DEFINICIN DE INFLAMACIN

Es el conjunto de respuestas de los tejidos vivos frente a una agresin fsica, infecciosa o
autoinmune, que determina en los sistemas homeostticos de la sangre y en el tejido
conectivo, una serie de cambios encaminados a localizar y aislar el agente agresor para luego
eliminarlo y reparar el dao tisular .
El mayor problema que surge en la inflamacin es que la defensa se dirija tanto hacia agentes
dainos como a no dainos, de manera que provoque lesin en tejidos u rganos sanos.
La reaccin vascular es el componente ms importante de la inflamacin, permite la afluencia a
la zona afectada demolculas y clulas, encargadas de neutralizar y retirar los agentes
agresores y los restos del tejido daado.Acontinuacin se muestran las reacciones
desencadenadas en el organismo:

La inflamacin empieza con la vasodilatacin, esto provoca enrojecimiento, aumento de la

temperatura de la zona e hinchazn. En la zona inflamada se liberan sustancias que irritan las
terminaciones nerviosas causando dolor y en algunos casosotras que originan fiebre. El
aumento de la temperatura favorece la respuesta inmunitaria.

El objetivo final de la respuesta inflamatoria es en definitiva la reparacin del dao sufrido por el
organismo, mediante la proliferacin de clulas especificas o bien su sustitucin porfibroblastos
dejando en este caso como secuela una cicatriz.
CAUSAS DE LA INFLAMACIN
La inflamacin es causada por la liberacin de sustancias llamadas prostaglandinas (PGs), que
se hallan almacenadas en todas las clulas del cuerpo. Cuando un factor agresivo ataca al
cuerpo, las PGs se liberan como medio de defensa y se presenta hinchazn, enrojecimiento
y dolor de la parte afectada.
Los agentes causantes de la inflamacin son muy variados algunos de ellos se muestran :
TIPOS DE INFLAMACIN
La inflamacin segn su duracin se divide en aguda, subaguda y crnica.
a. La aguda es de duracin relativamente corta (minutos, horas o pocos das), se inicia
muy rpidamente y se caracteriza por el exudado de fluidos plasmticos y lamigracin de
leucocitos predominantemente, presenta un intenso enrojecimiento, aumento de la
Temperatura, tumefaccin, dolor y alteraciones funcionales.
b. La inflamacin crnica dura semanas, meses o incluso aos y se caracteriza
histolgicamente por el infiltrado de linfocitos y Ms con la proliferacin de vasos sanguneos y
tejido conectivo, el cual puede llevar a la formacin de granulomas; en esta inflamacin se
Presenta un aumento de temperatura, rubor no tan intenso, y dolor menos agudo.
c. La Inflamacin subaguda es una forma intermedia
de imbricacin de inflamacin aguda y de inflamacin crnica. Tiene sentido tanto temporal
como morfolgico, pero la utilizacin de este trmino es obsoleto. A veces se encuentra una
inflamacin aguda central y crnica perifrica como en los abscesos. Cualquier tipo de
inflamacin puede sufrir brotes de reagudizacin o pasar a una fase de codificacin.

ANTIINFLAMATORIOS
Son un grupo de frmacos que actan bloqueando la sntesis de PGs, tienen adems efecto
analgsico y antipirtico. (13)
TIPOS DE ANTIINFLAMATORIOS NO
ESTEROIDALES (AINES)
Tambin son conocidos como frmacos analgsicosantipirticos, porque la mayora tiene
accinantiinflamatoria, analgsica y antipirtica.
Objetivos
Determinar el efecto teraputico del berro
Comprobar el efecto cicatrizante
Evaluar el efecto farmacolgico del berro ,sobre la reparacin de la heridas en
ratones
comprobar actividad cicatrizante de extractos hidroalcoholicos de Berro
(Nasturtium officinale) en ratones, con el fin de proveer productos
naturales frente al uso de frmacos.

materiales
Materiales generales al inicio
Caja o jaula: los ratones se alojan en cajas diseadas para facilitar su bienestar puede
ser de metal o plstico, inoxidable con o sin filtro
Agua de bebida: El agua debe ser potable y suministrarse libremente durante toda la
vida del animal, puede ser en frascos bebederos de vidrio o de policarbonato, debe ser
acidificada, esterilizada mediante autoclave o por mtodo de filtracin.
Material vegetal

Para la investigacin se utiliz un kilo de planta completa seca y pulverizada de Berro

(Nasturtium officinale)

