Grupo 11 Medicina Tropical

Dr. ngel Ortiz

Universidad de Guayaquil
Escuela de Medicina

Nombre: Leidy Alejandra Cern

Deber #3
Investigar 3 Abstract cada uno con su Anlisis:
Leishmaniasis
Enfermedad de Chagas
Coccidia

PREGUNTAS CLAVE:

Que hicieron?
Como lo hicieron?
Que obtuvieron?

Arginase activity of Leishmania isolated from patients

with cutaneous leishmaniasis.
Badirzadeh A1,2, Taheri T2, Abedi-Astaneh F3, Taslimi Y2, Abdossamadi Z2, Montakhab-
Yeganeh H2, Aghashahi M3, Niyyati M1, Rafati S2.

Author information
Abstract
Cutaneous leishmaniasis (CL) is one of the most important vector-borne parasitic diseases,
highly endemic in Iran, and its prevalence is increasing all over the country. Arginase (ARG)
activity in isolated Leishmania parasites from CL patients is yet to be explored. This study
aimed to compare the ARG activity of isolated Leishmania promastigotes from CL patients with
a standard strain of L. major and its influences on the disease pathogenesis. We recruited 16
confirmed CL patients from Qom province, in central Iran; after detection
of Leishmania species using PCR-RFLP, we assessed the levels of ARG in the isolated
promastigotes and determined the parasites' growth rate. Only L. major was identified from CL
patients. The level of ARG activity in the isolated Leishmania promastigotes from CL patients
was significantly higher than that obtained from the standard strain of L. major. No significant
correlations between ARG activity and lesion size, number, or duration were observed; in
contrast, a significant negative correlation was seen between ARG level and Leishmania'

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growth rate. The obtained results suggest that increased ARG expression and activity in the
isolatedLeishmania promastigotes might contribute to the higher parasite infectivity and play a
major role in the pathogenicity of the CL.
Que hicieron?
Este estudio fue aprobado por el Comit de tica del Instituto Pasteur de Irn (ID 8916, mayo de
2013). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de cada paciente que particip en este
experimento. Un total de 16 pacientes clnicamente confirmados de CL, que viven en las regiones
CL endmicas de la provincia de Qom ubicada en el centro de Irn, incluyendo; Distrito rural de
Qomrood, regiones urbanas y suburbanas como Qanavat y Kahak del condado de Markazi de la
provincia de Qom (12). Fueron remitidos al Laboratorio Principal del Centro de Salud de Masjid
Jameh en la provincia de Qom desde octubre de 2015 hasta mayo de 2016 (Figura 1). CL individuos
fueron considerados para la inscripcin si se presentaron con lesiones cutneas activas de reciente
aparicin de la infeccin. Las muestras se obtuvieron mediante desecho de lesiones utilizando un
vaccinostyle, en condiciones estriles; Adems, la confirmacin de laboratorio de los pacientes con
CL se realiz mediante microscopa directa en frotis de tincin de Giemsa (33), microcultivo por
aspiracin de lesin (34) y PCR-RFLP / PCR anidada (13, 35).
Como lo hicieron?
El ADN genmico total de parsitos aislados de pacientes se purific directamente a partir de la fase
de crecimiento logartmico de promastigotes utilizando el kit de extraccin de cido nucleico GF-1
(GF-1, Vivantis, Canad), de acuerdo con los protocolos del fabricante. En este estudio, PCR
anidada se realiz en los 16 casos confirmados de CL para la prueba final de identificaciones de
especies de Leishmania, siguiendo el mtodo descrito en otra parte (9). En esta PCR, se utilizaron
dos pares de primers externos e internos especiales de kDNA. Los cebadores CSB1XR y CSB2XF
para la primera ronda, y LiR y 13Z para la segunda, se utilizaron para amplificar los segmentos
variables en minicrculos de kDNA de parsitos Leishmania (Tabla 2]. Adems, se amplific la
regin transcrita interna (ITS1) del ADN ribosmico de la subunidad pequea (ssrDNA) a partir de
promastigotes cultivados mediante una simple PCR, utilizando cebadores especficos de Leishmania,
que amplifican un fragmento de ADN de 320 pb (Tabla 2). Se utilizaron cepas de referencia de L.
tropica (MOHM / IR / 09 / Khamesipour-Mashhad), L. major (MRHO / IR / 75 / ER) y L. infantum
(MCAN / ES / 98 / LLM-877) Controles estndar positivos y la mezcla de reaccin sin la adicin de
ADN se utiliz como control negativo para
Artculo aceptado Este artculo est protegido por derechos de autor. Todos los derechos reservados.
Controlar la reaccin. La longitud de los amplicones clasific 300-360 pb dependiendo de la especie
de Leishmania. Se utiliz como marcador un marcador de escala de ADN de 50 pb (Jena Bioscience,
Jena, Alemania) a 260 nm de longitud de onda. Para el anlisis de RFLP, los productos de PCR
incluyendo el ITS1 amplificado se digirieron usando la enzima de restriccin HaeIII (Fermentas,
Life Sciences, Alemania), segn la recomendacin del fabricante, para la identificacin final de la
especie del parsito
Que obtuvieron?
Se reclut un total de 16 pacientes con lesiones confirmadas de CL, que vivan o viajaban en las
regiones endmicas de CL de la provincia de Qom, en el centro de Irn, para este estudio (Figura 1).
El diagnstico fue aprobado por demostracin de amastigotes en frotis de raspado de la piel, cultivo
de promastigotes en el medio Drosophila de Schneider, PCR-RFLP y PCR anidada (datos no
presentados) (Tabla 1). Se identificaron especies de parsitos aislados mediante PCR, PCR-RFLP y
PCR anidada; L. major fue identificado como el agente causante en todos los pacientes con CL. En
PCR-RFLP, para los grupos de control positivo, los patrones de bandas incluyendo los 2 fragmentos
de 220 y 140 pb para L. major, 2 fragmentos de 200 y 60 pb para L. tropica y 3 fragmentos de 200,
80 y 60 pb Para L. infantum. De los 16 pacientes de CL reclutados en este experimento, 2 eran
mujeres y 14 hombres, con una edad mediana de 40 aos (rango: 20-63 aos). En la PCR anidada, L.
major y L. tropica proporcionaron fragmentos de 560 pb y 750 pb, respectivamente (Tabla 1). Un
gran nmero de pacientes con LC present lesiones nodulares (7 pacientes), 5 pacientes con lesiones
ulceradas y 4 pacientes con lesiones mixtas ulceronodulares. Diecinueve lesiones fueron observadas
en el brazo, las manos y los dedos; 16 en la pierna y el pie; 6 en la cara (frente, mejilla, labio y

