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Cardell Hernandez
r.
Prlogo
a bioqumica es una ciencia que se ha desarrollado con un ritmo muy
El texto fue elaborado teniendo en cuenta los intereses de las diferentes especia-
lidades de las ciencias mdicas. De igual modo, ste puede ser de utilidad a estu-
diantes d e cualquier otra carrera biolgica. En el Tomo IV se tratan, adems,
algunos aspectos especializados de la bioqiimica de inters clnico actiial, lo que
permite a estudiantes de aos superiores y graduados de las diferentes ramas de las
ciencias mdicas complementar y aplicar conocimientos adquiridos al cursar las
ciencias bsicas.
Las autores
CONTENIDO
CAP~TULO
22. Citoesqueleto 401
Citoplasma soluble 401
Microfilamentos 402
CApfiULo20. Membranas biol6gieas 373 Principales funciones de los microfilamentos 404
Componentesmoleculares de las membranas 373 Microtbulos 405
Lpidos de membrana 373
Protenas de membrana 375 Principalesfunciones de los microtbulos 406
Glcidos de membrana 376 Filamentos intermedios 406
Modelo del mosaico fluido 376 Inclusiones citoplasmticas 407
Membrana plasmtica 378 Glbulos de grasa 407
Funciones de la membrana plasmtica 381 Grnulos de glucgeno 408
Transportedesustanciasatravs de las membranas 381 Resumen 409
Difusin y smosis 381 Ejercicios 410
Transporte mediante protenas 382
Potencial de membrana en reposo 385
Diferenciacinde la membrana plasmtica 385
Resumen 386 C~pfrvLo23. Ndeo celular 411
Ejercicios 386 Componentesestructurales del ncleo 411
Envoltura nuclear 412
Nuclolo 415
CAPf'm.0 21. Organelmmembranosusin-ulares 389 Nucleoplasma 415
Tipos de organelos membranosos internos 389 Par cromatina-cromosoma 416
Estmctura general de las endomembranas 390 Cromatina 416
Funciones generalesde los organelos membranosos 390 Cromosomas 416
Relaciones entre los organelos membranosos 391 Cariotipo humano normal 417
Retculo endoplasmtico 391 Mitosis 419
Aparato de Golgi 394 Resumen 420
Lisosomas 395
Ejercicios 421
Peroxisomas 397
Terminacin 480
Eventos posterminacin 483
Transcripcin en eucariontes 485
Sntesis y maduracin de los ARNr 486
Sntesis y maduracin de los ARNt 487
Unidades de transcripcin 487
Sntesis y maduracin de los ARNm 490
CmTin.024.Flujo celular de informacin 427 Inhibidores de la transcripcin 493
Informacin molecular 427 Resumen 494
Formas de la informacin niolecnlar 428 Ejercicios 495
Transferencia de informacin 429
Ciclo celular 429 CmTin.028. Cdigo
- gen6co
- 497
Actividad biosinttica durante el ciclo celular 431 Primeros pasos 497
Regulacin del ciclo celular 434 Descifrado del cdigo 498
Resumen 437 Codones de terminacin 501
Ejercicios 437 Codon de iniciacin 502
Universalidad del cdigo 503
CAPTin.025. Replicacin de los ADN 439 Estructura del cdigo 503
Historia del problema 439 Descodificacin 505
Aspectos generales 441 Resumen 506
Requerimientos de la replicacin 442 Ejercicios 507
Etapas de la replicacin 444
Replicacin en procariontes 444 CAPTUL0 29. Ribosomas 509
Replicacin en E. coli 444 Primeros indicios 510
Origen de la replicacin 445 Composicin molecular 510
Eventos previos a la iniciacin(preiniciacio)445 Estructura tridimensional512
Iniciacin 447 1,ocalizacin de los componentes 512
Elongacin 449 Dominios funcionales 515
Terminacin 452 Riognesis de los ribosomas 516
Modificacin del ADN (posterminacin) 453 Ribosomas eucariontes 517
Replicacin en eucariontes 453 Polirribosomas 518
Complejidad del proceso 453 Resumen 518
Replicacin en eucariontes pluricelolares 455 Ejercicios 519
Fidelidad del proceso 456
Inhibidores de la replicacin 457 CAPTULo 30. 'ihduccin 521
A manera de conclusiones 458 Primeros aportes 521
Resumen 459
Caractersticas generales 522
Ejercicios 460 Eventos previos a la iniciacin 522
Iniciacin 525
CAPTUL0 26.Op@zacin del genoma eucarionte 461 Formacin del complejo de preiniciacin 525
Genes y cromosomas 461 Incorporacin del fmet-ARNt,526
Genes y ADN 465 Incorporacin del ARNm 526
Estructura del gen 466 Formacin del complejo de iniciacin 70s 526
Familias gnicas 468 Elongacin 527
Genoma humano 47 1 Incorporacin del aminoacil-ARNt 527
Resumen 472 Formacin del enlace peptdico 529
E,jercicios 473 Translocacin 529
Terminacin 530
CAPfTUL0 27. Transcripcin del ADN 475 Traduccin en eucariontes 530
Aspectos generales 475 Posterminacin 532
Etapas de la transcripcin 476 Distribucin de protenas 533
Eventos previos a la iniciacin (preiniciacin) 477 Consideraciones energticas 534
Iniciacin 479 Inhibidores de la traduccin 535
Elongacin 480 Resumen 536
Ejercicios 536
c m 0 31. Reeombinari6n gentica 537 Reparacin por recombinacin 567
Historia del problema 537 Sistemas SOS 569
Tipos de recombinacin gentica 538 Reparacin de otros daos 569
Modelo de Holliday 539 Alteraciones de la reparacin 569
Comprobacin del modelo 541 Resumen 571
Formacin del intermediario de Holliday 542 Ejercicios 571
Enzimologa de la recombinacin 542
Significadobiolgico de la recombinacin 545 CAPfiur,~
34.Regulaci6n de la expresi6n genetiea 573
Resumen 546 Aspectos generales 573
Ejercicios 546 Regulacin transcripcional 574
Induccin enzimtica 574
32. Mutadones
CAPfirrr.0 549 Mecanismo de atenuacin 581 .-
Definicionesy nomenclatura 549 Eficiencia del promotor 582
Concepto de mutacin 549 Regulacin postranscripcional 582
Tipos de mutaciones 550 Regulacin en encariontes 583
Mutaciones gnicas 550 Regulacin pretranscripcional 584
Mutagnesis 551 Regulacin transcripcional 585
Mutgenos anlogos de bases 551 Regulacin postranscripcional 585
Mutgenos qumicos 552 Resumen 586
Sustancias intercalantes 553 Ejercicios 587
Radiaciones 553
Consecuenciasde las mutaciones 553 CAPfiULo35. k o l o g l a del ADN reeombiinante 589
Mutaciones mayores 555 Procedimiento general 589
Supresin 556 Obtencin de genes especficos 591
Mutaciones en humanos 557 Recombinacin in vitro 591
Resumen 558 Vectores 593
Ejercicios 559 Identificacin del gen recombinado 595
P m b l e m en la produccin de pmtenas eucariontes 596
CAPnno 33. Comervaei6nde la informaci6n genetiea 561 Expresin de genes clonados 596
Modificacin-restriccin 561 Experiencia tpica 596
Daos al ADN 564 Empleo diagnstico 598
Bases mal apareadas 564 Perspectivas 599
Bases perdidas 564 Resumen 600
Alteraciones de bases 564 Ejercicios 601
Rotura de una hebra 564
Rotura en las 2 hebras 565
Enlaces entrecruzados 565
Sistema de reparacin 566
Fotorreactivacin 566
Reparacin por escisin 566
Introduccin a la seccin
En este texto podr comprobarse cmo estos conocimientos son retomados necesaria-
mente para lograr mejor comprensin del funcionamiento y regulacin del metabolis-
mo celular, cobrandofuerza una concepcin de la relacin estmctnra-funcin a todos
los niveles de organizacin de la materia viva.
Sin embargo, debe quedar claro que una clula es un objeto muy complejo, con un
elevadsimo grado de organizacin cuya comprensin requiere an de intensas inves-
tigaciones.
Las membranas biolgicas son organizaciones supramacromolecularesflexibles
y fluidas que delimitan las clulas del medio circundante (membrana plasmtica), o
constituyen el sistema de endomembranas caracterstico de las clulas eucariotas y
que condicionala compartimentacin de stas; adems, las membranas delimitan a
muchos organelos citoplasmticos.
Aunque la composicin molecular de las membranas biolgicas varia segn el
tipo de clula del cual forme parte, e incluso de su localizacin intracelular, todas ellas
presentan un conjunto decaracteristicascomunes tantoen relacin con su composicin
molecular y su organizacinestructural general como con sus funciones bsicas.
En este captulo se estudiarn estas caracteristicas comunes a todas las membranas
biolgicas y adems, se tratarn las especificidades estructurales generales de la
membrana plasmtica, haciendo nfasis en algunas de sus funciones,particularmente
las relacionadas con el paso de sustancias a travs de ella.
Lpidm de membrana
Losopid~s<lwxenwnbranfonnandopartedelasmembrana~presentanlapropiedad
deser aniptieascomose mrdar, stase - ed
una pomn polar y otra apolar (captulo 13).Dichos Ipidosde membranas son fdtidos
de glicerina y esngolpidos;los triacilglicridos se encuenhan en cantidadesnfimas.
Algunos tipos de membrana poseen colesterol y stem de colesterol.
La caracterstica anfiptica de los principales Ipidos de las membranas condiciona
la organizacin estructural destos en forma de micela o bicapa (Fig. 20.1),en la cual
los grupos polares se disponen hacia el exterior de sta e interactan con el medio
acuoso a travs de puentes de hidrgeno y de interaccioneselectrostticas.Las cadenas
apolares, a su vez, se dirigen hacia el interior, entreellas se establecen atracciones por
uniones bidmfbicas y por fuerzas de Van der Waals.
Fie. 20.1. Reuresentacin esriaeial de un seemento de bieaiia liudica. En negro. tomos de carbono;
En la Fig. 20.2 puede apreciarse la forma en que el colesterol se relaciona con los
fosfolpidos;como se ha dicho, la bicapa, estructura fundamental de las membranas, es
fluida; ello depende de su composicin. La longitud de lacadena y el grado de insatu-
racin de los cidos grasos, -que constituyen los fosftidos de glicerina y
esfingolpidosinfluyen deformadeterminante en esta propiedad; de esta manera los
cidos grasos de cadena corta y los insaturados limitan el "empaquetaniiento" de las
cadenas hidrfobas y por tanto contribuyen a la fluidez. La presencia de colesterol en
la membrana eierce
" efectos sobre su fluidez.
La bicapa lipdica es asimtrica, ya que la disposicin de sus componentes difiere
en cada una de las capas. La mayora de las molculas de fosfatidil serina y fosfatidil
etanolamina se encuentran en la capa interna, en tanto que, en la externa predominan
las defosfatidil colina y esfingomielina; el difosfatidil glicerol se encuentra slo en la
membrana interna de la mitocondria y en algunas membranas bacterianas. El inositol
en el fosfatidilinositol, as como el 4,s-difosfoinositol fosfoglicrido (PIP,) forman
parte tambin de la membrana plasmtica y en el caso del PiP2esfuente de 2 segundos
mensajeros.
Los plasmalgenos forman parte tambin de algunas membranas como el tejido
nervioso y el corazn. Como veremos ms adelante,algunos glcidos se unen a Ipidos
formando los glucolpidos.
El espesor de la bicapa lipdica mide aproximadamente entre 6 y 9 nm para la
mayora de lasmembranas; esta bicapase comporta como una barrera permeablepara
las sustancias lipdicas, e impermeables a los iones y compuestos polares con la
excepcin del agua (Fig. 20.3).
SLE q m q o m 83- suippI$a3sa)uaUodu1o~
'(2861 'u?!qpa epunaas
i i a k q '7 .eqqnha!g ap opeuioL)
W l
-?"he ap apgmdns e1 ua o lo!lai
-u! la ua uppe>!qn ns un% '( p )
seqqj!~ado semsuuixa 6 ( 2 d q 'e)
sa@Pa>u!a semsryu! las uapand
seuequiaui m1 ap seu!aiold se1 'VOZ %
ou!s 'lein)anilsa u?pezpea~oel e uahnquluoa anbiod 019s ou sapqanasa sauopuy
xoyiu! la epeq u e q e m l d
uepduiasap anb 'sewquiaui se1ap sa@luauiep!nyquauoduiw uos s z u p p ~ m?
as sa~elodes e p se1 anb oiuq ua
'szlru~aixasa!qpadni se1 e!xq uau
-ods!p as saxelod sezaqm se1 ten>
el "a edexq eun ueuiasq anh [a>
waueui ap uauodqp as soJ!iedgue
sop!dg s o 7 .seJ!3ola!q seu
-wqmaui se[ ap eqseq e l n p n i l q 'COZ 'a!,#
Fig. 20.5. Disposicin en la membrana plasmtica de la gliroforina, protena intrnseca de las
glbulos rojos humanos.
(Tomado de Bioqumica. L. Stryer. Segunda edicin, 1982).
Gleidos de membrana
N
, Bicapa
lipdica
. '
1
Protena
l
Protena
l
Bomba
~ e c e i t ode
membrana
r
canales transpoitadora
Fig. 20.8. 'Tipos de protenas d e menihranas. Ohs6rvesc Wmu todas rllas son protenac integrales.
...
.
-gH~
'1;
-. l
r,
HOOC
.
l.
*Y .i
-.
<
~. exiracelular
, Espacio
Citoplasma
ellas captan alguna? seales quniicas del exterior y trasmiten una informacin Iiacia
el interior de la clula. No todos los receptores son proteinas de membrana, pues en
algunoscasosla protena receptora se encuentra localizadaen el interior de la clula y
no forma parfe de la nienilnma plasnitica. Se hace referencia slo a los receptores de
membrana. Estos de acuerdo con sus respuestas ante las seales pueden:
La estructura de los receptores es muy variada, pueden estar formados por una
cadena polipeptdica o cnnstituir oligmerus ms o menos complejos. En muchos
casos se pueden distinguir 3 dominios: uno extracelular, glicosilado, relacionado cnn
el reconocimiento molerular de la seal quniica; otro que atraviesa la membrana, y un
tercero, intracclular relacionado con la trasinisii,n de la informacin (Fig. 20.10).
Bicapa
lipdica
Colaterol 17 23 22 3 6
Glicolipidos 7 3 28 hz hz
Bicapa lipdica
En el primer caso se trata de molculas para las cuales la membrana plasmtica es
permeable, lo que le permite difundir, esto depender nicamente de la diferencia de
Fig. 20.12. Pcrrnealiilidatl selcitiv" de la
concentracin de dicho soluto fuera y dentro de la clula, o sea, de su gradiente de hieapa lipdiea.
concentracin. La velocidad de difusin en este caso es directamente proporcional a la
diferencia de concentracin del soluto.
Este tipo de transporte se realiza a favor del gradiente y no requiere de energa ni
de transportador, aunque en algunos casos, participan aly n a s protenas que forman
canales y permiten el paso de determinadas sustancias mediante el mecanismo de
difusin simple (Fig. 20.13). Al igualarse las concentraciones de la sustancia
transportada, fuera y dentro de la clula el flujo neto se hace cero.
1 1 canal La smosis es un caso particular de la difusin simple, pues lo que atraviesa la
membrana es el lquido. Si en ambos lados de una membrana semipermeable existen 2
Bicapa soluciones con concentraciones diferentes de un soluto que no puede atravesarla, se
produce el paso del solvente acuoso desde el ladodonde seencuentra la solucin ms
diluida hacia la ms concentrada, hasta que ambas concentraciones se igualen. Se
conoce como presin osmtica a la fuena que hay que ejercer en el lado de la solucin
mq concentrada ( C, en la figura 20.14) para impedir el paso del agua desde el lado de
la solucin ms diluida (C, en la figura).
Membrana semipermeable
Fig. 20.14. s) Des disi>liieiirnesdc ceiicen-
traciancs d i f ~ r ~ n t cdcl s niisnio
soluto, sepanidas por una " I C ~ I -
hrana simipcrnieal>leqw pcrmilf
cl pasa dcl disolvente pcro ni, del
snlutii. E l disulventc pasara del
ienipartinicnlii de menor eoiircri-
traciii IC,) al de i i i q i i i . cnnien-
trariiin IC,) hasta que se igualen
las conccntrecion~sen ambos la-
dui, h) ta eoluiiinn del lquido sube
en C. y hoja en C,. A la presin
que se ilrlw e j e r c r r en C' para
evitar el ascenso dc la rolumma dc
liquido sc denomina preiiiin
osnitira.
Poros o canales
El transporte con la participacin de proteia puede ser por poros o canales y en este
caso el mecanismo es similar alde difusinsimple,comose ha sealado. Los canales y los
poros son protenas transniembranales que delimitan espacios a travs de los cuales se
realiza el paso de algunas sustancias; los poros son menos selectivos y dejan espacios
mayores, un ejemplo lo constiiuyenlos p o m de la membrana nuclear. Los canales poseen
mayor selectividad en cuanto a la sustancia que los atraviesa, esta selectividad parece
estar relacionadacon su tamao y carga, pues no presentan sitios de unin paraellas. A
diferencia de los poros, que siempre se mantienen abiertos, la apertura y cierre de los
canales estn regulados por determinados ligandos u otras seales, un ejemplo 10
constituyen los canales del Na'.
En el transporte pasivo participan protenas transmembranales conocidas como
permeasas o "translocasas" ,este tipo de transporte se realiza tambin a favor del
gradiente y se lellama pasivo porque no requiere deenerga.
Las protenas transportadoras reconocen a la o las sustancias especficas
transportadas por ellas; tienen un wmportamiento similara las enzimas en cuanto a su
capacidad para saturarse, as como para experimentar inhibicin de tipo competitiva.
La diferencia fundamental con las enzimas es que no transforman su ligando.
Cuando la protena transportadora es capaz de transportar slo una molcula, se
dice que el proceso es uniporte; cuando el paso de una determinada sustancia depende
del trasporte simultneo de otra, el proceso se denomina cotransporte. ste se designa
como simporte si el paso de ambas sustancias se produce en el mismo sentido, en caso
contrario se conoce como antiporte.
En la figura 20.15 se observa la forma de actuar de una protena transportadora en
el caso de uniporte, sta presenta 2 conformaciones; tambin se aprecia como el paso
de una a otra resulta esencial para la realizacin de su funcin. En la figura 20.16 se
puede apreciar la diferencia que existe en el comportamiento en la velocidad de
transporte en el caso de la difusin simple y la facilitada (transporte pasivo).
Bicapa
n
Gradiente de
lipdica concentracin
Fig. 20.35. Mecanismo de transporte pasi-
vo. El cirmhio de conformacibn
resulta esencial para la funcin de
, la protena transportadora.
Protena (Tomado de Molecular Uiology
transportadora of the cdl. U. Alberts et al., 1983).
.....--a!:
3 _--- -
.e
'
,,--
/, Difusin
facilitada
Cations
Nn*
K*
Mg2*
ea:*
H+
Aniones
L1-
Nota: Tanihin mnstituycn animes numerosas los cidos nucleicos y otras sustancias
Fig. 20.17. La honiha de Na+-K*reqiiierr energa en furnia de ATP para su accin. La protena se
fosforila y experimenta una traaisri,i>forniaein,la cual resulta necesaria para realizar su
funcin. Al deefusfurilarse la I>ainl>iirecupera su conformaein inicial.
(Tomado de Maleeular Bielogy of the r d . R. i\lbcrts et al., 1983).
384
Potencial de membrana en reposo
La diferencia del contenido inico dentro y fuera de las cliilas condiciona una
diferencia de potencial elctrico, donde el interior de la clula es ms negativo que el
exterior; esta diferenciase debe en gran medida al funciouamiento de las bombas,en
especial a la ATPasa Na--K' dependiente, ya que provoca en so accin un deshalance
instantneo de cargas por la salidade 3 iones de sodio y la entrada de 2 de potasio. A
esta diferencia contribuye, adeins, la presencia de protenas aninicas de forma
predominante en el interior de la clula.
Ladiferencia de potencial entre el exterior y el interior de lai ctlulas oscilade -20 a
-200 mv y el valor en muchos tejidos, como el riervioso, es de -70 mv.
Si por alguna causa, como pudiera ser la entrada de iones de sodio al interior de la
clula, la diferencia de potencial se hace menor, se producira una despolarizaciii.Por
el contrario,si la entrada de ionescloruro (CI-)ola salida de K+provoca unincremento
de la diferencia de potencial con respecto al wlor de reposo, en ese caso se produce
una hiperpolarizacin. Estos cambios de los valores de potencial en las clulas
excitables estn relacioiiados con la trasniisin del impulso nervioso (rapitulo 64) y
otros procesos fisiolgicos.
Resumen
Las membranas biol6giras son organizaaones supramacromoleeulares flexi-
bles y fluidas, formadas fundamentalmente por Ipidos y protenas en proporciones
variables segn el tipo de clula y la loeazaan intracelular de la membrana
Adems de pidos y protenas, las membranas animales suelen tener determi-
nados tipos de gludos en su composicin, los pidos presentes en estas estructuras
se caracterizan por ser anfiphtieos y se organizan formando bicapas que confor-
man la estructura bsica de las membranas.
Las protenas pueden ser exhecas o intrnsecas de acuerdo con su ubicacin
en las supercies o en el interior de la bicapa, respectivamente. Las intrnsecas son
ms abundantes y entre ellas se encuentran numerosas enzimas, las protenas trans-
portadoras y los receptores de membranas.
Los gbcidos se encuenban unidos a protenas o Ipidos formando glicoprotenas
o glicolpidos, se loealizan hacia la cara externa o luminal de las membranas y
contribuyen a la orientacin de las protenas.
La membrana plasm6tica est formada por una doble capa continua y delga-
da, que delimita a la clula y permite que sta se relacione con el medio; por fuera
de la membrana plasmhtica existe una cubierta celular que la cubre y protege. Las
funciones de esta membrana son variadas, pero el paso selectivo de sustancias es
una de las funaones ms importantes.
La bicapa Lipdica resulta permeable a las molculas apolares, e impermeable
a los iones y molculas polares con la excepan del agua. La incorporacin de
maeromolculas a travs de las membranas se produce por el mecanismo de
endocitosis que ser4 objeto de estudio en el capitulo 21.
Los mecanismos de transporte de sustancia a travs de la membrana son de 3
tipos: difusin simple, transporte pasivo y transporte activo. En el primer caso no
se requiere de transportador ni de energa y el paso del soluto se realiza a favor del
gradiente. El transporte pasivo se realiza tambihn a favor del gradiente de concen-
tracin, pero se requiere la presencia de una protena transportadora aunque no se
precisa de energa. El transporte activo requiere la participacin de algunas pro-
t e h conocidas como bombas, que funcionan con consumo de energa; el paso de
sustancia en este caso se reaiiza en contra del gradiente de concentracin, un ejem-
plo tpico de ese tipo de transportador lo constituye la ATPasa Na'-K+ dependiente.
Las membranas plasm5ticas experimentan diferenciaciones relacionadas con
la especializacin celular, que le permiten a la clula realizar de manera ms
eficientesu funcin.
Ejercicios
1. ;Por qu las menibranas biolgicas constihiyen estruciuras supraii~acromoleculares?
2. Enumere los componentes fundan~eiitales de las membranas biolgicas y explique
las proporciones en que ellos sc encuentran.
3. ;Cul es la propiedad comn que tienen los lpidos presentes en las membranas
biolgicas y diga por qu esta propiedad es fundamentalpara constituir la estructu-
ra bsica de las membrana?
4. Enumere los distintos tipos de Ipidos y explique cmo se disponen en las membra-
nas.
5. Cite losdistintos tipos de protenas presentes en las membranas biolgicas y expli-
que las diferencias entre ellas.
6. Mencione las distintas funciones que cumplen las protenas en la membrana
plasmtica.
7. Explique la importancia del carcter informacional en la realizacin de las funcio-
nes de las protenas de membrana.
8. Expliquela disposicin de los glcidos en la membrana plasmtica.
9. Cite las funcionesde la membrana plasmtica.
10. Establezca una comparacin entre la difusin simple y el transporte pasivo en
relacin con requerimientos energticos, necesidad de protena transportadora y
direccin del flujo de sustancia.
11.Establezca una comparacin entre el transporte activo y pasivo. Refirase a los 3
aspectos indicados en el ejercicio numero 10.
Entre las caracterktim que distinguen a una clula eucariota tpica, junto con la
presencia de un ncleo bien delimitado, se encuentra el hecho de que estas clulas
poseen, adems de la membrana plasmlica, un complejo sistema de membranas inter-
nas denominados sistema de endomembranas
Este complejo sistema parece ser imprescindible para el mantenimiento de la
actividad vital de las clulas que tienen un volumen relativamente grande. El sistema
de endomembranas est ausente en las pequeas clulas procanatas.
La extensin del sistema de endomembranas se deduce cuando se conoce que, en
las clulas eucariotas tpicas, estas endomembranas representan del 95 al 98 % de
todaslas membranas celulares,de modo que la membrana plasmtica que rodea a la
clula slo es una pequea fraccin del total de ellas.
Las endomembranas no son homogneas, presentan un definido grado de
diferenciaciny especializacin que conduce a la formacinde organelos subcelulares
distinguiblesdesdelos puntos devista estmctural y funcional, por lo que resulta muy
vlido estudiar estos componentes celulares bajo la denominacin de organelos
membranosos internos (Fig.21.1).
Lisosoma
Peroxisoma
Aparato de
Golgi
Nuclolo
Mitocoodrias
Fig. 21.1. Imagen de una clula eucariontf
vista por medio del rniiroarapio Ncleo
electrnico. Ohsrvesc la prcsen-
ria en el interior celular de nume-
rosas estruettiras de aspecto Membrana
mernbranoao. plasmtica
(Tomado de Priniipes de Biochimie.
AL. Lehninger, 1985).
-
Componentes celulares y Gentica molec~phr 395
funcin tpica de los lisosomas se realiza gracias a las enzimas hidroltieas que suman
varias decenas de diferentes hidrolasas, capaces de actuar sobre los distintos sustratos.
Las enzimas lisosomales se sintetizan en el retculo endoplasmtico, de donde
pasan al aparatode Golgi. Las enzimas lisosomales se caracterizan por ser glicoproteinas
y poseen un pH ptimo en la regin cida. El lisosoma, como organeloindependiente,
se origina por evaginaciones del aparato de Golgi en forma de pequeas vesculas de
0 5 pm de dimetro, que se denominan lisosomasprimarios(fig. 21.8).
La membrana de los lisosomas posee una bomba de protones (H') dependiente de
ATP, que mantiene el interior de este organelo en un valor de pH cercano a 5,0, en
correspondenciaconel valor pthode pH para la accin de las hidrofasasque contiene.
Lascaraeterscw de permeabilidadde esta membrana son tales que, mienhas mantienen
separadas sus potentes hidrolasas del resto de la clula, permiten la salida de los
Fig. 21.8. Aspecto de los lisosomas prima- productos de degradacin de las biomolculas que son digeridas.
rios y secundarios en una imagen Los mecanismos, mediante los cuales las enzimas lisosomales son dirigidas hacia
de microseopia electrnica.
Lisosoma primario (LP) y lisosoma la formacin de este organelo, no estn del todo aclarados, pero se les ha atribuido un
secundario (LS). elevado significado a la presencia en las enzimas lisosomales de un oligosacrido que
(Tomado de Molccular Biologv of contiene manos 6 fosfato,lo cual se considera un marcador especfico de estas enzimas
the eell. B. Alberts et al., 1983). y que pudiera participar en interacciones con receptores vinculados a su transporte
intracelular.
Los sosomas participan en el recambio normal de los componentescelulares y en
la digestin de materiales provenientes del exterior celular; tambin intervienen en la
remodelacin de tejidos durante la embriognesis y el desarrollo, e incluso en
mecanismos emergentes de supervivenciacelular ante un inadecuado suministrode
nuhientes.
En su funcionamiento los lisosomas primarios dan origen a diversos tipos de
lisosomas secundariosde variada morfologa, cuya nomenclatura diverge de un autor
a otro. Resulta de inters referirse a 2 tipos de lisosomas secundarios, ya que sus
denominaciones se basan en el origen del material en proceso de digestin localizado
en su interior, los autofagosomas (lisosoma secundario autofgico) y los
heterofagosomas(lisosoma secundarioheterofgico).
Los heterofagosomas son vesculas digestivas que se forman por la fusin de
lisosomas primarios con vesculas heterofgicas, constituidas por invaginacionesde
la membrana plasmtica que incluyen en su interior material proveniente del exterior
celular (fagocitocis y pinocitocis).
La fagocitocis y la pinocitocis son 2 variantes de un proceso general denominado
endocitocis; como su nombre indica, la endocitocis consiste en la incorporacin al
interior celular de material proveniente del exterior. En el caso de la fagocitocis el
material incorporado es relativamentevoluminoso (virus, bacterias, fragmentos de
otras clulasy complejossupramacromoleculares),mientras que la pinocitd se refiere
a la incorporacin de molculas o pequeas porciones del medio extracelular.
El mecanismo general de la endocitocis consiste en la invaginacinde la membrana
plasmtica, con formacin de una vescula donde queda incluidoel material endocitado;
por tanto, la membrana que rodea este material tiene su origen en la membrana
plasmtica. Al menos, en algunos casos el mecanismo de endocitocis se desencadena
por la unin del material que ser endocitadoen los receptores especficoslocalizados
en la propia membrana plasmtica.
Los autofagosomas se forman por la fusin de lisosomas primarios con vesculas
autofgicas, que contienen en su interior material procedente de la propia clula. El
origen y formacin de las vesculas autofgicas se desconoce. En la figura 21.9 se
representan estos procesos de autofagia y beterofagia.Al lisosoma secundario que
contiene en su interior material que noes digerible se te denomina cuerpo residual.
Se ha descrito un numeroso grupo de enfermedades hereditarias debidas a
deficiencias de algunas de las enzimas lisosomales; estas enfermedades de
"ates0ramiento"con frecuencia afectan el normal desuroUo del sistema nervioso central
y de otros rganos. Es comn observar en clulas de pacientes con estas afecciones un
gran nmero de lisosomas distendidos y "abarrotados", con el sustrato no digeridode
la enzima que est en dficit (fig. 21.10).
Membrana plasmtica
Fagocitosis
Los lisosomas tambin estn implicados en otro tipo de alteraciones, como los
procesos iniamatorios y degenerativos. En otras partes del texto se har referencia a
algunas de estas enfermedades.
-
2. Establecimiento de gradientes de concentracin.
3. Disponibilidad de reas de supercie.
4. Incremento de la velocidad de los procesos metabtim.
5. Generacin de nuevas membranas.
Ejercicios
1. Enumere todos los organelos intracelulares que estn formados por membranas.
2. Cul es la estructura general de las membranas que constituyen a los organelos
membranosos intracelulares? ;Cules caractersticas las distinguen?
