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Gnero Brucella spp

FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Gnero Brucella spp


Prof. Marcos JP Gomes

Nos animais: Doena de Bang, Aborto Contagioso, Aborto Infeccioso, Aborto Enzotico e
"Slinking of The Calf".
No homem: Febre Ondulante, Febre de Malta ou do Mediterrneo, Febre Maltesa, Febre de
Gibraltar

ATUALIDADES
Atualmente (2013), na List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature
organizada pelo pesquisador J.P. Euzby h citao de 10 espcies e nenhuma subespcie
neste site www.bacterio.cict.fr/b/brucella. O gnero contm poucas espcies; so elas:
Brucella abortus (Schmidt 1901) (Meyer and Shaw 1920).
Brucella canis (Carmichael and Bruner 1968)
Brucella ceti (Foster et al. 2007)
Brucella inopinata (Scholz et al. 2010)
Brucella melitensis (Hughes 1893) (Espcie tpica do gnero).
Brucella microti (Scholz et al. 2008)
Brucella neotomae (Stoenner and Lackman 1957)
Brucella ovis (Buddle 1953).
Brucella pinnipedialis (Foster et al. 2007)
Brucella suis (Huddleson 1929,)

HISTRICO
Em 1887, foi isolada a primeira espcie do gnero Brucella pelo oficial e mdico
Dr. David Bruce, em amostras (bao) colhidas na necropsia de militares que morreram
vtimas dessa enfermidade nas costas do Mediterrneo, chamada de Febre de Malta. O
organismo foi inicialmente denominado Micrococcus melitensis e posteriormente de
Brucella melitensis.

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Em 1897, Bernard Bang, um veterinrio dinamarqus, isolou de um feto abortado


bovino uma bactria que foi denominada inicialmente de Bacillus abortus e, mais tarde, foi
conhecida como Brucella abortus.
Em 1914, Jacob Traum isolou de um leito abortado a B. suis.
Em 1956, MB Buddle e Boyes, na Nova Zelndia, isolaram um microrganismo com
caractersticas semelhantes ao gnero Brucella spp de ovinos com alteraes genitais.
Em 1953, Simmons e Hall, na Australia, isolou de carneiros com epididimite um
microrganismo idntico ao isolado na Nova Zelndia.
Em 1957, Stoenner e Lachman, nos Estados Unidos, isolou a B. neotomae de um
roedor do deserto de Utah deniomindo Neotoma lepida.
Em 1966, Liland Carmichael, nos Estados Unidos, isolou a B. canis que
posteriormente foi descrita por Carmichael, em 1969.
As espcies B. ovis e a B. canis so mais adaptadas aos seus hospedeiros do que a B.
abortus, B. melitensis ou a B. suis.
Em 1994, Ross e colaboradores, na Esccia, isolaram e identificaram de penpedes
(focas) uma nova espcie do gnero Brucellas. Em 2007, os novos isolados foram includos
no gnero Brucella como o nome de B. pinnipedialis (Foster et al. 2007).
Em 1994, Ewalt e colaboradores, nos Estados Unidos, isolou de um cetceo
(golfinho) capturado. Mais tarde, esses isolados foram incluidos no gnero Brucella com o
nome de B. ceti (Foster et al. 2007).
As amostras isoladas desses mamferos marinhos e os testes sorolgicos neles
realizados demonstraram que a infeco bruclica ocorre em um grande numero de espcies
marinhas.
Em 2008, Barun Kumar De e colaboradores, nos Estados Unidos (Oregon),
descreveram as caractersticas microbiolgicas, bioqumicas e moleculares de uma
cepa/linhagem de Brucella incomum (BO1) isolada de uma prtese de seio (silicone) de
uma senhora com 71 anos de idade com sinais clnicos compatveis com brucelose. A
anlise inicial, incluindo teste de susceptibilidade bioqumica, TSA, anlise de cidos

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graxos e anlise molecular baseadas na reassociao do ADN-ADN e presena de mltiplas


cpias de IS711 sugeriram que o isolado era uma brucella like organism, mas a
determinao da espcie, atravs de dados moleculares baseados no sequencionamento do
16S rARN e na anlise sequencial multilocus, demonstraram que a linhagem BO1 era uma
cepa incomum, atpica e nova de Brucella, pois no est relacionada as atuais espcies
descritas. Em 2010 esta linhagem foi includa na List of Prokaryotic names with Standing
in Nomenclature com a denominao de B. inopinata (brucela no esperada).
Tiller e colaboradores, em 2010, descreveram o isolamento e identificao de uma
bactria incomum, Gram negativo, imvel e Brucella like organism (BO2) isolado de
uma biopsia pulmonary de um homem com doena pulmonar crnica com 52 anos, na
Austrlia. As caractarsticas bioqumicas e moleculares caractersticas da amostra BO2
demonstraram similaridade com a amostra BO1 descrita como B. inopinata.
Em 2009, Natalia E. Schlabritz-Loutsevitch e colaboradores, nos Estados Unidos
(Texas), descreveram e relataram, pela primeira vez, um novo isolado de Brucella
associado a dois casos de morte neonatal em primatas (babunos). As amostras do tero
isoladas foram caracterizadas, utilizando os testes bioqumicos tradicionais, PCR e
sequenciamento de multilocus. Os isolados se assemelham morfologicamente a Brucella
embora suas caracteristicas no fossem consistentes com qualquer espcie descrita.

BRASIL
No Brasil, Gonalves Carneiro, em 1913, relatou, pela primeira vez, um caso de
brucelose no homem. Desde l, vrios inquritos epidemiolgicos revelaram a presena da
enfermidade nos animais domsticos em todo o pas. A brucelose bovina causada pela B.
abortus a mais prevalente das infeces bruclicas no Brasil, seguida da B. suis em
sunos. A B. melitensis e a B. neotomae no foram isoladas/identificadas no pas (Poester et
al., 2002).
Em 1977, um levantamento nacional estimou a prevalncia para cada regio do pas.
Neste estudo a regio Norte obteve uma prevalncia de 4,1%; a regio Nordeste com 2,5%;

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a regio Centro-Oeste com 6,8%; Sudeste com 7,5% e regio Sul com 4%. (Brasil, 1977).
Em 2001, o Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) instituiu o
Programa Nacional de Controle e Erradicao de Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) que
definiu estratgias no controle da brucelose bovina no Brasil (Instruo Normativa 2004).
Os inquritos sorolgicos realizados no perodo compreeendido entre 2001 e 2004, nos 13
estados (BA, ES, GO, MG, MT, PR, SC, RJ, RS, SP, SE, TO e DF) constataram que a
infeco est disseminada em todas as reas estudadas e que a situao desigual entre os
estados e mesmo entre regies de um mesmo estado. Detectou-se uma tendncia de
crescimento da brucelose bovina no pas (Centro-Oeste / Norte) com elevao nos estados
com muita tradio na pecuria de corte. Mato Grosso apresentou aumento da prevalncia
quando comparado ao ltimo levantamento da situao nacional realizado em 1975
(Anselmo e Pavez, 1977). Outros estados diminuram sua prevalncia, especialmente os
estados de Minas Gerais e Santa Catarina que apresentou os menores ndices do Brasil
(Lage et al. 2008).

CARACTERSTICAS GERAIS DO GNERO


Cocos, cocobastonetes ou bastonetes curtos com 0,5-0,7 de dimetro e 0,6-1,5m de
comprimento; arranjos individuais, aos pares, cadeias curtas ou mesmo em pequenos
grupos; acapsulados; no possuem colorao bipolar verdadeira; no possuem esporos;
Gram negativas; imveis; no flagelados; aerbias, possuindo metabolismo do tipo
respiratrio; possuem sistema citocromo, e como aceptor final de eltrons, oxignio ou
nitrato e, sendo assim nitrato redutase produzida. Muitas amostras requerem CO2
suplementar para seu crescimento, especialmente no cultivo primrio. As colnias, em agar
dextrose ou outro meio sem sangue so transparentes, elevadas, convexas com bordos
inteiros, lisos e com superfcie brilhante. Possuem cor de mel quando iluminadas com luz
transmitida. Variantes rugosas de espcies lisas existem. Existem tambm espcies rugosas
estveis com uma preferncia por determinados hospedeiros (caninos e ovinos).

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A temperatura tima de crescimento de 37C. O crescimento ocorre entre 20C a


40C e o pH timo entre 6,6 a 7,4; catalase positiva; geralmente oxidase positiva;
quimiorganotrficas. A maioria das cepas requer meios de cultivo seletivo e complexo,
contendo aminocidos, tiamina, nicotinamida e ons de magnsio. Algumas cepas podem
ser induzidas ao crescimento em meio mnimo, contendo sais de amnio como nica fonte
de nitrognio. O crescimento promovido pela adio de soro ou sangue, entretanto
hemina (Fator X) e nicotinamida adenina dinucleotdio (NAD Fator V) no so essenciais.
Produz cido, mas no de carboidratos em meios convencionais, exceto para a B.
neotomae. No produzem indol; no liquefaz a gelatina ou soro coagulado; no lisam
hemcias; no produzem metil carbinol (Teste de Voges-Proskauer); vermelho de metila
negativo; possuem antgenos intracelulares especficos para o gnero; so parasitos
intracelulares facultativos. So agentes infecciosos transmissveis para muitas espcies
animais, e o homem.

TAXONOMIA
Classicamente, o gnero Brucella continha seis espcies, mas continua evoluindo.
Atualmente, novas espcies foram includas. Cada uma das espcies possui seus
hospedeiros preferenciais: B. abortus (bovinos); B. melitensis (caprinos e ovinos); B. suis
(sunos); B. canis (caninos); B. ovis (ovinos); B. neotomae (rato do deserto, Neotomae
lepida); B. microti (camundongo do campo, Microtus arvalis); B. ceti (cetceos); B.
pinnipedialis (penpedes) e a B. inopinata (homem). Todas so importantes patgenos para
os animais (domsticos e silvestres) e o homem, causando uma doena que denominada
genericamente de brucelose. Exceto a B. neotomae e a B. ovis, todas as demais so capazes
de infectar o homem. Novas espcies como B. pennipedialis dos penpedes; a B. ceti dos
cetceos e a B. microti do roedor Microtus arvalis, e a B. innopinata isolada do homem
foram includas recentemente no gnero.
As alteraes causadas pela brucelose so encontradas nos rgos reprodutores e
sistema microctico fagocitrio (retculo-endotelial). As leses no trato reprodutor incluem

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placentites e/ou abortamentos (bovinos, ovinos, sunos e caprinos) que levam


infertilidade, associadas s perdas econmicas importantes.
A facilidade com que algumas espcies do gnero Brucella podem ser transmitidas
(direta ou indiretamente) aos animais e ao homem mostra a importncia do controle desta
enfermidade.
As caractersticas morfotintoriais e culturais no so suficientes para diferenciar as
espcies novas e clssicas, assim como os seus vrios biovares. Pode no ser correto
associar o isolamento de uma espcie ou biotipo a um hospedeiro, muito embora, cada
espcie tenha certa predileo por certos hospedeiros, conforme o Quadro I.

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Quadro I. As principais espcies de Brucella spp e seus hospedeiros preferenciais


Espcie(s) Hospedeiro Preferencial Hospedeiros secundrios
_____________________________________________________________________________
Bovinos B. abortus B. melitensis**
B. suis
Ovinos B. melitensis** B. abortus
B. ovis (Epididimite)
Caprinos B. melitensis** B. abortus
Eqinos B abortus B. suis
Sunos B. suis B. melitensis**
B. abortus
Caninos B. canis B. abortus
B. melitensis**
B. suis
Homem B. abortus B. canis
B. melitensis**
B. suis
B. inopinata** ?
B. ceti**
B.pinnipedialis** ?
Roedores B. neotomae** ?
(Neotoma lepida)
Camundongo campo B. microti** ?
(Microtus arvalis)
Cetceos B. ceti** ?
Penpedes B. pinnipedialis** ?

** At o presente momento, no h isolamento dessas espcies do gnero Brucella no Brasil.

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DIAGNSTICO LABORATORIAL
O diagnstico laboratorial complexo, pois exige equipamento, meio e pessoal
qualificado. As caractersticas diferenciais entre diferentes espcies clssicas e seus
biovares do gnero Brucella mostrado no Quadro II abaixo.
Quadro II. Caractersticas diferenciais entre espcies/biovares clssicas do gnero Brucella
__________________________________________________________________________________
C r e s c i m e n t o em c o r a n t e s A g l u t i n a o do s o r o
Espcies Biovar CO2 H2S Tionina Fucsina bsica A M R
_________________________________________________________________________________
B. melitensis 1 n n + + n + n
2 n n + + + n n
3 n n + + + + n

B. abortus 1 (+) + n + + n n
2 (+) + n n + n n
3 (+) + + + + n n
4 (+) + n (+) n + n
5 n n + + n + n
6 n n + + + n n
7 +/- + + + + + n
9 n + + + n + n

B. suis 1 n + + n + n n
2 n n + n + n n
3 n n + + + n n
4 n n + (-) + + n
5 n n + n n + n

B. canis n n + (n) n n +

B. ovis + n + n n n +

B. neotomae n + (n) n + n n

Obs. * n = negativo- + = positivo

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Brucella abortus

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Brucelose bovina
Brucelose equina
INTRODUO
O isolamento de Brucella abortus foi obtido nas diversas populaes bovinas
distribudas pelo mundo, embora sejam raros em pases onde programas de controle e
erradicao foram bem sucedidos.

MORFOLOGIA E COLORAO
A B. abortus um bastonete curto ou cocobacilo, medindo 0,5 a 0,7 por 0,6 a
1,5m. Os bastonetes so to curtos que podem ser confundidos com cocos. Eles esto
presentes em arranjos individuais ou cadeias curtas. A B. abortus por ser um parasito
intracelular facultativa e frequentemente encontrada em aglomerados ou em esfregaos de
exsudatos. A B. abortus Gram negativa, corando-se, com alguma dificuldade, pelos
corantes comuns. Ela no lcool cido resistente, mas pode resistir descolorao com
alguns cidos fracos; esta propriedade confere a base para algumas coloraes especiais tais
como a colorao de Kster em que o organismo cora-se de vermelho vivo. B. abortus no
mvel, no forma esporos e no possui cpsula bem desenvolvida. Entretanto, a presena
desta cpsula pode ser demonstrada em cepas isoladas, utilizando-se corantes especiais.

RESISTNCIA E SOBREVIVNCIA
As espcies so inativadas pela pasteurizao entre 10 e 15 segundos; so destrudas
rapidamente pelos desinfetantes comuns como o cresol 3%; hidrxido de sdio a 2%;
compostos de ortofenis 3-5%; mercuriais e lcool 70%.

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O crescimento de B. abortus fora da clula dos mamferos hospedeiros no tem


importncia na epidemiologia da doena, pois ela no se multiplica fora dos animais e
somente persiste no ambiente. A viabilidade dela fora do hospedeiro influenciada pelas
condies ambientais. A sua viabilidade aumentada em temperatura mais amena e
umidade, sendo diminuda quando h alta temperatura, luz solar direta e dessecamento,
como demonstrado no Quadro II.
A resistncia fora do corpo do hospedeiro de aproximadamente: 5 dias
temperatura ambiente; 30-37 dias quando secas lentamente no solo; 75 dias no feto
abortado em clima temperado. O tempo de sobrevivncia nas fezes parece ter importncia,
especialmente em muitos sistemas produtivos. O tempo de sobrevivncia das fezes lquidas
varia, sendo dependente da temperatura de estocagem. Na temperatura de 4550 C a
sobrevivncia da B. abortus de 4 horas, enquanto que na temperatura de 15C de
aproximadamente 8 meses.
Quadro II. Sobrevivncia da B. abortus, segundo o ambiente e o tempo
Ambiente Tempo
Luz direta 4,5 h

Solo
Seco 4 dias
mido 66 dias
Frio 151 185 dias

Fezes
Fluidas 8 240 dias
Altas Temperaturas 2 dias

Urina 5 dias

gua
Tratada 5 114 dias

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Poluda 30 150 dias

Feto sombra 180 dias

OUTRAS FONTES DE INFECO


O papel dos touros na transmisso da B. abortus tem sido objeto de investigaes. A
B. abortus pode causar orquite, epididimite e vesiculite seminal e a localizao nesses
lugares resulta na eliminao do agente pelo smen. Seu potencial de transmisso est
associado ao mtodo de reproduo (monta natural, I.A.) e, freqentemente touros
infectados permanecem frteis.
Equdeos domsticos so susceptveis infeco com B. abortus havendo pouca
evidncia que eles possuam um papel significante na epidemiologia da doena. A B.
abortus geralmente localiza-se na bursa, tendes, msculos e articulaes assim como
tecidos e trato reprodutivo. O achado clnico clssico o abscesso fistulado denominado
Mal das cernelhas ou Mal das Cruzes.

CARACTERISTICAS CULTURAIS E BIOQUMICAS


O crescimento pode ser aerbio, mas muitas cepas necessitam tenso de CO2 para o
seu crescimento, especialmente no isolamento primrio (B. abortus e B. ovis). A B. abortus
catalase e oxidase positivas, produzindo H2S de protenas ou peptdeos ricos em
aminocidos e enxofre. Geralmente produz urease.
Os biovares foram classificados, segundo os testes:
1) Suscetibilidade aos corantes;
2) Necessidade de CO2;
3) Produo de H2S e
4) Presena do antgeno de superfcie A (abortus) ou M (melitensis)
A B. abortus no hemoltica, no liquefaz a gelatina e no produz cido a partir da
glicose ou outro carboidrato, possuindo um padro de oxidao de substrato.

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O crescimento de B. abortus incrementado pela adio de sangue ou soro. Meios


com composio complexa como soro dextrose agar ou Albimi Brucella agar ou caldo
devem ser utilizados no isolamento primrio e/ou na manuteno de cepas.
Antimicrobianos podem ser adicionados ao meio bsico (polimixina B 5.000 UI/L;
bacitracina 25.000 UI/L; ciclohexamida 100 mg/L; cido nalidxico 5 mg/L; nistatina
100.000UI/L e vancomicina 20 mg/L), inibindo o crescimento de contaminantes em
amostras de placenta, secrees vaginais, leite ou fluido do abomaso de fetos abortados.
As colnias da B. abortus no isolamento primrio so de crescimento lento e
raramente visvel antes das 48 horas. Elas atingem o crescimento mximo aps 5 a 7 dias a
37C. A colnia isolada pode ser lisa, caracterizado por serem convexas; redondas com o
bordo inteiro; podem estar dissociadas ou rugosas, caracterizadas por serem colnias
chatas, grandes com aparncia granular e opacas. O crescimento esparso no meio fluido.
A quantidade de C+G do ADN de 57%. A B. abortus mostra 100% de homologia com as
outras brucelas, exceto a B. ovis.

FAGOTIPAGEM
A fagotipagem utilizada para identificar diferentes espcies de Brucella spp,
incluindo as amostras de B. abortus. Os fagos utilizados na rotina so Tb, Wb, Fi, Bk2 e R.
A diluio do fago conhecida como RTD (Routine Test Dilution) que corresponde a
104-105 unidades formadoras de placas por mililitro (UFP/mL). O RTD o nmero mnimo
de fagos responsvel pela lise confluente numa cepa propagante. Os procedimentos para
fagotipagem foram descritos em detalhes por Corbel e Hendy (1985). A fagotipagem uma
ferramenta rpida e segura na identificao de espcies do gnero Brucella.

ANTGENOS
A parede celular da B. abortus consiste de uma camada externa de
lipopolissacardio na qual a cadeia de polissacardeos fica exposta. A cadeia de
polissacardeo possui os antgenos de superfcie principais (A ou M), os quais esto

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envolvidos na aglutinao. Estes antgenos da B. abortus nas cepas lisas esto relacionados
com antgenos de superfcie encontrados na Yersinia enterocolitica 09, sendo fonte de
confuso na interpretao de testes sorolgicos para a brucelose.
As protenas da parede celular esto agrupadas em 3 categorias de acordo com o
peso molecular (SDS-PAGE). As protenas possuem: a) 8.000 a 94.000D; b) 35.000 a
40.000D (porinas) e c) 25.000 a 30.000D. O antgeno protico provavelmente estimule a
reao de hipersensibilidade retardada, provavelmente uma porina. Os antgenos
envolvidos na resposta celular no esto totalmente identificados.