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nariz); Y 1 en el vientre. La duracin de la enfermedad del paciente oscil entre 1 y 7 meses
(mediana: 1,5 meses): 1 paciente (N 7) present mltiples lesiones durante 7 meses con varias
recadas despus de la curacin sin tratamiento clnico. En particular, ninguno de los pacientes ha
sido sometido a ningn tratamiento antes del muestreo. El paciente con lesin del vientre (No. 12) al
comienzo de la enfermedad tena una pequea ppula; Sin embargo, despus de las aplicaciones de
extracto de ajo, el tamao de la lesin se desarroll en un mes. El tamao de la lesin oscil entre 0,5
y 8,5 cm.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28731592

J Mol Diagn. 2017 Jul 17. pii: S1525-1578(17)30108-3. doi: 10.1016/j.jmoldx.2017.05.010. [Epub ahead of
print]

Comparative Study and Analytical Verification of PCR

Methods for the Diagnosis of CongenitalChagas Disease.
Cura CI1, Ramrez JC2, Rodrguez M3, Lopez-Albzu C4, Irazu L3, Scollo K4, Sosa-Estani S4.

Author information
Abstract
Congenital infection is currently the first cause of new cases of Chagas disease
in Argentina and nonendemic areas worldwide. Its diagnosis is of utmost
importance to guarantee curative treatment. To improve such diagnosis, a
transfer process of PCR tests to the national laboratory network has been
initiated. We performed a comparative study of four PCR assays [two end-point
PCR and two duplex real-time quantitative PCR (qPCR) procedures] to detect
Trypanosoma cruzi DNA in blood samples. Because satellite DNA and
kinetoplastid DNA qPCR methods have the best performance and the use of
two different molecular targets for confirmatory purposes has been
recommended, these methods selected to perform the transfer process and, in
consequence, subjected to an analytical verification protocol based on
international guidelines. The anticipated reportable range was verified between
0.25 and 105 parasite equivalents per milliliter of blood (par. eq./mL) for both
qPCR methods, and the limit of detection was estimated to be 0.87 (95% CI,
0.62-1.24) and 0.43 (95% CI, 0.32-0.59) par. eq./mL for satellite DNA and
kinetoplastid DNA qPCR methods, respectively. In addition, both qPCR
methods had trueness and verified precision in the highest and the lowest
concentrations tested. This work provides critical knowledge of the technology
transfer process planned to cover laboratories of the regional network with
known installed facilities.

