INFORME COLECTA, EVALUACION Y CONSERVACION DE SEMEN EN UN EQUINO

MACHO QUARTER HORSE

INTRODUCION

La colecta de semen es una tcnica habitual que se emplea para evaluar la capacidad
reproductiva de los sementales, el control rutinario de la calidad del semen, el diagnstico
de la infertilidad y por su puesto la inseminacin artificial ya sea con semen fresco,
refrigerado o congelado.
Los mtodos para la recoleccin de semen en los caballos son diversos entre ellos se
pueden citar: la vagina artificial, la electroeyaculacin, el colector cervical, la extraccin de
espermatozoides de conducto epididimario, la excopula, la masturbacin y el preservativo,
la eleccin del mtodo depende del macho y su entrenamiento sin embargo en su mayora
es necesario el acompaamiento de la hembra en celo como principal estimulo (Serres
Dalmau, 2012).
Todo este tipo de tcnicas como finalidad el aumento de la eficiencia y eficacia de la funcin
reproductiva del sistema de produccin y mejoramiento gentico (RANGEL PORTA, y otros,
2009).
Debido a la prevalencia de problemas reproductivos asociados al semental, relacionados
con la produccin y calidad seminal, el anlisis de semen es una herramienta importante
para el diagnstico y seguimiento. En otros casos las alteraciones de la lbido, dificultades
en la ereccin, la monta o de la eyaculacin e incluso problemas psquicos pueden resultar
factores limitantes que determinen una disminucin de los parmetros reproductivos del
sistema de produccin, siendo estos algunos de los factores que han llevado al desarrollo
de mtodos como la inseminacin artificial que en los ltimos aos ha crecido debido a las
ventajas que aporta a la cra equina, aumento del nmero de yeguas cubiertas por cada
semental, la mejora de los ndices de concepcin de algunos sementales y yeguas
subfrtiles, la posibilidad de almacenamiento, transporte del semen, la disminucin de los
accidentes en los animales y las personas ocurridos durante la cubricin (Serres Dalmau,
2012).

OBETIVOS GENERALES
Realizar el examen general y reproductivo de un macho.
Evaluar la viabilidad y calidad del semen.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Realizar la colecta de semen de un macho Quarter Horse.
Evaluar la viabilidad del semen al utilizar dos diluyentes diferentes para conservar
el semen.
Evaluacin reproductiva del macho.
Evaluacin macroscpica y microscpica de una muestra de semen colectada a
travs del mtodo de vagina artificial.
 EXAMEN REPRODUCTIVO DEL MACHO

Resea
RESEA
Nombre: EDAD: SEXO: ESPECIE: RAZA: PESO:
MACHO Equino Quarter horse 550 Kg
MOTIVO DE DIETA: ESTADO VACUNAS: FIN
CONSULTA: Pasto de corte y REPRODUCTIVO ZOOTECNICO:
Valoracin concentrado Entero Reproductor
reproductiva

Anamnesis:
Este es el ejemplar estrella del criadero, por lo cual est en constante servicio se
reporta que realizo la ltima monta el 28 de junio, puede realizarse de 3 a 4 veces
por semana, tiene un registro de produccin mnimo de volumen de semen
colectado por el mtodo de vagina artificial de 12 mL hasta 50 mL.

Examen clnico general

CONSTANTES FISIOLOGICAS

FRECUENCIA FRECUENCIA TEMPERATURA: PULSO: MEMBRANAS TIEMPO CONDICION

CARDIACA: RESPIRATORIA: 38,5 C 40 ppm MUCOSAS DE CORPORAL:
40 lpm 20 rpm FUERTE ROSA LLENADO
PALIDO CAPILAR: 7/9
2 Seg
TEMPERAMENTO: ACTITUD: MOTILIDAD: A la inspeccin de aplomos y desplazamiento no se
DOCIL ALERTA Normomotilidad evidencia alteracin alguna que pueda influir en la
en los cuatro realizacin de la monta, en cuanto a la evaluacin
cuadrantes. de rganos de los sentidos como vista y olfato
responde a todos los estmulos de forma adecuada.

