Manual Análisis Instrumental

MANUAL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL
Elaborado por:
JAIRO ALBERTO VILLAMIZAR GELVEZ

Estudiante de Tecnologa Qumica
Cdigo: 1930022
Directora:
DORA CECILIA RODRIGUEZ ORDOEZ

Qumica, M. Sc.
UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE INGENIERAS
DEPARTAMENTO DE QUMICA
PLAN DE ESTUDIOS DE TECNOLOGA QUMICA
2013
AGRADECIMIENTOS
El autor del trabajo expresa sus agradecimientos a la Universidad Francisco de Paula

Santander y a las siguientes personas, cuyos aportes fueron valiosos para llevar a cabo el
desarrollo de este manual: al Ingeniero Juan Mara Torres Caicedo, director del
Departamento de Qumica, a la profesora y directora del presente manual Dora Cecilia
Rodrguez Ordoez por su valiosa colaboracin en el desarrollo de cada prctica propuesta,
a Mara Ascensin Acevedo, Mara Eugenia Moreno, Guillermo Nio, Gloria Cecilia
Medina, Mirian Carvajal Valderrama y Yolanda Meja Toro, docentes y auxiliares del
Laboratorio de Qumica, por su colaboracin, y a todas aquellas personas que de una u otra
forma brindaron su colaboracin.
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
LISTADO DE TABLAS
5
LISTADO DE FIGURAS 6
8
INTRODUCCIN
PRCTICA N 1 NORMAS DE SEGURIDAD, ORGANIZACIN DE

TRABAJOS DENTRO DEL LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL 9
PRCTICA N 2 TRATAMIENTO ESTADSTICO DE DATOS 19
PRCTICA N 3 DETERMINACIN POTENCIOMTRICA DE LA ACIDEZ

DEL VINAGRE 26
PRCTICA N 4 DETRMINACIN DE ALCOHOL ETLICO POR

REFRACTOMETRA.. 33
PRCTICA N 5 POLARIMETRA (ROTACIN ESPECFICA DE

SUSTANCIAS PTICAMENTE ACTIVAS). 38
PRCTICA N 6 DETRMINACIN DE HIERRO (Fe), POR EL MTODO

COLORIMTRICO DE LA FENANTROLINA. 44
PRCTICA N 7 DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE

FSFORO DISPONIBLE EN SUELOS AGRCOLAS.. 49
PRCTICA N 8 ADITIVIDAD DE ABSORBANCIAS, DETERMINACIN

ESPECTROFOTOMTRICA SIMULTANEA DE CROMO Y MANGANESO... 56
PRCTICA N 9 DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN

UNA BEBIDA ENERGIZANTE, MTODO DE LA CURVA DE CALIBRACIN 62
PRCTICA N 10 DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN
UNA BEBIDA ENERGIZANTE, MTODO ADICIN DE UN ESTNDAR. 67
PRCTICA N 11 ESPECTROSCOPIA INFRARROJA, APLICACIN DEL

TUTOR IR PARA LA IMPLEMENTACIN DE CONCEPTOS TERICOS.. 72
PRCTICA N 12 ANLISIS INFRARROJO, PREPARACIN DE MUESTRAS

PARA ANLISIS 76
PRCTICA N 13 DETERMINACIN DE HIERRO Y MAGNESIO POR

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA.. 86
PRCTICA N 14 CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICIENCIA

(HPLC), DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN BEBIDA
REFRESCANTE... 101
PRCTICA N 15 CROMATOGRAFA DE GASES, ANLISIS DE UNA

MEZCLA DE HIDROCARBUROS. 116
LISTADO DE TABLAS
Pg.
Tabla 1. Resultados obtenidos de la titulacin del Biftalato de potasio (KHP) 24
Tabla 2. Preparacin de los patrones de Fe+2 para el anlisis. 46
Tabla 3. Preparacin de patrones para el anlisis de fsforo en suelos agrcolas 53
Tabla 4. Preparacin de los patrones de cafena para realizar la curva de calibracin 64
Tabla 5. Preparacin de los patrones para la adicin de un estndar 69
Tabla 6. Propiedades de la llama en Absorcin Atmica. 92
Tabla 7. Preparacin de los patrones para el anlisis por absorcin atmica 96
Tabla 8. Preparacin de los patrones de cafena (HPLC) para realizar la curva de

calibracin 113
5
LISTADO DE FIGURAS
Pg.
Figura 1. Representacin de los errores sistemticos y aleatorios 21
Figura 2. Montaje utilizado para realizar una valoracin o titulacin qumica. 23
Figura 3. Valoracin potenciomtrica de una solucin de cido actico vs NaOH 28
Figura 4. Grficas representativas de la determinacin potenciomtrica de una

solucin 29
Figura 5. Principio de refraccin, incidencia de un haz de luz 34
Figura 6. Regin Infrarroja del Espectro Electromagntico 77
Figura 7. Representacin de los picos y bandas de absorcin en un espectro IR 77
Figura 8. Celda desmontable (1-ventanas; 2-anillo espaciador; 3-anillos

intermedios; 4-soporte). 78
Figura 9. Celda para anlisis IR cuantitativo de lquidos 79
Figura 10. Celda para el anlisis IR de gases 80
Figura 11. Troquel utilizado para fabricar los discos de KBr 81
Figura 12. Componentes de un Espectrofotmetro de Absorcin Atmica 88
Figura 13. Lmpara de ctodo hueco. 89
Figura 14. Quemador-Nebulizador de premezclado o flujo laminar 90
Figura 15. Regiones de la llama en un quemador de premezclado o flujo laminar 93
Figura 16. Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de absorcin atmica

de doble haz. 94
Figura 17. Diagrama de flujo para un anlisis por Absorcin Atmica 97
Figura 18. Comportamiento de las partculas en la cromatografa de intercambio

inico 103
6
Figura 19. Comportamiento de las molculas en la cromatografa de exclusin por
tamao 104
Figura 20. Estructura interna de la Bomba Recproca para (HPLC) 106
Figura 21. Estructura interna de la Bomba de desplazamiento para (HPLC) 107
Figura 22. Estructura de un bucle utilizado en cromatografa (HPLC). 108
Figura 23. Partes de la columna para cromatografa (HPLC) 110
Figura 24. Estructura de la celda del detector ultravioleta en cromatografa (HPLC). 111
Figura 25. Estructura interna del equipo para cromatografa de gases (gas portador,
sistema de inyeccin, columna y detector) 118
Figura 26. Seccin transversal de un inyector de vaporizacin instantnea 119
Figura 27. Columnas utilizadas en cromatografa de gases (GC) 120
Figura 28. Representacin estructural de un detector de ionizacin de llama (FID) 122
Figura 29. Representacin estructural del detector de conductividad trmica (TCD). 123
7
INTRODUCCIN
La ciencia encargada de la separacin y determinacin de especies qumicas (analitos), con

base en sus propiedades fsicas tales como la conductividad, el potencial del electrodo, la
absorcin o emisin de la luz, la relacin masa/carga, la fluorescencia ,entre otras, adems
de utilizar correctamente los instrumentos analticos modernos recibe el nombre de Anlisis
Instrumental. El Anlisis Instrumental es una asignatura fundamental en la formacin de
los estudiantes de Tecnologa Qumica, Qumica, Qumica industrial y dems profesiones
afines; debido a que en los ltimos aos se han producido diversos instrumentos sensibles
que han incrementado considerablemente la capacidad de conocer, cuantificar y controlar
los analitos, cuya complejidad va en aumento.
Debido a que los laboratorios de qumica de la Universidad Francisco de Paula Santander

no cuentan con un manual de prcticas de laboratorio definido para la asignatura; se
desarroll un manual de prcticas de laboratorio de anlisis instrumental, que se convertir
en una herramienta de enseanza til y prctica, que le permite al estudiante comprender
los fenmenos estudiados en la asignatura y su preparacin para el futuro.
Cada prctica incluida en el manual, fue elegida cuidadosamente, adems fue probada y
estructurada por el autor, con la finalidad de que se ajuste al actual contenido programtico
y a los recursos disponibles en los laboratorios de qumica de la UFPS. Al realizar cada
experiencia el estudiante complementar su formacin, y se podr preparar para
desempearse a nivel profesional.
El manual de prcticas de laboratorio fue estructurado bajo ciertos parmetros que permiten
que la informacin sea ordenada y asimilada fcilmente por los estudiantes, describiendo
paso a paso las acciones que se deben seguir. Esta informacin en cada prctica, se
presenta de la siguiente forma: objetivos, que el estudiante debe cumplir al realizar cada
prctica; un marco terico, en el cual se menciona los fundamentos que rigen la prctica; el
procedimiento, pasos que debe seguir el estudiante para realizar el anlisis; cuestionario, le
permite al estudiante afianzar los conocimiento; las referencias bibliogrficas que le
permite al estudiante ampliar conocimientos sobre el tema tratado.
8
PRCTICA N 1
NORMAS DE SEGURIDAD, ORGANIZACIN DE TRABAJOS DENTRO

DEL LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL
1.1 OBJETIVOS
Conocer las normas de seguridad y comportamiento en el laboratorio de Anlisis

Instrumental.
Conocer los riesgos fsico-qumicos y biolgicos de las diferentes sustancias que se
utilizarn en las prcticas de laboratorio de anlisis instrumental.
Comprender la importancia de contar con el botiqun de emergencias e identificar
sus componentes bsicos.
Conocer las normas para la presentacin de los informes de laboratorio de anlisis
instrumental.
1.2 INTRODUCCIN
Para trabajar en el laboratorio de anlisis instrumental, es necesario el entendimiento de las

normas que rigen la seguridad y el comportamiento de los estudiantes, con su cumplimiento
se podrn prevenir distintos incidentes, como incendios y explosiones, entre otros. Los
estudiantes deben conocer los riesgos fsico-qumicos y biolgicos de las sustancias que se
utilizan en las diferentes prcticas; as como identificar los distintos componentes que
deben conformar el botiqun de emergencias. Para la presentacin de los informes de las
prcticas de laboratorio, el estudiante deber cumplir con las normas expuestas por el
docente al inicio del curso.
1.3 FUNDAMENTO TERICO
1.3.1 NORMAS GENERALES PARA EL LABORATORIO DE ANLISIS

INSTRUMENTAL
Para realizar las prcticas es indispensable vestir la bata de laboratorio y la

indumentaria apropiada.
La puntualidad es indispensable para el inicio y desarrollo de la prctica.
9
Para la ejecucin de las prcticas se deben conformar grupos de trabajo organizados
al inicio del semestre.
Dentro del laboratorio est prohibido fumar, comer y realizar acciones que puedan
generar accidentes.
Cada alumno debe traer preparada la prctica mediante la presentacin del pre-
informe de laboratorio, para ello debe leer con anterioridad y cuidadosamente el
contenido de la prctica y la bibliografa correspondiente.
Utilizar siempre que sea necesario los implementos de seguridad, tales como
tapabocas, guantes, gafas de proteccin, careta de gases, entre otros.
No colocar sobre los mesones de trabajo maletas, prendas personales o libros, esto
quita espacio para trabajar y pueden estropearse con los reactivos. Slo deben estar
sobre los mesones los materiales de trabajo que se estn utilizando.
Al inicio y finalizacin de cada prctica se debe lavar el material de vidrio y
enjuagarlo con agua destilada.
Identificar los riesgos fsico-qumicos y biolgicos de cada reactivo a utilizar en la
prctica para prevenir cualquier accidente.
No use nunca una sustancia sin estar seguro que es la indicada en la prctica, evite
accidentes.
Los materiales slidos inservibles como fsforos, papel y desechos deben
depositarse en un recipiente adecuado.
Depositar los residuos de reactivos en los respectivos recipientes para su posterior
disposicin.
Al finalizar cada prctica, limpiar su sitio de trabajo y dejarlo en perfecto estado.
1.3.2 NORMAS DE SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO DE ANLISIS

INSTRUMENTAL
Antes de utilizar un reactivo, verificar los datos anotados en la etiqueta, revisar sus
propiedades fsicas, qumicas y toxicolgicas para ser manejadas adecuadamente.
Para manejar sustancias voltiles, inflamables y explosivas se deben llevar a la
campana de extraccin o en su defecto a un lugar ventilado.
No pipetear con la boca ningn lquido.
Para la dilucin de los cidos, aadir lentamente el cido al agua contenida en un
recipiente agitando constantemente y enfriando.
Al calentar tubos de ensayo evitar el contacto de la boca del tubo con alguna parte
de nuestro cuerpo.
Nunca se debe llevar a la boca ningn material ni reactivo.
10
Nunca devuelva al recipiente original una sustancia que se haya sacado del mismo,
pues podra contaminarla.
Si se derrama algn cido sobre la mesa, se debe recoger inmediatamente y lavar la
superficie con agua varias veces.
1.3.3 IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS PELIGROSAS
Para cualquier producto qumico utilizado en el laboratorio se debe tener la informacin

sobre el riesgo inherente a su uso. Esta informacin aparece en las etiquetas o en las fichas
de seguridad, en la que aparecer el nombre de la sustancia o preparado e identificaciones
de peligro. En la ficha de datos de seguridad aparecer informacin precisa, tal como:
La identificacin de la sustancia: El trmino empleado para la identificacin de la

sustancia deber ser idntico al que figure en la etiqueta.
Composicin: La informacin aportada debe permitir a la persona conocer sin

dificultad los peligros que puedan presentar los componentes de la sustancia. No es
necesario indicar la composicin completa (naturaleza de la sustancia y su
concentracin) aunque puede ser til la descripcin general de la sustancia y su
concentracin.
Identificacin de los peligros: Se proporciona la clasificacin de la sustancia. Se

deben indicar clara y brevemente los peligros que representa la sustancia para el
estudiante y el medio ambiente. Se distingue claramente de las sustancias clasificadas
como peligrosas o no peligrosas y se describen los principales efectos adversos tanto
fsico-qumicos como para la salud y el medio ambiente. Algunos peligros dentro del
laboratorio son:
- Riesgo de inflamabilidad: Un riesgo comn dentro de un laboratorio es un

incendio, que puede ocurrir debido a diversos combustibles, comburentes y fuentes
de ignicin que se encuentran en el laboratorio. Si se produce un incendio, se debe
informar inmediatamente a los dems y pedir ayuda. Si el incendio es pequeo se
puede intentar apagarlo utilizando medios apropiados como el extintor, en caso de
no conseguirlo trate de evacuar lo ms rpido posible el lugar.
11
- Riesgo de explosin: Las explosiones pueden ocurrir fcilmente en un laboratorio
si no se conocen las propiedades de las sustancias. Algunos riesgos de explosin se
pueden presentar por: reacciones exotrmicas no controladas en las que se liberen
grandes cantidades de energa, exposicin al fuego de sustancias altamente
inflamables y mal manejo de sustancias incompatibles, entre otras.
Primeros auxilios: Debe especificarse en primer lugar si se precisa asistencia mdica

inmediata. La informacin sobre primeros auxilios debe ser breve y fcil de entender
por parte del afectado, los all presentes y los servicios de emergencia. Deben
describirse brevemente los sntomas y los efectos, adems es importante indicar si se
requiere o es aconsejable consultar a un mdico.
Manipulacin y almacenamiento: Especificar las precauciones necesarias para

garantizar una manipulacin sin peligro, incluyendo recomendaciones sobre medidas de
orden tcnico tales como las de contencin, de ventilacin local y general, las destinadas
a impedir la formacin de aerosoles y polvo, o para prevenir incendios, as como las
medidas de proteccin del medio ambiente. Para el almacenamiento se debe especificar
las condiciones necesarias para un almacenamiento seguro como lugares ventilados y
protegidos contra variables de temperatura, humedad, luz, entre otras.
Propiedades fsicas y qumicas: Para permitir la adopcin de las medidas adecuadas de

control. Proporcionar toda la informacin pertinente sobre la sustancia como:
- Aspecto: Indicar el estado fsico (solido, lquido, gas) y el color de la sustancia tal y
como se suministra. Si el olor es perceptible, describirlo brevemente. Indicar el pH
de la sustancia tal y como se suministra, en caso de solucin acuosa indicar la
concentracin.
- Otros datos: Indicar otros parmetros importantes para la seguridad, tales como la
miscibilidad, conductividad y punto de ebullicin o de fusin, entre otros.
Informacin toxicolgica: Las sustancias o algunos preparados que por algn efecto
como inhalacin, ingestin o penetracin cutnea, puede producir efectos nocivos no
hereditarios en la descendencia, o aumentar la frecuencia de stos, as como afectar de
forma negativa a la funcin o a la capacidad reproductora masculina o femenina, se
consideran como sustancias toxicas. A estas sustancias se les debe prestar total cuidado
con la finalidad de evitar accidentes graves.
12
1.3.4 PRIMEROS AUXILIOS EN EL LABORATORIO
Cuando se trabaja en un laboratorio los estudiantes se encuentran expuestos a diversos

accidentes que pueden afectar su integridad fsica, por tal razn se deben exponer las pautas
que se deben cumplir como parte de prevencin en caso de algn accidente. Los accidentes
ms comunes en los laboratorios son: cortes y heridas, quemaduras o corrosiones,
salpicaduras en los ojos e ingestin de productos qumicos. Los primeros auxilios que se
deben prestar en caso de alguno de los anteriores accidentes se describen a continuacin:
Cortes y heridas: Lavar la parte del cuerpo afectada con agua y jabn. No importa
dejar sangrar algo la herida, pues ello contribuye a evitar la infeccin. Aplicar
despus agua oxigenada y cubrir con gasa esterilizada y algodn. Si persiste la
hemorragia o han quedado restos de objetos extraos acudir inmediatamente a un
centro de salud.
Quemaduras o corrosiones: Por fuego u objetos calientes, no lavar la lesin con

agua, tratarla con disolucin acuosa o pomada especial para quemaduras,
posteriormente cubrir la herida con una venda. Por cidos en la piel, identificar la
zona afectada y aplicar abundante agua. Aplicar crema especial para quemaduras,
posteriormente cubrir la herida con una venda.
Salpicaduras en los ojos: Lavar inmediatamente con agua la zona afectada, aunque
se sienta dolor o irritacin, la persona afectada debe tratar de mantener los ojos
abiertos, de tal modo que el agua penetre debajo de los parpados. Cuando se tenga
al paciente estabilizado buscar atencin medica inmediatamente.
Inhalacin de sustancias qumicas: llevar al paciente al aire fresco

inmediatamente, prestarle atencin mdica tan pronto como sea posible. Al primer
sntoma de dificultad respiratoria, iniciar la respiracin artificial boca a boca. El
oxgeno debe ser administrado solamente por personal entrenado. Continuar la
respiracin artificial boca a boca hasta que el mdico lo aconseje. Tratar de
identificar el humo o vapor causante de la dificultad respiratoria.
Ingestin de sustancias qumicas: Cuando se produce un accidente en el cual se

ingiere una sustancia qumica se debe tener en cuenta las siguientes
recomendaciones antes de llevar al paciente a una entidad promotora de salud:
13
- cidos corrosivos, no inducir jams al vmito, de lo contrario puede ocasionar
lesiones en el tracto digestivo. Administrar lechada de magnesia (xido de
magnesio + agua) en grandes cantidades.
- lcalis corrosivos, no inducir jams al vmito, de lo contrario puede ocasionar

lesiones en el tracto digestivo. Administrar abundantes tragos de disolucin de
cido actico al 1%; administrar grandes cantidades de leche o algunas claras de
huevo batidas en agua.
- Sustancias toxicas, cuando se haya ingerido una sustancia toxica o venenosa,

tratar al paciente con antdoto universal, el cual se prepara con 2 partes de
carbn activado, 1 parte de xido de magnesio y 1 parte de cido tnico. Se
homogeniza totalmente y se guarda en seco. Para administrarlo se disuelven 15
gramos en medio vaso de agua caliente. Si el paciente no mejora, se debe llevar
rpidamente a un centro de salud en el cual se le realice un lavado estomacal.
1.3.5 EL BOTIQUN DE PRIMEROS AUXILIOS
En cada laboratorio se debe contar un botiqun de primeros auxilios, que proporcione

diferentes herramientas que permitan controlar un accidente u otro riesgo. Un botiqun
debe contener materiales de limpieza y algunos productos o preparados qumicos que
permitan la atencin inmediata y adecuada del paciente, algunos de estos son:
MATERIALES PRODUCTOS
Algodn Alcohol antisptico

Gasas esterilizadas Agua destilada
Bandas adhesivas Solucin cido actico al 1 %
Esparadrapo Antdoto universal
Hisopos Pomada de cido tnico
Vendas Crema sulfadiazina de plata.
Cinta adhesiva Lechada de magnesio
Tijeras Bicarbonato de sodio
Pinzas Agua oxigenada
Cinta Microporo Carbn activado en polvo
Cloruro de sodio
14
1.3.6 ORGANIZACIN EN EL LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL
La organizacin en el laboratorio debe estar debidamente respaldada por una serie de

responsabilidades claramente definidas al inicio del semestre. Los deberes que se deben
cumplir dentro del laboratorio de anlisis instrumental son los siguientes:
Preparacin de la prctica: Se debe preparar la prctica acordada antes de

realizarla en el laboratorio, para lo cual se debe conocer la gua, leerla
completamente e identificar los objetivos y el fundamento terico de la prctica, as
como el procedimiento a seguir e identificar si se deben realizar clculos previos.
Puntualidad: La permanencia en el laboratorio es necesaria para reforzar los

conocimientos adquiridos en clase, adems de ser muy limitado el tiempo en el cual
se desarrolla cada prctica, se debe aprovechar al mximo el tiempo y se deben
cumplir con los horarios acordados al inicio de clases con el correspondiente
docente de la asignatura.
Limpieza: Al inicio de cada prctica de laboratorio se debe contar con materiales y

herramientas de imprescindible uso, las cuales deben estar completamente limpias y
libres de interferencias que puedan alterar un resultado. Para preservar las pautas de
higiene se deben cumplir las normas generales y de seguridad en el laboratorio, esta
serie de recomendaciones permiten trabajar de forma segura y confiable.
1.3.7 LA BITCORA O CUADERNO DE LABORATORIO
Durante el desarrollo de las prcticas de laboratorio se obtienen diversos resultados que se

deben reportar al docente de clase, para dichos reportes es fundamental contar con la
utilizacin de una bitcora o cuaderno de laboratorio. En ste se reportan los datos
obtenidos de cada prctica, as como las diferentes conclusiones y ejercicios que se
desglosen del desarrollo de cada tema. Para llevar la bitcora o cuaderno de laboratorio
ordenadamente se deben cumplir algunas normas como:
Es aconsejable el uso de un cuaderno cuadriculado, ya que la cuadrcula facilita la

escritura y lectura de tablas de datos, grficas y diagramas de flujo.
Se debe utilizar letra legible y clara, que le permita al docente la evaluacin.
Todos los resultados obtenidos de cada prctica se deben consignar en la bitcora.
15
En la bitcora no se debe borrar; los posibles errores deben tacharse por medio de
una raya la cual debe ir encima de lo que se desea eliminar.
Las operaciones correspondientes a los clculos deben indicarse mediante un solo
ejemplo, sin incluir detalles aritmticos innecesarios
Una buena bitcora de laboratorio debe contener una descripcin completa y
autentica del trabajo realizado, incluyendo resultados positivos o negativos, el
experimento deber contener la fecha de realizacin, el nombre de la prctica, las
conclusiones obtenidas y las preguntas propuestas.
Las pginas de la bitcora o cuaderno de laboratorio debern estar enumeradas y
bajo ningn contexto se deben arrancar hojas.
La bitcora o cuaderno de laboratorio debe sin ninguna excepcin llevarse a cada
prctica de laboratorio.
1.3.8 EL INFORME DE LABORATORIO
Al finalizar cada prctica de laboratorio, el estudiante deber presentar ante su docente un

informe correspondiente a la prctica realizada, en el cual plasme los resultados y
conclusiones obtenidas, adems de ser un escrito serio, claro y que precise el contenido de
la prctica. El informe de laboratorio se debe conformar de la siguiente manera:
Ttulo de la prctica: En l se coloca el nombre completo de la prctica realizada.
Integrantes de grupo: En este apartado se deben plasmar los nombres completos y

apellidos de los diferentes integrantes que conforman el grupo de trabajo.
Objetivos: En este apartado se describen los objetivos que se buscan con la

realizacin de la prctica.
Marco terico: En este apartado se debe realizar una breve resea sobre los
fundamentos de la prctica realizada.
Procedimiento: En este apartado se debe plasmar un diagrama de flujo, que

permita conocer los pasos que se deben realizar para el desarrollo de la prctica.
Los anteriores tems deben ser incluidos en el pre-informe de laboratorio, el cual

deber estar consignado en la bitcora de trabajo al inicio de la prctica.
16
Recoleccin de datos y resultados: En este apartado se deben plasmar todos los
datos obtenidos con el desarrollo de la prctica. Los datos pueden representarse por
medio de tablas, diagramas de flujo, ejercicios, grficas, entre otros, que permitan
desglosar de buena manera el contenido temtico de cada prctica.
Anlisis de resultados: En este apartado se discuten y analizan de manera detallada

cada una de las observaciones y resultados obtenidos, con la finalidad de
comprender claramente cada una de las actividades desarrolladas en el trascurso de
la prctica.
Conclusiones: En este apartado se deben estructurar las conclusiones de cada

prctica, las cuales debern ser acordes con los objetivos, es decir en qu medida se
cumplen los objetivos propuestos.
Bibliografa: En este apartado se deben relacionar los medios de consulta utilizados

para la elaboracin del informe es decir textos, revistas cientficas, monografas,
direcciones electrnicas (internet), entre otras fuentes de informacin, que permitan
soportar el anlisis de resultados y las conclusiones aportadas por el estudiante.
1.4 PROCEDIMIENTO
Teniendo en cuenta el fundamento de la prctica, socializar en grupo cada uno de los

aspectos all contenidos. Discutir y pactar con el docente, las normas y el plan de trabajo
que se utilizar para comprender la asignatura anlisis instrumental y laboratorio.
1.5 CUESTIONARIO
1. Antes de manipular una sustancia qumica Qu se debe conocer de ella?
2. Qu se entiende por ficha de seguridad de una sustancia qumica?
3. Teniendo en cuenta la importancia de las fichas de seguridad en las sustancias

qumicas, estructurar la ficha de seguridad para el Etanol.
4. Qu se entiende por emtico, antdoto y cmo se debe preparar el antdoto

universal?
17
5. Cmo se deben almacenar las distintas sustancias qumicas segn sus propiedades
y riesgos fsico-qumicos y biolgicos?
1.6 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
MENCIAS Rodrguez E., MAYERO Franco, L. M., Manual de Toxicologa

Bsica. Ediciones Daz de Santos S.A, Espaa, 1a edicin, 2000.
VALCARCEL, M., ROS, A., La Calidad en los Laboratorios Analticos. 1a ed.

