MICROBIOLOGA

norma erazo Sandoval

CAPTULO I

GENERALIDADES

A. INTRODUCCIN

El mundo de los microbios es quiz tan grande como el Universo, basta entender
que un puado de tierra contiene tantos microorganismos como seres humanos en
todo el planeta. El tamao tan pequeo de stos hizo difcil su comprensin por
mucho tiempo sobre su existencia y funcionamiento. El trabajo de muchos
personajes de la ciencia a lo largo de unos 200 aos, dio como resultado el
surgimiento de la microbiologa como ciencia.

La accin de los microorganismos ha condicionado y condiciona la

caractersticas de toda la biosfera, por lo que el conocimiento de la accin de
los microorganismos puede ayudar a comprender el potencial que tienen stos
y su uso en diferentes campos, como en procesos de biodegradacin,
procesos industriales (obtencin de antibiticos, vitaminas, enzimas),
depuracin de aguas y procesos agrcolas como fertilizantes microbianos y
biopesticidas, masa microbiana (protena unicelular y vacunas) .

Actualmente, los microorganismos son manipulados genticamente, mediante a la

aplicacin de las tcnicas de ADN recombinante (Biotecnologa Molecular) en los
seres vivos para la obtencin de productos de inters industrial como la insulina,
hormonas de crecimiento e interfern.

B. CONCEPTO
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Es una Ciencia experimental que se ocupa del estudio de los microorganismos,

como: bacterias, virus, algas unicelulares, protozoos, hongos; de sus interacciones
con otros organismos y con el medio ambiente.

C. LOS PRINCIPIOS DE LA MICROBIOLOGA

1. Generacin espontnea

Las primeras explicaciones acerca del origen y la existencia de estos seres

microscpicos dieron lugar en primer lugar a la teora de la generacin
espontnea, la que se remonta a tiempos tan lejanos como antes de la Era
Cristiana y persisti por ms de 1.500 aos. Doscientos aos antes de ella,
Varro ya propona la posibilidad del contagio de ciertas enfermedades debido a
criaturas invisibles suspendidas en el aire.

Lucrecio (75 A. C.) pensaba que, las cosas surgan de una especie de
tomo o semilla. En el libro VI dice: "As como hay semillas benficas para
nuestra vida, seguramente existen otras que causan enfermedad y muerte",
adems de alguna forma esta primera semilla se haba generado
espontneamente, es decir que podan aparecer organismos vivientes a partir
de materia no viviente. Otros personajes pensaban que las plagas o epidemias
eran gobernadas por fuerzas sobrenaturales. Hipcrates y Galeno
consideraban que las epidemias o vapores venenosos eran generados por
conjunciones planetarias o por alteraciones en la propia Tierra.

El simple razonamiento sobre la existencia de los microbios no constituy la

prueba de su verdadera existencia. sta slo pudo ser demostrada gracias al
descubrimiento de una lente de aumento y fue el holands Antonie van
Leeuwenhoek (1632-1723) quien fabric la primera lente lo suficientemente
poderosa como para observar por primera vez a los organismos unicelulares.
como protozoarios, tanto de vida libre como parsitos de las vsceras de
algunos animales; tambin logr observar hongos filamentosos y levaduras.
Hizo importantes observaciones sobre la estructura de las plantas y descubri
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los espermatozoides de algunos animales. Solo fue hasta 1676 que pudo
observar organismos an ms pequeos, como las bacterias.

2. La controversia de la generacin espontnea

La verdadera comprensin de la importancia de los microorganismos en el

mundo comenz como resultado de la controversia sobre la generacin de
materia viviente a partir de la materia muerta. En un principio existan dos
escuelas bien definidas de pensamiento: aqulla que tomando a Lucrecio al pie
de la letra apoyaba la idea de que se podran generar animales a partir de
materia muerta gracias a la existencia de una "fuerza vital" (generacin
espontnea) y la que deca que la vida slo se genera a partir de vida (en latn
omne vivum ex vivo). Los antiguos que crean en la generacin espontnea
daban recetas para preparar "ratones" a partir de comida en putrefaccin.
Opuestas a este punto de vista eran las ideas de Redi, quien en 1668 mostr
que la aparente generacin espontnea de larvas en la carne provena de la
visita de las moscas que ponan huevecillos sobre ella. Sin embargo,
Needham, otro investigador, hirvi extracto de carne en un frasco, lo tap y
encontr que despus de algunos das aparecan criaturas que se movan.
Esto, llev a pensar que dichos organismos eran realmente producto de la
generacin espontnea. Ms tarde, Spallanzani llev a cabo experimentos
ms cuidadosos con los que demostr que los organismos grandes eran
destruidos al ser hervidos durante 30 segundos, pero los microorganismos
sobrevivan y se desarrollaban aunque los frascos estuvieran hermticamente
cerrados. Despus de muchos ensayos, encontr que si herva los frascos
parcialmente cerrados durante 45 minutos, el contenido se mantena sin
contaminarse casi indefinidamente, y slo si se permita la entrada de aire, el
contenido entraba en putrefaccin rpidamente. Un cocinero francs, llamado
Francois Appert, a principios del siglo XIX desarroll el arte de preservar
comida en frascos sellados para lo cual hirva el contenido dentro del frasco y
los cerraba sin permitir la entrada de aire fresco. Este hallazgo lo llev a fundar
una prspera industria de conservas. Schultze en 1836 conect el recipiente
que contena extracto de carne a otros dos recipientes, uno de los cuales
contena cido sulfrico y el otro potasa; a travs de stos se hizo pasar
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lentamente aire fresco todos los das durante tres meses y el extracto de carne
no se contamin. Theodor Schwann, en 1837, llev a cabo un experimento
similar, pero la diferencia consisti en que el aire fresco se haca pasar por un
recipiente que contena un metal fundido en ebullicin y de esta forma cualquier
materia orgnica se mantena estril en el interior. Sin embargo, cuando se
dejaba pasar aire fresco sin entrar en contacto con el metal fundido, el
contenido se contaminaba invariablemente. La interpretacin que dio Schwann
a sus resultados fue la siguiente: "Los microorganismos que deben estar
presentes en el aire son destruidos al hacer pasar el aire por un lquido
incandescente. Por lo tanto, la putrefaccin sin duda se debe al hecho de que
estos grmenes, al nutrirse y desarrollarse a costa de esta sustancia, la
descomponen y sobreviene la putrefaccin." Ms tarde, la tcnica de estos
experimentos fue simplificada y en 1853 Schroeder y Von Dush descubrieron
que, despus de hervir el recipiente, bastaba con cerrar el extremo abierto con
un tapn de algodn. A partir de estos experimentos se derivan dos
importantes postulados: el primero consiste en hacer un medio de cultivo libre
de microorganismos; el segundo consiste en mantener el medio estril por
largo tiempo y esto se logra evitando la entrada de los microorganismos que
estn suspendidos en el aire. A pesar de estos avances, los resultados de
Spallanzani, Schultze y Schwann no fueron aceptados por la mayora del
pblico cientfico de la poca debido a que muchos microorganismos resisten
temperaturas hasta de l00C durante varias horas. Koch, ms tarde, llev a
cabo estudios sobre el bacilo del ntrax y encontr que las esporas de algunas
bacterias eran altamente resistentes al calor y que slo se destruan a l20C o
ms, y eso al cabo de 20 minutos. Pasteur (1822-1895) fue quien desech la
teora de la generacin espontnea mediante sus experimentos convincentes.
El experimento ms sorprendente fue aquel en el que Pasteur mostr cmo un
medio nutritivo permaneca estril aun cuando estuviera comunicado con el
exterior. Para esto dise unos frascos especiales (cuello de ganso) que
presentaban dobleces en el cuello, donde se retienen los posibles microbios
contaminantes, esto demostr que la putrefaccin proviene del crecimiento de
microorganismos y no de la generacin espontnea. Pasteur y Koch llegaron a
ser considerados hroes por haber rescatado a la humanidad de una de las
ms grandes amenazas, esa era la contaminacin microbiana.
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Otro personaje importante fue el fsico ingls Tindall quien estaba interesado
en los fenmenos de la dispersin de la luz en el agua y en el aire (fenmeno
que hoy se conoce como efecto Tindall), sus observaciones se apoyaron en
los experimentos de Pasteur. Al pasar un rayo de luz observ pequeas
partculas que flotan y l lo atribuy a la presencia de los microorganismos
responsables del fenmeno de putrefaccin. Tindall mostr que el aire normal
contenido en una cmara hermtica presenta una serie de partculas diminutas
que se hacen aparentes al incidir un rayo de luz en la cmara. Sin embargo,
despus de algunas semanas las partculas se depositan en el fondo y el rayo
de luz ya no es dispersado. A esto Tindall lo llam cmara pticamente vaca.
En 1869 demostr que al llenarse una cmara con aire que se forzaba a pasar
a travs de un algodn, se lograba obtener aire pticamente vaco y ste no
iniciaba el proceso de putrefaccin.

En estudios posteriores sobre la fermentacin butrica y la produccin de

vinagre, Pasteur encontr que estos procesos se deban al desarrollo de
microorganismos especficos como son el Vibrion butiricum y el Mycoderma
aceti. Pasteur aclar los conceptos sobre la fermentacin y defini que sta es
el producto de una reaccin que lleva a cabo un microorganismo y que cada
microorganismo tiene su propio tipo caracterstico de fermentacin. Las
levaduras producen alcohol, las bacterias lcticas cido lctico, el vibrin
butrico cido butrico, etctera.

Edward Buchner, ms adelante, logr demostrar en forma accidental que la

fermentacin ocurra en un extracto de levaduras, y comenz a pensar en la
fermentacin como una cadena de reacciones qumicas que podan ocurrir aun
en ausencia del microorganismo.

D. IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DE LA MICROBIOLOGA

La Microbiologa como ciencia tiene aplicaciones importantes que producen

impacto en nuestra vida cotidiana en las reas:
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1. Mdica:

Identificacin de los diferentes microorganismos de importancia mdica.

Prevencin y tratamiento de enfermedades infecciosas causadas por
microorganismos en plantas y animales, incluyendo al hombre.

2. Industrial:

En procesos de fermentacin en la produccin de antibiticos, cidos

orgnicos, aminocidos, enzimas, disolventes, combustibles (Metano, etanol y
otros).
Control de calidad de productos industriales: Biodeterioro de papel, madera,
textiles, pintura y corrosin de metales.

3. De los Alimentos:

Deterioro microbiano de los alimentos.