EPIZOOTIOLOGIA
A B. abortus um agente intracelular facultativo de bovinos e outras espcies,
sendo transmitida pela ingesto do alimento ou secrees contaminadas. A transmisso
venrea possvel, mas pouco comum. A transmisso congnita ou intramamria pode
ocorrer. Equinos, ovinos e ces podem infectar-se, mas a transmisso, nestas espcies, para
o hospedeiro primrio pouco provvel. A doena encontrada em todas as regies
criatrias de bovino no mundo, exceto nas reas onde os programas de erradicao tiveram
sucesso.
A B. abortus no resistente luz solar e dissecao, sobrevivendo mais no
inverno do que no vero. Sobrevive no leite, mas destruda pela pasteurizao.
A brucelose bovina endmica no Brasil, estando presente e diagnosticada em
todos os estados, entretanto h grandes variaes entre as estimativas dos estados. O
Ministrio da Agricultura (MA), em 1975, num levantamento soroepidemiolgico estimou
a prevalncia da infeco bruclica em bovinos em 4,0% na regio Sul; 7,5% na regio
Sudeste; 6,8% na regio Centro-Oeste; 2,0% na regio Nordeste e 4,1% na regio Norte
(Anselmo e Pavez, 1977; Poester et al., 2002). Outros estudos, realizados principalmente na
dcada de 80 no detectaram mudanas significativas comparadas estimativa da dcada
anterior. No comeo da dcada de 1990, Minas Gerais iniciou uma campanha de vacinao
compulsria de terneiras com a B19 em todo o estado. Alm de Minas Gerais, o Rio

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Grande do Sul era o nico estado que possua um programa de vacinao ativo, mas com
menores ndices de cobertura vacinal (Paulin e Ferreira Neto, 2003).
No Rio Grande do Sul, os levantamentos regionais revelaram que a situao pouco
mudou nos ltimos anos. O programa bem sucedido de vacinao contra a brucelose bovina
fez baixar a prevalncia de 2% para 0,6% em 1986. O ltimo levantamento, realizado em
2006, revelou uma prevalncia ao redor de 1% com variaes, segundo a regio do Estado.
Segundo os dados oficiais, a prevalncia da brucelose bovina no Brasil variou entre 4 e 5%,
no perodo de 1989-1998 (Brasil, 2001).
Os estudos brasileiros mostraram que foram isoladas e identificadas a B. abortus
biovares 1, 2, 3 e 6 e a B. suis (Garcia-Garrillo, 1987; Langenegger et al., 1975). Giorgi et
al. (1972), em So Paulo, isolaram 23 amostras de B. abortus e B. suis de bovinos, sunos e
equinos. No Rio Grande do Sul, Poester (1974; 1977) isolou B.abortus biotipo 1 e B. suis
de bovinos, equinos e sunos. No Rio de Janeiro, Langenegger et al. (1975), isolaram e
identificaram 10 amostras B. abortus, sendo 4 cepas de B. abortus biotipo 1 e 6 do biotipo
3 de bovinos em matadouro. A maioria dos casos de brucelose humana est ligada a
atividade profissional do trabalhador e essencialmente relacionada com o magarefe.
A prevalncia da infeco humana ou animal muito provavelmente esteja
subestimado, pois so reduzidos os trabalhos disponveis. Em Minas Gerais, Godoy et al.
(1977) estimaram prevalncia de 0,28% de reagentes dentre 9.360 amostras de doadores de
sangue. Barufa (1978), no Rio Grande do Sul, evidenciaram que a enfermidade era mais
frequente em pessoas da zona rural; mais frequente no homem do que na mulher e que o
consumo de queijo no pasteurizado seria a fonte de infeco para o homem.
Nos Estados Unidos, 85% das infeces em bovinos so causadas pelo bitipo 1; as
remanescentes pelos bitipos 2 e 4. As propriedades de maior tamanho provavelmente
possuem maiores infeces maiores pela manuteno de animais, latentemente infectados.
O uso de reas de pastejo comunitrias pode ser um fator na transmisso de B. abortus
entre as propriedades. H casos de infeco por B. abortus em vrias espcies silvestres
como bises, cervdeos e alces. O convvio destas espcies com bovinos aumenta a

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possibilidade de infeces cruzadas, representando uma via pouco frequente. Na frica, a


situao bem diferente, ocorrendo casos de brucelose bovina devido transmisso,
atravs dos animais silvestres.
Os animais pr-pberes so geralmente resistentes infeco, mas h um aumento
da suscetibilidade infeco com o amadurecimento sexual e prenhez. A infeco da
bezerra (terneira) pode ocorrer no tero da me ou pela ingesto de leite contaminado.
Animais expostos podem desenvolver infeces latentes que no so detectveis, atravs de
testes sorolgicos. A freqncia de tais infeces est estimada em 2 a 3 % dos animais
expostos. Os animais com infeco latente podem permitir a transmisso da infeco ao
produto e disseminar a brucelose em uma propriedade (tida como) indene. Nos machos, os
casos de epididimites e orquites so relativamente comuns, podendo assim, transmitir a
brucelose, atravs do smen contaminado.
A principal porta de entrada da B. abortus a mucosa oral de terneiros ou terneiras
que ingerem leite contaminado; nasofaringe e a mucosa conjuntival e, mais raramente, o
trato genital de machos e de fmeas. Sob condies experimentais, o organismo penetra na
pele ntegra de cobaias, sunos e bovinos. Aps a penetrao a B. abortus dirige-se ao
linfonodo regional e, posteriormente corrente sangunea. A fase de bacteremia resulta na
disseminao do organismo ao bere, tero e linfonodos associados.
A B. abortus um microrganismo intracelular facultativo, podendo sobreviver e
multiplicar-se em macrfagos e clulas epiteliais. A sobrevivncia nas clulas fagocticas
do hospedeiro, em parte, est relacionada falha do organismo em estimular um nvel
efetivo de desgranulao aps a entrada do agente. Este efeito mais aparente em B.
abortus com variantes lisas do que nas rugosas. A B. abortus possui uma resistncia natural
morte intraleucocitria. O agente prolifera maciamente em clulas com altos nveis de
eritritol, como aquelas encontradas no trato genital de fmeas prenhe e macho. As bactrias
penetram nas clulas epiteliais do crion e proliferam, produzindo placentite e endometrite
com ulcerao da camada de revestimento do tero.

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As leses no feto incluem: edema, congesto pulmonar, hemorragias do epicrdio e


da cpsula esplnica. A morte fetal segue, mas no certo que seja devido endotoxinas da
B. abortus ou interferncia da funo placentria. A presena dos organismos induz
inflamao das membranas, interferindo com a circulao do feto e pode explicar o porqu
do aborto. O feto morre por falta de aporte nutricional. O organismo encontrado no
estmago e pulmes do feto abortado. O aborto, geralmente ocorre no tero final da
prenhez. Aps o parto ou aborto a B. abortus est presente nas descargas uterinas por
poucos dias, sendo gradualmente eliminada do trato reprodutivo. A infeco pode ser
mantida no sistema microctico fagocitrio e bere. Grande nmero de bactrias
eliminado no leite e fonte de infeco para bezerros (terneiros) e para o homem. A maioria
dos infectados permanece portador pela vida, eliminando o organismo no exsudato e no
leite, aps cada parto. A B. abortus pode ser detectada nos linfonodos do trato digestivo e
bao de animais infectados, podendo ser isolada do sangue e de higromas do joelho. O
higroma da articulao do joelho possui alta correlao com abortos causados por B.
abortus em animais no continente africano, onde um grande nmero de organismos
virulentos est presente no fluido.
B. abortus pode infectar equinos em menor frequncia do que em bovinos. Nos
equinos, as localizaes preferenciais so: bursas, articulaes ou bainhas tendneas, e tem
sido encontrada em bursites supra-atlantal, bursites supra-espinosa e em cernelhas
fistulosas (Mal das cernelhas). Esta bactria pode tambm infectar ovinos, caprinos e
sunos, mas numa frequncia menor.

IMUNIDADE
A B. abortus parasito intracelular facultativo, podendo escapar do efeito
bactericida do anticorpo ou complemento presente no plasma. A imunidade protetora
depende principalmente da resposta celular em que a atividade ltica dos macrfagos
iniciada, aps a ativao das linfocinas pelos linfcitos T. A opsonizao pelos anticorpos

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facilita a entrada da bactria nos macrfagos, aumentando a possibilidade da morte


bacteriana intracelular.
As bactrias multiplicam-se mais lentamente nos macrfagos de animais vacinados
do que em animais controle no vacinados. O anticorpo humoral pouco correlacionado
com a imunidade protetora. Fmeas vacinadas com B19, quando (bezerras) terneiras,
mostram-se resistentes ao desafio, aps os ttulos carem a nveis abaixo dos detectveis.
Entretanto, grandes doses de soro hiperimune podem interromper a difuso de Brucella spp
nos animais infectados. Aps a infeco, aglutininas da classe IgM so as primeiras
imunoglobulinas a aparecerem no plasma, atingindo o seu pique em 2 semanas. Os
anticorpos IgG aparecem um pouco mais tarde, superando os ttulos de IgM em 4 a 6
semanas e, permanecendo como anticorpos dominantes. Bovinos infectados possuem altos
ttulos de IgG. Estes anticorpos aglutinantes no possuem atividade opsonizante e nenhum
efeito sobre a eliminao do organismo. Em bezerras vacinadas com a B 19, a produo de
IgM aumenta rapidamente. O anticorpo IgG1 eleva-se mais lentamente, no atingindo altos
nveis, nem persistem por muito tempo. Os anticorpos de IgG1 so muito mais baixos nos
animais vacinados do que dos animais naturalmente infectados.

DIAGNSTICO
A infeco causada pela B. abortus pode ser detectada, atravs do: a) diagnstico
bacteriolgico; b) diagnstico sorolgico e c) diagnstico molecular.

Diagnstico bacteriolgico
O isolamento da B. abortus obtido pelo cultivo no meio base (agar Triptose ou
agar Albimi) com a adio de soro e ATMs. O cultivo incubado 37C em uma atmosfera
de 10 % de CO2, durante, pelo menos, 4 dias.
As amostras podem ser obtidas de feto abortado; placenta; exsudato uterino; leite e
abscessos. A prova biolgica consiste na inoculao de tecidos ou fluidos macerados em
cobaias, devendo ser sacrificados 3 a 6 semanas, mais tarde. O soro testado para a

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presena de anticorpos e os rgos como o bao, fgado, linfonodos regionais e testculos


devem ser cultivados para o re-isolamento de B. abortus.
O exame direto de tecidos pode ser realizado pela IF (Imunofluorescncia) ou pela
imunoistoqumica. Estas tcnicas podem ser importantes, especialmente em amostras
contaminadas (membranas fetais, cotildones, secrees vaginais ou fetais), apesar de ser
pouco utilizada na prtica.

Diagnstico sorolgico
Os testes sorolgicos para diagnstico da brucelose tiveram inicio, em 1897, com o
desenvolvimento do teste de aglutinao de Wright (Wright e Smith, 1897). Problemas de
reaes sorolgicas positivas resultantes de exposio a outras bactrias ou reaes
cruzadas foram detectados. Desde ento, melhores testes tm sido desenvolvidos e muitos
destes so utilizados mundialmente. Raras enfermidades infecciosas apresentam tanta
variedade diagnstica como a brucelose. Estes mtodos incluem testes aplicados no soro,
no sangue total, no muco vaginal, no plasma seminal, no leite dessorado ou no leite total.
O diagnstico da brucelose, de um modo geral, enfrenta situaes especficas e
prprias que podem interferir com o desempenho dos testes aplicados (sensibilidade e
especificidade). Reaes inespecficas so atribudas a anticorpos naturais ou a produtos
catablitos de organismos que compartilham antgenos de estruturas semelhantes s da
Brucella. Reaes cruzadas com outros microrganismos como: Salmonella urbana,
Escherichia coli O:116 ou O:157, Stenotrophomonas maltophilia e Yersinia enterocolitica
O:9 so alguns desses exemplos.
A membrana externa da brucela lisa composta de fosfolipdios, protenas e LPS-S.
A maioria dos testes sorolgicos, particularmente aqueles que utilizam suspenso de
bactrias ntegras como o teste de soro-aglutinao lento (SAL) em tubo; o teste do
Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) e o teste de Fixao do Complemento (FC); a
maioria dos testes de ELISA e o Teste do Anel em Leite (TAL) foram desenvolvidos para
detectar anticorpos contra a cadeia O do LPS-S.

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Estes testes so teis em levantamentos, campanhas em larga escala e em programas


sanitrios de controle e erradicao com fins comerciais, muito embora outros testes como
ELISA no sejam oficialmente reconhecidos no Brasil, no contexto do Programa Nacional
de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT). Alguns destes testes so
aplicados como teste de triagem por serem baratos, simples, com alta sensibilidade,
seguidos de testes confirmatrios mais especficos.

Teste do Antgeno Acidificado Tamponado (AAT)


O teste do AAT uma modificao do teste de aglutinao em placa. O antgeno
corado pelo Rosa de Bengala e tamponado a um pH de 3,65. Neste pH as aglutininas no
especficas so inativadas o a IgG dos animais infectados, aglutinam fortemente. Iguais
volumes de soro e antgeno (30l) so misturados; agitados por 4 minutos e observados em
caixa com iluminao indireta. O teste barato e simples de realizar. Apesar de melhorar a
especificidade num pH cido, resultados falso-positivos podem ocorrer, geralmente devido
a presena de IgM devido a vacinao pela B19.

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1) B. abortus; 2) B. canis; 3) B. ceti; 4) B. melitensis; 5) B. microti*; 6) B. neotomae; 7) B. ovis; 8)


B. pinnipedialis; 9) B. suis biovar 1; 10) B. suis biovar 2; 11) B. suis biovar 3; 12) B. suis biovar 4;
13) B. suis biovar 5.
Espcies 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Urease +**** + + + + + - + + + + + +
VP - - - - + - - - - - - - -
Fago Tb**
+ - - - - d - -***** - - - - -
(Tbilisi)
Fago Wb**
+ - + - + + - + + + + + +
(Weybridge)
Fago Iz**
+ - + + + - + + + + + +
(Izatnagar)
Fago** R/C - + - - - + - - - - - -
L-Alanina*** + - - + - d - d - d - -
L-Arabinose*** + - + - + - - + + - - -
L-Arginina*** - + - - - - - + + + + +
L-
+ - - + + + - - d - - d
Asparagina***
Meso-
+ d d + + - + + + + + +
Eritritol***
D-Galactose*** + - + - + - - + + - - -
L-Acido
+ + + + + + + d + + + +
glutmico***
L-Lysina*** - d - - - - - + d d d d
DL-Ornitina*** - + - - - - - + + + + +
D-Ribose*** + + + - d - + + + + + +
D-xilose*** - - + - - - - + d d d d
Hospedeiro Sui,
Bov Can Cet Cap Mar Nle Ov Pin Sui Sui Ren Ren
preferencial Leb
Espcies 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
1) B. abortus; 2) B. canis; 3) B. ceti; 4) B. melitensis; 5) B. microti*; 6) B. neotomae; 7) B. ovis; 8)
B. pinnipedialis; 9) B. suis biovar 1; 10) B. suis biovar 2; 11) B. suis biovar 3; 12) B. suis biovar 4;
13) B. suis biovar 5.

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Fixao do Complemento
Este teste considerado como o teste confirmatrio na deteco sorolgica de
anticorpos de animais infectados. Ele foi modificado, padronizado e adaptado ao sistema de
microplacas (Alton et al. 1988; Anon, 2000). Ao contrrio do teste SAL, os ttulos no
diminuem quando a doena torna-se crnica. Os resultados so expressos em unidades
internacionais (UI) e, apesar de no estar padronizado no Brasil, o ponto de corte definido
por alguns pases em 20 UI que aplicado rigorosamente onde a B19 no tiver sido
utilizada por muitos anos. A sua aplicao restrita em pases que aplicam a B19 como a
frica do Sul que frequentemente tem problemas com um nmero inaceitvel de falso-
positivos, pois a vacinao induz a ttulos significantes. necessrio treinamento e
experincia para certificar como livres de brucelose, quando rebanhos ou animais
individualmente so positivos ao teste.
Os ttulos vacinais tendem a declinar mais rpido do que aqueles devido infeco
com cepas de campo. O declnio de ttulos tambm dependente da idade de vacinao dos
animais. Existe uma dificuldade na diferenciao das reaes vacinais das causadas por
cepas selvagens, no existindo nenhuma prova sorolgica capaz de diferenciar ttulos
vacinais de infecciosos. A vacinao de novilhas e animais adultos pode resultar em muita
confuso na interpretao de testes laboratoriais, sendo essencial o registro de vacinaes e
de datas de nascimento para permitir a correta interpretao dos resultados do testes de FC.
Este teste preconizado em bovinos para comrcio internacional.

Teste de Soroaglutinao lenta (SAL)


O teste de soro-aglutinao em tubo (SAL) foi, no passado, utilizado nos programas
de erradicao da brucelose em muitos pases. O antgeno e as condies do teste foram
padronizados internacionalmente. O teste realizado em pequenos tubos e com diluies
seriadas do soro. A aglutinao completa na diluio 1:100 ou maior considerada
positiva. Mais tarde, este teste foi adaptado como teste de SAR (soro aglutinao rpida) e
hoje no mais utilizado.

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Em alguns pases, o teste de SAL foi, e ainda utilizado, associado ao teste do 2-


mercaptoetanol (2ME), como teste confirmatrio nos programas de erradicao e controle
da brucelose. Ele considerado como de alta especificidade quando associado ao 2ME e
alguns autores desencorajam o seu uso isoladamente, especialmente para propsitos
comerciais.
Aglutininas no especficas no soro so diminudas pela adio de EDTA, sem a
reduo nos ttulos de B. abortus de animais infectados. O teste de SAL-EDTA um teste
muito mais especfico e particularmente til na deteco de infeces novas,
particularmente naquelas com duas semanas de curso como demonstradas em condies
experimentais, mas sua utilidade em rebanhos que esto cronicamente infectados mais
limitada, pois alguns animais infectados poderiam ser classificados como negativos pelo
teste, pois a infeco est na fase crnica. O teste de SAL ainda muito til como teste
suplementar para indicar os nveis de anticorpos IgM, a imunoglobulina aps a vacinao
com a B19, mas no serve como indicador de infeco ou vacinao.

O teste do 2-Mercaptoetanol (2ME)


um teste utilizado em paralelo com a prova lenta que por sua seletividade apenas
para IgG empregado como teste complementar aos testes de triagem. Os anticorpos da
classe IgM degradam-se em presena de substncias, contendo radicais tiol como o 2ME.
Desse modo, as amostras de soro com predomnio de IgM apresentam-se negativas ao 2ME
e positivos prova lenta. Este mesmo resultado pode ser interpretado como resultado
inconclusivo. Se os 2 testes forem positivos com predomnio de IgG, eles podem indicar
infeco.

O teste de ELISA indireto (ELISAi)


O teste de ELISA indireto (ELISAi) possui uma sensibilidade semelhante do
AAT, porm menor que a FC. O teste ELISA foi o teste substituto do AAT por estar
padronizado e sua leitura feita por espectrofotmetro ao invs de visual. Deve-se ter

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cuidado ao empregar-se esta tcnica em rebanhos vacinados com B19, pois muitos
resultados falso-positivos podem ocorrer. O teste tem sido indicado para o comrcio
internacional de bovinos pela OIE (Anon, 2000).

O teste de ELISA competitivo (ELISAc)


A base deste teste foi o uso de anticorpo monoclonal seletivo (Mab) que compete
com o anticorpo a ser testado. O ELISAc utiliza um Mab especfico para um dos epitopos
da B. abortus (cadeia O) e que por isso possui maior especificidade do que o ELISA
indireto. O ELISAc foi capaz de eliminar em parte, os problemas de reaes ps-vacinais
(B19) ou com outras bactrias. Infelizmente, o ELISAc resolve apenas parcialmente este
problema. Ainda persistem os anticorpos aps a infeco com Yersinia enterocolitica O:9 e
pela vacinao com B19. Entretanto, a atividade do anticorpo residual devido vacinao
ou reao cruzada foi menos persistente neste teste do que com os outros testes.
recomendado como teste alternativo no comrcio internacional de bovinos pela OIE (Anon,
2000)

Ensaio da Polarizao Fluorescente (EPF)


O ensaio de polarizao fluorescente uma tcnica rpida e simples para mensurar a
interao antgeno-anticorpo, sendo til tanto no laboratrio quanto em trabalhos de campo.
O mecanismo do teste baseado na velocidade de rotao aleatria das molculas em
soluo. Molculas menores apresentam maior velocidade e vice-versa. O antgeno,
conjugado com fluorcromo de baixo peso molecular (um fragmento do polissacardeo O da
B abortus) adicionado ao soro ou outro fluido a ser testado. Se o anticorpo estiver
presente, h a ligao com o antgeno marcado, causando uma diminuio de taxa de
rotao que pode ser medida por um equipamento de luz polarizada. O EPF tem
apresentado bons resultados em trabalhos experimentais. Este teste recomendado como
uma alternativa para o mercado internacional de bovinos, pela OIE.

