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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

DEPARTAMENTO DE QUMICA

CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA

Luana Santos Almeida


Marcos Paulo Fernandes de Almeida
Marcelo de Frana Pinheiro
Marlia Santos Nunes

LIPDIOS

Professor: Andr Luis Bacelar Barreiros

So Cristvo 2013
1. OBJETIVOS

1.1 Objetivo Geral: Produzir sabo a partir da reao dos lipdios presentes no leo de soja
com uma soluo de potassa alcolica. Extrair a lecitina da gema do ovo, pelo tratamento com
acetona e clorofrmio e caracteriz-la pela adio de etanol e hidrxido de sdio.

1.2 Objetivos Especficos:


1.2.1 Comprovar a presena de sabo pelo abaixamento da tenso superficial;
1.2.2 Precipitar os cidos graxos pela adio de cido actico glacial;
1.2.3 Precipitar sabes de clcio pela adio de cloreto de clcio;
1.2.4 Precipitar sabo por excesso de eletrlitos, pela adio de soluo saturada de
cloreto de sdio;
1.2.5 Detectar a presena de fosfato por meio de uma soluo de molibdato de
amnio em cido sulfrico.
2.PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

2.1. FLUXOGRAMA DA CARACTERIZAO DO TRIACILGLICERIS

TUBO DE ENSAIO

15 gotas de leo

5,0 mL de soluo de potassa alcolica

3 prolas de vidro

AQUECER EM BANHO MARIA FERVENTE POR 30 MINUTOS

RESFRIAR

4,0 mL de gua destilada

SEPARAR IGUALMENTE EM QUATRO TUBOS

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

2.2. FLUXOGRAMA DOS TESTES EM CADA TUBO DE ENSAIO

TUBO DE ENSAIO 1
1,0 mL da soluo preparada

2,0 mL de gua destilada

AGITAR

OBSERVAR

TUBO DE ENSAIO 2

1,0 mL da soluo preparada

cido actico gota a gora

OBSERVAR
TUBO DE ENSAIO 3

1,0 mL da soluo preparada

Soluo de cloreto de clcio 10% gota a gota

OBSERVAR

TUBO DE ENSAIO 4
1,0 mL da soluo preparada

1,0 mL de soluo de cloreto de sdio

OBSERVAR

2.3. FLUXOGRAMA DA EXRAO DA LECITINA

BQUER de 250mL

1 gema de ovo

30 mL de acetona

MISTURAR

REPOUSAR POR 5 MINUTOS

FILTRAR A VCUO

FILTRADO SLIDO

DESPREZAR
BQUER de 250mL

slido da etapa anterior

20 mL de acetona

MISTURAR

REPETIR A FILTRAO A VCUO POR MAIS DUAS VEZES

FILTRADO SLIDO

DESPREZAR SECAR

BQUER DE 100 mL
precipitado seco

30 mL de CHCl3

AGITAR

FILTRAR

TUBO DE ENSAIO

EVAPORAR O CHCl3 EM BANHO-MARIA FERVENTE

LECITINA
2.4. FLUXOGRAMA DA CARACTERIZAO DA LECITINA

TUBO DE ENSAIO

Lecitina

10 mL de etanol

10 mL de hidrxido de sdio

AQUECER EM BANO-MARIA FERVENTE POR 15 MINUTOS - AGITAR

RESFRIAR

10mL de gua destilada

cido actico glacial at o pH cido

(cerca de 2,5 mL )

REAQUECER POR 1MIN

FILTRAR QUENTE

FILTRADO

LMINA

1 gota do filtrado

1 gota de Lugol

COBRIR

FREEZER POR 10MIN


TUBO DE ENSAIO

3,0 mL de filtrado

1,0 mL de molibdato de amnio em

cido sulfrico (25g/L HSO4 1,5 mol/L)

AQUEER EM BANHO-MARIA POR 5MIN

OBSERVAR PPT
3. MATERIAIS NECESSRIOS

3.1- Vidrarias
3.1.1 Balo de fundo redondo;

3.1.2 Bastes de vidro;

3.1.3 Bqueres de 250 mL;

3.1.4 Erlenmeyer de 250 mL;

3.1.5 Erlenmeyer de 500 mL;

3.1.6 Frasco de vidro pequeno;

3.1.7 Funil simples;

3.1.8 Funil de separao;

3.1.9 Kitassato;

3.1.10 Pipetas graduadas de 5 mL;

3.1.11 Pipeta graduada de 10 mL;

3.1.12 Pipetas Pasteur;

3.1.13 Proveta de 100 mL;

3.1.14 Tubos de ensaio;

3.1.15 Vidros de relgio.

3.2- Reagentes
3.2.1 gua destilada;