Mtodos de conservacin de los alimentos.

Produccin de alimentos por mtodos microbiolgicos: Productos

lcteos, fermentacin del pan, bebidas alcohlicas, protena de origen
unicelular.

4. Agrcola:

Fertilidad del suelo.

Enfermedades microbianas de las plantas.

Plaguicidas microbianos.

5. Microbiologa Ambiental:

Ciclos biogeoqumicos (Fijacin del Nitrgeno en el suelo).

Interacciones entre las poblaciones: Simbiosis fijadora de nitrgeno.

Micorrizas.

Bioluminiscencia.
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Los microorganismos en sus hbitats naturales: Aire, Agua, Suelo y

Ambientes Extremos (Aguas Termales, Lagos salados, y otros).
Reduccin de la Calidad y la Contaminacin Ambiental.

Procesos de Biorremediacin.

E. DESARROLLO HISTRICO

En el desarrollo de la ciencia de la Microbiologa se puede distinguir las siguientes

etapas.

1. Emprico.

El proceso de la fermentacin, definido como la transformacin qumica de

compuestos orgnicos con la ayuda de enzimas (sobre todo los producidos por
microorganismos), es muy antiguo. Sumerios y Babilonios antes del ao 6.000 A.C
ya conocan la capacidad de las levaduras para producir alcohol en forma de
cerveza. Los egipcios, en el ao 4.000 A.C descubrieron que el CO2 generado
por la accin de las levaduras (Saccharomyces) poda fermentar el pan. El vino, otro
antiguo producto de fermentacin ya se lo menciona en la biblia en el libro de
Gnesis.

Hacia el siglo XIV D.C la destilacin de bebidas alcohlicas era comn en muchas
zonas del mundo como Francia (Brandy) y Escocia (Whisky). Los
microorganismos han proporcionado alimentos y bebidas durante ms de 8.000
aos, sin que se tuviera nocin de su existencia.

Leeuwenhoek, en el siglo XVIII, fue la primera persona que los describi al

observar, a travs de su microscopio simple. Sin embargo, estas observaciones no
condujeron a ninguna investigacin acerca de las posibles actividades de los
microorganismos.

El papel de las levaduras como agentes fermentadores no fue reconocido hasta

mediados del siglo XIX por Pasteur quien descubri que las levaduras transforman
el azcar en alcohol en ausencia de aire (fermentacin alcohlica).

Emil Christian Hansen, en 1883 obtuvo el primer cultivo puro de levadura

cervecera que denomin Saccharomyces carlsbergensis. Pero, es a finales del
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siglo XIX y gracias al desarrollo de las tcnicas de cultivos puros, se aisla y

distribuye la primera cepa de levadura vnica, la Steinberg 92, para su uso
comercial en la produccin del vino. Con estos trabajos y los de Pasteur, la
fermentacin pasa de ser un arte (resultados imprevisibles) a ser una ciencia
(resultados previsibles).

2. Cientfico

Los progresos realizados en bioqumica a partir del descubrimiento de las enzimas

por Buchner en 1897 fue considerable, pero no comenzaron a aplicarse en la
fermentacin industrial hasta la primera guerra mundial (1914).

En el lado alemn, la obtencin de glicerol para la fabricacin de explosivos se

convirti en una necesidad urgente. El bioqumico alemn Carl Neuberg utiliz
pequeas cantidades de glicerol producidas en los procesos de fermentacin
alcohlica (lgrima del vino). Este cientfico descubri que la adicin de bisulfito
sdico al tanque de fermentacin favoreca la produccin de glicerol, en ese
entonces se produca alrededor de 1.000 toneladas de glicerol al mes.

A los ingleses, por su parte, les haca falta acetona para la fabricacin de
municiones. Este problema fue resuelto por un qumico de origen ruso, Chain
Weizmann, quien desarroll la fermentacin butanol-acetona utilizando la bacteria
anaerobia Clostridium acetobutylicum. Este descubrimiento fue determinante en el
desarrollo de la guerra.

La produccin de cido ctrico por microorganismos tambin tiene su origen en la

primera guerra mundial. Hasta entonces este cido se extraa de los ctricos,
siendo Italia el mayor productor. Cuando los hombres fueron llamados a la guerra,
los cultivos se desatendieron, esto hizo que se incrementara considerablemente el
precio. Por lo que en 1923 se introdujo un proceso microbiano para su obtencin.
El organismo fue Aspergillus niger, el mismo que es hongo aerobio obligado.

En 1928, Alexander Fleming observ que el hongo Penicillium notatum mataba

sus cultivos de la bacteria Staphylococcus aureus. Descubri que el lquido celular
poda inhibir el crecimiento de muchas especies bacterianas, a esto lo llam
penicilina. En la dcada de 1930, algunos qumicos britnicos intentaron aislar la
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penicilina, pero fracasaron debido a su inestabilidad. Fue en 1939, cuando Howard

Florey, Ernest Chain y colaboradores en la Universidad de Oxford obtuvieron la
penicilina en una forma estable y con ello tambin se demostr su impresionante
actividad antibacteriana. El primer ensayo clnico en un paciente de Oxford con
septicemia (Staphylococcus) se llev a cabo el 12 de Febrero de 1941. Debido a la
segunda guerra mundial se consider que Estados Unidos fuera el pas donde
produjera a gran escala.

La necesidad de utilizar tcnicas aspticas para conseguir cultivos puros llev al

desarrollo de los fermentadores con agitacin que hasta la actualidad son los ms
usados.

Otra contribucin al desarrollo de la biotecnologa moderna fue el desarrollo de las

tcnicas de seleccin de razas o cepas. Penicillium notatum produca 2 mg de
penicilina por litro de cultivo, mientras que un mutante de Penicillium chrysogenum
produce actualmente hasta los 20 g/L.

El descubrimiento de la penicilina seal el comienzo de la era de los antibiticos.

Selman Waksman aisl estreptomicina de Streptomyces gryseus. A partir de
entonces se hizo prctica comn el muestreo de suelos para la obtencin de un
gran nmero de aislamientos, de los cuales se han obtenido y se siguen
obteniendo numerosos antibiticos, sobre todo de un grupo de bacterias
denominadas Actinomicetos.

a. Ingeniera Gentica

Despus de la fermentacin de la penicilina no hubo ningn desarrollo significativo

en la microbiologa industrial durante 30 aos.

Al fines de los aos 60 se gener expectativas por utilizar las clulas microbianas
(biomasa) como una fuente de protenas, lo que se denomina Single Cell Protein
(SCP). Sin embargo, los pases desarrollados no necesitaron el SCP por que
generaron cultivos con altos rendimientos, mientras que los pases subdesarrollados
no podan construir plantas industriales para obtener SCP.

En 1973, Stanley Cohen, Herbert Boyer y sus colaboradores desarrollaron la

metodologa necesaria para transferir la informacin gentica de un organismo a
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otro, con lo cual se consigue la capacidad de crear (ms que aislar) cepas
superproductoras como en el caso de la produccin de insulina humana a partir de
la bacteria Escherichia coli en 1978.

b. Futuro

El uso potencial de los microorganismos puede llevar a los siguientes beneficios:

Diagnstico, prevencin o cura de enfermedades infecciosas y genticas.

Aumento del rendimiento de cultivos mediante la creacin de plantas

resistentes a insectos, hongos y virus.

Desarrollo de microorganismos que producirn compuestos qumicos,

polmeros, aminocidos, enzimas y varios aditivos de alimentos.

Eliminacin de contaminantes y residuos txicos del medio ambiente.

Muchos autores mencionan adems, que entre los aspectos positivos de los nuevos
avances, tambin es necesario considerar las consecuencias sociales que pueden
derivarse del uso de esta tecnologa y por ello se plantean las siguientes preguntas:

Puede ser algn organismo modificado genticamente perjudicial para otros

organismos o el medio ambiente?

Puede el desarrollo y uso de los organismos modificados genticamente reducir la

diversidad gentica natural?

Deben modificarse genticamente a los hombres?

Los nuevos diagnsticos invadirn la privacidad de las personas?

Deben tener propietario, los organismos creados por ingeniera gentica?

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CAPITULO II

EL SUELO

A. GENERALIDADES

El suelo es un sistema dinmico, donde existe una gran diversidad de

microorganismos que interactan entre ellos y establecen relaciones de
diversos tipos con plantas y animales. Son responsables de la formacin del
suelo.

El nmero y tipo de microorganismos presentes en el suelo dependen de

diversos factores como: los nutrientes, la humedad, aireacin, temperatura,
pH, prcticas agrcolas, etc.

Su principal accin est relacionada con la transformacin de la materia

orgnica y la disponibilidad de los elementos para las plantas, por lo tanto
tienen mucho que ver con el desarrollo y sanidad de las mismas.

B. IMPORTANCIA ECOLGICA DE LOS MICROORGANISMOS DEL

SUELO

El funcionamiento del suelo depende del ciclo de nutrientes y de la

disponibilidad de energa, y estos de los organismos que viven en l. Los
microorganismos son generadores del flujo de energa y del reciclaje de los
nutrientes.

La fuente primaria de energa proviene del sol; la que es captada por las
plantas y las algas verdes y azules, que la almacenan en forma de
compuestos orgnicos que sirve de alimento para otros organismos. Sin
embargo, la fuente de energa para el suelo, principalmente proviene de los
residuos de los cultivos y en menor proporcin, de animales muertos o de sus
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residuos, donde intervienen los microorganismos edficos, que ayudan a liberar

la energa necesaria para el funcionamiento del sistema suelo

De esta manera la energa va siendo pasada a travs de una cadena o red ,

desde su captacin por las plantas, pasando a los animales, luego a los
organismos que les consumen, para finalmente pasar a los microorganismos
descomponedores del suelo, que van pasando de un nivel de la red al otro.

La vegetacin silvestre y los cultivos toman sus nutrientes gracias a que los
microorganismos edficos los liberan del material descompuesto. Las plantas
interactan con diversos organismos mediante asociaciones temporales
o permanentes, como las de tipo simbitico o de beneficio mutuo y que
muchas veces llegan a ser sinrgicas, como bacterias y hongos que
obtienen el carbono desde las plantas y facilitan el transporte de
nutrientes como el nitrgeno, fsforo y potasio hacia las plantas.