Conducta sexual o libido: El ejemplar muestra reflejo de flehmen, se observa la

elevacin y retraccin del labio superior por lo cual se realiza la recoleccin de
molculas como las feromonas que le permite al macho reconocer las
caractersticas de la hembra en celo.
Esta conducta permite evidenciar de igual manera que el macho se encuentra en
capacidad de realizar la monta de manera adecuada y efectiva en cuanto a las
caractersticas fsicas externas.
Examen reproductivo externo
Testculos:
A la palpacin se evidencia una consistencia dura pero flexibilidad,
elsticidad y aparentemente normal en cuanto a conformacin la ubicacin
se encuentran en un plano horizontal de forma oval y la ubicacin respecto
al cuerpo el escroto est en la distancia adecuada para brindar la temperatura
adecuada, el tamao del testculo derecho es un poco ms grande y est
ms crneo dorsal en comparacin con el testculo izquirdo, al realizar la
prueba de deslizamiento de membranas no se observa ninguna alteracin.

DIAMETRO DIAMETRO DIAMETRO

TESTICULAR TESTICULO TESTICULO
TOTAL IZQUIERDO
50.5 cm 25 cm 25.5 cm
ECOGRAFIA Testculo Testculo
TESTICULAR derecho. izquierdo
Ancho 5,61 5,57
Alto 6,10 5,75
Largo 5,73 5,42

No se observ presencia de masas ni lquidos al examen ecogrfico.

CLCULOS TAMAO TESTICULAR

Volumen testicular
= ,
= , , , , = , , , ,
= , = ,

Volumen testicular total

= +
= , + ,
= ,

Produccin total de espermatozoides

= [, ()] ,
= [, (, )] ,
= [, ] ,
= .
 Pene y Prepucio
En cuanto a la coloracin e integridad de las mucosas se encuentran
aparentemente normales al tacto se evidencia normalidad en la temperatura,
la forma y volumen son caractersticos de la raza; no se evidencia ningn tipo
de secrecin en uretra y se observa presencia de esmegma producto del
recambio celular y cebo de las glndulas de Tyson de la zona el glande y
porcin interna del prepucio. No presenta alteraciones en su morfologa.

Recoleccin
Lavado del pene: se debe retirar todo el contenido de esmegma y detritos celulares
que puedan afectar la calidad del semen, este se puede realizar con agua y
posteriormente se realiza secado con papel toalla absorbente.
Seguridad: Se debe realizar la restriccin de la yegua por medio de sueltas para
evitar que golpee al macho o al operario al momento del cortejo o la colecta; adems
se debe realizar el vendaje de la cola para evitar la laceracin del pene o la vagina
con los pelos de la cola.

