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NORMA TCNICA NTC


COLOMBIANA 5698-1

2009-08-19

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS Y ALIMENTOS


PARA ANIMALES. METODO HORIZONTAL PARA
LA ENUMERACiN DE MOHOS Y LEVADURAS.
PARTE 1: TCNICA DE RECUENTO DE
COLONIAS EN PRODUCTOS CON ACTIVIDAD
ACUOSA (Aw) SUPERIOR A 0,95

~~.
I ONTEC
E: MICROBIOLOGY OF FOOD ANO ANIMAL FEEDING
STUFFS - WITH HORIZONTAL METHOD FOR THE
ENUMERATION OF YEASTS ANO MOULDS. PART 1:
COLONY COUNT TECHNIQUE IN PRODUCTS WATER
ACTIVITY GREATER THAN 0,95.

CORRESPONDENCIA: esta norma es idntica (IDT) con respecto


a su documento de referencia, la norma
ISO 21527-1:2008.

DESCRIPTORES: microbiologa de alimentos; mtodo


horizontal; enumeracin de levaduras;
enumeracin de mohos; recuento de
colonias.

I.C.S.: 07.100.30

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y ce~ificac(i~91~IC~2~~~~


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Prohibidasu reproduccin Editada2009-09-01


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.
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~ector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representacin de todos los


est garantizada por los C en el proceso de Normalizacin Tcnica
caracterizado por la pa de Consulta Pblica, este ltimo

de que responda en

de esta norma a
3MC
ALlM
TORIO LTDA
ALPINA
ANNAR D
ARCHIVO
TORIO DE
MAYOR DE BO
ASBIOQUIM LTDA
BIANLlSIS
BIOCONTROL LTOA
BIOQUILAB LTOA
BIOTRENDS LABORATOR
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA
CARULLA VIVERO SA OBILOGOS ASOCIADOS
CONGELAGRO SA ULAB LTDA
CASA LUKER S.A PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
REPES & WAFFLES SA PURIFICACiN Y ANLISIS DE FLUIDOS
ONGELAGRO LTDA
ORPOLAC - CORPOICA QUALA SA
COKAPKA SECRETARIA DISTRITAL DE SALUD DE
NZIPN LABORATORIO SA BOGOT
SUIZO SA
I DUSTRIAS ALIMENTICIAS ZEN SA
I DUSTRIA PRODUCTORA DE ACEITES UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
ENOVABLES UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
VECOL SA
I STITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
CIONAL DE COLOMBIA VlLASECA LTDA
VITROFARMA SA
Adems
. . de las ant enores
. e C
sIgUientes empresas'. ,n onsulta Pblica el Proyect o se puso a consideracin de las

ACEGRASAS S.A. EMPRESA DE ACUEDUCTO


ACUAGYR S.A. E S P ALCANTARILLADO DE BOGOT E S P Y
ALGARRA SA .. . FBRICA DE ESPECIAS . . y
ALIMENTOSCRNICOSSA PLANTASUIZO CONDIMENTOS EL REY S A
AQUALAB FRUGAL S.A. ..
AREPAS DOA ALEJA INSTITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
ASEBIOL NACIONAL DE COLOMBIA
ASINAL
ASOCIACiN COLOMBIANA DE CIENCIA JOHNSONDIVERSEY
Y TECNOLOGIA COSMTICA - ACCYTEC KLlK S.A
LABORATORIO A.B.B.A
ASOCIACiN COLOMBIANA DE
LABORATORIO DE GENTICA Y
MICROBIOLOGIA BIOLOGIA MOLECULAR
BAVARIA S.A. LA CAMPIA
BECTON DICKINSON DE COLOMBIA MULTIDIMENSIONALES S.A.
LTDA. NESTL DE COLOMBIA S.A.
CERVECERIA LEONA S.A. QUIKLTDA.
COLOMBINA SA ROCHE DIAGNOSTICS
CORPORACiN PARA EL AVANCE DE LA SERVICIOS DE LABORATORIO CLiNICO
MICROBIOLOGIA y LA MICROSCOPIA LTDA.
-MICROS- UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN
DUPONT QUALlCON

