Grupo 11 Medicina Tropical

Dr. ngel Ortiz

Universidad de Guayaquil
Escuela de Medicina

Nombre: Gabriel Ernesto Olvera Lpez

Deber #2

Investigar 3 Abstract cada uno con su Anlisis:

Terapia Gnica con MicroRNA
Tcnica Molecular PCR para Diagnostico de enfermedades tropicales
Tcnica Inmunolgica para Diagnostico para enfermedades tropicales

Treatment of HCV Infection by Targeting MicroRNA

Harry L.A. Janssen, M.D., Ph.D., Hendrik W. Reesink, M.D., Ph.D., Eric J. Lawitz, M.D., Stefan Zeuzem, M.D.,

Maribel Rodriguez-Torres, M.D., Keyur Patel, M.D., Adriaan J. van der Meer, M.D., Amy K. Patick, Ph.D., Alice Chen,

B.A., Yi Zhou, Ph.D., Robert Persson, Ph.D., Barney D. King, M.D., Sakari Kauppinen, Ph.D., Arthur A. Levin, Ph.D.,

and Michael R. Hodges, M.D.

N Engl J Med 2013; 368:1685-1694May 2, 2013DOI: 10.1056/NEJMoa1209026

BACKGROUND

The stability and propagation of hepatitis C virus (HCV) is dependent on a functional interaction between
the HCV genome and liver-expressed microRNA-122 (miR-122). Miravirsen is a locked nucleic acid
modified DNA phosphorothioate antisense oligonucleotide that sequesters mature miR-122 in a highly
stable heteroduplex, thereby inhibiting its function.

METHODS

In this phase 2a study at seven international sites, we evaluated the safety and efficacy of miravirsen in
36 patients with chronic HCV genotype 1 infection. The patients were randomly assigned to receive five
weekly subcutaneous injections of miravirsen at doses of 3 mg, 5 mg, or 7 mg per kilogram of body
weight or placebo over a 29-day period. They were followed until 18 weeks after randomization.

RESULTS

Miravirsen resulted in a dose-dependent reduction in HCV RNA levels that endured beyond the end of
active therapy. In the miravirsen groups, the mean maximum reduction in HCV RNA level (log10 IU per

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milliliter) from baseline was 1.2 (P=0.01) for patients receiving 3 mg per kilogram, 2.9 (P=0.003) for those
receiving 5 mg per kilogram, and 3.0 (P=0.002) for those receiving 7 mg per kilogram, as compared with
a reduction of 0.4 in the placebo group. During 14 weeks of follow-up after treatment, HCV RNA was not
detected in one patient in the 5-mg group and in four patients in the 7-mg group. We observed no dose-
limiting adverse events and no escape mutations in the miR-122 binding sites of the HCV genome.

CONCLUSIONS

The use of miravirsen in patients with chronic HCV genotype 1 infection showed prolonged dose-
dependent reductions in HCV RNA levels without evidence of viral resistance. (Funded by Santaris
Pharma; ClinicalTrials.gov number, NCT01200420.)

Que hicieron?
Utilizaron Miravirsen que es un oligonucletido antisentido modificado con cido nucleico
bloqueado con 15 nucletidos complementario y con una alta afinidad y especificidad para
la regin 5 'del miR-122 maduro. Miravirsen puede secuestrar y as inhibir miR-122.
La administracin de miravirsen a chimpancs con infeccin crnica por VHC proporcion
una supresin viral duradera sin evidencia de mutaciones resistentes en los dos sitios de
unin miR-122 de la regin 5 'no traducida del genoma de HCV, y no se observaron
eventos adversos en estudios de fase 1 En voluntarios sanos.
Como lo hicieron?
Los pacientes que no haban sido sometidos a tratamiento previo para la infeccin crnica
del genotipo 1 del VHC fueron matriculados en siete sitios internacionales. Los pacientes
elegibles eran de 18 a 65 aos de edad y se les requiri tener una enfermedad heptica
compensada con un nivel de ARN del VHC en plasma de ms de 75.000 UI por mililitro. Se
excluyeron los pacientes con otras causas de enfermedad heptica crnica, cirrosis (como
se diagnostic en biopsia previa) o enfermedad heptica descompensada. Los pacientes
tambin deban ser seronegativos para el antgeno de superficie de la hepatitis B y
anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana y tener un recuento absoluto
de neutrfilos de 1500 o ms por milmetro cbico, un recuento de plaquetas de 100.000 o
ms por milmetro cbico, valores normales de creatinina srica y Para bilirrubina total y
directa, y niveles de alanina aminotransferasa menos de 3 veces el lmite superior del
rango normal.
Que obtuvieron?
Un total de 36 pacientes con infeccin crnica por el genotipo 1 del VHC fueron incluidos
en el estudio, con 9 pacientes en cada grupo de miravirsen (que recibieron 3 mg, 5 mg o 7
mg por kilogramo) y en el grupo placebo. Las caractersticas basales fueron similares entre
los cuatro grupos de estudio
De los 36 pacientes, 12 iniciaron tratamiento con interfern pegilado y ribavirina durante el
seguimiento.
El uso de miravirsen en pacientes con infeccin crnica por genotipo 1 del VHC mostr
reducciones dependientes de la dosis prolongada en los niveles de ARN del VHC sin
evidencia de resistencia viral.