3. Explique las funciones generales de los organelos membranosos.
4. Cules son las caractersticas estructurales y funcionales de las 2 porciones del
retculo endoplasmtico?
5. Explique cules son los mecanismos que intervienen en la unin de los ribosomas
con el retculo endoplasmtico rugoso.
6. Cul esla participacin del retculoendoplasmticoenla formacin de membra-
nas intracelulares?
7. Cules son las caractersticas estructurales y funcionales del aparato de Golgi?
8. :Mediante cul mecanismo los productos madurados en el aparato de Golgi alcan-
zan otras localizaciones?
9. Cules son las funciones generales de los lisosomas y cmo se asegurael cumpli-
miento de estas funciones?
10. Cules son las diferencias entre un lisosoma primario, un autofagosoma y un
-
heterofaeosoma?
11.Cules son las caractersticas estructurales y funcionales de los peroxisomas?
12. ;,Cmo se establecen las relaciones estructurales y funcionales entre los diferentes
organelos membranosos?
El citoplasma se consideraba una fasesoluble amorfa, y aunque desde hace un siglo
se plante por algunos investigadoresla presencia deesiructurastravecularesen &,estas
estrnctnmsediemn por artefactosh&qne,apohdamente2dca&ah;is,mmediante
tcnica$ especiales de microscopia electrnica, qued establecida la existencia de tal
esqueleto celular. Entonces hoy, citosol es el trmino ms usado para designar el medio
interno acuoso,donde se hallan losorganelos y las molculas disueltasintracelularmente,
lo que equivaldraa la antigua concepcin del citoplasma amorfo.
El citoesqneleto es una compleja red de filamentosy microhibulos que atraviesa
el citoplasma y determina la forma de cada clula, ascomo su organizacin estmctural
interna. Diversos tipos de movimientos celulares estn asociados con esta fina red
tridimensional de estructuras protenicas que conforman el citoesqueleto.
Los principales avances logradosen el conocimientode esta dinmica estructura
subcelular derivan de estudios realizados en msculos y en tejidos, cuyas clulas
presentan cilios o flagelos, los cuales poseen funciones evidentemente asociadas al
movimiento mecnico. Los componentes moleculares presentes en estas estructuras,
estn tambin en aqullas que conforman el citoesqueleto de todas las clulas. Los
filamentosy microtbnlos que participan en los movimientos del msculo y de los
cilios presentan propiedades muy semejantes a las observadas en el citoesqneleto,
pero difieren en estabilidad. Los movimientos del citoesqueleto son muy Ibiles y
cambiantes, mientras que los del msculo y delos cilios son ms estables.
En este captulo trataremos las caractersticasde los diferentes componentes del
citoesqneleto: los microfilamentos, los filamentos intermedios y los microtbnlos.
Para ello se estudiarnlas interacciones que algunas drogas mtablecen con algunos d e
sus componentes moleculares, las cuales han servido de insustituible instmmentopara
conocer su dinmica, y naturalmente se referirn las funcionesque se hallan asociadas
a estas organizaciones subcelulares.
Por ltimo se tratar de los grnulos bien definidos que permanecen en el interior
de algunos tipos de clulas especializadas y a los cuales se les conoce como inclusiones
citoplasmticas.
Citoplasma soluble
A la luz del microscopio ptico se denomin citoplasma al contenido delimitado
Por la membrana plasmtica; algunos distinguieron una zona perifrica que llamaron
exoplasma o plasmagel y una ms fluida en el interior,el endoplasma oplasmasol. No
hay dudas de que el endoplasmaes unafaseacuosa,peroeshidiosposteriores permitieron
descubrir la trama defamentos y microtbulosque le proporcionan una armazn, por
lo cual pas a la historia la idea del citoplasma como un contenido amorfo. Ello no
niega que, a pesar de la existencia de los organelos y el reconocido citoesqueleto, hay
un medio interno representado por el citosol. El trmino, surgido del fraccionamiento
celular por medio dela centrifugacin, se aplica a la fraccin soluble que se obtiene
despus de centrifugar un homogeneizado de tejido a elevadsimas velocidades. Este
citosol es particularmente abundante en las clulas poco diferenciadas; en ste se
hallan las proteinas y enzimas solubles de la matriz citoplasmtica, entre estas ltimas
se encuentran las de la gluclisis y las encargadas dela activacin delos aminocidos,
previo a la biosntesis de las protenas. Por supuesto que en esta fase acuosa tambin se
hallan los distintos metaholitos que intervienen en las transformaciones qumicas del
metabolismo intermediario.
e
requiere de la participacin de otras protenas.
En el citoplasma existe una reserva de molculas de actina libre en equilibrio con -- .
la actina polimerizada (actina F) y este equilibrio depende del control de factores ,'
36 n m
celulares que permite la coordinacin de los movimientos; por ejemplo, uno de estos
factores es la protena profilina, la cual se une a la actina e interfiere con la
polimerizacin; se desconoce a travs de qu mecanismos reguladom se debilita esta
asociacin.
- 1
Cada molcula de profilina se une a una molcula de actina y de este modo
interfiere con la polimerizacin. Hay algunas evidencias aisladas que sugieren la
existencia d e mecanismos reguladores, los cuales inodulan la interaccin
actina-profilina, afortunadamente se establece un dispositivo de control capaz de
disparar una rpida polimerizacin.
La mayor parte del conocimiento acerca del equilibrio dinmico entre la , -
C o m ~ n t e ~~~~s
s y -tia mIecPar 403
muscular, en la cual no intervienen la polimerizacin ni la despolimerizacin de
filamentos Ibiles.
Contrario a la accin de las citocalasinas,existeotrotipo de drogas del grupo de
los alcaloides: la faloidina, que estabiliza los filamentos de actina, de manera que
impide su desorganizacin; cuando esta sustancia se le inyecta a los protozoos,como
la ameba (la faloidinano atraviesa la membrana), impidelos movimientos ameboides.
Parece claro que la dinmica de la formacin y desagregacin de los microfilamentos
es esencial para la consecucin de los diferentes movimientos que dependen de estas
estructuras
Cabe destacar que tos famentos de actina son estnicturas que presentan polatidad,
es decir, que sus extremos son diferentes, porque sta es una propiedad que permite
explicar cmo ocurren algunos de los movimientos en los que ellos participan.
La afinidad de las molculas de actina para asociarse es diferenteen cada extremo.
La concentracincrticade actina brees aqulla a la cual la velocidad de incorporacin
es igual a la de disociacin del polmero. Parece que la hidrlisis del ATP provoca un
Fig. 22.4. Estructura qumica de la cambio conformacional, de manera que la concentracin crtica se hace menor en uno
ritoealasina B. de los extremos que en el otro; por tanto, en determinadas concentraciones intermedias,
el tilamento se puede mantener en un estado estacionario, segn el hecho de que las
molculas se separan predominantemente de un extremo (-) y se aaden de manera
predominante al otro (+). En el estado estacionario la velocidad neta de incorporacin
al extremo (+) es igual a la de desagregacin del extremo (-).La consecuencia deesto
(Fig. 22.5)es que la longitud del filamento permanece constante,perose va desplazando
en el espacio desde el extremo (-) al (+).
' desplazamiento'
Colchicina
Filamentos intermedias
Si bien los 2 tipos ms importantes de componentes del citoesqueleto son los
microfilamentos y los microtbulos, caracterizadospor su dinmica labidad, existe
otro tipo de filamento, de dimetrointermedio entre aqullos y que resulta ser mucho
ms estable. Esta propiedad sedebe aquesus constiiuyentesmolecularessonprotenas
de naturaleza fibrosa y no globular, que los hace muy resistentes a la extraccin con
soluciones de variadas concentraciones salinas y con detergentes no inicos; sin
embargo, esta insolubilidad hace posible su observacin microscpica mucho ms
fcil que la de los restantes componentes del citoesqueleto.En la figura 22.7se presentan
microfotografas correspondientes a 2 tipos celulares diferentes.
Los filamentos intermedios tienen una disposicin que tambin parece partir del
centro de la clula, pero con recorridos menos sinuosos; se hallan relacionados con las
zonas de las clulas que estn bajo grandes tensiones.
Varios tipos de protenas estn presentes en los filamentos intermedios, tienen
pesos moleculares que varan de 40 000 a 200 000 D y se polimerizan sin dar lugar a
estructuras tan regulares como las de los microtbulos y microfilamentos; el nmero
de estas protenas fibrosas vara segn el tipo de clula y la especie.
Cada lamento parece presentar un hmero como unidad de polimerizacin,aunque
ello no est confirmado, y todava los factores que controlan estas estructuras y sus
funciones son objeto de especulacin. Lo que sise puede afirmar es que cada tipo de
clula presenta filamentos intermedios caractersticos, que estn constituidos por
~rotenasdiferentes que se asocian; ejemplo de ello son los filamentos de queratina en
las clulas epiteliales, los de vimentina en los fibroblastos y los neurofilamentos de las
neuronas.
precisa mente,^^ diversidad hacemucho msdificil su estudio y el desus protenas
constituyentes.Laasociacinde estas protenasfibrw parece presentar caractersticas
estructurales semejantes a la de la colgena (captulo 68).
Deacuerdo con lo expresado se comprende que lapolimerizacin de los filamentos
intermedios, hasta el momento, parece ser un proceso irreversible; de ello no deben
deducirse que el nmero, tamao y disposicin de estas estructuras han de mantenerse
constantes a lolargo de toda la vida celular. Se han descubierto enzimas proteolticas
que degradan especficamente un tipo u otro de filamentos intermedios, y se desconoce Fig. 22.7. MicrofotograBas de filanientos
cmo es regulada la actividad de estas enzimas NI vivo; in vitro, muchas de ellas son interrncdios. a) Por tcnicas de
activadas por el Caz'; lo cierto es que la nica forma conocida en que pueden ser inmuiionuoreseeneia se visualizan
filamentos intermedias de
desagregados los filamentos de esta clase es, mediante la hidrlisis de sus protenas, en
vimeiitina. h) Neurafilamentas
pptidos ms pequeos. presentes en un sector de
En tanto no se demuestre lo contrario, la funcin de los filamentos intermedios axoplasnia cn el axn gigante de
parece restringida a soporte mecnicode la estructura celular. una lombriz marina.
('hmsdo de Molecular Biolagy of
the cell. B. Albere et al., 1983).
Glbulos de grasa
408
Monocapa de enzimas especficas
que recubren la molcula de glucgeno
Fig. 22.10, Microfotagrafia dc los grnulos de glucgeno. a) Las inclusiones citaplssmtieas, en este
casa grnulos de glucgena, sc ubscrvan corno mltiplrs zonas densamente oscurecidas. h)
Kepresentacih csqueiiiitira de un grnulo de glucgcno.
(Tomado de Molceular Binlogy af the ccll. B. Alherts et al., 1983).
Resumen
La fase soluble que se obtiene como sobrenadante en una centrifugacin de
muy elevada velocidad se conoce como citosol. Las tenicas avanzadas de
micmsmpia electrnica no niegan que el medio interno celular, donde se encuen-
tran los organelos y el citoesqueleto,se halla baado por una fase acuosa, el citosol.
En ste se encuentran disueltos metabolitos, protenas y enzimas solubles. El
dtoesqueleto es una compleja red de lamentos y microtbulos que atraviesan el
dto~lasma . -
,v determina la forma celular. ascomo la oreanizaa6n del hialonlasma
Los microlamentosson el resultadode la polimerizacin de monmeros de la
-
protena acna, una de las 2 protenas fuodamentales que participan en la propie
dad conrcl de Las fibras muxulares. Estos pomeros, en el caso de los lamen-
tos del citoesqueleto de una clula cualquiera, se agregan y despolimerizan de
forma continua, lo cual les confere una dinmica en su loealizaci6n, iamaio y
estabidad, adems, les permite intervenir en funciones relacionadas con algunos
movimientos celulares.
Eata dinmica y su importancia en algunas propiedades celulareshan podido
ser estudiadas con la ayuda de drogas que, como la citocalasina, impiden la
polimerizaci6n de las molculas de actina. La profia es una protena que pareee
tener una funci6n parecida en el control fisiol6gico del equilibrio
polimerizacin-despolimerizaci6nde los microfilamentos.
Si se interfiere la mecnica normal de los microlamentns se impide la loco-
moci6n wlular, la f a g d h i s , la citocinesis y el desarroiio de las digitaciones que
ocurre en la respuesta fiiol6gica de las plaquetas, entre otros procesos.
Los micmtbulos poseen una dinmica similar, pero estn constituidos de otra
pmteiaa, la tubuna
Las 2 estnictur~scitadas presentan polaridad y generalmente en un extremo
Predomina la desagregacin de los monmeros, y en el opuesto la polimerizacin,
m c t e r s o c a que hace posible la movilidad de ambos.
Los mkmtbulos del citoesqueleto tienen una dimmica semejante a la de los
microlamentos, pero como los pdaeros estables de acna se hallaron en los
msculos, existen tambin micmtbulos ms duraderos y menos cambiantes en los
d i o s y melos.
Los mieroffibulos se originan de ordinario en regiones adyacentes al niideo
celular, denominadas centros organizadores, stos estn relacionados con los
centrfolos.
Las protenas accesorias establecen nexos entre las molculas de tubulina y de
stas con otros componentes celulares.
Los microtbulos son determinantes en la especioadad de la forma de los
diferentes tipos de clulas, intervienen en la morfognesis,en la formacin del huso
mittico, confieren polaridad a las c6lulas que la poseen, parece que desempean
una funcin en algunos nenmrreeeptores y, por mipuesto, forman parte importante
del sistema eirnilatorio intraeelular.
Por Ultimo, los filamentos intermedios los forman diferentes protenas en las
disntas clulas: y son ms estables que los mimamentos y microhbulos. Tam-
bin se diferencian de aquJlos en que Las protenas que los integran son fibmsas en
vez de globulares. Su diversidad ha hecho ms d i d el estudio y comprensin de
sns estnictnras y funciones: en las clulas epitealesexisten filamentosde querana;
en los fibmblastos y la mayora de otras clulas suele estar presente la vimentina,
entre las protenas componentes de los filamentos intermedios.
Se presume que estos filamentos se destniyan por pmtelisis y se han aislado
enzimas especicas para sns diversas proteias constituyentes.
Las 3 estructnras esindiadas conforman el citoesqueleto, que como su nombre
indica constiuye el soporte meesnico del coqjunto de la arquitectura celular.
Las inclusiones citoplasmticasson acumulaciones de sustancias que se alma-
cenan durante algn tiempo en la clula Los exponentes ms comunes son los
glbulos de grasa y los grnulos de glucgeno, ambos tienen funcin de reserva
energ6tica para la clula o el organismo.
Ejercicios
1.Realice una comparacin entre las protenas que integran los microfilamentosy los
microthulos.
2. Qu caractersticaespecial presentan las protenas de los filamentosintermedios
que no la poseen las de los microfilamentosy microtbulos?
3. Cul es el sentido del gran dinamismo que presentan las estructuras polimricas
fundamentalesdel citoesqueleto?
4. Trate de deslindar las funciones de los microfilamentos, los microtbulos y los
filamentos intermedios que les son propias y las que lesson comunes a los3.
5. La divisin celular no se afecta por la droga citocalasina,pero s por la colchicina.
Qu conclusin puede usted inferir en cuanto a las estructuras del citoesqueleto
que intervienen en la mitosis y las que no lo hacen?
6. De acuerdo con lo estudiado en el captulo 18 y en ste, jcree usted que los
grnulos de glucgeno constituyen sistemas multienzimticos?
7. ;,Son los glbulos de grasa inclusiones exclusivas del adipocito?
La diferenciafundamentalentre las clulas procariotas y eucariotas es la presencia
en estas ltimas de la envoltura nuclear que separa al ADN; tambin existen diferen-
cias entre los procesos relacionados con el ADN y los procesos que ocurren en el
citoplasma. En las clulas procariotas, la sntesis de ARN (transcripcin)y la sntesis
de protena (traduccin)se llevan a cabo casi de manera simultnea,sin haberse sepa-
rados an los ARNm del ADN. La aparicin, durante el proceso evolutivo,de la envol-
turanuclear posibilit la separacin entre los procesos de transcripcin y traduccin,
lo que permiti el desarrollo de ambos.
En este captulo describiremoslas diferentesestructuras del ncleo: la envoltura
nuclear, el nuclolo, la cromatina-cromosomasy el jugo nuclear, adems, haremos
referencia a la relacin entre estas estructuras y su funcin.
El estudio del ncleo celular constituye un ejemplo fehaciente del principio de
laoiganizacinde las macromolculas, ya que podemos observar duranteel desarrouo
de la mitosis cmo diferentes estructuras nucleares desaparecen bajo determinados
mecanismos de regulacin, no del todo conocidos, y vuelven a formarse, entre otras
causas, por el mnocimiento molecular entre suscomponentes.La propiedad del m n e
cimientomolecularligado a lasdiferentesestruchuas fuetratada en el captulo9.
Cuando la clula se encuentra en interfase podemos ver todas las estructuras
nucleares: el material gentico se encuentra estructurado en forma de cromatina, la
envoltura nuclear est presente y podemos observar al menos un nuclolo. Cuando en
la clula comienza la divisin mittica, ocurren cambios que conducen a la desapari-
cin de la envoltura nuclear, a la conversin de la cromatina en cromosomas y a la
desaparicin del nuclolo. Una vez terminada la separacin del material gentico
en 2 partes iguales, entre lasclulas hijas, se producen loscambios que le devuelven
a la clula la estructnra que tena en la interfase.
l.Envoltura nuclear.
2. CromaOna
3. Nuclolo.
4. Nncleoplasma o jugo nuclear.
Fig. 23.1. Componentes del ncleo. a) La
membrana nuclear. (b) El nuelolo.
(e) La eromatina. (d) El
nueleoplasma (a carialinfa). Se
observan ambas membranas de la
envallura nuclear y los ribosomas
unidos a la membrana externa;
tambin se observan (e) Las poros
de la membrana.
Envoltura nudear
~ ~~
.~~~~
. ~ ~~~~
m.
23.1).A &delos
p o m slo pueden pasardetenninadoscompuestos,tienen paso selectiva
Si observamos una de las 2 cara de la membrana, notamw que los poros presentan
una distribucih hexagonal (Fig. 232); stos constituyen del 10 al 36 % del rea total
de la membrana, y hay entre 40 y 145poros por micrmeiro cuadrado.
Poros
P m m
Membrana interna de la
membrana nuclear
- Cromatina
Los poros pueden observarse muy bien en una fotograa al microscopio electrni-
co;parecen ser canales abiertosqueconectan ambos compariimentos,estn bordeados
por protenas especiales, tanto por su superficie citoplasmtica como nuclear y el
propio conductoparece estar ocupado por ellas.
Cromah
Tipo de histona Y % % Y H 4
Peso molecular (kD) 21 14,s 13,7 15,3 11,3
Relacin lidarg 20 1,2 2,s 0,7 0,s
Fig. 23.11. Partes de un cromosoma. Se repraentan 2 cromosomas, en ellos podemos observar las
partes que lo forman: (a) Brazos. (b) Centrmero (constriccin primaria). (c) Constriccin
secundaria. (d) Satlite.
Gmpo A: metacntricos (1,2 y 3), tienen los brazos del mismo largo.
Gmpo B: submetacntricos(4 y S), sus brazos tienen tamaos diferentes.
Grupo C: submetacntricos(6,7,8,9,10,11,12 y X), iguales al grupo anterior,
pero de menor tamao.
Gmpo D: acrocntricos con satlite (13,14 y 15), uno de sus pares de brazos
son muy cortos.
Gmpo E: metacntricosy submetacntricos(16,17 y 181,de menor tamaio.
Gmpo F: metacntricos (19 y 20), de menor tamao.
Gmpo G: acrocntricosconsatlites y sin ellos (21,22 y Y),de menor tamao.
Fig. 23.12. Cariotipo humano normal.
Grupo A: Metacntricos.
Grupo B: Submetacntricos.
Grupa C: Submetacntricos.
Grupa D: Aeroentrieos con satlite.
Gnrpo E: Metacntricos y submetacntricos.
Grupo F: Metacntricos.
Grupo G: Aeroentrieos con satlite y sin l.
(Tornado de Molecular Biology
of the cell. B. Albe- el al., 1983).
1.Profase.
2. Metafase.
3. Anafase.
J. Telofase.
.,-
Todas las macromolculas que participan en estos procesos se caracterizan por presen-
tar propiedades informativas, por lo que en el primer captulo se discuten brevemente
algunos aspectosfundamentalesde la informacin molecular y de su transferencia, as
como su momento de expresin durante el ciclo de vida de la clula. Toda la seccin
est prcticamente encaminada al estudio de las 3 grandes vertientes que tienen que
ver con la informacin gentica, o sea, su trasmisin, conservacin y expresin.
Laseccin comienza con el breve anlisis en el captulo 24 del complejo proceso dela
transferencia de informacin en los seres vivos, sus formas de expresin, as como los
momentos del ciclo celular donde se hacen ms evidentes estos mecanismos; en este
mismo capitulo se hace un hreve estudio del ciclo celular y su regulacin.
Cada organismo, para ser cual es, debe expresar la informacin que contiene en su
material gentico; este aspecto es uno de los ms complejos, pues esa informacin
debe ser copiada primero en una molcula especfica de ARNm, como se ver en el
captulo 27 "Transcripcin del ADN", y despus en la secuencia de aminocidas de las
protenas como se estudia en el captulo 30 "Traduccin". Para ello es necesaria la
existencia de una relacin entre estos 2 tipos de molculas y por eso se dedica el
captulo 28 al estudio del cdigo gentico, en tanto en el 29 se trata el estudio de los
ribosomas, que son los orgauelos dondeocurre la sntesis de protenas. Una eficiente
expresin de la informacin gentica requiere de mecanismos de control que sern
estudiados en el captulo 34 "Regulacin de la Expresin Gentica".
1. Reconocimiento-inmovilizacin-hirnsconfon.
2. Reeonocimiento-inmovilizacin-transeonformacin-modulacin.
3. Reconocimiento-inmovilizacin-transconformacin-translocalizacin.
4. Reconocimiento-inmovilizacin-transconformacin- ?
Ntese que en las 4 casas la idenaficacin representa la primera etapa del proceso.
A diferencia de la informacin secnencial, la informacin conformacional presen-
ta diferentes grados de actividad funcional. Para que un grupo de molculas pueda
realizar funciones diversas y especficas debe poseer informacin conformacional.
li.ansferencia de informacin
En captulos anteriores ha quedado demostrado que en las macromolculas fun-
cionales, la conformacin depende de su estructura primaria, de su secuencia, por lo
que en stas se funden los 2 tipos de informacin: la secuencial y laconformacional.
Puede decirse que en estas molculas la informacin contenida en la secuencia es
precisamente la de cmo construir la estructura iridimensional. En ellas se produce la
transicin de lo secuencial a lo conformacional.
Pero la informacin secuencial,como hemos visto, es la adecuada para la trasmi-
sin, por lo tanto, sta debe provenir de otra molcula que slo contena este tipo de
informacin y la de esta ltima, provino a su vez de otra macromolcula con informa-
cin tambin de tipo secnencial.
En esto consiste una de las principales regularidades que se observa en los orga-
nismos vivos y que se refiere a la forma en que fluye lainformacin en las clulas. No
importa el nmero de etapas en que el proceso se desarrolle, ni los mecanismos
moleculares implicados en cada una de ellas, ni las formas especficas en que lo realiza
cada organismo particular: la informacin molecular se trasmite siempre desde una
molcula con informacin secuencial hacia otra molcula con informacin
conformacional; esto es lo que hemos denominado principio de transferencia de infor-
macin.
Esa transferencia de informacin se manifiesta en los organismos vivos mediante
3mecanismos bsicos. El primero -la conservacin-tiende a mantener la informacin
lo ms invariable posible, utilizando estmcturas de elevada estabilidad y procesos de
rectificacin y reparacin. El segundo -la trasmisin- garantiza el paso de la informa-
cin de un organismo a sus descendientes con el ms elevado grado de fidelidad, de
modo que todos los descendientes posean en esencia la misma informacin. El tercero
-la expresin- consiste fundamentalmente en la direccin de la sntesis de molculas,
dondese produzca la transicin hacia la informacin conformacional,y sta se exprese
en funciones especficas que permitan el mantenimiento, desarrollo y reproduccin
del organismo que la posee.
Estos 3 procesos se llevan a cabo en diferentes momentos de la vida celular, por lo
cual a continuacin se har un estudio somero de las caractersticas de los principales
estados o fases por los que atraviesa una clula durante su vida.
Fig. 24.3. Sincranizacin por seleccin. (a) Las clulas cultivadas se colocan en tubos de centrfuga
que contienen ficol en una concentracin que va desde S % en la boca hssta 10 % en el
fondo, creando as un gradiente de densidad.(b) Al ser eentrifugadas las clulas se desplazan
hacia abajo, acumulndaae en una zona donde su densidad corresponde con la del medio de
centrihgacin. (t) Como las clulas en U, son muy grandes se desplazan mucho ms hacia
el fondo. El tubo se perfora par el fonda y se obtiene Is fraccin que contiene las clulas en
penada G,, y se cultivan nuevamente.
[jp/
se repite (C), con la cual se logra
un rendimiento considerablemente
mayor.
.r:
esin ubicados de forma continua o discreta a lo largo del ciclo celular; su ubicacin y
los mecanismos moleculares de esos procesos, son los aspectos que sern abordados en
los captulos siguientes.
fig. 24.7. Estudio de la sntesis de lpidos de membrana durante el cielo celular. (a) La figura muestra
que el contenido celular de fusfolipidos aumenta de forma continua durante el ciclo celular.
(b) Resultado del estudio de incorporacin de ['HI-colina (precursor de la sntesia de
fosfatidil-colina y esfingomielinas) muestra que sta es continua durante el ciclo. Los 2
experimentos dcmucstran que al igual que otros componentes moleiulares, la sintesis de las
lpidos de las membranas es un proceso continua.
Las protenas quinasas dependientesde ciclinas (Cdk) son enzimas que transfie-
ren un grupo fosfatodel ATPhacia residuos de serina o treonina de protenas sustratos.
Las Cdk resultan a su vez reguladas por ciclos de fosforilacin -desfosforilacin.
La enzima mejor estudiada es la Cdk2 que contiene 3sitios de fosforilacin: uno en la
treonina 14(T14),otro en la tirosina 15 W15) y el tercero en la treonina 161 (T161). La
fosforilacin de los 2 primeros sitios tiene un efecto inhibitorio, mientras que la del
tercero es activante. Existen quinasas especficas para la fosforilacinen TI4 y Y15.
La fosforilacin en TI61 se realiza por la quinasa activadora de la Cdk2 (CAK),cuya
subunidad cataltica es la Cdk7 y la reguladora es la ciclina H. Si la Cdk2 est
fosforilada, pero no est unida a ciclinas, puede ser desfosforilada por la fosfatasa
asociada a las quinasas (KAP), pero en presencia de la ciclina esta desfosforilacin
no es posible (Fig. 24.9).
ATP ADP
c'
de fosforilacin y uno de unin a
8 las eielinas. En ausencia de las
cielinas y de la FosForilaein son
inactivas. La fosforilacin de los 3
sitios las mantiene inactivas aun
.- . @ cuando estn unidas a las eiclinas.
El estado totalmente activo se al-
$
\; cama cuando la quinasa unida a la
-O5 T161\@ eiclina est fosforilada slo en la
~ ~
treonina 161.
ATP
Resumen
El elevado grado de organizaci6n que caracteriza a los seres vivos se mantiene
gradas a la informaci6n moleeular, ata puede ser de tipo seeueneial, adecuada
para la conse~1sci6ny la trawiisi611, y de tipo oonformaconal, apropiada para la
expresi6n. El principio de transierencia de iniormaein establece que la informa-
d6n m o l e d a r Buye desde la seniencid hacia la conformacional.
El ciclo celular comprende todas las transformaciones que las clulas experi-
mentan durante su vida En l se &Onguen 4 etapas: la M o de divisin celular, la
S o de shteala del ADN, asZ como las etapas G, y G, que separan las 2 etapas
anteriores. Los principales componentes maeromoleeularesde las clulas se sinte-
tizan de forma discreta, corno el ADN y las hiptolfas; y de forma continua,comolos
ARNs,las proteinas y los pidos componentes de las membranas. Para el estudiode
estos asoectos se utilizan las tcnicas de cultivos de clulas de crecimiento
sincron&ado y de captad611de precursores radhcvos, entre otres.
Los meeaatsnios moleculares de regulacin del dclo celular no estn total-
mente conocidos. Se sabe que exbten factores reguladores positivos y negativos, asZ
como un grupo de familias protelaicas implicadas en el proceso. Las cielines ac-
tan sobre las Cdk y determinan su especWiddad de aeei6n, con lo cnai resultan
fosforllados determinados sustratos en momentos claves del ciclo celular. Las
fcdntasas y los inbibidores de las quinasas contribuyen a la modulsd6n na de
estos mecanismos. El conodmiento del ciclo celular tiene importancia en la prc-
ca mdica por su vinculad6n con la gnesis del cncer.
Ejercicios
1.&Qurelacin existe entre la desaparicin del nuclolo durante la profase y los
datos conocidos sobre las caractersticas de la sntesis de ARN durante el ciclo
celular?
2. Se dice que la existencia de las cromtides es la expresin citogentica de la
duplicacin del ADN Por qu?
3. cules son las caractersticasestructurales que debe reunir una macromolcula
para presentar informacin secuencial y cules para la conformacional?
4. Un cultivo de clulas no sincronizadose expone a "C- inositol durante un breve
perodo, despus se lavan las clulas para eliminar el exceso, se someten las clulas
a un proceso de autorradiografa y al revelar la placa se encuentran que todas las
clulas incorporaron el 14C-inositolcon igual intensidad &Culesseran las conclu-
siones del experimento?Cul de los componentescelularesse estaba estudiando?
5. Si el experimento de La pregunta anterior se hubiera realizado con clulas de
crecimiento sincronizado,sena igual la interpretacin de los resultados?
6. Algunos autores sugieren que cuando se trata de clulas eucariontes, sera ms
correcto decir la duplicacin de la cromatina que la duplicacin del ADN &Enqu
se fundamenta esta afirmacin?
1.a transferencia de la iuforinacin gentica de padres a Iiijos constituye el fen-
inenn mis iinportantc de la materia viva,esto no slo garantiza la sucesin deba vida,
sino i1dei116s.constituye el inecanismo bsico de conservacin de las especies, pues
los drscendientes siemprc poseen caractersticas estructurales y funcionales similares
a los progcnitorcs. I'.n los orjianisinos monocelulares esta transferencia es directa,
pues se prndiicc por el iiiccanis~node divisin celular ya estudiado (captulo 23). En
los or~iiiisiiiospliiriceliilarcs, sin embargo, existen clulas especializadas en esta
fuiicii>nque son Lis ci.luliis scxii;iles. [.as clulas sexuales niasculina (espermatozoide)
y f~iiieiii~ias
(i,viilo).portando cada una la informacin gentica de la especie, se unen
en la fecundacii,~~ y mediante procesos coiiiplejos, ms o menos prolongados, dan
origen al or~aiiisiiioionipleto. Al ser los ganietos haploides en la fecundacin se
rcstituyc el nnier diploide caracterstico de la especie. Como la fecundacin es
especifica. todos los seres vivos darn descendientes iguales a s, o sea, de la misma
especie; esa transferencia de informacin de una clula o un organismo a sus des-
cendientestiene su fundamento molecular precisaniente en la duplicacin o replicacin
de los cidos desoxirribnnucleicos.
