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GNERO CRYPTOCOCCUS

O gnero Cryptococcus foi descrito pela primeira vez em 1894 por Francesco Sanfelice, quando
isolada de suco de pssego. Na poca ele fez inoculao em ces, em galinhas, porquinhos da India
e verificou tumores semelhantes a sarcoma, chamando Saccharomyces neoformans. Nesse mesmo
ano, tiveram dois outros pesquisadores, Otto Busse e Abraham Buschke, onde o primeiro isolou da
tbia de humanos leveduras que apresentavam cpsulas, e o denominou Saccharomycosis hominis,
e o estudou esses mesmo caso, e verificou formas semelhantes a coccdios.

Ferdinand Curtis (1895) verificou o 2 caso de criptococose em humanos, denominando de


Saccharomyces subcutaneous tumefaciens. O termo cryptococcus deriva do grego kryptos que
remete aquilo que escondido, preso, secreto. Mais tarde, em 1901, Jean Paul Vuillemin,
denominou o mesmo organismo de Cryptococcus hominis.

Stoddard & Cutler em 1916, verificaram que em cortes histolgicos de tecidos parasitados
apresentavam reas claras ao redor. Incialmente acharam que essas reas eram devido a lise
tecidual, mudando o nome do microorganismo para Torula histolytica. Mais tarde, Freeman (1931)
percebeu que essas reas claras eram devido a contrao que a cpsula do microorganismo sofria
durante o processo de fixao do corte histolgico.

Rhoda Benham em 1935, estudou 22 leveduras, inclusive os isolados de Busse, Curtis e Sanfelice,
quanto fermentao, assimilao, morfologia colonial e sorologia. Isolados humanos pertenciam
provavelmente a uma nica espcie e aceitou a denominao Cryptococcus hominis. Mais tarde, o
nome da espcie foi mudado para Cryptococcus neoformans, onde o primeiro termo j termo j
havia sido criado por Ktzing em 1833 e o segundo foi em respeito a denominao dada por
Sanfelice ainda em 1894.

As principais espcies so C. neoformans e C. gattii, cujos correspondentes na forma teleomorfa


so, respectivamente, Filobasidiella neoformans e Filobasidiella bacillispora. Porm, antigamente,
a segunda espcie era considerada uma variedade do C. neoformans. Em 1999, Franzot et. al.
determinaram o Cryptococcus neoformans var neoformans sorotipo D e o Cryptococcus neoformans
var grubii sorotipo A. At ento, fazia-se a extrao de lquor para diagnstico, e atravs da tcnica
de nigrosina, verificava-se uma levedura esfrica e com cpsula, ligada principalmente a excretas de
pombo, sendo considerada como C. neformans somente, com diferentes sorotipos e variedades.
Hoje, entretanto, considera-se o primeiro como C. neoformans, com os sorotipos A, D, e, AD, e o
segundo como C. gattii, com os sorotipos B e C.

Os fatores que estimulam a fase sexual so:

Material vegetal de modo geral;


ons cobre;
Excretas avirias;
V8 (suco que leva a vrios vegetais);
Falta de nitrognio;
IAA (lcool actico indlico);
Inositol.

Fatores que inibem a reproduo sexuada:

Alto teor de CO2;

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gua (umidade);
Temperatura de 37C
Luz

Baseado na biologia molecular, foi possvel determinar ainda variedades dentro das espcies de
Cryptococcus. Conseguiram 8 tipo moleculares diferentes. O VN1 (variedade neoformans,
corresponderia ao sorotipo A, seria C. neformans da variedade Grubii). O VN2 a mesma coisa, pois
seria o sorotipo A. O VN3 seria um hibrido, o VN4 seria o serotipo D. O VG1 seria do sorotipo gati.
Abaixo mostrando quatro tipos moleculares de C. neoformans.

O aspecto morfolgico da colnia em meio Saboraud mucoide, incialmente branco, com


aspecto de doce de leite, podendo mudar para castanho mais tarde. Ocupa o espao que existe
entra a parede do tubo e o meio, quase como se escorregasse conforme crescesse. Quando
colocado em meio com compostos fenlicos, como a dopamina, cresce colnias marrons. Na
ausncia de dopamina, usa-se gar niger.
A diferenciao de C. neoformans C gattii ocorre atravs da assimilao do segundo a vrios
compostos como: nitrato, D-prolina, D-tritofano, cido mlico, cido fumrico, glicina. Alm disso,
o C. gattii tambm suporta canavanina, crescendo em sua presena. O C. neoformans no assimila
nenhuma das substncias citadas e tambm no cresce na presena de canavanina.
Com base no aspecto de crescimento com canavanina, foi criado um meio chamado CGB com
canavanina, glicina e azul de bromotimol, indicador de pH. Se o meio ficar azul, ento trata-se de C.
gattii; do contrrio, se no houver crescimento, trata-se de C. neoformans. A glicina serve como
fonte de carbono. Outra alternativa o GCP que contm glicina, cicloheximida e vermelho de fenol,
deixando o meio vermelho caso haja crescimento de colnia. Como o C. neoformans no cresce na
presena de cicloheximida e C. gattii cresce, possvel fazer a diferenciao. Entretanto, esse meio
no to confivel quanto o primeiro, uma vez que algumas cepas de C. neoformans so um pouco
resistentes a cicloheximida e podem crescer. A glicina, da mesma forma que o primeiro meio, serve
como fonte de carbono. Outro meio, pouco importante o CDBT (creatinina, dextrose, azul de
bromotimol, tiamina).

