Pesq. Vet. Bras.

30(6):479-483, junho 2010

Carcinoma bronquolo-alveolar em leo-africano

(Panthera leo)1
Ricardo B. Lucena2, Rafael A. Fighera3, Adriano B. Carregaro4, Maria Andria
Inkelmann2 e Claudio S.L. Barros3*

ABSTRACT.- Lucena R.B., Fighera R.A., Carregaro A.B., Inkelmann M.A. & Barros C.S.L.
2010. [Bronchioloalveolar carcinoma in an African Lion (Panthera leo).] Carcinoma
bronquolo-alveolar em leo-africano (Panthera leo). Pesquisa Veterinria Brasileira 30(6):479-
483. Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria,
RS 97105-900, Brazil. E-mail: claudioslbarros@uol.com.br
A case of diffuse bronchioloalveolar carcinoma of the mixed type was diagnosed in the
lung of an adult female African lion (Panthera leo) with presenting signs of progressive dyspnea
and weight loss. In all pulmonary lobes there were multiple 0.2-0.5cm in diameter soft and
homogenous white nodules. Histologically, these nodules consisted of neoplastic cells with an
alveolar and papillary disposition, a pattern reminiscent of the preexistent pulmonary structure.
The cytoplasms of numerous neoplastic cells were positive in the periodic acid-Schiff (PAS)
stain. At immunohistochemistry examination, all neoplastic cells reacted strongly and uniformly
to pancytokeratin; focal reactivity for thyroid transcription factor 1 (TTF-1) was observed in the
nucleus of neoplastic cells mainly in those at the margins of the nodules. Positive reaction for
surfactant A was observed in multifocal areas, both in the cytoplasm and plasma membranes
of neoplastic cells. The diagnosis of diffuse bronchioloalveolar carcinoma of the mixed type
was made based on histological, histochemistry and immunohistochemistry findings. This
seems to be the first report of a primary malignant neoplasm in the lung of the African lion.
INDEX TERMS: Felid, Panthera leo, oncology, pathology, pulmonary carcinoma.

RESUMO.- Um caso de carcinoma bronquolo-alveolar difuso
do tipo misto foi diagnosticado em um leo-africano
(Panthera leo), hospitalizado com sinais de dispnia e ema-
grecimento progressivo. Em todos os lobos pulmonares
havia mltiplos ndulos esbranquiados, macios e homo-
gneos, de 0,2-0,5cm em dimetro. Histologicamente, os
ndulos eram constitudos por clulas neoplsicas arranja-
das em alvolos e papilas sustentados por moderado estro-
ma fibrovascular, um padro que lembrava a estrutura pul-
monar pr-existente. Na reao pelo cido peridico de Schiff
1
Recebido em 16 de novembro de 2009.
Aceito para publicao em 20 de abril de 2010.
2 Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria, rea de
concentrao em Patologia Veterinria, Centro de Cincias Rurais
(CCR), Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Camobi, Santa
Maria, RS 97105-900, Brasil.
3 Departamento de Patologia, Centro de Cincias da Sade, UFSM,
Santa Maria, RS. *Pesquisador 1A do CNPq. Autor para correspondn-
cia: claudioslbarros@uol.com
4 Departamento de Clnica de Pequenos Animais, CCR, UFSM, San-
ta Maria, RS.
(PAS) foi observada marcao positiva no citoplasma de
numerosas clulas neoplsicas. Todas as clulas neoplsi-
cas demonstraram forte e uniforme imunorreatividade cito-
plasmtica para pancitoceratina. A marcao para o fator 1
de transcrio da tireide (TTF-1) foi observada em focos
nos ncleos das clulas neoplsicas das margens dos n-
dulos. Nas seces avaliadas para surfactante A, a marca-
o foi observada em mltiplas reas focais, tanto no cito-
plasma como na membrana citoplasmtica das clulas ne-
oplsicas. O diagnstico de carcinoma bronquolo-alveolar
difuso do tipo misto foi feito com base nos achados
histolgicos, histoqumicos e imuno-histoqumicos. Essa
parece ser a primeira descrio de um neoplasma pulmonar
primrio maligno em leo-africano.
TERMOS DE INDEXAO: Doenas de lees, oncologia, pa-
tologia, carcinoma pulmonar.
INTRODUO
Neoplasmas primrios de pulmo so pouco comuns em
animais, diferentemente do que ocorre em humanos, em
que so descritos mundialmente como os mais frequentes