Por otro lado, existe el conjunto de especies que conforman la Comunidad

Recicladota del suelo, integrada por especies trituradoras, descomponedoras,
parasticas, predadoras, patognicas, saprofticas, etc que van desintegrando
los compuesto orgnicos complejos hasta un estado inorgnico. Mientras
mayor sea el nmero de microorganismos, como hongos, bacterias y algas
verdeazules o cianofceas y mesofauna como insectos, caros, moluscos,
colmbolos, ispodos, enqutridos, miripodos y las lombrices, ms
rapidamente se produce la descomposicin y el reciclaje de nutrientes.

Los nutrientes pueden estar temporalmente retenidos en el suelo en el interior

de los organismos, en las partculas minerales del suelo, especialmente las
arcillas, en agregados, en los coloides; pudiendo ser obtenidos tambin desde
el aire y el agua. Los seres vivientes en el suelo conforman la biomasa.

Los microorganismos del suelo juegan un papel indispensable, manteniendo la

fertilidad de los suelos. Elementos esenciales para el crecimiento, tales como
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oxgeno, nitrgeno, carbn, azufre y fsforo, son reciclados por

microorganismos del suelo.

C. USO POTENCIAL DEL LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO

1. Como indicadores de contaminacin.

Por ser el suelo uno de los principales hbitats de muchos microorganismos,

stos pueden ser usados en procesos de descontaminacin y algunos pueden
ser usados como indicadores de contaminacin, Los microorganismos
indicadores deben estar ausentes del medio especfico (agua suelo), a
menos que ste haya sido contaminado, y generalmente no son miembros de
la flora nativa del suelo o del sistema acutico.

Diferentes grupos de microorganismos participan en el tratamiento biolgico de

residuos lquidos y slidos, los mismos que pueden ser de tipo aerobio,
anaerobio mixto.

2. Como agentes de biorremediacin.

Se entiende por Biorremediacin al uso de microorganismos para degradar

agentes txicos y desechos peligrosos, que surge como un tratamiento para la
restauracin de suelos, masa de agua y subsuelos contaminados.

Los procesos biolgicos que tienen lugar mediante la presencia de

microorganismos son de gran importancia para restaurar los ambientes
contaminados. Entre estos procesos se cita a:

a. Biomineralizacin: Es la completa destruccin de los contaminantes

orgnicos para reducirlos a sus constituyentes minerales bsicos.

b. Biotransformacin: Los contaminantes orgnicos son parcialmente

degradados formando otras sustancias qumicas menos complejas.

c. Biovolatilizacin: Las bacterias y hongos pueden volatilizar metales por

adicin del grupo metilo, que hace al metal muy voltil.

d. Cometabolismo: Se refiere a la habilidad de las bacterias de romper un

contaminante en la adicin de un sustrato primario, es decir que los
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compuestos qumicos al ser metabolizados, pueden apoyar el crecimiento y

servir como fuente de carbono u otro elemento energtico.

La descontaminacin se puede realizar por:

a. Bioaumentacin: Consiste en la adicin de microorganismos al sitio

contaminando cuando la poblacin nativa carece de capacidad degradadora.

b. Bioestimulacin: Adicin de estimulantes en la actividad microbiana nativa

como sustratos o aceptores de electrones para la degradacin anxica.

c. Bioventeo: Es la introduccin de oxgeno a travs del suelo para estimular

la poblacin microbiana netamente aerobia.

d. Composteo: El material contaminado se coloca sobre la superficie del

terreno en forma de pilas que se cubren para crear condiciones termfilas,
peridicamente se mezcla para favorecer la aceleracin.

e. Biocultivo: Tratamiento en fase slida que generalmente se realiza en

sitios confinados para retener los lixiviados que se forman.

f. Biosorcin: Uso de microorganismos con afinidad para absorber metales

bajo ciertas condiciones, generalmente se aplica en fase lquida.

3. Ventajas de la biorremediacin:

Son seguros, econmicos y ms rpidos que algunos tratamientos

fisicoqumicos.

Se utilizan sistemas biolgicos cuyo costo es mnimo, ms an si se

utiliza la poblacin autctona.

El ecosistema del sitio contaminado prcticamente no se altera; al

contrario se recupera.

No se generan desechos como producto del tratamiento, ya que los

contaminantes son realmente degradados.
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Pueden ser acoplados a otro tipo de tecnologa cuando la remocin de

los contaminantes no es la deseada.

Los contaminantes absorbidos o atrapados en los poros del suelo,

tambin son biodegradados.

Si la actividad microbiana no es la deseada, puede estimularse con la

adicin controlada de compuestos requeridos.

Cuando los contaminantes orgnicos son empleados como la principal

fuente de carbono y energa para los microorganismos el proceso se
realiza con mayor rapidez.

Cuando se trata de una biorremediacin in situ se tienen ventajas

adicionales.

Se eliminan costos de transportacin.

Al utilizar la poblacin microbiana autctona se elimina la necesidad de

introducir microorganismos potencialmente peligrosos.

D. MICROORGANISMOS INVOLUCRADOS EN ALGUNOS PROCESOS

DE BIODEGRADACIN

1. Biodegradacin de Hidrocarburos

En el siguiente cuadro se representan los gneros ms comunes de hongos

y bacterias que tienen la capacidad degradadora. Estos microorganismos
degradan compuestos especficos o grupos de compuestos.

BACTERIAS HONGOS
Achromobacter Micrococcus Acremonium Glicladium
Acinetobacter Mycobacterium Aspergillus Graphium
Alcaligenes Nocardia Aureobasidium Humicola
Arthrobacter Proteus Beauveria Monilia
Bacillus Pseudomonas Botrytis Mortierela
Brevibacterium Sarcina Candida Paecelomyces
Chromobacterium Serratia Chryisosporium Penicillium
Corynebacterium Spirillum Cladosporium Rhodotorula
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Cytophaga Streptomyces Cochlobolus Saccharomyces

Erwinia Vibrio Cylindrocarpon Spicardia
Flavobacterium Xanthomonas Debaryomyces Tolypocladium
Fusarium Thrichoderma
Geotrichum Verticillium

2. Biodegradacin de Pesticidas

Algunos gneros de hetertrofos usan pesticidas como sustratos ya

sea cometabolizando las molculas o usando stas como nutrientes.

BACTERIAS ACTINOMICETOS HONGOS

Agrobacterium Streptomyces Alternaria
Arthrobacter Nocardia Aspergillus
Bacillus Micromonospora Cladosporium
Clostridium Fusarium
Corynebacterium Glomerella
Flavobacterium Mucor
Klebsiella Penicillium
Pseudomonas Rhizoctonia
Xanthomonas Trichoderma

3. Biodegradacin de metales pesados

MERCURIO SELENIO ARSENICO

Bacillus Candida spp Aspergillus

Clostridium Clostridium Mucor
Mycobacterium Corinebacterium Scopulariopsis
Pseudomonas Micrococcus Fusarium
Aspergillus Paecilomyces
Neurospora
Scopulariopsis
y algunas levaduras
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CAPTULO III

PRINCIPALES GRUPOS DE MICROORGANISMOS

A. BACTERIAS

1. rbol Filogentico Universal

Las bacterias o eubacterias son microorganismos unicelulares que

pertenecen al dominio Bacteria. Los miembros de este dominio tienen
diferencias con aquellos pertenecientes a los otros dos dominios, Archaea y
Eukarya.

En la Tierra, existen slo dos tipos bsicos de clulas que son estructuralmente
muy diferentes: las procariontes y las eucariontes. Las bacterias son
clulas procariontes.

rbol Filogentico Universal

 18

2. Abundancia

En general, el grupo ms numeroso de bacterias en el suelo son los

Actinomicetos que resisten condiciones secas y pueden sobrevivir en suelos
desrticos. Los gneros ms comunes son: Nocardia, Arthrobacter y
Streptomyces.

Las bacterias del gnero Streptomyces adems de producir antibiticos,

producen metabolitos llamados geosminas las cuales dan al suelo su olor
caracterstico.

Otro grupo comn de bacterias heterotrficas del suelo es el Myxobacteria que

son pigmentadas y forman masas brillantemente coloreadas. Bajo condiciones
de inanicin se acumulan para formar complejos cuerpos fructificantes
macroscpicos, los cuales contienen esporas que pueden sobrevivir en
condiciones pobres de nutrientes.

Las bacterias estn ntimamente ligadas a la existencia de la vida sobre la

Tierra. Son causantes de muchas enfermedades, pero tambin en muchos
casos son las responsables de la continuidad de la vida.

3. Caractersticas

Las bacterias no poseen todas las estructuras que contienen en su interior las
clulas de los organismos superiores (desde levaduras hasta las clulas de
cualquier animal).

Las eubacterias presentan las siguientes caractersticas principales:

a. Presentan una envoltura llamada pared celular, con excepcin de los

Mycoplasmas, que le otorga rigidez y proteccin en medios osmticamente
inadecuados. La pared celular est formada de un componente qumico
especfico llamado peptidoglicano y su presencia ha permitido catalogar a
las bacterias en Gram positivas (color violeta) y Gram negativas (color
rosado).
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b. La membrana citoplasmtica posee una estructura trilaminar tpica y est

formada por lpidos, protenas y pequeas cantidades de hidratos de
carbono.

c. No tienen un ncleo que contenga al cido desoxirribonucleico (ADN), el

cual es el material gentico, sino que ste se encuentra libre en su interior
(citoplasma), es decir, el cromosoma es desnudo y se lo conoce como
nucleoide. El tamao de esta molcula de ADN es varios cientos de veces
ms grande que la bacteria misma y contiene toda la informacin hereditaria
necesaria.

d. El citoplasma contiene, adems, molculas de ARN, llamadas ribosomas,

cuya funcin es la de ensamblar protenas que tendrn, a su vez, diversas
funciones. Estos ribosomas son ms pequeos (70s) que los de las clulas
de los animales superiores.

e. Poseen grnulos citoplasmticos que son acumulaciones de materiales

de reserva como polisacridos, lpidos y polifosfatos.

f. Las bacterias pueden tener organelos que les permitan moverse, los ms
comunes son los flagelos.

g. Las bacterias pueden tener diversas formas: esfricas, en forma de bastn y

hasta ramificadas. En general, su tamao es muy inferior al de una clula de
un organismo superior y su multiplicacin es por divisin Se reproducen por
fisin binaria o divisin asexual simple. (Ej. Escherichia coli completa su
divisin en 45 minutos)

d. Algunas bacterias tienen estructuras conocidas como endosporas, las

cuales pueden resistir el paso del tiempo y aun agresiones tales como altas
temperaturas y productos qumicos txicos que acaban normalmente con
una bacteria. Estas esporas permanecen en estado latente y, bajo
condiciones adecuadas, pueden dar lugar a una nueva bacteria.
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4. Clasificacin de las bacterias segn la estructura de la

pared celular

Dentro de las eubacterias existen tres grupos de bacterias que pueden ser
diferenciados en relacin a la estructura de la pared celular.