Editorial Revert, S.A., Barcelona, 2002.
VERDE Calvo J., ESCANILLA Hurtado M., REYES Dorantes A., y MALPICA
Snchez F. Manual de Prcticas de Qumica Analtica ; Universidad Autnoma
Metropolitana, Iztapalapa, 1a edicin, Mxico D.F, 1999.
Servicio de Prevencin de Riesgos Laborales del CSIC en Sevilla, Ministerio de

Educacin y Ciencias. Manual de Buenas Prcticas de Laboratorio. Consejo
Superior de Investigaciones Cientficas. Sevilla, 2007.
18
PRCTICA N 2
TRATAMIENTO ESTADSTICO DE DATOS
2.1 OBJETIVOS
Reconocer la importancia del tratamiento estadstico de los datos obtenidos durante

la experimentacin qumica mediante una prctica sencilla de valoracin de
soluciones.
Adquirir destrezas en el manejo de errores sistemticos y aleatorios durante la
estandarizacin de una solucin de NaOH.
Aplicar la desviacin estndar, varianza y el coeficiente de variacin en una serie de
datos para conocer la precisin del mtodo utilizado.
2.2 MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES REACTIVOS
3 Matraces Erlenmeyer de 250 mL Solucin de hidrxido de sodio

Probeta de 100 mL (NaOH)
Bureta de 50,00 mL Biftalato de potasio (KHP)
Agua destilada
1 Vaso de precipitado de 50 mL
Balanza analtica
Esptula, varilla de vidrio
Frasco lavador
Calculadora
2.3 FUNDAMENTOS TERICOS
Las valoraciones o titulaciones qumicas son todos aquellos mtodos de anlisis

cuantitativo en los cuales la sustancia a determinar se estudia en forma indirecta, por medio
de la medicin del volumen de una solucin apropiada, de concentracin conocida, que
reacciona completamente con la sustancia analizada o analito.
19
Las medidas experimentales estn sujetas a errores o incertidumbres en sus valores, debido
a factores como las imperfecciones del instrumento de medida o a las limitaciones de
nuestros sentidos en el caso de que ellos sean los que registren la informacin, entre otros.
El valor de las magnitudes fsicas se obtienen experimentalmente efectuando una medida;
est puede ser directa o indirecta, donde se pueden generar imprecisiones inevitables.
El error es un factor inevitable en cualquier proceso de medida; nada puede ser medido con
toda precisin. Este hecho es tan relevante, al punto que un resultado experimental sin una
estimacin del error no tienen ningn significado prctico, ya que desconocer el error
significa desconocer el grado de confiabilidad de un resultado. El error experimental est
determinado por la precisin y exactitud de las medidas. La relacin entre precisin y
exactitud se relaciona en los errores sistemticos y errores aleatorios.
Errores aleatorios o indeterminados: Son errores que causan la dispersin de los

resultados de una medida experimental en una serie de rplicas. Si las medidas son
altamente reproducibles o si por el contrario, resultaron muy dispersas, significa que
los errores aleatorios fueron pequeos o grandes, respectivamente. Generalmente
los errores aleatorios son de pequea magnitud, y dan origen a desviaciones
positivas y negativas, las cuales fluctan alrededor del valor medio. Siempre estn
presentes y no pueden ser corregidas, por lo tanto son los principales determinantes
del error experimental.
Error sistemtico: Los errores sistemticos son demasiado grandes y no siempre

estn presentes, puesto que se pueden corregir si se detecta la fuente que los origina.
El error sistemtico es reproducible de una medicin a otra a lo largo de un
experimento, ocasionando que los resultados de una serie de medidas sean errneos
en una misma direccin, esto significa que todos los datos estn por encima, o por
debajo del valor verdadero o terico. Existen tres tipos de errores sistemticos:
- Errores Instrumentales: Estn relacionados con alguna perturbacin o

alteracin en el correcto funcionamiento de los instrumentos de medida, estos
errores se corrigen mediante la calibracin de los instrumentos de medida.
- Errores Personales: Se presentan como consecuencia de las limitaciones

propias del analista, estos errores se logran corregir mediante el cuidado y
autodisciplina en el trabajo por parte del analista.
20
- Errores de Mtodo: Ocurren cuando se presentan condiciones experimentales
inadecuadas o inesperadas (inestabilidad de reactivos, interferencias qumicas,
perdidas por volatilidad, entre otros), son difciles de detectar y corregir.
Figura 1. Representacin de los errores sistemticos y aleatorios.
Para establecer el tipo de error en los anlisis experimentales se dispone de algunos

parmetros estadsticos importantes entre los cuales se encuentran las medidas de
posicin, parmetro estadstico que demuestra la tendencia que tiene un conjunto de
medidas repetidas de agruparse alrededor de un punto definido; esta caracterstica permite
seleccionar un valor representativo que describe o resume todo el conjunto de datos. Las
medidas de variabilidad o dispersin, describen el grado en que los valores de una serie
de medidas repetidas varan o se diferencian entre s. Los parmetros estadsticos ms
utilizados en los anlisis experimentales son: la media aritmtica o promedio, la desviacin
estndar, la varianza y el coeficiente de variacin.
La Media Aritmtica: Tambin conocida como promedio, o simplemente media,

se define como la suma de todos los valores medidos (Xi) dividido entre el nmero
de determinaciones realizadas (n). Est definicin cuyo resultado se expresa en las
mismas unidades en que se hicieron las mediciones, es la ms utilizada para
establecer la centralidad de una serie de datos.
La Desviacin Estndar: Evala la precisin en trminos del grado de proximidad

de los datos (Xi) al valor de la media (X). El clculo de la desviacin estndar tiene
una pequea variacin de acuerdo con el nmero de determinaciones (n).
21
Si el nmero de medidas es grande, n 30, se calcula la desviacin estndar de la
poblacin y se representa por la letra griega sigma (), y viene dada por la
expresin:
Por otro lado, cuando el nmero de medidas es pequeo, como normalmente ocurre
en las prcticas de laboratorio, se determina la desviacin estndar de la muestra,
(S), se define como:
La Varianza: Es el promedio aritmtico del cuadrado de la diferencia de los datos

observados (Xi) y la media (X). En otras palabras, la varianza equivale al cuadrado
de la desviacin estndar, S = s2
Coeficiente de Variacin: Tambin conocida como desviacin estndar relativa, es

una medida de la variabilidad relativa que expresa la magnitud de la desviacin
estndar como un porcentaje de la media. Se utiliza para estandarizar la
variabilidad de dos o ms conjuntos de datos obtenidos en escalas de medicin
diferentes, o que tienen media muy diferente, y as poderlos comparar.
22
2.4 PROCEDIMIENTO
2.4.1 Preparacin de las Soluciones:
a) Biftalato de potasio (KHP estndar primario): Pesar en la balanza analtica una

cantidad exacta alrededor de 0,2500 g de KHP y disolver en 25 mL de agua destilada.
Repetir el procedimiento para preparar 10 soluciones de KHP.
b) Solucin de hidrxido de sodio (NaOH 1,00 M): Esta solucin se entregar al inicio de
la prctica por el asistente de laboratorio, la concentracin real de la solucin se
determinar por medio de la valoracin qumica.
2.4.2 Determinacin:
Pesar la muestra de KHP en la balanza analtica y transferirla cuantitativamente a un

Erlenmeyer de 250 mL, disolver en 25 mL de agua destilada, agitando hasta disolucin
completa y adicionar 3 gotas de indicador de fenolftalena.
Figura 2. Montaje utilizado para realizar una valoracin o titulacin qumica.
Preparar el montaje para realizar la valoracin

qumica. Lavar con abundante agua la bureta y
purgarla con la solucin de NaOH. Llenar la
bureta hasta el aforo con la solucin de NaOH.
Colocar el Erlenmeyer con la solucin de

(KHP), debajo de la bureta y abrir la llave,
aadir lentamente la solucin de NaOH hasta
que la solucin trate de tornarse rosada (cuando
se encuentra en el punto de equivalencia);
cerrar la llave y luego adicionar
cuidadosamente gota a gota la solucin de
NaOH. El color rosado claro persiste ms
tiempo cuando se est cerca del punto final de
la valoracin.
23
Valorar las diez soluciones de KHP y registrar el volumen de NaOH (consumido en la
valoracin) en la Tabla 1:
Tabla 1. Resultados obtenidos de la titulacin del Biftalato de potasio (KHP).
Masa KHP (gramos) V Consumido NaOH (mL) Concentracin NaOH (mol/L)
Calcular la concentracin de NaOH en cada muestra e identificar la media aritmtica,

desviacin estndar, varianza y coeficiente de variacin de los datos obtenidos. Nota:
Recolectar los datos obtenidos por los diferentes grupos de trabajo, para realizar el tratamiento
estadstico.
2.5 CUESTIONARIO
1. Calcular la media aritmtica, desviacin estndar, varianza, y coeficiente de

variacin, de los datos reportados tras la valoracin del NaOH.
2. Qu opinin le genera el tratamiento estadstico de datos en un anlisis qumico?
3. Qu tipos de errores afectan la precisin de un mtodo instrumental?
4. Se realizaron 14 determinaciones de la concentracin del ion nitrato (g/mL) en una

muestra de agua. Calcular la media aritmtica, desviacin estndar, varianza y
coeficiente de variacin.
Muestra Ion Nitrato (g/mL) Muestra Ion Nitrato (g/mL)
1 0,5114 8 0,4921
2 0,4956 9 0,5134
3 0,4834 10 0,5265
4 0,5056 11 0,5189
5 0,4702 12 0,4856
6 0,5113 13 0,5345
7 0,5234 14 0,4934
24
5. Cules son los indicadores utilizados para determinar el punto de equivalencia?
SKOOG Douglas A., WEST D. M., HOLLER James, CROUCH Stanley R.

Fundamentos de Qumica Analtica. 8a ed. Editorial Revert, 1997.
MILLER J. C., MILLER J. N. Estadstica para Qumica Analtica. 2 ed.

Addison-Wesley Iberoamericana S.A., 1993.
BLANCO Tirado Cristian, VILLABONA Estupin Santiago. Manual,

Introduccin a las Prcticas de Laboratorio del Programa de Pregrado de Qumica.
Universidad Industrial de Santander (UIS).
HARRIS Daniel C., Anlisis Qumico Cuantitativo. Captulo 7, Valoraciones

Editorial Revert, S. A., Barcelona Espaa, 2007.
CABRERA Riao Nstor. Fundamentos de qumica analtica bsica, Anlisis

Cuantitativo. Captulo 7, Volumetra. 2a ed. Universidad de Caldas, 2007.
25
PRCTICA N 3
DETERMINACIN POTENCIOMTRICA DE LA CIDEZ DEL VINAGRE
3.1 OBJETIVOS
Identificar los componentes del equipo utilizado para registrar una valoracin
potenciomtrica cido-base.
Adquirir destreza en la calibracin del medidor de pH.
Conocer la importancia de los indicadores qumicos utilizados en las valoraciones
cido-base.
Determinar la acidez total de una solucin de cido actico (vinagre) mediante la
deteccin potenciomtrica del punto final.
Elaborar las grficas de los resultados potenciomtricos, para la deteccin del punto
final.
Bureta de 50,00 mL Hidrxido de sodio (NaOH)

Pipeta graduada de 1, 5, 10 mL cido actico (vinagre)
Pipeta aforada de 50,00 mL Biftalato de potasio
3 Matraces Erlenmeyer de 250 mL Fenolftalena
Baln aforado de 100,0 mL Solucin Buffer de pH 7
Baln aforado de 250,0 mL Solucin Buffer de pH 4
Vasos de precipitado de 100, 250, Agua destilada
500 mL
Esptula
Agitador de vidrio
Soporte para bureta con pinzas
Medidor de pH
26
Los mtodos volumtricos se basan en el hecho de que la concentracin del reactivo

valorante debe ser conocida dentro del grado de precisin requerido. El problema crtico en
una valoracin potenciomtrica es el de reconocer el punto en el cual las cantidades de
especies reactantes se encuentran presentes en cantidades equivalentes, el punto de
equivalencia. La curva de valoracin puede seguirse punto por punto, proyectando valores
sucesivos de pH contra el volumen de valorante aadido. Las adiciones de valorante deben
ser cantidades muy pequeas, exactamente medidas, a travs del margen de pH. En la
mayor parte del margen de la valoracin, el pH vara gradualmente, pero cerca del punto de
equivalencia el pH sufre una rpida variacin. El problema, en general, es el de detectar
este agudo cambio en el pH que tiene lugar en las proximidades del punto de equivalencia.
En las valoraciones potenciomtricas de un cido dbil - base fuerte, se pueden considerar

cuatro etapas, como se puede observar en la figura 3, la cual representa el cambio del pH de
una disolucin de cido actico valorada con NaOH:
En el punto inicial hay una disolucin de un cido dbil, cuyo pH se puede calcular
a travs de la ecuacin de su constante de equilibrio (Ka). En la grfica corresponde
a la ordenada en el origen.
Entre el punto inicial y el punto de equivalencia, la disolucin valorada contiene el

cido dbil y la sal de su base conjugada, que se va formando al aadir la base
fuerte. Por tanto, es una disolucin reguladora, cuyo pH puede calcularse mediante
la ecuacin de Hendersson y Hasselbach, comprobndose que se mantiene
prcticamente constante. Corresponde aproximadamente al tramo comprendido
entre el origen y el pH de 6,00.
En el punto de equivalencia todo el cido se ha neutralizado, encontrndose como la

sal de su base conjugada. En consecuencia, el pH ser bsico, y la eleccin del
indicador est condicionado a que el pH final, se encuentre en el rango del cambio
de cada indicador. En la grfica corresponde al punto de inflexin.
Una vez que se haya alcanzado el punto de equivalencia, si se sigue aadiendo la

base fuerte, el pH se har ms bsico con rapidez. Corresponde al tramo final de la
grfica.
27
Figura 3. Valoracin potenciomtrica de una solucin de cido actico vs NaOH.
La cantidad total de cidos presentes en una muestra de vinagre (expresada como gramos
de cido actico por 100 mL de vinagre), puede determinarse fcilmente por valoracin con
una disolucin de NaOH previamente estandarizada, el NaOH reacciona con el cido
actico del vinagre mediante la siguiente reaccin:
CH3COOH + NaOH CH3COONa + H2O
Puesto que la estequiometria de la reaccin es (1:1), en el punto de equivalencia se

cumplir que:
N de moles de cido = N de moles de base
McidoVcido = MbaseVbase
En el punto de equivalencia de esta valoracin el pH de la disolucin ser bsico (debido a

la presencia del ion acetato) y por tanto, para detectar el punto final de esta valoracin hay
que elegir un indicador que cambie de color al pH adecuado. En este caso, se utiliza
indicador de fenolftalena, que en soluciones cidas es incolora, mientras que en medio
bsico toma una coloracin rosa.
La valoracin tambin puede realizarse por potenciometra, con ayuda de un medidor de

pH. En este caso, el punto de equivalencia corresponde al momento en el cual se produce
la variacin ms rpida del pH. La mejor forma de determinar el punto de equivalencia es
calcular la primera y segunda derivada de la curva de valoracin, que mide la velocidad de
cambio del pH, y que presentar un mximo en el punto de equivalencia, cuyas grficas se
pueden observar en la figura 4. As puede determinarse con exactitud el punto de
equivalencia, y por lo tanto la concentracin de la solucin de cido actico.
28
Figura 4. Grficas representativas de la determinacin potenciomtrica de una solucin
Mtodo directo: consiste en

graficar los datos de potencial en
funcin del volumen de reactivo.
El punto de inflexin en la parte
ascendente de la curva se estima
visualmente y se toma como
punto final.
Mtodo de la primera derivada:

implica calcular el cambio de potencial
por unidad de volumen de valorante
(E/V). El grfico de estos datos en
funcin del volumen promedio V
produce una curva con un mximo que
corresponde al punto de inflexin. Si la
curva es simtrica, el punto mximo de la
pendiente coincide con el punto de
equivalencia. Las curvas asimtricas dan
un pequeo error de titulacin si el punto
mximo se toma como el final. Estas
curvas son comunes cuando el nmero de
electrones transferidos es diferente en las
semi-reacciones del analito y valorante.
Mtodo de la segunda derivada: En

este caso se grafica 2E/2 V, en la figura
puede verse que la segunda derivada de
los datos cambia de signo en el punto de
inflexin. Este cambio de signo es
tomado en algunos casos como punto
final. El punto final de la valoracin se
toma en el punto de interseccin de la
segunda derivada con cero. Este punto
puede ser ubicado con mucha precisin.
29
3.4 PROCEDIMIENTO
3.4.1 Preparacin de la Solucin de NaOH :
Pesar en un vaso de precipitado la cantidad de NaOH necesaria para preparar 250,0 mL, de
una disolucin 0,1000 M. Pesar el NaOH en la balanza analtica y aadir un poco de agua
destilada, agitar vigorosamente con la varilla hasta su completa disolucin. Transferir el
contenido del vaso de precipitado a un baln de 250,0 mL y llevar hasta aforo con agua
destilada. Nota: En caso de preparar la solucin con anterioridad a la prctica, se recomienda
envasar la solucin en un recipiente de plstico, para as evitar la reaccin del NaOH con el
recipiente de vidrio.
3.4.2 Estandarizacin de la solucin de Hidrxido de sodio (NaOH):
Desecar una cantidad de biftalato de potasio (patrn primario) durante 2 horas a 110 C, y
dejar reposar por 15 minutos en el desecador. Pesar en la balanza analtica alrededor de
0,2500 g de KHP (anotando el valor de la pesada con cuatro cifras decimales).
Posteriormente disolver en 25 mL de agua destilada, agitar vigorosamente durante unos
minutos y transferir la solucin a un Erlenmeyer de 250 mL, adicionando 3 gotas de indicador
de fenolftalena. Preparar tres soluciones de biftalato y estandarizar la solucin de NaOH,
reportando el volumen de base consumida en la estandarizacin. Calcular la concentracin del
NaOH.
3.4.3 Calibracin del medidor de pH:
Para la calibracin del equipo se realizan los siguientes pasos:
Encender el equipo.
Lavar los electrodos con agua destilada y secarlos.
Colocar debajo de los electrodos en un vaso de precipitado la solucin buffer de pH
7,00.
Introducir los electrodos en la solucin.
Verificar que el botn de temperatura del equipo se encuentre a 25 C.
Colocar el medidor de pH en la posicin de leer [pH].
Calibrar el pH al valor de 7,00.
Repetir el mismo procedimiento con la solucin buffer de pH 4,00
Sacar los electrodos del vaso, y fijarlos en una posicin que permita quitar fcilmente
el vaso con la solucin buffer.
30
3.4.4 Determinacin:
Tomar una alcuota de 50,00 mL de la muestra problema (vinagre), en un vaso de precipitado

de 500 mL y aadir 2 o 3 gotas de indicador de fenolftalena (no es necesario, solo se adiciona
para ir viendo los cambios), luego se coloca la solucin sobre el agitador magntico. Instalar
una bureta de tal manera que se pueda agregar la solucin de NaOH sin que se produzcan
salpicaduras; introducir los electrodos del medidor de pH en la solucin que se va a valorar,
luego procedemos a colocar en marcha el motor del agitador, colocar el botn del equipo en la
posicin para leer pH; Leer y anotar el pH inicial.
Medir y anotar el pH despus de cada adicin de NaOH 0,1 M. Al principio, agregar

volmenes grandes de esta solucin (de 1 a 5,00 mL), no agregar ms reactivo hasta que el
pH se mantenga constante durante unos 30 segundos. En ocasiones el motor del agitador da
lugar a lecturas errneas de pH, es aconsejable detener el motor durante la toma de cada
lectura. Disminuir el volumen de NaOH que se agrega a la muestra, segn vaya aumentando
el valor de pH/mL, que se calcula para cada adicin. En la proximidad del punto de
equivalencia, agregar NaOH en incrementos de 0,1 mL. Continuar la valoracin hasta 5 mL
despus del punto de equivalencia, aumentando los volmenes aditivos a medida que el
pH/mL vuelva a disminuir.
3.5 CUESTIONARIO
1. Representar las siguientes graficas de los resultados potenciomtricos:
pH vs. V en mL de NaOH agregado.

pH / V vs. V promedio de NaOH agregado.
pH2 / V2 vs. V en mL de NaOH agregado.
2. Calcular el porcentaje de cido actico [% cido actico (p/v)] de la muestra

problema.
3. Cul es la importancia del cido actico en la Industria Qumica?
4. Cules son los requisitos sanitarios que deben cumplir las fbricas que
comercialicen vinagre para consumo humano?
31

Fundamentos de Qumica Analtica. 8a ed. Editorial Revert, 1997.
HOBART Willard H., MERRITT Lynne L., DEAN John A. Mtodos

Instrumentales de Anlisis. 4a ed. Editorial Continental S.A., 1972.
WALTON Harold F., REYES Jorge. Anlisis Qumico e Instrumental Moderno.

Captulo 1, Potenciometra. El Medidor de pH. 1a ed. Editorial Revert, S.A.,
Espaa, 1983.
Ministerio de la Proteccin social, resolucin N 0775 del 3 de marzo del ao 2008,

por la cual se establece el reglamento tcnico sobre los requisitos sanitarios que
deben cumplir las fbricas que procesen, envasen, transporten, expendan,
almacenen, importen, exporten y comercialicen vinagre para consumo humano.
[Pdf en lnea] disponible en URL: http://www.puntofocal.gov.ar/notific
_otros_miembros/col87a1_t.pdf.
Wikipedia: La Enciclopedia Libre. Artculo, cido actico, composicin y

produccin. [En lnea], Wikipedia Foundation, Inc. ltima modificacin: 17
octubre de 2011, a las 10:13. [citada 20 octubre 2011], disponible en <URL:
http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_ac%C3%A9tico>.
32
PRCTICA N 4
DETERMINACIN DE ALCOHOL ETLICO POR REFRACTOMETRA
4.1 OBJETIVOS
Determinar la concentracin de etanol por refractometra.