Do ponto de vista da epidemiologia, o C, neoformans tem sido fortemente associado a excretas


de pombo. Trabalhos recentes tm demonstrado sua presena de diferentes espcies de pssaros.
O fungo no patognico para as aves, principalmente devido a alta temperatura destas aves
(42C). Sua associao a excretas desses animais ocorre devido a sua capacidade assimilar a
creatinina, alm de outros componentes presentes na urina, como purinas, xantinas e cido rico,
os quais funcionam como fatores de crescimento. O C. neoformans pode ser encontrado em todas
as regies do mundo, predominando o sorotipo A. Os sorotipos D e C predominam nos EUA e
Colmbia.

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O C. gattii, por outro lado, vive em associao com plantas, tendo sido isolado de madeira em
decomposio, cavidade de rvores e, com relativa frequncia, de eucalipto. Acreditava-se, antes,
haver relao somente com reas tropicais e subtropicais. Hoje, cada vez mais evidente a
existncia de uma associao epidemiolgica entre eucaliptos (habitat do Cryptococcus) e
ocorrncia de infeces em seres humanos e em animais que vivem junto a essas arvores, como
o caso dos coalas na Austrlia. Aqui no Brasil, o eucalipto uma rvore extica. Como hoje muitas
espcies hibridizam, difcil saber qual espcie est associada ao Cryptococcus, e logo, so vrias
as espcies que apresentam esse microrganismo. Existem duas teorias sobre a associao do fungo
com o eucalipto:
Endoftico: o fungo estaria dentro dos vasos do vegetal, onde no momento da florao ele
sairia na forma basidisporos.

Epiftico: presenta na parte externa, como em cascos das rvores. Nestes ocorre a lignina, e
o fungo produz lignase. Por isso, pode ser a hiptese mais aceita.

As espcies de eucalipto associadas com o fungo so: Eucalyptus tereticornis, E. camaldulensis,


E. rudis, E. gomphocephala, E. blakelyi. Mais tarde foi isolado das espcies Cassia grandis, Ficus ,
Chapu de praia e outros. O Cryptococcus pode ser isolado ainda de gua de bebedouro, poleiro,
alimentos, e alguns insetos que entram em contato com as fezes (besouros e barata), solo
contaminado com fezes de aves, fezes de morcegos, poeira, principalmente dos portadores de HIV
(pois a criptococose o principal indicativo de HIV).

Fatores interferentes na presena de Cryptococcus:


- PH do material (fezes) em torno de 5,5 a 6,0
- Temperatura (acima de 39C nocivo)
- Presena de bactrias
- Presena de amebas
- Toxinas killer (toxinas produzida por leveduras que tem efeito deletrio sobre leveduras de outras
espcies) produzidas por Candida famata, C. parapsilosis e Pichia carsonii;

As formas de infeco podem ser:


Inalao de leveduras ou basidisporos.
Ingesto: causa criptococose gstrica.

No caso de mastite a via de infeco outra, que seria o canal da teta.


Embora o stio primrio de infeco por Cryptococcus seja o pulmo, a criptococose , sobretudo,
uma doena do sistema nervoso central, porque em um nmero considervel de indivduos
infectados o fungo, ao se disseminar, atinge as meninges. mais encontrada em pacientes
portadores de HIV. O fungo se instala no pulmo, acoplando-se no alvolo, desenvolve-se e alcana
a corrente sangunea, sendo carreado para o SNC. A via mais comum a inalao de partculas
contaminadas em suspenso no ar, sendo por leveduras ou basidisporos. As evidncias do pulmo
como primeira via de infeco so:
Isolamento do agente a partir do ar
Tamanho apropriado das partculas
Alguns pacientes apresentam leses nos pulmes
Isolamento do escarro
Pneumonia precedente meningite criptoccica
Existem cepas clnicas de C. neoformans geneticamente semelhantes a ambientais

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Instilao nasal e no espao retro-orbital em camundongos;
A distribuio no Brasil se d com prevalncia na regio Sudeste. Os maiores casos so em So
Paulo, Rio de Janeiro, Minas Gerais e Esprito Santo. Como essas regies recebem grande nmero
de imigrantes de outros estados, esses dados podem no ser muito corretos.