La forma ms sencilla de identificar una bacteria es la coloracin o tincin de

Gram, la misma que es una tincin diferencial porque no todas las clulas se
tien de la misma manera y de esa manera permite discriminar entre dos
grandes grupos de eubacterias, las eubacterias Gram positivas y Gram
negativas.

Los microorganismos Gram positivos, como el Staphylococcus aureus,

adquieren un color violeta despus de la coloracin de Gram, debido a que
contienen una pared celular estructuralmente muy diferente a la de los
microorganismos Gram negativos, como la Escherichia coli, que adquieren un
color rosado.

El tercer grupo de eubacterias es el de los Bacilos Acido-Alcohol

Resistentes (BAAR) que pueden ser diferenciados utilizando la coloracin de
Ziehl-Neelsen. La diferencia en la coloracin no se debe a reacciones qumicas
con ciertos componentes de la pared sino a la estructura fsica de la misma.

a. Caractersticas de las eubacterias Gram positivos

Las eubacterias Gram positivas son clulas con una gruesa pared celular de
peptidoglicano, mientras que la membrana citoplasmtica est formada con
fosfolpidos y protenas. El compuesto peptidoglicano es una macromolcula
gigante formada por cadenas de un dmero compuesto por N-
acetilglucosamina y N-acetilmurmico. A su vez, estas cadenas se
encuentran unidas entre s mediante pptidos, que son pequeas cadenas de
aminocidos que se entrecruzan. Estos puentes peptdicos son caractersticos
de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto ms complejo sea el
entrecruzamiento.
 21

El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la clula, y

evita que la clula estalle en medios hipotnicos. Al ser porosa permite el paso
de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalticas y
productos de secrecin hacia el exterior de la clula.

La pared celular Gram positiva tambin contien cidos teicoicos y cidos

lipoteicoicos. Los cidos teicoicos son cadenas de ribitol o glicerol unidas
por fosfodisteres, y estn unidos covalentemente al peptidoglicano por
medio de grupos fosfodister en el oxihidrilo del C6 del N-acetilmurmico. Los
cidos lipoteicoicos son polmeros de glicerofosfato se encuentran anclados en
la membrana citoplasmtica y no estn unidos al peptidoglicano. La funcin de
estos compuestos sera estructural, pero existen evidencias que indican que
tambin participaran en la regulacin de las enzimas hidrolticas que renuevan
la pared celular.

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Positiva

b. Caractersticas de las eubacterias Gram negativas

Las eubacterias Gram negativas son clulas con una delgada capa de
peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa.

Las clulas se encuentran envueltas por una membrana citoplasmtica

formada por una bicapa fosfolipdica y protenas. Por encima de esta
membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida
 22

covalentemente a unas lipoprotenas de anclaje que fijan la membrana

externa por medio de porciones lipoflicas. Entre la membrana citoplasmtica y
la membrana externa queda delimitado el espacio periplsmico. Este espacio
es ocupado por el periplasma que es una matriz isotnica respecto al
citoplasma, isotonicidad que es mantenida mediante los oligosacridos
derivados de membrana (MDO), y en la que se hallan componentes catalticos
de suma importancia para la viabilidad celular.

La membrana externa tiene una estructura de bicapa asimtrica en donde la

cara externa esta compuesta por el lipopolisacarido (LPS) y la cara interna
por fosfolpidos. Adems, esta membrana es rica en protenas, algunas de las
cuales se denominan porinas. La membrana externa funciona como una
barrera de permeabilidad para ciertas sustancias como antimicrobianos y
retarda el pasaje de otros que son inactivados en el periplasma. El LPS est
formado por tres regiones: el polisacrido O (Antgeno O), el polisacrido
del centro (KDO) y el lpido A (Endotoxina). La presencia del LPS en la
membrana externa le confiere a la clula una efectiva proteccin contra
enzimas digestivas y detergentes como las sales biliares, y dota a la superficie
bacteriana con una fuerte hidrofilicidad que le permite a la clula evadir la
fagocitosis, tener cierta resistencia al complemento, evitar la respuesta inmune
especfica por alteracin de la superficie antignica y adherirse a ciertas clulas
del hospedero.

Las porinas son poros o canales proteicos no especficos que pueden ser
atravesados por pequeas molculas hidroflicas. En la membrana externa se
encuentran otras protenas que funcionan como canales de difusin especficos
y facilitan el paso de di, tri y oligosacridos.
 23

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram Negativa

c. Caractersticas de los Bacilos Acido-Alcohol Resistentes

Los microorganismos pertenecientes al gnero Mycobacterium se

caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las
restantes eubacterias. La pared de las Mycobacterias posee un alto contenido
de lpidos que la hace impermeable a los agentes hidroflicos, por lo tanto estos
microorganismos no se tien adecuadamente con los reactivos utilizados en la
coloracin de Gram y no pueden ser clasificados como Gram positivos o
negativos. Las Mycobacterias son teidas adecuadamente por el mtodo de
Ziehl-Neelsen (Tincin Acido-Rpida) que utiliza como solucin decolorante
una mezcla de etanol y cido clorhdrico. Estos microorganismos una vez
coloreados son resistentes a la decoloracin cido-alcohlica y por eso se
denominan Bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

Los microorganismos del gnero Mycobacterium contienen una membrana

citoplasmtica formada por una bicapa lipdica similar a las restantes
eubacterias. Por encima de esta membrana se encuentra el rgido
peptidoglicano que contiene N-glucolilmurmico en lugar de N-
acetilglucosamina. Por medio de una unin fosfodister, el peptidoglicano se
halla unido covalentemente al arabinogalactano, un polmero de arabinosa y
galactosa. En la porcin ms distal y externa de los arabinogalactanos se
 24

hallan fijados los cidos miclicos que tienen cadenas carbonadas largas
(C60 a C90). Los glucolpidos son un grupo de compuestos (micolatos de
trealosa, sulfolpidos, micsidos, etc) que se encuentran asociados no
covalentemente a los cidos miclicos y se ubican perifricamente en la pared.
Los micolatos de trealosa (llamados factores de cordn porque su presencia
produce cultivos que tienen forma de cordones serpenteantes) y sulfolpidos se
encuentran principalmente en las cepas de Mycobacterias ms virulentas. El
lipoarabinomanano (LAM) es un compuesto que se halla anclado en la
membrana citoplasmtica. El LAM es considerado como el equivalente
mycobacteriano del lipopolisacrido de las Gram negativas debido a que
provoca una importante respuesta antimicrobiana en macrfagos. En las cepas
de Mycobacterias ms virulentas la arabinosa terminal del LAM est recubierta
con residuos de manosa (manLAM) a diferencia de las cepas no virulentas no
estn recubiertas (AraLAM). Adems, el LAM tambin podra servir como poro
para el paso de los nutrientes a travs de la pared celular. En la pared celular
tambin se encuentran protenas inmunoreactivas que son utilizadas con fines
diagnsticos (PPD).

El Mycobacterium tuberculosis es el agente etiolgico de la tuberculosis, una

enfermedad que primariamente produce lesiones en los pulmones y que puede
causar la muerte. La lepra es una infeccin causada por el Mycobacterium
leprae que es un parsito intracelular obligado.

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Acido - Alcohol Resistente

 25

5. Algunos grupos de bacterias

a. Bacterias verdaderas heterotrofas

Gram Negative Gram Positive Actinomycetes

Pseudomonas Bacillus Rhodococcus
Rhizobium Clostridium Nocardia
Bradyrhizobium Enterococcus Frankia
Azotobacter Corynebacterium Streptomyces
Agrobacterium Arthrobacter
Serratia Mycobacterium
Flavobacterium Micrococcus
Enterobacter
Sphaerotilus
Spirillum
Myxococcus
Escherichia
Photobacterium
Leptothrix
Desulfovibrio

b. Bacterias verdaderas autotrofas

Fotoautotrofas Nitrificadores Oxidadotas del Metanotrofas

S
Purple Sulfur Nitrosomonas Thiobacillus Methylomonas
Green Sulfur Nitrobacter Beggiatoa
Purple Nonsulfur

c. Archaeabacteria
Sulfur
Methanogens Halophiles Hyperthermophiles
Dependent
 26

Methanobacterium Halobacterium Thermococcus Sulfolobus

Natronobacterium

d. Cyanobacterias (algas azul - verdes)

Oscillatoria

6. Bacterias que causan enfermedades humanas.

Slo una pequea parte de los miles de especies de bacterias causan

enfermedades humanas conocidas. Generalmente, las bacterianas son
destridas con calor (esterilizacin y pasteurizacin) y antibiticos. Pero el abuso
de estos compuestos en los ltimos aos ha favorecido el desarrollo de cepas
de bacterias resistentes a su accin, como Mycobacterium tuberculosis, que
causa la tuberculosis. Entre los gneros importantes se mencionan a:
TIPO ESPECIE ENFERMEDAD
Bacilo Bacillus anthracis ntrax
Bacillus cereus Intoxicacin alimentaria por Bacillus cereus
Clostridium botulinum Botulismo
Clostridium perfringens Mionecrosis clostridial (gangrena gaseosa)
Clostridium tetani Ttanos
Corynebacterium diphtheriae Difteria
Escherichia coli Diarrea
Klebsiella pneumoniae Bronconeumona
Mycobacterium leprae Lepra
Mycobacterium tuberculosis Tuberculosis
Salmonella sp. Salmonelosis
Salmonella typhi Fiebres tifoideas
Salmonella typhimurium Gastroenteritis por Salmonella
Shigella dysenteriae Disentera bacilar
Shigella sp. Sigelosis
Yersinia enterocolitica Yersiniosis, gastroenteritis
Yersinia pestis Peste
Yersinia pseudotuberculosis Linfadenitis mesentrica

Clamidia Chlamydia trachomatis Tracoma, uretritis, cervicitis, conjuntivitis

Cocoba Bordetella pertussis Tos ferina
cilo Brucella sp. Brucelosis
Haemophilus influenzae Meningitis, neumona bacteriana
Haemophilus pertussis Tos ferina
 27