Construir la grfica del ndice de refraccin vs concentracin para el sistema de
alcohol-agua.
Cuantificar el alcohol etlico presente en un licor comercial.
Conocer la importancia del etanol en la industria qumica.
Desarrollar habilidades en el manejo del refractmetro.
MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS
Balones aforados de 50,0 mL Alcohol etlico puro

Pipeta aforada de 1,0 mL y 10 mL 20 mL de licor comercial sin color
Pipeta aforada de 20,0 mL Licor incoloro: vodka, aguardiente
Pipeta graduada de 10 mL
Pera de succin
Gotero
Refractmetro
El fenmeno de la refraccin est basado en el cambio de velocidad que experimenta la

radiacin electromagntica al pasar de un medio a otro, como consecuencia de su
interaccin con los tomos y molculas del otro medio. Dicho cambio de velocidad se
manifiesta en una variacin en la direccin de propagacin. La medida relativa de la
variacin entre dos medios tomando uno fijo como referencia se le conoce como ndice de
refraccin (n) y en general esta expresado con respecto al aire.
33
El ndice de refraccin est relacionado con el nmero, la carga y la masa de las partculas
vibrantes de la sustancia a travs de la cual se transmite la radiacin. As, se ha
comprobado que para grupos de compuestos anlogos el ndice de refraccin varia con la
densidad y el peso molecular de la muestra. En consecuencia, el ndice de refraccin, al
igual que el punto de fusin, ebullicin y la densidad, se puede utilizar para la
caracterizacin e identificacin de especies lquidas. En muchos casos, el ndice de
refraccin de las mezclas binarias vara linealmente con la composicin de las mismas,
aunque siempre ser conveniente comprobar esta aditividad mediante la construccin de
curvas de calibracin. Para mezclas ms complejas, es necesario acudir previamente a
separaciones en fracciones simples o binarias, antes de realizar las mediciones.
El instrumento para medir el ndice de refraccin (n), es bsicamente un sistema ptico que
busca medir el ngulo que se ha desviado la radiacin, utilizando para ello dos prismas: uno
fijo de iluminacin sobre el cual se deposita la muestra y uno mvil de refraccin. Los
prismas estn rodeados de una corriente de agua termostatizada, ya que la temperatura es
una de las variables que afecta a la medida. Cuando la radiacin electromagntica atraviesa
un lmite entre dos medios, cambia su velocidad de propagacin. Si la radiacin incidente
no es perpendicular al lmite, tambin cambia su direccin. El cociente entre la velocidad
de propagacin en el espacio libre (vaco) y la velocidad de propagacin dentro de un
medio se llama ndice de refraccin del medio. El principio de funcionamiento de un
refractmetro se basa en la velocidad de la luz que depende del medio en el que viaja. Si
un rayo de luz atraviesa sesgadamente desde un medio haca otro de diferente densidad,
cambia su direccin cuando traspasa la superficie. Este cambio en la direccin se
denomina refraccin; por lo tanto, cuando la luz atraviesa haca un medio ms denso, el haz
se aproximar a la perpendicularidad trazada sobre la superficie divisoria en el punto de
incidencia. Este fenmeno se debe fundamentalmente a que la velocidad de la luz cambia;
Es decir, se hace ms lenta cuanto ms denso sea el medio que traspasa.
Figura 5. Principio de refraccin, incidencia de un haz de luz.
34
Se denomina ngulo de incidencia (i) al ngulo formado entre el rayo en el primer medio y
la perpendicular, mientras que el correspondiente ngulo en el segundo medio se denomina
ngulo de refraccin (r). Existen diversas leyes, que son capaces de determinar el ndice de
refraccin de diversas sustancias, como se mencion anteriormente la velocidad de la luz
depende del medio que atraviesa; la relacin de velocidades de la luz en el vaco y en
cualquier otra sustancia se conoce como ndice de refraccin absoluto. Sin embargo, para
fines prcticos esta relacin se sustituye por:
Dnde:
n =ndice de refraccin a una longitud de onda ( )determinada.

V aire = Velocidad de la luz en el aire
V M = Velocidad de la luz en un medio M.
La ley de Snell plantea tambin que es posible demostrar que el ndice de refraccin podra
determinarse en funcin de la siguiente relacin:
Dnde:
n =ndice de refraccin a una longitud de onda ( )determinada.

(i) aire = ngulo de incidencia de la luz en el aire.
(r) M = ngulo de refraccin de la luz en un medio M.
El refractmetro corresponde al grupo de los que miden el ngulo crtico ( lmite), como
medio para la determinacin del ndice de refraccin. Estando calibrado a 20 C y
utilizando luz blanca para su iluminacin, nos da directamente el ndice de refraccin para
la lnea D del sodio ( =5.893 A).
35
La determinacin del ndice de refraccin (una propiedad fsica fundamental de cualquier
sustancia) se usa, por ejemplo para, conocer la composicin o pureza de una muestra, a
travs de un instrumento llamado refractmetro. Por esto, el uso de los refractmetros ha
cobrado gran inters en el rea de la fabricacin de bebidas alcohlicas y un claro ejemplo
est relacionado a la elaboracin de vinos. La presencia de azucares es uno de los
parmetros fundamentales de la enologa [Arte de producir vino], debido a que esta familia
de compuestos interviene prcticamente en todo el proceso de elaboracin que conduce
desde el cultivo de la uva hasta la produccin del vino, determinando la calidad del
producto final.
4.4 PROCEDIMIENTO
4.4.1 Preparacin de los patrones de alcohol etlico:
A partir de alcohol etlico puro y agua destilada, preparar una serie de soluciones tipo con las
siguientes concentraciones (porcentaje en volumen % V/V): 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80,
90 %. Preparar 50,00 mL de cada solucin en balones aforados de 50,00 mL.
4.4.2 Determinacin:
Agitar cada solucin preparada para homogenizar y con la ayuda del gotero tomar una muestra
para llevar al refractmetro. Determinar el ndice de refraccin de cada solucin y registrar los
valores en una tabla. Realizar la grfica entre el ndice de refraccin vs concentracin de
alcohol etlico (% de etanol).
Medir el ndice de refraccin de la muestra problema (licor preferiblemente incoloro), y con la

ayuda de la grfica determinar la concentracin alcohlica del licor. Nota: Para que el
mtodo sea aplicable a todos los licores debe realizarse una destilacin previa de la
muestra.
36
4.5 CUESTIONARIO
1. Determinar el ndice de refraccin de cada solucin de alcohol etlico y de la

muestra problema.
2. Graficar los valores del ndice de refraccin vs Concentracin de alcohol etlico (%

de etanol). Cul es el porcentaje de etanol presente en el licor?
3. Aparte del ndice de refraccin qu otros parmetros se pueden medir con el

refractmetro?
4. Cul es la importancia de la determinacin del % de alcohol etlico en la Industria

de las bebidas alcohlicas?
5. Cules son las aplicaciones del etanol en la Industria Qumica?
6. Consulta el diagrama de flujo para la obtencin del alcohol etlico?
SKOOG, Douglas A., HOLLER James, NIEMAN T. A. Principios del Anlisis

Instrumental. 5 ed. Editorial McGraw Hill, 2001.
PICKERING William F. Qumica analtica moderna. 2a ed. Editorial Revert

S.A, 1980.
MILLN Sagrario Mara, ESCOFET Jaume, PREZ Elisabeth. ptica

Geomtrica. Captulo 14, 1a ed. Editorial Ariel S.A., 2003.
HAVEN Mary, TETRAULT Gregory, SCHENKEN Jeral. Laboratory

Instrumentation. Fourth Edition, Captulo 5, Refractometry, Canad 1995.
Wikipedia: La Enciclopedia Libre. Artculo Etanol, sntesis y aplicaciones. [En

lnea], Wikipedia Foundation, Inc. ltima modificacin: 10 de noviembre de 2011,
a las 22:37. [citada 29 octubre 2011], disponible en <URL:
http://es.wikipedia.org/wiki/Etanol >.
Diagrama proceso de obtencin de etanol, CENICAA 2008, disponible en <URL:

http://www.cenicana.org/pop_up/fabrica/diagrama_etanol.php
37
PRCTICA N 5
POLARIMETRA
(ROTACIN ESPECFICA DE SUSTANCIAS PTICAMENTE ACTIVAS)
5.1 OBJETIVOS
Identificar los componentes del polarmetro, equipo utilizado para detectar la

rotacin especifica de sustancias pticamente activas.
Adquirir destreza en la calibracin del polarmetro, para la posterior eficacia en la
toma de lecturas.
Determinar el valor de la rotacin especifica de sustancias pticamente activas.
Estudiar el efecto que tienen ciertas sustancias sobre la luz polarizada.
Polarmetro POLAX-2L Soluciones de glucosa al 10 %

Baln aforado de 100,0 mL (g/mL).
Vaso de precipitado de 500 mL Solucin de sacarosa y maltosa
Esptula (g/mL).
Balanza analtica Agua destilada
Papel absorbente
La polarimetra, en su acepcin ms amplia, comprende todas las investigaciones de los

fenmenos pticos en que interviene la luz polarizada. Para los fines de este estudio el
tema se limita a la medida de la rotacin del plano de polarizacin de la luz cuando esta
atraviesa una capa de una sustancia pticamente activa. La estereoqumica, es el estudio de
la estructura tridimensional de las molculas. El descubrimiento de la etereoisomera fue
uno de los hitos ms importantes de la teora estructural de la qumica orgnica.
38
Se podra definir a los estereoisomeros, como aquellos que difieren slo en la orientacin
espacial de sus tomos, mantenindose unidos entre s. Existen dos tipos principales de
isomera: la isomera geomtrica o cis - trans, que se produce cuando la rotacin de un
carbono respecto a otro se encuentra impedida por la presencia de un enlace doble o en
estructuras cclicas, y la isomera ptica. Los ismeros pticos, tienen las mismas
propiedades qumicas y fsicas, excepto en la direccin en que hacen rotar el plano de una
luz polarizada. El valor de la rotacin especfica es el mismo, pero en sentido opuesto;
estos compuestos se llaman enantimeros. Para que un compuesto sea pticamente activo,
sus molculas deben ser quirales (quiros = manos), es decir que una molcula y su imagen
especular no deben ser superponibles, adems tampoco deben tener un elemento de simetra
(plano de simetra). El instrumento utilizado para medir la rotacin especfica de las
sustancias pticamente activas es el polarmetro.
El polarmetro consta bsicamente de dos elementos polarizantes, uno de los cuales es fijo
y el otro gira montado en una escala graduada que permite medir su orientacin respecto al
primero; la luz monocromtica de la lmpara de sodio esta paralela al eje del aparato a
travs de un colimador y es polarizada por un prisma de Ncol. Existe un prisma auxiliar
dispuesto de tal forma que intercepta la mitad del rayo de luz. La radiacin pasa despus a
travs de la muestra contenida en un tubo de vidrio de 20 cm de longitud; posteriormente
atraviesa el otro prisma de Ncol (analizador) y va al ocular.
El primer auxiliar divide el campo en dos porciones semicirculares iguales, la posicin de

equilibrio se alcanza girando la escala; entonces una mitad reduce su intensidad luminosa y
la otra la aumenta hasta que se consigue que las dos mitades tengan la misma intensidad de
luz. Al introducir una sustancia pticamente activa entre los dos prismas de Ncol
(polarizador y analizador) se deshace el equilibrio y es necesario mover la escala para
restablecerlo. El movimiento de la escala nos da una medida directa de la actividad ptica
de la sustancia.
Para eliminar posibles errores, es preferible hacer primero una medida con el tubo lleno de
disolvente (agua, en el caso de disoluciones acuosas). Es preciso asegurarse de que no haya
burbujas de aire en el tubo del polarmetro estas burbujas significaran interferencias en el
paso del haz de luz, y por tal razn una medida errnea. Para obtener medidas exactas es
preciso tener cuidado en llenar el tubo y asegurarse de que no hay filtraciones de luz por
ninguna rendija. Las dos tapas del tubo deben estar cuidadosamente limpias y secas. Antes
de realizar medida alguna deber mantenerse encendida la lmpara de vapor de sodio
durante 10 a 15 minutos para que, una vez caliente, de su luz caracterstica.
39
5.4 PROCEDIMIENTO
5.4.1 Calibracin del Polarmetro POLAX-2L:
Para comenzar a desarrollar la prctica es esencial la calibracin del equipo, debido a la

importancia de los resultados que se desean obtener, para lo cual se procede de la siguiente
manera:
Encender el Polarmetro POLAX-2L, para el cual se enchufa a un toma de corriente de

110 V y se acciona el botn que se encuentra al lado del cable ubicado en la parte
posterior del equipo.
Tomar el tubo polarimtrico de 200 mm el cual es el indicado para los lquidos claros,
llenarlo con agua destilada hasta rebosar y deslizar el lente de vidrio que trae la tapa
del tubo de manera horizontal evitando que queden burbujas de aire dentro del tubo y
finalmente colocar la tapa del tubo polarimtrico.
Abrir la cubierta del polarmetro y colocar el tubo polarimtrico en el porta tubo del
equipo. Cerrar la cubierta del polarmetro.
Descripcin del teclado:

a) La tecla R de color azul indica el primer campo.
b) La tecla L de color azul indica el segundo campo.
c) La tecla de color rojo indica la velocidad para ubicar cualquiera de los dos
campos.
Proceder a buscar los campos a travs de las teclas anteriormente descritas teniendo en
cuenta que la tecla roja debe mantenerse oprimida al mismo tiempo en que se manejan
ya sean la tecla R o L para una mayor velocidad, visualizndolos de la siguiente forma:
Rotacin Derecha (Primer Campo).
Rotacin Izquierda (Segundo Campo).
40
Despus de ubicar el primer y segundo campo se procede a ubicar el tercer campo
devolvindose con una leve rotacin de tal manera que quede ubicado en la mitad de R
yL
Despus de ubicar el tercer campo, oprimir inmediatamente la tecla ZERO.
En la pantalla del polarmetro debe aparecer la lectura 0,00 indicando que el equipo ya
se encuentra calibrado.
Nota: Despus de calibrar el equipo es indispensable retirar el tubo polarimtrico, desocuparlo

y lavarlo con agua destilada para continuar con el anlisis de la muestra.
5.4.2 Determinacin de la rotacin especfica:
Colocar en el tubo polarimtrico una solucin de glucosa al 10 % (g/mL); deslizar el

lente de vidrio que trae la tapa del tubo de manera horizontal evitando que queden
burbujas de aire dentro del tubo y finalmente cerrar el tubo polarimtrico. Nota: La
presencia de burbujas de aire en el tubo polarimtrico ocasionan interferencias.
Abrir la cubierta del polarmetro y colocar el tubo polarimtrico en el porta tubo del
equipo. Cerrar la cubierta del polarmetro.
Ubicar los campos polarimtricos, utilizando las teclas R y L manteniendo la tecla roja
oprimida para una mayor velocidad de ubicacin.
Campo uno Campo dos
Despus de ubicar el primer y segundo campo se procede a ubicar el tercer campo

devolvindose con una leve rotacin. En este campo se identifica si la muestra es
dextrgira o levgira, dependiendo de la tecla que se haya utilizado para ubicar este
campo: si utiliz la tecla R la sustancia es dextrgira, si utiliz la tecla L la sustancia es
levgira.
41
Determinar la rotacin especfica de la solucin de glucosa al 10 %.
Retirar el tubo polarimtrico con la solucin de glucosa y lavar con abundante agua
destilada, purgar el tubo con la prxima muestra que se desea analizar.
Repetir el procedimiento para determinar la rotacin especfica de la solucin de
sacarosa y maltosa (soluciones problema). Nota: Las soluciones problema sern
entregadas por el asistente de laboratorio.
5.4.3 CLCULOS:
5.5 CUESTIONARIO
1. En qu consiste la polarimetra?
2. Qu se entiende por una sustancia pticamente activa?
3. A qu se le llama sustancias dextrgiras y a cules levgiras?
4. Qu es un sacarmetro?
5. Una solucin de 2 g de (+) - gliceraldehido HOCH2-CHOH-CHO en 10 mL de

agua, se coloca en un tubo polarimtrico de 100 mm, con el polarmetro se encontr
una rotacin de (+) 1,74 a 25C. Calcular la rotacin especifica del (+)
gliceraldehido?
42
6. Una solucin de 0,5 gramos de (-) epinefrina disueltos en 10 mL de HCL diluido se
coloc en un tubo polarimtrico de 20 cm. Con el polarmetro, se encontr que la
rotacin era de - 5,0 a 25C. Calcular la rotacin especifica de la epinefrina?
HOBART Willard H., MERRITT Lynne L., DEAN John A. Mtodos

Instrumentales de Anlisis. 4a ed. Editorial Continental S.A., 1972.
PICKERING William F. Qumica analtica moderna. 2a ed. Editorial Revert

S.A, 1980.
ORIA Solano E., PARDO Prez E., ALONSO Toms F. Prcticas de Laboratorio
de Qumica Orgnica. Prctica # 7 Polarimetra, Universidad de Murcia,
Secretariado de publicaciones e intercambio cientfico 1991.
WADE L. G. Qumica Orgnica. 5a ed. Editorial Pearson Prentice Hall.,

Captulo 5, Actividad ptica. Madrid, 2004.
43
PRCTICA N 6
DETERMINACIN DE HIERRO (Fe), POR EL MTODO

COLORIMTRICO DE LA FENANTROLINA
6.1 OBJETIVOS
Conocer los trminos y conceptos sobre la absorcin de radiacin en la regin

visible del espectro electromagntico.
Aplicar la Ley de Beer en el anlisis de muestras de concentracin desconocidas.
Adquirir destrezas en el manejo del espectrofotmetro UV/Visible.
Determinar la cantidad de hierro total presente en una muestra de agua por el
mtodo colorimtrico de la fenantrolina.
7 Balones aforados de 100,0 mL Solucin estndar de hierro 10 ppm

Balones aforados de 50, 250,0 y Solucin acuosa de clorhidrato de
500,0 mL hidroxilamina al 10 % P/V
Probeta de 250 mL
Vaso de precipitado 250 y 500 mL Solucin acuosa de 1,10-
Pipetas aforadas de 5, 10 y 25,0 mL fenantrolina al 0,10 % P/V
Pipeta graduada de 10 mL Solucin acuosa de acetato de sodio
Frasco lavador 1,20 M
Pera de succin
Espectrofotmetro UV/Visible
Cuando un haz de radiacin electromagntica pasa a travs de una muestra (solida, liquida
o gaseosa), ciertas frecuencias pueden eliminarse selectivamente por absorcin. La
absorcin es un proceso en el que la energa electromagntica, se transfiere a los tomos,
iones o molculas que componen la muestra. La absorcin provoca que estas partculas
pasen de su estado normal a la temperatura ambiente (estado fundamental), a uno o ms
estados excitados de energa superior.
44
La espectroscopia de absorcin molecular UV/Visible comprende la absorcin de la
radiacin entre 160 nm a 780 nm (aproximadamente). La espectroscopia de absorcin
molecular se basa en la medida de la transmitancia (T), o de la Absorbancia (A), de
disoluciones que se encuentran en cubetas transparentes que tienen un camino ptico de b
cm. Normalmente la concentracin (C) de un analito absorbente est relacionada
linealmente con la absorbancia.
En solucin, el hierro se encuentra como Fe+3 por lo tanto es reducido al estado ferroso
(Fe+2) con hidroxilamina, en medio cido y luego se trata con 1,10 fenantrolina (C12H8N2)
a pH de 3,2 a 3,3 (mantenido as por el acetato de sodio). Tres molculas de 1,10
fenantrolina acomplejan cada ion ferroso para formar un complejo rojo-naranjado.
Para asegurarse de que todo el hierro presente en la muestra se encuentra en forma de Fe+2
se aade, antes de la formacin del complejo, un agente reductor como es el clorhidrato de
hidroxilamina, el cual reduce el Fe+3 a Fe+2 segn la reaccin:
Fe+3 + 2NH2OH ---------------- Fe+2 + N2O + H+ + H2O
Fe+2 + 3FenH+ ================ Fe (Fen)3+2 + 3H+
La solucin coloreada cumple con la ley de Beer; su intensidad es independiente del pH

desde 3,00 a 9,00; un pH entre 2,90 y 3,50 asegura el rpido desarrollo del color en
presencia de un exceso de fanantrolina y evita la formacin de sales de hierro, por ejemplo,
de fosfatos. El anlisis de hierro por ste mtodo se puede llevar a cabo con un
espectrofotmetro ajustado a 508 nm, que es la longitud de onda mxima a la que absorbe
el complejo coloreado.
45
6.4 PROCEDIMIENTO
a) Solucin estndar de hierro 0,01 mg/mL (10 ppm)
b) Solucin acuosa de clorhidrato de hidroxilamina al 10 % P/V, disolver 5,000 gramos

de H2NOH-HCL en 50,0 mL de agua destilada.
c) Solucin acuosa de 1,10 fenantrolina al 0,10 % P/V, disolver 0,5000 gramos de

monohidrato de 1,10 fenantrolina en 500,0 mL de agua destilada. Calentar
ligeramente si es necesario. Cada mL es suficiente para no ms de 0,90 mg de Fe. No
preparar ms reactivo que el necesario; se oscurece por reposo y debe desecharse.
d) Solucin acuosa de acetato de sodio 1,200 M, disolver 41,50 gramos de

CH3COONa.3H2O en 250,0 mL de agua destilada.
6.4.2 Preparacin de patrones:
Preparar las soluciones patrn para la calibracin de Fe+2, de 0 (blanco), 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5
ppm a partir de la solucin estndar de Fe 10 ppm. Teniendo en cuenta las indicaciones de la
Tabla 2:
Tabla 2. Preparacin de los patrones de Fe+2 para el anlisis.
No. V solucin V solucin V sln. V solucin Vol. Concentracin

Patrn patrn hidroxilamina acetato de 1,10- final final (ppm)
(mL) (mL) sodio (mL) fenantrolina (mL)
(mL)
0 0,0 1,0 10,0 10,0 100,0 0.0
1 5,0 1,0 10,0 10,0 100,0 0.5
2 10,0 1,0 10,0 10,0 100,0 1.0
3 15,0 1,0 10,0 10,0 100,0 1.5
4 20,0 1,0 10,0 10,0 100,0 2.0
5 25,0 1,0 10,0 10,0 100,0 2.5
46
6.4.3 Determinacin:
A cada baln aforado de 100,0 mL se transfiere en su orden el volumen de solucin patrn

de hierro (en el del blanco se adiciona agua destilada) ver tabla 8. Luego la hidroxilamina
(reductor), seguido por el acetato de sodio y finalmente la 1,10 fenantrolina, se deja que
las mezclas reposen durante 15 minutos, luego se aforan con agua destilada y se mezclan
bien.
Para preparar la muestra problema, se transfieren 10 mL del problema (o el volumen que

sea necesario para que la muestra est en el intervalo de concentraciones de la curva de
calibracin) a un baln aforado de 100,0 mL y se trata en la misma forma que los patrones
de calibracin. Nota: Al reportar la concentracin de la muestra problema se tiene que
tener en cuenta el factor de dilucin aplicado.
Cuando se tengan preparadas las muestras se realizan las siguientes mediciones:
Realizar un barrido espectral entre 400 750 nm sobre una de las soluciones
patrn, para obtener el espectro de absorcin y determinar la longitud de onda ( )de
mxima absorcin ( mxima).
Fijar la mxima en el equipo y cuadrar el cero de absorbancia con el blanco.
Medir la absorbancia de los patrones a la mxima y hacer una curva de calibracin

entre ABS vs concentracin. Verificar la regresin lineal de los datos (r 0,999) y
asegurarse que el intervalo lineal est conformado por cinco patrones.
Medir la absorbancia de la muestra problema a la mxima y verificar que est en el

intervalo lineal de la curva de calibracin. Si no lo est, hacer las diluciones
necesarias y los clculos respectivos.
Determinar la concentracin de hierro en la muestra problema y reportarla en ppm.
Nota: Cada vez que se va a hacer una medicin, la celda que contiene la muestra se debe
purgar con cada solucin, con al menos tres porciones de la solucin que va a contener.
47
6.5 CUESTIONARIO
1. Realizar la curva de calibracin entre ABS vs concentracin de los patrones.
2. Determinar el valor de la absortividad y la absortividad molar de la muestra

problema.
3. Una solucin cuya concentracin es 5,0x10-4 M en un analito X, se introduce en una

celda de muestra cuya longitud de paso es de 1 cm, cuando se mide a una =490
nm, la absorbancia fue de A= 0,388, Cul es la absortividad molar. Si la misma
solucin se mide a =520 nm y su absorbancia es de A= 0,495. Cul es la
absortividad molar ()?