La replicacin de los ADN de doble cadena es un proceso comple.jo que no est
conipletainente esclarecido. Esta complejidad se deriva de diferentes factores como
son: la estructura tridimensional de los ADN y su grado de superenrollamiento, la
especificidad de las protenas replicativas, la necesidad de una fuente energtica y la
elevada fidelidad que requiere el proceso.
Las dificultades para su comprensin aumentan al no existir una forma nica de
replicacin para todos los organismos que contienen ADN de doble cadena.
En este textose examinarn alguna caractersticas comunes a la replicacin de los
ADN de doble hebra. Despus se estudiar de forma ms detallada cada aspecto del
proceso, se comenzar por los organismos procariontes y se concluye con los aspectos
conncidosdel pmceso en los organismeucariontes. Cada etapa se esiudiar de acuerdo
con los conncimientosactuales. El aspecto ms desarrollado ser el sistema replicativo de
la bacteria E. coli, por ser el mejor conucido de todos y porque a partir de lasinvestigacio-
nes en este organismose han podido comprenden muchosde los mecanismosimplicados,
y establecer los modelos, tanto tericos como experimentales,para el esclarecimientode
un fenmeno tan trascendental en los seres vivos.
Aspectos generales
Toda la informacin gentica contenida en el ADN reside en su secuencia de
bases, por lo tanto la funcin primordial de cualquier modo de replicacin es duplicar
la secuencia de bases de la molcula progenitora. La especicidad de los apareamientos
de bases -adenina con timina y citosina con guanina- provee el mecanismo usado por
todos los sistemas replicativos.
Otro aspecto comn es que los nucletidos son aadidos uno a uno al extremo
3 ' - 0 H de una cadena en crecimiento por enzimas llamadas ADN-polimerasas. La
secuencia de bases de cada una de las cadenas del ADN es copiada en forma
complementaria, as cuando en la hebra que sirve de molde aparece la timina, en la
hebra nueva se incorporar adenina y lo mismo sucede al aparecer cualquiera de las
bases.
En los ADN de doble hebra el proceso de replicacin se produce copindose
ambas cadenas de manera simultnea, por lo que las molculas formadas conten-
drn una banda que proviene del ADN, que sirve de molde o patrn y una banda
neoformada. Como la molcula de ADN que se est copiando est formada por 2
bandas complementarias, y cada una de ellas sirve de molde para la sntesis de una
cadena nueva, resultar que gracias a este mecanismo las molculas nuevas no
slo sern iguales al molde en su secuencia de bases, sino que sern iguales entre
s. De acuerdo con el mecanismo explicado, las molculas de ADN de doble hebra Fig. 25.2. Carcter semiconservativo. El
modelo general de la replieaein
que se obtienen como resultado del proceso contienen una cadena del ADN que acorde con la experiencia dc
sirvi de molde y una cadena nueva, lo que significa que durante la replicacin se Mcsselson y Stahl consiste en que
conserva la mitad de la molcula original, por lo que se dice que este proceso es una molcula duplohelicoidal de
semiconservativo (Fig. 25.2). ADN (a) se separa en sus 2 eadc-
nas y cada una dc ellas sirve dc
La reaccin bsica de la polimerizacin consiste en la adicin de un molde para la sntois de la cadena
desoxinuclesido trifosfatado al extremo 3 ' - 0 H del desoxinucletido precedente, complementaria. Cada molcula
eon la liberacin de pirofosfato, la cual conduce a la formacin del enlace fosfodister; nuera h) est formada por una
esto quiere decir que la cadena se va formando del extremo 5 ' -P al 3 ' -OH, luego el banda parental (en azul) y una
neoformada (en rojo). Luego to-
crecimiento de la cadena es unidireccional. das ellas san iguales entre s.
Esta reaccin es muy reversible,pero el acoplamientoa la hidrlisisdel pirofosfato
favorece el crecimiento de la cadena -la reaccin global de polimerizacin (Fig. 25.3).
Las cadenas de las molculas de ADN son antiparalelas (de polaridad opues-
ta); esta disposicin es la que- permite
- me,jor apareamiento de las bases. En el
proceso de sntesis, las polimerasas se van desplazando sobre la cadena de ADN
en la direccin 3 ' -t 5 ' a la vez que forman la nueva cadena en sentido 5 ' + 3 ' ,
lo une significa uue el uroceso Dresenta tambin carcter antiuaralelo: esto hace
que la doble hebra que se va formando tenga ya una estructura en doble hlice como
las molculas originales, lo cual le confiere una elevada estabilidad (Fig. 25.4).
En resumen, la replicacin se produce por complementaridadde bases, aadidas
una a una en forma unidireccional y antiparalela, tiene carcter semiconservativo y
est acoplada a la hidrlisis del pirofosfato.
Requerimientos de la replicaci6n
Para que la replicacin tenga lugar hace falta un nmero considerable de molcn-
las, en especial de macromolcnlas,entre ellas se encuentran los 4 tipos de nuclesidos
.
trifosfaiados v los 4 desoxinuclesidostrifosfaiados. as como iones divalentes.. esDe-
cialmente el Mg2+que siempre acompaa a los nncletidos en sus reacciones. El total
de protenas que participa en la replicacin es desconocido, pero se sabe que constitn-
ye un nmero considerable,entre ellas se encuentran las protenas estabilizadorasdel
Etapas de la repiicaun
El estudio de la replicacin ha sido dividido de forma tradicional en 5 grandes
etapas, cuyo conocimiento no es uniforme, pues la complejidad de cada una es diferen-
te. La preiniciacin consiste en el ensamblaje del sistema replicativo; la iniciacin, en
la colocacin adecuada del primer precursor: la elongacin, en el crecimiento de la
cadena y la terminacin, en el final del proceso, as como la posterminacin se refiere
a modificaciones que experimenta la molcula recin formada hasta ser totalmente
funcional.
Estas mismas etapas, aunque con contenidos diferentes, sern consideradas en los
dems procesos -transcripcin y traduccin- relacionados con los mecanismos de
transferencia de la informacin gentica y se resaltar la similitud formal que existe
entre ellos.
El primer evento es tener acceso al sitio oriC, lo cual se logra por la accin de las
topoisomerasasde tipo U, que por su modode actuar, como se muestra en la figura 25.5,
favorecen la formacin de topoismeros negativos que son los adecuados para la
repcacin. La preiniciacibn consiste en la separacin de las 2 cadenas en el oriC, de
Inanera que las protenas replicativas puedan acceder a la secuencia de bases del ADN.
Como esta separacin origina superenrollamientos positivos hacia a ambos lados
de oriC, son necesarias las topoisomerasas tipo 1 y tipo 11 para mantener el
superenrrollado negativo requerido para la replicacin.
Los eventos queocurrenen oriC tienen el orden siguiente: la protena DnaA se va
uniendo a las secuencias de 9 nucletidos R1-R4 de forma cooperativa, y adems,
favoreciendointeraccionesentre ellas, de manera que al oriC pueden quedar unidas de
Dna A + HU
Iniciaun
Pdiahacerp~lahorq31aeswcesaiwotro~pode pmteiasAlquedarsepaiwi;s
las 2 hebras del ADN quedaexpuestaunasecuenciadeunos70 nuclebodos,denomnadasitio
deensamblajedel Uii&doroPAS@~earsambly~~).ElsiooPASsmnocidoporla
protena PriA,quese une a l y permite la unin posterior dePriB; entoncesse une DnaT y
pmmuevehaciaeesitiolatranslocaandeun~mplejo~nstituidoporDnaB:DnaC:PnC El
complejo de 6 protanas formado se mueve sobre el ADN en las 2 direcciones gracias a la
actividad de helifasa 5 ' 7 3 ' de DnaB y la 3 ' +S ' de%.
En lugares especficosel complejo reconoce alguna serial y a l se une la DnaG que
tiene actividad iniciadoray forma polirribonncletidosde aproximadamente 10unida-
des de largo, el ARN iniciador. La accin iniciadora deDnaG dependede la presencia de
DnaB; esta acciGn c-mhinada de iniciadorasy helicasas esuntemaque se repite en todos,
o casi todos los sistemas replicativos estudiados. Al conjunto de todas estas protenas,
incluyendo a DnaG se le denomina complejo iniciador (Fig. 25.7).
-9As
~-...
5' 3'
3' I I I I I I I I I I 5'
1 PAS
Pri A. P B: Dna t
5'
3' 5'
5'
t &/+SD
n Dna
I I I I I I I I I Y - I / R W I I I I I l l l
3' l l l l l l l I I I I I I I I I
5'
-+
NTP
Fig. 25.7. Formacin del corpsculo iniciador. Al pmgresar la abertura del ojal se descubre el PAS al
cual se unen en forma sucesiva PriA, PriB y DnaT, y estos a su vez promueven la incarpa-
incorporan las subunidades al ncleo, pero tanto la procesividad como su alta veloci-
dad tienen un requerimiento ahsoluto de la subunidad P; esto se debe a la forma en que
la poliinerasa se ensambla sobre el ADN. Una vez formado el ARN iniciador,el comple-
jo y se asocia al Iihrido ADN ) ARN y promueve la incorporacin de la subunidad 8;
esta protena est formada realmente por 2 subunidades que presentan una forma circu-
lar hueca. El complejo y produce la abertura del anillo que despus se cierra con el
hbrido ADN ARN en su interior. Este proceso requiere ATP y es el nicomomento
que la ADN polimerasa 111necesita ATPpara funcionar. La estructura particular de la
subunidad P le permite deslizarse sobre el ADN de doble hebra hasta localizar en una
de ellas un extremo 3 ' - 0 H . En cualquier momento, el ncleo de la polimerasa despla-
za al complejo y y se une al anillo deslizante formado por la subunidad 8; al ncleo se
incorporan sucesivamente el restode lassubunidades. La importancia de que el com-
plejo Pol 111* contenga 2 copias del ncleo (a&@)se ver inmediatamente cuando se
trate la elongacin. La incorporacin de la ADN polimerasa 111al ADN preiniciado se
muestra en la figura 25.8.
hbridos ADN ARN; debido a esta actividad, ella va eliminando uno a uno 10s sintetirar dc nirnera simultnea la
hehra riinductora > la conducida.
Fig. 25.12. Accin de la ADN ligasa. Utilizand<i romo cofaitor el NAD', la ADN ligasa de la E. col
une nudetidos contiguas mediante la formacin de un enlace fosfodister, con lo cual los
frapientos formados en la banda conducida se unen unas ion otros y se forma una banda
continua. -- m--
La ADN polimerasa 1 es una enzima ms sencilla que la pol 111, pues se trata de
una cadena polipeptidica nica de 109 kD; adems de las actividades menciona-
das tambin posee actividad esonucleasa 3 , -5 ' , cuya importancia se ver ms
adelante. En su movimiento sobre el ADN es capaz d e provocar el
desenrollamiento.
La ADN ligasa es tambin una enzima sencilla, formada por una sola cadena
polipeptdica de 77 kD y fue descubierta en 1966 en 5 laboratorios simultnea-
mente. Para la unin de 2 oligodesosinucletidos se requiere que estn formando
parte de una doble cadena de ADN. La formacin del enlace fosfodister entre los
fragmentos necesita de una fuente de energa que en la E. colila proporciona el
NAD' (Fig. 25.13).
Como las 2 horquillas se mueven en direccin opuesta, la cadena que se
sintetiza de manera continua (en favor del movimiento de la horquilla) no es la
misma en cada horquilla y recibe el nombre de banda conductora, en tanto, la que
se sintetiza discontinuamente recibe el nombre de banda conducida.
En la E. colise conoce adems otra enzima, la ADN polimerasa 11, cuya funcin
parece estar ms bien relacionada con los mecanismos de reparacin del ADN, pues
algunos mutantes que carecen de ella no presentan alteraciones en la replicacin. El
movimiento de las horquillas se favorece por la accin de las helicasas, y las torsiones 3. Mecanismo de accin de la ADN
que se generan se alivian por la topoisomerasa 1 (Fig. 25.14). ligas.. La reaccin ocurre en va-
En resumen, la nota ms sobresaliente de la elongacin es la actividad de la rias etapas. I,a enzima reacciona
ADN polimerasa 111 que aade uno a uno los desoxinucletidos en una hebra con el NAD' y forma un complejo
intermediario E:AMP. En un pasa
dirigida por la secuencia de la hebra contraria; de esta forma el proceso transcurre posterior la transferencia del gru-
rpidamente. Este alargamiento se produce de manera diferente en cada una de las po adenilato activa el extremo
2 hebras, para la fibra conductora slo hace falta la participacin de la pol 111; la 5 '-P, ron lo cual se facilita la for-
otra se alarga discontinuamente y requiere la participacin del comple,jo ni- macibn del enlaec fosfodister. La
ligasa y el AMP seseparan del ADN
ciador, la pol 111, la pol 1 y la ADN ligasa. En la E. coli se utiliza N.AD* como y la molcula queda hrmada intc-
fuente de energa para la accin de las ligasas. grarnente.
Fig. 25.14. Funcin de la topoisomerasa 1
en la elongacin. (a) E1 desplaza-
miento de la Iielicasa va creando
zonas de tensin por delante de la
horquilla que dificultan su avan-
ce. 1.a topoisomerasa 1 relaja esas
tensiones y facilita el proceso. (b)
Esquema del mccanisma de la
topoisomerasa 1 que consta de 2
pasos: Iro. corte de una banda del
ADN que queda unido a la enzima
y Zdo., paso de la otra banda por
la brecha y cierre del corte.
Terminacin
Fig. 25.16. Horquillas mltiples en los eueariontes. La replicaein en eueariontes se produce con la
formacin de numerosas horquillas que al crecer bidireeeionalmente se encuentran unas
con &ras y se fusionan, con lo cual se aumenta considerablemente la velocidad del procesa.
Pera como se muestra no todos los sitias de iniciacin se activan simultneamente.
454 L-Bmm
Replicaan en eucariontes pluriceluiares
A = Unin de la telomerasa
..........
.......... 5' C-C-A-A-T-C-C-C
-
Esiudios recientes uarecen demostrar aue la longitud de los telmeros est rela-
cionada con la posibidad de divisin de la clula, de modo que mientras ms corto es
el telmero, menor es la potencialidad proliferativade la clula; esto ha hecho que la
telomerasa se convierta en un posible blanco para el tratamiento del cncer.
456 -ua*le*
de copia, que las molculas hijas contengan exactamente la misma secuencia de
bases nitrogenadas que la molcula paterna. En estudios con bacterias que se
reproducen rpidamente y que permiten estudiar en corto tiempo varias genera-
ciones d e clulas, se ha calculado que en la replicacin se comete un error, o sea,
se incorpora una base errnea por cada mil a cien mil millones de bases incor-
poradas (loya 10"). Si el genoma de la E. coliposee aproximadamente 4 x 10"b,
la posibilidad d e error es menor que una base incorrecta por ciclo replicativo.
Ninguno de los mecanismos conocidos por s solos son capaces de explicarlo,
pero la accin conjunta de todos ellos puede crear un efecto potencializador, es
decir, todos juntos provocan una fidelidad mucho mayor que la suma de todos
ellos por separado. Algunos de estos mecanismos se comentarn a continuacin y
se har nfasis en varios de ellos.
El primer factor de fidelidad es la elevada especificidad del apareamiento de
bases formando los pares adenina-timina y citosina-guanina. El otro es la elevada
especificidad de las polimerasas, las cuales slo incorporan los desoxinucletidos
que forman pares complementarios al ADN que se est copiando.
Otro factor que contribuye a la fidelidad es la utilizacin de un ARN inicia-
dor, ya que como ste es eliminado y reemplazado por el segmento de ADN corres-
pondiente, estas zonas son rectificadas siempre. De usarse un segmento de ADN
como iniciador, estas zonas no se leeran de nuevo y cualquier error en ellas se
podra mantener.
Existe, adems, un mecanismo de rectificacin. A pesar de todo lo anterior,
cuando se incorpora una base errnea entra a funcionar el mecanismo denomina-
do de edicin. La base incorrecta no forma pares de bases tan estables como la
correcta y esa zona del ADN se debilita; esto hace que en ocasiones los
desoxinucletidos aadidos posteriormente no se unan bien a la banda complemen-
taria, lo que sirve como seal a la ADN polimerasa 111, que con su actividad
exonucleasa 3 ' 4 ' comienza a eliminar los nucletidos mal apareados. Cuando
llega a una zona donde el pareamiento es correcto detiene su accin y entonces la
polimerasa 111contina alargando la cadena de forma adecuada. En este mecanis-
mo tambin pueden intervenir endonucleasas que producen la hidrlisis del enla-
ce fosfodister prximo a las bases mal apareadas, hacindolo siempre en la cade-
na neoformada, pues sta no tiene an el patrn de metilacin caracterstico, y
con ello se diferencia de la cadena que sirve de molde o patrn. Todos estos
mecanismos contribuyeii a que los errores de copia sean mnimos y el proceso
transcurra con una elevada fidelidad.
Inhibidores de la replicacin
Existe un numeroso grupo de sustancias, de las cuales muchas de ellas son
antihiticos. que actan como inhibidores d e la replicacin y cuyo empleo ha
contrihuido a dar la !isin actual sobre el proceso. Atendiendo a s u mecanismode
accin se clasifican en 2 grupos: los que actan sohre el ADN molde y los que
actan sohre las protena5 replicativas.
Al primer grupo pertenecen los colorantes de acridina, la actinomicina D y el
etidio, que se intercala11entre las bases y dificultan la separacin de las cadenas;
la netropsina !la clistaiiiicina .A. que se unen fuertemente a zonas ricas en pares
A-T; y la bleuiiiicina ! iieiicarzinostatina, que producen roturas de los enlaces
'
entre los carhonos 3 ' 4 ' de la desoxirribosa.
Al segundo grupo pertenecen la afidicolina, que inhihe la ADN polimerasa
alfa; y la novohiociiia !el rido iialidxico. que actan sobre la topoisomerasa 11.
Un importante g r u p o d e inhibidores lo constituyen los 2 ' - 3 '
didesoxirribonuclesidostrifosfatados, que se han empleado para determinar la se-
cuencia de bases de los ADN; slo actan in vitro, ya que los nuclesidos trifosfatados
no atraviesan la membrana celular (Fig. 25.18).
o o
II
CH3,
CH - CH
,!
CH: \
NCH3 CH, N - CH3
/ /
o=c c\=
,o
/CH,
CH, -N
\
\
c=n
-
/-
I ,,CH,- CH HC-CH, I
O=C CH2
\
CH-CH\
/
NH HN CH3
Fig. 25.18. lnhihidores de la replicacin. / \
O=C
En la figura se muestra la estructu- \ /C = O
CH -- CH
ra de la aelinoniirina D que est
compuesta por un anillo triple de
1 \
NH '.
F-
NH
CH
1
CH,
fenoxazona y 2 polipptidas ccli- : ~ CH3
cos laterales. Al interactuar ron el
ADN el anillo de fenoxazana se
. .
intercala entre 2 pares de bases Actinomicina D
(preferiblemente GC) y los pp- . ...
. ,
,
, (,
,
," . , ,.?, ,
tidos interactan con lai zonas ve-
cinas fortaleciendo la unin entre ,.: ..
',. ,
las 2 bandas. La? protenas repli-
eativas al llegar al sitio donde est
la actinomieina D no pueden se-
parar las bandas del ADN y se de-
tiene el movimiento de la horqui- N-C
Ila. La novobioiina y el rido 0x0- 1 1
niliea par su parte san inhibidores OH H O 1
de las topaisomcrasas y su accin C=O CH2
dificulta la replieaein.
1
NH, Navobiocina cido oxolnico LH3
A manera de conclusiones
Hasta aquise han desarrollado los aspectos ms sobresalientes deunode los ms
importantes procesosde la niateria viva. Coniose vio al inicio,se planteaban unasene
de problemas importantes para su realizacin, problenias c l i p complejidad hacan
prever respuestas coniplejas y as ha resultado.
Pero cabra preguntarse ;por qu resulta tan complejo este proceso? No existen
mecanismos ms simples e igtiahiiente probables para un proceso de esta naturaleza?
;.Por qu se requiere un iiniero taii elevado de enziiiias. con tan elevados grados de
coniplejidad estructural y fiuicional'>
Por supuesto. que estas respuestas no las tiene nadie. Cuando se analiza un meca-
iiisniu de este tipo slo podemos decir las ventajas que representa con respecto a otro
alternati! o. sin llegar a saber por qu los organismos con estas caractersticas han sido
seleccionados de manera evolutiva sobre otros: esa es la base del razonamiento que
harenios a contiiiuacibii.
La replicaciuii se produce slo una \ez durante la vida de la clula,por lo cual
errores que se cometan durante el proceso pueden acarrear consecuenciastrascenden-
tes para el organismo y para la especie. Segn parece, sta es la razn primaria del
elevado grado de complejidad,lo que est apoyado, adems, por el hecho de que en la
medida que aumenta la longitud del ADN en las clulas es mayor el grado de com-
plejidad del proceso y mayor el nmero de factores protenicos especif~cos
involucrados.
El elevado grado de precisin que requiere la transferencia de informacin,de
generacin en generacin, con un elevado grado de fidelidad, obliga a la complejidad
del proceso molecnlar que constituye su fundamentofinal.
Resumen
La trasmisin de la informacin gentica de un organirmio a sus descendientes
constituye el fenmeno ms importante de ia materia viva, y aunque adquiere
diferentes formas de acuerdo con el tipo de organismo, su fundamento f i i es el
mecanismo de replicaun del ADN. Toda la informacin gentica est codicada
en la secuencia de bases nitrogenadas del ADN, y el apareamiento especfico de
ellas es el mecanismo bsico utilizado en todos los sistemas replicativos. La
replicaan tiene un carcter reiterativo, pues los desoxinucletidos son aadidos
por el mismo mecanismo al extremo de una cadena en crreimiento, procede por
complementaridad, acoplada a la hidrhis del pirofosfato y de forma antipara-
lela y semiconservativa.
La replicacin ms senciua es la de los virus de los proeariontes, cuyo estudio
ha permitido esclarecer algunos de los mecanismosmoleculares involucrados en el
proceso. En la replicacin del ADN de la E. cofi participan numerosas enzimas
como las topoisomerasas, helieasas, polimerasas, ligasas, ectera, as como otras
muchas protenas de carcter no enzimtico, pero cuya participacin es indispen-
sable en el proceso. Para su estudio, este proceso se ha dividido en 5 etapas. La
preioiciacin ocurre en un sitio especfico, denominado origen y en l las
topoisomeras~sU aumentan el superenmliamiento negativo, las helicasas separan
las 2 cadenas y las SSB estabilizan esta estructura que se denomina horquilla de
iniciacin. En la iniciacin un conjunto de protenas forman el wmplejo iniciador
que mediante la hidriisis del ATP, como fuente de energ'a, localiza una secuencia
especa y sintetiza un oligorribonucietido complementario al ADN denomina-
do ARN iniciador, el cual aporta el p p o 3 ' -0Hnecesario para la incorporacin
del primer desodrribonude6tido por la ADN- polimerasa Iii. La elongacin ocu-
rre de forma diferente en las 2 hebras. En la banda wnductnra el proceso es conti-
nuo y con la sola participacin de la ADN-polimerasaIii. En la banda conducida el
proceso es discoonuo y resulta necesaria la formacin de muchos ARN iniciado-
res en la medida que crece el tamao de la horquilla. La ADN polimerasa J H aade
los desoxinucletidoshasta encontrar un ARN iniaador. Los ARN iniciadores son
eliminados por la ADN polimerasa 1que, adems, Llena con desoxinucletidos los
sitios ocupados anteriormente por el ARN. La ADN ligasa une los fragmentos for-
mados dando integridad a la cadena neoformada. El movimiento de la horquilla es
facilitado por la accin combinada de las helicasas, las topoisomerasas1 y las SSB.
La terminacin constituye la etapa menos conocida; existe un sitio especfico para
la terminacin, al cual se unen protenas que provocan la terminacin de la
replicacin. En los ADN circulares se forman catenatos para cuya separacin es
n e c e a i a la accin de las topoisomerasas U. Posterior a la tenninarin ocurre la
modicacin que consiste en la meolacin de bases especficas, con lo cual se pro-
tege al ADN de la accin hidroltica de las enzimas de restriccin. Todo el proceso
presenta una elevada fidelidad de copia que viene dada, entre otros factores, por la
precisin del apareamiento de bases, la espedfddad de las polimerasas, la e W -
nacin del ARN iniciador y el mecanismo de reeticacin.
El estudio de la replicacin en eucariontes est an en sus primeros pasos,
debido a la compleja estmctura de los cromosomas y a la dificultad para la obteo-
cin de grandes cantidades de mutantes que permitan seguir una estrategia similar
a la uazada en procnriontes. No obstante, los estudios reazedos en virus y leva-
duras han dado susprimeros frutos. A partir de esos estudios,y con la identificacin
de genes y caracterizacin de protenas involucradas en la replieacin, es posible
en estos momentos tener una representacin bastante aproximada del proceso en
los organismos superiores, aunque an quedan muchos detalles importantes por
esclarecer.
Numerasos son los antibiticos cuya accin espeeea consiste en actuar como
inhibidores de la replieacin, los cuales, adems del beneficio que han reportado a
la lucba contra las enfermedades infecciosas, han sido de ine&ble valor para el
estudio del complejo proceso de la replicacin del ADN.
Los resultados obtenidos experimentalmente en diferentessistemasreplicativos
permiten intentar una descripcin generalizada del proceso, que tendr su expre-
sin partinilar en cada organismo dado. La repiicacin comienza en sitios especi-
fim del ADN, denominados orgenes de repiicacin, que contienen secuencias de
bases nitrogenadas que sirven para la unin de protenas espefficas. La unin de
estas protenas producen el desenrollamientolocal de la doble hebra del ADN, que
por accin de otras protenas es agrandado. Un sistema enzimticoespecfico for-
ma el ARN iniciador, que ser alargado por el replisoma que contieue,almenos,las
actividades de ADN polimerasa y de exonucleasa 3 ' -15 ' y que funciona en el
mecanismo de edicin. Una de las hebras se forma de manera connua, en tanto, la
otra se sintetiza por fragmentos que luego son unidos por Laaccinde ADN ligasas.
Todo el proceso se caracteriza por la elevada velocidad de pomerizacin, la alta
prwesividad y la extraordinaria fidelidad de copia.
Ejercicios
1. Demuestre que en el proceso de replicacin se cumplen los principios siguientes:
a) De los cambios graduales.
b) De acoplamiento.
c) De transferencia de informacin.
2. Teniendo en cuenta las caractersticas de su accin explique por qu es necesario
que en la preiniciacin intervenga la topoisomerasa II y durante la elongacin la
topoisomerasa 1.
3. ;Por qu algunos autores afirman que la replicacin es un procesosemidiscontinuo?
4. cul es la justificacin molecular de la necesidad de formar el ARN iniciador?
5. ;Puedeun mutante de la E. colique carezca de Iielicasas realizar la replicacin de
manera eficiente?
6. Cul esladifereiiciafuiiciot~al durantela replicacin entre la ADN polimerasa 1y
la ADN polimerasa III?
7. Para poder aislar con facilidad los fragmentosde Okasaki se prefiere utilizar bacte-
rias mutantes que son deficientes en la actividad dela ADN ligasa. ;Por qu cree
usted que sea asi?
8. Teniendo en cuenta las caractersticas funcionales de todas las ADN polimerasas
conocidas. plantee un modelo que pueda explicar cmo es posible la replicacin
de una ~iiolculalineal (no circular) de ADN.
Y. Para investigar si exista un sitio para la terminacinenelcromosomacircular de la
E. coli se realiz el experimento siguiente: el ADN fue cortado y se extrajo un
fragmento de gran tamao, despus los 2 extremos fueron unidos y se estudi el
proceso de replicacin, tomando muestras seriadas y analizndolas por
autorradiografa.Deduzca cules deben ser los resultados esperados:
a )Si en efecto existe un sitio parala terminacin.
bi Si el sitio de terminacin no existe.
En todos los organismos celulares el material gentico est constituido por ADN
de doble banda; aun cuando su estructura general es muy similar y eit compuesto por
las mismas bases nitrogenadas (A, T, C, C) existen notables diferencias entre las
organizaciones particulares de los genomas en procanantes y eucariontes.
Una primera diferencia reside en el contenido de ADNde los diferentes organismos.
Una bacteria tpica como la E. coli posee un material gentico equivalente a 4 x 10"
bases. En un insecto como la Drosophiln nielu~~ogaster es de 1.6 x 10' y en los inam-
feros, de 4.8 x 10".
En segundo lugar, en los procariontes el ADN ocupa un lugar central en la clula.
sin que exista una separacin fsica entre l y el resto del organismo. En las clulas
eucariontes el material gentico (ADN) se encuentra separado fsicamente del resto de
la clula por una envoltura constituida de una doble membrana (captulo 23).
Pero tal vez la diferencia ms sobresaliente radica en la forma caractei-ktica que
est organizado el material gentico en los eucariontes. Como muclias de esas
particularidades influyen notablemente en los mecanismos de expresin de la
informacin gentica y su regulacin, se estudiarn primero las particularidades
fundamentales de la orgaiiizacin del genoma en los organismos eucariontes.
Hb C Cambia en P6 glu-lis
Hh M S"*A,,%<"7"
Cambia en P63 his-tir Meta Hb
Al conjunto de formas alternativas del mismo gen que pueden ocupar el mismo sitio
en el cromosoma (locus) se le da el nombre de alelos. Pueden existir numerosas formas
allicas del mismo gen, pero una clula diploide slo puede contener 2 como mximo,
una en cada uno de los cromosomas homlogos. Si el par est representado por genes
idnticos, y por tanto sus productos son indistinguibles, el organismo es homocigtico
para esa pareja, pero si se trata de formas allicas, entonces es heterocigtico. Es muy
difcil encontrar algunas clulas u organismos pluricelulares que no sean Iieterocigticos
para uno u otro par de genes; esta diferencia en la estmctura de los genes se refleja en su
producto, o sea, en la protena y su funcin. Se utiliza el trmino de genes de tipo silvestre
para referirse al gen que supuestamente consewa su formaoriginal, a sus formas alternativas
se les denomina mutantes. por cuanto es la mutacin el mecanismo fundamental en la
formacin de los alelos. En ocasiones algunos de los alelos mutantes codifican un producto
que no es funcional. Suponga que existe un gen "A" que es de tipo silvestre y su mutante
"a" que da un producto anormal, incapaz de realizar cualquier funcin. Existen 3
combinaciones posibles para esta pareja de genes (Fig. 26.2):
1. Los 2 genes son de tipo silvestre, por lo que el organismo es homocigtico (AA) y
todo el producto gnico es normal.