479
480
e mortais tipos de cncer (Parkin et al. 2004). O carcino-
ma bronquolo-alveolar (CBA) um neoplasma pulmonar
caracterizado pela proliferao celular ao longo dos alvo-
los pulmonares e junes bronquolo-alveolares pr-exis-
tentes, o que mantm a arquitetura do pulmo. Em medici-
na veterinria, o CBA o neoplasma primrio de pulmo
mais prevalente em ces e gatos, mas incomum em
outras espcies. Tumores bronquolo-alveolares geralmente
ocorrem como ndulos isolados ou na forma de mltiplas
massas na periferia do pulmo; raramente tais tumores
podem ocorrer de forma difusa (Wilson & Dungworth 2002).
Histologicamente, neoplasmas primrios de pulmo podem
ser confundidos com metstases pulmonares de outras
formas de cncer. Nesses casos, a avaliao imuno-
histoqumica imprescindvel para confirmar a verdadeira
origem pulmonar (Ramos-Vara et al. 2005).
Neoplasmas so pouco descritos em lees (Panthera
leo); quando relatados se restringem ao tegumento e aos
sistemas alimentar, hematopotico, reprodutor, nervoso e
esqueltico (Dorso et al. 2008, Owston et al. 2008, Tucker
et al. 2008, Taylor et al. 1976). No conhecimento dos auto-
res, at o momento, no h descrio na literatura de
neoplasma primrio maligno afetando o Sistema Respirat-
rio em leo-africano. Foi descrito apenas um adenoma pul-
monar como um achado incidental em um leo submetido
eutansia em decorrncia de um oligodendroglioma
enceflico (Tucker et al. 2008). Este relato tem como obje-
tivo descrever os aspectos clnicos, patolgicos e imuno-
histoqumicos do carcinoma bronquolo-alveolar em um leo.
MATERIAL E MTODOS
Um espcime de leo-africano (Panthera leo), fmea, adulto,
com histrico de dispneia e emagrecimento progressivos foi
atendido no Hospital Veterinrio Universitrio da Universidade
Federal de Santa Maria (HVU-UFSM) e necropsiado no Labora-
trio de Patologia Veterinria da UFSM (LPV-UFSM). Fragmen-
tos de diversos rgos foram fixados em formol a 10%, embebi-
dos em parafina, seccionados a 3m, corados com hematoxili-
na e eosina (HE) e submetidos a tcnicas histoqumicas que
incluram o cido peridico de Schiff (PAS) e o tricrmico de
Masson (TM). Avaliao imuno-histoqumica foi realizada pela
tcnica da estreptavidina-biotina-peroxidase (LSAB Kit Peroxi-
dase Universal, DakoCytomation5) em diferentes seces do
pulmo. A imunomarcao foi visualizada com o uso de 3-3di-
aminabenzidina (DAB). As seces foram contracoradas com
hematoxilina de Harris; utilizaram-se controles positivos e ne-
gativos para cada anticorpo. Inicialmente utilizou-se anticorpo
anti-pancitoceratina (policlonal, DakoCytomation5), na diluio
de 1:2000, e anti-vimentina (clone V9, DakoCytomation5), na
diluio de 1:100. As seces foram testadas tambm com anti-
protena S-100 (policlonal, DakoCytomation5), na diluio de 1:5000,
e anti-cromogranina A (clone DAK-A3, DakoCytomation5), na
diluio de 1:600. Para confirmar a origem pulmonar das clu-
las neoplsicas, as seces foram avaliadas para a presena
do TTF-1 (clone 8G7G3/1, DakoCytomation5), na diluio de 1:50,
e da apoprotena surfactante A (clone PE10, DakoCytomation5),
na diluio de 1:800.
5 Dako Cytomation, 6392 Via Real, Carpinteria, CA, USA.
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Ricardo B. Lucena et al.
RESULTADOS
Na necropsia foi confirmado o pssimo estado corporal. Em
todos os lobos pulmonares havia mltiplos ndulos de 0,2-
0,5cm de dimetro. Ao corte, os ndulos eram macios e
apresentavam-se homogeneamente esbranquiados. His-
tologicamente, os ndulos eram constitudos por clulas
neoplsicas arranjadas em alvolos e papilas com modera-
do estroma fibrovascular, um padro que lembrava a estru-
tura pulmonar pr-existente (Fig.1). As clulas neoplsicas
eram cuboides ou colunares baixas, mas variavam de ta-
manho e forma em algumas reas (pleomorfismo modera-
do). Essas clulas tinham citoplasma eosinoflico e abun-
dante; o ncleo era grande, redondo, disposto basalmente e
formado por cromatina agregada com nuclolo nico e
inconspcuo. Ocasionais clulas com ncleo excntrico,
citoplasma abundante e com um nico e grande vacolo
(clulas em anel de sinete) foram observadas. Em mlti-
plas reas dos ndulos havia corpos de psammoma no
interstcio (Fig.2). Mitoses eram pouco frequentes. Em ex-
tensas reas do pulmo havia espessamento dos septos
alveolares por macrfagos e tecido conjuntivo (Fig.3). Gran-
de quantidade de fluido proteinceo, associado com fibrina
e neutrfilos ntegros, era visto no interior dos alvolos.
Na reao com o PAS foi observada marcao positiva
no citoplasma de numerosas clulas neoplsicas, o que per-
mitiu interpretar essas clulas como secretoras de mucina.
Nas clulas em anel de sinete o vacolo observado na HE
reagia fortemente com o PAS (Fig.4). Nas reaes com
tricrmico de Masson houve marcao de extensas reas
de colgeno, demonstrando a marcada fibrose (desmopla-
sia).
Todas as clulas neoplsicas demonstraram forte e uni-
forme imunorreatividade citoplasmtica para pancitoceratina
(Fig.5). Na avaliao para vimentina, a expresso foi nega-
tiva nas clulas neoplsicas e positiva no tecido conjuntivo
associado ao neoplasma. As seces testadas com anti-
Fig.1. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. As clulas neo-
plsicas esto arranjadas em alvolos, que, por vezes, pro-
jetam-se como papilas, e so sustentadas por escasso es-
troma fibrovascular. Observe que o padro pulmonar pr-
existente foi preservado. HE, obj.10x.
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Fig.2. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. Material anfof-