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normas internacionales, regionales Y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCiN DE NORMALIZACiN
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

CONTENIDO

Pgina

NTRODUCCIN 1

ALCANCE . . 2

REFERENCIAS N ....., 2

.................................... 2

5 ...................
3

51

52 ............................... 4

6. . 6

7. MUESTREO . . 6

8. PREPARACiN DE LA MU YO 7

9. PROCEDIMIENTO 7

9. PORCiN DE ENSAYO, SUSPENSiN INICIAL Y DILUCIONES 7

9. INOCULACiN E INCUBACiN 7

9. RECUENTO Y SELECCiN DE LAS COLONIAS PARA LA CONFIRMACiN 8

10 EXPRESiN DE RESULTADOS Y LMITES DE CONFIANZA 8


NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

Pgina

11. INFORME DE ENSAYO 8

BIBLIOGRAFA 10

DOCUMENTO DE REFERENCIA 11
NTC 5698-1

LOGA DE ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES.


DO HORIZONTAL PARA LA ENUMERACiN DE MOHOS Y LEVADURAS
1: TCNICA DE RECUENTO DE COLONIAS EN PRODUCTOS CON
IVIDAD ACUOSA (Aw) SUPERIOR A 0,95

neral de Microbiologa de alimentos


para la enumeracin de mohos y

n actividad acuosa (Aw)

acuosa (Aw)

as aplicaciones del
C 5698-2 pueden no
En este cas ueden utilizar mtodos
es abso necesario por razones
todo el para aplicar el mtodo
en la NTC 5698-2 , en la medida de lo

Es esencial que la se realice con el mximo cuidado para proteger


rario y evitar la contaminacin de la de mohos.

1 de 11
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

1. ALCANCE

La NTC 5698-1 especifica un mtodo horizontal para la enumeracin de levaduras y mohos


viables en productos destinados para consumo humano o alimentacin de animales, que tienen
una actividad de agua superior a 0,95 (huevos, carne, productos lcteos (excepto la leche en
polvo), frutas, verduras, pastas frescas, etc.), por medio de la tcnica de recuento de colonias a
una temperatura de 25 -c
1 -c (referencias [1] y [2]).

Esta parte de NTC no permite la enumeracin de las esporas de mohos, ni la identificacin de


la flora de hongos, el examen de los alimentos para determinar micotoxinas tampoco est
dentro del alcance de esta norma. El mtodo que se especifica en esta parte no es adecuado
para la enumeracin de hongos resistentes al calor, como el Byssochlamys fulva o
Byssochlamys nivea, en frutas y verduras enlatadas o embotelladas.

2. REFRENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicacin de


este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica nicamente la edicin citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la ltima edicin del documento normativo referenciado
(incluida cualquier correccin).

NTC 4491 (todas las partes), Microbiologa de alimentos y alimentos para animales.
preparacin de muestras para ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para anlisis
microbiolgico. Parte 1: Reglas generales para la preparacin de la suspensin inicial y de
diluciones decimales.

NTC 4092 Microbiologa de alimentos y de alimentos para animales. reglas generales para el
anlisis microbiolgico.

NTC 5698-2, Microbiologa de alimentos y productos de alimentacin animal. Mtodo horizontal


para la enumeracin de levaduras y mohos. Parte 2: Tcnica de Recuento de colonias en
productos con Actividad Acuosa (Aw) inferior o igual a 0,95.

GTC 171, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Gua para la preparacin y
produccin de medios de cultivo. Gua general para los ensayos de desempeo de medios de
cultivo.

ISO 8261, Milk and Milk Products. General Guidance for the Preparation of Test Samples, tnltie!
Suspensions and Decimal Dilutions for Microbiological Examinations.

3. TRMINOS Y DEFINICIONES

Para los propsitos de este documento, se aplican los siguientes trminos y definiciones.

NOTA Existen algunas formas intermedias y la distincin entre una levadura (vase el numeral 3.1) y un moho
(vase el numeral 3.2) puede ser arbitraria.