Coco Neisseria gonorrhoeae Gonorrea, enfermedad inflamatoria plvica

Neisseria meningitidis Meningitis
Staphylococcus aureus Neumona, sndrome de shock txico,
infecciones de la piel, meningitis
Streptococcus pneumoniae Neumona, infecciones del odo, meningitis
Streptococcus pyogenes Infecciones de garganta, fiebre reumtica
Streptococcus sp. Escarlatina, fiebre puerperal
Listeria Listeria monocytogenes Listeriosis, septicemia perinatal, meningitis,
encefalitis, infecciones intrauterinas

Micoplas Mycoplasma pneumoniae Neumona

ma
Rickett Rickettsia prowazekii Tifus epidmico, enfermedad de Brill-Zinsser
sia (transmitida por piojos)
Rickettsia rickettsii Fiebre de las montaas Rocosas (transmitida
por garrapatas)
Rickettsia typhi Tifus endmico (tifus murino, transmitido por
la pulga de la rata)

Espirilo Campylobacter fetus jejuni Campilobacteriosis (diarrea bacteriana)

Spirillum minor Fiebre producida por mordedura de rata
Espiro Treponema pallidum Sfilis
queta
Vibrio Aeromonas hydrophila Gastroenteritis, septicemia, celulitis,
infecciones de heridas, infecciones de las
vas urinarias
Plesiomonas shigelloides Gastroenteritis, diarrea
Vibrio cholerae 01 Clera epidmico
Vibrio cholerae no-01 Gastroenteritis
Vibrio parahemolyticus Gastroenteritis por Vibrio parahemolyticus
Vibrio vulnificus Infecciones de heridas, gastroenteritis,
septicemia primaria

7. Bacterias que causan enfermedades a plantas.

 28

B. HONGOS

1. Generalidades

Los hongos son organismos que pertenecen a al reino Fungi,

para diferenciarlo de Procariote, Protista, Plantae y Animalia.

Las caracteristicas especficas de los hongos son:

a. Presencia de sustancias qumicas especiales, como la

trealosa y manitol.
b. La diversidad y complejos ciclos de sus ciclos de vida
(diferenciacin sexual y la duracin de la fase diploide).
c. La nutricin es por absorcin, a dif erencia de lo que ocurre
en el reino vegetal que es por fotosntesis y digestin en el
reino animal.
d. El crecimiento depende enteramente sobre la reproduccin
asexual.

Los hongos tienen similitud con los miembros del reino vegetal por
la presencia de una pared celular y vacuolas.

Tambin, los hongos se parecen a los animales por la carencia de

plastidios, qumicamente son similares a algunos animales por
poseer quitina en sus paredes celulares y compuestos especficos
de almacenamiento como el glucgeno.

Algunos hongos son saprofticos, es decir pueden explotar materia

orgnica muerta. Viven sobre hojarasca, restos de vegetales y
animales muertos y sobre estircol.

Otros son parsitos y explotan materia orgnica viva, daando al

hospedero, el cual puede ser animal, vegetal u hongo.
 29

Otras especies han preferido mantener relaciones simbiticas con

organismos, generalmente auttrofos, donde la relacin implica
beneficio mutuo. Los mejores ejemplos son los lquenes
(alga/hongo) y las micorrizas (vegetal/hon go).

2. Importancia

Importantes descomponedores de la materia orgnica.

Comestibles: Pleurotas ostreatus, lentinula edades, Stropharia

rugosoannulata, Auricularia aurcula -judae, Coprinus comatus,
Legista nuda, Tuber melanosporum, Suillus luteus, Agaricus
bisporus, Flammulina velutipes , etc.

Medicinales: Penicillium, Lentinula edodes

Bioindicadores: Los que forman lquenes, micorrizas

Etnomicolgicos: Marasmius, Cortinarius.

3. Morfologa

Los hongos no poseen tallo, hojas ni races. Su cuerpo consiste

de un talo, no forman tejidos en el sentido funcional por lo tanto
no forman rganos.

El talo generalmente est formado de clulas alongadas llamadas

hifas, las cuales pueden ser septadas (conparedes horizontales
cruzadas) o no septadas (aseptad as) si no tienen paredes
cruzadas, esta es la estructura coenoctica. La ltima estructura
es limitada a pocos grupos particulares como MASTIGOMYCOTA Y
ZYGOMICOTYNA. En algunos casos, el aparato vegetativo
corresponde solamente a una clula, como el caso de las
levaduras. Sin embargo, en la mayora de los casos las hifas se
juntan para formar microscpicos filamentos, lo cual se denomina
 30

micelio, vara en densidad, carece de cualquier estructura

prominente.

En un cierto estado de desarrollo, si las condiciones son

favorables el proceso reproductivo se inicia, produce una clase
especial de clulas llamadas esporas a partir de una simple
fragmentacin del talo no diferenciado o a partir de la fusin de
ncleos celulares donde se mezclan los genes.

Las esporas pueden provenir directamente del micelio o mas

frecuentemente de estructuras diferenciadas, denominadas
esporforos, los mismos que pueden ser de variadas formas,
tamao y complejidad, como aquellos que producen las Morchelas,
Trufas, Boletus y Amanitas. Pero otros hongos producen
esporforos microscpicos, tan espectaculares como los primeros.

3. Ciclos de vida

El curso del ciclo de vida de un hongo muestra marcadas

variaciones de acuerdo a la consideracin del grupo.

Se puede decir que el na cimiento de un hongo ocurre en el

momento de la germinacin de la espora. Este evento da lugar al
micelio, llamado en este caso micelio primario, cuyas clulas
contienen un solo ncleo con n cromosomas.

Este micelio primario se desarrollar invadiendo s u sustrato, el

cual coloniza rpidamente, en dependencia de los parmetros
ambientales. Durante este estado, el micelio puede permanecer
difuso o arreglarse en masas estructuradas, las cuales no forman
tejidos reales, pero reciben el nombre de plectnquimas.

Cuando las condiciones lo permiten, la reproduccin puede

ocurrir. Entre las condiciones que se mencionan favorecen la
reproduccin, no solamente son las de tipo favorable sino tambin
muchos hongos reaccionan al stress.
 31

Si la reproduccin es de tipo asexual, el micelio primario produce

esporas dispersas solamente sobre el micelio o en esporforos
mas o menos complejos formados a partir de plectnquimas de
varias clases.

Si la reproduccin es de tipo sexual, es importante primero la

presencia de dos micelios de polaridad complementaria , los
cuales se fusionan y ocurre la plasmogamia (fusin del
citoplasma) y da lugar a un micelio secundario (fase dicaritica con
2 x n cromosomas). Las conexiones clam frecuentemente
ocurren sobre las septas. Cuando las condiciones son adecuadas
crecern esporforos que contienen clulas frtiles como ascos o
basidios, mas tarde en la fase de su ciclo reproductivo, ocurre la
fusin nuclear, con la cual se forman ncleos con 2n cromosomas.
La fusin es inmediatamente seguida por una serie de tres
divisiones, las cuales redistribuyen un stock nuclear haploide.
Entonces el ciclo es completado.

Poco se conoce acerca de la muerte de un hongo. Esto ocurre

cuando el micelio primario o secundar io desaparece por varias
razones. Algunas especies parecen ser anuales, y ellos recurren a
la produccin de esporas para la perpetuacin de su especie.
Otros son perennes, sobreviven en una forma micelial por muchos
aos antes de producir esporforos.

4. Fisiologa

Los hongos son organismos heterotrficos con respecto al

carbono.

Su comportamiento es ms variable con respecto al nitrgeno,

algunas utilizan nitrgeno orgnico o mineral. Tambien necesitan
Hidrgeno, fsforo, potasio, magnesio, azufre, man ganeso, cobre,
hierro, zinc, vitaminas, etc. Necesitan agua durante una parte o
 32

todo su ciclo biolgico. El calor y la luz tambin tienen un papel

importante en su fisiologa.

Son es su mayora aerbicos, aunque la micoflora del tracto

digestivo de los rumiantes es anaerbica.

Los hongos tienen un gran potencial metablico en virtud de sus

variadas reacciones enzimticas. Eso implica, que pueden
adaptarse a numerosos hbitats donde pueden producir una gran
cantidad y variedad de molculas qumicas, entre las que se
destacan muchas de tipo beneficioso y otros como altamente
venenosos para el hombre.

Hongos que causan enfermedades a humanos

En la mayora de la gente sana, las infecciones por hongos como la tia y el pie
de atleta son leves, afectan slo a la piel, el cabello, las uas, u otras zonas
superficiales. Sin embargo, en las personas con un sistema inmunolgico
deteriorado, como en pacientes con SIDA, diabetes, o que estn recibiendo
hormonas esteroideas; este tipo de infecciones, denominadas dermatofitosis
(Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton), pueden persistir durante
largo tiempo y pueden causar la muerte. Los pacientes con una infeccin
crnica por Candida, Histoplasma o Cryptococcus pueden necesitar
tratamiento a largo plazo.

Hongos que causan enfermedades a plantas

C. VIRUS

1. Introduccin
 33

(Del latn, veneno), son consideradas como entidades orgnicas

compuestas tan slo de material gentico, rodeado por una envuelta
protectora. El trmino virus se utiliz en la ltima dcada del siglo pasado
para describir a los agentes causantes de enfermedades ms pequeos
que las bacterias. Los virus son parsitos intracelulares obligados, es
decir: slo se replican en clulas con metabolismo activo, y fuera de ellas se
reducen a macromolculas inertes. Muchos virus conocidos causan
enfermedades a los seres humanos, animales, bacterias y plantas.

La existencia de los virus se estableci en 1892, cuando el cientfico ruso

Dmitry I. Ivanovsky, descubri unas partculas correspondientes al virus
del mosaico del tabaco. En 1898 el botnico holands Martinus W.
Beijerinck denomin virus a estas partculas infecciosas. Pocos aos ms
tarde, se descubrieron virus que crecan en bacterias, a los que se
denomin bacterifagos. En la dcada de 1940 el desarrollo del
microscopio electrnico posibilit la visualizacin de los virus por primera
vez.

2. Caractersticas

Partes de un virus

Los virus son parsitos intracelulares submicroscpicos, compuestos por ARN

o por ADN (nunca ambos) y una capa protectora de protena sola o
combinada (lipdos y glcidos). En general, el cido nucleico es una molcula
nica de hlice simple o doble; sin embargo, ciertos virus tienen el material
gentico segmentado en dos o ms partes. La cubierta externa de protena
 34

se llama cpsida y las subunidades que la componen, capsmeros. Se

denomina nucleocpsida, al conjunto de todos los elementos anteriores.
Algunos virus poseen una envuelta adicional que suelen adquirir cuando la
nucleocpsida sale de la clula hospedera. La partcula viral completa se
llama virin.