RUBINSON Kenneth A., RUBINSON Judith F. Anlisis Instrumental. Editorial

Prentice Hall, 2000.
PREZ Pino F., PREZ D. Bendito. Anlisis de elementos-traza por

espectrofotometra de absorcin molecular UV/Visible. Captulo 6
Espectrofotometra UV/Visible, Instrumentacin, publicaciones de la Universidad
de Sevilla.
SMITH Brian C. Quantitative Spectroscopy, Theory and practice. Unit 1,

Fundamentals of Molecular Absorption Spectroscopy. Elsevier Science USA
Academic Press, 2002.
KENKEL John, Analytical Chemistry for Technicians, Visible and Ultraviolet

Spectroscopy. Lewis Publishers US, 1994.
Artculo en Pdf. Basic UV-Vis Theory, Concepts and Applications, Thermo

Spectronic. [En lnea], Citada (25 junio de 2012), disponible en <URL:
http://www.plant.uoguelph.ca/research/homepages/raizada/Equipment/RaizadaWeb
%20Equipment%20PDFs/5B.%20UV%20VIS%20theory%20ThermoSpectric.pdf
48
PRCTICA N 7
DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE FSFORO

DISPONIBLE EN SUELOS AGRCOLAS
7.1 OBJETIVOS
Diferenciar los requerimientos esenciales de los diferentes tipos de suelos agrcolas

(monte, csped y jardn).
Comprender los rangos de pH estipulados, para cada tipo de suelo.
Identificar que elementos qumicos (nutrientes), son importantes para el crecimiento
vegetal en los suelos agrcolas.
Determinar la cantidad de fsforo disponible en una muestra de suelo agrcola por el
mtodo espectrofotomtrico.
6 Balones aforados de 50,0 mL HCL 1,000 M

2 Balones aforados de 100,0 mL Solucin estndar de fosforo (50
Baln aforado de 1 litro, ppm)
varilla agitadora Solucin extractora
Vaso de precipitado de 100 mL Solucin coloreadora
Pipetas aforadas de 1, 5, 25,0 mL
Pipeta graduada de 10, 25 mL
Frasco lavador, pera de succin
Medidor de pH
Espectrofotmetro UV/Visible.
El suelo es un sistema muy complejo que sirve como soporte de las plantas, adems de
servir de despensa de agua y de otros elementos necesarios para el desarrollo de los
vegetales.
49
El suelo es conocido como un ente vivo en el que habitan gran cantidad de seres vivos
como pequeos animales, insectos, microrganismos (hongos y bacterias) que influyen en la
vida y desarrollo de las plantas de una forma u otra. Las propiedades fsicas de un suelo
dependen fundamentalmente de su textura y de su estructura. La importancia de estas
propiedades es muy grande, ya que de ellas depende el comportamiento del aire y del agua
en el suelo, y por lo tanto condicionan los fenmenos de aireacin y permeabilidad. Las
propiedades fsicas son ms difciles de corregir que las propiedades qumicas.
La composicin qumica del suelo incluye la medida de (pH) y de los elementos qumicos
presentes en el suelo (nutrientes). Su anlisis es necesario para mejorar la productividad
del cultivo, adems de elegir las plantas ms adecuadas para obtener los mejores
rendimientos de cosecha.
La medicin del pH, permite referenciar el grado de acidez o basicidad que presenta el
suelo y generalmente se expresa por medio de un valor de pH del sistema suelo-agua.
Segn este valor un suelo puede presentar acidez, neutralizacin o alcalinidad, por medio
de estas propiedades se puede condicionar el suelo para el uso agronmico. En los suelos
agrcolas la mayora de las plantas prefieren rangos de pH de 5,5 a 7,5 pero algunas
especies prefieren suelos cidos o alcalinos. Sin embargo, cada planta necesita un rango
especfico de pH, en el que pueda expresar mejor su potencialidad de crecimiento.
El fsforo es un elemento de gran importancia para la planta ya que forma parte en la

composicin de cidos nucleicos, as como las sustancias de reserva en semillas y bulbos.
Contribuyen a la formacin de yemas, races y a la floracin. Una falta de fsforo provoca
un ahogo de la planta, crecimiento lento, una reduccin de la produccin, frutos ms
pequeos y una menor expansin de las races. Por tanto el correcto desarrollo de una
planta o cultivo depender del contenido nutricional de este elemento en el suelo.
Para determinar el fsforo disponible se utiliza la solucin extractora, la cual remueve las
distintas formas de fsforo presentes en la muestra (fosfatos de calcio, hierro y aluminio).
Los iones fosfatos al reaccionar con una solucin acida que contiene iones molibdato y
antimonio forman una molcula compleja acida de fosfato-molibdato-antimonio, que en
presencia de cido ascrbico se reduce y desarrolla un color azul de intensidad proporcional
a la concentracin de iones fosfato.
50
7.4 PROCEDIMIENTO
7.4.1 Preparacin de soluciones
a) Solucin estndar de fsforo 0,05 mg/mL (50 ppm)
b) Solucin extractora: Disolver en 100,0 mL de agua destilada 1,111 gramos de

fluoruro de amonio, aadir 25,0 mL de HCL 1,000 M previamente estandarizado,
transferir la solucin a un baln de 1 litro y llevar hasta aforo con agua destilada
mezclar la solucin y etiquetar bien. El pH de la solucin debe ser de 2,6. Los
ajustes de pH se realizan utilizando HCL.
c) Solucin coloreadora: Agregar 2,50 mL de la solucin A y llevar a un baln de

100,0 mL con 25,0 mL de agua destilada. Posteriormente aadir 1,0 mL de la
solucin B y llevar hasta aforo con agua destilada.
- Solucin A: Pesar 0,430 gramos de molibdato de amonio y agregar en un baln

de 100,0 mL, con 50,0 mL de agua destilada, posteriormente se agreg 0,010
gramos de tartrato de antimonio y potasio, y adicionar 4,80 mL de cido
sulfrico, aforar con agua destilada.
- Solucin B: Pesar 0,100 gramos de cido ascrbico en 50,0 mL de agua

destilada y adicionar 25,0 mL de la solucin A, posteriormente se llev hasta
aforo con agua destilada en un baln de 100,0 mL.
7.4.2 Preparacin de la muestra
Tomar una muestra de suelo agrcola (Jardn, Monte o Csped), tamizar la muestra para
eliminar interferencias y dejar reposar por 10 minutos.
7.4.3 Determinacin de pH en Suelos Agrcolas
Para determinar el pH del suelo, se pesan 25,00 gramos de suelo (seco y preparado) en un
vaso de precipitado de 100 mL, luego adicionar 25,0 mL de agua destilada y agitar con la
ayuda de la varilla, aproximadamente cada 15 minutos durante una hora. Para la
calibracin del equipo se realizan los siguientes pasos:
51
Encender el equipo.
Lavar los electrodos con agua destilada y secarlos.
Colocar debajo de los electrodos en un vaso de precipitado la solucin buffer de pH
7,00.
Introducir los electrodos en la solucin.
Verificar que el botn de temperatura del equipo se encuentre a 25 C.
Colocar el medidor de pH en la posicin de leer [pH].
Calibrar el pH al valor de 7,00.
Repetir el mismo procedimiento con la solucin buffer de pH 4,00
Al paso de hora de preparada la solucin (suelo-agua) y de haber calibrado el medidor de

pH, leer el pH de la muestra y reportar los datos para realizar las diferentes conclusiones.
7.4.4 Determinacin de Fsforo Disponible en Suelos Agrcolas
Para determinar el fsforo disponible en suelos agrcolas se utiliza el mtodo de Bray y

Kurtz, la muestra se debe preparar as:
Pesar 1,425 gramos de suelo seco y transferir a un tubo de ensayo.

Adicionar lentamente 10,0 mL de solucin extractora y agitar vigorosamente
durante 1 minuto.
Filtrar la suspensin inmediatamente y recibir el filtrado en un frasco de plstico de
50,0 mL (el frasco de plstico evita interferencias).
Se deja reposar el filtrado por 10 minutos.
Extraer con una micropipeta 1,0 mL del filtrado y transferirlo a un baln aforado de
50,0 mL, Aadir 9,0 mL de solucin coloreadora y llevar hasta aforo con agua
destilada, dejar reposar por 15 minutos. Determinar la absorbancia a la mxima.
7.4.4.1 Medida de la Absorbancia
Preparar los patrones de fsforo a partir de la solucin estndar de 50 ppm, siguiendo las
indicaciones de la Tabla 3:
52
Tabla 3. Preparacin de patrones para el anlisis de fsforo en suelos agrcolas.
N V estndar de P V solucin V solucin Volumen Concentracin

Patrn 50 ppm (mL) extractora coloreadora final (mL) (ppm)
1 0 (blanco) 1,0 mL 9,0 mL 50,0 0
2 5 1,0 mL 9,0 mL 50,0 5
3 10 1,0 mL 9,0 mL 50,0 10
4 15 1,0 mL 9,0 mL 50,0 15
5 20 1,0 mL 9,0 mL 50,0 20
6 25 1,0 mL 9,0 mL 50,0 25
Cuando se tienen preparados los patrones y la muestra de suelo se realizan las siguientes
mediciones:
Realizar un barrido espectral entre 400 750 nm sobre el patrn de 10 ppm, para
obtener el espectro de absorcin y determinar la longitud de onda de mxima
absorcin ( mxima).
Fijar la mxima en el equipo y cuadrar el cero de absorbancia con el blanco.

Introducir la muestra en las dos celdas y oprimir Auto Zero
Medir la absorbancia de los patrones a la mxima y realizar la curva de calibracin

entre ABS vs concentracin. Verificar la regresin lineal de los datos (r 0,999) y
asegurarse que el intervalo lineal est conformado por seis patrones.
Medir la absorbancia de la muestra problema a la mxima y verificar que se

encuentre en el intervalo lineal de la curva de calibracin. Si no lo est, realizar las
diluciones necesarias y los clculos respectivos.
Determinar la concentracin de fsforo disponible en la muestra de suelo aplicando

la siguiente frmula:
53
ppm de P disponible en suelo = CP x VC x VE
AxP
Dnde
CP = Concentracin de P obtenida en la curva de calibracin
VC = Volumen solucin coloreada
VE = Volumen del extracto aadido
A = Alcuota del extracto
P = Peso de la muestra de suelo
7.5 CUESTIONARIO
1. Realizar la curva de calibracin entre absorbancia vs concentracin de P.
2. Determinar la concentracin de fsforo disponible (P) en la muestra de suelo y

reportarla en ppm.
3. Teniendo en cuenta los rangos de pH, Qu se debe hacer cuando se tienen suelos
cidos o suelos bsicos?
4. Cules son las funciones de los principales nutrientes en las plantas y cules son
los sntomas de deficiencia?


LABRADOR Moreno Juana. La Materia Orgnica en los Agrosistemas. 1a ed.

Ediciones Mundi-Prensa. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentacin de
Madrid, 1996.
54
MARN Luisa Mara, ARAGN Pilar, BENITO Gmez Carmen. Manual de
laboratorio. Editorial Universidad Politcnica de Valencia, 2002.
GARCA CANO Adan. Manual de prcticas de la materia de edafologa.

Practica N 9, Determinacin de Fsforo Disponible. Pdf
Artculo en lnea. Soil and Plant Analysis Laboratory Manual, Capitulo 5 (Soil
Chemical Analysis) [En lnea], Citada (3 marzo de 2012), disponible en <URL:
http:// www. icarda.org/publications/lab_manual/read.htm
Artculo en Pdf. Soil Analysis Method 1 (SA 01), Pre-treatment of samples. [En
lnea], Citada (10 marzo de 2012), disponible en <URL: http:// www.icp-
forests.org/pdf/Chapt_3a_2006(2).pdf.
55
PRCTICA N 8
ADITIVIDAD DE ABSORBANCIAS, DETERMINACIN

ESPECTROFOTOMTRICA SIMULTNEA DE CROMO Y MANGANESO
8.1 OBJETIVOS
Conocer los trminos y conceptos sobre la aditividad de absorbancias y la absorcin

de radiacin en la regin visible del espectro electromagntico.
Aplicar la Ley de Beer, en la determinacin de un anlisis multicomponente.
Identificar los picos de mxima absorcin para el Cr y Mn.
Determinar la concentracin de Cr y Mn en una mezcla de sustancias absorbentes.
Balones aforados de 100,0 y 500,0 H2SO4 [concentrado]

mL Solucin de KMnO4 (1 x 10-3 N)
Vaso de precipitado de 250, 500 mL Solucin de K2Cr2O7 (2,5 x 10-3 N)
Pipetas aforadas de 5, 10 y 25,0 mL Solucin de H2SO4 [1:9]
Pipeta graduada de 10 mL Agua destilada
Balanza analtica
Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias
qumicas; al remplazar el ojo humano por otros detectores de radiacin, se puede estudiar la
absorcin de sustancias, no solamente en el rango del espectro visible, sino tambin en el
rango ultravioleta e infrarrojo del espectro electromagntico. La espectrometra de
absorcin molecular consiste en la medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe
n sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la radiacin, y a las mediciones a
una determinada longitud de onda.
56
Las medidas espectromtricas se basan en la ley de Lambert-Beer, que es una de las
ecuaciones que ms se utilizan en los anlisis instrumentales, ya que relaciona la absorcin
de la radiacin con la concentracin de un compuesto en disolucin. La espectroscopia de
absorcin molecular se basa en la medida de la transmitancia (T), o de la Absorbancia (A),
de disoluciones que se encuentran en cubetas transparentes que tienen un camino ptico de
b cm. Normalmente la concentracin (C) de un analito absorbente est relacionada
linealmente con la absorbancia.
Es posible analizar varias especies absorbentes presentes en una muestra sin llevar a cabo
separaciones previas de cada uno de los analitos, aprovechando que cada sustancia posee
caractersticas espectrales diferentes. En el anlisis simultneo o multicomponente se
aplica el principio de aditividad de las absorbancias o propiedad aditiva de la absorbancia:
En la anterior ecuacin, se indica que la absorbancia total medida a una longitud de onda,
es igual a la suma de las absorbancias de los componentes individuales y que el aporte de
cada componente a la absorbancia total es funcin del valor del coeficiente de absortividad
molar de cada especie absorbente (y de la concentracin) para una longitud de onda dada.
Es decir, en un sistema con varias especies absorbentes de la misma concentracin si se
mide la absorbancia a una longitud de onda determinada, la especie que presentara una
mayor contribucin a la absorbancia total ser la que presente mayor valor del coeficiente
de absortividad molar ().
Para una mezcla con componentes absorbentes es posible establecer la concentracin de

ellos si se plantean, mnimo ecuaciones de aditividad para longitudes de onda. Para el
caso de una solucin que contiene dos especies absorbentes a y b, se escogern como
mnimo dos longitudes de onda 1 y 2, para la medida de la absorbancia total de la mezcla y
se plantearan las ecuaciones:
Nota: La seleccin de las longitudes de onda deben hacerse de manera que a una de ellas el
componente (a), absorba claramente ms que el otro, mientras que en la otra longitud de
onda ocurra lo contrario.
57
Cuando se lleva a cabo un anlisis multicomponente o simultneo se deben tener en cuenta
algunas condiciones como:
Los componentes no deben presentar interacciones qumicas entre s ni con el

solvente, es decir, las absorbancias deben ser aditivas si cada especie en la mezcla
se comporta en forma independiente.
Si los espectros de los componentes tienen una gran similitud, el anlisis ser ms
difcil e inexacto.
La seleccin de las longitudes de onda analticas ptimas es el parmetro crtico

para obtener buenos resultados. Generalmente se escogen longitudes de onda donde
un componente presente absorcin alta, mientras el otro componente, a dicha
longitud de onda, presente una absorcin mnima o no presente absorcin.
El anlisis multicomponente o simultneo se puede resolver por medio de la determinacin

de las absortividades molares () de los componentes absorbentes, a las diferentes
longitudes de onda y resolviendo el sistema de ecuaciones podemos identificar las
concentraciones de los componentes absorbentes contenidos en la muestra problema.
8.4 PROCEDIMIENTO
a) Solucin patrn de KMnO4 (1 x 10-3 N): Pesar 0,0032 gramos de KMnO4 en un

vaso de precipitado, disolver con un poco de agua destilada, transferir a un baln de
100,0 mL y aforar con H2SO4 diluido [1:9].
b) Solucin patrn de K2Cr2O7 (2,998 x 10-3 N): Pesar 0,0147 gramos de K2Cr2O7 en
un vaso de precipitado, disolver con un poco de agua destilada, transferir a un baln
de 100,0 mL y aforar con H2SO4 diluido [1:9].
c) Solucin diluida de H2SO4 [1:9]: Transferir 50,0 mL de H2SO4 concentrado a un

baln aforado de 500,0 mL que contiene agua destilada y aforar.
d) Muestra problema: Ser una mezcla de las soluciones a y b, se le entregara a cada

grupo al inicio de la prctica por el docente.
58
8.4.1 Determinacin:
Cuando se tengan las soluciones y la muestra problema ya preparadas se deben realizar las
siguientes mediciones espectrofotomtricas:
Realizar un barrido espectral entre 400 750 nm sobre la muestra de KMnO4,

utilizando como blanco H2SO4 diluido [1:9], para obtener el espectro de absorcin y
determinar la longitud de onda de mxima absorcin ( mxima KMnO4).
Realizar un barrido espectral entre 400 750 nm sobre la muestra de K2Cr2O7,

utilizando como blanco H2SO4 diluido [1:9], para obtener el espectro de absorcin y
determinar la longitud de onda de mxima absorcin ( mxima K2Cr2O7).
Fijar la mxima KMnO4 en el equipo y cuadrar el cero de absorbancia con el

blanco (H2SO4 1:9). Para cuadrar el cero de absorbancia se introduce en las dos
celdas la solucin diluida de H2SO4 y se oprime la opcin Auto Zero.
Medir la absorbancia de los patrones de KMnO4 y K2Cr2O7 a la mxima del

KMnO4 y determinar la absortividades molar () para cada compuesto.
Fijar la mxima K2Cr2O7 en el espectrofotmetro y cuadrar el cero de absorbancia

con el blanco (H2SO4 diluido 1:9).
Medir la absorbancia de los patrones de KMnO4 y K2Cr2O7 a la mxima del

K2Cr2O7 y determinar la absortividades molar () para cada compuesto.
Medir la absorbancia de la muestra problema a las dos longitudes de onda de

mxima absorcin ( mxima KMnO4 y mxima K2Cr2O7).
Determinar la concentracin de Cr y Mn en la muestra problema.
59
8.5 CUESTIONARIO
1. Determinar las absortividades molares (), de los patrones de KMnO4 y K2Cr2O7 a

las longitudes de onda de mxima absorcin.
2. Determinar la concentracin (N), de Cr+3 y Mn+2 en la muestra problema.
3. Se realiz un anlisis de aditividad de absorbancias sobre dos complejos qumicos

que contienen Co y Ni. El anlisis arrojo los siguientes datos:
Muestra Absortividad molar () a 365 nm Absortividad molar () a 700 nm

Co 3529 L/mol.cm 428,9 L/mol.cm
Ni 3228 L/mol.cm 10,2 L/mol.cm
Posteriormente se analizaron dos soluciones a y b, para las cuales se obtuvieron las

siguientes absorbancias a las diferentes longitudes de onda de mxima absorcin:
Solucin Absorbancia a 365 nm Absorbancia a 700 nm

a 0,598 0,039
b 0,902 0,072
Cul es la concentracin de Co y Ni en cada una de las anteriores soluciones?

Nota: para realizar el anlisis se utilizaron cubetas de plstico de paso ptico de 1
cm.
4. Qu interferencias se pueden presentar en el desarrollo del anlisis por aditividad

de absorbancias?


60
ALONSO Sierra I., QUINTANILLA Damin, RUIZ Santiago, ZARCERO Morante
Sonia. Anlisis Instrumental, Captulo 2, Ley de Lambert-Beer, Aplicaciones
Cuantitativas. Editorial Netbiblo, Espaa, 2010.
VZQUEZ Salas Pedro. Laboratorio de Anlisis Instrumental, Prctica N 8

Aditividad de la ley de Beer. Morelia, noviembre de 2008.
DINKO Instruments, Manual de Instrucciones UV- VIS Espectrofotmetro UV

2300 II. Departamento de Qumica, UFPS. DINTER S.A. 1a edicin 2011.
UNAL, Universidad Nacional de Colombia, sede Bogot. Direccin Nacional de

Servicios Acadmicos Virtuales. Contenidos en lnea, Qumica Analtica II,
Determinaciones Simultneas o Anlisis Multicomponente, disponible en <URL:
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2001184/lecciones/Cap13/03_01_01.
htm.
61
PRCTICA N 9
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN UNA BEBIDA

ENERGIZANTE, MTODO DE LA CURVA DE CALIBRACIN
9.1 OBJETIVOS
Conocer la importancia de la absorcin de radiacin en la regin ultravioleta del

espectro electromagntico.
Adquirir destreza en el manejo del espectrofotmetro UV/Visible.
Aplicar el mtodo de la curva de calibracin para determinar la concentracin de
una muestra desconocida.
Determinar la cantidad de cafena en una bebida energizante.
6 Balones aforados de 50,00 mL Solucin acuosa de cafena 100 ppm

2 Balones aforados de 250,0 mL Bebida Energizante (RED BULL,
Baln aforado de 100,0 mL PEAK, entre otra bebida de gusto
Vasos de precipitado de 50 , 100 mL del alumno)
Pipetas aforadas de 1, 5, 10,0 mL
Pipeta graduada de 10, 25 mL
Frasco lavador
Pera de succin, varilla agitadora
La cafena es un alcaloide natural que se encuentra en las hojas, semillas o frutos de ms de

63 especies de plantas en todo el mundo. La mayor fuente de cafena y las ms comunes
son el caf, cacao en grano, las nueces y hojas de t.
62
Ficha tcnica
Cafena: 1,3,7 trimetilxantina
Estado: slido
Densidad: 1,230 g/mL
Masa Molar: 194,19 g/mol
Punto de fusin: 510 K (237 C)
Alrededor del mundo el consumo de productos derivados de estas especies suministra una
alta tasa de cafena, por tal razn se conoce como la droga ms comn consumida por miles
de personas alrededor de todo el mundo. La popularidad de la cafena se deriva
principalmente del hecho que es una sustancia farmacolgicamente activa y estimula
levemente el sistema nervioso central. En general se acepta que hay poco riesgo de dao si
una persona consume menos de 300 mg de cafena al da o dos. Sin embargo, a veces si se
consume cafena por parte de mujeres en estado de embarazo puede ocasionar ansiedad o
estrs, por lo tanto se recomienda reducir el consumo en menos de 200 mg de cafena al
da.
Si bien no hay una reglamentacin clara o requisitos para controlar la cantidad de cafena
en los productos alimenticios, en especial las bebidas energizantes, se debe implementar
tcnicas de anlisis que permitan identificar la cantidad de cafena presente en los
diferentes productos alimenticios. La tcnica analtica ms utilizada por los grandes
laboratorios de todo el mundo para identificar la cantidad de cafena es la cromatografa
liquida o (HPLC), esta tcnica representa para los laboratorios una herramienta confiable,
debido a que se elimina considerablemente los errores representados por interferencias que
pueden afectar el desarrollo de un anlisis, por tal razn esta tcnica instrumental es ms
confiable en comparacin con otros mtodos. El HPLC es un recurso costoso y altamente
tcnico que no se encuentra tpicamente en laboratorios pequeos y de enseanza de las
universidades, por tanto, este problema debe ser solucionado por dichos laboratorios
implementando la utilizacin de otra tcnica de anlisis instrumental.
El mtodo de anlisis alternativo al HPLC para identificar la cantidad de cafena en un

producto alimenticio es por medio de la espectroscopia ultravioleta, por la cual se puede
cuantificar el contenido de cafena principalmente en bebidas gaseosas y bebidas
energizantes. La cafena puede ser extrada por disolventes clorados tales como el
diclorometano y cloroformo, tcnicas comnmente empleadas por diferentes industrias.
Despus de que la cafena es extrada puede ser analizada directamente por disolucin y
medicin de la absorbancia de patrones a la longitud de onda de 270 nm.
63
9.4 PROCEDIMIENTO
a) Solucin acuosa de cafena (100 ppm): Pesar 0,0251 gramos de cafena y adicionarlo
en un vaso de precipitado con 50 mL de agua destilada, agitar vigorosamente hasta
disolucin, posteriormente transferir la solucin a un baln de 250,0 mL y llevar hasta
aforo con agua destilada.
b) Preparacin de la Bebida Energizante: Tomar 50,0 mL de la bebida y transferir a

un vaso de precipitado, agitar consistentemente hasta eliminar las burbujas y dejar
reposar por 15 minutos. Preparar una muestra diluida de la bebida, de modo que la
concentracin de cafena en ella, se encuentre en el intervalo lineal de la curva de
calibracin.
9.4.2 Preparacin de patrones para la curva de calibracin:
Preparar las soluciones patrn de cafena 0, 4, 8, 12, 16, 20 ppm a partir de la solucin acuosa
de 100 ppm (ver Tabla 4).
Tabla 4. Preparacin de los patrones de cafena para realizar la curva de calibracin.
N Patrn V solucin patrn de Volumen final en Concentracin final

cafena 100 ppm (mL) mL (ppm)
1 0 (blanco) 50,0 0
2 2 50,0 4
3 4 50,0 8
4 6 50,0 12
5 8 50,0 16
6 10 50,0 20
64
9.4.3 Determinacin:
Cuando se tengan preparados los patrones de cafena y la muestra problema, realizar las
siguientes mediciones en el espectrofotmetro:
Antes de comenzar las mediciones se debe leer el manual de funcionamiento del

espectrofotmetro, para tener una idea clara de los procedimientos a realizar.
Realizar un barrido espectral entre 200 400 nm sobre el patrn de 8 ppm de

cafena, para obtener el espectro de absorcin y determinar la longitud de onda ()
de mxima absorcin ( mxima).
Fijar la de mxima absorcin en el equipo y cuadrar el cero de absorbancia con el

blanco.
Introducir en la celda el patrn N 1 de cafena y medir la absorbancia a la

mxima, repetir este procedimiento con los dems patrones.
Realizar una curva de calibracin entre ABS vs concentracin de cafena. Verificar

la regresin lineal de los datos (r 0,999) y asegurarse que el intervalo lineal est
conformado por seis patrones.
Medir la absorbancia de la muestra problema (bebida energizante) a la mxima y

verificar que se encuentre en el intervalo lineal de la curva de calibracin. Si no lo
est, realizar las diluciones necesarias y los clculos respectivos.
Determinar la concentracin de cafena en la bebida energizante y reportarla en

ppm.
9.5 CUESTIONARIO:
1. Realizar la curva de calibracin entre ABS vs concentracin de los patrones de cafena.
2. Cul es la concentracin de cafena en la muestra problema (bebida energizante)?
65
3. Se realiz un anlisis de cafena en el espectrofotmetro, donde se prepararon patrones
de 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 ppm de cafena, para las cuales se obtuvieron absorbancias
respectivamente de (ABS: 0 [Blanco]/ 0,234/ 0,276/ 0,312/ 0,346/ 0,396/ 0,432).
Posteriormente se analiz una muestra desconocida de cafena y su absorbancia fue de
0,372. Cul es la concentracin de la muestra desconocida de cafena? Cul es la
absortividad y la absortividad molar de la muestra?
9.6 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

PREEDY Victor R., Caffeine Chemistry, Analysis, Function and Effects, RSC
Publishing, the Royal Society of Chemistry, 2012.
SMITH Brian C., Quantitative Spectroscopy, Theory and practice. Unit 1,

KENKEL John. Analytical Chemistry for Technicians, Visible and Ultraviolet

PASTO Daniel J., JOHNSON Carl R. Determinacin de Estructuras Orgnicas.