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Teste do Anel em Leite (TAL)


O teste do anel em leite (TAL) foi utilizado na deteco de anticorpos no leite. O
desenvolvimento de reao positiva depende de duas reaes:
a) Glbulos de gordura no leite so aglutinados pelos anticorpos no leite
(aglutininas/glbulos de gordura)
b) Brucelas coradas pela hematoxilina (antgeno) que so adicionadas ao leite e que
formam um complexo antgeno/anticorpo e glbulos de gordura que ascendem superfcie,
formando uma camada colorida no topo do tubo de teste.
O teste foi utilizado com teste de detriagem pela sensibilidade e versatilidade, pois
pode detectar a infeco bruclica nas amostras de leite (tarro ou de tanques) de rebanhos
com animais infectados, nos indivduos infectados de um rebanho ou no monitoramento de
rebanhos livres. A sensibilidade reduzida quando aplicada em rebanhos grandes com
poucos reagentes. Entretanto, a perda na sensibilidade em rebanhos grandes com 150 ou
mais animais pode ser contrabalanada pelo aumento na proporo do leite em relao ao
antgeno adicionado amostra. Apesar de sua reduzida sensibilidade em grandes rebanhos,
o TAL tem tido sucesso no monitoramento de rebanhos leiteiros livres de brucelose. Aps
um teste positivo no tarro, as vacas que contriburam com esse leite devem ser
individualmente testadas pela sorologia, na identificao das fmeas infectadas.
O TAL tem desvantagens como resultados falso-positivos incluindo
1-Prevalncia alta de mastites;
2-Proporo alta de vacas no incio e fim de lactao;
3-Vacinao recente com B19 (3-4 meses);
4-Leite congelado.
As amostras de leite podem ser preservadas para o TAL pela adio de 0,5 mL de
soluo de formalina (7,5 mL de 37% de formaldedo em 1 litro de gua destilada) para 10
ml de leite se o teste for realizado muito longe.

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No TAL o antgeno uma suspenso morta de B. abortus, coradas pela


hematoxilina. Leite fresco misturado ao antgeno na proporo de 1 mL do leite para cada
gota de antgeno. A mistura incubada a 37C, durante 1 hora. Caso seja positiva, a reao
apresentar agrupamentos de organismos na poro superficial, levados pelos glbulos de
gordura. Assim, um teste positivo evidenciado pela formao de um anel de colorao
violeta azulada na poro superior do tubo. A durao e temperatura na qual as amostras
so estocadas podem causar reaes falso-positivas (em particular temperaturas maiores de
45 C por 5 min). As amostras pasteurizadas no devem ser testadas pelo TAL.
Vrios pases tm substitudo o TAL pelo ELISAi para o leite. Embora essa tcnica
no esteja padronizada, ela recomendada no comrcio de bovinos pela OIE.

Diagnstico molecular (PCR)


Numerosos ensaios, utilizando o PCR j foram desenvolvidos na identificao de
espcies do gnero Brucella spp, especialmente nos estudos epidemiolgicos. Vrias
estratgias tm sido exploradas na diferenciao de espcies de Brucella, incluindo locus
specific multiplexing como o baseado no IS711 (sequncia de insero); PCR-RFLP no
locus omp2. Infelizmente, no h tcnica robusta o suficiente que permita a diferenciao
entre os diferentes bitipos. Inicialmente, esses ensaios foram dirigidos ao ADN purificado
de isolados cultivados, mas to logo novas linhagens foram identificadas (no leite e queijo),
novos avanos permitiram a melhoria dessa tcnica diagnstica em laboratrios como a
remoo de inibidores da PCR.

TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS


A B. abortus sensvel s gentamicinas, canamicinas, tetraciclinas e rifampicinas. A
tetraciclina associada estreptomicina no tratamento de brucelose humana. A combinao
de cotrimoxazol rifampicina ou tetraciclina e estreptomicina rifampicina tambm
utilizada. A localizao intracelular do organismo requer uma terapia prolongada. Bovinos
no devem ser tratados com ATMs.

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VACINAS
H dois imungenos importantes no controle da infeco por B. abortus: a vacina
elaborada com a amostra B19 e a vacina elaborada com a amostra RB51. As 2 vacinas so
vivas. A cepa 19 consiste de uma linhagem vivel, caracterizada pela baixa virulncia
(cobaias e bovinos) e excelente propriedade imunizante. Esta cepa possui grande
estabilidade. A sua virulncia no foi alterada desde 1930, ano em que foi isolada pela
primeira vez. A cepa B19 uma amostra lisa de B. abortus, levemente patognica para
cobaias. Vacas prenhes podem abortar pela inoculao da vacina B19 e, nesse caso, o
organismo vacinal pode ser demonstrado com facilidade nas membranas fetais e feto. A
linhagem vacinal, raramente eliminada pelo leite. Ela pode causar infeco no homem,
geralmente de forma leve, com perodo de recuperao mais curto do que infeces por
cepas virulentas. Esta vacina deve por isso ser manipulada com cuidado.
As terneiras (bezerras) devem ser vacinadas entre 4 e 8 meses de idade. A vacinao
nessa idade recomendada para evitar a persistncia de aglutininas e problemas no
diagnstico mais tarde.
A cepa B19 protege da infeco por B. abortus cerca de 70% das vacas ou por 4 a 5
gestaes, sendo mais efetiva na proteo de animais jovens de cria quando aplicada sob
bases populacionais. Animais adultos vacinados com a B19 so protegidos, mas
desenvolvem aglutininas, persistentemente. H evidncias de que se reduzirmos a dose
vacinal haveria uma menor persistncia de aglutininas, mas esta prtica no recomendada
no Brasil. A vacinao de vacas no perodo de prenhez inicial com grandes doses (60
bilhes) de B19 produz uma alta probabilidade de infeco uterina. O risco menor quando
a dose reduzida (300 milhes).
A vacina elaborada com a cepa rugosa 45/20 de MacEwen no mais empregada
em nosso meio, mas foi usada no Brasil e amplamente utilizada na Irlanda e outros pases
europeus no controle da brucelose bovina, no passado. uma vacina produzida com a
bactria morta e com adjuvante oleoso.

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CONTROLE E PREVENO
As perdas econmicas advindas da brucelose, juntamente com o perigo de infeco
humana, impuseram o programa de controle e erradicao da doena. No Brasil, a perda
econmica com a brucelose bovina foi estimada, em 1971, como algo em torno de 32
milhes de dlares anuais (Poester et al., 2002). muito provvel que esses prejuzos
estejam subestimados e urge que faamos um levantamento da prevalncia da brucelose em
todos os estados do Brasil. Assim poderamos inferir nos prejuzos diretos e indiretos da
brucelose nos bovinos e em outros animais de produo.
Os princpios incorporados no PNCEBT foram dependentes das condies locais,
manejo e do nmero de animais envolvidos.
1) Animais infectados devem ser detectados, marcados e eliminados da propriedade.
A deteco realizada pela sorologia ou ainda utilizando o Teste do Anel no Leite como
teste de triagem, seguido pelo teste de aglutinao de cada amostra animal com sacrifcio
dos reagentes.
2) A vacinao obrigatria com B19 de terneiras (bezerras) entre 4-8 meses deve
aumentar a resistncia dos animais. importante esclarecer que no RS aconselhado fazer
a vacinao de animais um pouco mais cedo, pois algumas raas europias ciclam com 5-6
meses de idade.
3) Princpios gerais de higiene so impostos na preveno da infeco ou re-
introduo da infeco. A doena desaparece dentro de 2 anos e, ao final de 5 anos, dos
animais com infeco crnica, se forem tomadas essas medidas,.

VACINA RB51
A amostra RB51 uma amostra rugosa, estvel e que no contm cadeia O no LPS
da parede celular e comporta-se bioquimicamente como a linhagem lisa 2308 em sua
utilizao do eritritol, da qual foi originada. A RB51 induz a formao de anticorpos s
protenas da membrana externa, mas no contra a cadeia O. Por esta razo pode ser

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aplicada em animais com qualquer idade, pois no interfere com os testes sorolgicos. Ela
possui reduzida virulncia para camundongos por ter um perodo curto de "clearence" no
bao, conferindo por isso imunidade ao camundongo imunizado e desafiado com B. abortus
2308. Esta vacina est sendo utilizada em vrios pases, inclusive no Brasil, pois no
interfere nos testes sorolgicos tradicionais para deteco de anticorpos contra o LPS
(lipopolissacardio) da cadeia O.
A vigilncia de uma propriedade deve ser mantida por meio de testes sorolgicos
peridicos; pelos testes nos animais comprados; pela ocorrncia de sinais clnicos
compatveis com a enfermidade e pelo exame sorolgico de animais enviados ao
matadouro.
Quadro IV. Resultado dos testes, segundo a tcnica AAT, 2ME de brucelose LABACVET-UFRGS, entre
2001 e 2010.

Ano Amostras AAT 2ME % AAT 2ME % 2ME

2001 1.745 222 148 12,7 66,6 8,4

2002 1.433 208 143 14,5 68,7 9,9

2003 535 126 70 23,5 55,5 13,0

2004 61 0 0 0

2005 212 27 13 12,7 48,1 6,1

2006 6 2 33,3 ?

2007 86 16 1 18,6 6,25 1,1

2008 12 0 0 0

2009 65 14 21,5 21,5

2010 10 3 3 30 30

2011

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Quadro V. Amostras de soro trabalhadas no LABACVET-UFRGS entre 2001-2010


Ano Bovino Eqino Suno Caprino Ovino Canino
2001 1745
2002 1433 11 0 15 70 16
2003 535 2 0 31 120 25
2004 61 2 0 1 26 141
2005 259 5 1 63 220 79
2006 41 9 0 1 97 184
2007 88 50 0 56 53 424
2008 12 32 0 1 138 70
2009 65 25 0 49 141 31
2010 10 13 0 12 8 3
2011
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Brucella ovis

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Brucelose Ovina
Epididimite Ovina
INTRODUO
A Brucella ovis causa uma enfermidade crnica nos ovinos e, caracterizada
principalmente por alteraes testiculares com conseqncias sobre a fertilidade dos
carneiros, abortos ocasionais nas ovelhas e aumento da mortalidade de perinatal em
cordeiros.

HISTRICO
A B. ovis foi isolada, na Nova Zelndia, pela primeira vez, em 1952, por McFarlane
e colaboradores.
Na Austrlia, Simmons e Hall, em 1953, isolaram e descreveram o organismo como
semelhante a brucella like organism.
Em 1953, Buddle e Boyes consideraram-na como uma mutante da Brucella
melitensis. Buddle props os nomes de Brucella ovis, tendo como base os antgenos de
superfcie comuns entre a amostra e as amostras rugosas de B. abortus e B. melitensis.
Props tambm o nome da doena como epididimite infecciosas dos carneiros.
A homologia do DNA recentemente props a existncia de uma nica espcie, a B.
melitensis, no gnero Brucella e as demais espcies (de hoje) seriam biovares. Assim
teramos B. melitensis biovar Ovis. Esta proposta, no entanto, no se concretizou na prtica.

DISTRIBUIO
A infeco cosmopolita, especialmente nos pases onde h criao de ovinos. A
infeco maior quando detectada pela primeira vez, podendo variar entre 20 a 60% dos

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carneiros e em 45 a 75% dos rebanhos testados. A prevalncia baixa, nos pases onde h
programas de controle, entretanto a erradicao difcil de ser alcanada.
A B. ovis produz doena clnica ou subclinica em ovinos que caracterizada por
leses genitais em carneiros e placentite nas ovelhas. A principal consequncia da doena
a reduo na fertilidade dos machos, abortos espordicos na fmea e aumento da
mortalidade perinatal. A doena tem sido relatada na Argentina, Austrlia, Brasil, Canad
Chile, Frana, Alemanha, Hungria, Mxico, Nova Zelndia, Peru, Romenia, Russia,
Repblica Eslovaca, frica do Sul, Espanha, Uruguai, EUA, mas provavelmente ela ocorra
na maioria dos paises produtores de ovinos.

IMPACTO ECONMICO
O impacto econmico difcil de ser quantificado. No Brasil, sabemos que a
enfermidade causa prejuzo direto e indireto sobre a produtividade dos rebanhos infectados,
especialmente sobre a fertilidade de reprodutores ovinos (machos e fmeas). Recentemente,
as autoridades governamentais brasileuras elaboraram um programa nacional de controle da
brucelose ovina para o Brasil, mas ainda no foi efetivamente implantado.

CARACTERSTICAS MORFOLGICAS ECULTURAIS


A B. ovis um cocobastonete ou bastonete Gram negativo; no encapsulado; no
forma esporos; possui tamanho de 0,5 a 0,7 de dimetro e 0,7 a 1,2 m de comprimento;
corados pela tcnica de Stamp ou de Kster; cresce bem em meios bsicos (Trypticase Soy
Agar, Blood Agar Base, Columbia Agar) enriquecidos com 5 a 10% de sangue ou soro ou
seletivamente isolada no meio de Thayer-Martin modificado. O crescimento necessita 10 a
20% de CO2 no cultivo primrio, embora existam cepas CO2 independentes.
As colnias tornam-se visveis aps 3 a 5 dias de incubao a temperatura de 34
37C. As amostras podem crescer a temperatura de 26C, mas as colnias aparecem em 6-
10 dias. Colnias no so hemolticas, so circulares, convexas, com bordos inteiros. So
positivas ao teste da acriflavina para colnias rugosas.

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CARACTERSTICAS BIOQUIMICAS
Perderam a atividade da urease e no reduzem nitrato a nitrito. So catalase
positivas e oxidases negativas. H2S negativas. Crescem nas concentraes de fucsina bsica
e tionina. Oxidam: L-alanina, D-alanina, L-asparagina, D-asparagina, cido d-glutmico,
DL-serina, e adonitol. No oxidam: L-arabinose, D-galactose, D-glicose, D-ribose, meso-
eritritol, D-xilose, L-arginina, DL-citrulina, DL-ornitina e L-lisina.

FAGOTIPAGEM
A B. ovis no lisada pelos fagos: Tibilisi, Weybridge, M51-S708, Firenze, BK,
MC/75, D ou grupo R. No entanto lisada pelo fago R/O, tanto na RTD (dose rotina de
teste) como 104 RTD. No h biotipos reconhecidos.

TRANSMISSO
A principal forma de transmisso por via venrea. A transmisso macho para
macho possvel em que machos infectados e animais susceptveis compartilham o mesmo
espao. Sodomia outro meio de transmisso.
A maioria dos casos ocorre aps a estao de monta ou acasalamento.
Indubitavelmente existem mecanismos complexos que no esto totalmente conhecidos,
mas a transmisso venrea passiva de macho infectado para macho suscetvel via fmea
infectada parece ser a mais importante forma de transmisso para manter e difundir a
doena. A probabilidade de infeco depende principalmente da via, da dose e das
caractersticas intrnsecas do animal, tais como idade e raa.
A infeco experimental no carneiro pode ser obtida de muitas formas: oral,
intravenosa, intratesticular, conjuntival, intraprepucial subcutnea, atravs de escarificaes
da pele, intraretal, e intranasal. Embora no haja estudos comparativos, os melhores

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resultados foram obtidos, atravs da inoculao intraconjuntival, intraprepucial ou por


ambas simultaneamente. Doses de 5 X 108 1010 UFC de B. ovis so suficientes para obter
as taxas de infeco prximas a 100%. Se a idade afeta a susceptibilidade infeco, isto
alvo de controvrsia. A infeco tem sido demonstrada em carneiros com 4 meses de idade,
sugerindo que animais na puberdade ou logo aps a ela so susceptveis a B. ovis. Embora a
transmisso venrea parea ser a principal forma de difuso, os animais adultos so mais
susceptveis infeco natural. Alem disso, a incidncia de alteraes testiculares e a
brucelose aumentam com a idade, estando relacionadas experincia sexual dos animais.
No h informaes publicadas sobre o efeito da idade sobre a suscetibilidade infeco
sobre condies experimentais.

SUSCEPTIBILIDADE AOS HOSPEDEIROS


As ovelhas, ao contrrio dos carneiros, parecem ser resistentes infeco. Poucas
fmeas adquirem a infeco ativa com aborto e morte perinatal mesmo quando cobertas por
machos infectados. O mesmo acontece com a infeco experimental de fmeas prenhes. A
infeco que ocorreu na primeira prenhez, dificilmente acompanha a seguinte. Cordeiros
nascidos de mes infectadas, dificilmente tornam-se infectados, mesmo ingerindo leite
infectado. Estas evidncias demonstram que o papel das fmeas na transmisso ativa da
infeco menos importante.
H muitas referncias sugerindo que a susceptibilidade pode variar entre as raas de
carneiros. A raa Merina australiana parece ser menos infectada pela B. ovis do que as raas
britnicas no mesmo ambiente. A mesma observao tem sido feita, comparando raas
importadas com raas nativas. As raas nativas da Espanha e a raas derivadas da raa
Merina so mais resistentes brucelose ovina do que as raas europias importadas.
Embora a resistncia gentica doena possa ser importante, a suscetibilidade pode estar
relacionada taxa de crescimento, precocidade e atividade sexual.

Infeo por outras espcies

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A B. ovis parece infectar exclusivamente ovinos, acomentendo essencialmente


carneiros. No h relatos do isolamento da B. ovis no homem.
H referncias da infeco experimental de outras espcies animais. A inoculao
experimental da B. ovis no macho caprino leva colonizao genital e extragenital e
posteriormente ao desenvolvimento de leses semelhantes quelas observadas nos
carneiros. O manejo extensivo em que caprinos e ovinos coabitam pode facilitar a
transmisso de ovinos para caprinos e vice-versa. Entretanto, o isolamento de B. ovis de
casos naturais, em caprinos ainda no foi relatado. A infeco tem sido tambm
reproduzida nos cervos silvestres.
Animais de laboratrio tm sido infectados por inmeras vias com doses variando
entre 104 a 1011 UFC, mas com sucesso varivel. No h um modelo animal experimental
na pesquisa com B. ovis, embora coelhos, ratos, gerbil, hamster, camundongo e cobaias
tenham sido utilizados.

PATOGENIA
H um longo perodo de latncia antes de surgirem os sinais clnicos evidentes,
assim como a infeco causada por outras espcies de brucelas. Sob condies
experimentais, o agente permanece confinado aos linfonodos prximos ao local de entrada
por 2 a 3 semanas e ento ocorre bacteremia.
Nos carneiros experimentalmente infectados, a bactria tem sido isolada do fgado,
rins, bao, testculo, epiddimo, vescula seminal, glndula bulbouretral, ampolas e
linfonodos ilaco, pr-escapulares, pr-crural, submaxilar, parotdio e retrofarngeo. Os
rgos-alvo so epiddimo e glndulas sexuais acessrias com eliminao do agente,
atravs do smen, na maioria dos carneiros. Nos animais reagentes, geralmente o cultivo
negativo, mas a bacteria pode estar localizada em outros rgos. Essa hiptese consistente
com o isolamento da B. ovis no bao e linfonodo ilaco de animais experimentalmente
infectados e que no foram isoladas dos rgos genitais e glndulas sexuais acessrias. A
localizao no epiddimo acompanhada por edema perivascular e infiltrao dos

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linfcitos, moncitos e neutrfilos. Logo aps a inflamao do epitlio tubular segue-se


uma hiperplasia papilar e degenerao hidrpica local com formao de cistos intra-
epiteliais. A destruio epitelial, tanto pela bactria quanto pela reao inflamatria leva a
um extravasamento de espermatozides. A resposta do hospedeiro aos espermatozides
extravasados leva a formao de um granuloma espermrico que pode bloquear o
epiddimo com posterior degenerao e fibrose.
Na fmea, a patogenia da B. ovis no bem conhecida. Fmeas ovinas
experimentalmente expostas a B. ovis tanto antes da monta quanto no final da gestao no
abortam. Somente femeas expostas no incio ou na metade da prenhez desenvolvem
infeco, podendo eventualmente abortar. A bactria localiza-se na placenta e alcana o
feto, atravs dos vasos do crion, com a progresso da infeco. Embora o aborto no seja
frequente, as fmeas infectadas desenvolvem placentite, interferindo na nutrio fetal e
nascimento de cordeiros fracos. A reao inflamatria e imunolgica da B. ovis ao feto
similar quelas observadas no feto bovino causado pela B. abortus.