Formas de colecta
1. Vagina artificial: Todas las vaginas artificiales consisten en una caja
externa y un forro interno de ltex entre los cuales se infunde agua tibia y/o
aire para proveer la presin y temperatura adecuadas. Normalmente
 empleamos temperaturas de 40 a 42C, cuando el caballo presenta
problemas para eyacular es conveniente elevar ligeramente la temperatura
del agua para mejorar el estmulo sobre el pene, en ningn caso se deben
sobrepasar los 50C, una temperatura demasiado elevada provocar el
rechazo del caballo a la vagina; como en muchos otros aspectos
encontraremos preferencias individuales respecto a la temperatura interna
de la vagina. El grado de presin dentro de la vagina artificial tambin tiene
un efecto directo en la eyaculacin; debe ser suficientemente alta para
permitir el contacto y la estimulacin del pene pero no debe restringir la
penetracin o expansin del miembro a su estado de plena ereccin. Con
sementales especialmente difciles es conveniente usar un termmetro para
controlar la temperatura interna y pesar la vagina artificial llena o llenarla con
una bomba y un manmetro con el fin de que las condiciones no varen entre
recolecciones. En el momento previo a la recoleccin la vagina artificial se
lubrica con una pequea cantidad de gel estril, debindose evitar los
lubricantes bacteriostticos ya que suelen ser espermicidas, una buena
lubricacin favorece la cpula y la eyaculacin.
Modelos: La vagina Missouri o Nasco, El Modelo japons o
Nishikawa, El Modelo Roanoke, Los modelos Colorado, Lane y CSU
y La vagina Polaca.
2. Preservativo: El preservativo se emplea cuando no se dispone de vagina
artificial o bien el caballo no la acepta. El preservativo se coloca sobre el
pene en ereccin y debe recuperarse inmediatamente despus de la
cubricin evitando que caiga al suelo. La muestra obtenida mediante el
preservativo es completa y representativa, sin embargo debemos tener en
cuenta que est ms contaminado con bacterias y detritus del exterior del
pene que el recolectado en vagina artificial y adems el contacto prolongado
de los espermatozoides con el ltex puede alterar su motilidad, por estas
razones y la incomodidad en su uso no debe ser empleado como primera
opcin para la obtencin del semen.
3. Masturbacin La masturbacin consiste en realizar la recogida del semen
mediante el masaje del pene del caballo, normalmente con ste en estacin
sobre sus cuatro extremidades. Este tipo de recoleccin lleva consigo una
labor ardua durante el periodo de entrenamiento pero suele ser bien
aceptado por los animales y es muy prctico y eficaz una vez que el semental
est acostumbrado.
La tcnica consiste en colocar al semental en un potro de contencin y
excitarlo con una yegua en celo, con el pene en ereccin se coloca una bolsa
sobre el glande y con unas compresas atemperadas a 45 C colocadas una
en el glande y otra en la base del pene masajear hasta que se produce la
eyaculacin.
Esta tcnica es de eleccin en caballos con problemas del aparato locomotor
que les impidan o dificulten la monta o con problemas como ataxia o
incoordinacin ya que permite que la eyaculacin se realice en una postura
 mucho ms estable. Presenta tambin otras muchas ventajas, por ejemplo,
la muestra que se obtiene es perfectamente representativa y la
contaminacin es mnima, se puede realizar adems la recogida fraccionada
del semen y requiere un equipamiento mnimo y una sola persona como
recolector. Una vez el semental ha sido entrenado se puede repetir con la
frecuencia necesaria sin afectar al comportamiento sexual del animal.
4. Colector cervical El Colector Cervical consiste en un recipiente de cristal
soplado de Borosilicato, de un grosor constante de 2.2 a 3 mm, realizado
mediante la tcnica de soplado de cristal en su punto de fusin, en el que se
aprecian con 3 partes diferenciadas: La boca, La ampolla y El cuerpo del
colector.
El colector cervical debe ser introducido a travs de la vagina en el crvix de
la yegua en celo, por su extremo alargado que corresponde al cuerpo del
colector que tras ser introducido, debe presionarse sobre la ampolla para
producir la dilatacin del crvix y la introduccin de esta de manera que
obture completamente la entrada de semen en el tero. Por ltimo la boca
del colector debe ser cubierta completamente por los labios del crvix para
impedir que el semental detecte la presencia de este durante la cubricin.