3.2.2 Acetona;

3.2.3 cido actico glacial;

3.2.4 cido sulfrico;

3.2.5 Cloreto de clcio;

3.2.6 Cloreto de sdio;


3.2.7 Etanol;

3.2.8 Gema de ovo;

3.2.9 Hidrxido de sdio 10%;

3.2.10 Molibdato de amnia;

3.2.11 leo de soja;

3.2.12 Reativo de Lugol;

3.2.13 Potassa alcolica;

3.2.14 Tricloro metano.

3.3- Diversos

3.3.1 Balana semi-analtica;

3.3.2 Banho-maria;

3.3.3 Bomba de vcuo;

3.3.4 Chapa aquecedora;

3.3.5 Conta-gotas;

3.3.6 Funil de Buchner;

3.3.7 Galeria para tubos de ensaio;

3.3.8 Papel de filtro;

3.3.9 Peras de suco;

3.3.10 Prolas de vidro;

3.3.11 Pina de madeira;

3.3.12 Pisseta;

3.3.13 Placa de aquecimento.

3.3.14 Bomba a vcuo


4- PROPRIEDADES FSICAS DAS SUBSTNCIAS UTILIZADAS

Tabela 1: Propriedades Fsicas

Substncias Frmula Massa Ponto Ponto de ndice de Densidade Solubilidade


molecular molar de fuso ebulio refrao (g.cm-3) (g/100 mL
(g/mol) (C) (C) (nD) H2O)

cido sulfrico H2SO4 98.08 10,38 279,6 1,33 1,8356 Miscvel

gua destilada H 2O 18.00 0 100 - 1,00 Miscvel

Acetona CH3COCH3 58,08 -95 56 - 0,79 Miscvel

Acido actico C2H4O2 60,04 16,05 118,1 - 1.049 g/cm3 Miscvel


glacial (l)
1.266 g/cm3
(s)

cido sulfrico H2SO4 98,08 10,38 279,6 - 1,8356 Miscvel

Cloreto de clcio CaCl2 110,98 772 1935 - 2,15 74,5

Coreto de sdio NaCl 58,443 801 1465 1.5442 2,165 35,6


(589 nm)

Etanol C2H6O 46.06 114.3 78.4 1,36 0,789 Miscvel

Gema de ovo - - - - - - -

Hidrxido de NaOH 39.997 322 1388 1.412 2.13 10025


sdio

Lecitina - - - - - - -

Lugol - - - - - 1,12 -

Molibdato de (NH4)6Mo7O24 1235,86 90 - - 2,498 Miscvel


amnia 4 H2O

Olho de soja - - - - - 0,93kg/dm3 -

Potassa alcolica KOH - - - - - -

Triacilglicerol C55H98O6 - - - - - -

Clorofrmio CHCl3 119,38 -63,5 61,2 1,4459 1.483 0,8


5. REAES OCORRIDAS

5.1 TRIACILGLICERIS

Figura 1: Reao de Saponificao

Figura 2: Precipitao de cidos graxos e de sabes de clcio

5.2 LECITINAS
Figura 3: Hidrlise bsica da Lecitina

6. RESULTADOS OBSERVADOS E DISCUSSO

6.1. TRIACILGLICERIS
Os lipdios so substncias insolveis em gua e solveis em solventes orgnicos apolares. Os
lipdios apresentam cidos graxos como componentes de sua estrutura, como por exemplo, os
presentes nas ceras, triacilgliceris e fosfolipdios. Estes compostos quando aquecidos em presena
de base forte sofrem hidrlise, produzindo sais de sdio ou potssio de cidos graxos, tambm
chamados de sabes, sendo denominados lipdios saponificveis. Os cidos graxos, tambm
chamados de sabes podem precipitar pela adio de cidos fracos como o actico, pois o cido
graxo insolvel em gua, ou pela adio de sais de clcio ou magnsio, pois estes formam sais
insolveis com os cidos graxos.

Para a realizao desta prtica, adicionou-se em um tubo grande, 15 gotas de leo de soja e
5,0 mL de soluo de potassa alcolica, aquecendo-se a mistura em banho-maria fervente por 30
minutos, sendo que para isso adicionou-se prolas de vidro afim de evitar a ebulio repentina. Aps
os 30 minutos resfriou-se o tubo, ver imagem 1:
Imagem 1: Tubo de ensaio sendo aquecidos

Aps a diluio transferiu-se volumes iguais para 4 tubos de ensaio e realizou-se em cada
tubo os seguintes testes:

Tubo 1- Abaixamento da tenso superficial

Ao adicionar 2,0 mL de gua no tubo 01 contendo os sais potssio de cidos graxos e


agitar houve uma formao de espuma, indicando a presena de sabo e
consequentemente o abaixamento da tenso superficial da gua. Isto explica pelo fato
de que as caldas apolares das molculas dos sais de cidos graxos tem tenso
superficial baixa, quando colocados em gua conduzem o abaixamento da tenso
superficial da gua, com demonstra o esquema 1 e a imagem 2.
Imagem 2: formao da espuma

Esquema 1: demonstra o fenmeno que ocorre para o abaixamento da tenso


superficial.