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Dr. ngel Ortiz

Symptomatic Dengue in Children in 10 Asian and Latin

American Countries
Mana LAzou, M.Sc., Annick Moureau, M.Sc., Elsa Sarti, Ph.D., Joshua Nealon, M.Sc., Betzana Zambrano, M.D., T.

Anh Wartel, M.D., Luis Villar, M.D., Maria R.Z. Capeding, M.D., and R. Leon Ochiai, Ph.D., for the CYD14 and

CYD15 Primary Study Groups*

N Engl J Med 2016; 374:1155-1166March 24, 2016DOI: 10.1056/NEJMoa1503877

BACKGROUND

The control groups in two phase 3 trials of dengue vaccine efficacy included two large regional cohorts
that were followed up for dengue infection. These cohorts provided a sample for epidemiologic analyses
of symptomatic dengue in children across 10 countries in Southeast Asia and Latin America in which
dengue is endemic.

METHODS

We monitored acute febrile illness and virologically confirmed dengue (VCD) in 3424 healthy children, 2
to 16 years of age, in Asia (Indonesia, Malaysia, the Philippines, Thailand, and Vietnam) from June 2011
through December 2013 and in 6939 children, 9 to 18 years of age, in Latin America (Brazil, Colombia,
Honduras, Mexico, and Puerto Rico) from June 2011 through April 2014. Acute febrile episodes were
determined to be VCD by means of a nonstructural protein 1 antigen immunoassay and reverse-
transcriptasepolymerase-chain-reaction assays. Dengue hemorrhagic fever was defined according to
1997 World Health Organization criteria.

RESULTS

Approximately 10% of the febrile episodes in each cohort were confirmed to be VCD, with 319 VCD
episodes (4.6 episodes per 100 person-years) occurring in the Asian cohort and 389 VCD episodes (2.9
episodes per 100 person-years) occurring in the Latin American cohort; no trend according to age group
was observed. The incidence of dengue hemorrhagic fever was less than 0.3 episodes per 100 person-
years in each cohort. The percentage of VCD episodes requiring hospitalization was 19.1% in the Asian
cohort and 11.1% in the Latin American cohort. In comparable age groups (9 to 12 years and 13 to 16
years), the burden of dengue was higher in Asia than in Latin America.

CONCLUSIONS

The burdens of dengue were substantial in the two regions and in all age groups. Burdens varied widely
according to country, but the rates were generally higher and the disease more frequently severe in
Asian countries than in Latin American countries. (Funded by Sanofi Pasteur; CYD14 and CYD15
ClinicalTrials.gov numbers,NCT01373281 and NCT01374516.)