Os fatores predisponentes, principalmente para o C. neoformans:


Glicocorticoterapia;
Transplantes;
Sndromes de falncia dos rgos;
Diabetes mellitus;
Doenas reumatolgicas
Doenas pulmonares crnicas
Doenas hematolgicas malignas
Cncer
Desordens linfoproliferativas
Terapias imunossupressoras
HIV.

O C. gattii altamente virulento e no precisa que o sistema imune do hospedeiro esteja


debilitado. Apesar disso, mais dificilmente encontrado.
O animal domstico mais frequentemente acometido o gato. Por ser um animal caador de
pssaros, ele vai at seus ninhos, de localizao inacessvel a outros animais, e, dessa maneira, ele
se contamina com o fungo que eliminado junto com as fezes de certas aves, como o caso de
pombos. Por estar mais frequentemente no solo, tambm pode se contaminar. Apresentam leses
que chamam-se nariz de palhao, devido ao abaulamento que ocorre nessa regio.
Em condies ambientais de baixa umidade, a cpsula do Cryptococcus colapsa, protegendo o
fungo contra a desidratao. Assim, ele se apresenta como uma estrutura globosa, pequena o
bastante para atravessar s barreiras fsicas existentes na mucosa respiratria e chegar at os
alvolos pulmonares.
Os fatores de virulncia so:
Mating type : umas das clulas essncias para a fase sexual. mais virulento que a clula
A, e tambm predominante;
Calcineurina A e temperatura: o crescimento a 37C em atmosfera similar a 5% de CO2 e pH
7,3. A sobrevivncia a esta temperatura depende da calcineurina, enzima ativada por ons
de clcio.
Cpsula: quando pequena, no ambiente, compatvel com a deposio alveolar. Depois
que o fungo se desenvolve no organismo, a cpsula aumenta, dificultando a fagocitose,
atravs de estudos que envolvia a exciso do gene responsvel pela sua expresso.
constituda de cido glicurnico, xilose, manose, e protenas. O fatores que estimulam o
crescimento da cpsula so: baixo teor de ferro, soro sanguneo, CO2, ons de Ca+. Alto teor
de cloreto de sdio so fatores que inibem seu crescimento.

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Manitol: produzido pelo agente. Altas concentraes de Crytococcus no SNC leva ao edema,
diminuindo o edema e levando a remoo de radicais OH, aumento da resistncia do agente
ao estresse pelo calor e presso osmtica.
Melanognese: um fenmeno observado em cultivos de C. neoformans, quando se v a
formao de colnias de cor castanha a marrom-escura na superfcie de meios de cultura
adicionados a diidroxifenois (meio com dopamina). A difenoloxidase, que responsvel pela
melanognese, catalisa a conservao de DOPA a dopaquinona. Esta sofre um rearranjo a
dopacromo e este, inicialmente polimerizado a melanocromo e depois a melanina. Como
o crebro rico em catecolaminas, dopa, norepinefrina, todas as substancias que podem ser
utilizadas na melanognese, compreensvel que o rgo-alvo seja o SNC. Isso visvel
quando animais experimentais quando infectados com o fungo, apresentam o crebro
escuro.
Urease: estudos onde fez-se a retirada do gene responsvel pela expresso dessa enzima,
os fungos, quando inoculados em coelhos, no provocaram sua morte e os animais
sobreviveram.
Proteases e fosfolipases: so enzimas importantes na virulncia, onde a primeira faz a
degradao de protenas como as imunoglobulinas, e a segunda faz a degradao de
fosfolipdios, auxiliando o microrganismo a entrar nos tecidos. A deteco de proteases pode
ser feita pelo cultivo em gar para protease, que constitudo por um meio bsico
adicionado de soro de albumina bovina, com incubao a 32C por at 15 dias. O teste
positivo quando ocorre uma zona transparente ao redor da colnia.

Isolamento: depende de onde o material provm, ambiental ou de material clnico (lquor, swabs
nasais, lavados traqueais, bipsia de tecidos). Neste caso, usa-se meio Sabouraud dextrose a 4%
acrescido de cloranfenicol (100 mg/ litro), levando at meses para a colnia crescer. No caso se
isolado em meio com cicloheximida, pode ou no haver crescimento, dependendo da espcie, como
dito anteriormente. Para tanto, pode-se usar de meio DOPA (leva dopamina, asparagina, glicina,
creatinina, glutamina, sulfato de magnsio e sulfato de potssio) e gar nger.
Identificao: observa-se o aspecto da colnia, e na microscopia, clulas muitas vezes com
cpsula pequena. Alm disso, pode ser usado o auxanograma (assimilao de fontes carbonadas e
nitrogenadas) e zimograma (prova de fermentao), sabendo que o Cryptococcus no fermenta
acares. Por fim, pode ser feito a sorotipagem atravs de um kit Japons de alto custo. A prova da
urase positiva para Cryptococcus. Meios CGB e GCP, alm de gar Mycosel (que leva
cicloheximida).