MAIOR TENSO
MENOR TENSO
SUPERFICIAL SAIS DE CIDOS
SUPERFICIAL GRAXOS

Polar
MEIO AQUOSO
GUA GUA
HIDRFILA
LIPFICA

Tubo 02: Precipitao de cidos graxos


Ao adicionar algumas gotas de acido actico glacial na soluo de sais de cidos
graxos, at uma total eliminao do precipitado branco e recuperao dos cidos
graxos livres e acetato de sdio na soluo.
Imagem 3: Teste de precipitao de cidos graxos

Tubo 03: precipitao se sabes de clcio


A maioria dos sabes constitudos com sais de potssio so solveis em gua, ao tratar
com CaCl2 torna-se insolveis em gua, caracterizado pelo aparecimento de um
precipitado branco consistente, que indica a formao de sabo de clcio.. Os sais de
clcio( Ca2+) formados a partir da reao com os cidos graxos com cloreto de Clcio
so insolveis em gua. Os sabes de clcio, so denominados sabes metlicos, os
quais fornecem consistncia aos leos para formar graxa. Ver imagem 4:

Imagem 4: Precipitao de sabes de clcio

Tubo 04: Precipitao de sabo por excesso de eletrlitos


Ao adicionar soluo saturada de cloreto de sdio em proporo igual soluo de
sais de potssio de cidos graxos, ocorre o efeito salting-out. Ocorre quando o sal ao
dissolvido em gua, apresenta-se quase que totalmente dissolvidos na forma de
ctions e nions. A interao entre os eletrlitos do sal e as molculas da gua, altera a
solubilidade dos sais de cidos graxos. Assim, sendo responsvel pela precipitao do
sabo.

Imagem 5: Precipitao do sabo por excesso de eletrlitos

6.2. LECITINAS
As lecitinas so uma classe de fosfolipdios constituda de dois cidos graxos, glicerol e
cido fosfrico, unidos a um lcool aminado (colina). Uma das fontes de lecitina presente em nossa
alimentao a gema do ovo, podendo ser extrada desta por tratamento com acetona e em seguida
clorofrmio. Sendo que a hidrlise bsica da lecitina libera sais de cidos graxos (sabes), glicerol,
fosfato e colina.

Extrao: a fim de extrair a lecitina, colocou-se uma gema de ovo num bcquer de 250 mL e
adicionou-se 30 mL de acetona, misturou-se fortemente com um basto de vidro e deixou em
repouso por 5 minutos. A acetona desnatura as protenas e tambm extrai os pigmentos presente na
gema, alm de outros lipdios presentes, com exceo dos fosfolipdios, no caso a lecitina. Filtrou-se
ento esta mistura a vcuo, para remover a acetona, juntamente com as substncias que ela extraiu. A
lecitina no extrada com a acetona porque apresenta uma polaridade diferente, para se obter uma
extrao mais eficiente adicionou-se a acetona ao precipitado mais duas vezes mas agora com 20 mL
onde observou que a cada extrao o precipitado ficava mais esbranquiado devido a remoo dos
pigmentos da gema, restando no precipitado a protena desnaturada e a lecitina, descartando-se o
sobrenadante. Aps a ltima filtrao, espalhou-se o precitado no papel de filtro com o auxlio de um
basto de vidro, para que este secasse mais rapidamente. Transferiu-se ento o precipitado seco para
um bquer de 100 mL, ao qual se adicionou 20 mL de clorofrmio e agitou-se bem, a funo deste
extrair a lecitina, restando no filtrado apenas a protena desnaturada. Filtrou-se ento a mistura em
filtrao comum, usando papel de filtro pregueado, recolheu-se o filtrado em um tubo de ensaio
grande, sendo que este agora a parte de interesse, pois nele que se encontra a lecitina. Para se
obter uma extrao mais eficiente adicionou-se mais 10 mL de clorofrmio ao precipitado, sendo que
aps a filtrao este foi desprezado e o CHCl3 evaporado em banho-maria, restando um lquido
oleoso, que a lecitina parcialmente pura, como apresentado nas imagens 6 e 7:

