EXTRACCION DE ADN EN HIGADO DE POLLO

Objetivo

En esta prctica realizaremos la extraccin del ADN de clulas animales, su estructura

fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en
el ncleo celular de largusimas cadenas de esta molcula.

Material necesario

Tejido animal (hgado de pollo)

Trozo de tela para filtrar
Pipeta
Alcohol 96

solucin de detergente
Varilla de vidrio
Solucin de NaCl 2M
Embudo
Probeta
Vaso de precipitados
Detergente tipo lavavajillas

Fundamento

El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido
a protenas para formar la cromatina. As, para extraerlo ser necesario homogeneizar
el tejido y romper las clulas para separar el ncleo, romper tambin la envoltura
nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las protenas que lo
protegen y, por ltimo, precipitarlo para extraerlo de la solucin. Una vez realizado
esto, el ADN aparecer como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la
varilla de vidrio. Por ltimo, se puede situar sobre un porta, teirlo con un colorante
bsico y observarlo al microscopio.

Procedimiento

1. Triturar en fro la muestra de hgado en el mortero junto con arena o mediante

la batidora para homogeneizar el tejido. Este procedimiento tambin rompe
muchas clulas liberando su contenido. Parecer ser ms eficaz el empleo de
una batidora, con la que se obtiene una mezcla ms homgnea y fcil de filtrar
despus.

2. Aadir unos 10 ml de agua destilada o, en su defecto,y remover

suavemente pero mezclando a fondo.
3. Filtrar varias veces el resultado a travs de un pedazo de tela. Un pauelo viejo
de algodn va bien. Este filtrado es lento y difcil, pero retendr en el pauelo
restos de tejido.

4. Aadir al filtrado resultante un volumen igual de solucin de NaCl 2M. Esta

disolucin tan concentrada tiene varios efectos. En primer lugar provoca un
choque osmtico que es capaz de romper algunas membranas no afectadas
por el tratamiento anterior. Adems, las cargas positivas de los iones
Na+ atraern luego las cargas negativas del ADN mantenindolo en la
disolucin.

5. Aadir ahora 1 ml de detergente y remover suavemente, mezclando bien pero

evitando que se forme espuma. Dejando reposar un minuto cada vez.
El detergente completa la rotura de las membranas al disolver y separar los
lpidos de las mismas. Tambin interviene en la separacin de las protenas
que rodean al ADN. Si es posible volver a filtrar, se obtendr una solucin ms
limpia de restos.
6. Con los pasos anteriores hemos conseguido tener el ADN libre en la disolucin
acuosa (la cual contendr tambin diversos restos tisulares y celulares en
funcin de la bondad del filtrado). A continuacin hay que separar el ADN
hacindolo precipitar.

7. Ahora se aaden alcohol. Es muy importante evitar que se mezclen ambas

soluciones, pues ser en la interfase donde precipitar el ADN.
1. El ADN ir apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma
de grumos blancos.