2. Un gen es de tipo silvestre y el otro es mutante (Aa), el organismo es heterocigtico
y slo contiene aproximadamente la mitad del producto gnico normal.
3. Los 2 genes son mutantes (aa), el organismo es homocigtico, por lo que todo el
producto gnico es anormal. Si ese producto realiza una funcin importante para la
vida, la clula en esas condiciones no sobrevivir o lo har en condiciones precarias.
L,
color de los ojos, la forma de las extremidades. etctera. Los caracteres acostumbran a
clasificarse en dominantes o recesivos, de acuerdo con los patrones de trasmisin
gnica. En ocasiones se comete el error de hablar de genes dominantes y recesivos,
pero en realidad estos trminos slo se refieren al carcter determinado por el genotipo.
Estos conceptos son relativos y contrarios, o sea, la existencia de uno determina la
existencia del otro. En un inicio se deca que el carcter era dominante cuando siempre
se expresaba en el fenotipo, mientras que el recesivo slo lo haca si estaba en estado
homocigtico; aqu se conceba el fenotipo como las caractersticas ms externas del
organismo. En la medida que se han ido perfeccionando el conocimiento sobre la
expresin de los genes y los procedimientos que permiten localizar y cuantificar el
producto gnico, la concepcin del fenotipo y con ella la del carcter recesivo se han
modificado; es de esperar que con las nuevas tcnicas introducidas que permiten
detallar la estructura del gen, la diferencia esencial inicial entre estos 2 conceptos
tienda a desaparecer. La distincin entre caracteres dominantes y recesivos es muy
importante en la prctica mdica, pues hay enfermedades que se trasmiten como un
carcter dominante y otras como recesivo, todo lo cual el mdico debe tener muy
presente para hacer los asesoramientos genticos del paciente y de la familia.
Un ejemplo permitir esclarecer los conceptos definidos hasta el momento. Para
los grupos sanguneos ABO existen bsicamente 3 alelos. El grupo sanguneo A es
dominante y est determinado por el alelo A. Ntese que aqu el fenotipo no es algo
externo, pues por la sola observacin del sujeto no es posible determinar su grupo
sanguneo. El grupo sanguneo B es tambin dominante y lo determina el alelo B. El
grupo O tiene carcter recesivo y se origina por el alelo O. Una persona con la
combinacin gnica AA ser del gmpo sanguneo A, en tanto la del genotipo BB ser
del B. Las combinaciones genotpicas A 0 y BO originan fenotipos A y B,
respectivamente. El genotipo 00 corresponde al grupo sanguneo 0 . Ahora bien,
como A y B son dominantes, la persona que tenga un genotipo AB expresar amhos
genes por igual y ser del gmpo sanguneo AB. Cuando 2 genes que determinan el
mismo caricter se expresan de igual forma en el fenotipo, se dice que los caracteres son
codominantes.
Esto tiene su explicacin molecular. Las sustancias que determinan el grupo
sanguneo ABO son pequeos heteropolisacridos que forman parte de la membrana
de los eritrocitos. Como se muestra en la figura 26.3, los sujetos del grupo sanguineo O
Fig. 26.3. Determinacin gentica de los
grupos sanguineos ABO. Los
eritroeitas poseen un polisacrido
unida a lpidos o protenas de sus
membranas, ste posee carcter
antignieo y est formado como
se muestra en IP figura por gluco-
sa (Glu), galaefora (Gal), furnsa
(Fue) y N-acetilglucosamina
(NAGlu), y es denominado antge-
no O. El gen A codifica la enzima
A que aade al polisacridoun resto
de N-aeetilgalactosamina (NAGal)
y lo convierte en el antigeno A.
Por su parte el gen B codifica la
enzima B que aade al nntgeno O
un resta de galactosa y lo ronvier-
te en el antigeno B. Si la persona
pasee los 2 genes poseer tambin
las 2 enzimas y aproximadamente
tienen en sus eritrocitos el polisacndo mostrado en (a). El gen A codifica una enzima
la mitad de sus anlgenos sern A y que aade la N- acetil-galactosamina al extremo del polisacrido, cambiando su
la otra mitad ser B, por lo que ella especificidad reaccional; en tanto el gen B codifica la enzima que aade galactosa,
ser del grupo AB. De no poseer otorgando una especificidad diferente. En los sujetos AA 6 A 0 la estructura resultante
ninguna de estas genes, entonces
ser del grupo O.
ser como se muestra en (b). en los BB BO es como en (c). En los 00 es como en (a).
mientras que en los AB se encontrarn como en (b) y (c) aproximadamente a partes
iguales.
Genes y ADN
De acuerdo con numerosos estudios el ADN contenido en una clula diploide
Ii~iinanaes aproximadamente 7,3 x 10" g. Si el peso molecular promedio de un par de
iiucletidos es de 1,025 x 10~"g se deduce que la clula diploide humana contiene
alrededor de (7,3 x 10~"/1,025x 1W)7,l x 1 O9 pares de bases por genoma diploide,
3,s x 10' por geiioma haploide.
Si todo este ADN codificara protenas de aproximadamente 500 aminocidos
cada una, podra producirse ms de un milln de ellas. Como para cada aminocido se
requieren 3 bases harn falta (500 x 3) 1 500 pares de bases. A partir del genoma total
seran (3.5 x lO''I1,S x 10') 2,3 x 10"protenas.
Por varios mtodos genticos se ha determinado que la clula humana contiene
aproximadamentede 70OX a 100000genes. Si se mantienen los mismos "supuestos"anteriores,
pan la codificacinde 100 000protenas senm necesarkai [(7x 109 x (3 x IW)] 2,l x 10*pares
de bases, lo cual representa [(2,1 x 107)1(3x 10') aproximadamente 1071, es decir, que
slo aproximadamente el 10 %del ADN contiene informacin para la sntesis de
riiolculas especficas (protenas. ARNr y ARNt). De aqu se deduce que la mayor parte
del ADN est implicada en los mecanismos de regulacin de la expresin gentica o en
otras funciones an desconocidas.
Si se asla el ADN de una bacteria y se cona mediante emiiiias en unos 500 a 1 000
fragmentos y se centrifiigaii en un gradiente de densidad de CsCI. se observan que se
renen en una zona nica y estrecha (Fig. 26.4).
Esto se debe a que la densidad del ADN es proporcional a su contenido en G + C
y la composicin promedio de cada fragmento, que contiene varios cientos de bases,
no vara mucho de uno a otro. Si se aplica el mismo procedimiento al ADN de un
mamfero se obtienen 2 zonas, la mayor con una composicin aproximada de A + T del
60 %,pero la menor con ms del 90 P/a de A + T. lo cual constituye un hecho inusual. Al
ADN contenido en esta zona se le denomina ADN satlite, &te ha sido observado en
muchos organismos y en el ser humano constituye del 0.5 al 1 lo (10' pares de bases)
del genoma.
Una caracterstica importante del ADN satlite es lade estar formado por secuencias
repetidas organizadas en tndem, una a continuacin de la otra. Estas secuencias
generalmente son cortas, de 5 a 10 bases, pem pueden llegar a tener de 100 a 200 bases.
Las secuencias caractersticas de la D. mrlarioguster son las siguientes: -
1.683
Densidad
(O O 86---------------- 5 130 0 1
;; 16
16
81
10
10
139
o
0
3 .--............84
41...............1
~
. ; l;i 123
67
28
32
~ i g 26.6.
. caractersticas de 10s intrmes.
La figura representa la secuencia
de bases nitrogenadar alrededor
de las uniones exn-intrn y la
intrn-exn. as como demueslra
Total
a n a l i ~ a d o 139
) ~ ---( 1 1-
130
cioconstancia
la y del par del
AGpar GTfinal.
en el en el ini-
Fig. 26.9. Familias multignicas complejas. El grupo est formado por genes que se transeriben de
forma independiente. L a figura representa la familia de las - . las hiitonas en (a) el
cenes rima
eriza de m&, (b) la ~ros&hila mdanogaster y (c) en el tritn, una especie de salamandra
marina. La flecha indica el sentida de la transcripcin.
El desarrollo que han alcanzado las diferentes tcnicas, para el estudio de los
cidos nucleicos, hace tener esperanzas de que en los prximos aos se conocern
muchos ms elementos acerca de la estructura y la organizacin del genoma humano.
A este objetivo debe contribuir de fonna sobresalienteel Proyecto del Genoina Humano.
que pretende establecer la secuencia de bases de todas las molculas de ADN contenidas
en los cromosomas humanos y realizar estudios comparativos con secuencias de otros
organismos, para determinar la funcin de cada uno de los segmentos de ADN. Esta
investigacin es transcendental para la biologa contempornea y debe estar terminada
para los primeros aos del prximo siglo.
Resumen
El material gentico de todos los organismos celulares est constnido por el
ADN, que puede exLsr en una sola molcula como en los proeariontes, o en varias
como en los encariontes, en los niales, adems, est separado del reato de la clula
por una doble membrana. El ADN de eucariontesse encnentra asociado con prote-
uas, formando el par cromatina-cromosoma. El nmero y la forma de los
cromosomas son caracterLsticos de cada especie. En los cromosomas se hallan
secuencias de bases nitrogenadas que contienen la infomci6n neeessria para la
&tesis de las protenas, los ARNr y los ARNt: stos son los genes. El conjunto de
todos los genes en un organismo deine el genoma Un gen puede tener muchas
formas al6Ucas pero una dlula s61o puede tener 2. Si son ignales, la d u l a es
homaeig6tica, y heterocig6tieasi sondesiguales. La pareja de genes que determina
un earcter forman el genotipo y su manifestscin externa es el fenotipo. Un ejem-
plo caraetersocn de la relacin genotipo-fenotipo en seres humanos lo constituyen
los g m p sanguneosABO.
En la clula eucarionte existen distintos tipos de secuencias nueleotdicas en el
ADN: las altamente repetidas, mediana y moderadamente repetidas y las semen-
cias nicas. Los genes casi siempre se encuentran en secuencias de copia nica,
aunque existen notables excepciones como los de las historias y los ARNr. Las
secuencias altamente repetidas se locazan en los centrmeros y con menor fre-
cuencia en los telmeros; su hinan es de800nocida Los genes eucariontes son
diseonnuos,pues presentan secuencias hieraladas no codificantes (htrones), se-
parando las codificantes (exones). Los geoes cuentan adems con sus promotores y
con sus seeuenciasfnncionales-aunque no ccdicantes- tanto hacia el extremo 5'-P
como hacia el 3'-OH.
Muchos genes relacionados funcionalmente se agrupan,formando famias
gnicas que pueden ser simples, complejaso reguladaspor el desurolio ontogentico
del organismo.
El genoma humano constituye un caso especial dentro de los organismos
eucariontes por la importancia extraordinaria que tiene su mnoeimiento pmfnn-
do. Se han LoealVado ms de 800 genes en los cromosomas humanas y a partir de
n u m e m estudios se han podido precisar algunas de sus caractersocas ms so-
bresalientes: los genes que ccdican proteinas espeficas de un rgano o tejido no
estn agrupados en el mismo cromosoma, as como tampoco los relacionados con
una va metablica; las subunidades de protehw heteromncas se codifican por
genes localizados en cromosomas diferentes; algunos genes ccdiean ms de una
cadena popeptidica; tambin se encuentran separados los genes que ccdican
formas diferentes de la misma e m k q por ltimo, la presencia de pseudogenes en
una proporcin notable del genoma es un heeho apreciable en el genoma humano.
F.stos conocimientos tienen no S610 una importancia terica, sino tambin prc-
tica sobre todo en el campo de las ciencias mdicas-
Ejercicios
1.Un gen A tiene un alelo A ' . Si el genotipo femenino es AA y el masculino A ' A '
cules sern los posibles genotipos de los descendientes?
2. Cul sera el resultado de la pregunta anterior si los genotipos masculino y feme-
nino hubieran sido AA ' ?
3. Se ha calculado que en el ADN de la E. coli existen 1 500 genes. Si cada uno
codifica una protena de 500 aminocidos y el ADN total es de 4 x 10' pb. Cul
ser la proporcin codificante de ese ADN?
4. Cules son los tipos de secuenciai de ADN que encontramos en las clulas
eucariontesy qu relacin tienen con las funcionesdel ADN?
5. A un cultivodeclulassele aade ['HI-uridina durante lominutos. Las clulas se
lavan para eliminar el exceso de reactivo. Se sigue entoncesla marca radiactiva por
los compartimentoscelulares. En los primeros minutos despus de la exposicin
toda la radiactividad se localiza en el ncleo de todas las clulas. A medida que
pasa el tiempo se observa que las clulas se comportan deforma diferente, mientras
en algunai de ellas la radiactividad permaneca en el ncleo, en otras se localizaba
en el citoplasma Cmo pueden explicarse estos resultados?
6. Se sabe que la ARh' polimerasa tarda aproximadamente 5 minutos en sintetizar el
ARNr de 28 S. Calculecuntas molculas pueden formarse en 8 horas si:
a) Existe un slo gen para el ARNry se transcribecon una sola polimerasa cada vez.
b) Existen 100 copias del gen y cada uno es transcrito por una sola molcula de la
enzima.
c) Existen 100 copias del gen y cada uno es transcrito por 100 polimerasas
simultaneamente.
Aspectos generales
La transcripcin es el proceso central en el crecimiento y desarrollo de las clulas,
en lacual los genes que se encuentran en el ADN de los cromosomassonselectivamente
localizados, reconocidos y transcritos, produciendo ARN mensajeros, ribosomales
(estructurales)y de transferencia (adaptadores). El notable progreso en Los ltimos
aos de la gentica bacteriana,el ADN recombinante, la bioqumica-fsica, etctera,ha
Fig. 27.1. Relacin transcripein traducrin.
ampliado considerablementelos conocimientossobre este proceso. Aun cuando pue- En los proeariontes (a) al no eiis-
dan existir diferencias en los mecanismos de transcripcinen diferentes organismos, tir envoltura nuclear la traduccin
hay una serie de caractersticascomunes a todos ellos que se enumeran a continuacin. comienza generalmente antes de
terminar la transcripcin. En los
Los precursores de la sntesis de los ARN son los 4 ribonuclesidos trifosfatados, cuearionles (b) cl ARNm se forma
ATP, GTP, UTP y CTP. En la reaccin de polimerizacin, los ribonucletidos son en el ncleo y alli se procesa antes
aadidos uno a uno al extremo de una hebra en crecimientopor enzimas denominadas de ser transportada al citoplasma
ARN polimerasas dependientes de ADN o ARN polimerasas. donde es traducida.
La secuencia de bases del ARNes complementaria a la hebrade ADN, quese est
copiando. Aunqueel ADN es en general dedoble hehra,en cada sector especficoslo
una de ellas se utiliza como molde o patrn para la sntesis de ARN.
La hebra de ARN crece en el sentido 5 ' -3 ' ,mientras va copiando la hebra del
ADN que est en direccin 3 ' -5 ',luego la sntesis es antiparalela y nnidireccional.
La reaccin bsica de polimerizacin consiste en la adicin de un ribonuclesido
trifosfatado al extremo 3 ' - 0 H del nucletidoprecedente, con liberacin de pirofosfato,
formndose un enlace fosfodister. Al igual que en la replicacin, la polimerizacin
avanza acoplada a la hidrlisisdel pirofosfato. Las ARN polimerasas son capaces por
s mismas de iniciar la sntesis, luego no hay necesidad de un iniciador.
En resumen, la transcripcin se produce por el mecanismo bsico de
complementaridad de bases. aadidas en formas gradual, unidireccional y antiparalela,
sin necesidad de un iniciador y acoplada a la hidrlisis del pirofosfato.
Etapas de la transcripcin
En el estudio de este procesoseseguir el mismo ordenamiento quecon el estudio
de la replicacin: la iniciacin, la elongacin y la terminacin, as como los eventos
previos a la iniciacin (preiniciacin) y los posteriores a la terminacin (postermi-
nacin). En primer lugar se analizar c6mo ocurre el proceso en los organismos
procariontes, queson los mejores conocidos. Ms tarde se tratar la transcripcin en
eucariontes dondese ha producido un extraordinario avance en los ltimos aos. La
transcripcin es un proceso ms simple que la replicacin. En la E. coli una sola
enzima es suficientepara la realizacin de todo el proceso; se comienza por describir
las caractersticas estructurales y funcionales de la enzima para no intermmpir la se-
cuencia de los eventos moleculares.
Esta enzima debe realizar mltiples acciones para llevar adelante la transcripcin:
reconocer el comienzo de lacadena de ARN que se debesintetizar en una doble hebra
de ADN, para lo cual debe identificar una secuencia de bases especfica,debido a las
irregularidades de la estructura del ADN en esa zona del genoma; colocar cada
nucletido en su posicin correcta de acuerdo con la secuencia de bases del ADN;
realizar la sntesis total de la molcula de ARN desde el principio hasta el final;
reconocer las seales que indica el lugar apropiado para la terminacin del proceso;
debe adems reconocer sitios reguladores tantoen el ADNcomoen el ARN transcrito,
y poder interactoar con factores proteinicos y pequeas molculas que modulan la
actividad de la enzima en su recorrido sobre el ADN.
La ARN polimerasa mejor conocida es la de E. coli,quefue descubierta por Weisy
Gladstoneen 1959. Esta enzima est constiiuida por 5 subunidades; 2 subunidades a de
136 kDdemasa molecular cada una; una P de 150 kD; una p 'de 155 kD, y una ode7U kD,
para un total de ms de 450 kD. Es una de las mayores enzimas conocidas. Cada clula
bacteriana contiene aoroximadamente unas 3 000 molculas de la enzima.
Diversos procedimientosexperimentalespermiten afirmar que la subunidad P est
relacionada con la unin de los ribonucletidos sustratos y de los inhibidores de la
polimerizacin, as como la subunidad p ' en la unin con el ADN. Ambas subunidades
contienen un ion Zn2+por molcula. La funcin de la subunidad a est relacionada
con el ensamblaje de la enzima. Ninguna de las subunidades presenta actividad
cataltica, ni de unin con el ADN en ausencia de las otras. La suhunidad a s e disocia
fcilmente de la holoenzima, quedando el ncleo constituido por el resto de las
subunidades. Recientemente se ha reportado la existencia en la E. coli de, por lo
menos, 5 subunidades o diferentes.
La holoenzima presenta una forma ms bien alargada, con una longitud mwma de
25 nm, es lo sufcientementegrande paraentrar en contactocon casi 75 pares de bases del
ADN, sin embargo, el ncleo slo presenta 10 nm de longitud que le permite cubrir
aproximadamente 30 pb.
El ncleo de la enzima tiene gran afinidad por el ADN, y se une a ste fuertemente
en cualquier lugar de la cadena.
Fig. 27.3. Estructura del promotor. Se muestra la secuencia del promotor de 3 upemnes. En azul, la
secuencia de -35 que parcee estar muy conservada. En rojo, la regin -10 can su secuencia
consenso TATAAT. La letra roja corresponde con el primer nucletido, en ser transcnto que
generalmente es A.
Terminaan
1
1
/ Zona rica ZOnarica
ienGC enAT
'o'
I I
Transcripcin
ARNm
....
ABCDFG ZZYYZZ ......G'FrE'D'C'B'A',
donde: A y A', B y B' y las dems son bases complementarias. De esta forma la
secuencia es capaz de formar pares de bases intracatenarios, dando lugar a una
estmctura en tallo y asa enel ARN y posiblemente tambin en el ADN.
2. Una secuencia rica en CG muchas veces esta localizada dentro del tallo, aunque
puede parcialmenteencontrarse dentro del asa.
3. Es usual quese presente a continuacinuna secuencia rica en AT,que sale fuera del
tallo y hace que el ARN contenga una adenina seguida por 4 a 8 uridinas.
Fig. 27.12. Estructura de un ARNm palicistrnico. Las ARNm de prucariontes son policistrnicos,
contienen la informacin para varias cadenas polipeptdicas (G1, G2, G3 y G4), cada una de
lar cuales presenta su mdon de iniriaein (AUG) y de terminacin (UAG) separados por
sceueniias espaciadoras ( E l , E2 y E3), la zona conductora hacia el extremo 5' que contiene
la secuencia de Sliine y Dalgarno (SD), as como la zona no traducible del exlrema 3'-OH.
- -
Todos estos cambios se realizan despus de la transcripcin en un proceso llama-
do modificacionespostranscripcionaleso maduracin.
El ARNt mejor conocido es uno de la E. coli que lee el codon GAU y transfiere
tirosina, que est formado por85 nucletidos. La E. coli tiene 2 genes para este ARNt
que estn adyacentes y presentan 2 secuencias idnticas de 350 bases,cada unacon un
espaciador de 200 nucletidos. Los 2 genes son transcritos en un solo ARN, que es
cortado cuando se hacompletadosusntesis. La transcripcin comienza 41 bases antes
del extremo 5 ' -P del ARNt y termina 224 bases despus del extremo 3 ' -0H.
Primero ocurre la transformacin del extremo 3 ' por la eliminacin de las bases en
vanos pasos enzhticos, hasta dejar d o 2 nucletidos despus del CCA; despus se
eliminan las bases anteriores al extremo 5 ' , quedando ste formado. La enzima
ribonucleasa P (Amasa P) bidroliza la molcula en el lugar adecuado, pues reconoce
su estructura tridimensional en esta zona; inmediatamente la misma enzima elimina
los 2 nucletidos sobrantes del extremo 3 ' ,con lo cual la molcula adquiere su tama-
o definitivo. Por ltimo, se produce la modificacin de las bases nitrogenadas en
sitios especficos y se forma la pseudouridina, la tionridina, la metilguanosina y la
isopenteniladenosina (Fig. 27.13).
- -
ARNr 16s ARNt(ne) - ARNtiAla) - ARNr 23s ARNr 5S - ARNtiAsp) - ARNtiTrp)
Los genes de los precursores de los ARNt son transcritos por la ARN polimerasa
111, de muchos de ellos se conoce totalmente la secuencia de bases y a partir de ella se
han podido precisar las secuencias necesarias para la transcripcin. Hacen falta 2
regiones: la primera,localizada entre las posiciones +10 y +20 y la segunda, entre +S0
y +60 del ARNt maduro -lasseales estn dentrodel gen- y stas corresponden a las
asas D y TC, respectivamente; luego estas zonas tienen una funcin dual: en la estruc-
tura tridimensional de la molcula y en la promocin de la transcripcin de sus genes
(Fig. 27.16).
Unidadesde transeripei6n
Antes de describir la maduracin de los ARNm es conveniente hacer algunas
consideraciones. En primer lugar, los ARNm de eucariontes son monocistrnicos, slo
tiene informacin para la sntesis de una cadena polipeptdica. Tanto el extremo
5 ' -P como el 3 ' - 0 H estn modificados por una estructura en forma de casquete,
el primero, y por una larga secuencia de adeninas repetidas, poli(A), el segundo.
Los ARNm maduros no contienen las secuencias de bases que corresponden a los
intrones en el ADN, pues son eliminadas durante la maduracin.
L
Fig. 27.17. Eliminacin de intrones en los
ARNt En la eliminacin de los
intrones, los 2 exones son proce-
sados de forma diferente. Una
endonueleasa (EN) hace el corte
en los sitios de unin del intrn. El
fosfato de la posicin 3' pasa a la
2' espontneamente,en tanto, una
quinasa ( Q ) adiciona un grupo
fosfato al extremo S', que despus
es activado par una ligasa (L)que
le transfiere un grupo adenilato.
Por ltimo, se forma el enlace
fosfodister, mientras que una
fosfalasa (F) elimina el grupo
fosfato de la posicin 2'.
ARN m
ARN m
Fig. 27.19. Unidades transcripcionaks com-
b ..
// .... . . .~ .. plejas. (a) El gen de 1s ealcilonina
....~e.= . ,
gen
?. .
-+A?
.! .
V.,.l
>., ., , // , . !, , . ' con un solo sitio de iniciacin (i) y
ii h // A, A, 2 de ~>oliadenilaein(A) y madu-
racin diferente que, segn el pri-
mer caso,da origen a la cakitonina
Sitiodepoli (A)
/ Terminacin
-- ~ 1 27.22.
~ . Formacin de la cola de Poli A.
-- La secuencia AATAAA indica que,
en unos 20 pb ms adelante, se
5 .
debe oroducir la incor~oraeinde
Eliminacin de nucletidos la cala de poli adcnina POMA). Al
. IAUAAA realizarse la lrsnscripcin, u n a
5'
4
' Adicin de poli (A)
&.,4-,\-. ...,\- 3'
endonueleasa hidroliza el ARNm
en cl sitio adecuado y la poli(Al
polimerasa adiciona adeninas que
5' 250 pueden llegar alcanzar el nJmero
de 250.
De esta manera quedan formados los extremos 5 ' y 3 ' a los pocos minutos de
terminada la transcripcin; estos extremos no experimentan ninguna otra modifca-
cin durante la maduracin.
El siguiente paso consiste en la eliminacin de los intrones, donde intervienen
ribonucleoprotenas que contienen los ARN nucleares pequeos U1, U2 y U5 (Fig.27.23).
Los intrones se eliminan uno a uno, esta etapa al parecer comprende los pasos
siguientes:
Todo el proceso requiere ATPcomo cofactor -que no puede ser sustituido por
ningn otro NTP- y Mgha bajas concenhaciones,pues muy elevadas tienen un efecto
inhibitorio.
Como se dijo anteriormente si la unidad transcriptiva es simple, el corte y el
empalme se producen siempre de la misma forma, originando siempre un mismo
ARNm; pero en las unidades complejas se emplean diferentes sitios de iniciacin
o de incorporacin del poli(A), o formas distintas de corte y empalme que pueden
originar ARNm diferentes y que, por lo tanto, darn origen a distintas protenas.
Se ha insistido en que la maduracin del ARNm constituye un punto de control
fundamental en el mantenimiento de los niveles adecuados de ARNm en el cito-
plasma.
Sobre el transporte de ARNm al citoplasma poco se sabe, solamente est
comprobado que ocurre una vez que el proceso de maduracin ha concluido. Al
contrario de los ARNm de procariontes, los de eucariontes son muy estables en el
citoplasma y tienen una vida media de horas; se ha pensado que esto se debe a la
modificacin de sus 2 extremos. Un fenmeno curioso es que la cola de poli(A) se
va acortando en el citoplasma. Dos experiencias son claves en estas conclusiones:
se aislaron ARNm que eran muy estables, se les elimin la cola de poli(A) y se
inyectaron en el citoplasma de una clula y se comprob que presentaban un
recambio muy rpido. Por otra parte, se tom el ARNm de histonas que no contie-
ne poli(A), se le aadi ste, se inyectaron en el citoplasma celular y se observ
que la velocidad de recambio disminuy considerablemente.
El conocimiento de estos procesos ha permitido conocer el origen de algunas
enfermedades, de las cuales las ms conocidas son algunos tipos de talasemia;
sta comprende un grupo de entidades nosolgicas que se caracterizan por la
ausencia total o parcial de una de las cadenas de la hemoglobina.
En algunos pacientes que presentan el tipo (no sintetizan cadenas P) se ha
descubierto una mutacin que origina un cambio G -,A en el extremo 5 ' del
segundo intrn; esto inactiva a este sitio y se produce un ARNm a partir de otro
sitio donante dentro del intrn. En otros casos del tipo P' (producen un bajo nivel
de cadenas p) se han localizado mutaciones en el primer intrn, donde se crea un
nuevo sitio aceptor. Se produce un corte y empalme anormales, utilizando este
nuevo sitio con preferencia al normal y disminuyendo asla formacin de cade-
nas B normales. Por ltimo, se han descrito casos del tipo u" (no sintetizan cadenas
u) que han perdido las 5 bases inmediatas al primer exn, con lo cual se pierde el
sitio donante para el corte y el empalme. Al no poderse utilizar este sitio se
emplea otro que est localizado dentro del exii.
Todos estos fenmenos son conocidos recientemente por lo que existen mu-
chos puntos no esclarecidos. Es de esperar que en los prximos aos se tenga un
conocimiento ms completo de los mecanismos empleados y del significado bio-
lgico de este complejo proceso de sntesis de los ARNm en las clulas eucariontes.
Inhibidores de la transcripcin
Pudieran considerarse 2 tipos de inhibidores: los que impiden la separacin de las
cadenasdel ADN, que por lo general son tambin inhihidores de la replicacin, y los que
actan de forma directa sobre las polimerasas. Los primeros ya fueron tratados en el
captulo 25. Entre los segundos se encuentra el antibitico rifampicina, que acta
sobre la ARN polimerasa, impidiendo la fase de iniciacin. Una sustancia conocida
como u-amanitina inhibe la sntesis de ARN en eucariontes por actuar sobre la ARN
polimerasa ii. Adems de sus acciones teraputicw por locual seran ya nificientemen-
te importantes,estos inhibidoresson de inapreciable valor en el laboratorio, pues su uso
hapermitidoesclarecer muchosaspectos de estos complejos procesos (Fig. 27.24).
Rifamicina B
Resumen
La transcripcin es el proceso central en el crecimiento y desarrollo de la
clula, en la cual la informacin gentica contenida en el ADN se copia en un ARN
especco, ribwmal, de transferencia o mensdero. El desarrollo tcnico alcanza-
do en los itimos aos ha permitido obtener una visin comprensible, en principio,
de este fenmeno. Lea precursores de la transcripcin son los nuclesidos iri-
fosfatados que son Unidos mediante enlace fosfodister 3 ' -5 ' ,por accin de la
ARN polimerasa, segn la secuencia de bases de una hebra del ADN.
En los proeariontes -especialmente en la E. coi&una sola enzima es eapaz de
reazar todo el procmo, sta es una protena oligomrica a la cual se unen otras
subunidades en diferentes fases del evento. Para comenzar la transcripcin la
polimerasa debe unhe ntimamente al promotor y lograr la aperinra de la doble
hebra del ADN, en este paso la subunidad a es fundamental; luego comienza la
incorporacin de los ribonuelesidos trifosfatados cnyas bases son complementa-
rias a lasdel ADN; la protena NusA impide la terminacin prematura de la cadena.
La terminacin se produce gracias a una seal especca en el ADN, aunque en
ocasiones la protena Rho determina el m e de la sntes'i, sin que al parecer existan
seales para ello. Despuk de terminada la sntesiscomienza el profeso de madura-
cin. Los ARNm no sufren modicaciones, pero los ARNr y ARNt se sintetizan en
forma de prenirsores de gran tamao, quedeben ser acortados hasta alcanzar su
forma denitiva
En los euuuiontes existen 3 tipos de ARN polimerasa: el tipo 1es del nuclolo
y rralizala sntesisde los ARNr; los 11y iii son del nucleoplasma y llevan a cabo la
sntesisde los ARNm, la primera, y de los ARNt y el ARNr de 5 S, la segunda.