Patologia no Macho
Carneiros infectados no desenvolvem epididimite palpvel, mesmo quando a B.
ovis est associada epididimite ovina, Em levantamento conduzido com 267 carneiros
soropositivos, somente 125 (46,8%) mostraram alteraes testiculares palpveis. Uma
proporo importante de carneiros infectados no evidencia leses escrotais.
Na maioria dos casos, a localizao testicular unilateral e a cauda do epiddimo o
local mais comum. Alteraes na cabea e no corpo do epiddimo so frequentes. A atrofia
testicular e aumento da cauda do epiddimo so caractersticas da fase crnica da doena. A
aparncia macroscpica dos testculos geralmente normal, mas pode-se perceber
granulomas e calcificao. O epiddimo afetado parece firme, mostrando superfcie
esbranquiada ao corte em consequncia da proliferao de tecido conectivo.
Frequentemente so encontrados no tecido conectivo, abscessos, contendo substncia
cremosa ou caseosa. Hemorragia e inflamao exsudativa na tnica vaginal so achados

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frequentes como resultado da ruptura da leso bsica (espermatocele) do epiddimo. A


organizao deste exsudato leva a formao de adeses entre estas duas camadas da tunica
vaginal. As vesculas seminais esto aumentadas com ductos dilatados com contedo fluido
ao corte. Nenhuma alterao macroscpica pode ser observada na glndula bulbo-uretral,
prstata e ampolas.

Lesoes no Macho
O exame microscpico dos epiddimos infectados mostra edema intersticial, fibrose
e infiltrado perivascular de linfcitos e plasmcitos. Os ductos epididimrios mostram
hiperplasia epitelial com cistos intraepiteliais, contendo neutrfilos e restos celulares.
Granuloma espermtico circundado por linfcitos, clulas gigantes e epiteliides so
achados frequentes.
A atrofia testicular deriva do processo regressivo do epitlio testicular e suspeno
da espermatognese. Pode tambm ocorrer proliferao do tecido conectivo intertubular,
granuloma espermtico extratubular, necrose e calcificao dos ductos seminferos.
As principais alteraes das vesculas seminais incluem a infiltrao de linfcitos e
plasmcitos; fibrose e hiperplasia epitelial difusa com cistos intraepiteliais, contendo
neutrfilos.
A inflamao das ampolas est associada com a epididimite. reas focais de
hiperplasia com cistos intraepiteliais vazios e acmulo de neutrfilos no lmen das
dilataes do epitlio so geralmente observadas. Alem disso, acmulo de clulas redondas
e fibrose podem ser visualizados na lmina prpria.
O exame microscpico da prstata e da glndula bulbouretral revela uma discreta
infiltrao de clulas redondas e hipertrofia glandular focal. Formaes papiliformes e
concrees (corpora amilacea) so frequentes nessas duas glndulas acessrias.
Nas ovelhas infectadas observa-se um exsudato purulento, variando de uma pequena
quantidade sobre a superfcie da membrana corioalantide intacta at uma grande

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quantidade na rea interplacentoma. O exsudato contm bactrias, macrfagos, neutrfilos


e clulas epiteliais de descamao. Fibrose, espessamento e edema da membrana
corioalantide so observadas nos casos mais graves. Os cotildones podem evidenciar
vrios graus de necrose. Clulas do epitlio corinico podem estar aumentadas e conter
bactrias. Necrose focal epitlio intercotiledonrio e corinico so frequentemente
observados. Leses nas artrias so comuns com trombos fibrinosos no interior de vasos;
aumento de clulas endoteliais e proliferativas, na tnica intima. No h leses
patognomnicas na infeco bruclica.

Isolamento em amostras Clnicas


As amostras para o isolamento de B. ovis de animais vivos inclui: smen, suabe
vaginal e leite. O smen pode ser colhido facilmente em subios tomados da cavidade
prepucial, apos a eletroejaculao. Se o eletroejaculador no disponvel, podemos coletar
da vagina de fmeas livre da infeco, imediatamente aps a monta natural. A melhor
tcnica de diagnstico direto o isolamento bacteriano em meio de cultivo adequado.
Amostras de smen, subio vaginal, ou leite, devem ser semeados diretamente em placas,
contendo meios adequados; incubadas a 37C numa atmosfera de 5-10% de CO2. Os
tecidos devem ser macerados e triturados com pequena quantidade de salina estril ou PBS
antes de serem semeado. A amostra de smen menos contaminada pode ser obtida pela
exposio e limpeza do pnis e o ejaculado colhido em frasco estril.
Nos animais mortos, a colheita de amostras para isolamento da B. ovis inclui nos
machos, o epididimo, vesculas seminais, ampolas seminais, linfonodos inguinais e nas
fmeas, o tero, linfonodos ilacos e supramamrio. Entretanto para obter melhores
resultados deveremos incluir outros rgos e linfonodos como: bao, linfonodos cranial,
pr-escapular, prefemural e testiculares. Cordeiros mortos e placenta devem ser
examinados. As amostras preferenciais devem colhidas como o fluido do abomaso e
pulmo. As amostras para cultivo devem ser refrigeradas e transportadas para o laboratrio
o mais rpido possvel aps a coleta. A bactria permanece vivel por at 72 horas a

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temperatura ambiente e a sobrevivncia pode ser aumentada a 4C ou preferencialmente


pelo congelamento das amostras teciduais.
Esfregaos vaginais e de smen podem ser corados pela tcnica de Stamp onde
cocobastonetes caractersticos podem ser evidenciados na maioria dos infectados. O exame
de amostras coradas pelo Stamp (trato genital do carneiro, linfonodo inguinal, placenta,
contedo do abomaso e pulmo de feto) pode permitir o diagnstico presuntivo rpido.
Entretanto outras bactrias com morfologia similar ou caractersticas tintoriais semelhantes
(B. melitensis, Coxiella burnetii e Chlamydophila spp) podem estar presentes nas amostras,
tornando o diagnstico difcil para profissionais menos experientes. A microscopia deve ser
confirmada pelo cultivo do agente.

Identificao do Agente
A existncia de leso macroscpica (epididimite uni ou bilateral) no carneiro pode
ser indicativa de infeco, mas exames laboratoriais so necessrios para confirmar a
doena, atravs de mtodos diretos e indiretos.
Esfregaos diretos podem ser examinados, atravs da colorao de Gram ou Stamp
e a presena de cocobastonetes demonstrada em muitos animais infectados. Entretanto,
outras bactrias com caractersticas morfotintoriais semelhantes (B. melitensis,
Chlamydophila abortus) podem estar presentes.

Exame Direto
O diagnstico direto realizado, atravs do isolamento da B. ovis no smen, nos
tecidos do carneiro ou ainda nas secrees ou leite de fmeas em meio de cultivo seletivo.
As tcnicas de biologia molecular como PCR e eletroforese de campo pulsante tm sido
aplicadas, entretanto as tcnicas indiretas baseadas nos testes sorolgicos so as preferidas
no diagnstico de rotina. O smen do carneiro pode ser obtido facilmente por meio do
eletroejaculador. O smen pode ser colhido para bacteriolgico em sacos plsticos ou por
meio de subio tomado da cavidade prepucial aps a eletroejaculao.

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Cultivo
No isolamento da B. ovis, as amostras de smen so semeadas diretamente em
plascas de AS apropriadas (Thayer-Martin); incubadas a 10% de CO2.
A colheita e transporte de amostras uma tarefa trabalhosa, pois alguns animais
infectados no excretam ou a eliminam intermitentemente e, por isso, o bacteriolgico de
smen no prtico e nem til no diagnstico da infeco, especialmente em programas de
controle e erradicao de grande escala.

Isolamento e identificao
As colnias da B. ovis no so hemolticas; so circulares, convexas; possuem
bordos inteiros; so do tipo rugoso quando examinadas pela luz oblqua; positivas ao teste
de acriflavina. A B. ovis perdeu a atividade de urease; falha na reduo de nitrato para
nitrito; catalase positiva; oxidade negativa; no produz H2S; no crese na presena de
violeta de metila, mas geralmente cresce na presena de concentraes de fucsina bsica e
tionina.
A maioria dos laboratrios de diagnstico veterinrio no est equipada na
identificao completa da B. ovis, sendo necessria a adoo de um protocolo prtico e
presuntivo na identificao. A maioria das B. ovis pode ser identicada, tendo como base as
caracteristicas de crescimento, observao direta, utilizando a luz refletida oblqua,
colorao de Stamp, Gram, catalase, oxidase, urease e teste de acriflavina. Entretanto, a
identificao definitiva deve ser realizada no laboratrio de referncia com experincia na
identificao e tipificao de Brucella spp. Recentemente, um mtodo de eletroforese de
campo pulsante foi desenvolvido para o gnero Brucella spp e com essa tcnica possvel
diferenciar B. ovis das outras espcies.

Fagotipagem

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Os cultivos no so lisadas pelos bacterifagos do grupo Tbilisi, Weybridge e Iz, no


teste de diluio rotineiro (RTD) ou 104 RTD, enquanto so lisados pelo bacterifago R/C.

Diagnstico sorolgico
Teste de Imunodifuso em gelose de agar (IDGA), Teste de Fixao do
Complemento (FC) e, ensaio imunoenzimtico (ELISA), utilizando antgenos de superfcie
solveis da B. ovis, podem ser utilizados. Alguns testes de ELISA, que utilizam protenas
recombinantes e monoclonais, esto sendo testadas em pesquisas de campo. As
sensibilidades dos testes IDGA e ELISA so semelhantes e o teste de ELISA apresenta
maior sensibilidade do que o teste de FC. A combinao da IDGA e ELISA apresenta os
melhores resultados em termos de sensibilidade, embora o teste de IDGA seja mais prtico
e barato. O teste recomendado para o comrcio internacional permanece sendo o teste de
FC.
O LPS da parede celular o principal antgeno de superfcie na maioria das
bactrias Gram negativas, sendo verdade para as brucelas lisas. Entretanto a B. ovis
rugosa e, portanto sua superficie celular difere das demais brucelas lisas. A principal
diferena na estrutura da parede celular entre as brucelas lisas e rugosas a ausncia de
cadeia O no LPS das amostras rugosas. O LPS da B. ovis assim como o LPS das mutantes
rugosas de B. abortus e B. melitensis podem ser extradas com o uso de solventes
orgnicos.
A tcnica de ter-de-petrleo-cloforfrmio-fenol (PCP), originalmente desenvolvida
para mutantes rugosas de enterobactrias a tcnica de escolha para obter LPS de B. ovis,
uma vez que ela produz antgeno essencialmente livre de protenas e cidos nuclicos.
Entretanto a grande hidrofobicidade do LPS purificado representa um problema para o seu
uso em muitos testes sorolgicos. A estrutura do LPS da B. ovis no tem sido estudada e
conhecida. Embora ela contenha acar presente na estrutura ncleo-lipdio A do LPS de
outras brucelas, o LPS purificado da B. ovis revela somente uma reao de identidade
parcial com o LPS dos mutantes rugosos de B. abortus e B. melitensis ou com o LPS

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rugoso presente no antgeno extrado pelo calor da B. canis, sugerindo a presena de


determinantes antignicos espcie-especficos no LPS da B. ovis.

Antgenos
O tratamento das brucelas rugosas pela tcnica da salina aquecida (mtodo da salina
quente) produz extratos antignicos solveis cujo componente principal precipita com o
soro das brucelas rugosas. Por essa razo, o antgeno termorresistente tem sido referido
como o antgeno rugoso especfico ou quando obtido da B. ovis ele chamado antgeno
especfico da B. ovis. Entretanto, a caracterizao qumica do antgeno termorresistente da
B. ovis mostrou que so enriquecidos com LPS rugoso, protenas da membrana externa e
outros componentes externos da membrana. Assim, o antgeno termorresistentes contm
determinantes do LPS especficos para a B. ovis, mas outros componentes antignicos
adicionais. O antgeno termorresistente, devido a sua solubilidade em gua e alta
concentrao em eptopos na superfcie celular o melhor antgeno para o diagnstico e
tm sido amplamente utilizados para o diagnstico sorolgico da infeco causada pela B.
ovis.
A B. ovis cepa REO 198 CO2 independente e por isso, recomendada como fonte
de antgeno termorresistente para os testes sorolgicos. Esta cepa foi obtida no Institute
National de la Recherche Agronomique (INRA) Laboratoire de Pathologie Infectieuse et
Immunologie, Nouzilly, Frana. Meios slidos so satisfatrios para o crescimento da B.
ovis REO 198. O ideal seria inclurem-se vrias cepas ou linhagens na elaborao do
antgeno.
O antigeno deve ser preparado como segue:
1) Crescimento exponencial de uma cepa de preferncia aerbia (B. ovis REO 198)
em frascos de Tripticase soja em incubador orbital a 37 C e a 150 rpm; ou em garrafas
Roux de Tripticase Soja Agar ou outro meio adequado, com 5% de soro ou em fermentador
descrito para B. abortus, mas com a adio de 5% de soro ao meio.

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2) As clulas so lavadas 2 vezes e ento suspensas em salina a 0,85% (12 g clulas-


peso seco) ou (30 g de clulas em 150 ml).
3) A suspenso celular autoclavada a 120 C por 15-30 minutos.
4) Aps o resfriamento, a suspenso centrifugada (15.000 X G; 4 C; 15 minutos)
e o sobrenadante filtrado e dializado em gua destilada (3 x 100 volumes) a 4 C por pelo
menos 2 dias.
5) O fluido dializado ultracentrifugado (100.000 X G; 4C; 6-8 hours).
6) O sedimento ressuspenso em uma pequena quantidade de gua destilada e
liofilizado.
7) O antigeno reconstitudo em gua destilada (para uso em IDGA) ou em tampo
salina-veronal (para uso no teste de FC) ou em tampo carbonato-bicarbonado (para uso em
ELISA).
8) A titulao feita contra os soros-controle positivos e negativos.

Ensaio imunoenzimtico (ELISAi)


H inmeras variaes do ensaio imunoenzimtico. O teste descrito aqui um teste
de ELISA indireto, utilizando o ABTS (2,2-Azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic
acid]) como cromgeno. Os testes so realizados em placas de ELISA com fundo chato
com 96 orificios. Os reagentes e as diluies so realizadas em PBS pH 7,2 com a adio
de 0,05% de Tween 20 (PBST). As diluies do antgeno so realizadas com tampo
carbonato-bicarbonato com pH 9,6.
As placas so lavadas com PBST, aps a fixao do antgeno. O antgeno
termorresistente e o conjugado so titulados e as diluies so selecionadas para dar a
melhor relao entre o soro padro positivo e negativo. Secundariamente os anticorpos
(anti-ovino IgG [H+L cadeias]) so geralmente conjugadas peroxidase, embora outras
enzimas possam ser utilizadas. Se o conjugado com peroxidase utilizado, o cromgeno
(ABTS) diludo em tampo substrato pH 4 (composto de cido ctrico trisdico e cido
ctrico). A isso adicionada gua oxigenada (H2O2), e as placas incubadas por 15-

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60 minutos a temperatura ambiente. A reao bloqueada com 1 mM de azida sdica e a


mudana de cor lida em espectrofotmetro com filtro de 405-414 nm.
O antgeno utilizado no ELISA o termorresistente estoque (1 mg/ml em tampo de
sensibilizao) titulado com diferentes diluies do antgeno, de conjugado e de substrato,
contra um soro padro ou contra diluies seriais de um painel de soros que so positivos e
negativos para B. ovis, visando a determinao da diluio mais adequada (geralmente 5-
10 g/ml). As placas de ELISA so sensibilizadas com 100 l de uma predeterminada
diluio de antgeno em tampo carbonato, pH 9,6 para cada poo. As placas so incubadas
por 2 horas a 37C ou overnigh a 4 C. Posteriormente, elas so lavadas 4 vezes para
remover o antgeno no ligado e, em seguida, so secas com batidinhas firmes com elas
viradas para baixo sobre toalhas absorventes. As placas sensibilizadas podem ser utilizadas
imediatamente ou estocadas a 4C (a estabilidade nessas condies adequada por pelo
menos 1 mes).
Diluir os soros controles positivos e negativos a 1/200 pela adio de 10 l do soro a
2 ml PBST. Adicionar um volume de 100 l da amostra em duplicata na microplaca. As
placas so cobertas, incubadas a 37 C por 1 hora; lavadas 3 vezes com tampo de lavagem.
O conjugado titulado e diludo em PBST adicionado (100 l) a cada poo e as
placas cobertas e incubadas por 1 hora a 37 C. Aps a incubao, as placas so lavadas
novamente 3 vezes com PBST.
Soluo de ABTS no tampo adicionada (100 l/orifcio); as placas so incubadas
por 15-60 minutos a temperatura ambiente com agitao continua.
A absorvncia lida automaticamente no espectrofotmetro com o comprimento de
onda entre 405 a 414 nm. Os valores de absorvncia podem ser expressos em percentagens
de absorvncia mdia dos controles positivos. Os valores de absorvncia podem ser
expressos como percentuais de absorvncia mdios do controle positivo transformados em
unidades ELISA calculados, tanto manualmente quanto pelo programa de computador que
calcula a curva de uma curva-padro construda com uma srie de resultados de diluies
do controle positivo. O limiar deve ser calculado, testando uma quantidade grande da

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populao ovina livre da infeco e a sensibilidade do teste sendo controlados na populao


de animais infectados pela B. ovis.
Estudos comparativos evidenciaram que o teste de ELISA possui melhor
sensibilidade que a IDGA ou a FC. A existncia de alguns soros ELISA-negativos e IDGA
positivos faz com que a combinao de IDGA com ELISA melhore a especificidade.
Entretanto a combinao do teste de FC e ELISA ou CF e IDGA no melhoram a
sensibilidade do teste de ELISA sozinho. O teste de FC possui outras desvantagens, tais
como:
a) Complexidade, b) Obrigatoriedade de inativao das amostras de soros; c)
Atividade anticomplementria de alguns soros; d) Dificuldade de realizao com soros
hemolisados e e) Fenmeno de pr-zona.
A IDGA o teste mais prtico no diagnstico de rotina em laboratrios menos
especializados por sua sensibilidade, simplicidade e fcil interpretao.

Brucella canis

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Brucelose Canina
INTRODUO
A brucelose canina era uma enfermidade associada B. abortus, B. suis e a B.
melitensis, antes do isolamento da B. canis, em 1966. A fonte de infeco em quase todos
os casos era o consumo de animais domsticos infectados ou pelo contato de ces com
derivados destes. Em contraste forma espordica da brucelose canina, h outra,
extremamente infecciosa para os ces, causada por uma nova espcie de Brucella.
Em 1966, Carmichael, nos Estados Unidos, durante uma investigao sobre a causa
de abortos em ces da raa Beagle, isolou um cocobastonete Gram negativo de vrios fetos
abortados. Mais tarde, vrias outras observaes deram suporte incluso deste organismo
no gnero Brucella, sendo denominada B. canis.
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AGENTE-INFECO
A B. canis o agente etiolgico da brucelose canina; enfermidade caracterizada por
manifestaes clnicas variadas. A maioria dos ces infectados no apresenta sinais clnicos
perceptveis, mostrando-se clinicamente normais.
As manifestaes clnicas indicativas da enfermidade no so exuberantes, mas
associadas com o trato reprodutor.
O sinal clnico primrio na fmea infectada o aborto, podendo ser acompanhado
ou no de mortes embrionrias ou natimortos.
Nos machos, os sinais clnicos mais comuns so: epididimite, orquite e/ou atrofia
testicular e dermatite de escroto. Outras manifestaes podem incluir: linfadenites e
esplenites, leses oculares, discoespondilites e osteomielites.
A contaminao ocorre, atravs das mucosas (oral, vaginal ou ocular). A bactria
fagocitada e ser transportada por macrfagos e granulcitos para os linfonodos regionais e
sistema circulatrio.
Bacteremia aparece entre 1 a 4 semanas, aps a infeco, podendo durar seis meses
e, algumas vezes, podendo persistir por 60 meses. A fase de bacteremia acompanhada de
sinais clnicos como febre discreta, linfadenopatia discreta e astenia de inconstante a
moderada. A fase de bacteremia pode levar leses inflamatrias nos discos intervertebrais
(discoespondilite), no globo ocular (uvete) e nos rins (glomerulonefrite), mas o mais
importante, que o agente atinge o trato reprodutos de machos e fmeas prenhas.
Nos machos, causa espermatozides anormais, levando esterilidade, aps cinco
semanas ps-infeco. Outros sinais como orquite, epididimite, hipertrofia prosttica,
edema do escroto podem ser detectados. Nas formas crnicas, h atrofia de um ou ambos os
testculos.
Na fmea prenha, a infeco geralmente leva a morte embrionria entre os dias 10 e
20 aps a concepo ou ao abortamento entre 45 e 59 dias de gestao. O aborto seguido
de secreo vaginal que pode persistir de 1 a 6 semanas. Geralmente a cadela pare filhotes

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mortos ou filhotes que sobrevivem apenas algumas horas ou dias. Raramente, a prenhez
chega a termo.
As fontes de infeco so representadas por smen, urina, fetos abortados ou
secreo vaginal. Os animais so infectados por via venrea ou pela ingesto de material
infectado. Infeco iatrognica (transfuso de sangue, uso de material de injeco
contaminado) possvel.