5. Excopula Consiste en la utilizacin de frmacos para provocar la

eyaculacin de los sementales y puede ser una alternativa a problemas
como la falta de libido o problemas de ereccin, monta o eyaculacin. A
pesar de los numerosos estudios realizados en este campo todava no estn
muy claras las vas nerviosas y los receptores que la desencadenan. De las
distintas teoras, parece que la ms apoyada es la que la eyaculacin est
mediada por receptores alfa adrenrgicos.
Un tratamiento de imipramina oral (3 mg/kg), seguido de una dosis de
xilacina intravenosa 2 h despus (0.66 mg/kg). Los eyaculados fueron de
bajo volumen, alta concentracin espermtica y un alto nmero de
espermatozoides totales.
Para la recogida es necesario un ambiente muy tranquilo para los
sementales y la excitacin previa. En poco tiempo, unos 10 min, se
produce la protusin o ereccin; la eyaculacin se produce
independientemente a stas entre los diez minutos y media hora despus
de la aplicacin del frmaco.
6. Extraccin de espermatozoides del conducto epididimario Los
espermatozoides de epiddimo pueden obtenerse post mortem o tras una
castracin, de hecho, el primer potro nacido de semen congelado se obtuvo
a partir de espermatozoides de epiddimo. Se sabe que despus de la
muerte de un semental los espermatozoides del epiddimo permanecen
viables durante un tiempo antes de que les afecte la descomposicin (24
horas tras castracin a T ambiente).
Para la obtencin de los espermatozoides se disecciona el epiddimo y se
coloca una cnula en el conducto deferente, posteriormente se secciona el
epiddimo en la zona de unin entre el cuerpo y la cola del epiddimo y se
realiza un lavado retrgrado de la cola del epiddimo con un diluyente
adecuado. Hay que tener en cuenta que en la cabeza del epiddimo se
eliminacin de fluidos sobrantes del espermatozoide inmaduro, en el cuerpo
 los espermatozoides comienzan a tener capacidad fecundante y cola donde
fundamentalmente se almacenan espermatozoides maduros. Los
espermatozoides obtenidos mediante este sistema pueden presentar un
cierto grado de inmadurez, se caracterizan por la presencia de un gran
nmero de gotas citoplasmticas y una baja motilidad. Cuando la recoleccin
se realiza postmortem el estado de las clulas suele ser muy deficiente, ya
que los espermatozoides son especialmente sensibles a la hipoxia, la accin
de los frmacos y la endotoxemia, por ello la obtencin de semen en
animales muertos por clico o enfermedades que han precisado tratamientos
farmacolgicos puede no obtener buenos resultados.
7. Electroeyaculacin Utilizando un electroeyaculador que produce
descargas elctricas de diferente intensidad y con frecuencia programable
se excitan las vesculas seminales pudindose obtener un eyaculado. Esta
tcnica no es utilizada en quidos produce un gran sufrimiento que incluso
puede llegar a la muerte del semental.

Para esta prctica en particular se utiliz el mtodo de vagina artificial modelo Missouri.

Preparacin
Este sistema est basado en la adicin de agua y aire a travs de una vlvula que permite
graduar la presin que ejercer la camisa sobre el pene del macho, el agua con que se
completa la cmara debe tener una temperatura de 50-54C, de manera que la temperatura
interna sea de 42-45 C.
Es sumamente importante que la temperatura sea medida mediante un termmetro y nunca
sea estimada; si la temperatura es inferior a la citada no habr suficiente estmulo para la
eyaculacin y si es superior se podr quemar al macho con los consecuentes trastornos
en su conducta sexual.
La cantidad de agua a colocar debe acomodarse al tamao del pene de manera tal que la
presin sea uniforme a lo largo de toda la vagina artificial y no dificulte la penetracin y
ereccin completa del pene. Si la presin es excesiva no permitir la correcta intromisin
del pene con lo cual el semen tomar contacto con las paredes de la vagina artificial a altas
temperaturas y se alterar la calidad de la muestra.
En la superficie interna de la camisa se debe poner un embudo colector plstico desechable,
el cual debe lubricarse con algn elemento no espermicida, tal como gel estril (K-J
lubricating jelly o carboximetil - celulosa estril), se debe adaptar un frasco colector que en
su interior contenga un recipiente u bolsa para colectar el semen y un filtro que permita
aislar la porcin gelatinosa del eyaculado.
El eyaculado debe protegerse de la luz y mantenerse a temperatura corporal hasta ser
transportado al laboratorio o lugar donde se realizara la evaluacin y diluciones para su
conservacin.
El operador encargado de recolectar el semen debe colocarse generalmente del lado
izquierdo junto con el personal que maneja al macho. Debe estar muy atento a las
reacciones tanto de la hembra como del macho para llevar a cabo de manera eficiente el
proceso.
 DILUYENTES

Para este caso en particular se van a utilizar dos diluyentes: Leche descremada UHT y
Opticell en proporciones 1:1 para evaluacin de calidad seminal y 1:2 para conservacin.