Los ARNr derivan de un transeritoprimario de 45 S, que es metilado en bases
y ribosas de uucletidos especeos y acortado hasta su tamao denitivo. Es m-
nasa que en el ARNr de 5 S, la seal que promueve la transcripcin es intragnica.
Los ARNt tambin se originan de un precursor mayor; en su procesamiento se
incluyen la redueein del tamao, la eliminacin de intrones, la adicin del extre-
mo CCA-OH y la modicacin de Las bases nitrogenadas. Como en el caso de los
ARNr de 5 S, las sesales promotoras son intragnicas. Los ARNm se sinteizan por
la polimerasa U a partir de una unidad de transcripcin, simple o compleja. El
promotor se encuentra fuera del gen y en l existen varias secuencias necesa-
rias para la transcripcin. El proceso de copia incluye tanto los exoues como
los intrones. La seal de terminacin -si existe- no ha sido an identificada. La
maduracin consiste en la modificacin del extremo 5 ' -P por un nucletido de
guanina metilada (Cap); la transformacin del extremo 3 ' -OH, en una larga
cola de adeniua -poli(A)- y en el corte y empalme de la cadena para la elimina-
cin de los intrones. Se ha comprobado que una misma unidad de traoseripcin
puede originar varios tipos de ARNm maduros por diferencias en la maduracin.
Un hecho hte-te lo constituyeel hallazgo de que algunostipos de talasemia
se deben a trastonios en el profeso de maduracin de los ARNm de la globina.
Ejercicios
1.Para hacer una experiencia de transcripcin in vitro se sintetizan artificialmente3
polidesoxinucletidos con la siguiente estructura:
-
2. En una exoeriencia donde se oretenda investigar el oroceso de trauscriocin. se
aadi al sistema rifampicina y se vio que la iniciacin quedaba bloqueada. Si se
;iada estreptoligidina ocurra la iniciacin, pero quedaba bloqueada la elongacin
Cules seran las conclusiones que este experimento aporta sobre el mecanismo
molecular de la transcripcin?
3. En un experimento posterior se comprob que la rifampicina se una fuertemente a
la subunidad p ' de la polimerasa y que la estreptoligidina se asociaba con la
subunidad p ;Cules seran las conclusionesms importantes de estos experimen-
tos con respecto al mecanismo de accin de la ARN polimerasa?
4. Qu consecuenciastraera para la transcripcin una alteracin de la protena NusA
quedisminuyera su afinidad por el ncleo de la polimerasa?
5. Cul es la caracterstica ms sobresalientede la transcripcin realizada por la ARN
pomerasa i ?
6. La cordicepina inhibe la accin de la poli(A) polimerasa. Qu consecuencias
pudiera tener su accin sobre las clulas prowriontas y eucarioutas? Argumente su
respuesta.
Wbieio no competitiva
En la figura 16.12 al igual que en el caso anterior semuestran adems los resulta-
I
- dos del experimento sin el inhibidor.
Y"
,'
Los efectos de este inhibidor sobre los parmetros cinticos son contrarios al
~ / ' anterior, se observa una disminucin de la Vm sin alteraciones de la Km; ni siquiera en
,/ , concentracioneselevadsimas de snstrato se logra eliminar la inhibicin.
I ,"
7 .S"
, !
VM
, -':, ',
Si la Km no se ha modificado quiere decir que no existe impedimento para la
.
unin de la enzima con el sustrato.,oero la afectacin de la Vm indica aue el inhibidor
disminuyede alyna forma la capacidad cataltica de la enzima. Se acepta que la unin
, "M
enzima-inhibidor se produce en un sitio diferente del centro activo y que esa unin
modifica las propiedades catalticasde la enzima, posiblemente modificando la con-
1
.- -1
~d 1% formacin del centro activo de forma que no impide la unin del sustrato pero dificul-
ta grandementesu transformacin.
Fig. 16.12. Inhihidares no competitivas. El El esquema de la reaccin con la participacin de un inhibidor no competitivo ser
inhibidor no competitivo no se alo-
ja en el centro activo y no puede
impedir la entrada delsustrala,pera
de alguna forma dificulta su trans- E + S +ES+ E + P
formacin; en supreaencialaseur- E + I d E I
vas que se obtienen difieren en el
valor de I N m , pero no alteran el ES + 1 +EIS
valor de -1lKm. Variaciones en la E1 + S +EIS
concentracin del inhibidor dan
origen a una familia de curvas que
se cortan en el eje de las abeisas en La enzima existe en un estado libre y en forma de varios complejos (EI, ES y EIS)
el punta -I/Km.
de los cuales slo ES da productos. Si suponemos que la unin de S a la enzima no
i d u y e sobre la unin de 1y viceversa,entonces la constante de disociacinde E1 ser
igual a la de EIS y viene dada por cualquiera de las ecuaciones siguientes:
~ m ='Vm. (1+ -)
[Il
Ki
En este caso tambin la enzima existe en forma de varios complejos de los cuales
slo ES puede dar productos, pero no existe ningn impedimentopara la unin con el
sustrato; la existencia de esos complejos determina una disminucin del nmero de
centros activos tiles en la preparacin y, por tanto, una disminucinde la velocidad
de reaccin.
Los inhibidores no competitivos no son anlogos estructurales del sustrato; el
iodoacetato es un potente inhibidor no competitivode las enzimas que poseen grupos
sulfibidrilos en, o cerca de, su centro activo.
Algunos medicamentos utilizados diariamente en la prctica mdica son
inhibidoresennmticos, como el caso de las sulfamidasque se emplea en el tratamien-
to de infeccionesbacterianas.
En general las armas qumicassuelen ser tambin inhibidores enzimticosque al
bloquear determinadas reacciones puedeu daar un rgano o tejido especfico. si la
enzima que resulta inhibida est presente slo en l, o al organismo en su totalidad si
la enzima inbibida est muy distribuida en la economa.
La lucha contra la produccin, almacenamientoy utilizacin de las armas qumi-
cas debe constituir una posicin de principio de todo cientfico, pues es parte del
comportamiento tico impedir el uso de los avances de la ciencia en perjuicio de la
humanidad.
Resumen
La eintica enzimstica es la parte de la enzimologh que se ocupa del estudio de
la velocidad de las reacciones enzimeas v de las factores aue la modiscan.
En los eshidias ein6eos se deben obsekar algunas reglas que permitan hacer
una interpretacin ademada de las resuliadas, wmo son medir siempre veldda-
des ini&es y variar en cada experimento slo uno de las factores que pueden
alterar la velocidad. Los principales factores que ininyen sobre la velocidad de la
reaeO6n son las concentracionesde etuimas, mistraios y wfactores, la temperatu-
ra, el pH y la presencia de activadores o inhibidores.
La velocidad de las reacciones enzimtieas es diredamente proporcional a la
wnceniracin de enzima, lo cnal constuye el tundamento de toda la cintica
enzimtica.La wncentracin de sustrato innuye sobre la velocidad de forma muy
caracterstica.A medida que la wncentraci6n de mistrato aumenta se produce un
aumento de la velddad, pero en concentraciones muy elevadas de mistrato se
produce un estado de saturacin de la enzima que no permite mayores incrementas
de velocidad. Para explicar este comportamiento se emplea la teora deMiehaellis-
Menten, segn la cnal bastan 2 parmetms para explicarlo, uno, la Km define la
-dad de la enzima por el sustratoy el otm, Vm es un indicador de la capacidad
cataoca de la emima
Cuando en la reacein intervienen 2 susiratos, uno de los mpeetosms impor-
tantes que se debe determinares el orden en que seiigsnlm sustratosy seliberan los
productos. Atendiendo a este punto de vista se describen los mecanismos ordena-
dos, los azarow y el ping pong.
La inilueneis de la mncentraein de los whctores es similar a la del sustrato.
La velocidad varia con el pH y existe una wna de pH pmo donde la veloci-
dad es la mayor. Variaciones del pH en ambas lados de esta wna determinan una
disminucin de la velddad.
Al aumentar la temperahva la velocidad de reaeein aumenta, pero pasado un
limite comienza a disminuir, pues se producen alteraciones de la estructura
..
tridimensonal de la emha.
Los activadoresproducen un aumento de la velddad de la reaccin, se distin-
guen 2 principales, aqulios que se unen a la enzima libre y los que se unen al
nishsto. Por su parte los inhibidores disminuyen la velocidad de la reaccin, bien
porque modiean la Km, en cuyo caso son de tipo competitivo, o por alteraciones
de la Vm, que reciben el nombre de no competitivos.
Los eshidioseinticm son importantespara el conocimiento del meraniSrno de
a d 6 n de las enzimas, con el propsito de conwerio y modifi~~rlo. Muchos medi-
eamentos y algunas armas qumicas suelen ser bbibidores enzimticosespefim.
Ejercicios
1.Cules son las razones por las que en los estudios cinticos debe siempre medirse
velocidades iniciales?
2. En una experienciacintica se observa que al aumentarla concentracin de enzima
no se produce el esperadoaumento proporcional de la velocidad. A qu factores
pueden deberse estos resultados?
.
3. Si 2 enzimas actan sobre el mismosustrato con Km de 4 x 10" v 7 x 10.",resuec-
tivamente Qu conclusiones pueden derivarse deestos valores?
4. Calcule el nmero de recambio de una enzima que al estar en una concentracin de
10" M forma 3 x 10.' M del producto en un segundo.
5. Una enzima cataliza la reaccin:
Alanina ------ ,
Etanolamina + Co,
Primeros pasos
El problema del cdigo genticofue formuladopor primera vez por GwrgeGamour
en 1953,y en su solucin participaron numerosos investigadores,empleando funda-
mentalmente mtodos qumicos y biolgicos.
(;IIIIIOII W P U ~ I Ique la cadnia polipeptdira ce forma directamente $obre la doble
h6lire del 4DN. estando rada aniinocido situado rn un hueco rntrc 4 nucletidoc:
este hueco tendra aproximadamente la forma de un rombo. Dos nucletidos pertene-
can a una banda y 2 a la otra. El cdigo de rombos rojos de Gamowasegura preci-
samente las 20 letras, pues como utiliza 4 bases da origen a (4') 256 combinaciones; no
obstante, esta forma de codificacin directa impona algunas Limitaciones a la secuen-
cia de aminocidos de la protena, esto quiere decir que una vez fijado un aminocido,
el siguiente no poda ser cualquiera de los 20, sino un nmero muy reducido de ellos.
Sin embargo, las investigaciones demostraron que tal limitacin no exista en las
protenas, cuyas secuencias de aminocidos eran conocidas.
El descubrimientode quela sntesis de protenas se realizaba en una estructura
citoplasmtica (los ribosomas) y la existencia de los ARNm rechazaron definitivamen-
te la hiptesis de Gamow.
Por razonamientos tericos se estableci la relacin de codificacin -que se com-
prob despus experimentalmente-,o sea, cuntas bases son necesarias para codificar
un aminocido. Como el lenguaje del ARNm slo tiene 4 letras (A, U, G, C) y el de las
protenas 20, la relacin no poda ser 1:1, pues las protenas constaran de 4
aminocidos; si fueran 2 las bases alcanzarapara (4'=16) 16aminocidos; pero con 3
bases (4L64),el nmero de combinaciones era mayor que el nmero de aminocidos,
por lo que qurd est;il~lrcid~~ que a cada aiiiinotid~~en la protena le correspondan 3
.
bases en el 4RSm.,\ la relacin de codificacin ei 3:l. I.:ste triulete dr hase*;. ..
uor ser la
unidad de codificacin, recibi el nombre de codon.
Teniendo en cuenta que son posibles 64 combinaciones de bases y que slo 20
aminocidosdiferentes se incorporan en la sntesis de protenas,se deduce que al menos
para algunos aminocidos existe ms de un codon, o sea, el cdigo es degenerado. Los
codones que se traducen en el mismo aminocidoreciben el nombre de sinnimos.
Otra consideracinimportante se refiere a la forma en que el ARNm es traducido,
si el cdigo es o no superpuesto. Si el cdigo no es superpuestocada base nitrogenada
formar parte de un solo d o n , mientras que si fuera superpuestoformaraparte de ms
de uno:
3. UAG14GCIGCCKCUKUUFnrAPAGkGCMCl Superpuesto
UUU
UUG
UGU
GUU
UGG
GUG
GGU
Fen
Val
Len
CsS
m
Gli
500 mhqdmakldicd
Otra Lnea experimental diferente sigui H. Ghobind Khorana (1966), quien com-
binando procedimientos enzimticos y de sntesis orgnica logr la sntesis de
polinucletidos de secuencia conocida, a partir de la polimerizacin de dinucle-
tidos; uno de ellos fue el poli (AC) que produce ACACACACAC, el cual puede ser
ledo en grupos d e 3 bases como ACAlCAClACAlCAC de manera que el polipptido
sintetizado, tomando este polmero como ARNm, constara de 2 aminocidos
alternantes, que fue el siguiente:
Cis-Val-Cis-Val-Cis-Val
con lo que se comprobaba que UGU corresponda a la Cis, y se asign el GUG a la Val.
Khoranalogr tambin la polimerizacin de trinucletidos, por ejemplo, el poli
(UAC) que puede ser ledo de 3 formas diferentes:
l.UACIUAC(UACILIACIUACvACvACqueoriginapolitirosina
2. ACUlCUbCUbCUbCUbCUli\.CU que codifica politreonina
3. CUA(CUA(CUA(CUA(CUArUA(CUAque forma polileucina
originando slo 4 codones diferentes (UAU, AUC, UCU y CUA) que produce la se-
cuencia alternante Tir-Leu-Ser-Ile que puede comenzar con cualquiera de ellos. Esta
situacin se repeta con muchos polinucletidos del tipo poli(MNPQ).
Cuando se ensay el poli(GUAA)se esperaba encontrar un resultado similar,pues
stedebe producir tambin 4codonesypor tanto un tetrapptido repetido:
1.GUAAGUAAGUAAGUAAGUAAGUAA
Val - Ser Lis - ? -
2.UAAGUAAGUAAGUAAGUAAGUAAG
-
Val Ser - Lis - ?
3.AAG UAA GUA AGU AAG UAA GUA AGU
Lis ?
4.AGUAAGUAAGUAAGU AAGUAAGUA
-
Ser Lis - ?
Codon de iniciacin
En los sistemas in vitro la sntesis de protenas comienza en cualquiera de las
bases del polinucletido sinttico utilizado, pero in vivo esto no es as, se requiere de
un codon de iniciacin. Por experimentos in vitrose ha podido determinar que el ms
utilizado para ello es el AUG, aunque en muy pocos casos tambin el GUG; esto fue
corroborado ms tarde en numerosos estudios de secuencias de ADN. Estos codones
tienen adems la funcin de codificar aminocidos especficos -el AUG metionina y el
GUG valina- para incorporarlos dentro de la cadena. En el captulo30 se explicar
cmo la clula puede diferenciar una de otra.
Como resultado de todos estos trabajos a nales de 1966el cdigo gentico haba sido
descifrado completamente El total de codones y su signicadoapareceen lafigura28.2.
-
Aunaue el cdizo fue descifrado nor exoerimentos in vitro. la exactitud de la
asignacin de cada codon ha sido confirmada por anlisis genticos y bioqumicos. La
U C A G
U
Fen Ser Tir Cyr
Ser C
U Fen Tir CY~
Leu Ser A
Ter Ter
- Leu Ser Ter Tic G
Fig. 28.2. El cdigo gentico casiuniversal.
Estructura actual del cdigo
--
.
Leu Pro His .1rg U
GIN
i - ~ c g
,Are
c
A
aminocidos apolares y en la de- Leu Pro -
.2 GIN 112 G
rceha los palarcs; estas 2 mitades
difieren en que la segunda base Ile Tre AIN Ser 1 U
sea pirirnidinica a la izquierda, o
purniea a la derecha. Ocho de las
16 casillas estn ocupadas por el
mismo aminocida, la que signi-
fica que la tercera base es redun-
dante. Slo 2 aminocidos estn
codificados por un eodon cada
uno. INI se refiere al eodon de ini-
ciacin y TER a los de termina-
cin.
reciente tecnologa de secnenciacin del ADN ha dado la confirmacin definitiva a
este problema, qne pareca un sueo casi imposible,cuando fue postulado en 1953y
que poco msde 10 aos despus quedaba totalmente resuelto.
p b h ~ 8 3Grupo
. 1de codones, donde las 2 primeras bases son suficientespara la
codiiicacin del aminocido
X Y N Aminocido
G C 6 Ala
G U 5 Val
U C 5 Ser
CampoacatescdularrsyOenaicamdsailiu 503
Teniendo esto presente se pueden agrupar los codones slo por las 2 primeras
bases, en 2 grupos de 8 cada uno: en el primer grupo los pares XY, que codifican los
aminocidos con independenciatotal de Z y, en el segundo, los que varan segn Z sea
purnica (Pu) o pirimidnica m).
La columna n indica el nmero de puentes de hidrgeno que puede formar la
pareja XY al unirse a un par complementario(X'Y'). El valor n pudiera Uamarse grado
de complementaridad, que en el primer grupo es 6 y 5 (promedio 55) y el segundo 5 y
4 (promedio45). Se puede pensar que mientras mayor sea n,menor valor tendr la
interacciu Z-Z', ya quela unin XY-X'Y' es suficientementeestable.E1 valor de la
tercera base ser discutido nuevamente en el siguiente acpite. Estas caractersticas
han hecho suponer que el cdigo primitivo era de slo 2 letras y que ha evolucionado
hacia su estado actual de 3 letras.
lhblpZ&4. Grupo 11de codones, donde la tercera base tiene una funcin determinante
X Y N Aminocido
2FRi Z=Pi
Una vez conocido el cdigo gentico, o sea, la relacin entre la secuencia de bases
del ARNm y la de aminocidos de las protenas, es necesario conocer cmo se realiza
el proceso de descodificacin,cmose lograla conversin de un lenguaje en otro. Al
estudio detallado de los mecanismos de este proceso est dedicada el captulo 30.
Ahora slo se estudiar brevemente el fundamento del proceso de descodificacin.
Para poder descifrar el cdigo hace falta otro tipo de ARN llamado de transferen-
cia y cuya estructura fue estudiada en la seccin de biomolculas. Es necesario recor-
dar que en estas molculas existen 2 sitios bien definidos que ocupan los extremos de
la estructura de la aL. En uno de ellos (el extremo 3 ' -OH) se encuentra el triplete
5 ' XCA-3 ' a cuyo 3 -OH se une un aminocido especfico; en el otro extremo se Fig. 28.3. Importancia del carcter degene-
encuentra el asa anticodon con su secuencia caracterstica 5 ' ---Pi--U--XYZ-- rado. A partir del coda" GUC se
pueden ohteiicr Y codones, cam-
Pu(modificada)--3' ,donde XYZ representa el anticodon. Es este triplete el que se une
hiando una sola base cada vez. Sin
al codon del ARNm durante la traduccin, por la formacin de pares de bases embargo en 3 ocasiones el s i ~ n i f i -
--
complementarias. Por ejemplo, si el anticodon tiene la secuencia 5 ' AAA-3 ' su cado del codoii no cambia y de las
codon complementarioser el UU. A este tipo de ARNt se unir por el extremo 3 ' -0H 9 posibilidades slo en un caro sc
altera cl c a r c t e ~ polar del
el aminocido feuilalanina. Si el anticodon fuera 5 ' --GGG-3 ' se complementara
aniinucido codificado.
con el codon 5 ' --CCC-3 ' y el ARNt llevara en el extremo 3 ' -OH a la prolina. La
reaccin de unin del aminocido al ARNt correspondiente se estudiar con ms
detalles en el captulo 30.
Teniendo en cuenta que existen 61 codones que codifican aminocidos, cahra
suponer la existencia de 61 tipos de ARNt con sus anticodones correspondientes a
cada uno de los codones del ARNm. Esta idea fue sustentada inicialmente al hallar que
cuando se purificaba ARNt de la leucina (leu-ARNt) y se examinaba en un sistema
artificial de sntesis de protenas, haba una especie (leu-ARNt,) que incorporaba el
aminocido cuando se utilizaba poli(UC), pero no al emplear poli(UG), mientras otra
especie (leu-ARNt,,) lo haca con el segundo pero no con el primero, esto significaque
el leu- ARNt, lee el codn CUU y el leu-ARNt,,, el GUU.
Sin embargo, la idea un codon-un ARNt no prospermucho tiempo debido a los
experimentos de Holley, quien logr establecer la secuencia completa de bases del
ala-ARNt de levadura. Esta molcula lee 3 (GCU, GCC y GCA) de los 4 codones de la
alanina. El examen de la secuencia de las zonas no apareadas mostr que en un solo
-
sitio haba una secuencia 5 ' -GC--3 ' por lo que esta pareja deba ser parte del
aniicodon (se debe recordar que por convencin, las secuenciasde los cidos nucleicos
se escriben del extremo 5 ' al 3 ' y el apareamiento se realiza en sentido antiparalelo,
por lo que el codon 5 -- AUC-3 ' debe tener un anticodon 5'--GAU--3 ' ).
Esto implicaba que el anticodon fuera la secuencia 5 ' --IGC-- 3 ' ,en la cual 1
simboliza el nucletido raro de inosina. Como el ala-ARNt responde a los 3 codones
(GCU, GCC y GCA) entonces, la inosina no forma puentes de hidrgeno o puede
formarlos con U, C y A. Si fuera la primera situacin tambin leera el codon GCC, lo
cual no suceda, por lo tanto, 1puede formar puentes de hidrgeno, aunque no sea en la
forma de los pares habituales U-A y G-C (Fig. 28.4).
La aparicin de la inosina en el aniicodon se debe a que siempre que en la primera
posicin aparezca A en el transcrito primario, sta es desaminada enzimticamente
produciendo hipoxantina. que es la base que forma parte de la inosina.
La explicacin a este fenmeno fue propuesta por Francis Crick (1965) con la
idea del acoplamientovacilante (wobble). Hasta ese momento se crea que apareamientos
diferentes de A-U, A-T y G-C no aparecan en los cidos nucleicos. Esto es cierto en el
ADN por las caractersticas estructurales de la molcula, como se n o en la seccin de
biomolcnlas. Sin embargo, como el apareamientocodon-anticodon se produce entre 2
molculas de ARN no es necesario consemar la eshuciura regular de la doble hlice. Crick
demostr que pueden existir otros apareamientos en la interaccin codon- anticodon,
pero que esto requera en primer lugar que las 2 primerasbases fonnaran apareamientos
tpicos, para que segarantizara unaestabilidad mxima y,en segundolugar, queel terrer
par de bases no produjera mucha distorsin como ocurre habitualmentecon los pares
purina-purina, identificandocomo posibleslos apareamientosque aparecen en la figura
28.5.
Laposibidad deformarlos4 paresadicionalesdebases (A-1,U-1, C-1y G-U) explica
cmo una sola molcula de ARNt puede aparearse con varios codones.
Ahora es comprensible el caso de los ala-ARNt de levadura. Uno deellos,estudiado
por HoUey, que tiene el anticodon IGC puede formar pares de bases con 3 de los codones
(GCU, GCC y GCA), pues la inosina puede aparearse con U, C y A. El otro (denominado
ala-ARNt,,)slo acopla con el codn GCG, para lo cual seran posibles 2 anticodonesel
CGC y el UGC, pues G puede formar pares de bases con C y con U. Si fuera el UGC
entonces deba leer tambin GCG y GCA, pero como este no es el caso,el anticodon deba
ser CGC y lo es en realidad.
Aunqueensolucinlos tnnucletidosseaparean mal,pues su tamao no les permite
estabilizarse por las interaccionesde apilamiento de bases; en el proceso de traduccin
estas interaccionescodon-anticodon se estabilizan debido a vanos factores:
Resumen
Desde el punto de vista bioqumieo el cdigo gentico es la relacin de equiva-
lencia entre la sxuencia de bases nitrogenadas de los ARNm y la secuencia de
aminocidosde las protelnas. El d o n es la unidad de e o d i i i d n y est formado
por 3 bases, por lo que la relaci6n de d c a c i 6 n es 31. Cada base niirogenada del
ARNm forma parte de un solo codon, lo que quiere decir que el edigo no es super-
puesto. Por lo general cada aminocido es &cado por ms de un codon, lo que
significa que el cdigo es degenerado.
El deseiffado del cdigo fue posible gracias a 2 grupos de trabqjo principal-
mente el de Niremberg y el de Khoraoa El primero, utizaodo un sistema Ubre de
clulas y poliaueletidos sintticos, como inicio, y rinucletidosde secuencia cono-
cida, despus, logr establecer la estructura de numerosos codones. El segundo,
utilizando poliaucietidos de secuencia conocida conrm las asignaciones hechas
por Niremberg y establecila secuencia de otros codones, entre eLlos, los de termi-
nacin. A nales de 1966 el cdigo estaba totalmente descifrado.
Todaslas bacterias, virus, hongos, vegetales y animales utilizan el mismo cdi-
go; d o en las mitoeondrias aparecen variaciones, por lo que se considera que el
edigo tiene carcter quasiuniversal.
Los m& de la edmcua del cdigo Llevan a la idea de que su forma acuai es
resultado de un proceso evolutivo, en el cual se ha ido ganando en seguridad. El
eareter degeneradoposibitaamplias variaciones en la secuencia de bases del ADN,
y por lo tanto del ARNm, sin modicar esencialmente la edmcura primaria de las
pmieinas.
El proceso de deseodificacinse Lleva a cabo en los ribosomas con la participa-
cin de los ARNt, que contienen el triplete anticodon, que al aparearse con el codon
facilitan que cada amino4cido ocupe una posicin precisa en la cadena
polipeptidica. El apareamiento se produce con mayor fuerza en las 2 primeras
basesque en la tercera, lo que expiica que un mismo ARNt pueda leer varios codones.
Ejercicios
1. Como se observa en la figura 28.2 existen 6 codones para la Leu, Ser y Arg ,Cul
ser el nmeromnimo de Leu- ARNt,Ser-ARNt y Arg-ARNt que debe tener una
clula para sintetizar protenas eficientemente si todos los codones son utilizados
con la misma frecuencia?
2. El codon UAC codifica Tir y el UAG es un codon de terminacin Podra un
tir-ARNt aparearse al UAG y provocar que la sntesis de la protenacontinuara ms
all de su lmite normal?
3. El codon de iniciacin preferencial es el AUG, perose ha visto que tambin puede
emplearse el GUG y en ambos casos se incorpora Met Pudiera explicarse esta
situacin, suponiendo que un mismo ARNt pueda leer los 2 codones?
4. Los cidos aspriico y glutmico ocupan la misma casilla del cdigo, difierenslo
en la tercera base Cules deben ser los anticodones del asp-ARNt y el glu-ARNt
paraque en la cadena polipeptdica no pueda incorporarse uno de ellosen vez del
otro?
5. Un bioqumico afirm haber establecido la secuencia de bases de un Tir-ARNt
cuyoanticodon tena la secuencia 5 ' - ICA-3 ' .pero este hallazgo se puso en duda
por todos sus colegas Cules seran las razones que hicieron poner en duda el
hallazgo anunciado?
6. Un ARNm es modificado artificialmenteincluyndole una G entre los codones 15
y 16,y se observa que el polipptido sintetizado difieredel original en la secuencia
de aminocidos a partir del 16; despus se hace una segunda modificacin al
ARNm y se observa que ahora la secuencia de aminocidos del polipptido slo
difiere del original en los aminocidos 16,17 y 18 En qu consisti la segunda
modificacin?Cmo se pueden explicar los 2 resultados obtenidos?
Composicin molecular
Los ribosomas de la E. colise han estudiado con mayor intensidad que los de
cualquier otro organismo; al ser analizados en la ultracentrfuga presentan un coefi-
ciente de sedimentacin de 70 S, con un peso de partcula de 2 520 kD y estn consti-
tuidos por 66 % de ARN y 34 % de protenas.
Esta partcula puede ser disociada en 2 subunidades de tamao desigual. La
menor presenta un coeficiente de sedimentacin de 30 S, se le conoce como
subunidad 30 S, con un peso de 930 kD; est formada por una molcula de ARN
de 16 S que tiene un total de 1 541 nucletidos, para un pesomolecular de560 kD, lo
que representael60 % del peso de la subunidad, el 40 % restante lo constituyen 21
protenas con un peso total de 370 kD, que se han designado S1 a S21 para indicar
que pertenecen a la subunidad menor (small, pequeo) del ribosoma.
La subunidad mayor presenta un coeficiente de sedimentacin de 50 S, se le
conocecomo subunidad 50 S, con un peso de partcula de 1590 kD; est formada por
2 molculas de ARN, una de 23 S que contiene 2 904 nucletidos y otra de 5 S que
contiene 120 nncletidos, que en total representan 70 % del peso de la partcula, el
30 % restante lo constituyen 31 protenas designadas L1 a L34 (large, grande). Aun-
que se considera que hubo un error en la asignacin inicial de los nmeros a las
protenas, an se sigue usando la numeracin del 1al 34. El cuadro 29.1 resume
los aspectos principales de la coinposicin de los ribosomas procariontes.
Cuadro 29.1. Composicin molecular de los ribosomas de procariontes y encariontes
Subunidadmennr
Peso molecolar 0,9 x 10' l,44 x 10'
ARN 16 S 18 S
Peso molecular 0.51 x 10' 0,7 x loL
Protenas 21 35
Pesomolecnlar 8 300 - 25 800 -
11 200 41 500
Peso total de protenas O39 x 10" 0,74 x 106
Sedimentacin 30 S 40 S
Subunidadmayor
Peso molecular 1,s x 10"
ARN tipo/peso 5 S/ 40 O00
23 S/0,98 x 10"
Estructuratridimensional
El modelo asimtrico es el ms aceptado como conformacin general del ribosoma
de la E. coli, en el cual la partcula 70 S aparece ms o menos redondeada con un
dimetro aproximado de 23 nm.
La subunidad menor es una partcula asimtrica alargada hacia los polos, con
dimensiones aproximadas de 23 x 11nm, sta se presenta dividida en 2 partes desigu'a-
les por una especie de depresin. La menor, recibe el nombre de cabeza y ocupa el
tercio superior; la mayor; se designa como base, de la cual sobresale una pequea
porcin denominada plataforma, que estseparada de la cabeza por una hendidura. La
distribucindel ARN y las protenases aproximadamente concntrica, pero no homo-
gnea, pues las protenas estn hacia la periferia y el ARN, que tiene una disposicin
en forma de V, est hacia el centro. Este modelo que aparece representado en la figura
29.2 (a) hasido confirmado con numerosas pruebas experimentales.
La snbunidad mayor consiste en un cuerpo principal de forma hemisfricacon un
dimetro aproximadode 23nm que tiene3 protuberancias que difieren en su forma y
tamao: una protuberancia central redondeada y 2 laterales; una de ellas tiene forma
de varilla y contiene las protenas L7/L12 y se extiendede 8 a 12 nm haciaun lado de
la partcula; la protuberaiicia del lado opuesto es ms bien redondeada y se caracteriza
por la presenciadela protena Ll. En una proyeccin perpendicular a la protuberancia
L7/L12 aparece una muesca o depresin en la superficie de la partcula. Ladistribu-
cin de los ARN (hacia dentro) y las protenas (hacia afuera) es ms homognea que en
la subunidad 30 S; sus rasgos esenciales se recogen en la figura 29.2 (b).