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Que hicieron?
Para confirmar la presencia de infeccin por el virus del dengue, Una muestra de sangre
obtenida dentro de 5 das Despus de la aparicin de la fiebre fue probado por un
enzymelinked Inmunosorbente para ensayos no estructurales Antgeno de protena 1
(Platelia, Bio-Rad Laboratories), Por una reaccin cuantitativa de transcriptasa inversa-
polimerasa-cadena (PCR) de deteccin de dengue, Y por un serotipo especfico de PCR
en tiempo real de ensayo (Simplexa Dengue, Focus Diagnostics). Febril Los episodios se
consideraron virolgicamente confirmados (VCD) si alguna de estas pruebas tena una
resultado positivo.
Como lo hicieron?
Durante el mes de junio de 2011 a diciembre de 2013, y en 6939 nios, se realiz un
seguimiento de la enfermedad febril aguda y del dengue confirmado virolgicamente en
3424 nios sanos de 2 a 16 aos de edad en Asia (Indonesia, Malasia, Filipinas, Tailandia
y Vietnam) Entre junio de 2011 y abril de 2014. Los episodios febriles agudos se
determinaron como VCD por medio de un inmunoensayo de antgeno de protena 1 no
estructural y un ensayo de inmunoensayo reverso, Transcriptasa-polimerasa-cadena de
reaccin. La fiebre hemorrgica del dengue se defini segn los criterios de la
Organizacin Mundial de la Salud de 1997.
Que obtuvieron?
Aproximadamente el 10% de los episodios febriles de cada cohorte fueron confirmados
como VCD, con 319 episodios de VCD (4,6 episodios por 100 personas-ao) ocurridos en
la cohorte asitica y 389 episodios de VCD (2,9 episodios por 100 personas-ao) Cohorte
latinoamericana; No se observ ninguna tendencia segn el grupo de edad. La incidencia
de la fiebre hemorrgica del dengue fue inferior a 0,3 episodios por cada 100 aos-persona
en cada cohorte. El porcentaje de episodios de VCD que requirieron hospitalizacin fue del
19,1% en la cohorte asitica y del 11,1% en la cohorte latinoamericana. En grupos de edad
comparables (9 a 12 aos y 13 a 16 aos), la carga de dengue fue mayor en Asia que en
Amrica Latina.

Estandarizacin de la tcnica de aglutinacin

directa para el inmunodiagnstico de la
enfermedad de Chagas
Yenny Alviarez, Mara Lares, Mercedes Viettri, Cruz M. Aguilar, Leidi Herrera, Elizabeth
Ferrer

Resumen

Introduccin. La enfermedad de Chagas es causada por el parsito Trypanosoma

cruzi y su diagnstico inmunolgico se basa principalmente en la deteccin de
anticuerpos contra T. cruzi mediante pruebas tales como ELISA, inmunofluorescencia
indirecta (IFI) y hemaglutinacin indirecta (HAI). Esta ltima tiene el inconveniente de
requerir la preparacin de eritrocitos de carnero, difciles de obtener y de poca
duracin. Sin embargo, existen pruebas alternativas, como la tcnica de aglutinacin
directa.

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Objetivo. Estandarizar la tcnica de aglutinacin directa para el diagnstico de la
enfermedad de Chagas.

Materiales y mtodos. Se prepararon parsitos epimastigotes de T. cruzi mediante

dos protocolos, con tratamiento con tripsina y sin l. Los parsitos se colorearon, y se
determinaron las condiciones ptimas de concentracin parasitaria y diluciones de
suero. Se utilizaron sueros de pacientes con enfermedad de Chagas, de individuos
sanos y con otras parasitosis.

Resultados. La concentracin parasitaria ptima fue de 500 x106 parsitos/ml,

utilizando parsitos coloreados y sin tratamiento con tripsina. Las diluciones de suero
ptimas fueron de 1/25, 1/50 y1/100, y el punto de corte, la dilucin de 1/50. La
tcnica estandarizada mostr ndices diagnsticos de sensibilidad de 94,3 % (IC95%
79,5-99,0) y de especificidad de 96,3 % (IC95% 88,8-99,0); se encontr reaccin
cruzada en tres sueros de individuos con leishmaniasis visceral, con valores
pronsticos positivo y negativo de 91,7 % (IC95% 76,4-97,8) y de 97,5 % (IC95%
90,4-99,6), respectivamente. Se compararon los resultados con los obtenidos por HAI,
ELISA e IFI y la concordancia fue de 96 % con un ndice kappa de 0,90 (IC95% 0,81-
0,99).

Conclusin. La tcnica de aglutinacin directa estandarizada podra ser til para el

inmunodiagnstico de la enfermedad de Chagas.

Palabras clave

enfermedad de Chagas, Trypanosoma cruzi, pruebas inmunolgicas, parsitos,

anticuerpos

Standardization of a direct agglutination test for the

immunodiagnosis of Chagas disease

Introduction: Chagas disease is caused by the parasite Trypanosoma

cruzi and its immunological diagnosis is mainly based on the detection of
antibodies against T. cruzi using tests such as the ELISA, the indirect
fluorescence antibody test (IFAT) and the indirect hemagglutination test
(IHAT). The main disadvantage of the IHAT is the need to prepare sheep
erythrocytes, whose availability is limited and they have a short duration
once prepared. However, there are alternative tests, such as the direct
agglutination test (DAT).

