CLASE 1: BIOQUMICA

TEMA: ENZIMAS

PONENTE: Dr Emilio Guija Poma

AUTOR: Medics Science

Las enzimas posibilitan la descripcin de diferentes patologas y permite explicar las

transformaciones que ocurren en los alimentos estos naturalmente se transforman
(maduran, se pudren..)

Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de acelerar
las reacciones qumicas sin modificar la energa de activacin.

a) Caractersticas de las enzimas :

Son de naturaleza proteica.

- No modifican el cambio de energa libre de la reaccin.
- Catalizan las reacciones sin modificar la Keq.
- No se consumen, ni se producen durante la reaccin.
- Altamente especficas
- Actan sobre un sustrato o un nmero limitado de estos
- Son activas en un estrecho rango de Ph y temperatura

b) Importancia de las enzimas:

- Sus niveles en muestras biolgicas se requieren como prueba auxiliar para
diagnosticar algunas enfermedades
- El conocimiento de su estructura es imprescindible para el diseo de nuevos
medicamentos

- Permite una ap ropiada comprensin de los procesosbioqumicos a nivel celular. -

Posibilita la descripcin de diversas patologas a nivel molecular.
 Permite explicar las transformaciones que ocurren en los alimentos.

c) Actividad enzimtica

Entonces podemos separar en dos grupos a las enzimas:

-Las que NO REQUIEREN COFACTOR: pueden actuar solas sin ningn problema

-LAS QUE REQUIEREN COFACTOR o CONJUGADAS: estas pueden ser de naturaleza

orgnica e inorgnica. Cuando una enzima necesita de cofactor la parte proteica se llama
APOENZIMA y la no proteica se denomina COFACTOR este a su vez puede ser de 2 tipos:

-Orgnico : in metlico (Mg, Zn, Cu, K, Na)

-Inorgnico: se denomina COENZIMA (NAD, NADP, ATP)

La coenzima puede ser denominada de 2 clases:

-Cosustrato: cuando la interaccin de la coenzima con la apoenzima es laxa (osea

interaccionan por un momento y luego se desligan, durante el da puede llegar a ligarse a
50 o 100 enzimas diferentes PERO naturalmente todas esas enzimas requieren ESE TIPO
DE COFACTOR no otro. Por ejemplo: el ADN puede trabajar con ezimas que catalizan SOLO
reacciones de xido reduccin)

Puede unirse a la Lactato deshidrogenasa y desligarse, unirse a la gliceraldehido 3 fosfato

y desligarse, unirse a la glucosa 6 fosfato deshidrogenasa . Y as sucesivamente.

-El grupo prosttico: es una molcula que se liga a una enzima y ya no se separa JAMS
hasta que la enzima es desintegrada. Por ejemplo el piridoxal fosfato que se une a una
descarboxilasa y no hay manera de desligarla, la unin es de tipo covalente y como
consecuencia no hay forma de desligarla de la enzima a menos que sea desintegrada
(hidrolizada)
 Aqu El color rojo nos muestra una subunidad (una cadena polipeptdica) otra en verde,
azul y amarillo osea es una protena o enzima tetramrica. Y esa parte de la enzima se
llama apoenzima. Y en este caso esta enzima no funciona si es que no esta unida al
cofactor que en este cao es el grupo HEMO, cuando este se une a la AOPENZIMA forma la
HOLOENZIMA.
Esta es la gliceraldehdo 3 fosfato y este es el sitio activo, es decir el lugar de la enzima que
liga al sustrato y lo trasforma en producto, es una interaccin laxa a travs de puentes de
hidrgeno (son como 8) de encaje tridimensional.
Vamos a hacer un poco de mecanismo de accin de enzimas, esta es la carboxipeptidasa A
(hay varios tipos, en el ser humano hay 2 A y B)

El sitio activo tiene un cofactor de tipo metlico Zn que esta estabilizado con una histidina
196 y el glutmico 72, lo que ingresa al sitio activo es un pptido que muestra el lado
carboxilo terminal que tiene un grupo amino terminal en un extremo y carboxilo terminal
en el otro extremo.