lico e radiado no interstcio pulmonar (corpos de psammo-
ma). Observe que a direita h trs outros corpos menores
coalescendo no interior de um alvolo. HE, obj.40x.

Fig.4. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. Clulas ricas

em mucina fortemente marcadas pela reao com o cido
peridico de Schiff. PAS, obj.40x.

Fig.6. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. Foco de mar-

cao positiva para o fator 1 de transcrio da tireide em
uma juno bronquolo-alveolar neoplsica. A marcao
apenas nuclear. Imuno-histoqumica, mtodo da estrepta-
vidina-biotina-peroxidase, contra-colorao com hemato-
xilina de Harris, obj.40x.
2
Fig.3. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. No interstcio,
h deposio de tecido conjuntivo fibroso e acentuado
infiltrado inflamatrio constitudo principalmente por ma-
crfagos. HE, obj.40x.

Fig.5. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. Marcao forte

e uniforme para pancitoceratina no citoplasma das clulas
neoplsicas. Imuno-histoqumica, mtodo da estreptavidi-
na-biotina-peroxidase, contra-colorao com hematoxilina
de Harris, obj.20x.

protena S-100 e anti-cromogranina A foram negativas. A

marcao para o TTF-1 foi observada em focos, principal-
mente nas clulas neoplsicas das margens dos ndulos,
marcando apenas o ncleo (Fig.6). Nas reas onde o
neoplasma era composto por clulas secretoras de mucina
no houve marcao para o TTF-1. Nas seces avaliadas
para surfactante A, a marcao foi observada em mltiplas
reas focais, tanto no citoplasma como na membrana cito-
plasmtica das clulas neoplsicas (Fig.7). Com base nes-
ses achados o diagnstico definitivo foi de carcinoma
6 bronquolo-alveolar difuso do tipo misto.