En el rihosoma 70.9 lasubunidad menor est colocada asimtricamentesobre la
mayor,lo que permite que la plataformade la 30 S entreen contacto con la subunidad
50 S, ya que la depresin entre la cabeza y la base de la subunidad menor queda
alineada con la muesca de la suhunidad mayor como se representa en la tigura 29.2 (c).
Extremo 3'iicl5S
Dominios funcionales
Los ribosomas de todos los organismos presentan en general 2 regiones funciona-
les: la traduccional y la de salida o secrecibn; ubicadas en lugares opuestos. El domi-
nio traduccional incluye la cabeza y la plataforma de lasubunidad menor, ascomo la
protuberancia central y las laterales de la subunidad mayor; es en este dominio donde
han sido localizados varios sitios funcionales (Fig. 29.7).
FE-Tu FE-G
l 1 FI- 1.2.3.
Los ribosomas del citoplasma de los eucariontes son de mayor tamao que los de
procariontes con un coeficientede sedimentacin de 80 S con un peso de partcula de
4420 kD y estn constituidos por 60 % de ARNr y 40 % de protenas.
La subunidad menor presenta un coeficiente de sedimentacin de 40 S con
una masa de 1 400 kD y est formada por una molcula de ARN de 18 S que
contiene 1 900 nucletidos, con un peso total de 700 kD que representa el 50 %
de la partcula; el 50 % restante corresponde a unas 35 protenas con un peso total
de 700 kD.
La subunidad mayor -de 60 S y un peso de 2 820 kD-presenta en su composicin
3 molculas diferentes de ARNr,unade 28 S con 4 700 nucletidos, otra de5,8 S con
160 nucletidos y la tercera de 5 S con 120 nucletidos; ellos 3 constituyen e1 65 %
del peso de la partcula que incluye adems unas 50 protenas. En la figura 29.1 se
recogen los principales aspectos de la composicin molecular de los ribosomas
eucariontes.
La complejidad estructural de estos organelos hace que su estudio no est tan
avanzado como en los procariontes, por lo que no se puede contar hasta el momento
con un modelo detallado de su estructnra.
La biognesis de los ribosomas ocurre en el nuclolo donde se sintetizan los ARNr
de 28,18 y 5,s S; el de 5 S se produce en el nucleoplasma. Las protenas ribosomales
son sintetizadas por los ribosomas en el citoplasma y son transportadas al ncleo
Resumen
Los nbosomas son los organelos especialuados en la sn- de las protenas y
constituyen un componente universal de todas los orgaoianos celulares.
Los ribosomas procariontes estn formados por 2 subunidades de tamao
diferente. La menor o de 30 S tiene un ARNr de 16 S y 21 protenas., su fnncin
fundamental consiste en el reconocimiento don-anticodon. La mayor o de 50 S
presenta 2 tipos de ARNI, el de 23 Sy el de 5 S y 31proteinss, su funcin espeeca
fundamental es la formacin del enlace peptidieo. La partcula funcional o de 70 S
es la que funciona d-te la t r a d u d n .
Su estnietura iridimensional se define a partir del modelo asimirico. La
subunidad de 30 S consta de una cabeza, una base y una plataforma, y la de 50 S
consta deun cuerpo hemwrico con 3 protuberancias y una muesca En el ribosoma
funcionai la unin de las 2 subunidades conserva el carcier asimtrico.
Empleando tcnicas inmunolgicas asociadas con la microscopia electrnica,
ladispersin ueutrnica y la formacin de enlam cruzados se han podido determi-
nar la posicin de varios componentes ribosomaies, as como algunos de sus sitios
fqcionales. La mayora de las localizaciones se han realizado en el dominio
trridueeional y muy pocas en el de sada o secretar.
', La formacin de los ribosomas es un proceso complejo que requiere de la
pdcipacin simultnea de todos sus componentes, para lo cual es necesario la
snmistanto delos ARNr como de las protenas. Algo se ha avanzado en los Iomos
ao$en la monstrueein in viho de los ribosomas.
ks ribosomas eueariontes son mayores y ms complejos. La subunidad me-
nor o de 40 S presenta un ARNr de 18 S y unas 35 protenas. La mayor o de 60 S
tiene 3ARNr de 28; 5 3 y 5 S y alrededor de 50 p r o t e h . Juntasforman lapart'm-
la funcional de SO S.
La estructura de los ribosomas de organelos (mitowndrias y doroplastos) es
mucho menm conocida.
En las clulas los ribosomas se agrnpan formando posomas que pueden estar
aparentemente libres en el citoplasma, o unidos a membranas formando figuras
mctersticas. Los posomas Libres elaboran protenas Otoplasmticas, en tanto
los adheridos sintezan protenas de Secreei6n o de componentes membranosos.
Primeros aportes
A mediados de la dcada de los 50 Crckpropuso la hiptesis de que no exista una
interaccin directa entre los aminocidos v los cidos nucleicos aue los codificaba v
qneera necesariauna molcula adaptadorasin poder precisar nada sobre ella. Esta idea
se vio corroborada pocos aos despus cuando en 1957,Hoaglanddescubri un tipo
de ARN capaz de unirse especficamentecon aminocidos y que se denomin soluble,
pero que ms tarde se nombr detransferencia (ARNt).
Un aspectointeresantedel problema fue resuelto en una elegante experienciarealiza-
da porHowardDintzW,quien determinla direccin en quese produce la sntesis. Para
ello se utilizaron reticulocitos que sintetizaban hemoglobina activamente. Las clulasse
exponan a aminocidosmarcadoscon 'H durante diferentesperodos, que siempreeran
menores que el requerido para la sntesisde la protena. La hemoglobina se extraa y se
separaban las cadenas a y fi que eran entonces tratadas con tripsina. A los pptidos
resultantes se les meda la radiactividad y se comprobaba que sta era mayor hacia el
extremo carbofico. De hecho haba un gradiente de incremento de radiactividad desde
el extremo N terminal hacia el C termina1,por lo tanto, esa era la direccin de la sntesis.
Los experimentos para dilucidar el cdigo gentico ya haban mostrado queel ARNm se
lea en el sentido5 ' -->3 ' .A esta relacin entre la direccin de lectura del ARNm y la de
sntesis de la cadena polipeptdica se le denomina colinealidad.
Otro hecho sobresaliente fue puesto al descubierto en el laboratorio de Frederick
Sanger, quien dej establecido que existe un codon especfico para la iniciacin y que
ste es ledo por un ARNt especfico que difiere estructuralmente del resto de las
molculas del mismo tipo.
Sangertambin pudo determinar que este ARNt era cargado con la metionina y
que a sta se una un gmpo formilo, formando la formilmetionina,primer aminocido
que era incorporados la sntesis de protenas.
El inters por los mecanismos de sntesis de protenas es tal, que son muchos los
hombres y los laboratorios que han realizado aportes al esclarecimiento del proceso
hasta el nivel en que se encuentra en nuestros das.
Caractersticasgenerales
La traduccin tiene lugar en un organelo citoplasmtico especfico (los rihosomas)
y se produce forma unidireccional desde el extremo N terminal hacia el C terminal,
colinealmente a la lectura del ARNm (Fig. 30.1). Tiene carcter gradual y repetitivo,
pues los aminocidos van incorporndose uno a uno mediante el mismo mecanismo.
Tambin posee carcter acoplado, pues la energa necesaria para el proceso proviene
de la hidrlisisde nuclesidos trifosfatados. Tiene carcter dirigido, pues el orden que
los aminocidos ocupan en la cadena polipeptdica est determinado por el orden de
los codones en el ARNm.
Para la realizacin de la traduccin se requiere de ms de 200 macromolculas y
hanscwe a una velocidad promedio de unas 10aminocidos incorporadospor segundo.
,y.---- \
Fig. 30.1. Colinealidad ARNm protena. A
medida que el ARNm se va leyen-
do en el sentido 5 ' -->3 ' , la rade-
na polipcptidiia se va sintetizando
desde el extremo N-terminal hacia
cl extrcnio C-terminal; dc esta for-
ma la posicin de tos aniinoeidos
en la cadena polipeptdica queda
determinada por la posicin de los
eodoncs correspondientes en el
ARNm.
Fig. 30.2. Activacin de los aminucidos. Los aminocidos son unidos en una primera etapa al fosfato a dcl ATP, Comando un aminoaeiladenilato que
en una segunda etapa reacciona ron el ARNt correspondiente, transfirindole su grupo aminaacilo; ambas etapas de la reaccibn son
reversihles y calalizadas por las aminoacil-ARNt-sintft~sas~
En la primera etapa la enzima en presencia de iones Mg2+transfiere el aminocido
por su grupo carboxilo alfosfata msinterno del ATP,formndoseun enlace anhidrido
mixto de alta energa. Esto da lugar a la formacin de pirofosfatoque abandona la
enzima y un aminoaciladenilato que permanece unido al centro activo de la sintetasa.
La hidrlisis del pirofosfato favorece el sentido de la reaccin.
En la etapa de transferencia el grupo aminoacilodel aminoaciladenilato se trans-
fiere al restoderibosadel extremo 3 ' - OHdel ARNt correspondiente,formndoseel
aminoacil-ARNty AMP. Existen 2 familias de enzimas que se diferencian en que una
de ellas transfiere el aminocido hacia el 3 ' -0H y la otra hacia el 2 ' -OH, lo cual
depende de la forma en que se produce la unin enzima sustrato. De todas formas el
grupo aminoacilo puede migrar del 3 ' al 2 ' ,y viceversa, unas 10 000 veces por
segundo. Como ya fue expresado, la reaccin general es reversible y presenta una
constante de equilibrio que vara entre 0,3 y 0,7, dependiendo del aminocido, de lo
que se deduce que el enlace ster del aminoacil-ARNttiene un contenido energtico
comparable con el del enlace anhdrido de cido del ATP.
Del mecanismo expuesto se infiere que las sintetasas poseen una doble especifici-
dad, pues por una parte deben reconocer al aminocido especficoy por otra al ARNt
que le corresponde. La traduccin correcta del mensaje gentico depende en elevado
grado de la especificidad deesta reaccin, pues no se conoce un mecanismo de rectifi-
cacin como el de la replicacin. De las 2 etapas, la de mayor especificidad es la
segunda. Esto se pudo comprobar cuando se utiliz la sintetasa especfica para la
isoleucina, e incubndola con valina se logr la formacin del valil-AMP, pero al
aadir el ARNtV"en vez de producirse la transferencia del grupo valilo al ARNt, se
estimul la hidrlisis del valil-AMP.
Casi todos los aminocidos una vez unidos a su ARNt correspondienteestnen
condiciones de unirse a los ribosomas para la sntesis de protenas, no obstante, existe
una notableexcepcin.Se trata de aqul que va a servir parala iniciacin.
Como ya se estudi en el captulo 28, el codon de iniciacin es el AUG (y en
algunos organismos el GUG), que adems codifica la metionina. Smgerdescubri que
existen 2 tipos de ARNt""', uno que se emplea en la iniciacin,el ARNty, y otro para
las posiciones interiores, el ARNt"?. La misma sintetasa cataliza la unin de los 2
ARNt a la metionina, pero el Met-ARNt,"" es posteriormente modificadopor la accin
de una transformilasa especfica que utiliza como donante activado de formilo el
N1"formiltetrahidrofolato(FH,), como aparece representado en la figura 30.3. El pro-
ducto de la reaccin se denomina N-formilmetionil-ARNt(fmet-ARNtmh'"). Esta enzi-
ma slo reconoce al ARNt y no al ARNtm,lo cual hace suponer la existencia de
diferencias estructurales entre los 2 ARNtM".La formilacin de la metionina en el
ARNt es esencial para la iniciacin de lasntesisde protenas. La traduccin de ARNm
virales aadidos a extractos bacterianos es bloqueada por la adicin de trimetiprima,
un potente inhibidor de la dihidrofolato reductasa,sin embargo,la inhibicinessupri-
mida por la adicin de N'Uformil-FH,o defmet-ARNt, .
ARN,,--CH. O A R N , , - ~ ~ ~
Fig. 30.3. Reaccin d e formilaein del
metionil ARNf iniciador. Una en- Transformilasa
, >
zima tronsforniilaaa, que utiliza
romo donante d e farmila al y-(> F( 1, , . -0 OH
N1"f<,rmil-tetrahidrofolato,modi- li:,-,, .
.,. , . - . ,, ~ : , -,-:, -,z
fica el grupa amino de la metimina
ic:i'll_ H !C'k!.#.
unida al AKVt,. Esta reaccin es - ~
Componentes celulares
en una unin que es altamenteestahilizada por FI-1 y FI-3. Por su parte la unin del FI-1
es estabizadapor FI-2 y FI-3. En experimentosin iitrose ha mniprobadoquecadafactor
por separado puedeunine a la 30 S,perolaprmencia delos 2 restantesestab'izala unin.
Lus3factores se unen contiyamente y muy cercadelextremo3'-OH del AUNrde 16
S y adyacentes a la zona de unin de la 50 S. A la estructura as formada se le denomina
complejo de preiniciacin.
La subunidad 50 S se une ahora y provoca la hidrlisis del GTP mido al FI-2, con lo
cual EI-1, FI-2, FI-3,GDP y Pi abandonan el ribosoma y el tinet-AUNt,devieneactivopara
la formacin del enlace peptdico.
El W P acta como un modulador alostrico. Si se emplea GDPCP (Fig. 30.5) ste se
une al FI-2 y el complejo FI-2 j GDPCP se une al ribosoma, pero no se separa de l al
incorporanela 50 S. Si previamente se remueveel GDPCP,e fonna una 70 S totalmente
tiuicional,osca,la hidmlisisdelGTPnoesimprescindiblepara la ubicacindelfmet-AIZN:,
slopara cambiar el efector de GTP a GDP y con ello variar la conformacin del FI-2. Se
ha postulado que esto produce a su vez una transconforniacin del fmet-ARNt que le
permite interactuar con la peptid transferasa. Este paso se hadenominado acomodacin.
Para liberar al FI-2se reuuiere la narticinacin del FI-1 en cuvaausencia nila hidrlisis
del GTP permite la liberacin del FI-2 ni la incorporacin de la 70 S. Parece ser que al
hidrdizarse el GTP,el El-2 quedaunido al GDPqne dehe intercambiar con el F1-l para
ahandonarel ribosoma
Las protenas L11 y la L7L12 estn involucradasen la hidrlisis del GTP. El contac-
to enhp FI-2:GTP y la prominencia L7L12 produce en esta itima una ~amconfonnacin
que activala GTPasa unida el ribosoma.
Fig. 30.5. Estructura del GDPCP. La figura mucstra las estructuras del GTPy del GDPCPque presenta
cmo, en ste ltimo, el grupo fosfato ms externo est unido al resto de la molcula por un
grupo mrtilcno, por lo cual este compuesto no es hidrolizable romo cl GTP y resdta dc gran
utilidad como su anlogo.
h ~
Fig. 30.6. Elongan. Las 3 ctapns fundamentales de la elongacin se repiten de manera continua
tantas veccs como aminocidos tiene la protena, por eso esta etapa tiene carcter reiterativo.
(a) El complejo como queda al final de la iniciacin. (b) Se ha incorporada el arninoacil-
ARNt al sitio A del ribosoma, que en el paso siguiente ( e ) queda unido al aininoaril qiie
ocupaba el sitio P. Se produce la transloeacin (d) y comienza un nuevo ciclo de elongacin.
La formaactiva del FE-Tb esun complejo binario con el GTP, queentonces puede
unirse al aminoacil-ARNtformando un complejo ternario, por lo que es probable que
la funcin del nucletido de guanina sea la de garantizar la conformacin adecuada
del factor. Como sucede en la iniciacin, la hidrlisis del GTPconstituye el mecanismo
de variar el efector y con ello su conformacin.
La forma activa del FE-Tu puede ser regenerada por EF-Ts, que reacciona con el
complejo FE-Tu:GDP y desplaza al GDPal tiempo quese forma un complejo entre los
2 factores FE-Tu:FE-Ts (este fue el que inicialmentese llam factor T); el FE-Ts es a su
vez desplazado por el GTPformndose el complejo FE-ni:GTP, que puede unirse a un
nuevo aminoacil-ARNt y el FE-Ts que puede reciclarse (Fig. 30.7).
Las interacciones entre FE-Tu, FE-Ts y GTPson reversibles in Wtro, no as la
unin con el aminoacil-ARNt, esto es lo que dirige la reaccin en un solo sentido.
El FE-TU es una cadena polipeptdica nica de 393 aminoacidos, con un peso
molecular de 43 kD y es una de las protenas ms abundantes de la E. coli, pues existen
unas 70 000 molculas por clula, lo que representa el 5 % del total de protenas
- - l de aminoacil-ARNt de la
celulares. Esto es suficiente Dara ooder ligar el ~ o ototal
clula y aproximadamente 10 veces el nmero total de ribosomas. La cantidad del
FE-Ts es aproximadamente igual al nmero de ribosomas, lo cual implica que la mayor
parte del FE-Tu se encuentra en forma de complejos binarios o tern&os.
En la formacin del complejo ternario con el FE-TkGTP, la caracterstica estruc-
tural ms importante del aminoacil-ARNt pareceser el brazoaceptor, aquel donde se
une el aminocido. Los cambios en el nucletido final de adenina impiden el recono-
cimiento del aminoacil-ARNt.El nico aminoacil-ARNtque no puede ser reconocido
por el complejo FE- Tu:GTPes el fmet-ARNti,loque excluye la posib'idad que la fmet
pueda ser incorporada en respuesta a un codon AUG interno. Una razn de este com-
e Fig. 30.7. Ciclo del factor de elniigarin T.
1. El FE-Tu (en azul) unido al GTP
GTP ( e n rolo) ~ w x e i a n acon el
D ainiriuaeil-,\RNt. 2. El cornplqjo
formado se incorpora al rihosoma.
3. E1 GTP es hidrolizado a GDP y
ronq>le,io TuIGDP abandona cl
ribosanm 1. En ese nionicnto in-
terviene ci FE-% que se une al
FE-TU drsplazando al GDP. 5. Con
posterioridad el GTP desplaza al
FE-Ts; ron lo cual el factor queda
eii cuiidiciones para recomenzar
el ciclo.
portamiento pudiera ser la estructura del brazo aceptor del ARNti el cual delante del
ACCA-aminoacil contiene un C:A no apareado en vez del par presente en todos los
dems ARNt. Otro hecho sera la presencia del grupo amino bloqueado, pues se ha
comprobado que el bloqueo del grupo amino en otros aminoacil-ARNt impide su
unin con el complejo FE-TxGTP.
Estudios con GDPCP han demostrado que la hidrlisis del GTP ocurre con poste-
:
rioridad a la incorporacin del complejo aminoacil-ARNt / FE-Tu GTP al ribosoma
pero, previa a la formacin del enlace peptdico, se produce la hidrlisis de un GTP por
cada aminoacil-ARNt que es incorporado.
/' '
\,
e Fig. 30.7. Cielo del factor de eloiigatin T.
1. El FE-Tu (eii arul) unido al GTP
GTP (en ro)o) reacciona con el
b aininuaeil-.\RNt. 2. El complejo
formado se inrorpora al rihnsorna.
3. El GTP es hidrolirado a GDP y
romplqio 'I'uIGDP abandona cl
rihosonia. 1. En ese niomento in-
tenieiie PI FE-Ts que se une al
FE-Tu desplarando al GDP. 5. Con
posterioridad el GTP desplaza al
FE-%, r o n lo cual el factor queda
en cundiriones para recomenzar
el cielo.
portamiento pudiera ser la estructura del brazo aceptor del ARNti el cual delante del
ACCA-aminoacil contiene un C:A no apareado en vez del par presente en todos los
dems ARNt. Otro hecho sera la presencia del grupo amino bloqueado, pues se ha
comprobado que el bloqueo del grupo amino en otros aminoacil-ARNt impide su
unin con el complejo FE-'k:GTP.
Estudios con GDPCP han demostrado que la hidrlisis del GTP ocurre con poste-
rioridad a laincorporacin del complejo aminoacil-ARNt / FE-Tu ; GTPal ribosoma
pero, previa a la formacin del enlace peptdico, se produce la hidrlisis de un GTP por
cada aminoacil-ARNt que es incorporado.
Terminacin
La terminacin de la sntesis de protenas implica un fenmeno poco frecncntc.
pues se trata de la interaccin de un codon directamente con una protena.
Se han caracterizado 3 proteinas que intervienen en la terminacin y sedenomi-
nan factores de liberacin FL. El FL-1 reconoce los codones UAA y UAG, en tanto
FL-2, los UGA y UAA y requiere que el peptidd-ARNt se encuentre en el sitio P. Parece
ser que los factores de liberacin realizan su accin en el sitio A, ya que algunos ARNt
mutantes capaces de reconocer codones de terminacin compiten con ellos por entrar
al ribosoma. El FL-3 estimula la accin de los 2 restantes.
La actividad de los factores de liberacin implica la separacin de la cadena
polipeptdica neoformada y al desensamblaje de todo el aparato biosintetizador
(Fig. 30.8).
lhduccin en eucariontes
La traduccin en eucariontes, como ha sido estudiada en reticnlocitosde conejos,
sigue en heas generales elmismo procedimiento queen los organiFmosprocariontes.No
obstante, en cada paso se destacan diferencias especficas que vienen dadas principal-
mente por 3factoresfundamentales:
Posterminacin
La cadena polipeptdica formada en el ribosoma suele experimentar modificacio-
nes que pueden producirse simultnea a s u formacin (modificaciones
cotraduccionales), o una vez que ha sido liberada del ribosoma (modificaciones
postraduccionales), que dan lugar a la forma definitiva y funcional de la protena.
En los procariontes el grupo formilo de laformilmetionina es eliminado antes de
terminar la traduccin por la accin de una desformilasa especfica, y en ocasiones,
tanto en procariontes como en eucariontes, enzimas del tipo de las aminopeptidasas
catalizan la separacin de varios aminocidos a partir del extremo N terminal. La
eliminacin de los aminocidos parece estar influida por los aminocidos que ocupan
las posiciones siguientes: la metionina permanecer como primer aminocido, si el
aminocido que ocupa el segundo lugar es arginina, asparagina, cido asprtico
glutmico, isoleucina o lisina; mientras que ser separada si los aminocidos que
ocupan el segundo lugar las alanina, glicina, prolina, treonina o valina. Frecuentemen-
te el grupo aminoterminal as formado es acetilado por accin de transacetilasas.
Algunas cadenas laterales de los aminocidos son modificadas, por ejemplo, du-
rante la sntesis del colgeno se produce la hidroxilacin delos restos de prolina y de
lisina; tambinsonesterificadosgruposfosfatos arestos de serina, tirosina y triptfano
de numerosas protenas.
Los gmpos prostticos son aadidos a las protenas como el hemo de la hemoglo-
bina y como los cofactores que se unen de forma covalente a la enzima como la biotina,
el FAD, etctera.
Un evento postraduccional importante es la formacin de los puentes disulfuro
entre 2 cistenas que contribuyen a la estructura tridimensional de muchas protenas.
La cadena protenica puede ser bidrolizada en diferentes puntos como sucede con
los zimgenos del tubo digestivo, como el pepsingeno, el tripsingeno, etctera, que
parecen ser formas de almacenamiento de la enzima y que slo alcanzan su estado
funcional en el momento de su accin.
La proinsulina es hidrolizada con la liberacin de un segmento polipeptdico
denominado pptido C que se encuentra en el centro de la molcula, haciendo que la
forma funcional de la hormona est formada por 2 cadenas polipeptdicas, cuando se
ha sintetizado como una cadena polipeptdica nica. En la hipfisis se forma una
protena que es procesada mediante protelisis parcial especfica y que puede dar
lugar a varias hormonas de acuerdo con la posicin de los enlaces peptdicos que son
hidrolizados.
El ensamblaje de las protenas formadas por subunidades tambin se produce
despus de la traduccin. Este ensamblaje parece ser ms sencillo en procariontes,
donde en muchos casos todas lassubunidades de una arotena multimrica se forman
a partir de un solo ARNm policistrnico y, por lo tanto, se traducen de manera simult-
nea; en los eucariontes cada subunidad se forma a partir de ARNm diferentes.
Distribucin de protenas
En los organismos eucariontes tiene una significacin especial el proceso de
distribucin de las protenas. Todas las protenas se forman en los ribosomas pero
deben realizar sus funciones en diferentes compartimentos celulares y, en ocasiones
deben ser llevadas hacia el exterior de las clulas. Las protenas que permanecen en el
citosol, as como las destinadas a las mitocondrias, los peroxisomas y el ncleo son
sintetizadas por ribosomas libres; las destinadas a otros compartimentos o hacia el
exterior se sintetizan en nbosomas unidos a las membranas del retculo endoplasmtico.
A manera de ilustracin se describir el trnsito de protenas a travs de los sistemas
membranosos de laclula, entre otras cosas por ser el mejor conocido.
Las proteinas que deben ser procesadas en el retculo endoplasmtico se forman
en un estado de preprotena, pues contienen hacia su extremo N terminal un pequeo
pptido de 22 a 30 aminocidos denominados pptido seal. Cuando este pptido ha
sido traducido es reconocido por un complejo nucleoprotenico conocido como part-
cula de reconocimientode la seal que est formada por un ARN de aproximadamente
300 nucletidos y 6 protenas de diferentes tamaos. Esta partcula acta tambin
sobre el ribosoma, bloquea la traduccin y posteriormente transporta los ribosomas
hacia las membranas del retculo, transfirindolosa una protena receptora quees parte
integral de la membrana. La unin del ribosomaa su receptor recluta haciaesazonaa
un grupo de protenas que se organizan en forma de canal denominado aparato
translocador, y hacia el cual es transferido el ribosoma. La unin del ribosoma al
aparato translocador se realiza de forma que el dominio de secrecin queda en contac-
to con la luz del canal, y al continuar la sntesis de la protena sta es descargada hacia
la luz del retculo (Fig. 30.9).
Formando parte del aparato translocador se han identificado al menos 4 protenas,
todas ellas con actividad enzimtica. La peptidasa seal separa el pptido seal del
resto de la cadena polipeptdica, en tanto la pptido seal hidrolasa produce la degra-
dacin hidroltica del pptidoseal hastasus aminocidos constiiuyentes. Las 2 enzimas
restantes actan sobre la cadena polipeptdica en crecimiento. La oligosacaril
transferasa cataliza la transferencia de oligosacridos hacia residuos especficos de
serina o asparagina, en tanto, la tiol disulfuro isomerasa cataliza la formacin de los
enlaces disulfuros y contribuye a la formacin de la estructura tridimensional de las
proteinas.
Las protenas que pasan a la luz del retculo contienen pequeas secuencias
aminoacdicas que indican su destino. La presencia hacia el extremo C terminal de la
secuencia KDEL determina que la protena permanezca en el retculo, en tanto la seal
KxKx KKxx u otras con 2 lisinas dirigen las protenas hacia el aparato de Golgi. La
presencia de manosa-6-P en el extremo de los oligosacridos orienta las protenas
hacia los ribosomas. Se cree que existe otra seal para las protenas que forman grnu-
Fig. 30.10. Mecanismo de accin de la puromicina. Existe una gran similitud estructural entre la CHOH
puromicina y el aminoaeil-ARNt, por lo que el antibitico se une al sitio A del ribosoma e
impide la entrada del ARNt cargado, provocando la lerminacin abortiva de la sntesis de la
protena.
Ejercicios
1.Demuestre que en el proceso de la traduccin se cumplen los siguientes principios:
a) De los cambios graduales.
b) De acoplamiento.
c) De interrelacin.
d) De transferencia de informacin.
2. Por qu en los experimentos de Nirembergy otms (captulo 28) se podan utilizar,
como ARNm, polinucletidos que no contenan el codon AUG para la iniciacin?
3. Qu significado tiene en cuanto a la fidelidad de copia de la traduccin las
propiedades de las enzimas aminoacil-ARNt-sintetasa?
4. La enzima nuclesido-difosfato-quinasacataliza la reaccin:
por qu cree usted que la inhibicin de esta enzima provoca una inhibicin de la
traduccin?
La recombinacin gentica es uno de los procesos ms importantes en que partici-
pa el ADN celular, durante su transcurso se produce el intercambio de grandes segmen-
tos de ADN entre 2 molculas. Sin el oroceso de la recombinacin. los cromosomas
fueran una combinacin fija de alelos particulares sujetos nicamente a los cambios
mutacionales; el lugar de los daos provocados por las mutaciones se agrandara en
muchas veces, pues pasara del gen al cromosoma; las mutaciones dainas se iran
acumulando hasta anular funcionalmente al cromosoma. Al intercambiar los genes de
uncromosoma a otro la recombinacin permite la separacin de lasmutaciones dai-
nas de las beneficiosas. haciendo nosible la eliminacin de las orimeras v la conserva-
cin de las segundas. Desde el punto de vista de la evolucin, un cromosoma viene a
ser algoascomo "un ave de paso", una asociacin temporalde aielos, cuya existencia
particular en los grandes perodos evolutivos sera e h e r a .
Exisen numerosas formas de recombinacin gentica, teniendo en cuentael modo
en que se produce el intercambio de los bloques de ADN y de acuerdo con el tipo de
organismo donde se produce. El mecanismo es complejo y no est totalmente escla-
recidoni enlos organismos mssimples, a pesar del extraordinarioavance logrado en
su comprensin durante los ltimos aos.
En este captulo se discutirn brevemente los conocimientos actuales sobre los
mecanismos moleculares de la recombinacin gentica, tomando como referencia el
sistema mejor conocido que es el de la E. coli, algunas evidencias experimentales
sobreel procesoen eucariontes, la funcin de la recombinacin en la evolucin de los
seres vivos y por ltimo, se pondr de manifiesto la aplicacin de muchos de los
conceptos relacionados con el estudio de la gentica humana, sobre todo en el campo
de la medicina.
Modelo de HoWday
En la figura 31.1 aparece representado el modelode Holliday, ste comprende 2
grandes etapas: la iniciacin y la maduracin.
Dos dobles hlices homlogas se alnean una al lado de la otra (apareamiento) (A)y
cada una de las banda$ es cortada mediante enzima5en unlugar especfico(B),secrea mi
extremo Libre que abandona la hebracomplementaria a la cual estaba unida por puentes
de hidrgeno, se asocia con la cadena complementaria de la otra molcula (invasin de
hebra) (C D) y se estableceuna ioteraccin fisicaentm las 2 molculas a recombinar. Esta
estructura puede estabilizane por la accin de la ADN ligasa que forma los enlaces
fosfodister correspondientesen cada hebra (E).La hebra invasorapuede ir estableciendo
cada vez un mayor nmero de puentes de hidrgenos con la molcula invadida, despla-
zando a la cadena original (migracin de hebra) (F). La estructura as formada recibe el
nombmde intermediario de Holliday.