El tamao y forma de los virus son muy variables, pero hay dos grupos
estructurales bsicos: isomtricos, con forma de varilla o alargados, y virus
complejos, con cabeza y cola (como algunos bacterifagos). Los virus ms
pequeos son icosadricos (polgonos de 20 lados) que miden entre 18 y 20
nanmetros. Los de mayor tamao son los alargados; algunos miden varios
micrmetros de longitud, pero en forma general no suelen medir ms de 100
nanmetros de ancho.

Muchos virus con estructura helicoidal interna (forma esfrica) presentan

cubiertas externas compuestas de lipoprotenas, glicoprotenas, o ambas, su
tamao oscila entre 60 y ms de 300 nanmetros de dimetro. Los virus
complejos, como algunos bacterifagos, tienen cabeza y una cola tubular que
se une a la bacteria hospedera.

En las plantas los virus causan daos como deformaciones, enanismo y

disminucin de la produccin de frutos y bulbos. Estas enfermedades pueden
ser reconocidas por sntomas como pequeas lesiones necrticas, manchas
amarillas (mosaico), anillos de color ms claro o lneas blancas (variegado) en
las hojas o deformaciones y cambios de color en los frutos. Una vez que la
planta est infectada es muy difcil que se pueda recuperar. Lo recomendable
es eliminar las enfermas y realizar acciones preventivas para evitar la
diseminacin de la enfermedad en el cultivo.

Los virus ingresan a las plantas por contacto directo entre un individuo
enfermo y otro sano, por ejemplo a travs de heridas durante la poda con
herramientas infectadas, o a causa de vectores biolgicos como insectos
(pulgones, mosquitos) o nemtodos que muerden sus races. Luego los virus
se mueven hacia los diferentes tejidos de la planta, diseminando la infeccin.
 35

Los virus se detectan mediante el test ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent

Assay). Usando extractos de varias plantas se ponen en los distintos pocillos
de una placa. Si los virus estn presentes son atrapados por anticuerpos que
reconocen las protenas virales (cambio de color). De este modo, se puede
distinguir plantas sanas (pocillos incoloros) y plantas infectadas (pocillos de
color).

Ultimamente, se estn creando plantas transgnicas resistenctes a virus, para

los cual a una planta normal se introduce un pequeo trozo del genoma del
virus (utilizando un vector que generalmente es Agrobacterium), con lo cual el
vegetal queda preparado para contrarrestar una infeccin viral, impidiendo
que el virus se replique.

3. Replicacin

Los virus carecen de las enzimas y precursores metablicos necesarios para

su propia replicacin, por lo que, los obtienen de la clula hospedera que
infectan. La replicacin viral es un proceso que incluye varias sntesis
separadas y el ensamblaje posterior de todos los componentes, para dar
origen a nuevas partculas infecciosas. La replicacin se inicia cuando:

a. El virus entra en la clula y las enzimas celulares eliminan la cubierta y el

ADN o ARN viral.

b. ADN o ARN viral se pone en contacto con los ribosomas, dirigiendo la

sntesis de protenas.

c. El cido nucleico del virus se autoduplica y se sintetizan las subunidades

proteicas que constituyen la cpsida.

d. Los componentes se ensamblan dando lugar a nuevos virus. Una nica

partcula viral puede originar una progenie de miles.

Determinados virus se liberan destruyendo la clula infectada, y otros sin

embargo salen de la clula sin destruirla por un proceso de exocitosis que
aprovecha las propias membranas celulares. En algunos casos las infecciones
 36

son silenciosas, es decir, los virus se replican en el interior de la clula sin

causar dao evidente.

Los virus que contienen ARN son sistemas replicativos nicos, ya que el ARN
se autoduplica sin la intervencin del ADN. En algunos casos, el ARN viral
funciona como ARN mensajero, y se replica de forma indirecta utilizando el
sistema ribosomal y los precursores metablicos de la clula hospedera. En
otros, los virus llevan en la cubierta una enzima dependiente del ARN que
dirige el proceso de sntesis. Otros virus de ARN, los retrovirus, pueden
producir una enzima que sintetiza ADN a partir de ARN. El ADN formado
acta entonces como material gentico viral.

Durante la infeccin, los bacterifagos y los virus de animales difieren en su

interaccin con la superficie de la clula husped. Por ejemplo, el bacterifago
T7, que infecta a la bacteria Escherichia coli, se fija primero a la clula y,
despus, inyecta su ADN dentro de ella y luego ocurre los mismos eventos
bsicos de la replicacin viral.
 37

Proceso de replicacin de un bacterifago

4. Virus que causan enfermedades humanas

Los virus causan muchas enfermedades humanas comunes, como resfriados,

gripes, diarreas, varicela, sarampin y paperas. Algunas enfermedades vricas,
como la rabia, la fiebre hemorrgica, la encefalitis, la poliomielitis, la fiebre
amarilla o el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), son mortales. La
rubola y el citomegalovirus pueden provocar anomalas graves o la muerte en
el feto.

Se estima que hay entre 1.000 y 1.500 tipos de virus, de los que
aproximadamente 250 son patgenos para el hombre.
 38

TIPO VIRUS ENFERMEDAD

Adenovirus Resfriado comn
Bunyavirus Hantaan Insuficiencia renal
La Crosse Encefalitis (infeccin
Sin Nombre cerebral)
Sndrome pulmonar
Calicivirus Norwalk Gastroenteritis (diarrea,
vmitos)
Coronavirus Corona Resfriado comn
Filovirus bola Fiebre hemorrgica
Marburg Fiebre hemorrgica
Flavivirus Hepatitis C (no A, no B) Hepatitis
Fiebre amarilla Hepatitis, hemorragia
Hepadnavirus Hepatitis B (VHB) Hepatitis, cncer de hgado
Herpesvirus Citomegalovirus Defectos de nacimiento
Virus Epstein-Barr (VEB) Mononucleosis, cncer
Herpes simple tipo 1 nasofarngeo
Herpes simple tipo 2 Herpes labial
Virus herpes humano 8 Lesiones genitales
(VHH8) Sarcoma de Kaposi
Varicela-zster Varicela, herpes zster
Ortomixovirus Influenza tipos A y B Gripe
Papovavirus Virus del papiloma humano Verrugas, cncer de cuello
(VPH) del tero
Picornavirus Coxsackievirus Miocarditis (infeccin del
Echovirus msculo cardiaco)
Hepatitis A Meningitis
Poliovirus Hepatitis infecciosa
Rinovirus Poliomielitis
Resfriado comn
Paramixovirus Sarampin Sarampin
Paperas Paperas
Parainfluenza Resfriado comn,
infecciones del odo
Parvovirus B19 Eritema infeccioso, anemia
crnica
Poxvirus Ortopoxvirus Viruela (erradicada)
Reovirus Rotavirus Diarrea
Retrovirus Virus de la Sndrome de
inmunodeficiencia humana inmunodeficiencia adquirida
(VIH) (SIDA)
Virus de la leucemia Leucemia de clulas T del
humana de las clulas T adulto, linfoma,
(VLHT-1) enfermedades neurolgicas
Rhabdovirus Rabia Rabia
Togavirus Encefalomielitis equina del Encefalitis
este Rubola, defectos de
 39

Rubola nacimiento

6. Virus que causan enfermedades a plantas

D. PROTOZOARIOS

1. Introduccin

Son organismos microscpicos unicelulares, su hbitat es muy diverso, pero

frecuentemente se los encuentra en la tierra y el agua. Algunos de ellos
pueden vivir durante muchos aos de forma inactiva protegidos por una
cubierta en forma de quistes. Al ser humano pasan a travs del agua,
alimentos, picaduras de insectos portadores y mediante relaciones sexuales.
Una de las enfermedades producida por protozoos, y muy extendida por todo el
mundo, es la malaria, transmitida por la picadura del mosquito Anopheles. La
disentera amebiana es transmitida por la ingesta de aguas contaminadas,
mientras que, la tricomoniasis es una infeccin que se transmite por contagio
sexual.

CAPITULO IV

FISIOLOG A DE LOS MICROBIOS

A. REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES

1. Requerimientos qumicos

El objetivo de un microorganismo es crecer y dividirse; para ello necesita

duplicar el material que posee. Las clulas utilizan elementos qumicos que
provienen del medio ambiente para transformarlos en los constituyentes
 40

caractersticos que componen dicha clula. Estos compuestos qumicos se

llaman nutrientes y el proceso por el cual una clula transforma estos nutrientes
en sus componentes celulares se denomina anabolismo o biosntesis. La
biosntesis es un proceso que requiere energa. Esta energa se obtiene del
medio ambiente. Las clulas pueden utilizar tres tipos distintos de fuentes de
energa: luz, compuestos orgnicos o compuestos inorgnicos. Aunque
algunos organismos obtienen su energa de la luz, la mayor parte lo hacen a
travs de compuestos qumicos. Cuando estos compuestos qumicos se
rompen originando compuestos ms simples se libera energa y a este proceso
se le denomina catabolismo. El resultado colectivo de las reacciones
anablicas y catablicas es el metabolismo.

Cuando los microorganismos se separan de su hbitat (donde adquieren los

nutrientes) y se cultivan en laboratorios o industrias se deben usar medios de
cultivo que contengan los elementos qumicos necesarios para su crecimiento.

Los nutrientes que requiere una clula para su crecimiento se pueden clasificar
en los siguientes grupos:
a. Macronutrientes: carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno.
b. Micronutrientes: fsforo, potasio, azufre, magnesio.
c. Vitaminas y hormonas o factores de Crecimiento.

d. Elementos traza o Iones Inorgnicos (zinc, cobre, manganeso,

molibdeno, cobalto, etc.).

a. Macronutrientes

1. Carbono
 41

Todos los organismos necesitan carbono en alguna de sus formas. El carbono

forma el esqueleto de los tres ms importantes nutrientes (carbohidratos,
lpidos y protenas) que se utilizan para la obtencin de energa as como
material celular. Los microorganismos que utilizan compuestos orgnicos como
fuente de carbono se llaman hetertrofos y aquellos que utilizan el CO2 como
fuente de carbono se llaman auttrofos.

Este elemento puede aportarse a los microorganismos en forma muy diversa

dependiendo del tipo de metabolismo que posean. El carbono es utilizado por
los microorganismos para sintetizar los compuestos orgnicos requeridos para
las estructuras y funciones de la clula.