3.1 Levadura. Microorganismo aerbico mesoflico que, a 25 "C usando un medio de agar
micolgico bajo las condiciones descritas en esta NTC, desarrolla colonias (vase el numeral 3.4)
redondas brillantes o mate sobre la superficie del medio, que usualmente tienen un contorno regular y
una superficie ms o menos convexa.

2
NTC 5698-1

Las levaduras dentro, en lugar de sobre un medio, desarrollan colonias redondas, lenticulares.

Moho. Microorganismo filamentoso aerbico mesoflico que, sobre la superficie de un


de agar micolgico bajo las condiciones que se describen en esta NTC, usualmente
rlo,'..,r~nlll", grmenes/propgulas de proliferacin planas o esponjosas (vase el numeral 3.3) o
(vase el numeral 3.4) con estructuras con color fructferas o que forman esporas.

Los mohos dentro, en lugar de sobre un medio, pueden desarrollar colonias redondas, lenticulares.

Propgula. Germen. Entidad viable capaz de crecer en un medio nutritivo.

PLO Clulas vegetativas, grupos de clulas, esporas, cmulos de esporas o una porcin de micelio de

Colonia. Acumulacin visible microbiana, desarrollada sobre o dentro


un medio nutritivo slido a le.

o de cultivo selectivo
una cantidad

do diluciones

ocdurante 5 d. Si es
durante 1 d a 2 d.

:>nr\rrrlcnte, y si as se requiere (para


bacterias) se confirma la identidad de

Se calcula el nmero de por gramo o por mililitro de muestra a


del nmero de colon es que se obtuvieron sobre las placas
leccionadas en niveles de dilucin colonias contables. Si es necesario, los
rlV\hr", y las levaduras se cuentan independientemente.

DILUYENTE Y MEDIO DE CULTIVO

on respecto a la prctica actual de laboratorio, vase la NTC 4491 (todas las partes).

DILUYENTE

Generalidades

la NTC 4491 (todas las partes), ISO 861 y las normas especficas que tratan de los
uctos en cuestin.
3
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

NOTA Es posible adicionar agentes tensoactivos como poli(oxietileno)sorbatitan rnonooleato" sdico [0,05 %
(concentracin de masa)] a los diluyentes para reducir la formacin de grumos de esporas de mohos y conidias
(referencia [2]). .

Excepto para la preparacin especfica de la muestra de ensayo, se recomienda utilizar como diluyente caldo de
agua de peptona al 0,1 % (concentracin de masa).

5.1.2 Composicin del caldo de agua de peptona al 0,1 % (concentracin de masa)

5.1.3 Preparacin del caldo de agua de peptona al 0,1% (concentracin de masa)

Disuelva los componentes en agua, mediante calentamiento, si es necesario.

Si es necesario, ajuste el pH de manera que, despus de la esterilizacin, est en 7,0 0,2 a


25 -c.

5.2 MEDIO DE CULTIVO

5.2.1 Agar de Dicloran rosa de bengala y cloranfenicol (DRBC) (referencias [3] y [4])

5.2.1.1 Composicin

Producto de la digestin enzimtica de tejidos animales y vegetales 5,0 9


D -Glucosa (C6H1206) 10,Og
Dihidrogeno fosfato de potasio (KH2P04) 1,0__a
Sulfato de magnesio (MgS04 . H2O) 0,5 9
Dicloran (2,6-dicloro-4-n itroanilina) 0,002 9
Rosa de bengala 0,025 9
Agar 12ga15ga
Cloranfenicol 0,1 9
~gua, destilada o desionizada 1000 mi
a Dependiendo de la resistencia de gel del agar.

NOTA Teniendo en cuenta la legislacin nacional vigente se puede considerar la utilizacin de medios de cultivo
de la GTC 125; para reportar segn las indicaciones de esta Norma Tcnica Colombiana se debe utilizar el medio de
cultivo referenciado en el mismo.