Evaluacin calidad del eyaculado

Evaluacin macroscpica
o Volumen: 20 mL
o Color: Blanco cremoso
o pH: 6.5
 Evaluacin microscpica
Las evaluaciones de rutina utilizadas en el pre congelamiento del semen
corresponden a la motilidad total, motilidad progresiva, vigor espermtico,
concentracin espermtica, volumen seminal sin gel, y el aspecto seminal.
Adems, se toman muestras para el anlisis de morfologa espermtica (Wernli,
2010)

o Motilidad individual progresiva (MIP)

Motilidad Progresiva
Se debe evitar que el semen sufra cambios bruscos de temperatura y se debe
contar con todo el material precalentado adems de una platina trmica en el
microscopio (38 a 40). Adems se debe evaluar inmediatamente despus de
la recoleccin. La motilidad progresiva se evala por medio del microscopio
utilizando los aumentos 40 X y 100 X, valorando tanto el movimiento global de
los espermatozoides, como tambin el movimiento individual progresivo de
aquellos mviles.
 Concentracin: 150-300 mlls espz /ml
De una dosis de semen se toma una muestra que se diluye en agua destilada
en una relacin 1:20 (por ejemplo, 50l de semen + 950l de agua destilada).
Despus de la homogeneizacin durante 5 segundos en un agitador
mecnico o en forma manual, se coloca una muestra de la dilucin en cada
hemicmara. El recuento se lleva a cabo en un microscopio a 100X.

El recuento y clculo de la concentracin de espermatozoides difiere segn

el tipo de cmara empleado. Existen en el mercado varios tipos de
hemocitmetros, razn por la cual se darn las indicaciones con un tipo de
cmara variando el clculo segn las instrucciones de uso de cada cmara
Camara de Neubabuer
Con ayuda de una pipeta automtica, se toma una alcuota de semen diluido y
homogenizado que luego transfiere a la hemicamara por medio de capilaridad
entre el piso de esta y el cubre objetos, dejando que la solucin ingrese sin que
pase a los canales laterales. Despus de 5 minutos necesarios para la
sedimentacin de las clulas espermticas, que posteriormente son contadas.
El nmero de espermatozoides es dividido por el rea contada, multiplicada por
la altura de la cmara y por la dilucin utilizada; obteniendo as el nmero total
de millones de espermatozoides por mililitro de semen.

Despus de esperar 5 minutos se enfoca a 100 x y se comienza el recuento. Se

deben contar los espermatozoides contenidos en 80 cuadraditos o sea en 5
cuadrados grandes. Deben contarse los cuadrados grandes separados por triples
lneas, evitando los 7 de los bordes que carecen de esta caracterstica
(generalmente se eligen los cuatro de las esquinas y uno central tomado al azar).
Para estandarizar el conteo, en cada cuadradito chico se contarn los
espermatozoides en l contenidos y aquellos cuyas cabezas se encuentren sobre
los bordes superior e izquierdo, sin contar los que se encuentran sobre los bordes
inferior y derecho. Esto slo es una regla arbitraria y puede modificarse segn la
comodidad del operador que realiza el conteo.

#
=
#

= =



=
,

= = /
= =
 Morfologa
Morfologa Espermtica
Determina el porcentaje de espermatozoides con o sin alteraciones
morfolgicas; el nmero total de las alteraciones no debe ser mayor al 30 %.
Consiste es hacer un extendido del semen sobre un porta objetos precalentado,
se seca y se sumerge en solucin saturada de rojo congo diluido en agua
durante 20 segundos, luego la lmina es lavada por su reverso y sumergida en
una solucin de violeta de genciana al 0.5 % por 5 segundos; posteriormente la
lmina es lavada nuevamente y secada al aire, para ser evaluada en el
microscopio. Entre otras coloraciones para evaluar morfologa espermtica, se
encuentra giemsa, eosina nigrosina y hematoxilina eosina.
El semen equino presenta ciertas caractersticas morfolgicas propias de la
especie tales como: cabeza asimtrica, posicin abaxial de la cola, un acrosoma
de poco volumen y la presencia de microtbulos en su cuello. Adems, se ha
reportado que el porcentaje de espermatozoides normales vara de 51% - 89%;
la presencia de anormalidades mayores suman un 9.5% incluyendo
anormalidades de la cabeza 4.1%, cola doblada debajo de la cabeza 2.5% y
defectos del cuello 2.4%; y anormalidades menores comprometiendo el 10.7%
dentro de las cuales se encuentran colas dobladas 6.9%, prdida de porciones
de la cabeza 1.4% y prdida del acrosoma 2% (Kuisma et al, 2006). Dichas
caractersticas morfolgicas pueden valorarse como anormales, representando
calidad espermtica pobre; sin embargo, se han presentado diversos casos en
los cuales la morfologa de los espermatozoides no est relacionada con la
fertilidad de los mismos; por lo tanto, un gran rango de anormalidades
morfolgicas son aceptables para los machos reproductores (Katila, 2001).
Para este caso en particular se observaron 20% de anormalidades vinculadas a
colas enrrollladas; cuello doblado; cola doble y gotas citoplasmticas.
 o Relacin vivos/muertos
Determinacin de espermatozoides vivos y muertos
El test de vitalidad que ms se utiliza es el test de eosina, tambin conocido con el
nombre de test de Williams Pollack.
Para llevar a cabo este test y determinar el porcentaje de espermatozoides que
estn vivos, se realiza una tincin de eosina.
Los espermatozoides muertos tienen perforaciones y agujeros en sus membranas,
por lo que son permeables al colorante eosina y por tanto aparecern coloreados
tras la prueba de vitalidad. Por el contrario, los espermatozoides vivos no estarn
teidos ya que tienen la membrana intacta y sta impide la entrada de la tincin de
eosina.