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Fig.7. Pulmo, carcinoma bronquolo-alveolar. Foco de mar-
cao positiva para apoprotena surfactante A em um alv-
olo neoplsico. A marcao apenas citoplasmtica.
Imuno-histoqumica, mtodo da estreptavidina-biotina-pe-
roxidase, contra-colorao com hematoxilina de Harris,
obj.40x.
DISCUSSO
As leses neoplsicas observadas no pulmo eram gra-
ves o suficiente para explicar a acentuada dispneia apre-
sentada por esta leoa e foram responsveis pelo atendi-
mento clnico ao qual o animal foi submetido. As extensas
reas de fibrose associadas ao tumor, possivelmente
induzidas pelas clulas neoplsicas, levaram a um diag-
nstico tentativo inicial de fibrose pulmonar idioptica felina
espontnea, descrita em gatos (Williams et al. 2004), mas
esse diagnstico foi posteriormente afastado em razo da
fibrose ser, neste caso, pouco significativa6.
A classificao dos tumores de pulmo em humanos e
animais baseada no stio de origem, no padro histolgi-
co ou na combinao desses (Wilson & Dungworth, 2002).
Neste caso, a avaliao histolgica foi compatvel com
carcinoma bronquolo-alveolar (CBA), uma vez que reve-
lou clulas neoplsicas com citoplasma abundante, que
foram PAS-positivas, e clulas com moderada quantidade
de citoplasma, que foram PAS-negativas, caracterizando
um CBA do tipo misto. O CBA um neoplasma originado
dos pneumcitos tipo II ou das clulas de Clara e o padro
misto tem sido descrito em outras espcies animais (Wil-
son & Dungworth, 2002).
O pulmo um dos principais stios de metstases de
neoplasmas no pulmonares, o que faz com que muitas
vezes seja difcil distinguir neoplasmas pulmonares pri-
mrios de metstases (Ramos-Vara et al. 2005). Estudos
imuno-histoqumicos em neoplasmas primrios de pulmo
so imprescindveis para posterior estabelecimento de pro-
6 Lminas dessa leso foram examinadas pelo Dr. Kurt Williams,
patologista norte-americano do Diagnostic Investigation, College of Veteri-
nary Medicine, Michigan State University, que descreveu a fibrose pul-
monar idioptica felina espontnea em gatos. O Dr. Williams afastou a
possibilidade se tratar dessa condio pela falta de fibrose significativa.
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tocolos seguros de diagnstico. Neste caso, a avaliao
inicial demonstrou imunomarcao positiva para pancito-
ceratina e negativa para vimentina nas clulas neoplsi-
cas, confirmando a origem epitelial do neoplasma em ques-
to. Para comprovar a origem primria pulmonar, foram
realizadas anlises para TTF-1 e apoprotena surfactante
A. O TTF-1 uma protena originalmente identificada nas
clulas foliculares da tireoide, mas tambm foi observada
nas clulas respiratrias e em reas do crebro em desen-
volvimento (Lau et al. 2002). O TTF-1 tem sido apontado
como um marcador altamente especfico em adenocarci-
nomas pulmonares de humanos e de ces (Lau et al. 2002,
Ramos-Vara et al. 2005). Na leoa deste relato, a marcao
para TTF-1 foi observada em focos na periferia dos ndu-
los pulmonares. Nos locais de acentuada necrose e infla-
mao a marcao foi fraca ou ausente. Nas reas com-
postas por clulas secretoras de mucina no foi observa-
do marcao. Em humanos tambm no h expresso para
esse anticorpo em CBA do tipo mucinoso (Lau et al. 2002).
Neste caso, a marcao para TTF-1 foi superior a marca-
o para apoprotena surfactante A, essa observao foi
constatada tambm em humanos, no qual apenas 57%
dos CBA foram positivos para apoprotena surfactante A
contra 71% de positividade nos casos testados para TTF-
1 (Kaufmann & Dietel 2000). A marcao negativa nas
seces testadas com cromogranina A serviu para excluir
a possibilidade de tratar-se de tumor neuroendcrino ou de
metstases de neoplasmas endcrinos.
CONCLUSES
No nosso conhecimento, esta a primeira descrio
de neoplasma pulmonar primrio maligno em leo-africa-
no.
O neoplasma comprometeu acentuadamente o parn-
quima pulmonar e foi responsvel por um quadro respira-
trio grave.
De acordo com a distribuio e padro histolgico, o
neoplasma foi classificado como carcinoma bronquolo-
alveolar difuso do tipo misto.
A origem pulmonar foi confirmada atravs da tcnica
de imuno-histoqumica (positiva para pancitoceratina, TTF-
1 e apoprotena surfactante A) e o padro histolgico foi
estabelecido atravs da HE e da histoqumica (padro misto
de reao ao PAS).
Agradecimentos.- Aos patologistas do Diagnostic Center for
Population and Animal Health, Michigan State University, Lansing, MI,
EUA, Ingeborg M. Langohr, Rebecca Smedleye e Kurt Williams, pela
disponibilidade em dar sua opinio acerca dos aspectos histopatolgi-
cos do caso aqui relatado.
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