5.2.1.2 Preparacin

5.2.1.2.1 Generalidades

Elabore una suspensin en agua de todos los ingredientes, excepto el cloranfenicol, y lleva a
ebullicin hasta disolverlos completamente. Si es necesario, ajuste el pH (vase el numeral 6.4)
de modo que despus de la esterilizacin est en 5,6 0,2 a 25 "C.

Agregue 10 mi de una solucin al 1 % (concentracin de masa) de cloranfenicol en etanol y


mezcle. Dispense el medio en cantidades en recipientes (6.5) con capacidad adecuada.
Esterilice llevando a autoclave a 121C durante 15 mino

1)
Tween 80 es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta informacin se brinda
para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobacin de este producto por parte
de ISO.
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

nfre inmediatamente el medio en un bao de agua (6.3) conservado a una temperatura entre
4 "C y 47 "C. Enfre hasta alcanzar temperatura inferior a 50 "C y dispense en cantidades de
5 mi en cajas de Petri estriles (vase el numeral 6.6).

ermita que el medio se solidifique y, si es necesario, seque la superficie de las placas tal
omo se describe en NTC 4092 y GTC 171 (todas las partes).

tilice inmediatamente o almacene en un lugar oscuro, segn la GTC 171 (todas las partes)
asta que se necesite.

RECAUCIN evite la exposicin del medio a la luz ya que los productos de la ruptura citotxica pueden dar
amo resultado una subestimacin de la micoflora en las muestras.

ser un problema (por ejemplo en carnes


rudas), se recomienda clo rtetraciclina (50 mg/I). En este caso,
repare el medio bsico tal lamente con 50 mg de cloranfenicol,
ispnselo en cantidades tambin una solucin al 0,1%
( oncentracin de masa) de agua (relativamente inestable en
lucin, se debe pre . Justo antes de la utilizacin,
dicione 5 mi de io bsico y vierta en las
que causa inhibicin de

pigmentos que
presentes en el
nte solucin de
ZnS04 7H20 19;

n el fin de evitar las placas de agar, se


r omienda la adicin de Te

.1.3 Ensayo de desempe de la calidad del medio de cultivo

.1.3.1 Generalidades

El agar DRBC es un medio slido. La productividad y la selectividad se deben someter a


e sayo de acuerdo con la GTC 171 segn las siguientes especificaciones

5. .1.3.2 Productividad

In ubacin: 5 d a 25 C 1 C
C pas: Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404

2) Ejemplo de un producto disponible en el comercio. Esta informacin se suministra para conveniencia de los
usuarios de esta norma y no constituye una aprobacin del producto por parte de ICONTEC .
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

Mucor racemosus ATCC 42647


o cepas registradas como equivalentes en otras
colecciones de hongos.

Medio de referencia: Lotedel medioSDA (agarde dextrosaSabouraud)ya validado.


Mtodo de control: Cuantitativo
Criterios: Relacin de productividad, PR 0,5
Reaccin caracterstica: Colonias/propgulas/grmenes caractersticos de acuerdo
con cada especie.
5.2.1.3.3 Selectividad

Incubacin: 5 d a 25 -c 1 -c
Cepas: Escherichia coli ATCC 24922 o
Bacillus subtilis ATCC 6633
o cepas registradas como equivalentes en otras colecciones de
bacterias.

Mtodo de control: Cualitativo


Criterios: Inhibicin total

6. EQUIPO Y MATERIAL DE VIDRIO

El equipo desechable es una alternativa aceptable para el material de vidrio reutilizable,


siempre que tenga las especificaciones correctas.

Equipo comn de laboratorio de microbiologa (vase la NTC 4092) y, en particular, el siguiente:

6.1 Incubadora, con capacidad para funcionar a 25 "C 1C.

6.2 Pipeta o micropipeta de descarga total, estriles, con capacidad nominal de 1 mi y


graduadas en divisiones de 0,1 mI.

6.3 Bao de agua, o equipo similar, con capacidad de funcionar entre 44 "C y 47 "C.

6.4 pHmetro, con exactitud de 0,1 unidades de pH a 25 "C.