Editorial Reverte S.A 1981. Reimpreso Espaa, 2003.
JENWAY, Bibby Scientific, the quantitative determination of caffeine in beverages

and soft drinks using UV wavelength spectroscopy. [En lnea], Citada (14 junio de
2012), disponible en <URL: http://www.jenway.com/adminimages
/A09_010A_Determination_of_Caffeine_in_Beverages_using_UV_Wavelength_Sp
ectroscopy(1).pdf
66
PRCTICA N 10
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN UNA BEBIDA

ENERGIZANTE, MTODO ADICIN DE UN ESTNDAR
10.1 OBJETIVOS
Conocer los trminos y conceptos sobre la adicin de un estndar en muestras de

anlisis.
Aplicar el mtodo de la adicin de un estndar para determinar la concentracin de
una muestra desconocida.
Determinar la cantidad de cafena en una bebida energizante.

Baln aforados de 250,0 mL Bebida Energizante (RED BULL,
Vasos de precipitado de 50 y 100 mL PEAK, Vive 100, u otra)
Pipetas aforadas de 1, 5,0 mL
Pipeta graduada de 10 y 25 mL
Frasco lavador
El mtodo de la adicin estndar es til para analizar muestras complejas en las que la
probabilidad de que ocurran efectos adversos debido a la matriz1 es considerable. Este
mtodo puede aplicarse de diferentes formas; una de las ms habituales implica la adicin
de volmenes diferentes de una solucin patrn a varias alcuotas de la muestra del mismo
tamao; este proceso es conocido como adicin de muestra.
1
El trmino matriz, hace referencia al conjunto de los distintos componentes que constituyen una muestra
analtica.
67
Despus, cada disolucin se lleva a un volumen fijo, antes de ejecutar la medida hay que
tener en cuenta que cuando la cantidad de muestra es limitada, las adiciones estndar se
pueden llevar a cabo por adiciones sucesivas de volmenes del patrn a un nico volumen
del problema exactamente medido. Las medidas se van haciendo en la muestra original y
despus de cada adicin del patrn en la muestra. En la mayora de las versiones del
mtodo de la adicin estndar, se espera que, despus de la adicin de un patrn del analito,
solo cambie su concentracin y que la matriz se conserve casi idntica.
En este mtodo varias alcuotas idnticas Vx de la disolucin problema con una

concentracin Cx, se transfieren a balones aforados de volumen Vs. A cada baln se le
aade un volumen variable (Vs mL) de una disolucin patrn del analito que tiene una
concentracin conocida Cs, se aaden entonces los reactivos adecuados y cada disolucin
se diluye hasta un volumen determinado. Cuando se realizan las mediciones
espectromtricas en cada una de esas disoluciones, la respuesta del instrumento es
proporcional a la concentracin. La representacin de A, en funcin de Vs, es una lnea
recta de la forma A = mVs + b.
Donde la pendiente m y la ordenada en el origen b vienen dadas por:
b = Vx Cx dnde C x = b Cs
m Cs m Vx
Tambin se puede dibujar manualmente una grfica de los datos, y la parte recta de la
misma se extrapola hasta el origen. La diferencia entre el volumen aadido de patrn en el
origen y el valor del volumen en el punto de interseccin de la lnea recta con el eje de las x
(Vx)0, es el volumen de patrn que equivale a la cantidad de analito en la muestra. Se puede
considerar:
Cx = (Vs)0 Cs
Vx
Las bebidas energizantes, son bebidas a base de agua sin alcohol y con algunas virtudes
estimulantes, que le ofrecen al consumidor virtudes regeneradoras de la fatiga y el
agotamiento, adems de aumentar la habilidad mental y desintoxicar el cuerpo. Las
bebidas enrgizantes estn compuestas principalmente por cafena, vitaminas, carbohidratos
y sustancias naturales orgnicas, que eliminan la sensacin de agotamiento por parte de la
persona que las consume. Se puede determinar la cantidad de cafena presente en una
bebida energizante, por medio de la adicin de volmenes de bebida a patrones preparados
de cafena y la lectura de absorbancia de las disoluciones a una longitud de onda de 270
nm.
68
10.4 PROCEDIMIENTO
a) Solucin acuosa de cafena (50 ppm): Pesar 0,01251 gramos de cafena y adicionarlo
en un vaso de precipitado con 50 mL de agua destilada, agitar vigorosamente hasta
disolucin, posteriormente transferir la solucin en un baln de 250,0 mL y llevar
hasta aforo con agua destilada.
b) Preparacin de la Bebida Energizante: Tomar 50,0 mL de la bebida y transferir a

un vaso de precipitado, agitar consistentemente hasta eliminar las burbujas y dejar
reposar por 15 minutos. Aadir 2,0 mL de la bebida a cada patrn de cafena
10.4.2 Preparacin de patrones:
Preparar las soluciones patrn de cafena 0, 2, 4, 6, 8, 10 ppm a partir de la solucin acuosa de

cafena (50 ppm) y aadir la cantidad necesaria de estndar; teniendo en cuenta las
Tabla 5. Preparacin de los patrones para la adicin de un estndar
N V Bebida V de estndar de Volumen

Patrn Energizante en mL cafena 50 ppm (mL) final mL
1 2,0 0 (blanco) 50,0
2 2,0 2 50,0
3 2,0 4 50,0
4 2,0 6 50,0
5 2,0 8 50,0
6 2,0 10 50,0
10.4.3 Determinacin:
Cuando se tengan los patrones preparados se realizan las siguientes mediciones:
Antes de comenzar las mediciones se debe leer el manual de funcionamiento del

espectrofotmetro, para tener una idea clara de los procedimientos a realizar.
69
Realizar un barrido espectral entre 200 400 nm sobre el patrn de 8 ppm de
cafena, para obtener el espectro de absorcin y determinar la longitud de onda ()
de mxima absorcin ( mxima).
Fijar la de mxima absorcin en el equipo y cuadrar el cero de absorbancia con el

blanco.
Introducir en la celda el patrn N 1 de cafena y medir la absorbancia a la

mxima, repetir este procedimiento con los dems patrones.
Realizar una curva de calibracin entre ABS vs Volumen de estndar. Verificar la

regresin lineal de los datos (r 0,999) y asegurarse que el intervalo lineal est
conformado por seis patrones.
Medir la absorbancia de la muestra problema (bebida energizante) a la mxima y

verificar que se encuentre en el intervalo lineal de la curva de calibracin. Si no lo
est, realizar las diluciones necesarias y los clculos respectivos.
Determinar la concentracin de cafena en la bebida energizante y reportarla en

ppm.
purgar con cada solucin, con al menos tres porciones de la solucin que va a contener
10.5 CUESTIONARIO
1. Realizar la curva entre ABS vs Volumen de estndar de los patrones de adicin de

un estndar.
2. Cul es la concentracin de cafena en la bebida energizante?
3. Qu diferencias existen entre la utilizacin del mtodo de la curva de calibracin y

el mtodo de la adicin de un estndar?
70
4. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en la anterior prctica (PRCTICA N
9), Cul fue el resultado ms acertado sobre la concentracin de cafena en la
bebida energizante, al realizarse el anlisis por los mtodos de la curva de
calibracin y la adicin de un estndar?

SMITH Brian C. Quantitative Spectroscopy, Theory and practice. Unit 1,

KENKEL John. Analytical Chemistry for Technicians, Visible and Ultraviolet

MOLINA V. Daniel Ricardo. Laboratorio de Instrumentacin Qumica .

Universidad Industrial De Santander (UIS). Prcticas de laboratorio 2008.
RODRGUEZ Rivera Vctor Manuel, MAGRO Edurne Simn. Bases de la

Alimentacin Humana. 1a ed. Editorial Netbiblo, Espaa, 2008.
DINKO Instruments, Manual de Instrucciones UV- VIS Espectrofotmetro UV

2300 II. Departamento de Qumica, UFPS. DINTER S.A. 1a edicin 2011.
71
PRCTICA N 11
ESPECTROSCOPIA INFRARROJA, APLICACIN DEL TUTOR IR PARA

LA IMPLEMENTACIN DE CONCEPTOS TERICOS
11.1 OBJETIVOS
Comprender los conceptos bsicos de la espectroscopia infrarroja.

Conocer el funcionamiento, la aplicacin e importancia de los equipos utilizados en
el anlisis infrarrojo.
Facilitar el estudio de los anlisis espectrales en la espectroscopia infrarroja
mediante la aplicacin del Tutor IR.
11.2 MATERIALES
El material utilizado para el desarrollo de la prctica ser entregado por el docente y

constara de un programa conocido como TUTOR IR (software libre) y donde se encontrar
la informacin referente a la espectroscopia infrarroja. El programa de instalacin Tutor
IR, es muy fcil de utilizar, solo se debe instalar el programa en el computador y traducir en
totalidad el contenido para desarrollar cada pregunta.
11.3 PROCEDIMIENTO:
Las preguntas que se presentan a continuacin tienen como objetivo hacer ms fructfero el
estudio de la espectroscopia infrarroja mediante el trabajo con el Tutor IR.
11.3.1 Introduccin a la Espectroscopia:
1. De dnde nace la idea de Espectroscopia Infrarroja?

2. Quin es Frederic William Herschel, cul fue su experimento y como demostr la
absorcin de la luz IR?
3. Qu descubri Isaac Newton de la luz y quien comprob su teora?
4. Cul es el orden de las bandas en el espectro electromagntico?
5. A qu se le llama luz polarizada?
72
6. Defina los siguientes conceptos: Longitud de onda, Frecuencia, Numero de onda
7. Que significa la frmula C= v
8. A qu es igual la energa segn la longitud de onda y el nmero de onda?
9. Si el nmero de onda de una radiacin es de 20 cm-1. A qu es igual la longitud de
onda y la energa?
10. Qu explica la teora de la vibracin molecular y en que numero de onda se
encuentra el infrarrojo medio?
11.3.2 Equipos para Anlisis Infrarrojo:
1. Nombre dos tipos de espectrofotmetros IR diferentes en su sistema ptico.

2. Cul es la fuente de IR en un espectrofotmetro clsico y en que rango trabaja?
3. Cmo llega la radiacin IR a la muestra, por qu utiliza espejos y no otro material?
4. Por qu es importante del espejo divisor (Choppin Mirror)?
5. Cul es la funcin de la rejilla de difraccin?
6. Por qu se conoce el espectrmetro clsico como dispersivo?
7. Qu elemento constituye un detector de radiacin IR, que seal mide y como la
transforma en medida de absorcin?
8. Qu es un espectro IR?
9. De qu partes consta un interfermetro de Michelson?
10. Cul es la funcin de la transformada de Fourier en el espectrmetro?
11. Qu ventajas presenta un espectrofotmetro con interfermetro y transformada de
Fourier sobre un equipo dispersivo?
11.3.3 Teora sobre el Anlisis Infrarroja:
1. Qu es un oscilador armnico clsico?

2. Cmo se presenta una curva de potencial armnico?
3. Cmo varia la energa potencial en un oscilador armnico?
4. Cmo se relacionan la frecuencia de vibracin v con la constante de fuerza y la
masa en un oscilador armnico?
5. Escriba una expresin matemtica que exprese la relacin entre la energa total de
un oscilador y el desplazamiento X de las masas
6. Por qu la relacin anterior que es correcta para un oscilador armnico no se puede
aplicar a las molculas?
7. Que predice la mecnica cuntica sobre la energa de vibracin de las molculas?
8. Por qu se dice que la energa est cuantizada?
73
9. Que indica la regla de seleccin?
10. Qu radiacin puede absorber una molcula segn la regla de seleccin, como se
aprecia en el espectro IR?
11. Qu es un modelo anarmnico?
12. Qu es un sobretono? cmo es su frecuencia comparada con la de la banda
fundamental?
13. Cmo aparece el sobretono en el espectro IR?
14. Por qu una molcula de H2 no absorbe radiacin IR?
15. Con cul de los campos que constituye la radiacin se debe alinear el dipolo
molecular para que se produzca la radiacin IR? Qu es un dipolo oscilante?
11.3.4 Anlisis Espectral IR:
1. Qu tipos de vibraciones se presentan en las molculas de agua?

2. Qu significan modos normales de vibracin?
3. Cuntos modos de vibracin presenta una molcula no lineal de N tomos?
4. Por qu aparecen tres picos de absorcin en la molcula en el espectro IR?
5. Cuntos modos de vibracin presenta el CO2, y por qu presenta solo 2 picos de
absorcin en el IR?
6. Cuntos modos de vibracin presenta el pentano C5H12?
7. Cuntos modos de vibracin presenta el grupo metilo CH3?
8. Cuntos modos de vibracin presenta el metileno CH2?
9. Qu significa la regin de las huellas digitales?
10. Indique el nmero de onda correspondiente a dos picos caractersticos de los
espectros IR de los siguientes compuestos: Hexano; 2,3-dimetilbutano; 1-hexino; 1-
heptino, cianuro de heptilo, tolueno, hexanol, hexilamina.
11.4 CUESTIONARIO
1. Adquirir e instalar el programa Tutor IR en su computador o equipo de trabajo.
2. Desarrollar las anteriores preguntas con la ayuda del Tutor IR, anexar las respuestas
en una carpeta y presentarlas al docente del curso.
74


SIERRA Isabel, PREZ Damin, GMEZ Santiago, MORANTE Sonia. Anlisis

Instrumental, Algunas herramientas de enseanza-aprendizaje adaptadas al Espacio
Europeo de Educacin Superior. Editorial Netbiblo, S. L., 2010.
University of Colorado, Boulder, Chemistry and Biochemistry Department, (2011).

CU Boulder Organic Chemistry Undergraduate Courses, IR Spectroscopy
Tutorial.
75
PRCTICA N 12
ESPECTROSCOPIA INFRARROJA, PREPARACIN DE MUESTRAS

PARA ANLISIS
12.1 OBJETIVOS
Conocer el funcionamiento del espectrofotmetro IR.

Adquirir destrezas en la preparacin de muestras para el anlisis IR.
Obtener los espectros IR de las muestras problema.
Identificar cualitativamente los grupos funcionales que se encuentran en los
compuestos qumicos analizados.
Conocer la importancia del anlisis IR.
Mortero de gata KBr espectroscpico

Pastillero con tornillos y troquel cido saliclico
Accesorios de laboratorio Lmina de poliestireno
Espectrofotmetro IR con Guayacol
transformada de Fourier. HCl 37 %
Acrilonitrilo
Urea
La regin infrarroja del espectro electromagntico se extiende entre la zona del visible y la
del microondas, ver figura 47. La seccin de mayor utilidad prctica de la extensa regin
IR es la que se extiende entre 4000 y 650 cm-1 denominada regin infrarroja media. La
utilizacin de la regin IR lejana, entre 650 y 200 cm-1, se ha ampliado considerablemente
en los ltimos aos, sobre todo para el estudio de compuestos rgano-metlicos o
inorgnicos.
76
La regin IR cercana comprendida entre 12500 y 4000 cm-1, accesible a la ptica de cuarzo,
donde se presentan las bandas armnicas, ha sido utilizada para determinaciones
cuantitativas.
Figura 6. Regin Infrarroja del Espectro Electromagntico.
La espectrometra de absorcin y reflexin en el infrarrojo medio, es una tcnica analtica

instrumental que permite conocer los principales grupos funcionales de la estructura
molecular de un compuesto. Esta informacin se obtiene a partir del espectro de absorcin
de dicho compuesto, al ser expuesto a la radiacin infrarroja en el espectrofotmetro. Los
espectros infrarrojos de un compuesto se representan por medio de una grfica con valores
de nmero de onda (cm-1), ante los valores de Transmitancia en porcentaje (%T). La
absorcin de radiacin IR que recibe un compuesto a una longitud de onda dada, origina un
descenso en el (%T) y se manifiesta en el espectro en forma de un pico o banda de
absorcin.
Figura 7. Representacin de los picos y bandas de absorcin en un espectro IR.
77
La espectroscopia IR es una tcnica verstil que permite obtener espectros de sustancias
slidas, lquidas y gaseosas utilizando en cada caso las celdas o soportes adecuados. Las
celdas son contenedores especiales con un camino ptico definido, apropiados para situar
muestras liquidas o gaseosas en el paso del haz de radiacin, las celdas deben cumplir con
requisitos como:
Las ventanas de las celdas deben ser permeables al paso de la radiacin a las
longitudes de onda en uso y de ser posible no deben provocar prdidas por reflexin
o dispersin.
El material de la celda debe ser resistente a la muestra.
El camino ptico de la celda debe estar perfectamente definido para anlisis
cuantitativo y permitir variaciones en el anlisis cualitativo.
En la medida de lo posible la celda debe permitir recuperar la muestra.
CELDAS PARA ANLISIS IR
Existen diferentes tipos de celdas para el anlisis infrarrojo, las ms utilizadas son:
Celdas desmontables: Consta de dos ventanas circulares de 25 mm de dimetro,

separadas por un espaciador de aluminio o tefln con un grosor variable entre 10 y
500 m dependiendo de la intensidad y concentracin del espectro a medir. El
camino ptico que dicta el espaciador no se define de forma precisa, ya que est
influenciado por la cantidad y viscosidad de la muestra que quede entre el mismo y
la ventana. Por este motivo las celdas desmontables slo se utilizan en medidas
cualitativas.
Figura 8. Celda desmontable (1-ventanas; 2-anillo espaciador; 3-anillos intermedios; 4-

soporte)
78
Celdas con camino ptico definido: Cuentan con dos ventanas con un espaciador
del grosor adecuado, aunque en una de las ventanas presenta dos orificios para el
llenado de la celda. Estos orificios continan en el anillo intermedio y el soporte
para acabar en un cuello que se cierra con un tapn de tefln. Una vez cerradas
pueden contener disolventes con puntos de ebullicin por encima de 60C, hay que
tener en cuenta que la muestra se calienta con el paso de la radiacin y que el
consiguiente aumento de presin pude traducirse en la evaporacin parcial o
completa de la muestra por fugas entre las ventanas y el espaciador. Actualmente se
encuentran celdas comerciales selladas que permiten utilizar disolventes con puntos
de ebullicin ms bajos; estas celdas se emplean en medidas cuantitativas en las que
es necesario conocer con exactitud el camino ptico y mantenerlo constante, al
menos durante la serie de medidas de calibracin y de la muestra de estudio.
Figura 9. Celda para anlisis IR cuantitativo de lquidos.
Celdas para gases: De acuerdo con la menor densidad de los gases se necesita un
camino ptico mayor que puede estar entre 5 y 10 cm. La celda consiste en un
cilindro de unos 45 mm de dimetro con dos orificios que se puedan cerrar y
resistentes al vaco, terminada en dos ventanas paralelas en torno a 50 mm de
dimetro. Cuando hay que determinar trazas de gases poco absorbentes se usan
celdas de multi-reflexin, que mediante un sistema de espejos permite alcanzar
caminos pticos incluso de 40 m.
79
Figura 10. Celda para el anlisis IR de gases.
PREPARACIN DE LAS MUESTRAS PARA EL ANLISIS IR
Durante un anlisis por espectroscopia de absorcin infrarroja, la muestra que se desea

analizar debe ser tratada de acuerdo a su estado (slido, lquido, gas). Los mtodos para
preparar las muestras se describen a continuacin:
Preparacin de muestras lquidas
Cuando la cantidad de muestra es pequea o cuando no se dispone del disolvente

apropiado, es habitual obtener los espectros del lquido puro. En este caso, slo una
pelcula muy delgada tiene un camino ptico lo suficientemente corto como para producir
espectros satisfactorios. En los anlisis cualitativos una gota del lquido puro se presiona
entre las dos ventanas de una celda desmontable conformando un (sandwich), donde las
ventanas son bsicamente de NaCl, la celda se debe cerrar con cuidado, evitando atrapar
burbujas de aire y apretando los tornillos lo suficiente sin romper las ventanas. La celda se
coloca en la trayectoria del haz de radiacin infrarroja y se obtiene el espectro de la
muestra. Las muestras de lquidos puros pueden contener el agua suficiente para destruir
las ventanas (NaCl) de la celda, por lo cual es necesario el pulido peridico de las mismas.
Preparacin de muestras slidas
En los anlisis infrarrojos de muestras slidas, se obtienen los espectros de dispersiones del
slido en una matriz lquida o slida. Generalmente en esta tcnica, la muestra slida se
debe pulverizar hasta que el tamao de sus partculas sea menor que la longitud de onda de
la radiacin para evitar los efectos de dispersin de la radiacin. Las dos tcnicas utilizadas
para preparar las muestras slidas son:
80
- La Pastilla de KBr: La tcnica ms utilizada en la preparacin de muestras slidas
para anlisis IR es la formacin de la pastilla de KBr (tambin se han utilizado otros
haluros de metales alcalinos). Las sales de haluros tienen la propiedad de flujo en
fro por lo cual cuando se presiona suficientemente este material finamente
pulverizado presenta propiedades transparentes o translcidas como el vidrio. Para
preparar la muestra se deben mezclar a fondo un miligramo o menos de dicha
muestra, finamente pulverizada, con aproximadamente 100 mg de polvo de KBr
desecado. La mezcla se realiza utilizando un mortero de gata con su pistilo.
Posteriormente se presiona la mezcla en un troquel especial entre 700 y 1000
kg/cm2 hasta obtener un disco transparente. A continuacin, el disco se coloca en la
trayectoria del haz de radiacin emitido por el espectrofotmetro FT-IR para
obtener el espectro infrarrojo.
Figura 11. Troquel utilizado para fabricar los discos de KBr.
- Preparacin de Suspensiones: Cuando los slidos no son solubles en un disolvente

transparente en la regin del infrarrojo ni es conveniente prepararlos en forma de
pastillas de KBr, sus espectros de infrarrojo se obtienen por dispersin del analito en
una suspensin de un aceite mineral o un hidrocarburo fluorado. Las suspensiones
se preparan moliendo de 2 a 5 mg de la muestra finamente pulverizada (el tamao
de partcula debe ser menor a 2 m) en presencia de una o dos gotas de un aceite
hidrocarbonado pesado (Nujol). Si es probable que interfieran las bandas del
hidrocarburo se pueden sustituir por 1,3 hexaclorobutadieno. En cualquiera de los
casos, la suspensin resultante se examina como una delgada pelcula entre celdas
con ventanas de NaCl.
81
- Lminas Delgadas de Polmeros: Se pueden obtener, con ayuda de un par de
placas calientes y una prensa, lminas delgadas de polmeros con un espesor
altamente reproducible, desde 15 hasta 500 m. Si la forma del polmero lo permite
la muestra se coloca directamente en el porta-muestra y se coloca en la trayectoria
del haz de radiacin infrarroja para obtener el espectro de absorcin.
Preparacin de Muestras Gaseosas
El espectro de un lquido de bajo punto de ebullicin o de un gas, se puede obtener

permitiendo a la muestra que se expanda en una celda cilndrica en la que se ha hecho el
vaco, equipada con las ventanas adecuadas. Para este fin se dispone de una variedad de
celdas cilndricas con caminos pticos que oscilan entre pocos centmetros y 10 o ms
metros. Los caminos pticos ms largos se obtienen en celdas compactas provistas de
superficies internas reflectantes, de modo que el haz pasa numerosas veces por la muestra
antes de salir de la cubeta. Para preparar las muestras gaseosas se necesitan de:
- Disoluciones: Siempre que sea posible, es conveniente obtener el espectro

infrarrojo de disoluciones preparadas de forma que contengan una cantidad
conocida de muestra, como se hace normalmente en espectrometra UV/Visible.
Sin embargo, esta tcnica tiene ciertas limitaciones en cuanto a sus aplicaciones, por
la disponibilidad de disolventes que sean transparentes en las regiones del
infrarrojo.
- Disolventes: Ninguno de los disolventes utilizados en la espectroscopia IR son

transparentes en la regin del infrarrojo medio. El agua y los alcoholes rara vez se
utilizan como disolventes, no slo porque absorben intensamente, sino tambin
porque ataca a los haluros de metales alcalinos, que son los materiales utilizados en
las ventanas de las celdas.
Bsicamente las muestras gaseosas suelen distribuirse y almacenarse en cilindros metlicos

o de vidrio, desde los que se transfiere la muestra a la celda, normalmente utilizando un
aparato de vaco que tras la evaluacin del sistema permite una medida exacta de la presin
parcial. Las cubetas de camino ptico fijo se pueden llenar o vaciar con una jeringa
hipodrmica. Las ventanas de NaCl son las ms utilizadas actualmente, y aun teniendo
cuidado, finalmente se daan debido a la absorcin de humedad que genera los disolventes.
82
12.4 PROCEDIMIENTO
Teniendo en cuenta los fundamentos tericos de la prctica, preparar las muestras que se
desean analizar teniendo en cuenta su estado fsico (solido, lquido, gas), cuando se tengan
preparadas las muestras, obtener y analizar los espectros IR de cada sustancia.
12.4.1 Calibracin del Espectrofotmetro IR con Transformada de Fourier (FT-IR):
Para preparar el espectrmetro (FT-IR) se cuenta con un manual de funcionamiento del

equipo, en el cual se especifican los datos que se deben ingresar en el computador, teniendo
en cuenta que los equipos de anlisis IR modernos trabajan con un sistema operativo
(Software), que le permite al analista facilitar el estudio del compuesto que desea analizar.
Calibrar el equipo y ajustarlo para realizar el anlisis cualitativo de los diferentes
compuestos entre el rango de 4000 a 400 cm-1.
12.4.2 Obtencin del espectro IR del poliestireno:
Determinar directamente el espectro de absorcin IR de una pelcula delgada de

poliestireno, utilizando el (FT-IR) en el rango de 4000 a 400 cm-1.
12.4.3 Identificacin Cualitativa:
Preparar las muestras para anlisis y obtener el espectro de absorcin IR de los diferentes
compuestos, slidos y lquidos, en el rango de 4000 a 400 cm-1. Analizar los espectros
obtenidos y establecer las conclusiones de la tcnica aplicada. Nota: Tener en cuenta el
manual de funcionamiento des espectrofotmetro IR utilizado en el anlisis.
12.5 CUESTIONARIO
1. Identificar los espectros de absorcin de las sustancias utilizadas y analizar los

diferentes tipos de picos que presentan los espectros.
2. Cul es la importancia de la espectroscopia de absorcin IR en los diferentes

campos de la qumica?
83
3. Qu ventajas presenta un espectrofotmetro con interfermetro y transformada de
Fourier sobre un equipo dispersivo?
4. Por qu es tan eficiente trabajar con un espectrmetro IR con transformada de