ZOONOSE
Os tcnicos (laboratrio, os proprietrios de animais, veterinrios) podem ser
infectados, apesar de o homem ser relativamente resistente a B. canis. Os sinais clnicos
(febre, calafrios, fadiga, perda de peso, linfadenopatia) so mais moderados do que aqueles
observados em outras espcies e, em muitos casos, so completamente assintomticos. As
complicaes so raras (artrite, meningite, endocardite), mas foram descritas.
A presena da brucelose canina nos centros urbanos brasileiros preocupante, pois
representa risco sade pblica, pelo estreito convvio ou contato com os seus familiares,
tanto pela populao de ces infectados e no domiciliados quanto por aqueles ces
infectados dentro de criatrios. Estudos epidemiolgicos dirigidos brucelose canina nestes
centros urbanos forneceram dados importantes quanto a sua apresentao, distribuio,
comportamento da enfermidade venrea para os caninos, mas tambm como uma zoonose,
especialmente para criadores, proprietrios, tratadores e clnicos veterinrios.

IMPACTO ECONMICO
O impacto econmico decorrente da infeco pela B. canis nos criatrios
complexo e difcil de estimar, pois as perdas incluem principalmente a queda brusca no
nmero de filhotes, eliminao de reprodutores infectados (machos e fmeas) da
reproduo; perda de material gentico superior; gastos com a reposio de animais
hgidos; os gastos com diagnstico, tratamento, desinfeco e preveno da infeco;
gastos com monitoramento do criatrio e a perda de confiana entre quem os criam e quem

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os compram. Talvez essas dificuldades sejam, em parte, razo para que nenhuma medida
seja tomada por parte da sociedade interessada somente no comercio de animais a despeito
do bem estar animal. hora de estimar os prejuzos causados com a brucelose canina em
criatrios, pois a infeco causada pela B. canis acomete um grande nmero de animais
(canis), onde ela ocorre sob a forma silenciosa ou sob a forma de pequenos surtos,
envolvendo animais com alto valor zootcnico.

EPIDEMIOLOGIA
A enfermidade foi registrada nos Estados Unidos; em pases da Europa; no Japo,
Madagascar e Mxico. Na Amrica do Sul, especialmente no Peru, Argentina e Brasil.
Estudos epidemiolgicos mostraram que a prevalncia da infeco causada pela B. canis
varivel, dependendo da rea geogrfica e do tipo de teste aplicado. Estudos sorolgicos
obtidos tm permitido valiosa informao sobre a enfermidade na populao canina bem
como na populao humana, representando, deste modo, mais um risco sade pblica.

BRUCELOSE CANINA NO BRASIL


No Brasil, os primeiros relatos ocorreram simultaneamente em So Paulo e no Rio
Grande do Sul, em 1976.
Em 1976, Sandoval e colaboradores na cidade de So Paulo, estimaram a infeco
em 3,61%, dentre as 221 amostras de soro de ces apreendidos pelo centro de zoonoses da
prefeitura municipal de So Paulo.
Em 1976-7, Wald e Fernandes, em Porto Alegre, estimaram a prevalncia da
brucelose canina em 12% dentre as 192 amostras de soro aleatoriamente colhidas de ces
atendidos pelo ambulatrio do Hospital de Clnicas Veterinrias (HCV).
Em 1978, Pereira Filho e colaboradores, em Salvador, quantificaram a enfermidade
em 1,43%, das 1.393 amostras de soro canino testadas.
Larsson, em 1979, obteve um percentual de 7,0% num levantamento realizado na
populao canina da cidade de So Paulo.

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Em 1987, em Campinas, Germano e colaboradores obtiveram um percentual de


5,4% de reagentes.
Em 1990, Schlemper e Vaz, em Santa Catarina, estimaram em 6,0% entre as 334
amostras de soro examinadas de ces na regio do Planalto Catarinense.
Em 1992, Magalhes Neto e colaboradores, em Pelotas, obtiveram uma prevalncia
de 22,7% entre 304 amostras de soro canino.
Em 1994, Poester e colaboradores, em Uruguaiana, obtiveram um percentual de
infeco na ordem de 7,4 % dentre as 95 amostras da zona urbana.
O isolamento da B. canis considerado como o "padro-ouro" no diagnstico da
brucelose canina. Ela chave importante para a aplicao de medidas no diagnstico,
controle e preveno da infeco/doena.

ISOLAMENTO NO MUNDO E BRASIL


O isolamento da B. canis pode ser obtido do sangue perifrico de animais com
ttulos altos de anticorpos (Moore e Kakuk, 1969).
Serikawa et al., (1978) isolaram B. canis da urina e da prstata de ces infectados.
Ueda et al., (1974) isolaram B. canis do bao, epiddimo, prstata e linfonodos
poplteos e ilacos.
Harris et al., (1974) isolaram B. canis do sangue, fluido cerebrospinal e de vrios
rgos de fmeas com sinais neurolgicos.
Henderson et al., (1974), nos Estados Unidos, isolaram a B. canis de 3 ces com
leses de osteomielite vertebral na regio traco-lombar (discoespondilites).
Riecke e Rhoades (1974) e Seagusa et al., (1977) isolaram B.canis de leses
oculares.
Schoeb e Morton (1978) isolaram o agente da brucelose canina de lcera exsudativa
escrotal.
No Brasil, Fernandes e Wald em (1976-7) isolaram, pela primeira vez, no Brasil a
B. canis do humor aquoso de co da raa Boxer, com leses oculares.

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Em 1977, em Minas Gerais, Godoy e colaboradores isolaram a B. canis em


hemocultura de uma fmea que havia abortado recentemente.
Larsson e Costa (1980), em So Paulo, isolaram trs amostras de B. canis, sendo 1
amostra de fmea com histrico de infertilidade, e as outras duas de uma fmea e de um
macho sem sinais clnicos.
Vargas et al., (1996), em Santa Maria, isolaram B. canis da placenta, de fetos
abortados e neonatos de um canil com reprodutores caninos de vrias origens.
Gomes et al., (1999), em Porto Alegre, isolaram B. canis do epiddimo e testculo de
um co com epididimite e orquite clnica.
No Rio de Janeiro, Ferreira e colaboradores (2003) isolaram e identificaram B. canis
de dois ces com sinais clnicos de brucelose canina de um canil comercial.

DIAGNSTICO LABORATORIAL
O diagnstico laboratorial da brucelose canina uma tarefa difcil e complexa,
incluindo as tcnicas de isolamento, segundo evidencia a Tabela 1.
O diagnstico sorolgico uma probabilidade diagnstica, pois dependem da
relao agente-hospediero e o tempo de infeco. Eles incluem o teste de fixao do
complemento (FC), soroaglutinao lenta (SAL), soroaglutinao rpida (SAR),
imunofluorescncia (IF), o teste de ELISA e imunodifuso (IDGA). A imunodifuso em
gelose de agar (IDGA) a tcnica mais utilizada no diagnstico laboratorial da infeco por
ser de fcil realizao, rpida e barata. Alm disso, esta tcnica possibilita utilizar, tanto o
antgeno superficial rugoso da B. ovis quanto da B. canis e da RB51.

HEMOCULTIVO
O hemocultivo da B. canis pode ser obtid atravs da seguinte tcnica:
1- Um volume de 100L (0,1 mL) de sangue, colhido com heparina ou citrato de sdio
semeado em placas de agar sangue (Brucella agar, Triptose agar); incubadas a temperatura
de 37C em atmosfera normal.

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2- Um volume de 5 mL de sangue semeado em 10 mL de caldo. O caldo inoculado deve


ser congelado de 12 a 24 h a -20C. Posteriormente, a amostra congelada deve ser
descongelada e incubada por 6 dias a 37C. Aps esse tempo, a amostra repicada em 2
meios em paralelo (seletivos e no seletivo).
Os meios de Caldo Brucella soro; Triptose soro; Kuzdas e Morse tornam-se seletivo
pela adio de cicloheximida (100 mg/L), bacitracina (25 000 U/L) e polimixina B (6 000
U/L), do bons resultados.

SMEN e URINA
Smen e urina devem ser cultivados por 4-7 dias em caldo seletivo e posteriormente
em gelose. Outras amostras clnicas eventualmente so trituradas em stomacher; inoculadas
em paralelo em meios seletivos e no seletivos.
As placas devem ser conservadas por 30 dias; examinada periodicamente em
estereoscpio com luz obliqua. As colnias suspeitas devem ser submetidas ao exame
bacterioscpico, teste de oxidase e tipo respiratrio. A identificao precisa da espcie est
reservada aos laboratrios especializados que pode pesquisar a aglutinao com antissoro
preparado com uma cepa de Brucella em fase R (geralmente uma cepa de Brucella ovis)
posteriormente se estudar as caractersticas bioqumicas; lisotipia e oxidao de acares e
aminocidos.
Tabela 1 Resultados Esperados no isolamento da B. canis em amostras clinicas

Amostra(s) Isolamento Ps-Infeco (PI)

Fluidos (vaginal Positivo


placenta, aborto)

Smen Positivo entre 1- 4 meses PI


Positivo ou negativo em 3 a 15 meses PI
Negativo para alm de 15 meses PI

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Sangue Positivo entre 1,5 - 7,5 meses PI


80% positivo em 6 a 12 meses PI
50 80% positivo em 2 - 4 anos PI
25 50% positivo em 4 - 5 anos PI
0 25% positivo para alm 5 anos PI

Urina Geralmente positivo (geralmente ) entre 2 7 meses PI

Epiddimo 50 100% positivo entre 9 15 meses PI


Negativo alm de 2 anos PI

Prstata Geralmente positivo at 16 meses PI

Linfonodo, bao, Geralmente positivo quando o animal est na fase de bacteremia


medula ssea

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CONTROLE E PREVENO
O controle torna-se um dilema, quando a brucelose foi diagnosticada num criatrio,
A eliminao da infeco demanda tempo e custos, mas a doena pode apresentar uma crise
emocional ou quando ces de valor gentico so acometidos.
A preveno particularmente importante nos canis. Ao contrrio da brucelose nos
outros animais domsticos, a brucelose canina no uma doena de notificao obrigatria
e sua prevalncia est baseada em limitados estudos sorolgicos. A incidncia da
enfermidade nos ces pouco diferente de quando ela foi reconhecida nos anos sessenta;
com exceo de alguns criatrios comerciais e organizaes de criadores de ces ou clubes
de caa que instituram medidas preventivas de maneira privada.
A preveno da reproduo em canis/criatrios dever incluir um plano de
monitoramento alem de cuidados sanitrios e de higiene.
Os testes sorolgicos incluem vantagens e desvantagens que devem ser conhecidas
pelos clnicos veterinrios conforme tabela 2.
1-Os testes sorolgicos devem ser realizados duas vezes com intervalos de um ms
em todos os ces introduzidos em um canil de reproduo.
2-As cadelas de um criatrio/canil devem ser testadas vrias semanas antes do cio
esperado. Se outros testes alem do SAT-2ME so necessrios para certificao de livres de
brucelose, haveria tempo para aplicar aqueles procedimentos antes do perodo do cio.
3-Nenhum animal novo deve ser introduzido na reproduo at que tenham sido
considerados negativos a dois testes com um ms de intervalo.
4-Testes anuais devero ser aplicados em todos os animais ou quando houver
alteraes reprodutivas ou abortos.
5-H fortes suspeitas de brucelose canina nos casos de aborto at que seja provado o
contrrio.
6-Ces com testes de triagem positivos ou inconclusivos devem ser isolados e
avaliados por hemocultura e sorologia, utilizando testes mais especficos como AGID,
utilizando antgeno de protenas citoplasmticas.

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7-Todo co infectado deve ser removido do canil e eliminado. Em alguns casos, h


recusa por parte dos proprietrios e, nesses casos, h indicao da castrao
concomitantemente terapia com antimicrobianos e acompanhamento do caso, em pelo
menos, trs meses.
Tabela. 2 Comportamento dos testes aplicados Brucelose canina pela B. canis

Teste Positivar Persistncia Vantagens e Desvantagens


Resultados Positividade

Aglutinao Simples, rpido, sensvel, poucos falsos


rpida em lmina negativos.
(antgeno corado 3 a 4 semanas PI At 3 meses ps
com Rosa bacteremia Muitos falsos positivos (teste com
Bengala), aps resultados positivos devem ser confirmados
tratamento do soro por outra tcnica).
com 2-ME

Aglutinao lenta At 3 meses ps Tcnica semi-quantitativa.


em tubos bacteremia
3-6 semanas PI Numerosos falsos +, inutilisvel com soros
hemolisados, fenmeno de zona possvel.

Aglutinao lenta At 3 meses ps Tcnica semi-quantitativa, + especifica que


em tubos na bacteremia aglutinao lenta em tubos.
presena de 2-ME 1,2-2 meses PI
Inutilisvel com soros hemolisados,
fenmeno de zona ensibil, necessita 48 h
de incubao

IDGA (antgeno At 4 meses ps Sensvel, + especfico que os testes


LPS) bacteremia anteriores.
1,5-2,5 meses PI
Tcnica complexa, interpretao delicada

IDGA (antgenos O teste mais especfico (detectar animais


citoplasmticos, infectados por outras espcies do gnero
de natureza At 3 anos ps Brucella, mas no apresenta reao cruzada
ensibil) bacteremia com outros gneros bacterianos), detecta
2-3 meses PI infectado cronicamente.

Teste complexo, ensibilidade menor que


o anterior

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VACINAO
No existe vacina e a profilaxia baseia-se sobre as medidas de ordem sanitrias tais
como isolamento do agente; eutansia dos infectados; desinfeco dos locais; quarentena e
vigilncia serolgica antes da introduo em uma criao.
O tratamento com antimicrobiano no 100% eficaz. Ele geralmente est associado
ao uso de tetraciclinas a aminosdio durante um ms.

SENSIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS


A B. canis in vitro sensvel s tetraciclinas; ao cloranfenicol; aos aminosdios;
rifampicina, s fluoroquinolonas e s sulfamidas. Muitas linhagens apresentam resistncia
cruzadas aos macroldeos.
Quadro I. Percentual de reagentes contra a B. canis, na IDGA, (antgeno LPS) no LABACVET-UFRGS

Ano N Amostras Reagentes %


1994 47 5 10,63
1995 29 2 6,89
1996 130 7 5,38
1997 72 4 5,55
1998 108 15 13,88
1999 34 8 23,52
2000 ? ? ?
2001 76 02 2,63
2002 35 0 00
2003 27 5 19,23
2004 145 29 20,00
2005 79 12 15,10
2006 184 23 12,50
2007 424 93 22,00
2008 70 4 5,70
2009 31 1 3,2
2010 3 1 33,3
2011

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PERSPECTIVAS
A preocupao em conhecer dados sobre brucelose canina nas diferentes faculdades
de veterinria do pas tem como objetivos: 1) Obter dados quanto prevalncia de
brucelose canina em ces atendidos pelo servio de atendimento policlnico nas instituies
de ensino superior, especialmente por no haver muitos registros. 2) Isolar a B. canis em
amostras clnicas bem como aplicar testes sorolgicos no monitoramento e controle da
infeco. 3) Prestao de servio especializado comunidade acadmica pelo treinamento
de tcnicos, estudantes e outros profissionais 4)Garantir segurana dos acadmicos e
professores quando do manuseio desses animais em aulas prticas de clinica mdica e
cirurgia.

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Brucelose nos Mamferos Marinhos

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SINONMIA: Brucella ceti : "Brucella cetaceae".


Brucella pinnipedialis: "Brucella pinnipediae".

CONSIDERAES GERAIS
Os estudos de hibridizao do ADN-ADN tm mostrado que o gnero Brucella
constitui uma nica espcie genmica. Segundo as regras de prioridade, Verger e
colaboradores propuseram que o nome de B. melitensis, B. abortus, B. canis, B. neotomae,
B. ovis e B. suis deveriam ser considerados como simples biovares da Brucella melitensis.
Esta proposio respeitou (e respeita hoje) os critrios utilizados para a definio de uma
espcie bacteriana apesar de que em 1988, o subcomit de taxonomia de o gnero Brucella
ter considerado a existncia de uma nica espcie no gnero Brucella, este mesmo comit
admite o uso da nomenclatura anterior bem como o uso corrente em trabalhos baseados na
taxonomia.
A reduo do gnero Brucella a uma nica espcie no adotada por parte da
grande maioria dos bacteriologistas e compreende parte dos especialistas do gnero
Brucella. Depois da reunio de 11 septembro de 2003, o subcomit de taxonomia de
Brucella decidiu por unanimidade rever a situao anterior e de reconhecimento
existncia de novas espcies dentro do gnero Brucella.
O reconhecimento dessas espcies justificado por estudos fenotpicos, pela
epidemiologia, pela importncia dessas bactrias dentro da Sade Animal e Humana e pela
utilizao potencial delas em guerra bacteriolgica.
Classicamente, as espcies do gnero Brucella foram isoladas de mamferos
terrestres. Mais tarde, a partir de 1994, amostras do gnero Brucella spp foram isoladas de
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mamferos marinhos. As caractersticas fenotpicas, os estudos de hibridizao,


sequenciamento do ARNr 16S e o sequenciamento do gene recA mostraram que essas
cepas ou linhagens pertenciam ao gnero Brucella.
O estudo do metabolismo oxidativo permitiu individualizar as amostras isoladas de
mamferos marinhos, permitindo que Jahans e colaboradores propusessem a espcie
"Brucella maris". Posteriormente, a ribotipagem (estudo dos fragmentos de restrio dos
genes codantes para o ARNr obtido pela enzima HindIII), a presena do segmento de
insero IS711 em aval do gene bp26 e a presena de motifs especficos dentro da
sequncia dos genes omp2 confirmaram que as cepas isoladas de mamferos marinhos eram
distintas daquelas isoladas de mamferos terrestres.
As linhagens isoladas de mamferos marinhos podem ser diferenciadas em 2 grupos.
As cepas isoladas principalmente de penpedes possuem uma cpia dos genes omp2a e
omp2b enquanto que as cepas isoladas principalmente de cetceos possuem 2 cpias do
gene omp2b. Assim, em 2001, Cloeckaert e colaboradores propuseram a nomenclatura de
"Brucella pinnipediae" para as cepas principalmente isoladas de penpedes e a
nomenclatura de "Brucella cetaceae" para as linhagens isoladas principalmente de
cetceos. A tcnica de IRS-PCR (Interspersed Repetitive Sequence-PCR) permitiu
igualmente reconhecer a existencia de 2 grupos de cepas. A nomenclatura de "Brucella
cetaceae" e da "Brucella pinnipediae" no correta. Em 2007, Foster e colaboradores
propuseram a nomenclatura de B. ceti (para as cepas isoladas de cetceos) e de B.
pinnipedialis (para cepas isoladas de penpedes). Essa nomenclatura foi validada e
publicada em 08 novembro de 2007.
A Brucella foi cultivada ou detectada com tcnicas de DNA em pinpedes e muitas
espcies de cetceos, incluindo focas comuns foca do porto (Phoca vitulina), foca anelada
(Phoca hispida), focas harpa (Phoca groenlandica), foca de capuz (Cystophora cristata),
foca cinzenta (Halichoerus grypus), boto (Phocoena phocoena), curto-bico golfinhos
comuns (Delphinus delphis), golfinhos listrados (Stenella coeruleoalba), golfinhos-roaz
(Tursiops truncatus), os golfinhos de lado branco do Atlntico (Lagenorhynchus acutus),

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golfinho de bico branco (Lagenorhynchus albirostris), os golfinhos de Maui


(Cephalorhynchus hectori Maui), golfinhos-cabea-branca ou golfinho de Hector
(Cephalorhynchus hectori), a baleia minke (Balaenoptera acutorostrata) e uma lontra
europeia (Lutra lutra).