Material biolgico: Ratones de la especie Mus musculus

Material farmacolgico:

indometacina, dosis 10 ml x kg
extracto acuoso, dosis de 200 mg/kg
solucin fisiolgica NaCl, 0,9 %, dosis 5mlx kg
solucin de albumina de huevo al 50%
pentobarbial, sosis 30 mg x kg

Equipo de medicin:

plestimometro

Materiales de laboratorio Probeta

Vasos de precipitacin de 1000, 250 Baln esmerilado
, 100 , 50 ml Matraces
Tubos de ensayo Reverbero
Gradilla Cpsulas de porcelana
Piseta Varilla de vidrio
Termmetro Balones volumtricos
Papel filtro Trpode
Embudo Embudo de separacin
Pipetas de 1 , 5 , 10 ml Guantes
Mascarilla Balanza analtica
Picnmetro Desecador
Pera de succin Refrigerador
Esptula Refractmetro
Crisol Estufa
Papel aluminio autoclave
Pinzas para tubos Ph metro
Algodn Espectrofotmetro
Bistur Bomba de presin
Capilares
Computadora
Fsforo
Cmara digital
Balones aforados
Mufla
Barbera
Uv
EQUIPOS Viscosmetro
Calculadora
Rota vapor R220

REACTIVOS
Agua destilada Acido sulfrico concentrado
Alcohol potable Hidrxido de potasio o Sodio
Agua potable Reactivo de Baljet
Extracto de berro Solucin de carbonato de sodio
Lanolina Tricloruro frrico al 5%
Glicerina Suero Fisiolgico
Propilenglicol Solucin de Ninhidrina al 5%
Trietanolamina Acido clorhdrico concentrado
Acido ctrico Cinta de magnesio metlico
Acido clorhdrico concentrado Alcohol amlico
Reactivo ter
Dragendorff Agares correspondientes para cada
Reactivo Wagner determinacin de patgenos
Reactivo Mayer
Cloroformo
Anhdrido actico

Efecto teraputico
EVALUACIN DEL EFECTO CICATRIZANTE DE LOS

EXTRACTOS HIDROALCOHLICOS DE BERRO EN

RATONES

Aclimatacin del animal de experimentacin por un periodo de 3 das mediante la dotacin de

alimento segn el peso de cada grupo en una racin de 2g de alimento por cada 10g de peso.

Depilacin del dorso de cada ratn utilizando una crema depilatoria (Veet)

Despus de 24 horas de realizada la depilacin se procedi a inducir

La herida, en el dorso del animal, mediante un corte en una medida de 1.5cm de largo y
aproximadamente 2mm de profundidad utilizando un bistur.

Se aplic los 3 extractos de Berro/Llantn, el Esterol y el alcohol al 50% a cada uno de los grupos
experimentales, 2 veces al da. Se observ los resultados

Procedimiento

1. Pesar y marcar las ratas

2. Anastesiar las ratas con inyeccin VIP de pentobarbial para facilitar la medicin
3. Medir la pata trasera izquierda con petismometro y expresara el resultado en ml
4. Admistrar por VIP, blanco: suero fisiolgico :B.cola : indometacina; oreja derecha
extracto
5. Maracar con una lnea la pata trasera izquierda de cada rata.
6. Despues de 20 min, administrar a los tres animales, 0.1 ml de albumina de huevo en la
pata trasera izquierda
7. Efectuar mediciones en la pata inflamada con el petismometro cada 30 min por cuatro
veces.Para esto tomar delicadamente a la rata envuelta en una franela dejando libre su
pata izquierda.Introducir en le petismografo hasta igualar la marca de este y la marca de
la pata.Al mismo tiempo se aspira con las geringas y se consignan los resultados en ml
de agua desplazada
8. Para hallar los valores de inflamacin neta se ulitiza la siguiente formula:

I.N.= inflamacin a determinado tiempo (ml) - dato basal

9. Para hallar los valores de eficiencia antiinflamatoria se utiliza la siguiente formula:

%EA= control- problema x 100

control

VAS DE ADMINISTRACIN DE FLUIDOS Y DROGAS

Va Subcutnea:

El medicamento se introduce a travs de una aguja fina, preferentemente bajo la piel del
abdomen o del dorso, all se va liberando lentamente al torrente sanguneo no existe en esta
zona muchas terminaciones nerviosas una vez inyectado la sustancia, luego realizar suavemente
masajes en el sitio de la inyeccin, para prevenir el escape del fluido Inyectado. Su volumen de
administracin es de 5710 mL.