Entonces tenemos Arginina 145 que corresponde a la enzima que esta en las
inmediaciones del sitio activo, la tirosina 298, y varios enlace peptdicos que son
hidrolizados por la carboxipeptidasa A para ello requiere que el GRUPO FUNCIONAL DE LA
ENZIMA que es la arginina 145 a travs de puentes de hidrgeno interaccione con el grupo
carboxilo del sustrato. Por otro lado la tirosina 148 interacciona con puentes de hidrgeno
con el sustrato, de esta manera el sustrato queda estabilizado en el sitio activo, con el
siguiente propsito:

-Recordando qumica orgnica: el Zn es un compuesto bivalente positivo, aqu hay un

doble enlace del grupo carbonilo que significa que hay 4 electrones, al ingresar el pptido
en el sitio activo, lo que hace el Zn es sustraer ese par de electrones, los atrae por su carga
positiva y atrae el par electrnico del grupo carbonilo por lo que la otra parte queda
cargado negativamente yy el carbono queda cargado positivamente, en esas condiciones
(en la molcula de agua los tomos de hidrgeno forman un enlace covalente cuyo ngulo
es de 104, s fuera de 90 perdera su condicin de disolvente universal; lo que quiere
decir que uno de los extremos queda cargado positivamente y el otro negativamente, al
producirse el desplazamiento de este par de electrones; ENTONCES el agua puede realizar
un ataque al carbono y se produce una RUPTURA DEL ENLACE PEPTDICO ) y de esa
manera se libera la tirosina y el resto del pptido se desplaza fuera de la enzima. En
pocas palabras es el mecanismo de accin de la enzima.

Todo esto es para que comprendan que las enzimas son altamente especficas, aqu o
podra entrar otro compuesto como el glucgeno, fructosa .

d) COENZIMAS

Son compuestos de naturaleza no proteica que requieren ciertas enzimas para ejercer
accin cataltica.

Caractersticas
Tienen bajo peso molecular.
Son termoestables.
Se unen a la enzima en el sitio activo con diferente fuerza de interaccin.
La especificidad de la reaccin en las que intervienen depende de la apoenzima.
Varias vitaminas ejercen su accin biolgica actuando como coenzimas.

Varias vitaminas del complejo B ejercen su accin biolgica trasformndose en

coenzimas

En el caso del CLORHIDRATO DE TIAMINA cuando se absorbe a nivel intestinal se convirte

en pirofosfato de tiamina y esta es una enzima.
La vitamina B6 se convierte en piridoxal fosfato que es un grupo prosttico (mediante
enlace covalente, manera fuerte no se desliga) que se une a enzimas como las
descarboxilasas que requieren para ser activas a este piridoxal y este se une al sitio activo

Actividad enzimtica

Bajo condiciones apropiadas, la velocidad es proporcional a la concentracin de

enzima.
La actividad (o eficiencia cataltica) se mide determinando la velocidad de:
-Formacin de producto: la enzima acta sobre un sustrato y nos da un producto que en
el laboratorio se trata que se coloree y as podamos medir su concentracin y de acuerdo
ver la eficiencia de catalizacin
-Consumo de sustrato: cuanto sustrato consumi pero es menos preciso.
-Trasformacin del cofactor: como el NAD cuando se convierte a NADH absorbe a 340nm
si no se trasforma no hay lectura, la intensidad de trasformacin incrementa la lectura en
el espectro fotmetro.

La unidad: es la cantidad de enzima que cataliza la formacin de 1 micromol de producto

por minuto, bajo condiciones definidas: Ph y temperatura principalmente.

e) Nmero de intercambio

Es el nmero de moles de sustrato trasformado por minuto por mol de enzima bajo
condiciones ptimas.
El valor para la anhidrasa carbnica es de 36 000 000 de molculas por sustrato
trasformados en un minuto por un mol de la enzima. Osea es muy elevada.

f) Sitio activo

- Lugar que le permite a la enzima ligarse al sustrato.

 - Su conformacin es complementaria o se torna complementaria al sustrato ,
solamente cuando el sustrato se liga a este sitio es trasformado a producto. Puede
darse el caso que el sitio activo o sea COMPLEMENTARIO Al sustrato-> cambia de
conformacin cuando se aproximan.
- Tiene una disposicin tridimensional cuyos grupos R de los aminocidos
interactan con el sustrato.
- Generalmente las enzimas son de mayor tamao que sus sustratos. Aunque
tambin puede ocurrir lo inverso
- En el sitio activo existen de 15 a 20 aminocidos pero solamente 2 o 3 participan
en catlisis.
- La combinacin de enzima y sustrato implica una interaccin a travs de por lo
menos 3 puntos (lo que explica la especificidad de las enzimas)

g) Especificidad enzimtica (PRINCIPAL CARACTERSTICA DE LAS ENZIMAS)

Que es lo que determina la especificidad?