CARACTERSTICAS GERAIS
As novas espcies B. ceti e B. pinnipedialis so constituidas de cocos,
cocobastonetes e/ou de bacilos curtos; Gram negativos; com 0,5 a 0,7m de dimetro e de
0,6 a 1,5m de comprimento; se apresentam de maneira isolada ou agrupada em curtas
cadeias ou em pequenos filamentos; possuem os antgenos do gnero Brucella; so imveis
e desprovidas de flagelos, aerbias; catalase, oxidase nitrato redutase e urease positivos;
indol negativas; H2S negativas; incapazes de liquefazer a gelatina e no acidificam os
acares contidos em meios convencionais.
Crescimento obtido em temperatura compreendida entre 20 e 40 C (temperatura
tima 37 C) e pH timo compreendido entre 6,6 e 7,4.
No AS com sangue ovino, as colnias so visveis aps 3 a 4 dias de incubao a
37C. Elas so convexas, circulares, de contorno regular, no hemoltica e com 0,5 a 1,0
mm de tamanho. O crescimento estimulado pela adio de soro ou sangue. No meio de
gelose glicose-soro, as colnias so transparentes, convexas, lisas, brilhantes, de contornos
regulares e apresentam uma colorao mel plida quando examinadas sob iluminao
oblqua.
B. ceti capaz de crescer em 3 a 4 dias em meio Farrell enquanto que o crescimento
da B. pinnipedialis retardado (7 a 10 dias) ou no observado. A grande parte das cepas da
B. ceti cultivada na ausncia de CO2 enquanto que o CO2 necessrio para a grande
maioria das amostras da B. pinnipedialis.
As caractersticas que permitem diferenciar a B. ceti e B. pinnipedialis das outras
espcies esto contidas no Quadro 1.

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Quadro 1. Diferenciao entre espcies do gnero Brucella spp


1) B. abortus ; 2) B. canis ; 3) B. ceti ; 4) B. melitensis ; 5) B. microti* ; 6) B. neotomae ; 7) B. ovis ; 8) B.
pinnipedialis ; 9) B. suis biovar 1 ; 10) B. suis biovar 2 ; 11) B. suis biovar 3 ; 12) B. suis biovar 4 ; 13) B. suis
biovar 5
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Urease +**** + + + + + - + + + + + +
VP - - - - + - - - - - - - -
Fago Tb**
+ - - - - d - -***** - - - - -
(Tbilisi)
Fago Wb**
+ - + - + + - + + + + + +
(Weybridge)
Fago Iz**
+ - + + + - + + + + + +
(Izatnagar)
Fago** R/C - + - - - + - - - - - -
L-Alanina*** + - - + - d - d - d - -
L-Arabinose*** + - + - + - - + + - - -
L-Arginina*** - + - - - - - + + + + +
L-Asparagina*** + - - + + + - - d - - d
meso-Eritritol*** + d d + + - + + + + + +
D-Galactose*** + - + - + - - + + - - -
L-cido
+ + + + + + + d + + + +
glutmico***
L-Lisina*** - d - - - - - + d d d d
DL-Ornitina*** - + - - - - - + + + + +
D-Ribose*** + + + - d - + + + + + +
D-Xilose*** - - + - - - - + d d d d
Hospedeiros Sui,
Bov Can Cet Pr Cd Neo Ov Penip Sui Sui Re Sui
preferenciais Leb
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
1) B. abortus ; 2) B. canis ; 3) B. ceti ; 4) B. melitensis ; 5) B. microti* ; 6) B. neotomae ; 7) B. ovis ; 8) B.
pinnipedialis ; 9) B. suis biovar 1 ; 10) B. suis biovar 2 ; 11) B. suis biovar 3 ; 12) B. suis biovar 4 ; 13) B. suis
biovar 5
* : Outras caract. permitem diferenciar a B. microti das outras espcies do gnero Brucella esto contidas na tabela II
** : Lticos na diluio corrente. *** : Oxidao **** : A cepa de referencia 544 assim como qualquer outra d resultado
negativo. ***** : Todas as amostras da Brucella pinnipedialis so lisadas pelo fago Tb.
B: Bovinos; Ca: Cd dos campos (Microtus arvalis); Can: Caninos; Ce: Cetceos; Pr: Pequenos Ruminantes; Ov: Ovinos
Ne: Neotomos; Sui: Suinos; Leb: Lebres; Re: Renas.

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SINAIS CLNICOS
As alteraes reprodutivas como aborto, em fmeas; orquite/epididimite, leses
granulares, em machos, so sinais primrios da brucelose nos animais terrestres.
A avaliao da fertilidade em animais marinhos de vida livre difcil, entretanto nos
Estados Unidos, em 1999, Miller e colaboradores relataram casos de aborto em dois
golfinhos (Tursiops truncatus) capturados.

O DIAGNSTICO DIFERENCIAL
Em golfinhos com meningite, o diagnstico diferencial inclui parasitismo
(Nasitrema spp), infeco estafiloccica, herpes e infeces por Morbillivirus. Outras
doenas que causam aborto, orquite, epididimite, abscessos e doenas sistmicas devem ser
considerados e evidncia de infeco por Brucella.

ESTUDOS MOLECULARES
Os estudos moleculares evidenciaram que as cepas dos mamferos marinhos diferem
das dos mamferos terrestres e mesmo entre as linhagens que acometem os cetceos e os
pinpedes. Algum tempo atrs, pesquisadores sugeriram a criao de uma nova espcie
denominada B. maris, entretanto ela no foi aceita. Mais recentemente, duas novas espcies
foram sugeridas; a B. cetaceae e a B pinnipediae, as quais ainda no foram oficialmente
aceitas nem rejeitadas.
Em 2007, Foster e colaboradores sugeriram os nomes de B. ceti e B. pennipedialis
para as brucelas de cetceos e de focas, respectivamente (Foster et al 2007).

ZOONOSE
A brucelose uma importante zoonose para o homem causando a grande variedade
de sinais e sintomas clnicos, incluindo febre ondulante, fadiga, prostrao, dor articular,
mialgia, depresso e anorexia. Frequentemente ocorrem sequelas e perodos de
recrudescncia, aps o episdio inicial de infeco. A brucela pode ser transmitida de

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animais para o homem pelo contato direto com animais infectados; pela ingesto de
produtos infectados e pela inalao de aerossis.
Quatro espcies do gnero Brucella (classif. atual) so causas primrias de infeco
no homem. A B. melitensis bastante infecciosa, sendo transmitida por caprinos e ovinos.
A B. abortus transmitida por bovinos. A B. suis transmitida por sunos e a B. canis
transmitida por ces. As outras espcies de Brucella infectam raramente ou no infectam o
homem.
H alguns poucos relatos na literatura relativos infeco humana causada por
linhagens de Brucella de mamferos marinhos.
Brew et al. 1999 registraram o caso ocorrido em um laboratorista que adquiriu os
sinais clnicos compatveis com brucelose. A infeco foi confirmada pelo isolamento,
testes diagnsticos sorolgicos, PCR, RFLP de Brucella de origem marinha ().
Sohn et al. (2003) relataram em dois pacientes peruanos, os quais foram
diagnosticados como portadores de neurobrucelose. O quadro clnico foi confirmado pelos
testes diagnsticos (isolamento, PCR, sequenciamento de DNA) como infectados
naturalmente por linhagens de Brucella de mamferos marinhos.
Na Nova Zelndia, McDonald e colaboradores, em 2006, relataram um caso em um
homem de 43 anos, morando em Auckland - Nova Zelandia, o qual apresentou sinais de
osteomielite espinal por 2 semanas com sinais de febre, rigor e fraqueza lombar. Os testes
aplicados reagiram tanto para a B. suis quanto B. melitensis. As amostras foram ento
enviadas ao laboratrio de Referncia internacional que o identificou como relacionado a
Brucella originria dos Estados Unidos de golfinhos (Tursiops truncatus) e da foca comum
(Phoca vitulina).

EPIDEMIOLOGIA PREVALNCIAS
H na literatura relatos em muitos lugares e em diversas ocasies de isolamento de
Brucella e comprovao sorolgica em muitos mamferos marinhos, especialmente no
Hemisfrio Norte.

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A prevalncia de anticorpos contra Brucella nos animais marinhos variou, segundo


diversos autores entre 0 a 38% dos cetceos, dos penpedes e musteldeos (Jepson et al.
1997; Tryland et al. 1999; Calle at al. 2002; Hanni et al. 2003; Maratea et al. 2003; Ohishi
et al 2003; Nielsen et al 2005).
Um grande estudo, envolvendo 1.855 penpedes dos EUA e 1.386 penpedes e
cetceos do Atlntico Norte revelaram que 3,1 e 8,2% tinham sorologia positiva para
brucelas marinhas, respectivamente (Tryland et al 1999; Nielsen et al 2001).
Amostras de Brucella foram isoladas em 31% (54/175) dos mamferos marinhos
provindos de diferentes origens (Forbes et al 1993; Ewalt et al 1994; Ross et al 1994;
Foster et al 1996; Clavareau et al 1998; Miller et al 1999; Tryland et al 1999; Gonzalez et al
2002; Maratea et al 2003; Tryland et al 2005).
H poucos relatos de sorologia positiva em penpedes e cetceos no Hemisfrio Sul.
Retamal e colaboradores, na Antrtica, em 2000, estimaram em 3,5% (6/17) das amostras
de penpedes positivas para brucelose. Van Bressem e colaboradores, em 2001
quantificaram em 55, 2% (32/58) das amostras reagentes prova de brucelose nos cetceos
examinados, nas costas peruanas do Pacfico Sul. Na Austrlia, Dawson (2005) detectou
reaes sorolgicas positivas em 3 espcies incluindo 75% (9/12) dos lees marinhos
(Neophoca cinerea). Na Nova Zelndia, Mackereth e colaboradores, em 2005 no
detectaram reagentes positivos em 1001 lees marinhos da Nova Zelndia (Arctocephalus
hookeri).

LESES
Pequenas alteraes patolgicas tm sido relatadas nos primeiros estudos nos
animais marinhos encalhados no leste do Atlntico Norte apesar do sucesso no isolamento
de agentes cepas pertencentes ao gnero Brucella. Contrariamente com as leses
granulomatosas e caseosas observadas e relatadas nas gnadas da baleia minque (B.
acutorostrata) no Oeste do Pacfico. Leses granulomatosas caseosas testiculares foram

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constatadas em 31% (11/35) e 38% (35/93) em machos da baleia minque do Pacfico Norte
capturados em 2000 e 2001 respectivamente.

COLETA DE AMOSTRAS
As amostras so isoladas de pulmes, do bao, do fgado, do lquido peritoneal, do
corao, dos rins, do epiddimo, dos ovrios, do leite, de abscesso, dos linfonodos e do
sangue. Em alguns animais, nenhuma patologia pode ser associada presena do agente,
enquanto em outros animais pode-se notar epididimite discoespondilite, meningite, leses
purulentas, necrose heptica, necrose esplnica, necrose dos linfonodos, peritonite, mamite
e endometrite. O diagnstico presuntivo da infeco pode ser evidenciado atravs da
presena de anticorpos anti-Brucella em outras espcies: golfinho sombra (Lagenorhynchus
obscurus), marsopa espinosa (Phocoena spinipinnis), baleia piloto (Globicephala melas),
baleia comum (Balaenoptera physalus), baleia boreal (Balaenoptera borealis), foca de
Weddell (Leptonychotes weddellii), mora do Atlantico (Odobenus rosmarus rosmarus),
foca de Kerguelen (Arctocephalus gazella) .
Estudo realizado em animais vivos nas costas da Esccia mostrou que
aproximadamente 49% das focas comuns e 33% dos botos eram soropositivos.
A ingesto de mamferos marinhos ou alimentos contaminados por esses animais
podem representar perigo para os animais silvestres e domsticos.
Os ursos polares consomem grandes quantidades de focas e um estudo mostrou que
5,4% dos ursos polares apresentarm anticorpos anti-Brucella.
As carcaas dos mamferos marinhos encontrados nas praias podem representar um
risco para os animais que crculam naquele ambiente. A inoculao experimental por via
intravenosa de cepas de Brucella isoladas de mamferos marinhos em bovinos provocou
abortos e a mesma amostra pode ser reisolada do feto. Por sua vez, a inoculao por via

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intraconjuntival no provoca soroconverso. Em cabras prenhes, a inoculao por via


conjuntival provocou uma soroconverso transitria.

DIAGNSTICO LABORATORIAL
O isolamento realizado em paralelo em meio de Farrell (incubado pelo menos por
14 dias aps a concluso do cultivo) e em AS incubado a 37 C em atmosfera enriquecida
com 10% de CO2. O meio de Farrell deve conter concentraes menores de bacitracina e/ou
de cido nalidxico, pois favorecem o cultivo da Brucella pinnipedialis.
O aspecto da colnia; o exame microscpico aps a colorao de Gram e a pesquisa
de anticorpos aglutinantes em lmina com soro anti-Brucella abortus permitem orientao
do diagnstico. O diagnstico da espcie mais complexo, devendo ser confiado a
laboratrios especializados.
O diagnstico sorolgico emprega os testes clssicos utilizados para o diagnstico
de brucelose dos mamferos terrestres (AAT, FC, ELISA, etc.). Embora esses testes ainda
no estejam validados.

CONTROLE
Mtodos especficos de controle no foram estabelecidos para a brucelose em
mamferos marinhos. Princpios gerais de controle de infeco, incluindo o isolamento,
desinfeco e higiene devem ser utilizadas com os animais infectados em instalaes
martimas de mamferos. Alguns autores sugerem que os centros envolvidos na reabilitao
de mamferos marinhos devem rotineiramente selecionar animais para Brucella spp.

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Brucella microti
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INTRODUO
Atualmente, alm das oito espcies descritas, h mais outra espcie que foi
adicionada s isoladas. A nova espcie chama-se B. microti, espcie isolada do
camundongo do campo (Microtus arvalis). Este roedor do campo provoca grandes
prejuzos s colheitas de cereais na Europa e reservatrio para outros agentes como
Leptospira interrogans, Francisella tularensis e Babesia microti.
Em 1996, a populao de camundongos do sul da Morvia (Repblica Tcheca) foi
objeto de um levantamento para melhor conhecer a dinmica das populaes. Entre 1999-
2003, os pequenos roedores foram vtimas de uma epidemia com grande mortalidade. As
observaes microscpicas das leses permitiram demonstrar cocobastonetes Gram
negativos.
O exame bacteriolgico efetuado em quatro animais capturados, em setembro de
2000, permitiu isolar em cultivo puro, oito amostras nas quais cinco pareciam assemelhar-
se com amostras do gnero Ochrobactrum spp. Duas dessas amostras, as amostras CCM
4915 e CCM 4916, foram de fato submetidas a um estudo bacteriolgico mais completo,
sendo identificadas como cepas de Ochrobactrum intermedium. O O. intermedium um
germe do solo, raramente responsvel por infeco em vertebrados, sendo pouco provvel
que o O. intermedium fosse a origem das epidemias observadas nos camundongos. As
amostras CCM 4915 e CCM 4916 foram submetidas a um estudo taxonmico.
O sequenciamento dos genes rrs, recA, omp2a e omp2b, assim como a hibridizao
ADN-ADN permitiu colocar as duas cepas dentro do gnero Brucella. A sequncia dos
genes rrs (1422 pb) e recA (897 pb) apresentaram 100% de semelhana com as seqncias
das Brucella spp. As sequncias dos genes omp2a (1104 pb) apresentaram 100 % de
semelhana com a sequncia da cepa 6516/98 da B. pinnipedialis, enquanto que a
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sequencia dos genes omp2b apresentou 99% de semelhana com a cepa B3196 da B.
abortus e 99 % de similitude com a linhagem B. suis 1330.
A tcnica de AMOS (AMOS para AbortusMelitensisOvisSuis) permite detectar e
diferenciar B. abortus, B. melitensis, B. ovis e B. suis, permitiu obter um fragmento de
2.000 pb ausente nas outras Brucella spp. A amplificao da regio situada em direo ao
gene bp26 conduz a obteno de um amplicon de 1029 pb, caracterstico das Brucella spp
isoladas de mamferos terrestres. A tcnica de MLVA [multilocus VNTR (variable-
number-tandem-repeats) analysis] efetuadas nas amostras CCM 4915 e CCM 4916 e em
424 amostras de Brucella spp revelaram que as cepas isoladas de roedores formavam um
grupo distinto das outras espcies do gnero Brucella.
As caractersticas fenotpicas permitem diferenciar as cepas CCM 4915 e CCM
4916 das outras espcies do gnero Brucella. Assim, em fevereiro de 2008, Scholz e
colaboradores sugeriram o nome de B. microti para esta bactria.

CARACTERSTICAS GERAIS
As cepas de B. microti so cocobastonetes ou de bastonetes curtos, Gram negativos,
com 0,5 a 0,8 m de diametro por 0,6 a 1,4 m de comprimento, e apresentam-se isoladas
ou agrupadas em filamentos irregulares, aerbias, imveis, no esporuladas, oxidase
positiva, catalase positiva, metabolismo oxidativo e aglutinao pelo soro anti-M diludo a
1/80.

CARACTERSTICAS BIOQUMICAS
Apresentam resposta positiva aos testes de:
Reduo dos nitratos (com formao de gas), Reduo dos nitritos, Urease, VP,
Fenilalanine desaminase, assimilao (galeria API 20 NE) de Adipato, L-arabinose, N-
acetil-glucosamina, D-glicose, Maltose e D-manose, Oxidao (utilizao do meio OF,
Difco), Frutose, Glucose, Maltose e Xilose.

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Apresentam resposta negativa aos testes de:


ADH, LDC, ODC, Produo de H2S, Citrato de Simmons, ONPG, hidrlise do
ADN, do amido, da caseina, da esculina, da gelatina, da lecitina, da tirosina, Assimilao
(galeries API 20 NE) do caprato, do citrato, do gluconato, do malato, do D-manitol e do
fenil-acetato.

Apresentam resposta positiva no API ZYM


Fosfatase cida, fosfatase alcalina, leucina arilamidase, valina arilamidase, cistina
arilamidase, alpha-glicosidase e esterase lipase.

Apresentam resposta negativa no API ZYM


Esterase, lipase, alpha-galactosidase, beta-galactosidase, beta-glucuronidase, beta-
glucosidase, alfa-manosidase, alfa-fucosidase, N-acetil-beta-glucosaminidase.
Outras caractersticas fenotpicas podem ser estudadas utilizando um sistema
miniaturizado, denominado Micronaut (Merlin microbiological diagnostics company)
o kit de identificao utilizado por Scholz e colaboradores no relatado no catlogo da
(Merlin microbiological diagnostics company). Os autores no deram nenhum detalhe
sobre este kit, citando apenas uma publicao de Neubauer et al. 2000.
A B. microti cultivada na presena de tionina (diluida 1/25.000) e na presena de
fucsina bsica (diluida 1/50.000). Nenhum crescimento evidenciado em caldo contendo
6,5% de NaCl.
Os cultivos so lisados pelos fagos Tbilisi, F1 e F25 a 10.000 RTD (Routine Test
Dilution, Dilution) e pelo fago Weybridge na diluio de rotina.
O cultivo facilmente obtido no agar nutritivo incubado na temperatura entre 25 e
42C, em atmosfera aerbia no enriquecida em CO2. Aps 24 a 48 horas de incubao a
28-37C, as colnias so lisas, transparentes, beges, ligeiramente cncavas de bordos
regulares e com dimetro de 1 a 2 mm. No AS, as colnias no so hemolticas. Aps 72h

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de incubao a 37C, as colnias possuem um tamanho compreendido entre 6 e 9 mm e de


colorao amarronzada.
A B. microti sensvel a gentamicina, tobramicina, ofloxacina e a associao de
trimetoprima-sulfametoxazol. Resistncia observada para a colistina, piperacilina, da
ceftazidima e tazobactam.