Vaintraperitoneal:

Esta va es la ms utilizada as como la intramuscular y la subcutnea, las sustancias a

administrar son pequeas y la absorcin por esta va es ms rpida. Se realiza usando una ajuga
corta y fina. El sitio para introducir la aguja es el cuadrante inferior izquierdo, con la aguja
levemente inclinado, la misma se sentir flotar libremente en la cavidad peritoneal, de no ser as,
no inyecte el liquido por esta va, ya que va hacia el interior de las vsceras o en un musculo de
la pared abdominal. Su volumen de administracin es de 5710 mL.(42)

Va oral:

Por esta va se administra por medio de una sonda pequeo, soluciones y suspensiones, se
introduce la sonda por el interdental verificando que la sonda este en el estmago no en los
pulmones, se sujeta por la piel del cuello y la espalda asegurndose que la cabeza y el cuello
quede extendido formando una lnea con la espalda.(42) (52)A si mismo se puede utilizar la
tcnica de la cnula, se coloca una jeringuilla en el extremo de la cnula, sumergiendo en la
vaselina alrededor de la cnula como lubricante para no causar daos en el tracto digestivo del
animal.

Manipulando por el dorso del animal en posicin recta para que facilite el ingreso de la cnula
as evitar el contacto a las vas respiratorias. Su volumen de administracin es hasta 10 mL en
dosis repetida

Va intramuscular:

El medicamento es administrado por debajo de la piel es decir se introduce dentro de musculo

por medio de una aguja de 25 G.

La administracin por esta va, el medicamento pasa rpidamente a la sangre por estar muy
irrigado por sus vasos sanguneos. El volumen a

Administrado es entre 0.3 mL.

Va intravenosa:

Por esta va se utiliza las venas laterales de la cola, el medicamento se introduce directamente
en el torrente sanguneo, es la va mucho ms rpido en la aparicin de la actividad farmacolgica
de cierta sustancia, su volumen de administracin de es de 0.5 mL

Intradrmica:

Para administrar por esta va, se manipula en una zona de piel que, sea el tejido drmico
densopara su mejor administracin se depila la zona

, se utiliza agujas de 25 G, su volumen de administracin es de 100 uL.

VALORACIN DE LA VA DE
ADMINISTRACIN
Antes del anlisis farmacolgico se valor la va de administracin para asegurar que el
medicamento sea absorbido y llegue al lugar de accin.Para este fin se utilizaron ratones a los
cuales se les dej en ayuno la noche anterior, al da siguiente se les anestesi con cloroformo
(Lab. Promeclin) para luego administrar 0,4 ml de una solucin de azul de metileno (MERCK) al
0,01% por va oral a travs de una cnula intragstrica. Luego de 15 minutos se procedi a
realizar la diseccin de la cavidad abdominal de los ratones y se llev a cabo una exploracin
fsica interna. (ANEXO 13) (28)
2.1.12.2. PRCTICA DE LA TCNICA
La prctica de la tcnica se realiz con el fin de adquirir destreza para hacer ms fcil el desarrollo
de la misma durante la evaluacin del efecto antiinflamatorio del PmL.
Para realizar esta prctica se utiliz a otro grupo de ratones, los cuales fueron anestesiados con
cloroformo. Se depil el lomo de los ratones y se les realiz una incisin para introducir un pellet
de algodn estril, luego se sutur la herida y se aplic alcohol yodado como antisptico (Lab.
Promeclin). Despus de algunos das se extrajeron los granulomas. (ANEXO 14)
ANLISIS FARMACOLGICO
MODELO EXPERIMENTAL DE INFLAMACIN:
GRANULOMA INDUCIDO POR DISCO DE ALGODN
La tcnica para determinar el efecto antiinflamatorio utilizando una mota de algodn fue
desarrollada por Meier R, Schuler W and Desaulles P.(29), a la cual se le han realizado varias
modificaciones.
Para la realizacin de nuestra tesis hemos seguido el modelo experimental de inflamacin de
granuloma inducido por discos de algodn propuesto por Molina Vivian,(30) tomando como
referencia para la realizacin de los clculos los utilizados en Evaluacin preclnica del efecto
antiinflamatorio del jugo de Morinda citrifolia L. (31)

Fundamentacin terica
La mayora de los experimentos para evaluar la accin antiinflamatoria involucran el uso de
granulomas por cuerpos extraos. La implantacin subcutnea de un disco de algodn en ratas
resulta en la formacin de un granuloma en el sitio de implante. Los primeros eventos
ocurren en la vecindad del disco de algodn y resultan en la generacin de sustancias
quimiotcticas para Nts y Mos, las cuales pueden ser producto del sistema de
complemento, el sistema de quinina o la generacin de productos de la oxidacin del cido
araquidnico. Estaprimera fase comprende una acumulacin de fluido y material proteico junto
con una infiltracin de Nts. (30)
El granuloma formado por 7 das es caracterizado por la formacin de una cpsula fibrosa
vascularizada que contiene fibroblastos y clulas mononucleares las cuales son ricas en N-
acetil--D-glucosaminidasa (NAG),marcador de enzimas lisosomales. Una activa infiltracin de
clulas polimorfonucleares (PMN) tambin caracteriza esta fase del proceso inflamatorio. (30)
protocolo experimental