Fourier?
5. Por qu los mtodos analticos cuantitativos que utilizan radiacin del infrarrojo
cercano parecen ser ms precisos y exactos que los que utilizan radiacin del
infrarrojo medio?
6. Analizar el siguiente espectro de absorcin IR de la N, N dimetilformamida
84

Instrumental. 5 ed. Editorial McGraw Hill, 2001. P 219.
SIERRA Isabel, PREZ Damin, GMEZ Santiago, MORANTE Sonia. Anlisis

Instrumental, Algunas herramientas de enseanza-aprendizaje adaptadas al Espacio
Europeo de Educacin Superior. Fundamentos e Instrumentacin en
Espectrometra de Absorcin en el Infrarrojo. Editorial Netbiblo, S. L. 2010. P 65
RUBINSON Kenneth A., RUBINSON Judith F. Anlisis Instrumental.

Editorial Prentice Hall, 2000. P 506.
STUART Barbara. Infrared Spectroscopy, Fundamentals and Applications.

Editorial WILEY, 2004. P 18.
PRUSHAN M. J. Instrumental Analysis Manual, LA SALLE UNIVERSITY.

Atomic Absorption Analysis of Calcium in Milk. P 45
ROUESSAC Francis, ROUESSAC Annick. CHEMICAL ANALYSIS, Modern

Instrumentation Methods and Techniques. Second Edition, Editorial WILEY 2007
LINDE, the Linde Group, Infrared Spectrometry Instrumentation. Contenido en

lnea, disponible en http://hiq.linde-gas.com/international/web/lg/spg/like35lgspg.ns
f/docbyalias/anal_infra.

Espectrofotometra Infrarroja Transformada de Fourier, disponible en <URL:
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2001184/lecciones/Cap21/06
_02_01.htm.
Universidad de Granada, Espaa, Departamento de Qumica y Fsica, Facultad de

Farmacia. Prctica de Laboratorio N 4 Obtencin del Espectro IR del cido
Acetil Saliclico. Disponible en <URL: http://www.ugr.es/~mclopezm/PDF/P4.pdf
85
PRCTICA N 13
DETERMINACIN DE HIERRO Y MAGNESIO POR ESPECTROSCOPIA

DE ABSORCIN ATMICA
13.1 OBJETIVOS
Entender el funcionamiento del espectrofotmetro de absorcin atmica.

Evaluar la importancia de la seleccin del ancho de banda y la longitud de onda en
un anlisis por espectroscopia de absorcin atmica.
Adquirir destrezas en el manejo del espectrmetro de absorcin atmica.
Hacer las curvas de calibracin para la determinacin de Fe y Mg.
Determinar la concentracin de Fe y Mg en dos muestras problema.
Matraces aforados de 1L y 250,0 mL Solucin madre de Fe (200 ppm)

Vaso de precipitado de 250 mL Solucin madre de Mg (1000 ppm)
Pipetas aforadas de 10 y 25,0 mL Solucin patrn de Fe (100 ppm)
Micro-pipeta de 1000 y 100 L Solucin patrn de Mg (100 ppm)
Lmpara de ctodo hueco para Fe HCL (diluido)
Lmpara de ctodo hueco para Mg Agua destilada
Matraces aforado de 50,0 mL
Balanza analtica
Espectrofotmetro de absorcin
atmica.
La espectroscopia de absorcin atmica es un mtodo para la deteccin y la determinacin

de elementos qumicos, particularmente de elementos metlicos. Uno de los pioneros en la
espectroscopia fue Isaac Newton, quien a principios de 1600 observ y estudi el
comportamiento de la luz solar cuando esta atraviesa por un prisma.
86
En 1831, J.F. Herschel demostr, que las sales de diferentes metales producen distintas
coloraciones a la flama cuando las sales disueltas o en forma directa son puestas en
contacto con sta. As por ejemplo las sales de calcio dan al contacto con la flama un color
naranja, las de sodio un color amarillo, las de potasio violeta, etc. Estas observaciones
fueron corroboradas posteriormente por otros cientficos sugiriendo que de esta forma
podra identificarse el metal formador de la sal en un compuesto qumico especfico. En
1859 los cientficos Kirschoff y Bunsen en 1859 ampliaron el conocimiento de la
naturaleza de este fenmeno, cuando la luz colorida emitida por el metal en la flama la
hicieron incidir en un depsito ptico que separa la radiacin emitida por el metal, de la luz
solar.
En este instrumento denominado espectroscopio (observacin del espectro) se observa que

cada metal que emite radiacin de diferente color, presenta lneas que aparecen en
diferentes posiciones en la pantalla o campo de observacin, y esto es independientemente
de las condiciones en que se realiza el experimento as como de la naturaleza de la sal
metlica y nicamente depende del metal. Adicionalmente, la intensidad de la lnea est
directamente relacionada a la concentracin del elemento en solucin. De esta manera se
tiene una forma de identificar el elemento (por la posicin de sus lneas), as como de una
manera de identificar ste (por la intensidad de las lneas producidas).
La espectroscopia de absorcin atmica (EAA), se fundamenta en la absorcin de radiacin

de una determinada longitud de onda. Esta radiacin es absorbida selectivamente por
tomos que tienen niveles energticos cuya diferencia en energa corresponde al valor de la
energa de los fotones incidentes. La cantidad de fotones absorbidos, se determina por
medio de la ley de Beer, que relaciona la prdida de poder radiante, con la concentracin de
la especie absorbente y con el espesor de la celda o recipiente que contiene los tomos
absorbentes. Los componentes de un espectrofotmetro de absorcin atmica son:
1) Una fuente de radiacin que emita una lnea especfica correspondiente a la

necesaria para efectuar una transicin en los tomos del elemento analizado.
2) Un nebulizador, que por aspiracin de la muestra liquida, transforma la muestra en

pequeas gotas para una atomizacin ms eficiente.
3) Un quemador, en el cual por efecto de la temperatura alcanzada en la combustin y

por la reaccin de combustin misma, se favorezca la formacin de tomos a partir
de componentes en solucin.
87
4) Un sistema ptico que separe la radiacin de longitud de onda de inters, de todas
las dems radiaciones que entran en el sistema.
5) Un detector o transductor, que sea capaz de transformar en relacin proporcional,

las seales de intensidad de radiacin electromagntica, en seales elctricas o de
intensidad de corrientes.
6) Un amplificador o sistema electrnico, que amplifica la seal elctrica producida,

para que pueda ser procesada con circuitos y sistemas electrnicos comunes.
7) Un sistema de lectura en el cual la seal de intensidad de corriente, sea convertida a

una seal que el operario pueda interpretar. Este sistema de lectura puede ser una
escala de aguja, una escala de dgitos, un graficador, una serie de datos que pueden
ser procesados a su vez por una computadora, entre otros.
Figura 12. Componentes de un Espectrofotmetro de Absorcin Atmica
FUENTES DE RADIACIN
Una vez que han sido formados los tomos, absorben radiacin de acuerdo a la ley de Beer
si esta corresponde a la diferencia en energa entre los niveles energticos de algunos de los
tomos presentes, de lo contrario, la radiacin pasa por la flama sin disminuir la potencia de
haz como efecto de los tomos contenidos en ella.
Los tomos de los diferentes elementos tienen lneas bien definidas que corresponden a
transiciones entre diferentes niveles atmicos. Estas transiciones tienen anchos espectrales
de decimas o hasta centsimas de nanmetro.
88
Cada elemento va a responder a la excitacin de una radiacin de longitud de onda muy
especfica ya que solo este elemento absorbe o emite tal tipo de radiacin, porque esta
corresponde a la diferencia entre dos niveles particulares de ese tomo. La idea de Alan
Walsh en la cual los tomos absorben y emiten radiacin al pasar del estado basal a un
estado excitado y tericamente emiten la misma frecuencia de radiacin en el proceso
inverso; por lo tanto si se tiene una fuente de excitacin en donde el elemento excitado es el
mismo que se va analizar, la radiacin emitida va a ser captada nicamente por el elemento
que es idntico al de la fuente luminosa. Las fuentes de excitacin utilizadas en los anlisis
por (EAA), son las lmparas de ctodo hueco.
Las lmpara des ctodo hueco (LCH o HCL [Hollow Cathode Lamp]) consisten de un
cilindro de vidrio sellado al vaco y con un gas inerte en su interior, en el extremo terminal
esta soldada una ventana de cuarzo fundido; esta ventana tiene que ser de cuarzo debido a
que casi todas las lneas espectrales tiles se hallan en el ultravioleta. Dentro de este
mismo cilindro se encuentran dos filamentos; uno de ellos es el ctodo y el otro el nodo.
El nodo generalmente es un alambre grueso hecho de nquel o tungsteno, el ctodo es en
forma de un cilindro hueco, en el interior del cual se encuentra depositado en forma de una
capa el elemento metlico que se va a excitar.
Figura 13. Lmpara de ctodo hueco.
NEBULIZADOR
Cuando una solucin acuosa de sales inorgnicas disueltas es aspirada y dirigida hacia una
flama, en esta ocurre una serie de eventos que conducen a la formacin de tomos en la
misma. El quemador-nebulizador de premezclado o de flujo laminar tiene la siguiente
secuencia de pasos en su operacin: inicialmente la muestra liquida (en la cual estn
disueltos los componentes en forma de iones positivos y negativos) debe ser conducidas al
nebulizador.
89
Para esto se hace uso del efecto Venturi, este efecto se crea cuando el oxidante se
introduce a travs de un tubo diseado de manera tal que se genera un vaco lo cual produce
la succin de la muestra liquida a travs del tubo capilar. Este mismo efecto Venturi
favorece la formacin de pequeas gotas en forma de roco, cuando la solucin se hace
impactar sobre un cuerpo slido de diseo y geometra adecuada. El combustible
necesario, (generalmente acetileno) se introduce directamente a la cmara del nebulizador
por medio de un conducto adicional.
Debido a que el oxidante que se introduce a travs del nebulizador para el efecto Venturi no
es suficiente para una adecuada combustin, el resto requerido se introduce tambin a la
cmara del nebulizador por medio de un conducto adicional. El resultado es que el
quemador lleva finalmente una mezcla oxidante (aire) y combustible (acetileno) que
transportan pequeas gotas de roco de la muestra aspirada.
Las pequeas gotas formadas, son arrastradas por el flujo de gases (oxidante y combustible)
que tambin entran a la cmara de mezclado del nebulizador que sustentan la reaccin de
combustin en el quemador. nicamente las partculas que tienen tamaos menores de 10
mm, lo que representa solo una pequea fraccin del volumen de muestra aspirada llegan
finalmente al quemador, ms del 90 % de la solucin es desechada a travs de un tubo de
drenaje que el nebulizador tiene para este fin. La intencin del drenaje es la de evitar que
partculas demasiado grandes alcancen el quemador. Cuando esto ocurre, debido a que el
tiempo de residencia de la gota en la parte ms caliente de la flama es de nicamente
milsimas de segundo, si la gota es demasiado grande, no se alcanzan a formar tomos a
partir de esta, y es muy probable que se originen falsas absorbancias.
Figura 14. Quemador-Nebulizador de premezclado o flujo laminar.
90
QUEMADOR
Cuando la muestra pasa por el nebulizador y se forman las gotas de muestra, estas llegan al
quemador donde ocurren los siguientes eventos:
El solvente es vaporizado y se forman los cristales de las sales metlicas que

originalmente se encontraban en solucin como iones positivos y negativos. La
naturaleza de las sales formadas dependen principalmente de la constante del
producto de la solubilidad del compuesto que cristaliza.
Una vez formadas las sales, estas son descompuestas por efecto de la temperatura, y
el elemento es reducido al estado metlico slido.
Posteriormente el metal pasa del estado lquido al estado gaseoso y finalmente se

tiene en un vapor atmico que es capaz de absorber radiacin de longitudes de onda
bien definidas.
Si la temperatura es lo suficientemente alta y el elemento metlico es de bajo

potencial de ionizacin, parte de los tomos del elemento pierden uno o ms de sus
electrones y se ioniza parcialmente.
Cuando el vapor atmico absorbe la radiacin de la longitud de onda definida para

dicho vapor, se obtiene una medida gracias al detector, que transforma en relacin
proporcional las seales de intensidad de radiacin electromagntica y las enva al
sistema de lectura, pasando primeramente por un amplificador.
Cuando la seal del detector pasa por el amplificador llega al sistema de lectura
donde la seal se convierte de tal manera que el analista la pueda interpretar
(ejemplo: transmitancia o absorbancia).
La temperatura de la llama es un factor importante para la determinacin de una muestra, y

se utilizan varias mezclas para poder manejar el poder calorfico de la llama a la necesidad
de la muestra. Hay que destacar que cuando se utiliza el aire como oxidante se obtienen
temperaturas de 1700 a 2400 C con varios combustibles. A estas temperaturas slo las
muestras que se descomponen fcilmente, se atomizan; para la mayora de las muestras
refractarias, se debe emplear oxigeno u xido nitroso como oxidante. Estos oxidantes
producen temperaturas de 2500 a 3100 C con los combustibles habituales.
91
Las velocidades de combustin son de considerable importancia, porque las llamas slo son
estables en ciertos intervalos de caudal. Si el caudal no sobrepasa la velocidad de
combustin, la llama se propaga hacia el interior del quemador dando un fogonazo.
Cuando el caudal aumenta, la llama sube hasta alcanzar un punto por encima del quemador
donde el caudal y la velocidad de combustin son iguales; en esta regin es donde la llama
es estable. A caudales ms elevados, la llama sube y al final alcanza un punto donde se
aparta del mechero y se apaga. Estas consideraciones demuestran la importancia de
controlar el caudal de la mezcla combustible-oxidante. Las propiedades de los
combustibles y oxidantes utilizados en los anlisis por EAA son:
Tabla 6. Propiedades de la llama en Absorcin Atmica.
COMBUSTIBLE OXIDANTE TEMPERATURAS VEL. COMBUSTIN

(C) (CM/S)
Gas natural Aire 1700 - 1900 39 43
Gas natural Oxigeno 2700 - 2800 370 390
Hidrogeno Aire 2000 - 2100 300 440
Hidrogeno Oxigeno 2550 - 2700 900 1400
Acetileno Aire 2100 2400 158 266
Acetileno Oxigeno 3050 3150 1100 2480
Acetileno xido nitroso 2600 2800 285
En los anlisis por EAA se utilizan diferentes combinaciones de gases para producir la
reaccin de combustin en el quemador, la llama producida por el mechero presenta una
estructura en la cual se pueden identificar diferentes zonas (zona de combustin primaria, la
regin interconal y la zona de combustin secundaria). El aspecto y el tamao de estas
regiones varan considerablemente con la relacin combustible-oxidante, as como con el
tipo de combustible y oxidante. La zona de combustin primaria en una llama de
hidrocarburos se reconoce por su coloracin azul que proviene de los espectros de bandas
de C2, CH y otros radicales. En general, en esta zona no se alcanza el equilibrio trmico y
por ello, esta zona rara vez se utiliza en la espectroscopia de llama.
La regin interconal, que es relativamente estrecha en llamas de hidrocarburo

estequiomtricas, puede alcanzar varios centmetros de altura con fuentes ricas en
combustible de acetileno/oxigeno o acetileno/xido nitroso. La zona es fuertemente rica en
tomos libres y es la parte de la llama ms ampliamente utilizada en espectroscopia. En la
zona de combustin secundaria, los productos formados en la regin interior se convierten
en xidos moleculares estables que se dispersan por los alrededores.
92
Figura 15. Regiones de la llama en un quemador de premezclado o flujo laminar.
INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN

ATMICA
El equipo utilizado para realizar el anlisis por espectroscopia por absorcin atmica es el
Espectrofotmetro de Absorcin Atmica. Existen equipos de un solo haz y otros de doble
haz. Los equipos ms utilizados actualmente son los de doble haz que logran aumentar la
estabilidad en el anlisis. En este equipo de doble haz, la radiacin emitida por una fuente
es dividida por un modulador con espejos; este consiste de una pieza circular con secciones
alternadas de espejo y partes huecas; esta pieza est girando, de manera que el haz de la
fuente pasa alternadamente por el hueco del modulador y llega a la flama o choca con una
seccin del espejo del mismo y es reflejado.
Estos dos haces son recombinados en un espejo especial (half-silvered mirror) pasan a
travs de un monocromador y finalmente la seal es enviada por medio de un
fotomultiplicador. Esta seal recibida por el sistema de lectura es la relacin entre la seal
de referencia y la seal de la muestra misma.
93
Figura 16. Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de absorcin atmica de doble
haz.
ANALISIS CUANTITATIVO POR (EAA)
Los anlisis cuantitativos realizados en espectroscopia de absorcin atmica son muy

semejantes a los realizados por espectroscopia UV/Visible. Para esto se prepara una serie
de estndares y se hace una curva de calibracin, con base a esta grfica se determina la
concentracin de las soluciones problema. Otras tcnicas aplicadas son:
Tcnica de Adicin de Estndar. Las propiedades fsicas de la solucin que se

aspira al quemador-nebulizador debern ser similares entre muestras problema y
soluciones estndar, ya que de lo contrario la eficiencia en atomizacin de la
solucin ser diferente y esto conducir a resultados errneos. Para evitar este
posible efecto se utiliza la tcnica de adicin de estndar la cual consiste en agregar
volmenes iguales de solucin problema a muestras estndar de concentracin
conocida, pero de diferente concentracin al elemento a determinar.
Aplicaciones Tpicas. La espectroscopia de absorcin atmica es muy til en la

identificacin de ms de 70 elementos. Tambin se pueden identificar metales en
petrleos, fluidos biolgicos, en el agua y en el aire.
94
INTERFERENCIAS
En los anlisis por espectroscopia de absorcin atmica se presentan interferencias

espectrales como no espectrales, las ms conocidas son:
Interferencia por dispersin de partculas. Cuando la solucin aspirada hacia el

quemador tiene un gran nmero de slidos disueltos, es probable que se tenga
interferencia por dispersin de partculas.
Interferencia por traslapamiento de bandas moleculares. Ocurre cuando la matriz
tiene cantidades grandes de compuestos moleculares sumamente complejos.
Interferencia por Ionizacin. Cuando la temperatura de la flama es muy alta y el
elemento pierde fcilmente uno o ms de sus electrones ms exteriores ocurre la
ionizacin.
Interferencias por volatilizacin del soluto. Cuando las sales formadas en el
quemador son de carcter refractario, estas resisten la descomposicin a tomos y
entidades ms simples si la temperatura no es lo suficientemente alta. La formacin
de entidades qumicas de resistencia a la volatilizacin en flamas comunes originan
interferencias, ya que no permiten que el analito sea atomizado eficientemente.
13.4 PROCEDIMIENTO
a) Solucin patrn de Fe (200 ppm): Pesar 1,494 gramos de sulfato ferroso amnico
hexa-hidratado (Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O). Adicionar en un vaso de precipitado con
50 mL de agua destilada, adicionar lentamente 20,0 ml de cido sulfrico
concentrado (98%). Adicionar solucin de permanganato de potasio (KMnO4) gota
a gota hasta que persisti un color rosado plido. Se transfiri cuantitativamente a
un baln aforado de un litro y se enraso con agua destilada, se etiquet y almacen.
b) Solucin patrn de Mg (1000 ppm): Pesar 1,000 gramo de magnesio en cinta (que
no est oxidada en la superficie), adicionar en un vaso de precipitado con 50 mL de
agua destilada, adicionar 1,0 mL de HCL [1:1], y transferir la solucin a un matraz
aforado de 1 litro, llevar hasta aforo con agua destilada, enrasar y etiquetar.
95
c) Solucin patrn de Fe (100 ppm): Transferir 125,0 mL de la solucin madre de Fe
(200 ppm) a un matraz de 250 mL, llevar hasta aforo con agua destilada, enrasar y
etiquetar.
d) Solucin patrn de Mg (100 ppm): Transferir 25,0 mL de la solucin madre de
Mg (1000 ppm) a un matraz de 250 mL, llevar hasta aforo con agua destilada,
enrasar y etiquetar.
13.4.2 Preparacin de Patrones:
Para el anlisis de muestras por absorcin atmica, se deben preparar los patrones para realizar
la curva de calibracin teniendo en cuenta el rango de trabajo para cada elemento. Para el
anlisis de Fe y Mg se trabaja con los siguientes rangos:
Muestra Rango de trabajo

Fe 0,5 a 5 ppm
Mg 0,1 a 0,5 ppm
Teniendo en cuenta el rango de trabajo, preparar cinco patrones a partir de la solucin patrn
(100 ppm) de cada muestra Fe y Mg, en matraces aforados de 50,0 mL, utilizando las
Tabla 7. Preparacin de los patrones para el anlisis por absorcin atmica.