PATOGENICIDADE
A infeco dos camundongos provoca caquexia, edema de extremidades dos
membros, artrites, orquites e adenites. Esses abscessos so, algumas vezes, sobre os
membros e sua ruptura causa perfuraes na pele. Na necropsia, h presena de abscessos
peritoniais, esplenomegalia, hepatomegalia pouco pronunciada e hemorragias intestinais
moderadas.
A inoculao por via subcutnea de 2,5 x 107 microrganismos em camundongos de
laboratrio (Cd SPF da linhagem ICR) provoca, em 4 a 69 dias, morte de 50 % dos
animais. Os camundongos mortos apresentam abscesso, uma ligeira esplenomegalia, um
exsudato peritonial contendo bactrias Gram negativas observadas nas leses.
Patogenicidade para o homem ou para outras espcies animais no foi ainda
documentada.

DIAGNSTICO
B. microti facilmente isolada das leses em agar nutritivo e no TSA. A
identificao delicada, pois a B. microti pode ser confundida com uma espcie do gnero
Ochrobactrum, especialmente quando se utiliza a galeria API 20 NE conduzindo a uma
identificao errnea de Ochrobactrum anthropi. De qualquer forma a ausncia de
motilidade permite distinguir facilmente B. microti de Ochrobactrum spp.

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Referencias Bibliogrficas recomendadas para o Gnero Brucella spp


Aguirre, NP.; Vanzini, VR.; Torion de Echaide, S.; Valentn, BS.; De Lucca, G.; Aufranc,
C.; Canal, A. & Nielsen, K. Antibody dynamics in holstein friesian heifers vaccinated
with Brucella abortus strain 19, using seven serological tests. J. Immunoassay
Immunochemistry , v. 23, p. 471-478, 2002.
Alton, GG.; Jones, LM.; Angus, RD.; Verger, JM. Tecniques for the Brucellosis
Laboratory. 1 Edio Paris: Institut National de la Recherche Agronomique (INRA),
190 p. 1988.
Anon, Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. WHO Technical Report Series
740, WHO. Genebra, 1986.
Anon, Manual of Standards for diagnostic Tests and Vaccines. 3 Ed., Paris: OIE. 2000.
Web address: http://www.oie.int/eng/normes/manual/A-00048htm.
Azevedo, SS.; Vasconcellos, SA.; Alves, CJ. Brucelose canina por Brucella canis. Revista
CRMV Ano X n.31, jan/fev/mar/abr p. 38-46, 2004
Blasco, JM. Brucella ovis. In: Animal Brucellosis, Nielsen K.; Duncan JR., eds. CRC
Press, Boca Raton, Florida, USA, 351-378, 1990.
Brew, SD.; Perrett, JA.; Stack, AP.; MacMillan, AP.; Staunton, NJ. Human exposure to
Brucella recovered from a sea mammal. Vet. Rec., v. 144, p. 483, 1999.
Bricker, BJ. PCR as a diagnostic tool for brucellosis. Vet. Microbiol., v. 90, p. 435-446,
2002.
Bricker, BJ.; Ewalt, DR.; Macmillan, AP.; Foster, G.; Brew, S. Molecular characterization
of Brucella strains isolated from marine mammals. J. Clin. Microbiol. v. 38, p. 1258-
1262, 2000.
Bricker, BJ.; Ewalt, DR.; MacMillan, AP.; Foster, G.; Brew, S. Molecular characterization
of Brucella strains isolated from marine mammals. J. Clin. Microbiol. v. 38, p. 1258-
1262, 2000.
Brown, GM.; Ranger, CR.; Kelley, DJ. Selective media for the isolation of Brucella ovis.
Cornell Vet., v. 61, p. 265-280, 1971.
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Buddle, MB. Studies on Brucella ovis n. sp., a cause of genital disease of sheep in New
Zealand and Australia. J. Hyg., v. 54, p. 351-364, 1956.
Bulgin, MS.; Anderson, BC. Association of sexual experience with isolation of various
bacteria in cases of ovine epididymitis. J. Am. Vet. Med. Assoc., v. 182, p. 372-374,
1983.
Burgess, GW.; McDowell, JW. Escherichia coli epididymitis and seminal vesiculitis in a
ram. Aust. Vet. J., v. 57, p. 479-480, 1981.
Burgess, GW.; Norris, MJ. Evaluation of the cold complement fixation test for diagnosis of
ovine brucellosis. Aust. Vet. J., v. 59, p. 23-25, 1982.
Calle, PP.; Seagars, DJ.; McClave, C.; Senne, D.; House, C.; House, JA. Viral and bacterial
serology of free-ranging Pacific walrus. J. Wildl. Dis., v. 38, p. 93-100, 2002.
Cargill, C.; Lee, K.; Clarke, I. Use of an enzyme-liked immunoabsorbent assay in a bovine
brucellosis eradication programme. Aust. Vet J., v. 62, p. 49-52, 1985.
Carmichael, LE. Abortions in 200 Beagles. JAVMA., v. 149, n. 8, p. 1126, 1966.
Carmichael, LE. Canine Brucellosis: An annoted review with selected cautionary
comments. Theriogenol., v. 6, n 2-3, p. 105-116, 1976.
Carmichael, LE. ; Greene, GE. Canine brucellosis. In: Infectious diseases of the dog and
cat. Greene, CE, (Ed), W.B. Saunders Company, p. 573-584, 1990.
Carmichael, LE.; Bruner, DW. Characteristics of a new species of Brucella responsible for
infectious canine abortions. Cornell Vet., v. 58, p. 579-592, 1968.
Carmichael, LE.; Bruner, DW. Characteristics of a newly recognized species of Brucella
responsible for infectious canine abortions. Cornell Veterinarian, v. 58, p. 579-592,
1968.
Carmichael, LE.; Kenney, RM. Canine abortion caused by Brucella canis. JAVMA., v.
152, p. 605-616, 1968.
Carmichael, LE.; Kenney, RM. Canine Brucellosis: The Clinical Disease, Pathogenesis,
and Immune Response. JAVMA., v.56, n. 12, p. 726-1734, 1970.

Gnero Brucella spp


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Gnero Brucella spp
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2013

Carmichael, LE.; Zoha, SJ.; Flores-Castro, R. Problems in the serodiagnosis of canine


brucellosis : dog responses to cell wall and internal antigens of Brucella canis.
Develop. Biol. Standard, v. 56, p. 371-383, 1983.
Clavareau, C.; Wellemans, V.; Walravens, K.; Tryland, M.; Verger, JM.; Grayon, M.;
Cloeckaert, A.; Letesson, JJ.; Godfroid, J. Phenotypic and molecular characterization of
a Brucella strain isolated from a minke whale (Balaenoptera acutorostrata).
Microbiol., v. 144, p. 3267-3273, 1998.
Cloeckaert, A.; Grayon, M.; Grpinet, O. An IS711 element downstream of the bp26 gene
is a specific marker of Brucella spp. isolated from marine mammals. Clin. Diagn. Lab.
Immunol., v. 7, p. 835-839, 2000.
Cloeckaert, A.; Grayon, M.; Grpinet, O.; Boumedine, KS. Classification of Brucella
strains isolated from marine mammals by infrequent restriction site-PCR and
development of specific PCR identification tests. Microbes Infect., v. 5, p. 593-602,
2003.
Cloeckaert, A.; Verger, JM.; Grayon, M.; Grpinet, O. Restriction site polymorphism of the
genes encoding the major 25 kDa and 36 kDa outer-membrane proteins of brucella.
Microbiol., v. 141, p. 2111-2121, 1995.
Cloeckaert, A.; Verger, JM.; Grayon, M.; Paquet, JY.; Garin-Bastuji, B.; Foster, G.;
Godfroid, J. Classification of Brucella spp. isolated from marine mammals by DNA
polymorphism at the omp2 locus. Microb. Infect., v. 3, p. 729-738, 2001.
Corbel MJ.; Gill, KPW.; Thomas, EL. Methods for the identification of Brucella.
Ministry of Agriculture, Fisheries and Food, UK, ADAS, RCV 22, 1978.
Corbel, MJ.; Moriyn, I. International Committee on Systematic Bacteriology
Subcommittee on the Taxonomy of Brucella. Minutes of the Meeting, 5 and 7 July
1994, Prague, Czech Republic. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 56, p. 1169-1170,
2006.
Corbel, MJ.; Thomas, EL. Use of phage for the identification of Brucella canis and
Brucella ovis cultures. Res. Vet. Sci., v. 38, p. 35-40, 1985.

Gnero Brucella spp


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Gnero Brucella spp
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2013

Currier, RW.; Raithel, WF.; Martin, RJ.; Potter, ME. Canine Brucellosis. JAVMA., v. 180,
n. 2, p. 132-133, 1982.
Da Costa, M.; Guillou, JP.; Garin-Bastuji, B.; Thiebaud, M.; Dubray, G. Specificity of six
genes sequences for the detection of the genus Brucella by DNA amplification. J. Appl
Bacteriol., v. 81, p. 267-275, 1996.
De Long, WJ.; Waldhalm, DG. ; Hall, RF. Bacterial isolates associated with epididymitis in
rams from Idaho and eastern Oregon flocks. Am. J. Vet. Res., v. 40, p. 101-102, 1979.
De, BK; Stauffer, L; Koylass, MS; Sharp, SE; Gee, JE; Helsel, LO; Steigerwalt, AG; Vega,
R; Clark, TA; Daneshvar, MI; Wilkins, PP.; Whatmore, AM. Novel Brucella Strain
(BO1) Associated with a Prosthetic Breast Implant Infection. J. Clin. Microbiol., v. 46,
n. 1, p. 43-49, 2008.
Diaz, R.; Bosseray, N. Identification dun compos antignique spcifique de la phase
rugueuse (R) des Brucella. Ann. Rech. Vet., v. 4, p. 283-292, 1973.
Diaz, R.; Jones, LM.; Wilson, JB. Antigenic Relationship of the Gram negative Organism
causing Canine Abortion to Smooth and Rough Brucellae. J. Bact., v. 95, p, 618-624,
1968.
Ekdahl, MO.; Money, DF.; Martin, CA. Some aspects of epididymitis of rams in New
Zealand. N. Z. Vet. J., v. 16, p. 81-82, 1968.
Englehardt, CEM. Incidencia de Brucella canis em perros en el distrito de Chiclayo.
Tesis Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo. Peru, 46p. 1974.
Ewalt, D.; Payeur, J.; Martin, B.; Cummins, D.; Miller, W. Characteristics of a Brucella
species from a bottlenose dolphin (Tursiops truncatus). J. Vet. Diagn. Investig., v. 6,
p. 448-452, 1994.
Fernandes, JCT.; WALD, VB.; JOBIM, GB. Isolamento de Brucella canis do humor
aquoso de um co com leses oculares. Arq. Fac. Vet. UFRGS., v. 4-5, p. 109-113,
1976/7.
Flores-Castro, R.; Segura, R. A Serological and Bacteriological Survey of Canine
Brucellosis in Mxico. Cornell Vet., v. 66, p. 347-352, 1976.

Gnero Brucella spp


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2013
Gnero Brucella spp
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2013

Forbes, LB.; Nielsen, O.; Measures, L.; Ewalt, DR. Brucellosis in ringed seals and harp
seals from Canada. J. Wildl. Dis., v. 36, p. 595-598, 2000.
Foster, G.; Jahans, KL.; Reid, RJ.; Ross, HM. Isolation of Brucella species from cetaceans,
seals and an otter. Vet. Rec., v. 138, p. 583-586, 1996.
Foster, G.; MacMillan, AP.; Godfroid, J.; Howie, F.; Ross, HM.; Cloeckaert, A.; Reid, RJ.;
Brew, S.; Patterson, IAP. A review of Brucella sp. infection of sea mammals with
particular emphasis on isolates from Scotland. Vet. Microbiol., v. 90, p. 563-580, 2002.
Foster, G.; Osterman, BS.; Godfroid, J.; Jacques, I.; Cloeckaert, A. Brucella ceti sp. nov.
and Brucella pinnipedialis sp. nov. for Brucella strains with cetaceans and seals as their
preferred hosts. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 57, p. 2688-2693, 2007.
Garcia-Carrillo, C. Animal and Human Brucellosis in the Americas. Paris: Office
International des Epizooties, 299p. 1990.
Gargani, G.; Lpez-Merino, A. International Committee on Systematic Bacteriology
Subcommittee on the taxonomy of Brucella. Correspondence Report (Interim Report),
1991-1993. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 56, p. 1167-1168, 2006.
Gargani, G.; Lpez-Merino, A. International Committee on Systematic Bacteriology
Subcommittee on the taxonomy of Brucella. Correspondence Report (Interim Report),
1991-1993. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 56, p. 1167-1168, 2006.
Garin, B.; Trap, D.; Gaumont, R. Assessment of the EDTA seoagglutination test for the
diagnosis of bovine brucellosis. Vet Rec., v. 117, p. 444-445, 1985.
Germano, PML.; Vasconcellos, SA.; Ishizuka, MM.; Passos, EC.; Erbolato, EB.
Prevalncia de infeo por Brucella canis em ces da cidade de Campinas-SP., Brasil.
Rev.Fac. Med. Vet. Zootec., v. 24, n. 1, p. 27-34, 1987.
Gleiser, CA.; Sheldom, WG.; Van Hoosier Jr, GL.; Hill, WA. Pathologic changes in dogs
infected with a Brucella canis. Lab. Anim. Sci., v. 21, p. 540-545, 1971.
Godfroid, J.; Cloeckaert, A.; Liautard, J.; Kohler, S.; Fretin, D.; Walravens, K.; Garin-
Bastuji, B.; Letesson, J. From the discovery of the Malta fever's agent to the discovery

Gnero Brucella spp


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Gnero Brucella spp
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2013

of a marine mammal reservoir, brucellosis has continuously been a re-emerging


zoonosis. Vet. Res., v. 36, p. 313-326, 2005.
Godfroid, J.; Kasbohrer, A. Brucellosis in the European Union and Norway at the turn of
the twenty-first century. Vet Microbiol., v. 90, p. 135-145, 2002.
Godfroid, J.; Saegerman, C.; Welleman, V.; Walravens, K.; Letesson, JJ.; Tibor, A.;
Mcmillan, A.; Spencer, S.; Sanna, M.; Bakker, D.; Pouillot, R.; Garin-Bastuiji, B. How
to substantiate eradication of bovine brucellosis when aspecific serological reactions
occur in the course of brucellosis testing. Vet. Microbiol., v. 90, p. 461-477, 2002.
Godoy, AM.; Neves, J.; Peres, JN.; Barg, L. Sobre um caso de infeco humana por
Brucella canis em laboratorio. Arq. Esc. Vet. UFMG., v. 31, n. 2, p. 141-145, 1979.
Godoy, AM.; Peres, JN.; Barg, L. Isolamento de Brucella canis em Minas Gerais, Brasil.
Arq. Esc. Vet. UFMG., v. 29, n. 1, p. 35-42, 1977.
Gonzalez, L.; Patterson, IA.; Reid, RJ.; Foster, G.; Barberan, M.; Blasco, JM.; Kennedy, S.;
Howie, FE.; Godfroid, J.; MacMillan, AP.; Schock, A.; Buxton, D. Chronic
meningoencephalitis associated with Brucella sp. infection in live-stranded striped
dolphins (Stenella coeruleoalba). J. Comp. Pathol., v. 126, p. 147-152, 2002.
Gyles, CL.; Thoen, CO. Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals. 2. Ed., Ames:
Iowa State University Press, 331p. 1993.
Hagiwara, MK. Brucelose Canina Experimental: Estudos Bacteriolgicos, Sorolgicos e
Anatomopatolgicos. Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., v. 36, n. 2, p. 141-156, 1984.
Hanni, KD.; Mazet, JAK.; Gulland, FMD.; Estes, J.; Staedler, M.; Murray, MJ.; Miller, M.;
Jessup, DA. Clinical pathology and assessment of pathogen exposure in Southern and
Alaskan sea otters. J. Wildl. Dis., v. 39, p. 837-850, 2003.
Harris, AM.; Horton, ML.; Letscher, RM.; McConnell, EE.; New, AL. Brucella canis-an
occult disease in a research canine colony. Lab. Anim. Sci., v. 24, p. 796-799, 1974.
Henderson, RA.; Horlein, BF.; Kramer, TT.; Meyer, ME. Discospondylitis in Three Dogs
Infected with Brucella canis. JAVMA., v.65, n. 5, p. 451-455, 1974.

Gnero Brucella spp


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2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Herr, S.; Te Brugge, LA. & Guiney, MCM. The value of microtitre serum agglutination test
as a second screening test in bovine brucellosis. Onderstepoort J. Vet. Res., v. 49, p.
23-28, 1982.
Herr, S.; Te Brugge, LA. Profiles of serological reactions following adult cow inoculation
with standard dose Brucella abortus strain 19 vaccine. J. South Africa Vet. Assoc., v.
56, p. 93-96, 1985.
Herr, S.; Williamson, CC.: Prigge, RE.; Van Wyk, A. The relationship between the
microtitration serum agglutination test and complement fixation tests in bovine
brucellosis serology. Onderstepoort J. Vet. Res., v. 53, p. 199-200, 1986.
Hosgood, G.; Eilts, BE. Diskoespondylitis associated with Brucella canis infection in dogs:
14 cases (1980-1991). JAVMA., v. 201, n 8, p.1253-1257, 1992.
Hublek, Z.; Scholz, HC.; Sedlcek, I.; Melzer, F.; Sanogo, YO.; Nesvadbov, J.
Brucellosis of the common vole (Microtus arvalis). Vector Borne Zoonotic Dis., v. 7,
p. 679-688, 2007.
Huddleson, IF. The differentiation of the species of the genus Brucella. Michigan State
College Agricultural Experimental Station Technical Bulletin. V. 100, p. 1-16,
1929.
Hughes, ML. The natural history of certain fevers occurring in the Mediterrranean.
Mediterranean Nature, v. 2, p. 325-327, 1893.
ICSB, Subcommittee on the Taxonomy of Brucella: Report of the Meeting, 5 September
1986, Manchester, England. Int. J. Syst. Bacteriol., v. 38, p. 450-452, 1988.
Jacques, I.; Grayon, M.; Verger, JM. Oxidative metabolic profiles of Brucella strains
isolated from marine mammals: contribution to their species classification. FEMS
Microbiol. Lett., v. 270, p. 245-249, 2007.
Jahans, KL.; Foster, G.; Broughton, ES. The characterisation of Brucella strains isolated
from marine mammals. Vet. Microbiol., v. 57, p. 373-382, 1997.

Gnero Brucella spp


FAVET-UFRGS
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Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
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2013

Jepson, PD.; Brew, S.; MacMillan, AP.; Baker, JR.; Barnett, J.; Kirkwood, JK.; Kuiken, T.;
Robinson, IR.; Simpson, VR. Antibodies to brucella in marine mammals around the
coast of England and Wales. Vet. Rec., v. 141, p. 513-515, 1997.
Johnson, CA. Clinical signs and diagnosis of Brucella canis infection. Comp. Cont. Educ.
Pract. Vet., v. 14, p. 763-772, 1992.
Jones, LM.; Zanardi, M.; Leong, D.; Wilson, JB. Taxonomic position in the Genus Brucella
of the causative Agent of Canine Abortion. J. Bact., v. 95, p. 625-630, 1968.
Larsson, MHMA.; Costa, E.O. Isolation of Brucella canis. Int. J. Zoon., v. 7, p. 125-130,
1980.
Larsson, MHMA.; Larsson, CE.; Costa, EO.; Guerra, JL.; Hagiwara, MK. Brucelose canina
Experimental: Estudos Bacteriolgicos, Sorolgico e Anatomopatolgico. Arq. Bras.
Med. Vet. Zoot., v. 36, n. 2, p. 141-156, 1984.
Livingstone, CW.; Hardy, WT. Isolation of Actinobacillus seminis from ovine epididymitis.
Am. J. Vet. Res., v. 25, p. 660-663, 1964.
Magalhes Neto, A.; Cruz, FW.; Santos, AF.; Gil-Turnes, C.; Aleixo, JAG.; Martins, LFS.;
Brodt, CS.; Gurvitz, R. Prevalncia de humanos e caninos reatores Brucella rugosa no
Municpio de Pelotas, RS. In: XI Congresso Estadual de Medicina Veterinria,
Gramado, RS. Anais. SOVERGS, 1992, 150 p. p.92, 1992.
Mantur, BG.; Amarnath, SK.; Shinde, RS. Review of clinical and laboratory features of
human brucellosis. Indian J. Med. Microbiol., v. 25, p. 188-202, 2007.
Maratea, J.; Ewalt, DR.; Frasca Jr, S.; Dunn, JL.; De Guise, S.; Szkudlarek, L.; St. Aubin,
DJ.; French, RA.; De Guise, S. Evidence of Brucella sp. infection in marine mammals
stranded along the coast of Southern. N. Engl. J. Zoo Wildl. Med., v. 34, p. 256-261.
2003.
Marin, CM.; Alabart, JL.; Blasco, JM. Effect of antibiotics contained in two Brucella
selective media on growth of B. abortus, B. melitensis and B. ovis. J. Clin. Microbiol.,
v. 34, p. 426-428, 1996.