Este intermediario no es esttico y su posicin puede ir variando en un sentido o en
otro por el mecanismo demigracin,~puede rotar sobresu eje cilndrico (isomerizaun)
(G,H)adquiriendo una nueva forma.
Laconstruccin demodelosespacialesha probado, sorpresivamente,que no existen
impedimentos estricos para la existenciade esaestructura y quecasi todas las basesse
encuentran apareadas.
La migracin de la hebra puede dar lugar a la formacin de zonas heterlogas de
ADN,segmentos donde el apareamiento delas bases est alteradocon la formacin de
reas que son genticamente heterocigticas; ste es uno de los hechos que ms ha
apoyado el modelo de Holliday.
Estudios tericos y prcticos han llevado a la conclusin que la velocidad de
migracin es lo suficientemente elevada como para permitir la formacin de zonas
hbridas en condiciones fisiolgicas.
Dada la simetra de la estructura, la maduracin puede ocurrir de 2 forma$,dando
lugar a 2 pares de cromosomas recombinantes.
La ruptura de arriba abajo o de izquierda a derecha (1) libera molculas de ADN de
igual tamao en las cuales pueden existir regiones heterocigticas, y que los genes que
estn en los flancos pueden mantenerse en su posicin original o con igual probabili-
dad pudo haberse realizado una recombinacin recproca (J,K).
Este modelo es muy atractivo como mecanismo general de la recombinacin
porque puede dar cuenta de las propiedades genticas de cromosomas recombinantes
Fig. 31.1. El modelo general de Hoilidag.
El modelo de recombinacin pro-
puesto por Hollidag plantea que 2
nioleiilas de ADN se aparean Val
?seproduieun~orteencadauna
de las bandas (b). Los extremos
libres invadcn la molcula contra-
ria le y dl, formando piicntcs de
hidrgeno can la cadena comple-
mentaria. La ADN ligasa sella la
brecha (el y se produce la inigra-
eiii de la hebra (fl, dando el in-
termediario de Holliday. Obsrve-
se que en este momento existe una
zona formada por 4 cadenas de
ADN enrollada una sebrc otra. La
isomerizariii por rotacin (g g h)
el corte posterior en uii sentido
\ci.tieal u horizontal (il daii lugar
a 2 molculas recombinadas ikl.
La zona heter6luga o heterorig-
tiea se observa cuando en iin sce-
tor de la molcula, una de las ca-
denas aparece en rojo y la otra en
azul.
que se producen en las formasms complejas deintercambio de genes que se conoce,
la meiosis de los eucariontes.
Dos hechos importantes conviene recordar:
Fig. 31.4. Modelo de alternativo de reeombinacin. En este modelo una de las cadenas invade a la
otra (a, b y e ) y la hebra que
~ ~ - queda
- desapareada es rellenada por la ADN polimerasa 1 (c, d
. .
ve). Desous es aue se oraducc la invasin de la hebra contraria (0.Y el .
vroceso sigue
- izual
.
al modelo ya descdto. Obsrvese que en este casa la zona heterloga es diferente en cado
una de las moleulw recombinadas.
lias rec y ruv. Adems, estn los relacionados con las protenas que participan en el
metabolismo general del ADN, como la ADN polimerasa 1, la ADN ligasa, las SSB y las
topokomerasas 1y 11.
No todos los genes de la familia rec han podido ser caracterizados con igual
profundidad,lo cual supone que el proceso no est completamente esclarecido. Sin
embargo, el conocimiento actual permite una buena aproximacin al mecanismo
molecular del proceso.
Estudios experimentaleshan demostrado que mutaciones en el gen recA pueden
reducir hasta 1000 veces la recombmacin gentica. La pmteia RecA es un polipptido
de 40 kD cuya sntesis se incrementa notablemente en situaciones que afectan de
forma negativa el metabolismo del ADN (luz ultravioleta,cido nalidxico, bleomicina
o mitomicina C), haciendo que pase de su nivel normal de unas 2 000 molculas por
clula a 50 000 aproximadamente,o sea, el 6% del total de las protenas celulares.
La primera actividad enzimtica conocida de RecA fue su accin proteoltica,
cuyo significado se aclara en el captulo 33 y que no est relacionada con la
recombinacin.
.
Con nostenondad se demostr aue la interaccin con ADN de cadena simple
~~ ~
invasora.
Resumen
La reeombinaci6n gentica es uno de los procesos ms importantes en que
participa el ADN celular, durante &te se produce el intercambio de grandes blo-
ques entre 2 molculas de ADN. Existen diierentestipos de reeomb'ici6n de acner-
do con las caracterseas de la molcula donante v la m o t o r a La transformaci6u.
traasduM6n y coqjngaci6n pertenecen al grnpo denominado recombinaci6n gene-
ral u homloga; en tanto la transposia6n es de tipo heter61oga. Al nivel moleeular
la reeombiici6n consa de 2 eapas: la mieid6n, con la formacin del interme-
diario de Holliday, y la mad-6n.
Se ha planteado un modelo general para explicar el proceso en tnninos
enzimstim; &te comienza con la parapaci6n de la protena RecBCD que al
moverse sobre el ADN crea una zona desnaturalizada de varios cientos de bases
que se mantiene gracias a la intemenein de las protenas SSB. Una de estas cade-
nas invade a la otra molcula que participa en el pmceso.
En e& momento interviene la protena R e d que se une a la hebra invasora
formando un complejo ADN-ReeA, que explora la otra molcula hasta encontrar
una zona de homoloela en la secuencia de bases. oara lo cual orovoca la
desnahiralizeci6npare% de la moleula receptora. Al Gcontrar la zona hom6lnga
se produce el apareamientode bases entre la hebra invasora y la molcula recepto-
ra. A medida que el apareamientoprogresa se crean zonas de t e d n en la m o l h -
la que pueden ser eliminadas con la parcipaci6n de la topoiwmerasa L La rota-
cin de la molcula formada da lugar a la aparici6n del intermediariode Holliday.
La mptura del intermediarioproduce 2 nuevas molculas recombinadas, pero
de esta etapa es pow lo que se conoce y 5610 recientemente se ha encontrado una
enzima producida por el fago T4 que reeonoce esta estructura como sustrato.
La freeuencia en la reeombinaein de 2 o ms genes ha permitido la elabora-
d6n de mapas geneticm en varios organismos.
La remrnbinacin gentira es el principal mecanismo capaz de explicar la
gran diversidad de organismos que componen una especie, de ab su valor en el
pmceso evolutivo. Adems puede significar un mecanismo de pmteeei6n, pues
permite la separacin de las mutaciones dainas de las beneficiosas. Se espera que
en Ina pr6ximos aos se produz~annotables avances en nuestro conocimiento sobre
los mecanismos moledama de la reeombinaci6n gentica
Ejercicios
1.Qu significadotuvo en la historia del conocimiento de la recombinacin gentica
la aparicin del modelo de Holliday?
2. ;Segnelmodelode Holliday puedearmane que en todo procesade recombinacin
se obtienen siempre 2 molculas recombinadas?
3. Qu entiende usted por una molcula de ADN heterocigtica? ;Qu funcin
desempea en la recombinacin?
4. Cules son las principales analogas y diferenciasentre los modelos propuestos
para explicar la formacin del intermediario de Holliday? En cul de ellos es
imprescindiblela participacin de la topoisomerasa I?
S. Los organismos que carecen de la protena RecA realizan la recombinacin con
muy baja frecuencia Cmo explicara usted este fenmeno en esos organismos?
6. Por qu puede afirmarse que la recombinacin gentica ha desempeado una
importante funcin en el proceso evolutivo de los seres vivos?
Definiciones y nomenclatura
En este tema se emplea un conjunto de trminos que deben ser definidos antes de
comenzar el estudio de los contenidos.
Concepto de mutacin
Tipos de mutaciones
Mutaciones gnicas
Mutagnesis
Son numerosos los agentes que pueden actuar como mutgenos pero pueden
reunirse de acuerdo con el mecanismo por el cual producen las mutaciones en los
siguientes grupos.
Un anlogo de base es una sustancia que no es ninguna de las bases habituales del
ADN, que puede ser incorporada a stedurante la repcacin por formar pares de bases
con alguna de las bases normales; que por tautomerizacin (captulo 8) puede cambiar
so patrn de apareamiento en el siguiente ciclo replicativo y originar un cambio de
bases en el ADN.
Un ejemplo de este tipo es el bromouracilo que es un anlogo de la timina y por
eliose apareacon la adeninaen su forma ceto,pero al cambiar a su forma enol forma par
con la guanina (Fig. 32.2) y en el siguiente ciclo replicativo aparecer un par GC
donde antes exista uno AT.
H
l Fig. 32.2. Anlogos de bases. La parte su-
O N perior dc la figura muestra la es-
/N /"-" ,y.---(:: .ii, "-/
\ \:: tructura dc la timina y del
H-C/
\
\CPC
4 \, \ - 7 (.
f'
. ,.
',;, 5-bromourarilo, donde sc advier-
te su siniilitud estructural. En la
H/N-~
\ N=C
82 -
Y ) . . :
y
-'
,i3
<.-i'"NN-
\ N=C Y-"
'N-H
\.'
.<' -- x
parte inferior se muestra, ema en
la forma cela, el 5-bromouraeilo
H
' (j 'il
I forma paresde havescon laadenina
H y acta como un anlogo de la
. e r oen forma enal se
timina.. ~
Adenina 5-Br-Uracila aparea con la guanina y sustituye
Guanina S-Br-Uracilo
(forma ceto) a la eitosina.
(forma enoi)
Para que esto suceda se requieren de 2 ciclos replicativos, como se muestran en la
figura 32.3.
Otro ejemplo es la 2-aminopurinaque sustituye a la adenina; no tautomeriza,pero
puede aparearse con la mina y con la citosina; aunque el apareamiento con la citosina
es muy dbil es lo suficientementefuerte para provocar en el siguiente ciclo replicativo
la transicin AT->GC.
Un mutgeno qumico es una sustanciaque reacciona con alguna de las bases del
ADN y la modioca de forma que cambia su patrn de apareamiento; los ms poderosos
son el cido nitroso (HNO,), la hidroxilamina, el sulfonato de etilmetano y la
N-metil-N'-nitro-N-Ntrosoguanidina(Fig. 32.4).
O O-CH,
SS/
8'c~H,
+,-, C
\N /C
(!4\.V
!
/(:
Radiaciones
TTTGCCCTAAGT
Fig. 32.6. Consecuencia de las mutaciones puntuales. Al producirse el cambia de una base par otra,
las consecuencias pueden ser diferentes debido al carcter degenerado del cdigo gentica.
El cambio de A x G da origen a una mutacin silente (derecha), pues se codifica el mismo
aminocido; C x A produce una mutacin neutra, pues cambia la leucina par la isoleucina
que son aminocidos del mismo tipo (centro); por ltimo, el cambio de T x G, si debe
originar un fenotipo mutante, pues la leurina que es un aminocida apolar se cambia por
arginina (izquierda) que es del tipo polar inico.
Otro tipo importante son aqullas que transforman el codon de iniciacin, lo que
impide la sntesis de la protena, pues en las concentraciones fisiolgicas de Mg2+,slo
con el codon AUG puede iniciarse la sntesis.
En otros casos estn implicadoslos codones de terminacin que pueden dar lugar
a 2 situacionesdiferentes: una es que un codon de lectnra sea convertido por el mutgeno
en un codon de terminacin, con lo cual provoca la terminacin abortiva de la cadena
polipeptdica; la otra, ocurre cuando un codon de terminacin es convertido en un
codon de lectura, lo cual ocasionar un aumento en el nmero de aminocidos de la
protena hacindola generalmente inservible (Fig. 32.7).
CCCTGGCATTAAGCC
Fig. 32.7. Mutaciones que afectan la termi-
nacin. En el primer casa (izquier- CCCUGGCAUUAAGCC
da), el cambio G x A da origen a la Pio - Trip - His - m
aparicin de un eadon de termi-
nacin y la terminacin anticipa-
da de la sntesis de protenas. En el
segundo casa (derecha), el cam-
bio A x C transforma un codon de
terminacin en uno de tirosina y
can ello prolonga la cadena CCCUGGCAUUACGCC
CCCUGACAUUAAGCC
polipeptdica ms all del limite
normal. Pla T- Pro ~ T n p His - m - Ala
Estas mutaciones pueden afectar tambin las zonas reguladoras, por ejemplo, la
fortalezade un promotor depende enhp otms factoresde la secuenciaconsenso TATAAT,
por lo que una mutaci6n que aleje la secuencia real de la consensodebilitar al promo-
tor, y la que lo acerque, lo har ms fuerte. Situaciones similares pueden originarse en
otras secuencias reguladoras como seestudiar en el capitulo 34. Las inserciones y las
deleciones provocan un corrimiento del marco de lectura, pues como los codones son
ledos uno a continuacin del otro, la adicin de una base dar lugar a una lectura
diferente a partir del punto de insercin. Igual sucede con las deleciones (Fig. 32.8).
GCAATCCTTTTTCAGGGGAAA
GCAAUCCUUUUUCAGGGGAU
Alii 1 1.w - Feii - Gln GIi 1.1\
Fig. 32.8. Inrercienes y dcleciones. 1.n in-
serriiin (izquierda) y la delecin
(derecha) de una hase alteran la
secuencia de aminocidos d e la
protena. a partir del punto doiidc
se produjo la mutaciii. ObsCrve-
+<;
GCAATCGCTTTTTCAGGGGAAA GCAATCTTTTTCAGGGGAAA se que mientras mis cercana sea la
rnutacibn al inicio del gen, en nia-
GCAAUCGCUUUUUCAGGGGAAA GCAAUCUUUUUCAGGGGAAA )or grado alterar la estructura de
Ala ,
IIc 4 a h 1 &L :GL && Ala - lic Fcn - Fen - lii - Git - Li, In pwteina que el gen codifica.
Mutaciones mayores
Con una frecuencia muy haja ocurren cambios que afectan secuenciasde muchas
bases (hasta miles) y que taxnbindebenserconsideradascomo mutaciones; las principa-
les son deleciones, duplicaciones y rearreglos. Las deleciones de 100 hasta l 000 pb
ocurren espontneamente,pero pueden ser estimuladas por agentes de entrecruzamiento;
presumiblemente los largos segmentos entrecruzados son eliminadosde alguna forma,
quizs con la participacin de algn mecanismo de recombinacin.
En una duplicacin (o triplicacin que tambin puede ocurrir) una secuencia de
bases se repite y aparece organizada en tndem (Fig. 32.9). La longitud del segmento
duplicadoes tpicamente tan larga que incluye a variosgenes. Estemecanismoes poco AGCTGCTATCCGA
frecuenteen bacterias, pero se observa en anfibiosdurante el mecanismo de amplificacin
+
TCCACGATACCCT
gentica y en clulas de mamferos relacionado con los mecanismos de resistencia a
algunas drogas como se discute en el captulo 84.
Parece ser que la duplicacin de genes ha desempeado tina funcin importante ACCTCCTATCGCIATCCCA
en el proceso de la evolucin; como un gen duplicado puede mutar independiente- TCGACCATAGCGATAGGCT
mente del otro, a partir de un gen nico puede producirse una familia de genes que
tiene un grupo de caractersticas comunes, pero posee aspectos especficos que los
diferencian y que, adems de una ganancia de material gentico, puede dar origen a
+ +
AGcTCTATCGCGA
protenas con funciones similares, pero con algn grado de diferenciacin. El ejem- TCGAGATAGCGCT
plo ms sobresaliente lo constituye el gen de la globina, que al parecer era nico en
un inicio y que por mecanismos de duplicacin y despus por mutaciones indepen- -
dientes ha dado lugar no slo a las cadenas que componen los diferentes tipos de
hemoglobina, sino tambin a la mioglobina, una protena muscular relacionada con Fix. 32.9. Mutaciones niayorcs. La dupli-
el almacenamiento de oxgeno en determinadas fibras musculares. cacin y la inversin de grandes
sectores del ADN constituyen fe-
Un rearrrglo tpico es la inversin, un segmentode ADN que es separadoy reinsertado
nmenos que ao son pocu fre-
con una orientacin invertida (Fig. 32.9). Los rearreglos de este tipo generalmente origi- eucntfs y que generalmente im-
nan un fenotipo mutante con respecto a los genes involucrados, pero si no son esencia- plican varios genes. Los mecaiiis-
les para el crecimiento a veces no son detectados. inus de produccin de cslus tipos
Los mecanismos moleculares de la duplicacin y el rearreglo no son conocidos, dc niirtaciones son desconocidos.
presumiblemente impliquen errores de replicacin, recombinacin, o ambos.
Mutaciones en humanos
El genoma humano surge como consecuenciade un largo proceso de evolucin y
no est exento de alteraciones mutacionales. Los actuales mtodos de anlisis han
permitido demostrar la existencia de mutaciones de todo tipo en los seres humanos; en
algunos casos estas mutaciones no tienen ninguna significacin y se descubren como
resultado de estudios masivos en grandes poblaciones, que se realizan en busca de
situacionesanormales, por lo que surge el concepto de polimorftsmoque se refiere a la
existencia de numerosas formas (secuencias)de una misma protena, tengan o no un
significado patolgico.
El c m ms sobresalientees el de la hemodobina de la cual se conocen alrededor de
400 tipos diferentes,aunque slo unos pocos de ellos causan alteraciones morbosas.
Las deleciones tambin aparecen en humanos y son causas de diferentes enferme-
dades, un resumen de stas se presenta en el cuadro 32.1.
Gen Enfermedad
Mecanismomolecular Ejemplos
1.Mutaciones puntuales
a) Transcripcin defectiva
mutaciones del promotor
c) Traduccin defectiva
terminacin premahua codon 17 A a T = lis a ter
codon 39 C a T = glN a ter (3)
2. Deleciones
a) Transcripcin defectiva parcial de 619 ph (6)
3. Insercin
corrimientodel niarco delectura 1 base en 819
1 base en 71/72 (4)
Resumen
Las mutaciones son alteraciones que se producen en el material gentico y que
se trasmiten a los descendientes. Los agentes mutagnicos o mutgenos son aqu-
iios capaces de producir mutaciorm, que pueden ser de nahiralem sica o qumica.
Los principales tipos de mutaciones gniw son las puntuales, por sustituci6n de
una base; las h e d o n e s , por la adici6n deuua base, y las deldones, por la sustrac-
cin de una base.
Las mutaciones pueden ser espontneassi se producen como coll~eeueuciade
la actividad normal del organismo o inducidas cuando en ellas interviene la mano
del hombre, con intenciones experimentales, accidentalmente, o por una actitud
criminal.
Las mutaciones pueden provocame eon la utilizadn de anlogos de bases como
el bmmouracilo y la Zaminopurina; mutgenos quimicm corno el cido nitmso, la
bidmxamk, la N-meol-N-nimN-ni-dina y el dionato de elmetano,
los cuales modifican las bases nitmgenadas cambiando su patrn de apareamiento.
'IgmbiQi son mutagniw las radiaciones ulavioleta, las ionizantes y las susanfias
intercalantea como el naranja de acridina, la pmflavina y la aeroflavina
Los efeftos causados por las mutaciones pueden ser diferentes segn el tipo de
mutacin (puntnal, h e d 6 n y deleein) y el sitio donde se producen (secuencias
codificantes o reguladom).
Otros tipos de mutaciones afectangrandes sectoresdel ADN como las grandes
deleeiones, las duplicadones y los rearreglos cuyos mecaniwos son desconocidos.
La supresin es el mecanismo por el cnal a parr de un mutante se logra
obtener el fenotipo dvestre y sta se debe ala ocurrencia de una segunda mutacin
en el mismo gen (intragnica), o en un gen Merente (extragnica).
Existen numerosos ejemplos de mutaciones en humanos muchas de las cuales
son causas de enfermedades,el ejemplo ms destacadocomo sucede en otms aspee
tm ya estudiados es el gen de la globina, que codifica la p o d n pmtenica de la
hemoglobina.
Ejercidas
1.Qu tipo de mutacin (transicin o transvenin) se produce si un cultivo celular es
tratado con:
a) bromouraco
b) 2-aminopurina
c) cido nitroso
d) hidroxilamina
e) sulfonato de etilmetano
: f) N-metil-N'-nitro-N-nitrmoguanidina
A.
BamHl H
B.rii>iiloliq~i~f~~cie~~,s G*GATCC
B.
Daos al ADN
Existen 3 mecanismos fundamentales que pueden provocar alteraciones estructu-
rales en el ADN y que son: la sustitucin de bases durantela replicacin, el cambio de
bases como resultado de una inestabilidad qumica inherente a la estructura de la base
o del enlace N-glicosdico y las alteraciones resultantes de la accin qumica o de otro
tipo de agentes ambientales. Estos mecanismos provocan algunos defectos.
Una delas hebras contiene una base qoeno puede formar puentes de hidrgenos
adecuados con la otra hebra. Este defecto puede ser el resultado de un error en la
replicacin que no haya sido rectificado por las polimerasas, lo cual es muy poco
frecuente. Otro ms comn es la desaminacin espontneade citosina a uracilo segui-
do de la conversin de ste en timina, y menos frecuente,la desaminacin de adenina
a hipoxantina que forma pares de bases con la citosina y no con la timina.
Estos errores son corregidos por un sistema de N-glicosidasas que comprende las
fases representadas en la figura 33.2.
En primer lugar se produce la desaminacin, ms tarde la Uracil N-glicosilasa
(O Hipoxantina N-glicosilasa) hidroliza el enlace N-glicosdico de esos nucletidos
daados, dejando la base de la hebra opuesta sin apareamiento. Un grupo de
endonucleasas conocidas como AP (apurnicas o apirimidnicas) hidroliza el enlace
fosfodister cuya base ha sido removida, y otros enlaces algunos nucletidos ms
adelante,dejando una brecha en la banda daada. La ADN polimerasa 1Uena la brecha,
pues dispone del extremo 3 ' - 0 H necesario y, por ltimo, la ADN ligasa sella los
extremos apareados por la polimerasa 1y el ADN queda reparado.
ejemplo las radiaciones ionizantes (las partculas beta emitidas por radioistopos na-
turales, o los rayos X) pueden cansar la rotura de los anillos de purinas y pirimidinas y
originar diferentes tipos de sustituciones qumicas. La base ms susceptiblees la timina,
uno de sus cambios ms frecuentes es su conversin en 5,6,dihidroxidihidrotimina
(Fig. 33.3 a)).Los radicales libres que se producen durante el desarrollo de diferentes
reacciones metablicas tambin pueden originar mltiples cambios.
Una de las alteraciones de bases mejor estudiada es la formacin de dmeros de
pirimidinas, especialmente de timina, provocada por la luz ultravioleta (Fig. 33.3 b)).
La formacin de estos dmeros por una parte distorsiona la hlice, pues las bases se
aproximan una a la otra, y por otra parte debilitan los puentes de hidrgeno con el par
correspondiente de la otra banda, esta situacin causa la inhibicin de la replicacin y
de la transcripcin.
Muchos son los agentes que pueden provocar la rotura del enlace fosfodister
entre ellos los perxidos, los compuestos que contienen grupos sulfihidrilos (como la
cistena) y metales, como el Fe" y el Cu"'. Tambin se puede originar por radiaciones
ionizantes. Lai desoxinibonncleasas que siempre estn cerca del ADN pueden acciden-
talmente provocar tales roturas.
Sistemas de reparaan
Los sistemasde reparacin son de 2 tipos fundamentales: los que dependen de la
luz (fotorreactivacin)y los que nodependen de sta (reparacin oscura). El segundo
tipo incluye 3 niecanismos fundamentales: reparacin por escisin, reparacin por
recombinacin y la respuesta SOS.
SistemaSOS
En este mecanismo se produce la sntesis del ADN de forma continua sobre los
dmeros de timina, por lo cual se obtiene un producto que contiene numerosos errores.
Este sistema no est perfectamente esclarecido, pero al parecer determina una prdida
de la actividad correctora de la ADN pol 111. Muchos genes bacterianos estn
involucrados en la respuesta SOS, de ellos los que mejor se han estudiado son el recA
y el lexA. El gen lexA codifica una protena que acta como regulador de la sntesis de
numerosas protenas, entre ellas de RecA y LexA. Cuando esta proteha est presente (y
normalmente lo est), los genes que intervienen en el sistema SOS estn inactivos, o
sea, muy poco ARNm es transcrito a partir de ellos. En estas condiciones RecA no
presenta actividad proteoltica, sin embargo, cuando la replicacin es bloqueada, la
pequeia cantidad de RecA presente es activada ensu formaproteoltica,para lo cual es
necesario la presencia de segmentos de ADN de una sola banda. Esta actividad
proteultica funciona slo sobre determinadas protenas, una de ellas es LexA que es
hidrolizada en 2 fragmentos que noson capacesdeinhihir lasntesis delos ARNm, por
lo que las protenas del sistema SOS son sintetizadas. Estudios recientes parecen
demostrar que LexA sufre un proceso de autoprotelisiisque es estimulado cuando est
asociada con RecA. Fenmenos similares ya han sido descritos para otras protenas.
Cuando la reparacin se ha completado RecA pasa a su forma inactiva y LexA
vuelve a desconectar el sistema rpidamente.
Alteraciones de la reparacin
En los ltimos aos el estudio de varias enfermedades genticas han llevado a la
conclusin de que en algunas de ellas existen alteraciones del sistema de reparacin
del ADN. En algunos casos parece ser la causa primaria, mientras que en otros se trata
slo de una deficiencia secundaria, por ejemplo, el Xerodermapigmentosum, la ataxia
telangiectsica, el sndrome de Fanconi y el sndrome de Bloom.
El Xerodermapigmentosum es una enfermedad que afecta la piel y el sistema
nervioso. La exposicin a la luz solar en los primeros meses produce eritemas, que
duran varios das, y bronceamiento acentuado. Las lesiones son ms intensas y ms
tempranas en las regiones del cuerpo expuestas al sol: cara, cuello, dorso de las manos,
etctera. La esclerosis drmica progresiva y las contracturas conducen a la deforma-
cin dela boca,los ojos y la nariz. Comnmenteexiste fotofobia con blefaritis,quera-
titis,opacidadesy lceras. Muchos pacientes mueren antes de los 20 aos por neoplasma
cutneo metastsicn. En cultivo de clulas obtenidas de estos pacientes se ha observa-
do una actividad deficiente en cuanto a la reparacin del ADN debido a los daos
causados por la luz ultravioleta. La enfermedad se trasmite como un rasgo autosmico
recesivo.
El estudio de clulas en cultivo procedentes de pacientes con esta enfermedad ha
demostrado que existen al menos 7 grupos de complementacin, lo que equivale a
decir que al menos existen 7 genes involucrados en la cansa de la enfermedad; estos
genes han sido designados XP-A a XP-G y se ha podido determinar que todos los
productos de estos genes participan en los mecanismos de reparacin por escisin de
nucletidos.
En el cncer de colon de tipo hereditario y no polipsico se ha determinado que su
cansa esencial radica en deficiencia del proceso de reparacin del malapareamientos.
La mayorade los casos puedeser ahibuida a mutaciones en los geneshMSH2,hMLH1,
hPMSl o hPMS2, los cuales codifican protenas que intervienen en el proceso de
reparacin.
La ataxia telangiectsicacomienza en edad temprana y a los 10 aos los signos de
ataxia son de una inestabilidad total, con hipotona muscular y abolicin de reflejos
tendinosos, tambin hay un bajo coeficiente de inteligencia.
La telangiectasia comienza entre los 3 y 4 aos de edad, en conjuntiva, orejas y
parte expuesta del cuello. Se constata una disminucin de los niveles de
inmnnoglobulina A. En el cariotipo pueden aparecer variadas aberraciones
cromosmicas. Hay tendencia al desarrollode linfomas, la muertellega en edad tem-
prana del paciente. Los fibroblastos de estos pacientes muestran una evidente dismi-
nucin de la actividad reparadora del ADN,especialmentefrente a radiaciones gamma.
Se trasmite como un rasgo autosmico recesivo. Parece ser que las alteraciones de la
reparacin son secundarias y que el defecto principal radica en la mutacin de un gen
supresor tumoral, al que se ha denominado ATM (siglas del ingls que significan
mutado en la ataxia telangiectsica).
El sndrome de Fanconi tiene como signo ms sobresaliente la hiperpigmentacin
y una disminucin general del nmero de clulas sanguneas (pancitopenia). Los
pacientes presentan baja estatura, tendencia a desarrollar leuceinia. Presentan una
actividad de reparacin del ADN disminuido sobre todo a la accin de agentes que
provocan entrecruzamiento de las hebras. Se trasmite como un rasgo autosmico
recesivo. En este caso tambin parece tratarse de un defecto secundario y el primario
est asociado a mutaciones en varios genes supresores tumorales.
El sndrome de Bloom se presenta ms en los varones que en las hembras. Existe
una evidente fotosensibilidad con aparicin de eritemas persistentes desde el primer
mes de vida. Despus aparecen las telangiectasiasprincipalmente en la cara y el dorso
de las manos. Los pacientes poseen baja estatura, pero no existe retraso mental y son
individuos sexualmente normales. Existe una disminucin de la actividad de repara-
cin del ADN, los linfocitos son particularmente sensibles al sulfonato de etilmetano.
Tienden a desarrollar leucemias. Se trasmite como un rasgo autosmico recesivo. Se ha
reportado recientemente que este sndrome est ligado a mutaciones en el gen de la
ADN ligasa.
Otras enfermedades relacionadas directamente con alteracionesen los procesos de
reparacin son el sndrome Cockaine,la tricotiodistrofia y el sndrome de hipersensi-
bilidad a la luz ultravioleta (UV').
Por ltimo, se ha invocado que una marcada disminucin de la actividad de los
sistemas de reparacin del ADN, pudiera ser la causa principal de las modificaciones
que se observan en los individuosdurante el periodo de envejecimiento; esto se tratar
con mayor detalle en el captulo SS.
Resumen
No existe otra macromolcnia niyaintegridad estructural tenga parala d u l a
el significado vital que tiene el ADN; su conservacin constituye por lo tanto una
actividad principal de la clula, tanto para evitar la contaminacin con ADN for-
neo como para reparar cualquier dao producido en las propias molknlas.
Unas de las primeras caractersticas que contribuyen a la conservacin del
material gen6tico son la propia estmdura del ADN, su asociacin con protenas y
su ubicacin, que en los eueariontes esta separado del resto de la clula por una
doble membrana.
Otro mecanismo lo constituye el sistema de modificacin-restriccin, pues
por una parte permite la ideniraeiu del propio ADN y por otra, la degradacin
de los ADN extraos evitando la contaminacin.
No obstante,el ADN es una molcula que est expuesta a daos como son: bases
mal apareadas, bases perdidas, alteraciones de bases, rotura de una o de las 2
bandas, formacin de enlaces entrecruzados, etc6tera. Para casi todos estos daos
existen sistemas de reparacin que pueden requerir de la exposicin a la luz o no.