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Dr. ngel Ortiz

Que hicieron?
Se utilizaron noventa y ocho muestras de sangre de guanidina-EDTA (GEB): 43 de pacientes (26
adultos y 17 infantes) con CD confirmados por al menos dos pruebas serolgicas independientes
(ensayo de inmunoabsorcin enzimtica, ensayo de inmunofluorescencia indirecta y ensayo de
hemaglutinacin indirecta ) 14 y 55 de los controles (25 adultos y 30 lactantes) con resultados de la
prueba serolgica no reactiva. Todas las muestras de GEB de nios se presentaron despus de los 10
meses de edad (media edad SD, 13,2 2,6 meses), cuando el diagnstico fue confirmado por
mtodos serolgicos. Entre las muestras de adultos (edad media desviacin estndar, 37,8 18,4
aos), las obtenidas de pacientes con resultados de pruebas serolgicas reactivas confirmadas en al
menos tres muestras diferentes correspondieron a pretransplante y posttransplante (n = 16) y
pretratamiento (n = 10 ) Muestras. Por otro lado, las muestras seronegativas correspondieron a
posibles casos de mordida de triatominos (n = 23) y accidentes de trabajo (n = 2) en los que se
confirmaron la deteccin microscpica negativa del parsito y los resultados de las pruebas
serolgicas no reactivas despus de tres controles consecutivos cada 30 das. Se mezclaron muestras
de sangre de adultos y lactantes (5 y 0,5 ml, respectivamente) con un volumen igual de tampn de
guanidina (6 mol / L) y EDTA (0,2 mol / L) (pH 8,00) Durante 48 a 72 horas para obtener las
muestras de GEB. Las muestras de GEB obtenidas de adultos se hirvieron durante 15 minutos y
luego se mantuvieron a 4C junto con las muestras de GEB de infantes (que no estaban hervidos)
hasta la extraccin de ADN.
Como lo hicieron?
Se extrajo ADN de 300 L de muestras de GEB usando el kit de Preparacin de Plantillas de Alta
PCR Pure (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania) como se describe por Duffy et al. 21
Doscientos picogramos de control de amplificacin interno linealizado se aadieron a cada muestra
antes de la extraccin de ADN. El DNA extrado se almacen a -20 C hasta su uso en anlisis de
PCR.
Que obtuvieron?
Se analizaron un total de 98 muestras GEB: 43 obtenidas de pacientes con muestras serolgicas CD
reactivas confirmadas y 55 de individuos con muestras serolgicas no reactivas para T. cruzi como
controles negativos para tratar la especificidad.
La infeccin congnita es la tercera va principal de transmisin de T. cruzi y la primera causa de
nuevos casos de CD en Argentina y en reas no endmicas en todo el mundo. En realidad, se han
calculado 1078 y 1457 nuevos casos anuales de CD en este pas debido a la transmisin vectorial y
congnita, respectivamente. 1 El tratamiento de los nios que adquirieron CD congenitally es
siempre eficaz cuando se persigue en los infantes dentro de los primeros aos de vida. Por lo tanto, el
diagnstico temprano de la infeccin puede jugar un papel esencial en el control de la carga de la
enfermedad en esta poblacin. Adems de las pruebas estndar, una PCR realizada en muestras de
sangre de recin nacidos de madres infectadas podra mejorar dicho diagnstico. 5 De esta manera, el
Instituto Nacional de Parasitologa Dr. Mario Fatala Chaben ha iniciado un proceso de transferencia
de tecnologa de PCR para el diagnstico de CD congnito a implementar en el Sistema de Salud
Pblica (datos no publicados).

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28727985

The Prevalence of Cyclospora cayetanensis and

Cryptosporidium spp. in Turkish patients infected with
HIV-1.
Uysal HK1, Adas GT1, Atalik K1, Altiparmak S1, Akgul O1, Saribas S1, Gurcan M2, Yuksel
P1, Yildirmak T1, Kocazeybek B1, Ziver T1, Oner YA1.