Los microorganismos se pueden dividir en categoras nutricionales en base a

dos parmetros: naturaleza de la fuente de energa y naturaleza de la
fuente principal de carbono.

Fototrofos: utilizan luz como fuente de energa.

Quimiotrofos: la fuente de energa es qumica.

Autotrofos: utilizan como fuente de carbono al CO2 y a partir del cual

sintetizan los esqueletos carbonados de los metabolitos orgnicos.

Heterotrofos: utilizan compuestos orgnicos como fuente de C y

electrones.

Combinndose estos dos parmetros se pueden establecer cuatro categoras

principales de organismos:

Fotoautotrofos: dependen de la luz como fuente de energa y utilizan CO 2

como principal fuente de carbono. Vegetales superiores, bacterias
fotosintticas, algas eucariticas, etc.

Fotoheterotrofos: utilizan luz como fuente de energa y emplean

compuestos orgnicos como fuente de carbono. Algunas bacterias
fotosintticas y algas eucariticas.
 42

Quimioautotrofos: utilizan CO2 como fuente de carbono y emplean fuentes

de energa qumica proveniente generalmente de compuestos
inorgnicos reducidos (H2, S2-, NH4+, etc).

Quimioheterotrofos: utilizan compuestos orgnicos como fuente de

carbono y energa. Los compuestos orgnicos tambin se comportan
como fuente de electrones. Este grupo est integrado por animales
superiores, hongos, protozoos y la mayora de las bacterias.

2. Hidrgeno

El hidrgeno forma parte de muchos compuestos orgnicos. Se encuentran

en el H2O, como componentes de nutrientes y en la atmsfera.

3. Nitrgeno

Todos los organismos requieren nitrgeno. El nitrgeno es metabolizado y

entra a formar parte de las protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared
celular. Las fuentes de nitrgeno que pueden ser utilizadas por diferentes
organismos incluyen el N2 atmosfrico en algunos procariotas, otros utilizan
compuestos inorgnicos como nitratos, nitritos o sales de amonio, mientras que
otros requieren compuestos nitrogenados orgnicos como son los aminocidos
o pptidos.

El nitrgeno es utilizado por las bacterias para formar aminocidos, pirimidinas,

purinas, etc, y puede provenir de fuentes diferentes.

Asimilacin de NH3 y sales de amonio: el nitrgeno es transferido con

este estado de oxidacin a los aminocidos por la va de la
glutamato/glutamina.

Fijacin de Nitrgeno: el N2 es reducido dentro de la clula a NH4+ y

metabolizado.

Reduccin asimiladora de Nitratos: los nitratos son reducidos dentro de

la clula por la va de los nitritos a NH3 y metabolizado.
 43

Hidrolizados proteicos: los microorganismos incapaces de asimilar el

nitrgeno de sales inorgnicas, lo obtienen a travs de compuestos
orgnicos nitrogenados como los hidrolizados proteicos. Estos
compuestos proteicos son a su vez hidrolizados por enzimas
bacterianas, fuera de la clula, a aminocidos, los que despus son
metabolizados dentro de la clula.

4. Oxgeno

De acuerdo a los requerimientos de oxgeno, las bacterias se pueden dividir en

5 grupos:

Aerobios obligados: requieren oxgeno para el crecimiento pues dependen

de este elemento para cubrir sus necesidades energticas. El oxgeno
es el aceptor final de electrones en la cadena respiratoria.

Anaerobios obligados: crecen en ausencia total de oxgeno porque

necesitan un medio muy reductor. Utilizan respiracin anaerobia donde
los aceptores finales de electrones pueden ser generalmente SO 42-,
fumarato2- o CO32-.

Anaerobios facultativos: pueden crecer en presencia o ausencia de

oxgeno. Utilizan al oxgeno como aceptor final de electrones en la
cadena respiratoria cuando est disponible, y en ausencia de oxgeno la
energa la obtienen por fermentacin o respiracin anaerobia
(generalmente el NO3- es un aceptor final de electrones en las
enterobacterias).
 44

Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en presencia o ausencia de

oxgeno, pero la energa la obtienen por fermentacin.

Microaerofilos: slo pueden crecer con bajas tensiones de oxgeno porque

las altas tensiones son txicas para este tipo de microrganismos (1 a
12% de O2 en la fase gaseosa). La energa la obtienen por respiracin
aerbica, cuando no hay aceptores electrnicos terminales alternativos,
o anaerbica.

b. Micronutrientes

1. Fsforo.

El fsforo es esencial para la sntesis de cidos nucleicos y ATP; tambin

forma parte de los fosfolpidos y polmeros de la pared celular. El fsforo se
suministra normalmente como fosfato inorgnico; alternativamente se puede
utilizar fosfato orgnico como son los glicerofosfatos y fosfolpidos.

2. Potasio

El in potasio acta como coenzima y probablemente como catin en la

estructura de RNA y otras estructuras aninicas celulares.

3. Magnesio

Se utiliza como cofactor de reacciones enzimticas donde acta el ATP.

4. Azufre

El azufre es necesario para la biosntesis de los aminocidos cisteina, cistina y

metionina. Forma parte de coenzimas como biotina, coenzima A y ferredoxina.
 45

Tiene un papel muy importante en la estructura terciaria de las protenas

(formacin de puentes S-S) y en el sitio cataltico de enzimas.

El azufre se suministra en forma inorgnica como sulfato u orgnica como

cistina, cisteina y metionina. Puede ingresar en la clula reducido (grupos
sulfhidrilos), como sulfato (debe ser reducido dentro de la clula para
metabolizarse) o como aminocidos azufrados.

c. Factores de Crecimiento

Son compuestos orgnicos que el microorganismo es incapaz de sintetizar a

partir de los nutrientes y son fundamentales para la maquinaria metablica de
la clula. Son vitaminas, aminocidos, purinas, pirimidinas, etc.

Las vitaminas se clasifican en dos grupos, hidrosolubles y liposolubles. Dentro

de stas ltimas la vitamina A, D y E no son necesarias para el crecimiento de
las bacterias. Todas las vitaminas hidrosolubles, excepto el cido ascrbico,
son necesarias para el crecimiento de bacterias. La mayor parte de las
vitaminas hidrosolubles son componentes de coenzimas. En los medios
indefinidos se utiliza como fuente de vitaminas el extracto de levaduras.

En relacin al requerimiento de factores de crecimiento los microorganismos se

pueden dividir en:

Prottrofos: microorganismos que sintetizan sus propios factores de

crecimiento.

Auxtrofos: microorganismos que requieren una fuente exgena de

factores de crecimiento debido a que son incapaces de sintetizarlos.

d. Elementos traza (c.a. 25 mg / l) o Iones Inorgnicos

Son esenciales para el crecimiento porque estabilizan los compuestos

biolgicos como enzimas, ribosomas, membranas, etc. Los iones requeridos
para el crecimiento bacteriano son aportados en el medio a travs de sales que
contienen K+, Mg2+, Mn2+, Ca2+, Na+, PO43-, Fe2+, Fe3+ y trazas de Cu2+, Co2+ y
Zn2+.
 46

En general los requerimientos de elementos traza se conocen slo

cualitativamente ya que es difcil demostrar su requerimiento debido a que las
cantidades necesarias se suelen encontrar a menudo como contaminantes en
otros constituyentes del medio. Son necesarios para activar algunos enzimas;
por ejemplo, el Mo6+ se necesita en la nitrogenasa que es el enzima que
cataliza la conversin del nitrgeno atmosfrico en amonaco en la fijacin
biolgica de nitrgeno.

2. Requerimientos fsicos

a. Temperatura

Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento.

Esto significa que a determinada temperatura la velocidad de duplicacin (o la
velocidad de crecimiento poblacional) de los microorganismos es mayor.

Hay que tener en cuenta que no todos los microorganismos crecen en el mismo
rango de temperaturas, por lo que se les ha clasificado de la siguiente manera:

Clasificacin Rango Optima

Termfilos 25 - 80 C 50 - 60 C

Mesfilos 10 - 45 C 20 - 40 C

Psicrfilo -5 30 C 10-20 C
 47

La temperatura afecta la estabilidad de las protenas celulares porque induce

cambios en su conformacin que alteran la actividad biolgica de estos
compuestos, especialmente la de enzimas.

b. pH

La mayora de los microorganismos crecen en pH cercanos a la neutralidad,

entre 5 y 9, cosa que no excluye que existan microorganismos que puedan
soportar pH extremos y se desarrollen. Segn el rango de pH del medio en el
cual se desarrollan pueden clasificarse en:

Clasificacin pH externo pH interno

Acidfilos 1.0 - 5.0 6.5

Neutrfilos 5.5 - 8.5 7.5

Alcalfilos 9.0 10.0 9.5

 48

Los microorganismos regulan su pH interno mediante un sistema de transporte

de protones que se encuentra en la membrana citoplasmtica, que incluye una
bomba de protones ATP dependiente.

El rango de pH ptimo para el desarrollo de los microorganismo es estrecho

debido a que frente a un pH externo muy desfavorable se requiere un gran
consumo de energa para mantener el pH interno.

c. Agua

El agua es el solvente en donde ocurren las reacciones qumicas y enzimticas

de la clula y es indispensable para el desarrollo de los microorganismos.

La actividad de agua (aW) del medio representa la fraccin molar de las

molculas de agua totales que estn disponibles, y es igual a relacin que
existe entre la presin de vapor de la solucin respecto a la del agua pura
(p/po). El valor mnimo de aW en el cual las bacterias pueden crecer vara
ampliamente, pero el valor ptimo para muchas especies es mayor a 0.99.
Algunas bacterias halfilas (bacterias que se desarrollan en altas
concentraciones de sal) crecen mejor con aW = 0.80.

Variaciones en la actividad de agua puede afectar la tasa de crecimiento, la

composicin celular y la actividad metablica de la bacteria, debido a que si no
disponen de suficiente cantidad de agua libre (no asociada a solutos, etc) en el
medio necesitaran realizar ms trabajo para obtenerla y disminuir el
rendimiento del crecimiento.

d. Potencial de Oxido -Reduccin

El Potencial de Oxido-Reduccin es una medida de la tendencia del medio a

donar o recibir electrones. Es crtico para el crecimiento de los
microorganismos y generalmente est asociado con la presencia de oxgeno
molecular disuelto en el medio el cual es muy oxidante. En medios que
contienen oxgeno, en condiciones similares a las atmosfricas, el potencial
redox vara entre 0,2 y 0,4 Voltios. Los anaerobios estrictos necesitan una
atmsfera sin oxgeno pues deben crecer en medios reductores donde el
 49

potencial no sea mayor a -0,2 Voltios. Sin embargo, potenciales redox positivos
creados por la presencia de otras sustancias qumicas no afectan el
crecimiento de los anaerobios ms estrictos, aunque muchos anaerobios
estrictos son inhibidos por potenciales mayores a -0.100 mV.