La fotorreactivacin, la reparacin por esfisin o por recombinacin son meca-
nismos con los cuales la clula cuenta para enfrentar los daos. El sistema SOS
proporciona un mecanismo de emergencia que slo funciona en caso de daos
graves y aunque permite la sobrevivencia del organismo, da lugar a la aparicin
de mltiples mutaciones.
Algunas de las enfermedadesde los sereshumanos se deben o se acompaan de
trastornos en los mecanismos de renaracin. entre otras. el Xeroderma
pigmeoasum, la ataxia telangieet&sica, el sindrome de Bloom, y el sndrome de
Fanconi. Itimamente se ha planteado la posibilidad de que el proceso de envejeci-
miento est tambih relacionado con una especie de agotamiento de los mecanis-
mos de reparacin del ADN.
Ejercicios
1.A veces durante la replicacin se produce un mal apareamientode bases que noes
detectado por el sistema corrector de la ADN polimerasa 1. Estos defectos pueden
ser reparados Cmo pueden las enzimas distinguir cul es la base mal colocada y
cual es la correcta?
2. Si a una bacteria sele introduce un fragmentodeADN deotra bacteriade la misma
lnea celular jactuar sobre ella el sistema de modificacin-restriccin?
3. Cules son las principales analogas y diferencias estructurales y funcionales
entre los 3 tipos de endonucleasasde restriccin?
4. ;Por qu cree usted que los daos por rotura en las 2 bandas del ADN casi nunca
pueden ser separados?
5. Qu repercusin tendr sobre la replicacin del ADN el tratamientode las clulas
con mitomicina C?
6. &Quimportanciatiene para el mdico el conocimiento de los diferentes mecanis-
mos de reparacin del ADN?
Los seres vivos estn en constante intercambio de materia, energa e informacin
con el medio, sta es una caracterstica esencial de la vida, peroesteintercambio no se
produce de igual manera en todos los organismos.
Las bacterias, por la forma en que viven, estn sometidas a cambios pronunciados
del medio, del cual extraen sus fuentesde sobrevivencia. Los eucariontes monocelulares,
aunque poseen una estructura ms compleja, estn en iguales condiciones.
En los organisnios pluricelulares ms desarrollados no todas las clulas se encuen-
tran expuestas a grandes cambios en la composicin del medio; en el hombre,slo las
clulas del tubo digestivo y el hgado experimentan grandes variaciones en la compo-
sicin del medio; el resto de las clulas del organismo se desarrollan en un niedio de
composicibn prcticamente constante.
Estas condiciones de vida influyen significativaniente en los iiiecanisnios utiliza-
dos por cada tipo de organismo, que le permite adaptarse a los cambios anibientales.
Los organismos monocelulares deben poseer mecanismos que funcionen de manera
rpida, tanto, como cambia el medio; mientras los organismos superiores pueden em-
plear mecanismos de respuesta ms lenta.
La presencia de nutrientes,su tipo y cantidad son algunos de los factores que ms
influyen en la sobrevivencia de un organismo; si ste no dispone de mecanismos
capaces de adaptar su metabolismo,cuando se producen cambios negativos denutrientes
en el medio, perecer en un tiempo ms bien corto.
En este captulo se estudiarn los mecanismos generales de regulacin de expre-
sin de la informacin gentica en los diferentes niveles, que permiten a los organis-
mos adaptarse a las condiciones cambiantes del medio. Se comienza por presentarlos
en procariontes, donde han sido mejor estudiados y posteriormente se hacen algunas
consideraciones acerca de los conocimientos actuales sobre la situacin en los orga-
nismos pluricelulares.
Aspectos generales
Los iiiecanisinos de seleccin natural han idoconservando las formas de vida que
presentan mayor eficiencia. Entre los organismos monocelulares, cualesquiera cambios
pernianente !hereditario que aumenten la eficiencia global del metabolismo celular,
hacen que estos tipos crezcan algo ms rpido que el tipo silvestre. Si se deja pasar un
tiempo prolongado la nueva lnea celular, desplazar totalmente al tipo silvestre.
Por ejemplo, si en una poblacin de 10' bacterias que duplican su nmero en
30 minutos, una bacteria es alterada de forma quesedupliquecada2YJminutos,cii
aproximadamente 80 das de crecimiento continuo, el Y9,9 % de la poblacin ser del
nuevo tipo; este tiempoes quizs muy largoen trminosde trabajode laboratorio, pero
es insignificante en cuanto a tiempo evolutivo se refiere, por lo tanto, sobre esta base
es razonable pensar que los sistemas de regulacin surgieron y se desarrollaron en el
sentido de ganar mayor eficiencia, como consecuencia del proceso de evolucin.
Existen algunas caractersticas ms o menos generales de la regulacin intracelular
que pueden resumirse en las siguientes:
Regulacin transcripcional
Los mecanismos inoleculares para cada sistema de regulacin pueden variar mu-
cho, pero frecuentementese clasifican en 2 grandes tipos: positivos y negativos.
En la regulacin negativa, la clula presenta un inhibidur, cuya accin determina
que la transcripcin se encuentre desconectada. En la positiva, hay molculas que
provocan una activacin del promotor. Las regulaciones positiva y negativa no son
excluyentes, y de hecho existen sistemas que estn regulados por las 2 formas.
En estos casos se hace necesaria la existencia de 2 efectores. Para evitar confnsio-
nes en lo sucesivo, debe tenerse presente la diferencia fundamental entre las 2 formas
mencionadas. En la regulacin negativa la unin del efector (que suele ser una prote-
na) al ADN provoca la inhibicin de la transcripcin, en tanto, que en la positiva, la
unin determina una activacin de la transcripcin.
A continuacin se presenta un estudio ms o menos detallado de los principales
mecanismos de regulacin transcripcional.
Fig. 34.3. hlodela general del oper". En el ADN se encuentran seriicneias ron diferrntcs fuiirioiics:
el gen regulador que codifica a la protena represara; la zona del opcrador-proiiii,tc>r 10-PI
donde se cine el represor y la R N polinierasa, as romo los genes cstrurliirales a ristruiies
que codifican la sntesis de protenm especficas (genernliiiciite cnliiiiasl. Cada oper6ii
posee un nmero caraiteristicu de risfrones.
Fig. 34.4. Estructura del opern lac. Se muestran las principales caractersticas estructurales del
oper" lae y de sus productos.
Polipptida Guia
\ Atranilato/ Indol-glicerol-P
\
T"ptfano
/
sintetasa sinletasa sintetasa
Fig. 34.9. Eslruetura del opern trp. En la figura se muestran las principales caractersticas estructu-
rales del o ~ e r nIrD Y de sus oroduetos. La zona o~erador-promotor(PIO) no est bien
A y B las subunidades de la triptfano sintetasa. Los sitios t son terminadores de los cuales
existen 2 al final del apern.
La diferencia con el sistema del opern lac estriba en que en este caso el
represor se sintetiza en forma inactiva (conformacin T), que presenta muy poca
afinidad por el ADN.
La unin del correpresor provoca un cambio de conformacin que aumenta ex-
traordinariamente la afinidad por el ADN y favorece la unin con el operador; este
correpresor result ser el propio triptfano.
Cuando la clula no dispone de triptfano exgeno, su concentracin intracelular
es tan baja que no hay posibilidades de unin con el represor y,por lo tanto, los genes
son transcriutos de forma continua. La adicin de triutfano al medio aumenta brusca-
mente su concentracin intracelular, favoreciendo su unin al represor y con ello la
inhibicin de la transcripcin. La utilizacin intracelular del triptfano disminuye su
concentracin, volvindose a la situacin inicial (Fig. 34.10).
Existen varios operones represibles bien estudiados y en lneas generales con-
cuerdan con el presentado en este texto, aunque como era de esperar tienen algunas
caractersticasespecficas.
Fig. 34.10. Funcionamiento del opern frp. El apcrn frp funciona de acuerdo con la disponibilidad
del triptbfano. Cuando no existe triptfano en el medio celular (A), el represor es inactivo
v no ~ u e d funirse al ooerador. lo cual ocrmitc aue se realice la transcripcin de los zenes del
Este tipo de regulacin, aun cuando es posible, es al parecer mucho menos fre-
cuente. Hay pocos casos esclarecidos donde la regulacin se exprese por variaciones
en el mecanismo de la traduccin, una vez formado el ARNm correspondiente.
El caso ms esclarecidoes la regulacin de la sntesis de las protenas que forma
parte de los ribosomas en los procariontes, que como se vio en el captulo 29 se
encuentran organizados en 7 operones.
Es necesario recordar que estos organismos carecen de envoltura nuclear y por
ello la transcripcin y la traduccin estn vinculadas directamente. Para formar los
ribosomas son necesarias las sntesis de los ARNr y de las diferentes protenas, por lo
que deben ocurrir la transcripcin de los ARNm correspondientesa cada uno de los
operonesy su posterior traduccin.
Como cada tipo de ARNr se une a un grupo especficode protenas durante el
proceso de "autoensamblaje" del ribosoma, debe existir una adecuada proporcin
entm el nmero de ambos ipmde molnilas. Cuando se "ensamblan" muchos r i h m a s ,
el nmero de ARNr empieza a disminuir y puede existir una superproduccin de
proteinas ribosomales, las protenas que controlan la expresin de cada uno de los
operonesse unen al ARNm correspondiente impidiendo la traduccin. Slo si apare-
cen ms molculas de ARNr, puede continuar la traduccin, de lo contrario sta se
mantiene inhibida (Fig. 34.12).
Fig. 34.12. Regulaein de la sntesis de protenas ribosomales. Para la formacin de los "bosomas se
requierc de la sintesis de los ARNr y las protenas en la proporcin adecuada. Si se produce
un exceso de protenas, stas se combinan con su propio ARNm e inhiben la traduccin.
Regulaan en eucariontes
Los sistemas reguladores eucariontes pluricelulares son algo diferentes a los
procariontes. La existenciade la membrana nuclear hace al ADN menos sensiblea los
cambios que se producen en el citoplasma y en el medio. Los requerimientos de las
clulas en organismos pluricelulares son muy diferentes de los procariontes. Las clu-
las embrionarias por ejemplo, se multiplican rpidamente, en tanto las clulas del
organismo adulto en ocasiones slo requieren nutrientes para su mantenimiento, pues
se dividen en casos excepcionales o nose dividen en absoluto.
Los estudios en eucariontes se dificultan por no existir tcnicas que produzcan y
aslen mutantes,separen y manipulen genes, as como extraer y purificar molculas de
ARNm especficas. En estos aspectos se ha avanzado mucho en la ltima dcada,
gracias a la introduccin de los procedimientos de la tecnologa del ADN recombinante.
Por otra parte, la dilucidacin de algunos mecanismos reguladores de la expresin
gentica en eucariontes indica que son numerosas la5 formas en que este fenmenose
realiza.
Las caractersticas de la organizacin del genoma de los eucariontes, la existencia
de la cromatina, la elevada proporcin de secuencias no codificantes, la existencia de
mecanismos que permiten el reordenamiento de los genes eucariontes y la misma
estructura del gen contribuyen a aumentar las dificultades en el estudio de sus meca-
nismos de regulacin.
A diferencia de los procariontes, existen varios nivelesde regulacin en los orga-
nismos pluricelulares que se expresan de forma diferente en los distintos tipos de
clulas, y que estn relacionados con las distintas etapas del proceso de expresin de
la informacin gentica.
Un primer nivel de regulacin viene dado por la seleccin de los genes que deben
transcribirse en un momento dado en cada clula. Durante mucho tiempo se pens que
la diferencia entre la eucromatina y la heterocromatina no era slo un aspecto de
apariencia tintorial; hoy sesabeque en la eucromatina estn contenidos los genes que
se transcriben de forma activa, mientras la heterocromatina presenta los genes que
estn silenciados. El ejemplo ms sobresaliente se da en el par de cromosomas sexuales
de la hembra; slo uno de los cromosomas X es activo, mientras el otro aparece fuerte-
mente "empaquetado" y puede observarse como un corpsculo que recibe el nombre
decuerpo de Barr, en lasclulasde las hembras.
Regulacin preir~oscripcional
Los genes que se encuentran en copia nica pueden ser suficientes para producir
una lenta acumulacin de protenas; por el contrario, una acumulacin ms rpida de
protenas se logra en el caso de genes de copias mltiples, hecho ste que es habitual
en el genoma. Sin embargo, en algunos casos ocurre la amplificacin de un gen o
conjunto de genes, como sucede en algunas clulas germinales o en las que desarrollan
resistencia a determinados frmacos.
El ejemplo mejor conocido se produce en los ovocitos del Xenopuslaevis, donde
los genes para los ARNr se incrementan unas 4 000 veces. La clula precursora del
ovocito contiene aproximadamente S00 genes para los ARNr, que despus de la ampli-
ficacin llegan hasta cerca de un milln, lo cual representa e1 75 % del ADN nuclear;
esto permite al ovocito sintetizar 10" ribosomas necesarios para la gran cantidad de
protenas que debe formar durante el perodo inmediato despus de la fertilizacin, en
este tiempo de apenas 3 semanas el nmero de nuclolos se incrementa de uno a varios
centenares.
Este ADN aparece como pequeas estructuras circulares que se replican mediante
crculos rodantes, aunque el mecanismo exacto no est totalmente esclarecido; cada
crculo puede contener varias copias de los genes de los ARNr.
Una vez queel ovocito ha madurado, el ADN circular esdegradado lentamente.
Despus de la fertilizacin el ADN cromosmicose replica y ocurre la mitosis repetida-
mente, mientras el embrin se desarrolla; sin embargo, el ADN extracromosmico no
se replica y este factor unido a su lenta degradacin hacen que al alcanzarse el nmero
de algunos cientos de clulas, este ADN amplificado ya no exista.
La amplificacin de los genes para los ARNr se ha observado en gran nmero de
organismos entre ellos insectos, anfibios y peces. En los mamferos este mecanismo
est muy asociado con el fenmeno de resistencia a determinadas drogas; stas actan
habitualmente como inhibidores enzimticos. Se han reportado cerca de 10 enzimas
cuyas concentraciones intracelulares aumentan mucho, debido a la amplificacin de
sus genes y de esta forma pueden soslayar la inhibicin, haciendo que la clula sea
resistente a la accin de la droga; un caso tpico de esta situacin se discute en el
captulo 84. Por ltimo, es interesante sealar que el mecanismo de amplificacin
gnica parece ser el responsable de la aparicin de algunos tumores malignos cuando
el gen amplificado es precisamente un oncogn.
Resumen
La dependencia manifiesta que existe entre los organismos vivos y el medio
donde se desarrollan trae aparejada la neeesidad de la existencia de meeanismos
de regulacin de la expresin de la informacin gentica, que permite la adapta-
cin del complejo metabiieo celular a los cambios constantes del medio. Estos
mecanismos difieren de acnerdo con el tipo de organismo que se irate, ya que estos
pueden estar expuestos a mayores o meuom variaciones de las caractersticasdel
medio, sobre todo con respecto a la obtencin de nntrieutes.
En general estos mecanismos de regulacin se caracterizan por la sntesis de
una protena especfica, slo cuando es u&, la inhibicin de actividades
enzimeticas que representan un mayor gasto de energa o una mayor produccin
de deshechosy vas productoras de mayor cantidad de energa metablica en tiem-
pos menores. Otra caractersUca relevante es la existenda de la regulacin eoordi-
nada que permite ejercer de manera simulinea el mecanismo sobrevarias enzimas
que intervienen en la mirmia secuencia metablica.
La regulacin de la expresin gentica puede rralizarse en 3 niveles funda-
mentales: pretranseripcional, transcripcional y posbanscripcional. El primero
est poco eshidiado y su ejemplo ms fehaciente es el mecanismo de amplicacin
gnica que tiene lugar en algunas clulas de organismos superiores.
El nivel transcripcionai se refiere a los mecanismos que actan directamente
estimulando (positivo) o inhibiendo (negativo) la sntesis de los ARNm. En
proeariontes existen 2 variantes: las induccin y represin enzimticas y la atenua-
cin.
La induccin enzimtica se caracteriza porque la presencia de una sustancia
(inductor)estimula la sntesisde protenas esflcas; en la represin la presencia
de determinada susiancia (compresor) provoca la inhibicin de la sntesisde pro-
tenastambin espeeiscas. Estas 2 situacionesrecibieron una explicacin mole&
con la aparicin del modelo del operu, segn el cual en el ADN celular pueden
disnguirse diferentes sectores funcionales: el gen regulador, el promotor, el ope-
rador y los genes estnichuaies (cishones).
El gen regulador codifica la protena represora que se une al operador y
bloquea la sntesisde los ARNm. La interaccin del represor con molcuias peque-
as puedehacer que ste se separe del operador (induccin)y, con ello, se comience
la sntesis de ARNm, o por el contrario puede ser n d a esa interaccin para
que el represor pueda unirse al operador (represin), con lo cual la sntesis de
ARNm se inhibe.
La atenuacin se caracteriza por la existencia de una zona del ARNm Uamada
gua (leader) que contiene varios d o n e s para un aminodcido determinado; si al
traducirse esa zona el amino6cido est abundante en la clula, la transcripcin se
inhibe, en caso contrario conma.
Muchos operones de induccin requieren adems la participacin del comple-
jo CAP-AMPc para poder funcionar an en presencia del inductor.
El ejemploms sobresalienteen proeariontes de regulacin postranscripcional
es la sntesis de protenas nbosomales, las cuales actan como inhibidores de su
propia formacin.
La regulacin de la expresin gentica en los eucariontes plnriceluiares resul-
ta mucho ms compleja que en los unicelulares. La zona de transcripcin est
relacionada con la eummatina, la cual se transerihe de forma activa, mientras la
betero~~umana apenas lo hace. Los genes tranSrritos por la ARN polimerasa 11
presentan promotores complejos que permiten la unin no slo de los factores
generales de transcripcin, sino, adems, de fadores gnico espe&cos que unas
veces estimulan el proceso y otras veees lo inhiben. De esta forma se reazan en
estos organismoslos fenmenosde induccin y represin de la sntesis de protenas.
En ocasiones, un mismo gen puede estar bajo el efecto de los 2 tipos de factores
(setivadores e inhibidores) y en esos ess<w el efecto de uno de ellos predomina sobre
el otro.
Tambin parreen ser puntos de control el procesamientodel ARNm y su trans-
porte hacia el citoplasma Tambin exisien indicios de repuiacin al nivel de la
traduccin y del m&mu por el cual las protenas sintetizadas alcanzan su
desno final. Los estudios que se realizan en estos momentos auguran que en los
prximos aos se tendr una informacin ms detallada de los mecanismos de
regulacin de la exprrsi6n gentica en los organismossuperiores, especialmente en
el hombre, tal vez eUo pueda contribuir a su bienestar y felicidad.
1. ;Qu repercusin podra tener sobre el mecanismo de regulacin del opern lac,
una mutacin en el gen regulador que produjera una modificacin en la conforma-
cin de la protena represora? Discuta por lo menos 2 alternativas.
2. ;Cmo podra afectarse el funcionamientodelopern lac,si ocurriera una muta-
cin en la zona del operador-promotor? Discuta al menos 3 posibilidades.
3. Cmo repercutira sobre el funcionamientodel opern lac una mutacin que diera
origen a la aparicin de un codun de terminacin en la zona central del cistrn de
la p- galactosidasa?
4. ;Qu caractersticasdebe poseer una sustancia para poder actuar como inductor
gratuito de un opern determinado?
5. Si en la zona gua del ARNm del opern trp ocurriera una niutacin, que diera lugar
a la aparicin de un tercer codon para el triptfano,;influira esto en la sensibilidad
del mecanismo de atenuacin a los cambios de concentracin del aminocido en la
clula?
6. ;Cmo puede el mecanismo de amplificacin gnica regular la sntesis de prote-
nas especficas?
7. Cree usted que el mecanismo de regulacin postranscripcional utilizado en la
sntesis de protenas ribosomales pudiera ser igualmente efectivo en otras protenas
conjugadas?
Entre las ciencias terica y tcnica existe una relacin dialctica. La teora busca
el conocimiento de las leyes generales de la naturaleza a partir del estudiodetallado de
numerosos fenmenos, en tanto, la tcnica persigue el objetivo de convertir esos
conocimientos en instrumentos prcticos vinculados directa o indirectamente a la
produccin material.
Esta interaccinse ha hecho tan evidente en las ltimas dcadas, con la aparicin
de la revolucin cientficotcnica,que ha llevado a formular la tesis de la conversin
de la ciencia en una fuerza productiva; pero existe tambin la relacin inversa, o sea,
los avances tecnolgicos tambin contribuyen, de forma considerable,al desarrollo
de la ciencia terica con la produccin de instrumentos que alcanzan cada vez un
grado ms elevado de perfeccin y que sirven para profundizar an ms en el
conocimiento de la naturaleza. A esta situacin no escapan algunos campos, al parecer
tan alejados, de la vida prctica como la gentica molecular.
Existen muchos ejemplosde como en los ltimos 40 aos, el desarrollo tecnolgico
ha conducido a gigantescos pasos de avance en el conocimiento de la biologa
molecular. La difraccin de rayos X permiti a los investigadores tener una visin
detallada de la estmctura de las macromolculas,ascomo la tcnica de centrifugacin
en gradientes de densidad de CsCl abri las puertas al conocimiento del mecanismo de
replicacin del ADN. La adquisicin ms reciente lo constituyela tcnica para unir
molculas de ADN in vitro,denominada tecnolw'a del ADN recombinante. Esta tcnica
bsica y sus mltiples variantes han revolucionado el estudio de la gentica de los
eucariontes y ha proporcionado fuentes de protenas especficas en cantidades
consideradasanteriormentecasi imposible.
En este captulo se estudiarn los procedimientos generales de esta tecnologa y
algunas implicacionesde sus procedimientos, en especial aqullos que ms vinculados
estn con la prctica mdica. No se pretende, ni mucho menos, hacer un anlisis
pormenorizado de este tema,qne por lodems esten constante crecimiento,ni siquiera
dar una descripcin de sus mltiples procedimientos. El objetivo principal es dar a los
lectores una idea de cmo estos conocimientos del nivel molecular de la biologa
pueden ser utiluados en la prctica.
Piocedimiento general
Existen numerosos procedimientos para la manipulacin de los genes, de
acuerdo con los objetivos que se persigan. Un procedimiento general para la
Obtencin de genes especficos
El mayor impactode esta tecnolg'a fue sobrelos mecanismos de las clulas eucariotas,
por eso slo se har referencia a la obtencin de genes eucariontes en forma simplificada,
pues en ocasiones, la complejidad del proceso rebasa los lmites de este texto.
El primer intentodeobtencin de ungen eucariontefue directamentede laclula; se
extraan las molculas de ADN y seexponan a la accin de una enzima de restriccin; los
fragmentos quese obtenan solanser muy grandes y eranecesario volver afragmentarlos
medianteunaendonucleasa con especificidad diferente a la primera; esto poda repetke
varias veces basta obtener fragmentos de tamao adecuado para su manipulacin. El
estudiode los puntos de corte de varias enzimas sobre una molcula de ADN origina los
h d o s m a p a s de restriccin, queconsisten en la representacin dela molcula de ADN,
sealando los puntos donde es cortada por cada una de las endonucleasas ensayadas;
cuando se tem'a el fragmento deseado se proceda a su insercin en un vector. Pero este
procedimiento no dio los resultados esperados; a partir de experienciasde este tipo fue
que quedaron establecidos el carcter disconnuo de los genes eucariontes y la existencia
de los intrones; estas caractersticasentorpecan la expresin de los genes eucariontesen
bacterias.
El segundo procedimiento consisti en aislar no al geu,sino al ARNm transcrito a
partir de l, para ello generalmentese seleccionaba una clula especializadaen la sntesis
de determinadaprotena, de manera que la concentracindel ARNm fuera lo ms elevada
posible, por ejemplo, los reticulocitos para el ARNm de la globina, las clulas P del
pncreas para ARNm de insulina, etctera. Este proceder tiene la ventaja de que ya han
sido eliminados los intrones. Para la obtencin del gen se incuban el ARNm con
los 4 dNTP y una enzima que se obtiene de retrovirns, que es capaz de formar una
molcula de ADN tomando como molde una de ARN, por lo cual se le ha denominado
En el acpite anterior se him referencia a los vectores; se entiende por vector a una
molcula de ADN que se emplea para introducir el gen deseado en una clula. Para que
un vector sea til debe reunir las condiciones siguientes:
+ *
amp tet amp te1
+
amp tet
smp tct
Fig. 35.5. Ideiitiiiiarin del plsniido ~.ecombinado.Si empleamos un plsmido que tiene los genes
,>ara la resistencia a la tetraciclina (tet) y a la ampicilina (amp), o sea, es de tipo tet'amp; Y
el D S de iiuestro inters se incorpora en la zona del gen tet, se origina un plsmido que es
tet aiiip-. Si este plsmido rciombinndo sc introduce en una bacteria que sea t e t a m p , la
Iiiirtci.ia re torna ter amp*. Estas baeteriasse exponen a la accinsimultneadela tetraciclina
! la cicloseriiia. Como las bacterias que sean tet* crecen y se multiplican, la cicloserina las
iiiata. en tanto. las ter, como presentan una inhibicin de su crecimiento, na son afectadas
por la cicloserina. Si despus las bacterias sobrevivientes se pasan a un medio que contiene
ampicilina, slo quedarn aqullas que sean resistentes y, par lo tanto, sean ter amp*, que
son las que han incorporado el plsmido recombinada.
Problemas en la produccin de protenas eucariontes
La utilizacin de bacterias para la produccin de protenas de eucariontes origina
los problemas siguientes:
Experiencia tpica
Una vez conocidos todos los elementos de trabajo, as como las dificultadesque
encierran estos experimentos, se describir una experiencia exitosa de sntesis de un
producto eucarionte por medio del aparato metablico de la E. Coli, se trata de la
somatostatina, una hormona polipeptdica de 14 aminocidos que se sintetiza
normalmente en el hipotlamo y el pncreas.
Como el nmero de aminocidos es pequeo, se procedi a la sntesis artificial del
gen que contiene51 pb, cuya secuencia en la banda codificadora sera:
Empleo diagnstico
La presencia de formas allicas de un gen en un individuo, que en algunos casos
pudiera ser patolgica, es detectada habitualmente por electroforesis o mtodos
antignicos de las variantes de protenas, aun cuando se sabe que ello se debe en
ltima instancia a variaciones en la secuencia de bases del A D N en los loci
cromosmicos correspondientes. Recientemente mtodos derivados de la tecnologa
del A D N recombinante han permitido el anlisis directo de las secuencias del gen, as
como determinar sus alteraciones especficas que provocan cambios estmctnrales de
una protena particular. La utilidad de esta tcnica es que permite la distincin entre 2
copias de un locnsparticular del genoma humano.
El mtodo ms utilizado en la prctica para el estudio de las variaciones gnicas es
el uso de las enzimas de restriccin; como estas enzimas realizan su accin en sitios
especficos del ADN, un cambio en la secuencia puede conducir a la aparicin o
desaparicin de un sitio particular y, por lo tanto, se altera el tamao de los fragmentos
que se obtienen cuando el A D N es digeridoutilizando esa enzima; lo mismo ocurre si
existen deleciones o inserciones.
La diferencia en los tamaos de los fragmentos de una regin determinada de
cromosomas homlogos puede ser detectada, con lo que se determina la existencia de
los alelos.
Suponga que un gen presenta 2 alelos Al y A2,en el Al existen 2 sitios reconncidos
por una enzima de restriccin separados por una distancia de 20 kb; pero en A2,
producto de las mutaciones, ha aparecido un nuevo sitio de restriccin para la misma
enzima entre los 2 anteriores, de manera que la accin de la enzima dar lugar a 2
fragmentos de 8 kb y 12 kb, respectivamente (Fig. 35.7).
Perspectivas
Muchos son los campos del quehacer humano donde la tecnologa del ADN
recombinante puede dar grandes resultados. La introduccin de genes especficosen
bacterias puede ser de gran utilidad, si estos organismos con su actividad provocan un
mejoramiento del suelo, un incremento en la fijacin de nitrgeno u otras
Resumen
Uno de los xitos ms sobresaentes de la gentica moleeular ha sido la intm-
ducei6n de la tecnologa del ADN reeombinante, que ha permitido obtener protef-
nas eueariontes en cantidades antes insospechadas y al mismo tiempo un anlisis
del gen al nivel molenilar.
El procedimiento general consiste en la obtenei6n de un gen particular, su
incorporaci6n a un vector y su propagaci6n. Los genes pueden obtenerse por frag-
mentari6ndelADN,por aislamientodel ARNm y slntesisdel een wr lamswi~tasa
inversa o por sinte& artificial del gen. LO; vectorea & empleados son los
plsmidos, los Virus y los mmosomas artieiales de levadura. La uni6n del gen al
vector puede ocurrir de 2 formas, segn el tipo de enzima de resMed6n empleada
en el proceso. Cuando la enzima no da fragmentos monofibrilares se requiere el
c o n m de la nudeotidil t r a n s f e m terminal.
La producci6n de protenas eucariontes en bacterias presenta varias
dificultades, pero basta con obtener algunas clulas recombinantes que,
proporcionndoles el medio adecuado, en pocas horas se tendrn tantas como se
quiera.
Mediante estos pmcedimientos se han obtenido nume- protenas, entre
ellas la somatostatina, la insulina y el interfern, el eual se obtiene con xito en
nuestro pas desde hace algunos dos.
La tecnologa del ADN recombinante puede ser 6oI en el anlisis del gennma y
proporciona un pmcedimiento preciso para el diagn6soco prenatal de algunas
enfermedades genticas; tambin puede ser utilizada en Jasdepartamentos de
trasplante y en medicina le@
Amplias son las perspectivas de esta tecnologfa para la agricultura, el
saneamiento ambiental y ia medieina No obstante, tambin puede ser empleada en
perjuido del hombre, dependiendo de quienes sean los que la empleen y no de los
pmcedimientos tcnicos.La humanidad debe condenar enrgicamente el empleo
criminal de estos procedimientos.
Ejercicios
1.;Cules cree usted que son las caractersticasque presentan los plsmidos que les
permite servir de vectores en los procedimientos del ADN recombinante?
2. Haga un diseode unexperimento para recombinar U> vitmun gen con un plsmido,
utilizando alguna de las enzimas de restriccin que aparecen relacionadas en el
captulo 33.
3. ;Cul fue el principal inconveniente encontradoal utilizar directamentelos genes
eucariontes para la recombinacin in vitro? Cmo pueden eliminarseesos incon-
venientes?
4. Por qu no siempre se logra la expresin de los genes an cuando han sido
incorporados al vector y ste se multiplica en la clula receptora?
5. ;Qu ventaja representa la incorporacin del promotor lac en los vectores?
6. ;Cmo puede la tecnologa del ADN recombinante favorecer el desarrollo de un
departamentode trasplantede rganos?
7. ;El hecho de que los procedimientos del ADN recombinante puedan ser utilizados
para causar dao a la humanidad, debe indicarnos que hay que concluir las inves-
tigaciones en este campo?
8. ;Qu perspectivas representa la tecnologa del ADN recombinante para los pases
subdesarrouados?
Resumen de la seccin