6.5 Frascos, matraces y tubos, para ebullicin y almacenamiento del medio de cultivo y
para hacer las diluciones.

6.6 Cajas de Petri, estriles, de vidrio o plstico, con un dimetro de 90 mm a 100 mm.

6.7 Microscopio, para diferenciar las levaduras de las clulas bacterianas (campo
luminoso, amplificacin de 250 veces a 1 000 veces).

6.8 Esparcidores, de vidrio o plstico (dimetro inferior a 2 mm y longitud de 80 mm). Es


recomendable que el dimetro no exceda 2 mm con el fin de minimizar la cantidad de muestra
que se adhiere a ellos al final del procedimiento de esparcido.

7. MUESTREO

Es recomendable enviar al laboratorio una muestra representativa. Dicha muestra no debe


haber sufrido daos ni cambios durante el transporte ni el almacenamiento. La muestra de
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RMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

oratorio no debe estar congelada.

El muestreo no es parte del mtodo que se especifica en esta NTC. El muestreo debera
11 arse a cabo de acuerdo con la norma especfica, adecuada al producto en cuestin. Si no
e iste norma especfica, se recomienda que las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre
e e tema.

8. PREPARACiN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

pare la muestra de ensayo segn la NTC 4491 (todas las partes), NTC 4092 y la norma
e ecfica que trate del producto en cuestin. Si no existe norma especfica, se recomienda
q e las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre este tema.

9. PROCEDIMIENTO

9. PORCiN DE ENSA

dilucin primaria) y las diluciones


la norma especfica que trate

mienda usar caldo de


un homogenizador

ipeta, Agite la
partculas que

9.
9..1 Sobre una ), utilizando una pipeta o
ropipeta estril
ida, o 0,1 mi de la su

bre una segunda placa de pipeta o micropipeta estril, transfiera


0, mi de la primera dilucin lquido) o 0,1 mi de la dilucin de 10-2
(o ros productos).

ra facilitar la enumeracin de poblac es bajas de levaduras y mohos, sobre tres de las


e as se pueden dispersar volmenes de hasta 0,3 mi de una dilucin de 10-1 de la muestra, o
d la muestra de ensayo, si es lquida.

pita estas operaciones con diluciones posteriores utilizando una pipeta o micropipeta estril
ra cada dilucin decimal.

Si se sospecha la presencia de mohos de crecimiento rpido, utilice la norma ISO 21527-2[6]

9..2 Disperse el lquido sobre la superficie de la placa de agar con un esparcidor estril
(v ase el numeral 6.8) hasta que el lquido se absorba por completo en el medio.

mbin se puede utilizar la inoculacin de las placas mediante el mtodo de vertido en placa,
ro en este caso la equivalencia de los resultados se debe convalidar en comparacin a la
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

inoculacin sobre la superficie, y la discriminacin y diferenciacin de mohos y levaduras no


son admisibles. El mtodo de esparcido sobre la superficie puede dar enumeraciones
superiores. La tcnica de esparcido de la placa facilita la exposicin mxima de las clulas al
oxgeno atmosfrico y evita el riesgo de desactivacin trmica de las propgulas de hongos.
Los resultados pueden depender del tipo de hongos.

9.2.3 Incube aerbicamente en posicin invertida las placas preparadas (vanse los numerales
9.2.2 y 6.1) a 25 "C 1 "C durante 5 d. Si es necesario, deje las placas de agar en reposo en
luz natural difusa durante los 2 primeros das.

Se recomienda incubar las cajas (vase el numeral 6.6) en una bolsa plstica abierta con el fin
de no contaminar la incubadora en el caso de diseminacin de los mohos fuera de las cajas.

9.3 RECUENTO Y SELECCiN DE LAS COLONIAS PARA LA CONFIRMACiN

Seleccione y cuente las cajas que tienen menos de 150 colonias/propagulas/grmenes. Si el


crecimiento rpido de los mohos causa problemas, realizar conteo a los 2 d y luego a los 5 d.