Objective: To standardize the direct agglutination test for the diagnosis

of Chagas disease.

Estudiante: Gabriel Ernesto Olvera Lpez

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Materials and methods: Trypanosoma cruzi epimastigotes were

prepared using two protocols, with and without trypsin treatment. The
parasites were stained and optimal conditions for parasitic concentration
and serum dilutions were determined. We evaluated the technique using
sera from patients with Chagas disease, from healthy individuals and
from individuals with other parasitic diseases.

Results: The optimal parasitic concentration was 500 x 10 6

parasites/ml using stained parasites without trypsin treatment. The
optimal serum dilutions were 1/25, 1/50 y 1/100 and the cut-off point
was the 1/50 dilution. The diagnostic indices for the standardized
technique were as follows: Sensitivity, 94.3% (95% CI: 79.5-99.0) and
specificity, 96.3% (95% CI: 88.8-99.0), with positive and negative
predictive values ?? of 91.7% (95% CI: 76.4-97.8) and 97.5% (95% CI:
90.4-99.6), respectively. Cross-reaction was observed only in three sera
from individuals with visceral leishmaniasis. The results were compared
with those obtained by IHA, ELISA, and IFA, and the concordance rate
was 96% and the kappa index, 0.90 (95% CI: 0.81-0.99).

Conclusion: The standardized direct agglutination test could be useful

for immunodiagnosis of Chagas disease.

Key words: Chagas disease, Trypanosoma cruzi, immunologic tests,

parasites, antibodies.

Que hicieron?
En el presente estudio nos propusimos estandarizar la tcnica de aglutinacin
directa para la deteccin de anticuerpos anti- T. cruzi . Se evaluaron dos
protocolos (28,32), los cuales se modificaron con el propsito de hacerlos
ms sencillos. Se compa-raron los protocolos evaluados con los resultados
obtenidos mediante las pruebas de referencia HAI, ELISA e IFI, midiendo la
concordancia y la determinacin de los ndices diagnsticos.
Como lo Hicieron?
Se estudiaron 35 sueros de individuos con enfermedad de Chagas
provenientes de zonas endmicas con resultados positivos en las tres
tcnicas de inmunodiagnstico antes mencionadas (controles positivos). Se
analizaron 35 sueros de individuos sanos con resultados negativos en las
tcnicas inmunolgicas y que no presentaban sntomas ni historia de
contacto con la enfermedad (controles negativos). Adems, se evaluaron 46
sueros de individuos con otras parasitosis, as: nueve con leishmaniasis
visceral, 22 con toxoplasmosis, cuatro con cisticercosis, tres con
himenolepiasis, dos con esquistosomiasis, y uno con cada una de las que
siguen: toxocariasis, hidatidosis, oncocercosis, larva migrans cutnea,
criptosporidiosis y rangeliosis, diagnosticadas por tcnicas inmunolgicas y
parasitolgicas (controles heterlogos). La mayora de las muestras de
suero provena del banco de sueros de la Seccin de Parasitologa Molecular
del Instituto de Investigaciones Biomdicas "Dr. Francisco J. Triana-
Alonso"-(BIOMED) y las dems, del Departamento de Parasitologa de la
Facultad de Ciencias de la Salud, sede Carabobo, Universidad de Carabobo,

Estudiante: Gabriel Ernesto Olvera Lpez

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Dr. ngel Ortiz
y del Laboratorio Clnico Flor-Lab. Es importante resaltar que las muestras
utilizadas en este estudio provenan de individuos que haban formado parte
de otros estudios aprobados por el comit de biotica del BIOMED y que,
mediante la firma del consentimiento informado, indicaron que los
remanentes de sus muestras podran utilizarse en otros estudios de
investigacin, siempre y cuando no fuera revelada su identidad.
Que obtuvieron?
La comparacin de los resultados obtenidos en la tcnica de aglutinacin
directa con respecto a las pruebas de referencia (HAI, ELISA e IFI) se
presenta en el cuadro 3; la concordancia obtenida fue mayor de 90 % y el
ndice kappa determin una fuerza de concordancia muy buena de acuerdo
con los criterios establecidos (41) en un intervalo de confianza de 95 %. Por
otro lado, la prueba estandarizada demostr su excelente reproducibilidad,
pues en cada experimento se hicieron repeticiones.

Bibliografia:

http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1503877

http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1209026#t=abstract

http://sci-hub.cc/http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1503877

http://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/2078/2472

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