Patrones de hierro (Fe)
Patrn (ppm) Sol. Patrn de Fe Sol. Patrn de Fe Volumen final (mL)
100 ppm (mL) 100 ppm (L)
0,0 0,0 0,0 50,0
0,5 0,25 250 50,0
1,5 0,75 750 50,0
2,5 1,25 1250 50,0
3,5 1,75 1750 50,0
5,0 2,5 2500 50,0
Patrones de magnesio (Mg)

Patrn (ppm) Sol. Patrn de Mg Sol. Patrn de Mg Volumen final (mL)
100 ppm (mL) 100 ppm (L)
0,0 0,0 0,0 50,0
0,1 0,05 50 50,0
0,2 0,10 100 50,0
0,3 0,15 150 50,0
0,4 0,20 200 50,0
0,5 0,25 250 50,0
96
Nota: Antes de iniciar las determinaciones, se debe consultar el manual de funcionamiento del
Espectrofotmetro de Absorcin Atmica utilizado en el anlisis. El manual contiene las
especificaciones de los parmetros que le permiten al analista ajustar el equipo de acuerdo a
las necesidades requeridas para el anlisis de cada elemento.
Teniendo en cuenta las instrucciones del manual de funcionamiento del Espectrofotmetro de

Absorcin Atmica, se cuadra en el equipo, la lmpara de ctodo hueco que se debe utilizar, la
longitud de onda de trabajo, el ancho de banda, la llama utilizada, entre otros ajustes, para las
muestras de Fe y Mg, respectivamente.
Figura 17. Diagrama de flujo para un anlisis por Absorcin Atmica.
Ajustes del espectrmetro de Absorcin Atmica para la muestra de Fe:

Lmpara de ctodo hueco: lmpara de Fe
Longitud de onda de trabajo (): 248,3 nm
Ancho de banda: 0,2 nm
Llama utilizada: Aire / Acetileno
Llama oxidante
Unidades de concentracin: mg/L (ppm Fe)
Reporte de los Datos: Absorbancia
97
Ajustes del espectrmetro de Absorcin Atmica para la muestra de Mg:
Lmpara de ctodo hueco: lmpara de Mg

Longitud de onda de trabajo (): 285,2 nm
Ancho de banda: 0,2 nm
Llama utilizada: Aire / Acetileno
Llama oxidante
Unidades de concentracin: mg/L (ppm Mg)
Reporte de los Datos: Absorbancia
Cuando se tengan preparados los patrones de Fe y Mg, y cuando el espectrmetro de

Absorcin Atmica se encuentre ajustado de acuerdo a las necesidades de cada metal, se
miden las absorbancias de cada patrn y se construye la curva de calibracin para cada metal.
Se determina el coeficiente de correlacin y se hace la curva de calibracin entre la
concentracin de los patrones y la absorbancia medida por el equipo. Con los resultados
obtenidos, se calcula la concentracin de Fe y Mg en las muestras desconocidas.
13.5 CUESTIONARIO
1. Realizar la curva de calibracin entre la Absorbancia vs Concentracin de los

patrones.
2. Determinar la concentracin de hierro (Fe) en la muestra problema y expresar el

resultado en ppm.
3. Determinar la concentracin de Magnesio (Mg) en la muestra problema y expresar

el resultado en ppm.
4. Cul es la importancia de la espectroscopia de absorcin atmica en los diferentes

campos de la qumica?
5. Qu entiende por Nebulizador?
6. Qu interferencias se pueden presentar en un anlisis por espectroscopia de

absorcin atmica?
98
7. El cobre se asla de las muestras de tejido mediante digestin, tras la extraccin de
todo el tejido. La concentracin de Cu en el sobrenadante se determina por EAA,
utilizando una llama aire acetileno. Una muestra de tejido seco y sin grasa, se
digiere a 68 C, durante 24 horas con 2 mL de HNO3 (0,75 M). El sobrenadante se
pasa a un baln de 5 mL y se lleva hasta aforo con HNO3 (0,75 M), el cobre se
analiz en un EAA a una =324,8 nm. Calcular la concentracin de Cu expresada
en g Cu/g de tssg (tejido seco sin grasa), si se analiza una muestra de 0,01123 g de
tssg cuya absorbancia es de A= 0,023?
Concentracin ppm de Cu Absorbancia
0,000 0,000
0,100 0,006
0,200 0,013
0,300 0,020
0,400 0,026
0,500 0,033
0,600 0,039
0,700 0,046
1,000 0,066

Instrumental. 5 ed. Editorial McGraw Hill, 2001. P 219

Captulo 8, Espectroscopia de Absorcin Atmica. 1a ed. Editorial Revert, S. A.,
Espaa 1983. P 243
ROCHA Castro E. Principios Bsicos de Espectroscopia. 1 ed. Editorial UACh,

Mxico, 2000. P 140

Prentice Hall, 2000. P 303
99
Fundamentos de Qumica Analtica. 8a ed. Editorial Revert, 1997. P 853


Universidad de Alicante, Servicios Tcnicos de Investigacin, Espectroscopa de

Absorcin Atmica, disponible en <URL: http://www.ua.es/es/investigacion/sti/
servicios/analisis_instrumental/analisis/aas.html

Funcionamiento de un Espectrofotmetro de Absorcin Atmica, disponible en
<URL:http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2001184/lecciones/Cap05/ani
macion6.htm
100
PRCTICA N 14
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICIENCIA (HPLC),

DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN BEBIDA
GASEOSA
14.1 OBJETIVOS
Establecer los principios que rigen la cromatografa (HPLC).

Comprender el manejo del equipo de cromatografa (HPLC) para analizar
correctamente la muestra.
Determinar el tiempo de retencin para la cafena bajo las condiciones de anlisis.
Hacer la curva de calibracin para los patrones de cafena.
Determinar el contenido de cafena en la muestra problema.
Evaluar la importancia de la cromatografa (HPLC) en la actualidad.

1 Baln aforados de 250,0 mL Bebida gaseosa (Coca-Cola, Pepsi, u
Vaso de precipitado de 50 mL otra).
Pipetas aforadas de 1, 10 y 20,0 mL
Frasco lavador
Micropipeta
Equipo para (HPLC) y accesorios
La cromatografa lquida de alta eficiencia es la tcnica analtica e instrumental ms

utilizada en la actualidad para realizar separaciones qumicas. La razn de la eficiencia de
la tcnica cromatografica resulta de la sensibilidad y cmoda adaptacin a las
determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separacin de especies no
voltiles y, sobre todo, la aplicabilidad de la tcnica a sustancias de gran inters para la
industria.
101
La cromatografa (HPLC) se encuadra dentro de la cromatografa de elucin. En sta, un
lquido (fase mvil) circula ntimamente en contacto con un slido u otro lquido inmiscible
(fase estacionaria); al introducir una mezcla de analitos en la corriente de la fase mvil,
cada analito avanzara a lo largo del sistema con una velocidad diferente que depender de
su afinidad por cada una de las fases. Cuando la mezcla termina su recorrido por la
columna, cada uno de los analitos introducidos en el sistema eluir con un tiempo diferente,
es decir, los analitos estarn separados.
CLASIFICACIN DE LA CROMATOGRAFA LQUIDA
Los diferentes tipos de cromatografa lquida se pueden clasificar en base a la naturaleza de

la fase estacionaria, debido a que es sta la que impone fundamentalmente el mecanismo de
separacin. Teniendo en cuenta la fase estacionaria, la cromatografa lquida se clasifica
as:
Cromatografa de Adsorcin (Lquido-Slido):
La separacin depende de la afinidad de la muestra hacia la fase slida o lquida. Si la

muestra es muy afn a la fase estacionaria (compuesta por partculas slidas pequeas) el
tiempo de retencin ser mayor. El solvente utilizado se conoce como eluyente y tambin
influye de manera importante en la separacin; si la muestra es ms afn a la fase lquida,
los tiempos de retencin sern ms cortos. La seleccin de la fase mvil influye
directamente en la separacin de las muestras. Los solventes pueden ser de naturaleza
orgnica o acuosa. La fase mvil debe tener algunas caractersticas como:
- No debe alterar la naturaleza de la columna.
- Debe disolver la muestra.
- Debe ser de baja viscosidad.
- Terminada la separacin, debe permitir la recuperacin del soluto de manera
simple.
Cromatografa de Fase Normal:
Esta tcnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase mvil no polar que se utiliza
cuando el analito es polar. El analito polar es retenido por la fase estacionaria polar. La
adsorcin aumenta con la polaridad del analito y la interaccin entre en analito y fase
estacionaria; esto incrementa el tiempo de elucin. La fuerza de interaccin depende no
solo de los grupos funcionales, sino tambin de factores estricos e ismeros estructurales.
El uso de disolventes polares disminuye el tiempo de retencin, mientras que disolventes
hidrfobicos aumentan el tiempo de retencin.
102
Cromatografa de Fase Inversa:
Esta tcnica es la ms comn, en la cual se utiliza una fase estacionaria no polar y una fase
mvil moderadamente polar. El principio bsico de esta tcnica est basado en las
interacciones del disolvente polar, el analito no polar y la fase estacionaria no polar. Las
caractersticas del analito son importantes para sus propiedades de retencin. La adicin de
disolventes polares incrementan el tiempo de retencin y aadir disolventes hidrofbicos lo
disminuyen.
Cromatografa de Intercambio Inico:
Esta tcnica se da cuando la fase estacionaria presenta en su superficie grupos ionizados

capaces de retener selectivamente a iones del signo contrario que circulan en la fase mvil.
Figura 18. Comportamiento de las partculas en la cromatografa de intercambio inico.
Cromatografa de Exclusin por Tamao:
Tambin conocida como cromatografa de gel permanente o cromatografa de gel filtrante.

Esta tcnica separa las partculas en funcin del tamao. En una cromatografa de baja
resolucin y sirve para determinar estructuras terciarias y cuaternaria de protenas, adems
permite averiguar el peso molecular de polmeros sintticos y naturales.
103
Figura 19. Comportamiento de las molculas en la cromatografa de exclusin por
tamao.
INSTRUMENTACIN PARA CROMATOGRAFA (HPLC)
Para realizar un anlisis por cromatografa (HPLC), se necesita disponer de un equipo que
le permita al analista obtener datos confiables que avalen la calidad del procedimiento. En
la actualidad se dispone de equipos para (HPLC) modernos muy sensibles que generan
resultados confiables. El equipo (HPLC) moderno se compone de cinco partes: un sistema
de recipientes especiales para la fase mvil; un sistema de bombas encargado de mantener
constante el flujo de la fase mvil; el sistema de inyeccin que permite introducir la
muestra a trabajar; la columna que tiene la funcin de separar los componentes de la
muestra y el sistema de deteccin de los solutos eluidos, el cual emite una seal que es
transformada para que el analista la pueda comprender.
RECIPIENTES PARA LA FASE MVIL
Los equipos para (HPLC) modernos se encuentran equipados con uno o ms recipientes
especiales de vidrio o de acero inoxidable, cada uno de los cuales contiene entre 200 y 1000
mL de un disolvente. Los recipientes son equipados con un sistema para eliminar los gases
disueltos como oxgeno y nitrgeno, que interfieren considerablemente generando burbujas
en las columnas y en los sistemas de deteccin.
104
Las burbujas generadas provocan ensanchamientos de banda que interfieren en el
funcionamiento del detector. Los desgasificadores son sistemas de purga que permiten
arrastrar los gases disueltos fuera de la solucin mediante finas burbujas de un gas inerte de
baja solubilidad. Con frecuencia el equipo (HPLC) contiene un dispositivo para la
filtracin del polvo y de las partculas slidas en suspensin en los disolventes, para evitar
que estas partculas daen la bomba o los sistemas de inyeccin u obturen la columna. No
todos los equipos (HPLC) cuentan con los desgasificadores, razn por la cual es
conveniente tratar los disolventes antes de introducirlos en los recipientes especiales, la
tcnica utilizada se basa en filtrar al vaco a travs de un filtro (millipore) de tamao de
poro muy pequeo; este tratamiento elimina los gases, as como la materia en suspensin.
SISTEMA DE BOMBAS
Los sistemas de bombeo en la cromatografa (HPLC) deben cumplir algunos requisitos

muy rigurosos que se describen a continuacin:
- Debe generar presiones por encima de 6.000 psi.

- Debe tener un flujo libre de pulsaciones.
- Debe generar un intervalo de caudales de 0,1 a 10 mL/minuto.
- El control y la reproducibilidad del caudal debe ser mejor del 0,5% relativo.
- Los componentes deben ser resistentes a la corrosin (juntas de acero inoxidable
o tefln).
Las altas presiones que generan las bombas de (HPLC) no constituyen un riesgo de
explosin, debido a que los lquidos no son muy compresibles. De este modo, la rotura de
un componente del sistema slo genera una prdida de disolvente. Se utilizan tres tipos de
bombas, cada una con sus propias ventajas y desventajas: bombas recprocas, bombas de
jeringa o de desplazamiento y bombas neumticas o de presin constante.
Bombas Recprocas:
Las bombas recprocas, se utilizan en aproximadamente el 90% de los equipos (HPLC)

modernos. Tienen una pequea cmara en la que el disolvente es empujado por el
movimiento de vaivn de un pistn accionado por un motor de arrastre. Dos vlvulas con
cierre de bola, que se abren y cierran alternativamente, controlan el flujo del disolvente
hacia dentro y hacia afuera de un cilindro.
105
El disolvente est en contacto directo con el pistn; tambin se puede comunicar la presin
al disolvente mediante un diafragma flexible, el cual a su vez se bombea hidrulicamente
por un pistn de vaivn.
Las bombas recprocas presentan la desventaja de producir un flujo pulsado, que se ha de

amortiguar dado que su presencia se manifiesta como ruido en la lnea base del
cromatograma. Entre las ventajas de las bombas recprocas se puede mencionar su pequeo
volumen interno (35 a 400 L), sus altas presiones de salida, su fcil adaptacin a elucin
con gradiente, y sus caudales constantes, los cuales son independientes de la contrapresin
de la columna y de la viscosidad del disolvente.
Figura 20. Estructura interna de la Bomba Recproca para (HPLC).
Bombas de Desplazamiento:
Las bombas de jeringa o desplazamiento consisten generalmente en unas grandes cmaras

como una jeringa, equipadas con un mbolo que se activa por un mecanismo de tornillo
accionado mediante un motor paso a paso. Las bombas de desplazamiento tambin
producen un flujo que tiende a ser independiente de la viscosidad y de la contrapresin.
Adems, el flujo que resulta est libre de pulsaciones. Esta bomba presenta desventajas que
incluyen una capacidad limitada de disolvente (= 250 mL) y una notable incomodidad para
el cambio de disolventes.
106
Figura 21. Estructura interna de la Bomba de desplazamiento para (HPLC).
Bombas Neumticas:
En las bombas neumticas ms simples, la fase mvil se encuentra en un recipiente

plegable colocado en una vasija que puede presurizarse mediante gas comprimido. Las
bombas de este tipo son econmicas y estn exentas de impulsos, aunque tienen una
limitada capacidad y presin de salida, y adems el caudal depende de la viscosidad del
disolvente y de la contrapresin de la columna. Estas bombas no se pueden utilizar en la
elucin con gradiente y estn limitadas a presiones menores de unos 2.000 psi.
SISTEMAS DE INYECCIN DE MUESTRA
El anlisis por cromatografa (HPLC) presenta limitaciones que afectan considerablemente

la precisin de los resultados, el factor limitante en la precisin de las medidas es la
reproducibilidad con que se puede introducir la muestra en la columna. El problema se
acenta en el ensanchamiento de banda que acompaa a la sobrecarga de las columnas. Por
ello, los volmenes que se emplean han de ser muy pequeos (de unas pocas dcimas de
microlitro a tal vez 500 L). Adems, se ha de poder introducir la muestra sin
despresurizar el sistema.
Actualmente el mtodo utilizado para introducir la muestra en cromatografa (HPLC) es la

utilizacin de bucles de muestra. Estos dispositivos son parte integrada del equipo
cromatogrfico y existen bucles intercambiables que permiten la eleccin de tamaos de
muestra desde 5 a 500 L. Con bucles de este tipo se puede introducir la muestra a
presiones de hasta 7.000 psi con una precisin relativa de unas dcimas por ciento.
107
Tambin existen vlvulas de inyeccin de micromuestras, con bucles con volmenes de 0,5
a 500 L. Se observa como la jeringa llena el bucle y la fase mvil pasa de la bomba a la
columna arrastrando la muestra para su posterior anlisis.
Figura 22. Estructura de un bucle utilizado en cromatografa (HPLC).
COLUMNAS PARA CROMATOGRAFA (HPLC)
Las columnas para cromatografa (HPLC), se construyen con tubos de acero inoxidable de
dimetro interno uniforme, aunque en algunos equipos se encuentran tubos de vidrio de
paredes resistentes. La mayora de las columnas para cromatografa (HPLC) tienen una
longitud entre 10 y 30 cm. El dimetro interno de las columnas (4 a 10 mm), y los tamaos
de las partculas de los rellenos son de 5 o 10 m.
En muchas ocasiones, para aumentar la vida de la columna analtica, se coloca delante de

esta una pre-columna que elimina no slo la materia en suspensin y los contaminantes de
los disolventes sino tambin componentes de la muestra que se unen irreversiblemente a la
fase estacionaria.
La composicin del relleno de la pre-columna debera ser semejante a la columna analtica;

sin embargo, el tamao de partcula es mayor para minimizar la cada de presin. Cuando
la pre-columna se contamina se vaca y se rellena de nuevo o se remplaza por otra nueva
del mismo tipo; as la pre-columna se sacrifica para proteger a la columna analtica.
108
En muchas aplicaciones no se necesita un control estricto de la temperatura, y las columnas
trabajan a temperatura ambiente. Sin embargo, cuando se controla la temperatura de la
columna en unas pocas dcimas de grado centgrado, se obtienen mejores cromatogramas.
La mayora de los equipos (HPLC) actualmente contienen hornos para las columnas que
controlan la temperatura de la columna a las dcimas de grado, desde la temperatura
ambiente hasta 100 o 150 C. Para controlar con precisin la temperatura, las columnas
tambin se pueden colocar en camisas con agua que provengan de un bao a temperatura
constante.
TIPOS DE RELLENOS PARA LA COLUMNA
En la cromatografa (HPLC) se utilizan dos tipos bsicos de rellenos para columnas,

pelicular y de partcula porosa. El relleno pelicular consiste en bolas de vidrio o de
polmero, no porosas y esfricas con unos dimetros entre 30 y 40 m. En la superficie de
las bolas se deposita una capa delgada y porosa de slice, almina, de una resina sinttica de
poliestireno-divinilbenceno o de una resina de intercambio inico. Para algunas
aplicaciones se aplica un recubrimiento adicional, constituido por una fase estacionaria
lquida que se mantiene fija por adsorcin. Los rellenos peliculares se utilizan ampliamente
en las pre-columnas y no en las columnas analticas.
Adems de los rellenos peliculares, los rellenos de partculas porosas estn conformados
por micropartculas porosas con dimetros entre 3 y 10 m y con la menor dispersin
posible con respecto a un tamao determinado. Las partculas son de slice, almina, de
una resina sinttica de poliestireno-divinilbenceno o de una resina de intercambio inico,
aunque la slice es el material de relleno ms comn en las columnas del equipo (HPLC),
las partculas de slice se preparan aglomerando partculas de slice de tamaos inferiores al
micrmetro en unas condiciones tales que se formen partculas mayores con dimetros muy
uniformes. Las partculas que resultan se recubren con pelculas orgnicas, que se unen
qumica o fsicamente a la superficie.
109
Figura 23. Partes de la columna para cromatografa (HPLC)
DETECTORES PARA CROMATOGRAFA (HPLC)
Los detectores para cromatografa (HPLC) son de dos tipos bsicos. Los detectores que se
basan en la medida de una propiedad de la disolucin responden a una propiedad del
efluente, tal como el ndice de refraccin, la constante dielctrica, o la densidad, que se
modifica por la presencia de los analitos. Por lo contrario, los detectores basados en una
propiedad del soluto responden a alguna de las propiedades del soluto, como la
absorbancia en el UV, fluorescencia o corriente lmite, que no son inherentes a la fase
mvil.
DETECTORES DE ABSORBANCIA
Los detectores de absorbancia son muy utilizados en los anlisis de compuestos orgnicos,
debido a la sensibilidad y precisin de los resultados. La mayora de detectores de
absorbancia son dispositivos de doble haz, en los que uno de los haces pasa por la cubeta de
flujo y el otro a travs de un filtro que reduce su intensidad; para comparar las intensidades
de los dos haces se utilizan detectores fotoelctricos contrastados.
El detector genera un cromatograma, que consiste en una representacin del logaritmo del
cociente de las dos seales detectadas en funcin del tiempo. Algunos tipos de detectores
de absorbancia son:
110
Detectores de absorbancia ultravioleta con filtros: Los detectores de absorcin
UV ms simples son los fotmetros de filtros con una lmpara de mercurio como
fuente. Lo ms comn en estos casos es aislar la lnea intensa a 254 nm por medio
de filtros; por otra parte las fuentes de deuterio o de filamento de wolframio con
filtros de interferencia tambin proporcionan una forma sencilla de detectar las
especies absorbentes que eluyen de una columna. Algunos equipos modernos se
equipan con discos porta-filtros que contienen varios filtros que pueden
intercambiarse rpidamente para la deteccin de distintas especies a medida que
eluyen. Estos dispositivos son utilizados en la repeticin de los anlisis
cuantitativos cuando se conoce la composicin cualitativa de la muestra, de tal
forma que se puede elegir una secuencia de filtros apropiados.
Detectores de absorbancia ultravioleta con monocromadores: La mayora de los

fabricantes de equipos (HPLC) ofrecen detectores que consisten en un
espectrofotmetro de barrido con una red entre sus componentes pticos. Algunos
se limitan a la radiacin ultravioleta; mientras que otros abarcan la radiacin
ultravioleta y la visible. Se pueden elegir varios modos operacionales, donde se
puede obtener el cromatograma completo a una sola longitud de onda o
alternativamente, cuando los picos que eluyen estn suficientemente separados en el
tiempo, se puede elegir distinta longitud de onda para cada pico. Cuando se desean
los espectros completos con fines de identificacin, se puede parar el flujo del
eluyente durante un tiempo suficiente que permita el barrido de longitudes de onda
de la regin de inters.
Figura 24. Estructura de la celda del detector ultravioleta en cromatografa (HPLC).
111
Las bebidas refrescantes como las gaseosas son refrescos saborizados, efervescentes sin
alcohol, que son consumidas por miles de personas alrededor del mundo. La gaseosas
presentan entre su composicin agua, azcar, edulcorantes, cidos (fosfrico, ctrico,
mlico, tartrico), colorantes, saborizantes, CO2, conservantes y cafena. La cafena es un
estimulante del sistema nervioso central relativamente dbil, tiene efecto diurtico y
estimulante del miocardio. El consumo de cafena relaja los msculos lisos, favorece la
vasodilatacin, contrae las arterias cerebrales, aumenta la secrecin acida del estmago y
potencia la contraccin del musculo esqueltico. La ingesta oral de cafena en el cuerpo
puede ocasionar daos si no se controla la cantidad ingerida; si se ingieren 200 mg de
cafena al da, se puede elevar el humor, causar insomnio, aumentar la irritabilidad, inducir
ansiedad y disminuir el cansancio. Por otra parte si se ingieren cantidades superiores a 200
mg, puede causar intoxicacin en el cuerpo, que se manifiesta con nerviosismo, insomnio,
hiperacidez gstrica, contracciones musculares, confusin y arritmia cardiaca.
Debido a los problemas que puede llegar a ocasionar el consumo de cantidades elevadas de
cafena en el cuerpo humano, el anlisis de cafena en las diferentes bebidas refrescantes
ofrecidas por las grandes empresas, permiten a los consumidores conocer si el producto es
seguro y se encuentra enmarcado dentro de los estndares de calidad que rigen los entes de
salud del estado, que controlan la calidad de los productos de consumo humano. La tcnica
analtica e instrumental ms utilizada por los grandes laboratorios de todo el mundo para
determinar la cantidad de cafena es la cromatografa (HPLC), esta tcnica representa para
los laboratorios una herramienta confiable y precisa, que le permite al analista tener criterio
sobre la muestra analizada.
14.4 PROCEDIMIENTO
a) Solucin acuosa de cafena (100 ppm): Pesar 0,0250 g de cafena y adicionarlo en un

vaso de precipitado con 50 mL de agua grado HPLC, agitar vigorosamente hasta
disolucin, posteriormente transferir la solucin en un baln de 250 mL y llevar hasta
aforo con agua grado HPLC.
b) Preparacin de la Bebida Refrescante: Tomar 50 mL de la bebida y transferir a un

vaso de precipitado, agitar vigorosamente hasta eliminar las burbujas y dejar reposar
por 15 minutos. Nota: La muestra diluida ser preparada con solventes grado HPLC y
filtrada antes del anlisis.
112
14.4.2 Preparacin de patrones para el anlisis:
Preparar las soluciones patrn de cafena de 1, 10, 20, 30, 40 ppm a partir de la solucin
acuosa de 100 ppm
Tabla 8. Preparacin de los patrones de cafena (HPLC) para realizar la curva de calibracin.
N Patrn V solucin patrn de Volumen final en mL Concentracin final

cafena 100 ppm (ppm)
1 0,5 mL 50,0 1
2 5 mL 50,0 10
3 10 mL 50,0 20
4 15 mL 50,0 30
5 20 mL 50,0 40
Cuando se tienen preparados los patrones de cafena y la muestra problema, se realizan los
ajustes respectivos del equipo (HPLC) para el anlisis:
Antes de operar el equipo de HPLC se debe leer el manual de funcionamiento y

tener la instruccin por el encargado del equipo, para tener una idea clara de los
procedimientos a realizar.
Si se tiene conocimiento de la muestra que se desea analizar, ajustar la longitud de
onda de deteccin, de lo contrario analizar un patrn para identificarla.
Ajustes del equipo (HPLC) para el anlisis de cafena:
Longitud de onda de deteccin: 273 nm

Detector (absorcin)
Columna
Disolvente: H2O grado HPLC
Fase mvil: 70% H2O, 30% CH3OH
Flujo: 1 mL/minuto
Volumen inyeccin de la muestra: 5 L
Tiempo de retencin: 4,090 minutos.
113
Cuando se termine de ajustar el equipo (HPLC), se inyectan los patrones de cafena
preparados y se procede a elaborar la curva de calibracin entre la concentracin del patrn
y el rea del pico de absorcin generado por el equipo. La muestra problema se trata de
igual forma, inyectando la muestra en el equipo y realizando el anlisis, con base en la
informacin del rea y altura del pico de mxima absorcin generado, determinar la
concentracin de cafena en la muestra problema.
14.5 CUESTIONARIO
1. Realizar la curva de calibracin entre el rea del pico de mxima absorcin vs

Concentracin de los patrones de cafena.
2. Determinar la concentracin de cafena en la muestra problema y expresar el

resultado en ppm.
3. Obtener el cromatograma de la muestra de cafena en bebida refrescante y explicar

el pico obtenido.
4. Cul es la importancia de la cromatografa (HPLC) en los diferentes campos de la

qumica?
5. Qu se entiende por Cromatograma?
6. Qu interferencias se pueden presentar en un anlisis por cromatografa (HPLC)?
14.6EFERENCIAS BIBLIOGRFICAS


Captulo 9, Cromatografa. 1a ed. Editorial Revert, S. A., Espaa 1983. P 270
RUBINSON Kenneth A., RUBINSON Judith F. Anlisis Instrumental. Captulo

14, Cromatografa Lquida. Editorial Prentice Hall, 2000. P 636
114
Fundamentos de Qumica Analtica. 8a Edicin. Editorial Revert, 1997. P 985

FLORIDA INTERNATIONAL UNIVERSITY, Laboratory Manual Instrumental

Analysis Laboratory. Department of Chemistry and Biochemistry, Spring 2007.
PRYDE A. and GILBERT M. T. Applications of High Performance Liquid

Chromatography. Kluwer, the language of science. London, 1979.