Para la evaluacin del efecto antiinflamatorio de la droga de PmL se utilizaron ratones machos
Swiss albinos, los cuales fueron pesados en la balanza OHAUS Scout II SC 2020
(Canad), identificados por la inscripcin en nmeros romanos y distribuidos al azar para formar
los 5 lotes de 6 animales.
Los pesos de los ratones de cada uno de los lotes se indican a continuacin:
Luego los ratones fueron anestesiados y rasurados en el lomo; posteriormente se les realiz una
incisin de aproximadamente 2 cm en la mitad del dorso lateral.
Finalmente se les introdujo de manera subcutnea 1 pellet de algodn estril de
aproximadamente 15 mg(32), los cuales fueron pesados en la balanza analtica BOECO BBL
31 (Alemania). A continuacin se sutur la herida y sobre ella se aplic alcohol yodado para
evitar infecciones.

Al da siguiente se realiz la aplicacin oral de la tintura de Llantn al 30% a los lotes 1, 2 y 3 a

dosis de 100, 200 y300 mg/kg de peso respectivamente; alcohol en suero fisiolgico (Fisiol UB,
Lab. Lamosan, lote 09030302) como blanco al lote 4 a dosis de 10 mg/kg de peso; y al lote 5
solucin de Indometacina (Indocid cpsulas de 25 mg, Lab. MSD, lote P346) como patrn a dosis
de 10 mg/kg. sta aplicacin se efectu por 7 das, durante los cuales se observaron los
parmetros de la inflamacin como la tumefaccin, rubor, calor, dolor y prdida o disminucin de
la funcin. Al octavo da se sacrificaron los animales en atmsfera de ter (Lab. Promeclin) y se
realiz la exresis de los granulomas, los cuales fueron pesados en el momento de la extraccin
determinando sus pesos hmedos. Posteriormente sesecaron en estufa a 60C durante 24 horas
y fueron pesados determinndose sus pesos secos.
Con los datos recolectados se calcularon los valores de contenido acuoso y contenido
fibrogranuloso, que fueron analizados estadsticamente entre s y en comparacin con
los de los grupos blanco y patrn. Por ltimo se determin el porcentaje de inhibicin de la
inflamacin.
PARMETROS DE LA INFLAMACIN
Para determinar el grado de inflamacin se utiliz la
Siguiente leyenda:
Leve: +
Moderada: ++
Intensa: +++
Ausencia: -
Calor: Para establecer el grado de calor presentado por el ratn se utiliz el sentido del tacto,
ste se bas en tocar con los dedos la zona donde se implant el pellet de algodn
determinando as su intensidad.

Dolor: Para evaluar el dolor se procedi a estimular la zona afectada mediante el pinchazo con
la cabeza de una aguja, midindose la reaccin del ratn como intensa si apenas se le tocaba
chillaba, moderada si al contacto con la aguja cerraba sus ojos o se esquivaba, leve si al
pincharleapenas realizaba un ligero movimiento y ausencia si no manifestaba ningn tipo de
reaccin.
Rubor: Para la medicin del rubor se utiliz el sentido de la vista, es decir se procedi a la
observacin de la zona de la herida del ratn, en donde se determin por el color elgrado de
rubor o enrojecimiento.

Tumefaccin: Para determinar el parmetro de

tumefaccin, se inspeccion visualmente la zona de implante del pellet de algodn,

calificndose como intensa si la zona se encontraba muy hinchada, moderada si la zona
presentaba una hinchazn media, leve si la zona presentaba una ligera hinchazn y ausencia
de la misma si la zona afectada presentaba slo el abultamiento por parte del pellet de
algodn.

Prdida del funcionamiento: Para conocer si hay prdida o disminucin de la funcin del
rgano o tejido afectado se realiz la observacin del ratn durante todos los das de
tratamiento, designndose como ausencia si el ratn presentaba el mismo comportamiento o
movilidad que tena antes del tratamiento farmacolgico; se calificara como grado intenso si
como consecuencia de la lesin el ratn presenta una ausencia de movilidad notable; moderado
si se observa una ligera falta de movilidad y como leve siapenas se produce una pequea
variacin en elmovimiento.