Gnero Brucella spp


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2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
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2013

Marin, CM.; Barberan, M.; Jimenez de Bagues, MP.; Blasco, JM. Comparison of
subcutaneous and conjunctival routes of Rev. 1 vaccination for the prophylaxis of
Brucella ovis infection in rams. Res. Vet. Sci., v. 48, p. 209-215, 1990.
Marin, CM.; Jimenez de Bagues, MP.; Blasco, JM.; Gamazo, C.; Moriyon, I.; Diaz, R.
Comparison of three serological tests for Brucella ovis infection of rams using different
antigenic extracts. Vet. Rec., v. 125, p. 504-508, 1989.
Mateudeantonio, EM.; Martin, M. In vivo efficacy of several antimicrobial combinations
against Brucella canis and Brucella melitensis strains isolated from dogs. Vet.
Microbiol., v. 45, p. 1-10, 1995.
McDonald, WL.; Jamaludin, R.; Mackereth, G.; Hansen, M.; Humphrey, S.; Short, P.;
Taylor, T.; Swingler, J.; Dawson, CE.; Whatmore, AM.; Stubberfield, E.; Perrett, LL.;
Simmons, G. Characterization of a Brucella sp. strain as a marine-mammal type despite
isolation from a patient with spinal osteomyelitis in New Zealand. J. Clin. Microbiol.,
v. 44, p. 4363-4370, 2006.
Michaux-Charachon, S.; Bourg, G.; Jumas-Bilak, E.; Guigue-Talet, P.; Allardet-Servent,
A.; OCallahan, D.; Ramuz, M. Genome structure and phylogeny in genus Brucella. J.
Bacteriol., v. 179, p. 3244-3249, 1997.
Miller, W.; Adams, L.; Ficht, T.; Cheville, N.; Payeur, J.; Harley, D.; House, C.; Ridgway,
S. Brucella-induced abortions and infection in bottlenose dolphins (Tursiops truncatus).
J. Zoo Wildl. Med., v. 30, p. 100-110, 1999.
Moore, JA.; Bennett, M. A Previously Undescribed Organism Associated with Canine
Abortion. Vet Rec., v. 80, p. 604-605, 1967.
Moore, JA.; Kakuk, TJ. Male dogs Naturally Infected with Brucella canis. JAVMA., v.
155, n. 8, p. 1352-1358, 1969.
Morrow, DA. Current Therapy in Theriogenology 2. Philadelphia: W.B. Sauders
Company, 1143p. 1986.

Gnero Brucella spp


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2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Myers, DM.; Jones, LM.; Varela-Diaz, V. Studies of antigens for complement fixation and
gel diffusion tests in the diagnosis of infections caused by Brucella ovis and other
Brucella. Appl. Microbiol., v. 23, p. 894-902, 1972.
Myers, DM.; Varela-diaz, V. Sorological and Bacteriological detection of Brucella canis
infection of stray dogs in Moreno, Argentina. Cornell Vet., v. 70, p. 258-265, 1980.
Myers, DM.; Varela-Diaz, VM.; Coltorti, E. A Comparative Sensitivity of Tube
Agglutination Tests for the Detection of Brucella canis Antibodies in Experimental
Infected Dogs. Appl. Microbiol., v. 28, n. 1, p. 1-4, 1974.
Nicoletti, P. Further studies on the use of antibiotics in canine brucellosis. Comp. Cont.
Educ. Pract. Vet., v. 13, p. 944-947, 1991.
Nicoletti, P.; Chase, A. The use of antibiotics to control canine brucellosis. Comp. Cont.
Educ. Pract. Vet., v. 9, p. 1063-1066, 1987.
Nielsen, K. Diagnosis of brucellosis by serology. Vet. Microbiol., v. 90, p. 447-459, 2002.
Nielsen, K. The serological response of cattle immunized with Yersinia enterocolitica O:9
or O;16 to Yersinia and Brucella abortus antigen in enzyme immunoassay. Vet
Immunol. Immunopathol., v. 24, p. 373-382, 1990.
Nielsen, K.; Duncan, JR. Animal Brucellosis. Boca Raton: CRC Press Inc., 453p. 2000.
Nielsen, K.; Gall, D. Fluorescence polarization assay for the diagnosis of brucellosis: A
review J. Immunoassay and Immunochem., v. 22, p. 183-201, 2001.
Nielsen, K.; Kelly, L.; Gall, D.; Nicoletti, P.; Kelly, W. Improved competitive enzyme
immunoassay for the diagnosis of bovine brucellosis. Vet. Immunol. Immunopathol.,
v. 46, p. 285-291, 1995.
Nielsen, O.; Nielsen, K.; Braun, R.; Kelly, L. A comparison of four serologic assays in
screening for brucella exposure in Hawaiian monk seals. J. Wildl. Dis., v. 41, p. 126-
133, 2005.
Nielsen, O.; Stewart, REA.; Nielsen, K.; Measures, L.; Duignan, P. Serologic survey of
Brucella spp. antibodies in some marine mammals of North America. J. Wildl. Dis., v.
37, p. 89-100, 2001.

Gnero Brucella spp


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Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Ohishi, K.; Takishita, K.; Kawato, M.; Zenitani, R.; Bando, T.; Fujise, Y.; Goto, Y.;
Yamamoto, S.; Maruyama, T. Chimeric structure of omp2 of Brucella from Pacific
common minke whales (Balaenoptera acutorostrata). Microbiol. Immunol., v. 49, p.
789-793, 2005.
Ohishi, K.; Zenitani, R.; Bando, T.; Goto, Y.; Uchida, K.; Maruyama, T.; Yamamoto, S.;
Miyazaki, N.; Fujise, Y. Pathological and serological evidence of brucella-infection in
baleen whales (Mysticeti) in the western North Pacific. Comp. Immunol. Microbiol.
Infect. Dis., v. 26, p. 125-136, 2003.
Osterman, B.; Moriyn, I. International Committee on Systematics of Prokaryotes
Subcommittee on the taxonomy of Brucella. Minutes of the meeting, 17 September
2003, Pamplona, Spain. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 56, p. 1173-1175, 2006.
Paulin, LM.; Ferreira Neto, JS. O Combate a Brucelose Bovina: Situacao Brasileira.
Jaboticabal: Funep, 154p. 2003.
Pereira Filho, MP.; Silva, JAH.; Rocha, JVN. Estudo da incidncia da Brucelose canina na
zona metropolitana de Salvador. In: Congresso Brasileiro de Medicina
Veterinria,16 Salvador, 1978. Anais. Salvador, Doc. Bras. Med. Vet.; Soc. Med. Vet.
Bahia, 1978 p.32.
Perrett, LL.; Brew, SD.; Stack, JA.; MacMillan, AP.; Bashiruddin, JB. Experimental
assessment of the pathogenicity of Brucella strains from marine mammals for pregnant
sheep. Sm. Rum. Res., v. 51, p. 221-228, 2004.
Poester, FP.; Gonalves, VSP.; Lage, AP. Brucellosis in Brazil. Vet Microbiol., v. 90, p.
55-62, 2002.
Quinn, J.; Carter, ME.; Markey, B.; Carter, GR. Clinical Veterinary Microbiology.
Edimburgh: MOSBY Harcourt Publishers Limited, 648p. 1999.
Quinn, PJ.; Markey, BK.; Carter, ME.; Donnelly, WJ.; Leonard, FC. Microbiologia
Veterinria e Doenas Infecciosas. Porto Alegre: Artmed, 512p. 2005.

Gnero Brucella spp


FAVET-UFRGS
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2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Radostits, OM.; Gay, CC.; Blood, DC.; Hinchcliff, KW. Veterinary Medicine: A
Textebook of the Diseases of Cattle Sheep, Pigs, Goats and Horses. 9 Ed.,
Philadelphia: W.B.Sauders, 1877p. 2000.
Radostits, OM.; Leslie, KE.; Fetrow, J. Herd Health: Food Animal Producton Medicine.
2 Ed., Philadelphia: W.B. Sauders Company, 631p. 1994.
Ramacciotti, F. Primer aislamiento de "Brucella canis" en humano por hemocultivo
efectuado en la Republica Argentina. Rev. Med. Vet. Arg., v. 61, p. 49-54, 1980.
Rebhun, WC.; Guard, C.; Richards, CM. Diseases of Dairy Cattle. Baltimore: Williams &
Wilkins, 530p. 1995.
Retamal, P.; Blank, O.; Abalos, P.; Torres, D. Detection of anti-brucella antibodies in
pinnipeds from the Antarctic territory. Vet. Rec., v. 146, p. 166-167, 2000.
Rhyan, JC.; Gidlewski, T.; Ewalt, DR.; Hennager, SG.; Lambourne, DM.; Olsen, SC.
Seroconversion and abortion in cattle experimentally infected with Brucella sp. isolated
from a Pacific harbor seal (Phoca vitulina richardsi). J. Vet. Diagn. Investig., v. 13, p.
379-382, 2001.
Riecke, JA.; Rhoades, HE. Brucella canis Isolated from the Eye of a Dog. JAVMA., v.
166, n. 6, p. 583-584. 1975.
Riezu-Boj, JI.; Moriyon, I.; Blasco, JM.; Marin, CM.; Diaz, R. Comparison of
lipopolysaccharide and outer membrane protein-lipopolysaccharide extracts in an
enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of Brucella ovis infection. J.
Clin. Microbiol., v. 23, p. 938-942, 1986.
Ris DR.; Hamel, KL.; Long, DL. Comparison of an enzyme-linked immunospecific assay
(ELISA) with the cold complement fixation test for the serodiagnosis of Brucella ovis
infection. N. Z. Vet. J., v. 32, p. 18-20, 1984.
Rodolakis, A.; Bernard, K. Isolement de Chlamydia des organes gnitaux de bliers atteints
dpididymite. Bull. Acad. Vet. Fr., v. 50, p. 65-70, 1977.
Ross, HM.; Foster, G.; Reid, RJ.; Jahans, KL.; MacMillan, AP. Brucella species infection
in sea mammals. Vet. Rec., v. 134, p. 359, 1994.

Gnero Brucella spp


FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Rylatt, DB.; Wyat, DM.; Bundesen, PG. A competitive enzyme immunoassay for the
detection of bovine antibodies to Brucella abortus using monoclonal antibodies. Vet
Immunol. Immunopathol., v. 8, p. 261-271, 1985.
Saegerman, C.; VO, TK.; De Waele, L.; Gilson, D.; Bastian, A.; Dubray, G.; Flanagan, P.;
Limet, JN; Letesson, JJ.; Godfroid, J. Diagnosis of bovine brucellosis by skin test and
evaluation of its performance. Vet. Rec., v. 145, p. 2140218, 1999.
Sandoval, LA.; Ribeiro, LOC.; Amaral, LBS.; Feitosa, MH.; Bazan, JM. Incidncia da
brucelose canina na cidade de So Paulo. Biol., v. 42, p. 128-132, 1976.
Santos, JM.; Verstreate, DR.; Perera, VY.; Winter, AJ. Outer membrane proteins from
rough strains of four Brucella species. Infect. Immun., v. 46, p. 188-194, 1984.
Schlabritz-Loutsevitch, NE; Whatmore, AM; Quance, CR; Koylass, MS; Cummins, LB;
Dick Jr, EJD; Snider, CL; Cappelli, D; Ebersole, JL; Nathanielsz, PW.; Gene B.
Hubbard, GB. A novel Brucella isolate in association with two cases of stillbirth in
non-human primates first report. J. Med. Primatol., v. 38, p. 7073, 2009.
Schlemper, SRM.; VAZ, AK. Inqurito sorolgico para Brucelose canina por Brucella
canis na Regio do Planalto Catarinense, Brasil. Rev. Bras. Med. Vet., v.12, p. 8-12,
1990.
Schoeb, TR.; Morton, R. Scrotal and Testicular Changes in Canine Brucellosis: A case
Report. JAVMA., v. 172, n 5, p. 598-600, 1978.
Scholz, HC.; Hubalek, Z.; Sedlek, I.; Vergnaud, G.; Tomaso, H.; Al Dahouk, S.; Melzer,
F.; Kmpfer, P.; Neubauer, H.; Cloeckaert, A.; Maquart, M.; Zygmunt, MS.;
Whatmore, AM.; Falsen, E.; Bahn, P.; Gllner, C.; Pfeffer, M.; Huber, B.; Busse, HJ.;
Nckler, K. Brucella microti sp. nov., isolated from the common vole Microtus arvalis.
Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 58, p. 375-382, 2008.
Seagusa, J.; Ueda, K.; Goto, Y.; Fujiwara, K. Ocular lesions in experimental Canine
Brucellosis. Jap. J. vet. Sci., v. 39, p. 181-185, 1977.
Searson, JE. Sensitivity and specificity of two microtitre complement fixation tests for the
diagnosis of Brucella ovis infection in rams. Aust. Vet. J., v. 58, p. 5-7, 1982.

Gnero Brucella spp


FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Serikawa, T.; Muraguchi, T.; Nakao, N. Significance of urine culture for detecting infection
with Brucella canis in dogs. Jap. J. vet. Sci., v. 40, p.353-355, 1978.
Sohn, A.; Probert, W.; Glaser, C.; Gupta, N.; Bollen, A.; Wong, J.; Grace, E.; McDonald,
W. Human neurobrucellosis with intracerebral granuloma caused by a marine mammal
Brucella spp. Emerg. Infect. Dis., v. 9, p. 485-488, 2003.
Spencer, TL.; Burgess, GW. Enzyme-linked immunosorbent assay for Brucella ovis
specific antibody in ram sera. Res. Vet. Sci., v. 36, p. 194-198, 1984.
Stackebrandt, E.; Frederiksen, W.; Garrity, G.M. Grimont, PAD.; Kmpfer, P.; Maiden,
MCJ.; Nesme, X.; Rossello-Mora, R.; Swings, J.; Trper, HG.; Vauterin, L.; Ward,
AC.; Whitman, WB. Report of the ad hoc committee for the re-evaluation of the species
definition in bacteriology. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., v. 52, p. 1043-1047, 2002.
Stoenner, HG.; Lackman, DB. A new species of Brucella isolated from the desert wood rat,
Neotoma lepida Thomas. Am. J.Vet. Res., v. 18, p. 947-951, 1957.
Sutherland, SS. An enzyme-liked immunosorbent assay for the detection of Brucella
abortus in cattle usinag monoclonal antibodies. Aust. Vet J., v. 62, p. 264-268, 1985
Sutherland, SS. Evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay in the detection pf
cattle infected with Brucella abortus. Vet Microbiol., v. 10, p. 23-32, 1984.
Swenson, RM.; Carmichael, LE.; Cundy, KR. Human infection with Brucella canis. Ann.
Int. Med., v. 76, p. 435-438, 1972.
Terakado, TE.; Ueda, NH.; Sugawara, H.; Isayama, Y. Drug susceptibility of Brucella
canis isolated from dogs. Jap. J. Vet. Sci., v. 40, p. 291-295, 1978.
Thoen, CO.; Steele, JH. Mycobacterium bovis Infection in Animals and Humans Ed.
Thoen CO.; Steele, JH. Ames: Iowa State University Press, 355p, 1995.
Timoney, JF.; Gillespie, JH.; Scott, FW.; Barlough, JE. Hagan and Bruners
Microbiology and Infectious Disease of Domestic Animals. 8 Ed. Ithaca: Cornell
University Press, 951p. 1992.
Tryland, M.; Derocher, AE.; Wiig, Y.; Godfroid, J. Brucella sp. antibodies in polar bears
from Svalbard and the Barents Sea. J. Wildl. Dis., v. 37, p. 523-531, 2001.

Gnero Brucella spp


FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Tryland, M.; Kleivane, L.; Alfredsson, A.; Kjeld, M.; Arnason, A.; Stuen, S.; Godfroid, J.
Evidence of brucella infection in marine mammals in the North Atlantic Ocean. Vet.
Rec., v. 144, p. 588-592, 1999.
Tryland, M.; Srensen, K.; Godfroid, J. Prevalence of Brucella pinnipediae in healthy
hooded seals (Cystophora cristata) from the North Atlantic Ocean and ringed seals
(Phoca hispida) from Svalbard. Vet. Microbiol., v. 105, p. 103-111, 2005.
Ueda, K.; Magaribuchi, T.; Saegusa, J.; Urano, K.; Itoh, K.; Kiuchi, Y.; Fujiwara, K.
Spontaneous Brucella canis infection in beagles: Bacteriological and Serological
Studies. Jap. J. vet. Sci., v. 36, p. 381-389, 1974.
Van Bressem, M.; Van Waerebeek, K.; Raga, J.; Godfroid, J.; Brew, S.; MacMillan, A.
Serological evidence of Brucella species infection in odontocetes from the south Pacific
and the Mediterranean. Vet. Rec., p. 148, p. 657-661, 2001.
Vargas, AC.; Lazzari, A.; Dutra, V.; Poester, FP. Brucelose canina: Relato de caso. Cincia
Rural, v. 26, n2, p. 305-308, 1996.
Verger, JM.; Gt, M.; Piechaud, M.; Chatelain, R.; Amisse, J.; Blancou, J. Isolement de
Brucella suis biotype 5 Madagascar, chez une chienne. Validity du nom despece
Brucella canis . Ann. Microbiol., v. 126 A, p.57-74, 1975.
Verger, JM.; Grimont, F.; Grimont, PAD. ; Grayon, M. Brucella, a monospecific genus as
shown by deoxyribonucleic acid hybridization. Int. J. Syst. Bacteriol., v. 35, p. 292-
295, 1985.
Wald, VB.; Fernandes, JCT. Sorologia da Brucelose canina no Municpio de Porto Alegre,
RS. Arq. Fac. Vet. UFRGS., v. 4-5, p. 92-95, 1976-7.
Wayne, LG.; Brenner, DJ.; Colwell, RR.; Grimont, PAD.; Kandler, O.; Krichevsky, MI.;
Moore, LH.; Moore, WEC.; Murray, RGE.; Stackebrandt, E.; Starr, MP.; Trper, HG.
Report of the ad hoc committee on reconciliation of approaches to bacterial systematics.
Int. J. Syst. Bacteriol., v. 37, p. 463-464, 1987.
Webb, RF. Clinical findings and pathological changes in Histophilus ovis infections of
sheep. Res. Vet. Sci., v. 35, p. 30-34, 1983.

Gnero Brucella spp


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Prof. Marcos JP Gomes
2013
Gnero Brucella spp
FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Webb, RF.; Quinn, CA.; Cockram, FA.; Husband, AJ. Evaluation of procedures for the
diagnosis of Brucella ovis infection in rams. Aust. Vet. J., v. 56, p. 172-175, 1980.
Williamson, P.; Nairn, ME. Lesions caused by Corynebacterium pseudotuberculosis in the
scrotum of rams. Aust. Vet. J., v. 56, p. 496-498, 1980.
Worthington, RW.; Stevenson, BJ.; de Lisle, GW. Serology and semen culture for the
diagnosis of Brucella ovis infection in chronically infected rams. N.Z. Vet. J., v. 33, p.
84-86, 1985.
Worthington, RW.; Weddell, W.; Penrose, ME. A comparison of three serological tests for
the diagnosis of B. ovis infection in rams. N.Z. Vet. J., v. 32, p. 58-60,1984.
Wright, AE.; Smith, F. On the application of the serum test to differential diagnosis of
thyphoid and Malta fever. Lancet, v. 1, p. 656-659, 1897.
Yamauchi, C.; Suzuki, T.; Nomura, T. Canine brucellosis in a beagle breeding colony. Jap.
vet. Sci., v. 36, p. 175-182, 1974.

Gnero Brucella spp


FAVET-UFRGS
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