Imagem 6: filtraco restando lecitina


Imagem 7: Lecitina parcialmente pura

Caracterizao: Para confirmar se o lquido obtido era a lecitina, o mesmo foi colocado em contato
com etanol e NaOH, levados a aquecimento em banho-maria, para que a molcula de lecitina quebrasse em
glicerol, sabo, colina, e fosfato de sdio. Assim, foram realizados testes para identificar a presena de colina
e fosfato de sdio. Adicionou-se ento 10 mL de etanol a lecitina obtida, para melhorar a solubilidade
do lipdio. Adicionou-se em seguida 10 mL de NaOH 10 mol/L, sendo observado a formao de duas
fases, evidenciando a ocorrncia da reao de hidrlise (saponificao), formando sabo, glicerol,
fosfato e colina. Aqueceu-se em banho-maria por 15 minutos para uma melhor separao das fases, a
fase de cima era sabo, foi descartada, a fase de baixo foi extrada para um bquer com o auxilio de
uma pipeta, sendo em seguida diluda com 10 mL de gua. Adicionou-se ento cido actico glacial,
com a finalidade de precipitar os cidos graxos, reaqueceu-se por 1 minuto, filtrou-se ainda quente e
observou-se o precipitado, ou seja, os cidos graxos que ficaram retidos no papel. Ver imagens 8 e 9:
Imagem 8: Lquido obtido com a extrao de lecitina depois da
adio de etanol em banho-maria fervente.

Imagem 9: Filtrado cotendo colina, fosfato e glicerol

O filtrado contm colina, fosfato e glicerol. Para detectar a colina, pingou-se 1 gota do filtrado
num vidro de relgio pequeno e sobre estebcolocou-se 1 gota de lugol, e levou-se ao freezer por 10
minutos. A presena de cristais o que confirma a positividade para a presena da colina. Pode ter ocorrido
erro na execuo da prtica ou ter utilizado materiais inadequados para a realizao da mesma, ou ainda a
temperatura do freezer ser inadequada, no foi possvel observar os cristais. Observar imagem 10:

Imagem 10: Observao dos cristais

Para detectar a presena de fosfato, colocou-se 3,0 mL do filtrado num tubo de ensaio e
adicionou-se 1,0 mL de soluo de molibdato de amnio em cido sulfrico, aqueceu-se em banho-
maria por 5 minutos com a finalidade de se observar a formao do fosfomolibdato de amnio que
um precipitado amarelo, como apresentado na imagem 11:

Imagem 11: Teste para detectar a presena de fosfato

7. CONCLUSO

Atravs das reaes de saponificaes conclumos que no leo de soja contm cidos graxos.
Com teste simples de precipitao observamos a formao de sabo de clcio e potssio.

Ocorreram erros que comprometeram o resultado de alguns experimentos, esses erros podem
ser atribudos tanto a falta de ateno na execuo do experimento e tambm a condio dos
materiais usados.

Por meio da prtica foi possvel extrair a lecitina presente na gema do ovo, assim como
identificar alguns produtos presentes na hidrolise da mesma, como, por exemplo, os cidos graxos,
fosfato e glicerol; entretanto houve dificuldades na deteco da colina (lcool aminado), que se
caracteriza pela formao de cristais, provavelmente em virtude de posteriores erros experimentais
como, por exemplo, o tempo que a amostra levou no freezer que pode ter sido insuficiente para a
eventual formao dos cristais.
8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BARREIROS, A. L. B. S. Roteiro de aulas prticas: Qumica de Biomolculas. Universidade


Federal de Sergipe. So Cristvo, 2012.2.

BARREIROS, A. L. B. S.; BARREIROS, M. L. Qumica de Biomolculas. So Cristvo:


Universidade Federal de Sergipe, CESAD, 2012.

BRUICE, P. Y. Qumica Orgnica. 4 Edio, volume 2. So Paulo: Pearson Prentice Hall,


2006.
Departamento de Bioqumica-UFPR. Bioqumica: Aulas prticas. 7 edio. Editora UFPR,
2008.

SANTOS,P.C.P.; BOCK, P. M. Manual prtico de bioqumica.1 Edio. Porto Alegre:


Editora Universitrio Metodista IPA, 2008.
SOLOMONS, T.W.G.,FRYHLE, C. B. Qumica orgnica. 9 Edio, vol. 2. Rio de Janeiro:
LTC Editora, 2009.
PETKOWICZ, C. L. O., et al. Bioqumica: Aulas prticas. Departamento de Bioqumica-
UFPR.7 Edio. Curitiba: Editora UFPR,2007.