B. TRANSPORTE DE NUTRIENTES EN LOS MICROORGANISMOS

La membrana citoplsmica controla el paso de los nutrientes dentro de la

clula, as como hacia fuera de la clula. Existen 4 mecanismos que regulan el
transporte de nutrientes:

1. Difusin pasiva

Las molculas de H2O y algunos nutrientes liposolubles pasan

libremente a travs de la membrana hasta equilibrar concentraciones.
No hay consumo de energa.

2. Difusion facilitada

Los nutrientes se unen a una protena transportadora para atravesar la

membrana pasando de mayor a menor concentracin. No hay consumo
de energa.

3. Transporte activo

La mayor parte de los nutrientes son transportados mediante este

mecanismo. Este proceso permite concentrar altos niveles de nutrientes
necesarios para las actividades metablicas dentro de la clula. Hay
consumo de energa. El ATP distorsiona el sitio de unin de la protena
transportadora dificultando a la molcula salir de la clula.

4. Transporte por translocacion de grupo

En este tipo la protena transportadora es un enzima que aade un

grupo fosfato del cido fosfoenolpirvico al nutriente durante el
 50

transporte. Este nutriente alterado ya no es capaz de unirse a la protena

transportadora por lo que se acumula dentro de la clula.

C. CRECIMIENTO DE LOS MICROORG ANISMOS

1. Curva de crecimiento

Un cultivo de un microorganismo, como el de las bacterias es simple y

homogneo, tiene un ciclo de crecimiento como el que se representa a
continuacin, donde se puede distinguir las siguientes fases:

Curva de crecimiento de una bacteria

a. Fase de Latencia: Es la fase de adaptacin al medio, existe aumento de

la masa celular pero no hay aumento en el nmero de clulas.

b. Fase de Crecimiento Exponencial: Es la fase donde se produce un

incremento exponencial del nmero de microorganismos.

c. Fase Estacionaria: Es la fase a la que se llega cuando se ha agotado la

fuente de energa.

d. Fase de Muerte: Es la fase que se caracteriza por una disminucin

exponencial del nmero de microorganismos.
 51

La fase de latencia puede ser inducida por un rpido cambio en las condiciones
del cultivo. En un medio fresco, el largo de la fase de latencia va a depender
del tamao del inculo, de la edad del inculo, y de los cambios en la
composicin y concentracin de los nutrientes que experimenten las clulas.

En el caso de la edad del inculo, ste va a influir en el tiempo de latencia en el

medio fresco debido a la acumulacin de materiales txicos y a la falta de
nutrientes esenciales dentro de la clula durante el crecimiento anterior. En
general, inculos viejos alargan la fase de latencia.

Cambios en la composicin y concentracin de nutrientes entre el cultivo del

inculo y el medio fresco pueden desencadenar el control y la regulacin de la
actividad enzimtica dentro de las clulas o la diferenciacin morfolgica, como
la formacin de esporas. Si las clulas son transferidas de un medio simple a
un medio rico, se van a necesitar ms tiempo y nutrientes para incrementar la
concentracin de enzimas necesarias para el metabolismo.

2. Medida del crecimiento

El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido desde

diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a determinar la
medida del crecimiento mediante diversas metodologas.

Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las

clulas individuales. Existen dos formas para determinar el nmero total de
microorganismos en una muestra:

a. Recuento microscpico de partculas

b. Recuento electrnico de partculas

Para otros, el crecimiento implica el aumento de los microorganismos capaces

de formar colonias debido a que slo se tiene en cuenta el nmero de
microorganismos viables y se lo puede determinar mediante:

a. Recuento de colonias
 52

b. Mtodo del nmero ms probable

Para los fisilogos bacterianos, bioqumicos y bilogos moleculares una medida

del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la sntesis
macromolecular y un incremento en la capacidad para la sntesis de los
componentes celulares es una medida del crecimiento.

a. Determinacin de peso hmedo

b. Determinacin de peso seco

c. Determinacin de nitrgeno total

d. Determinacin qumica de un cido nucleico

Un ltimo grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que

ejercen los microorganismos en los cambios qumicos de su entorno como
consecuencia del incremento de la biomasa.

e. Recuentos Directos

1. Recuento microscopico: Es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza

un equipamiento fcilmente disponible en un laboratorio de microbiologa. Para
estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de recuentos.

La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener veracidad en el llenado

de la cmara con lquido. Otra dificultad es la adsorcin de las clulas en las
superficies del vidrio, incluyendo pipetas.

Las cmaras ms utilizadas son las de Hawksley y la de Petroff-Hausser. La

primera tiene la ventaja que puede ser utilizada con objetivos de inmersin,
aunque la mayora de los recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las
mayores ventajas del recuento microscpico es brindar informacin adicional
sobre el tamao y la morfologa de los objetos contados.
 53

Cmara de recuento de Petroff-Hausser

Area Volumen Factor

Tipo de cuadro
[cm2] [ml] [1/Volumen]

Cuadrado total 1.00 x 10-2 2.00 x 10-5 5.00 x 104

Cuadrado grande 4.00 x 10-4 8.00 x 10-7 1.25 x 106

Cuadrado pequeo 2.50 x 10-5 5.00 x 10-8 2.00 x 107

1/Dilucin: 1 sobre la dilucin utilizada para llenar la cmara de recuento.

Nmero de cuadrados contados: Cantidad de cuadrados de la cmara

que se utilizaron para contar un el nmero de bacterias.
 54

Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cmara.

Depende del tipo de cuadrado en donde se realiz el recuento. Por
ejemplo, cada cuadrado pequeo tiene un volumen de 5 x 10 -8 ml (50
m x 50 m x 20 m = 5 x 104 m3 = 5 x 10-8 ml).

2. Recuento electronico: Los contadores electrnicos permiten realizar

recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de
hongos y microorganismos filamentosos o miceliares.

Estos instrumentos constan bsicamente de dos compartimientos comunicados

a travs de un pequeo conducto. En ambos compartimientos hay electrodos
que miden la resistencia elctrica del sistema, y como el orificio del conducto es
muy pequeo y su resistencia es muy alta, la resistencia elctrica de cada
compartimiento es independiente. El principio de funcionamiento de estos
instrumentos es el que se explica a continuacin. Un volumen fijo de una
suspensin bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al otro a
travs del pequeo conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un
microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de ste se
incrementa debido a que la conductividad de la clula es menor que la del
medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y
contados.

3. Medida de la Bio masa

La medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es utilizada

frecuentemente como base para la medida de una actividad metablica, o de
un constituyente metablico o qumico.

Algunos de los mtodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables,

pero pueden volverse complicados si se busca la exactitud.

Peso hmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es

pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o
centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra.
 55

La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio

intercelular y contribuye al peso total de la masa y generalmente se
ubica entre el 5 y 30% del peso.

Peso seco: El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas

que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado de un
volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica es til
para grandes volmenes de muestra, debido a que diferencias del orden
de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias.

Determinacin de acidos nucleicos: Es una tcnica que permite

determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Se
determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico
(generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la
poblacin.

Determinacion de nitrgeno: Es una tcnica que permite determinar

indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Existen distintas
tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una
muestra en relacin al compuesto que se quiera determinar. Puede
analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el
nitrgeno proteico mediante absorcin en UV, Reaccin de Biuret,
Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de
Kjeldahl.

Incorporacin de precursores radiactivos: Es una tcnica que permite

determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. En esta
tcnica se adiciona al medio un compuesto marcado radiactivamente
que puede ser incorporado a la clula, y luego se determina la cantidad
de marca incorporada por toda la poblacin.

Dispersin de la Luz
 56

Cuando un haz de luz paralelo golpea una partcula en suspensin, parte de la

luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida.
La nefelometra mide la luz dispersada por una solucin de partculas. La
turbidimetra mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz
transmitida a travs de la solucin. En relacin a la longitud de onda y al
tamao de la partcula pueden existir tres tipos de dispersin.

Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para

monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos. Son muy tiles pero
pueden llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin sobre el
peso seco (contenido macromolecular).

Absorbancia en funcin del Peso Seco

 57

Absorbancia en funcin del Peso Seco

Absorbancia en funcin del Nmero de Microorganismos Totales

En estos grficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos

microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la misma absorbancia,
mientras que para el mismo nmero de microorganismos totales la absorbancia
de cada suspensin es distinta.

Medios de cultivo
 58

Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en

concentraciones adecuadas y con condiciones fsicas ptimas permiten un
buen crecimiento de los microorganismos. Contienen una base mineral; fuente
de carbono, nitrgeno y azufre; atmsfera adecuada y los factores de
crecimiento necesarios.

Medio sintetico: son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para el estudio de
requerimientos nutricionales y para obtener resultados reproducibles.

Medio mnimo: son los medios que presentan la mnima cantidad de

nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos.

Medio complejo: medios que contienen nutrientes de composicin qumica

variable o no establecida. Son mezclas complejas y poco definidas de
sustancias. Se forman a partir de extractos animales, vegetales, etc.
Se utilizan cuando se necesita obtener una amplia gama de
microorganismos.

Medio enriquecido: medio que tiene un gran exceso de nutrientes y se

utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias
nutricionales.
No pueden ser selectivos. Agar chocolate, agar cerebro-corazn, etc.

Medio selectivo: medio que slo permite el crecimiento de un grupo de

microorganismos e inhibe el de otros. Permite seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphilococcus).

Medio diferencial: medio que permite revelar caractersticas fisiolgicas de

los microorganismos. Levine (permite visualizar la fermentacin de
lactosa por viraje de un indicador cido-base), Agar sangre (permite
visualizar la sntesis de hemolisinas).

Enriquecimiento: Es una tcnica que permite el desarrollo de un grupo de

microorganismos a partir de una muestra que contiene una gran variedad de
 59

microorganismos. Se utiliza un medio selectivo lquido para favorecer la

competencia entre los organismos y se incuba bajo determinadas condiciones.
Aquellos microorganismos para los que el ambiente sea ms favorable
crecern ms que los otros y finalmente sern predominantes.

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