1 : grupos funcionales de la enzima
2: grupos funcionales del sustrato (grupos carboxilos y amino
3 cofactores (Zn)
4 proximidad fsica (distancia de los enlaces)

*** Cuando el sustrato ingresa al sitio activo (relacionado al encaje) como aveces no
encaja perfectamente sino se torna complementario. Se puede producir:
-Encaje inducido: el ingreso del sustrato modifica la conformacin del sitio activo y este se
orna complementario al sustrato
- Si se gira la molcula no hay catlisis.

Permite que se conciba un metabolismo ordenado. Ya que las molculas de agua no son
estticas estn en constante movimiento como consecuencia de la energa del medio.

Presenta diversos grados:

-Muy elevada especificidad como la renina que hidroliza UN enlace peptdico de la

casena de la leche; la tripsina solo los enlaces lisina o arginina

-Alta especificidad(actan sobre determinados sustratos como la fosfatasa cida de bajo

peso molecular alta especificidad con el paranitrofenil fosfato)

-Relativamente especfica fosfatasa cida de la escherchia coli

-Especficas para su primer sustrato pero inespecfica para el 2. Por ejemplo la alcohol
deshidrogenasa acta sobre etanol pero para actuar requiere al NAD. El etanol lo
convierte en acetaldehdo y el NAD en NADH. Tambien acta sobre el propanol, butanol,
pentanol, hexanol, heptanol. Es inespecfica para un primer sustrato y especfica para el
cosustrato en este caso el NAD

-Estereoespecficas, pueden diferenciar de forma L (levgiro) de D (dextrgiro), la lactato

deshidrogenasa puede actuar sobre la L- lactato pero no del D-lactato . Igualmente este
proceso es reversible Si a la enzima le agregan piruvato con NADH esta enzima va a formar
L-lactato.

h) Estereoespecificidad

Si el sustrato tienen un carbono asimtrico, la enzima solamente acta sobre uno de los
ismeros pticos. Esta especificidad parece absoluta. Cuando el sustrato es una molcula
simtrica y el producto contiene un carbono asimtrico siempre se produce un ismero
ptico.
El R- enantiomero puede actuar a travs de 3 puntos con una enzima, en cambio el
enantiomero S la reaccin no ocurre por la alta especificidad

i) Enzimas interconvertibles

Son aquellas que existen por lo menos en 2 formas bien definidas

La conversin de una forma en otra ocurre por modificacin covalente de las cadenas
laterales de los aminocidos en condiciones biolgicas

No se consideran las modificaciones que ocurren durante la secuencia cataltica.

La fosforilasa b que participa en la degradacin de glucgeno por accin de la QUINASA

(todas las quinasas FOSFORILAN) y ATP -> se fosforila y cambia de nombre a fosorilsa A
que es activa por accin hormonal de reacciones en cascada.

La fosfatasa desfosforila la enzima y la inactiva

En el ayuno la b se convierte en a y ate las comidas al inverso

***Antes de concluir el siglo19 se saba que ocurran una serie de reacciones qumicas en
los seres vivos y eso ocurria por catalizadores fermentadores no se sabia su naturaleza,
recin se supo en 1925 cuando se purifico una enzima y en esa poca se dice que era de
naturaleza proteica pero en 1931 se purifico tripsina y quimotripsina y demostraron que
eran PROTEINAS

Hicieron el siguiente procedimiento: en 5 tubos de ensayo pusieron tampones a ph

enzima y concentraciones diferentes de sustrato y luego midieron a formacin de
producto en el tiempo y observaron que al AUMENTAR LA CONCENTRACIN DE
SUSTRATO, AUMENTABA LA VELOCIDAD DE LA REACCIN. Pero no aumentaba de manera
lineal (no era una recta sino una CURVA HIPERBLICA. Las siguientes hiptesis van a
tratar de explicar el por qu de este grfico

j) Hiptesis de Michaelis y Menten ( de aproximacin al equilibrio) 1913

-La enzima es un catalizador

-La enzima y el sustrato reaccionan rpidamente para formar un complejo ES. Luego se
descompone dando un producto.