= 70 % 30%
Conservacin

Dilucin del semen

Dilucin seminal y centrifugacin
El semen y el diluyente para centrifugacin deben encontrarse a la misma
temperatura en el momento de la dilucin (Morel, 1999). Puede hacerse a 37
C si se realiza inmediatamente despus de la colecta, o a los 22 C si se realiza
un enfriamiento previo del semen, conforme al protocolo francs de
congelamiento (Vidament, 2005).

CALCULOS PARA DILUCIONES

=
[ ] =
= %

Nmero total de espermatozoides por eyaculado.

1. # = [ ]
# = =
Total espermatozoides Motilidad Individual Progresiva
2.
, =
Cantidad de dosis

. =


=

=
Volumen por dosis

4. =

=

=
 Cantidad de diluyente a utilizar
5. =
=

= 14 mL de diluyente

Recomendaciones

La habilidad natural del personal encargado del manejo del macho es una de las
caractersticas fundamentales para conseguir una buena respuesta sexual en el momento
del servicio o dela colecta de semen. Si a esto le sumamos un apropiado mtodo para la
recoleccin de semen, todos estos detalles hacen que las probabilidades de obtener
muestras de alta calidad aumenten significativamente.
La manipulacin adecuada del semen luego de la recoleccin es importante para conseguir
una mayor viabilidad espermtica y as poder incrementar la fertilidad del semen, aun
cuando se trate de individuos subfrtiles en los cuales priman las caractersticas genticas
a heredar.
Todos estos pasos ntimamente encadenados llevan a un aumento de los porcentajes de
preez y a un aumento de la eficiencia reproductiva e incremento de la tasa de natalidad
por ende una mejora en la productividad del criadero.

Los mtodos que permiten evaluar de forma rigurosa las caractersticas tanto fsicas como
reproductivas del macho hacen que al momento de realizar la evaluacin, dilucin y
preservacin por refrigeracin permitan realizar una mejor seleccin de los Machos y por
ende una mejora significativa en los ndices productivos del criadero y sin mencionar que
se aprovecha de la mejor manera el eyaculado de un macho evitando el agotamiento de
sus reservas, lo que llevara en ltima instancia a una disminucin de su fertilidad.
Bibliografa
RANGEL PORTA, L. E., ALARCON ZAPATA, M., GALINA HIDALGO, C., HERNANDEZ CERON, J.,
PORRAS ALMERAYA, A., VALENCIA MENDEZ, J., . . . PARAMO RAMIREZ, R. (2009). MANUAL
DE PRACTICAS DE REPRODUCCION ANIMAL. MEXICO: UNIVERSIDAD AUTONOMA DE
MEXICO.

Serres Dalmau, C. (2012). MTODOS TRADICIONALES Y ALTERNATIVOS DE EXTRACCIN DE SEMEN.

REVISTA COMPLUTENCE DE CIENCIAS VETERINARIAS, 126 - 134.

Wernli, J. (2010). Actualidad sobre la congelacin de semen equino y anlisis de nuevas

propuestas en la composicin de los diluyentes. UNIVERSIDAD DE LA SALLE, 1-71.