Cromatografa Lquida de alta eficiencia, Equipos para anlisis (HPLC), Agilent

Technologies. disponible en <URL: http://www.home.agilent.com/agilent/home.
jspx?cc=CO&lc=eng
115
PRCTICA N 15
CROMATOGRAFA DE GASES, ANLISIS DE UNA MEZCLA DE

HIDROCARBUROS
15.1 OBJETIVOS
Establecer los principios que rigen la cromatografa de gases.

Conocer los componentes de un equipo para cromatografa de gases.
Comprender el manejo del equipo de cromatografa de gases para analizar mezclas.
Obtener el cromatograma de la mezcla de sustancias.
Analizar el cromatograma de la mezcla e identificar sus componentes mediante los
tiempos de retencin. (HICE CAMBIOS)
Matraces aforados de 100 y 50,00 Solucin patrn de Tolueno

mL Solucin patrn de Isooctano
Vaso de precipitado de 250 mL Solucin patrn de Ciclohexano
Pipetas aforadas y graduadas Solucin patrn de n-heptano
Micro-pipeta (L) Solucin patrn de Acetato de etilo
Equipo para cromatografa de gases Mezcla problema
con detector de ionizacin de llama Diclorometano
(FID), y software Clarity Lite
En cromatografa de gases (GC), la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una

columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de un gas
inerte. La fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la
de transportar el analito a travs de la columna cromatogrfica. Existen dos tipos de
cromatografa de gases:
116
La cromatografa gas-slido (GSC): Se produce la retencin de los analitos en
una fase estacionaria slida como consecuencia de la adsorcin fsica. La
cromatografa gas-slido ha tenido una aplicacin limitada debido a la retencin
semipermanente de las molculas activas o polares y a la obtencin de picos de
elucin con colas muy significativas (como consecuencia del carcter no lineal del
proceso de adsorcin), de modo que esta tcnica no ha encontrado una gran
aplicacin excepto para la separacin de ciertas especies gaseosas de bajo peso
molecular.
La cromatografa gas-lquido (GC): Se basa en el efecto de separacin cuando

una mezcla gaseosa en un gas portador, pasa a ritmo uniforme sobre o a travs de
una fase liquida que est extendida sobre un slido, en forma tal, que ofrece una
superficie lquida muy elevada en un volumen pequeo. Como resultado de la
solubilidad selectiva en la fase lquida estacionaria, los constituyentes de la mezcla
se mueven a travs de la columna por medio del gas portador, a diferentes
velocidades y tienden a separarse en bandas distintas. El gas seleccionado como
portador es siempre una substancia como el helio o el nitrgeno, que no puede ser
retenido apreciablemente por el lquido.
INSTRUMENACIN PARA CROMATOGRAFA DE GASES (GC)
La cromatografa de gases (GC), se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases, el cual consta

de diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de la muestra, la
columna (generalmente dentro de un horno) y el detector. Este equipo bsicamente
presenta mdulos ensamblados que deben:
Proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase mvil).
Permitir la introduccin de los vapores de la muestra en la corriente del gas que
fluye.
Contener la longitud apropiada de fase estacionaria.
Mantener la columna a la temperatura apropiada.
Detectar los componentes de la muestra conforme eluyen de la columna
Proveer una seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada
componente.
117
Figura 25. Estructura interna del equipo para cromatografa de gases (gas portador,
sistema de inyeccin, columna y detector).
GAS PORTADOR
Entre los gases portadores, que deben ser qumicamente inertes, para prevenir su reaccin
con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, el nitrgeno,
hidrogeno, argn y dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende del
tipo de detector empleado. Con el suministro del gas se encuentran asociados los
reguladores de presin, manmetros y medidores de caudal. Adems, el sistema de gas
portador contiene un tamiz molecular para eliminar el agua u otras impurezas.
Los caudales se controlan normalmente mediante un regulador de presin de dos niveles

colocados en el cilindro del gas, y algn tipo de regulador de presin o regulador de flujo
instalado en el cromatgrafo (GC). Las presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo
que da lugar a caudales de 25 a 150 mL/minuto (en columnas de relleno) y de 1 a 25
mL/minuto (en columnas capilares). Para comprobar el caudal se puede utilizar un
rotmetro o un simple medidor de pompas de jabn, el cual da una medida exacta del
caudal volumtrico que entra a la columna.
118
SISTEMA DE INYECCIN DE MUESTRA
La inyeccin de la muestra en cromatografa de gases es un apartado crtico, ya que se debe

inyectar una cantidad adecuada y debe introducirse de tal forma (como un tapn de
vapor) que sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se
da con cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado actualmente emplea una
microjeringa (de varios microlitros de capacidad) para introducir el analito en una cmara
de vaporizacin instantnea. Esta cmara debe estar a 50 C por encima del punto de
ebullicin del componente menos voltil, y est sellada por una junta de goma o de silicona
(septa o septum).
Para las columnas analticas ordinarias, el tamao de la muestra vara desde unas pocas
dcimas de microlitro a 20 L. Las columnas capilares exigen muestras mucho menores;
en estos casos se emplea un sistema divisor de la muestra que permite pasar a la cabeza de
la columna solamente una pequea fraccin de muestra, desechndose el resto.
Figura 26. Seccin transversal de un inyector de vaporizacin instantnea.
119
CONFIGURACION DE LA COLUMNA Y DEL HORNO PARA LA COLUMNA
En la cromatografa de gases (GC) se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o

de relleno y la tabulares abiertas o capilares. Las columnas capilares son las ms utilizadas
debido a su mayor rapidez y eficiencia. Las columnas capilares, son de dos tipos bsicos,
denominados columna abierta de pared recubierta (WCOT) y columna abierta recubierta
con soporte (SCOT). Las columnas abiertas de pared recubierta son simplemente capilares
con la pared interna recubierta de una fina capa de fase estacionaria. En las columnas
abiertas de soporte recubierto, la superficie interna del capilar esta revestida de una capa
delgada de un material de soporte, tal como tierra de diatomeas. La longitud de estas
columnas es variables, de 2 a 50 metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio,
slice fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un
horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicoidal con dimetros de 10 a 30 cm,
dependiendo del tamao del horno.
La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de

separacin de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisin de
dcimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullicin del analito o
analitos, y por lo general se ajusta un valor igual o ligeramente superior para l. Para estos
valores, el tiempo de elucin va a oscilar entre 2 y 40 minutos. Si se tienen varios
componentes con diferentes puntos de ebullicin, se ajusta la llamada rampa de
temperaturas con lo cual sta va aumentando ya sea de forma continua o por etapas; en
muchas ocasiones, el ajustar correctamente la rampa puede significar separar bien o no los
diferentes analitos. Es recomendable utilizar temperaturas bajas para la elucin, pero
conforme la temperatura es mayor la elucin es ms rpida, pero corriendo el riesgo de
descomponer el analito.
Figura 27. Columnas utilizadas en cromatografa de gases (GC).
120
SISTEMA DE DETECCIN (DETECTOR)
El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de determinar cundo ha salido el

analito por el final de la columna. Las caractersticas de un detector ideal son:
Adecuada sensibilidad, es necesario que pueda determinar con precisin cundo

sale analito o cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y
10-15 g/s de analito.
Buena estabilidad y reproducibilidad.
Respuesta lineal para los solutos que se extiende a varias rdenes de magnitud.
Intervalo de temperaturas de trabajo comprendido desde la temperatura ambiente
hasta 400 C.
Tiempo de respuesta corto que sea independiente del caudal.
Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o respuesta selectiva y altamente
predecible para un reducido nmero de analitos.
No debe destruir la muestra.
DETECTOR DE IONIZACIN DE LLAMA (FID)
El detector de ionizacin de llama (FID) es uno de los detectores ms verstiles y utilizados

en cromatografa de gases. Se compone de un quemador de hidrogeno/oxgeno, donde se
mezcla el efluente de la columna (gas portador y analito) con hidrogeno. Inmediatamente,
este gas mezclado se enciende mediante una chispa elctrica, producindose una llama de
alta temperatura. La mayora de compuestos orgnicos al someterse a altas temperaturas
pirolizan y se producen iones y electrones, que pueden conducir la electricidad a travs de
la llama. Este hecho se aprovecha estableciendo una diferencia de potencial de unos
cientos de voltios entre la parte inferior del quemador y un electrodo colector situado por
encima de la llama. La corriente generada es baja (del orden de los 10-12 A), por lo cual
debe ser amplificada por medio de un amplificador de alta impedancia.
El proceso de ionizacin que se da en la llama es complejo, pero se puede aproximar el

nmero de iones producidos al nmero de tomos de carbono reducidos en la llama. El
detector de ionizacin de llama responde al nmero de tomos de carbono que entra en el
detector por unidad de tiempo, por ello, es ms un detector sensible a la masa, que un
sistema sensible a la concentracin.
121
Existen algunos grupos funcionales, tales como carbonilo, alcohol, halgeno y amina,
originan en la llama pocos iones o prcticamente ninguno. Adems, el detector es
insensible a los gases no combustibles como H2O, CO2, SO2. Estas propiedades hacen del
FID uno de los detectores ms utilizados para el anlisis de la mayora de compuestos
orgnicos, incluyendo aquellos que estn contaminados con agua y con xidos de nitrgeno
y de azufre. La insensibilidad del FID hacia el agua le permite ser muy til en la deteccin
de contaminantes en muestras naturales de agua.
Figura 28. Representacin estructural de un detector de ionizacin de llama (FID).
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
Se basa en los cambios en la conductividad trmica de la corriente de gas ocasionados por

la presencia de las molculas del analito. Este dispositivo se denomina, a veces,
catarmetro, el cual presenta un sensor que consiste en un elemento calentado
elctricamente cuya temperatura, a una potencia elctrica constante, depende de la
conductividad trmica del gas circundante.
122
El elemento calentado puede ser un hilo fino de platino, oro, wolframio o tambin, un
termistor [2] semiconductor. La resistencia del hilo o del termistor tiene un coeficiente de
temperatura negativo. Para la configuracin de los componentes del detector se emplean
dos pares de elementos, uno de los pares se coloca en el flujo del efluente de la columna, y
el otro en la corriente de gas previo a la cmara de inyeccin de la muestra.
Figura 29. Representacin estructural del detector de conductividad trmica (TCD).
OTROS DETECTORES UTILIZADOS EN CROMATOGRAFA DE GASES
Adems de los detectores de ionizacin de llama (FID) y el detector de conductividad

trmica, que son ampliamente utilizados en la actualidad, existen otros detectores como:
Detectores de quimioluminiscencia del azufre (SCD): Se basa en la reaccin

entre ciertos compuestos azufrados y el ozono. La intensidad de fluorescencia
resultante es proporcional a la concentracin de azufre. En este detector el eluyente
se mezcla con hidrogeno y aire, para luego mezclarse con el ozono y medir la
intensidad de emisin resultante.
2
Un termistor es un sensor resistivo de temperatura; su funcionamiento se basa en la variacin de resistencia
elctrica que presenta un semiconductor con la temperatura.
123
Detector de captura de electrones (ECD): El efluente de la columna pasa sobre un
emisor (nquel-63), un electrn del emisor provoca la ionizacin del gas portador
(con frecuencia nitrgeno) y la produccin de una rfaga de electrones. De este
proceso de ionizacin, en ausencia de especies orgnicas, resulta una corriente
constante entre un par de electrodos. Sin embargo, la corriente disminuye
significativamente en presencia de molculas orgnicas que tienden a capturar
electrones. El detector de captura de electrones es de respuesta selectiva, siendo
muy sensible a las molculas que contienen grupos funcionales electronegativos
tales como halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitro. El detector de captura de
electrones es ampliamente utilizado para el anlisis de muestras medioambientales,
como el caso de los pesticidas y herbicidas.
Detector de emisin atmica (AED): El efluente se introduce en un plasma de

helio obtenido con microondas, que se acopla a un espectrmetro ptico de emisin
de diodos en serie. El plasma es suficientemente energtico como para atomizar
todos los elementos de una muestra, excitarles, y as obtener sus espectros de
emisin atmica caractersticos.
LA FASE ESTACIONARIA
Las propiedades deseables para una fase lquida inmovilizada en una columna para
cromatografa de gases comprenden:
- Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al menos

100C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno.
- Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin.
- Baja reactividad.
- Caractersticas de disolventes.
Existen diferentes disolventes con caractersticas ideales, para elegir uno, se debe tener en
cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor polaridad
deber tener la fase estacionaria. Algunas fases estacionarias utilizadas actualmente son:
Polidimetilsiloxano, fase no polar de uso general para hidrocarburos, aromticos,
drogas, esteroides, entre otras.
Poli (fenilmetidifenil) siloxano (10% fenilo), para esteres metlicos de cidos
grasos, alcaloides, drogas y compuestos halogenados.
Poli (fenilmetil) siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides, pesticidas y glicoles.
124
Poli (trifluoropropildimetil) siloxano, para aromticos clorados, nitroaromticos,
bencenos alquilsustituidos.
Polietilenglicol, para compuestos como glicoles, alcoholes, teres, aceites
esenciales.
Poli (dicianoalildimetil) siloxano, para cidos graos poliinsaturados, cidos libres y
alcoholes.
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA DE GASES (GC)
La cromatografa de gases es una de las tcnicas instrumentales de separacin ms eficaces

que se conocen actualmente; cada componente de una muestra suministra tres unidades de
informacin: posicin, altura y anchura de los picos en el cromatograma. La posicin, un
solo parmetro expresado como dato de retencin, suministra la informacin cualitativa y
los otros proporcionan la informacin cuantitativa.
Anlisis Cualitativo: Se basa en los tiempos de retencin generados en el

cromatograma por las sustancias contenidas en una muestra. Es un medio excelente
para confirmar la presencia o ausencia de un supuesto componente en una mezcla,
siempre que se disponga de un patrn. Tras la adicin del compuesto conocido a la
muestra, el cromatograma no debe presentar ningn pico nuevo, y debe observarse
el aumento de alguno de los picos ya existentes.
Anlisis Cuantitativo: Se basa en la comparacin del rea o altura del pico del
componente de inters con la de estndares de esta sustancia de concentracin
conocida. En los anlisis basados en altura de pico se requiere que la anchura de los
picos no sufra modificaciones durante el tiempo necesario para obtener los
cromatogramas de la muestra y los estndares para obtener resultados exactos. Por
ello es mejor el anlisis basado en el rea del pico, parmetro independiente de los
efectos de ensanchamiento.
125
15.4 PROCEDIMIENTO
15.4.1 Preparacin de las Soluciones Patrn:
Realizar los clculos necesarios para preparar las soluciones patrn de (tolueno, isooctano,
n-heptano, acetato de etilo y ciclohexano) componentes de la mezcla problema, para
identificar cada componente en el cromatograma teniendo en cuenta el tiempo de retencin
para cada sustancia.
Cuando se tengan preparadas las soluciones patrn y la muestra problema, se realizan los
ajustes respectivos del equipo para cromatografa de gases (GC):
Antes de operar el equipo de cromatografa de gases (GC) se debe leer el manual de

funcionamiento y recibir la instruccin por parte del encargado de su uso y
mantenimiento.
La mezcla problema se encuentra disuelta en diclorometano.
Inyectar la muestra problema (mezcla de hidrocarburos), en el equipo de cromatografa
de gases y obtener el cromatograma de la muestra.
Inyectar cada solucin patrn en el equipo de cromatografa de gases y obtener el
cromatograma de cada uno.
Basndose en los tiempos de retencin obtenidos en los cromatogramas de las
soluciones patrn, identificar los picos generados por el cromatograma de la muestra
problema (mezcla de hidrocarburos).
Ajustes del equipo de Cromatografa de gases (GC) para el anlisis:
Equipo de cromatografa de gases

Gas portador: Argn
Columna: Polar
Fase estacionaria: 5% Fenilmetilcilicona o Poli (fenilmetil) siloxano
Detector: ionizacin de llama (FID)
Temperatura Horno: 1 min 30C; 3 min 40C; 5 - 15 min 90C.
Solvente: Diclorometano
Volumen inyeccin de la muestra: 1 L
126
15.5 CUESTIONARIO
1. Analizar el cromatograma de la muestra problema (mezcla de hidrocarburos) y

evaluar los tiempos de retencin de los componentes de la mezcla.
2. Analizar los cromatogramas generados por los patrones individuales e identificar los
componentes de la muestra problema basndose en los tiempos de retencin.
3. Cul es la importancia de la cromatografa de gases (GC) en la industria?
4. Qu entiende por adsorcin y absorcin?
5. Qu interferencias se pueden presentar en un anlisis por cromatografa de gases

(GC)?
6. Las columnas para cromatografa de gases estn revestidas por una delgada capa
con un material de soporte conocido como tierra de diatomeas. Qu materiales de
soporte son conocidos actualmente?


Captulo 12, Cromatografa de gases. 1a ed. Editorial Revert, S. A., Espaa, 1983.
P 348

Prentice Hall, 2000. P 680
VALCRCEL Cases M., GMEZ Hens A. Tcnicas Analticas de Separacin.

Captulo 19, Cromatografa de gases. 1a ed. Editorial Revert, S. A., Barcelona,
1988.
127
Atomic Absorption Analysis of Calcium in Milk.
FLORIDA INTERNATIONAL UNIVERSITY, Laboratory Manual Instrumental

Analysis Laboratory. Department of Chemistry and Biochemistry, Spring 2007.

ENCYCLOPEDIA BRITANNICA, Cromatography, estudio de la tcnica y

aplicaciones. Disponible en <URL: http://www.britannica.com/EBchecked/topic/11
5917/chromatography
LINDE, The Linde Group. Gas Chromatography, especificaciones de la tcnica

cromatografica. Disponible en <URL: http://hiq.linde-gas.com/international/web/lg
/spg/like35lgspg.nsf/docbyalias/anal_gaschrom
128

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MANUAL DE PRCTICAS DE

JAIRO ALBERTO VILLAMIZAR GELVEZ

DORA CECILIA RODRIGUEZ ORDOEZ

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

El autor del trabajo expresa sus agradecimientos a la Universidad Francisco de Paula

PRCTICA N 1 NORMAS DE SEGURIDAD, ORGANIZACIN DE

PRCTICA N 2 TRATAMIENTO ESTADSTICO DE DATOS 19

PRCTICA N 3 DETERMINACIN POTENCIOMTRICA DE LA ACIDEZ

PRCTICA N 4 DETRMINACIN DE ALCOHOL ETLICO POR

PRCTICA N 5 POLARIMETRA (ROTACIN ESPECFICA DE

PRCTICA N 6 DETRMINACIN DE HIERRO (Fe), POR EL MTODO

PRCTICA N 7 DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE

PRCTICA N 8 ADITIVIDAD DE ABSORBANCIAS, DETERMINACIN

PRCTICA N 9 DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CAFENA EN

PRCTICA N 11 ESPECTROSCOPIA INFRARROJA, APLICACIN DEL

PRCTICA N 12 ANLISIS INFRARROJO, PREPARACIN DE MUESTRAS

PRCTICA N 13 DETERMINACIN DE HIERRO Y MAGNESIO POR

PRCTICA N 14 CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICIENCIA

PRCTICA N 15 CROMATOGRAFA DE GASES, ANLISIS DE UNA

Tabla 1. Resultados obtenidos de la titulacin del Biftalato de potasio (KHP) 24

Tabla 2. Preparacin de los patrones de Fe+2 para el anlisis. 46

Tabla 3. Preparacin de patrones para el anlisis de fsforo en suelos agrcolas 53

Tabla 4. Preparacin de los patrones de cafena para realizar la curva de calibracin 64

Tabla 5. Preparacin de los patrones para la adicin de un estndar 69

Tabla 6. Propiedades de la llama en Absorcin Atmica. 92

Tabla 7. Preparacin de los patrones para el anlisis por absorcin atmica 96

Tabla 8. Preparacin de los patrones de cafena (HPLC) para realizar la curva de

Figura 1. Representacin de los errores sistemticos y aleatorios 21

Figura 2. Montaje utilizado para realizar una valoracin o titulacin qumica. 23

Figura 3. Valoracin potenciomtrica de una solucin de cido actico vs NaOH 28

Figura 4. Grficas representativas de la determinacin potenciomtrica de una

Figura 5. Principio de refraccin, incidencia de un haz de luz 34

Figura 6. Regin Infrarroja del Espectro Electromagntico 77

Figura 7. Representacin de los picos y bandas de absorcin en un espectro IR 77

Figura 8. Celda desmontable (1-ventanas; 2-anillo espaciador; 3-anillos

Figura 9. Celda para anlisis IR cuantitativo de lquidos 79

Figura 10. Celda para el anlisis IR de gases 80

Figura 11. Troquel utilizado para fabricar los discos de KBr 81

Figura 12. Componentes de un Espectrofotmetro de Absorcin Atmica 88

Figura 13. Lmpara de ctodo hueco. 89

Figura 14. Quemador-Nebulizador de premezclado o flujo laminar 90

Figura 15. Regiones de la llama en un quemador de premezclado o flujo laminar 93

Figura 16. Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro de absorcin atmica

Figura 17. Diagrama de flujo para un anlisis por Absorcin Atmica 97

Figura 18. Comportamiento de las partculas en la cromatografa de intercambio

Figura 20. Estructura interna de la Bomba Recproca para (HPLC) 106

Figura 21. Estructura interna de la Bomba de desplazamiento para (HPLC) 107

Figura 22. Estructura de un bucle utilizado en cromatografa (HPLC). 108

Figura 23. Partes de la columna para cromatografa (HPLC) 110

Figura 26. Seccin transversal de un inyector de vaporizacin instantnea 119

Figura 27. Columnas utilizadas en cromatografa de gases (GC) 120

Figura 28. Representacin estructural de un detector de ionizacin de llama (FID) 122

La ciencia encargada de la separacin y determinacin de especies qumicas (analitos), con

Debido a que los laboratorios de qumica de la Universidad Francisco de Paula Santander

NORMAS DE SEGURIDAD, ORGANIZACIN DE TRABAJOS DENTRO

Conocer las normas de seguridad y comportamiento en el laboratorio de Anlisis

Para trabajar en el laboratorio de anlisis instrumental, es necesario el entendimiento de las

1.3 FUNDAMENTO TERICO

1.3.1 NORMAS GENERALES PARA EL LABORATORIO DE ANLISIS

Para realizar las prcticas es indispensable vestir la bata de laboratorio y la

1.3.2 NORMAS DE SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO DE ANLISIS

1.3.3 IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS PELIGROSAS

Para cualquier producto qumico utilizado en el laboratorio se debe tener la informacin