-El ES limita la velocidad. Por ello el incremento e la concentracin de sustrato se llega a

la VELOCIDAD MXIMA

-Solamente un simple S y un simple complejo ES son los participantes en la reaccin

-El complejo ES se descompone en E+P

-E, S, y ES estn en equilibrio.

-La S es muy elevada en relacin a E de tal manera que la formacin del complejo ES no
altera a S

-La velocidad total de la reaccin esta liitada por la ruptura de ES para formar E + P

-La velocidad se mide durante los primeros momentos de la reaccin siendo la reaccin
inversa insignificante.
VELOCIDAD MXIMA: significa que si se sigue incrementando sustrato la velocidad ya no
sigue, llega a un tope.

La enzima reacciona con el sustrato, forman el cmplejo enzima sustrato y posteriormente

enzima + producto.

Constantes de velocidad K1 y K2
La flecha en un solo sentido indica que el proceso es irreversible y que enzima
sustrato y complejo enzima sustrato estn en EQUILIBRIO.
 O concetracion de sustrato con la cual SE ALCANZA la mitad de la velocidad
mxima

k) Hiptesis de Briggs y Haldane (Hiptesis del estado estable) 1925

-La velocidad de formacin del complejo ES es igual a la velocidad de
trasformacin de dicho complejo
-El complejo ES puede regenerar a los reactantes: enzima y sustrato o convertirse
en enzima y producto

** Cuando reacciona la enzima con el sustrato da como resultado ES.

SI no forma el complejo se describira una recta y no formara producto.
La reaccin es REVERSIBLE el producto (complejo enzima sustrato) reacciona y da
enzima +sustrato.

Ejm: se tiene un lavatorio con una rendija en la parte inferior por donde va el
agua, si se cubre con un tapn se cubre parcialmente, se abre el cao, el nivel
del agua sube (el agua representa la velocidad en la que se forma el complejo
enzima sustrato ) hasta cierto nivel hasta la rendija de seguridad. OSEA parte
del agua va por la rendija inferior y OTRA parte del agua va por la rendija de
seguridad, el nivel de agua es CONSTANTE.

La cantidad de agua que llega al laboratorio es igual a la cantidad de agua que

se va por la rendija inferior y superior.

Repitiendo: enzima + sustrato= complejo enzima sustrato velocidad con la que

forma producto + velocidad con que regenera sustrato.

Ecuacin de Lineweawer y Burk

Practicamente invierten la ecuacin y les da como resultado la grfica de una
RECTA
 ***Pendiente = Km /Vmax .

Km depende de la naturaleza del sustrato

** No olvidar: La velocidad mxima depende de la concentracin de enzima

Importancia del valor Km

Establece un valor aproximado de los niveles desustrato intracelular.

Permite comparar enzimas de diversas fuentes ( ya que Km es una constante fsica

como comparar el punto de ebullicin del agua, alcohol etlico, benceno etc, ya que al
igual que km el punto de ebullicin es una constante fsica
 Posibilita determinar la concentracin de sustrato necesario para medir la
concentracin de la enzima ( para ello debemos conocer el valor de Km y determinar la
actividad de una enzima X con un sustrato determinado. Por ejemplo el Km es 2x 10 -7 la
concentracin de sustrato que se va a utilizar para medir la actividad de esta enzima tiene
que ser 10 veces MAYOR QUE Km, entonces colocamos en el medio de reaccin 2x 10 -6)

** Para mediar la concentracin o la actividad de una enzima se usa una concentracin de

sustrato 10 veces mayor que Km, desaparecemos Km, simplificamos S y obtenemos que la
velocidad de la reaccin es igual a VELOCIDAD MXIMA y esta depende nuevamente de la
concentracin de la enzima
Se puede medir la concentracin de una enzima en velocidad mxima pero para
estandarizar se dice que una concentracin de sustrato 10 veces mayor que Km es 1x 10 -5
vamos a usar una concentracin de sustrato 1 x 10 -4 ( 1 menos).