NOTA 1 Los mtodos de enumeracinpara levadurasy, en especial para los mohos, son imprecisosdado que
consisten en una mezcla de micelio y esporas sexuales y asexuales. Las cantidadesde unidades formadorasde
colonias dependendel grado de fragmentacindel micelio y de la proporcinde esporas capaces de crecer en el
medioen la placa.

NOTA2 A menudose presentala no linealidadde los recuentosde las placasque contienenla dilucin,es decir,
las diluciones de 10 veces de la muestra con frecuencia no dan como resultado reduccionesde 10 veces en los
nmerosde colonias recuperadasdel medio en la placa. Esto se ha atribuido a la fragmentacindel micelio y a la
ruptura de los cmulos de esporas durante la dilucin adems de la inhibicin competitiva cuando hay un gran
nmerode coloniassobre las placas.

PRECAUCiN las esporas de los mohos se dispersanen el aire con gran facilidad. Manipulelas cajas de Pe tri
con cuidadopara evitar el desarrollode coloniassatlitesque ocasionaranuna sobreestimacinde la poblacinen
la muestra.

Si es necesario, realice un examen (vase el numeral 6.9) con microscopio (vase el numeral 6.7)
con el fin de diferenciar entre clulas de levaduras o de mohos y bacterias provenientes de las
colonias.

Cuente las colonias de levaduras y las colonias/propgulas de mohos independientemente, si


es necesario.

Para la identificacin de levaduras y mohos, seleccione reas de crecimiento de hongos y


retrelas para examen con microscopio o realice la inoculacin en un medio adecuado de
aislamiento o de identificacin.

10. EXPRESiN DE RESULTADOS y LMITES DE CONFIANZA

Registre las colonias de levaduras y las colonias/propgulas de mohos independientemente, si


es necesario. Vase la NTC 4092

11. INFORME DE ENSAYO

El informe de ensayo debe incluir por lo menos la siguiente informacin:

a) toda la informacin necesaria para la identificacin completa de la muestra,

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N RMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

b) el mtodo de muestreo utilizado, si se conoce;

e) el mtodo de ensayo utilizado, con referencia a esta NTC;

d) todos los detalles operativos que no se especifican en esta norma o que se consideran
opcionales, junto con los detalles de todos los incidentes que hayan podido tener
influencia en los resultados de ensayo,

e) resultados de ensayo obtenidos.

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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

BIBLIOGRAFA

[1] Bell, C., Neaves, P., Williams, AP. Food Microbiology and Laboratory Practice.
Blackwell, Oxford, 2005. 324 p.

[2J Beuchat, L.R. Media for Detecting and Enumerating Yeasts and Moulds. In: Corry,
J.E.L., Curtis, G.D. w., Baird, R.M, Editors. Handbook of Culture Media for Food
Microbiology, pp. 369-386. Elsevier, Amsterda m, 2003. (progress in Industrial
Microbiology, Vol 37).

[3J Beuchat, L.R., Frandberg, E., Deak, T., Alzamora, S.M, Chen, J., Guerrero, AS.,
Lpez-Malo, A, Ohlsson, t., Olsen, M., Peinado, J.M, Schenurer, J., De Siloniz, MI.,
Tornai-Lehoczki, J. (2001) Performance of Mycological Media in Enumerating
Desiccated Food Spoilage Yeasts: An Interlaboratory study. Int. J. Food Microbiol. 2001,
70, pp 8-96.

[4J King Jr., AD., Hocking, Ad., Pitt, J.I. (1979) Dichloran-Rose Bengal Medium for
Enumeration and Isolation of Moulds from Foods. Appl. Environ. Microbiol. 1979, 37, pp.
959-964.

[5] ISO 6107-6:2004, Water Quality. Vocabulary. Part 6.

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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1

DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Microbiology o, Food and


Animal Feedings Stuffs. Horizontal Method for the Enumeraton of Yeasts and Moulds. Part 1:
Colony Count Technique in Products with Water Actvity Greater than 0,95. Gneva: ISO, 2004,
8 p (ISO 21527-1 :2008 (E).

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