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Abstract
Opportunistic infections such as cryptosporidiosis and cyclosporiasis are commonly
encountered in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). We investigated
the existence of opportunistic protozoans that significantly affect the quality of life in HIV-1
infected patients using conventional and molecular methods. The study group comprised 115
HIV-1 positive patients. In the identification of Cyclospora cayetanensis and Cryptosporidium,
the formol-ether precipitation method was used and smears were evaluated in optical
microscope by staining modified Ziehl-Neelsen (ZN). The primers and probes used for PCR
were Heat shock protein 70 for C. cayetanensis and the oocysts wall protein for
Cryptosporidium spp.. Cyclospora and Cryptosporidium spp. oocysts were detected in one and
two patients, respectively, by staining, whereas we detected C. cayetanensis in three patients
out of 115 (2.6%) by PCR, and Cryptosporidium spp. in a further three patients (2.6%). C.
cayetensis was detected in patients with CD4 counts of 64 cells/m, 182 cells/m and 287
cells/m, respectively. Cryptosporidium spp. was detected in patients with CD4 counts of 176
cells/m, 241 cells/m and 669 cells/m. As conclusion, PCR method is faster and more
sensitive than microscopic methods and to screen intestinal pathogens routinely in patients
infected with HIV should not be neglected in developing countries like Turkey.

Que hicieron?
En nuestro estudio, se pretende evaluar el papel de los recuentos de CD4 en Individuos infectados
con parsitos e investigar la prevalencia De protozoos oportunistas que afectan significativamente la
Calidad de vida de los pacientes infectados por el VIH-1 mediante Mtodos de identificacin
molecular. Nuestro estudio fue planeado como un Prospectivo aleatorizado estudio y se llev a cabo
como un cross-sectional Estudio de prevalencia.
Como lo hicieron?
Se prefiri un sistema de dos etapas para el proceso de aislamiento del ADN en la aplicacin del
mtodo molecular. En primer lugar, se utiliz un comprimido de InhibitEX con un aislamiento
clsico manual, Y cuando se dispersaron las sustancias inhibidoras, Las muestras se cargaron a una
mquina QIAcube. En nuestro estudio, preferimos el QIAGEN Q1 Aamp DNA Stool Mini Kit, que
es compatible con la mquina QIAcube. Para el Real-Time PCR, utilizamos el Genesig Primerdesign
Ltd. Cuantificacin de la Protena de Choque Trmico de Cyclospora cayetanensis 70 (HSP70) kit de
genes (Reino Unido). Para el Cryptosporidium Gnero, se utiliz el Genesig Primerdesign Ltd
Cuantificacin Del kit de genes Cryptosporidium (Crypto) Genomes (Reino Unido). Nuestra Estudio
se llev a cabo utilizando un Qiagen Rotor Q Real Time PCR mquina. Los cebadores y sondas
utilizados para la sonda basada en la sonda TagMan
La aplicacin de PCR en tiempo real amplifica la segmentacin de regiones especficas de la regin
70 de protena de choque trmico (HSP70) para C. Cayetanensis y la regin de la protena de pared
de oocistos (COWP) para Cryptosporidium. La extraccin positiva, negativa e interna de ADN
Controles y el patgeno que identificaba las Preparados de acuerdo con el contenido de sus
respectivos kits. Unos 15 l de valor de mezcla y 5 l de ADN extrado (Extrados de las muestras)
se pipetearon en cada uno de los 0,2 mL de tubos de PCR. Al final, todos los tubos contenan 20 l
de fluido. Despus de que los tubos de PCR se cargaron en el Rotor Gene Q Mquina, el protocolo
de amplificacin especificado en el Real-Time PCR se calibr en el software de la computadora
(Rotor Gene Q Series Software) y se inici la reaccin.

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La activacin enzimtica ocurri en el primer ciclo, y la Procesos de desnaturalizacin y recoleccin
de datos 50 ciclos. El aumento de la fluorescencia al final de cada ciclo Fue detectado por la mquina
Real Time PCR. La coleccin de Los datos fluorognicos tuvieron lugar en los canales FAM y VIC.
Que obtuvieron?
En nuestro estudio, hemos detectado Cyclospora y Cryptosporidium spp. Oocistos en uno y dos
pacientes mediante el mtodo ZN modificado en muestras utilizando el mtodo de precipitacin con
formol-ter, respectivamente, mientras que se detect C. cayetanensis
C. cayetensis se detect en tres pacientes con recuentos de CD4 de 64 clulas / m, 182 clulas / m
y 287 clulas / m, respectivamente.
Cryptosporidium spp. Se detect en tres pacientes con recuentos de CD4 de 176 clulas / m, 241
clulas / m y 669 clulas / m.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28682770

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