FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS DE

RIBEIRO PRETO - USP

DEPARTAMENTO DE FSICA E QUMICA

DISCIPLINA DE BIOQUMICA

CURSO DE ODONTOLOGIA

Prticas de Bioqumica

Conceitos Gerais

Elaborao:
Profa. Dra. Yara Maria Lucisano Valim (Coordenao)
Profa. Dra. Ana Isabel de Assis Pandochi
Prof. Dr. Augusto Csar C. Spadaro
Profa. Dra. Carem Gledes Vargas Rechia
Prof. Dr. Carlos Curti
Dra. Luciana Mariko Kabeya
Dra. Daniela Trinca Bertazzi

2008
 2

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS DE
RIBEIRO PRETO

Reitora:
Profa. Dra. Suely Vilela

Vice-Reitor:
Prof. Dr. Franco Maria Lajolo

Diretor:
Prof. Dr. Augusto Csar C. Spadaro

Vice-Diretor:
Prof. Dr. Jairo Kenupp Bastos

DEPARTAMENTO DE FSICA E QUMICA

Chefe do Departamento:
Profa. Dra. Pierina Sueli Bonato

Suplente do Chefe do Departamento:

Profa. Dra. Glria Emlia Petto de Souza

Endereo:
Faculdade de Cincias Farmacuticas de Ribeiro Preto USP
Departamento de Fsica e Qumica Disciplina de Bioqumica
Via do Caf, S/N
14.040-903 - Ribeiro Preto - S.P. - Brasil
Fone: (16) 3602-4179
Fax: (16) 3602-4880
 3

SUMRIO
5
INTRODUO AO LABORATRIO ..........................................................
I. Recomendaes gerais ...............................................................
5
II. Antes do experimento ...............................................................
6
III. Durante o experimento ..............................................................
6
III.A. manuseio dos reagentes ......................................................
6
III.B. preparo de solues .........................................................
6
III.C. medida do volume de lquidos ................................ 7
III.D. aquecimento de lquidos em tubo de ensaio e chama de bico
Bunsen ................................................................
7
IV. Depois do experimento ..............................................................
7
V. Acidentes mais comuns em laboratrio e primeiros socorros ..........................
8
VI. Principais vidrarias e materiais utilizados nas aulas prticas .....................
9

PREPARO DE SOLUES ................................................................

11
I. Introduo ................................................................
11
II. Formas de expressar a concentrao das solues ................................
11
II.A. Molaridade ................................................................
11
II.B. Concentrao da soluo expressa em porcentagem ..............................
12
II.C. Partes por milho (ppm) ......................................................
13
III. Informaes sobre o reagente .......................................................
14
III.A. Porcentagem de pureza do reagente ................................
14
III.B. Densidade ................................................................
15
IV. Diluio de solues ...............................................................
15
IV.A. Frmula geral ................................................................
15
IV.B. Diferena entre diluio A:B e mistura na proporo A:B ......................
16
V. Medida do volume de solues .......................................................
18
VI. Procedimento geral para uso de pipetas ................................
19

TITULAO ..........................................................................
21
I. Definio de termos ................................................................
21
II. Preparo do titulante ...............................................................
21
III. Titulao cido-base ...............................................................
22

CAPACIDADE TAMPONANTE ..............................................................

26
I. Dissociao da gua ................................................................
26
II. Relao entre [H+] e [OH-] em solues aquosas e o valor do pH ......................
26
III. Teoria de Brnsted-Lowry para cidos e bases ................................
28
IV. Dissociao de cidos fracos .......................................................
29
V. Soluo tampo ................................................................
30
V.A. Aspectos gerais ...............................................................
30
V.B.. Como funciona uma soluo tampo ................................
31
V.C. A equao de Henderson-Hasselbach ................................
33
VI. Capacidade tamponante ..............................................................
33
VI.A. Aspectos gerais ..............................................................
33
VI.B. Capacidade tamponante da saliva ................................
34
VI.C. Clculo da capacidade tamponante ................................
34
VII. Resumo ................................................................
35
VII.A. Itens levados em considerao na elaborao de uma soluo 35
tampo ................................................................
 4

VII.B. Principias equaes citadas neste captulo ................................

35
VII.C. Regras matemticas envolvendo logartmos ................................
35
VIII. Exemplo de preparo de uma soluo tampo ................................
36

38
PROTENAS ..........................................................................
I. Introduo ................................................................
38
II. Reaes para aminocidos ...........................................................
39
III. Reaes para identificao de protenas ................................
39
IV. Separao de protenas por precipitao ................................
40
IV.A. Precipitao pelos reagentes de alcalides ................................
40
IV.B. Precipitao fracionada por solues salinas concentradas ....................
41

GLICDEOS ..........................................................................
42
I. Introduo ................................................................
42
II. Parte experimental ................................................................
44
II.A.Preparao da soluo de amido ................................ 44
II.B.Pesquisa de amido na soluo preparada ................................
44
II.C.Obteno de glicose a partir da soluo de amido preparada ....................
45
II.D. Caracterizao qumica dos glicdeos ................................
45
II.D.1.Reao com alfa-naftol (teste de Molisch) ...............................
45
II.D.2.Pesquisa de sacardeos redutores (reao de Benedict) ...................
46

LIPDEOS ...........................................................................
48
I. Introduo ................................................................
48
II. cidos graxos ................................................................
48
III. Propriedades gerais ................................................................
50
III.A. Solubilidade ................................................................
50
III.B. Saponificao ...............................................................
50
III.C. Propriedade dos sabes ......................................................
50

SALIVA .............................................................................
52
I. Introduo ................................................................
52
II. Estudo da atividade da amilase salivar ................................
53
II.A.Fatores que influenciam na atividade enzimtica ...............................
53
II.A.1.pH ................................................................
54
II.A.2.Temperatura .............................................................
54
II.A.3.Concentrao de substrato ................................54
II.A.4.Concentrao de enzima ..................................................
55
II.A.5.Presena dos cofatores e/ou coenzimas ................................
55
 5

INTRODUO AO LABORATRIO

O laboratrio um lugar privilegiado para a realizao de

experimentos, possuindo instalaes de gua, luz e gs de fcil acesso em
todas as bancadas. Possui ainda local especial para manipulao das
substncias txicas, denominado capela, que dispe de sistema prprio de
exausto de gases.
O laboratrio um local onde h um grande nmero de substncias
que possuem os mais variados nveis de toxicidade e periculosidade. Este
um local bastante vulnervel a acidentes, caso no se trabalhe com as
devidas precaues.
As regras gerais de segurana em laboratrio resultam de vrios
anos de esforos de pessoas preocupadas em tornar o trabalho no
laboratrio uma atividade segura, minimizando os riscos de acidentes.
Para tirar o mximo de proveito delas, necessrio que todos os usurios
as conheam e as pratiquem, desde o primeiro instante em que pretenderem
permanecer em um laboratrio. So regras simples, fceis de memorizar e
de seguir.

I. RECOMENDAES GERAIS

1. Tendo qualquer dvida solicite aos professores os devidos

esclarecimentos.
2. Comparea s aulas nos dias e nos laboratrios designados para sua
turma.
3. Lembre-se que o laboratrio um lugar para trabalhos srios e no
para experimentos ao acaso; portanto, evite brincadeiras que dispersem
a sua ateno e a de seus colegas.
4. Realize somente os experimentos indicados na aula. Nada, alm disso.
Voc no sabe avaliar o perigo e a abrangncia do procedimento
inocente que pretende fazer.
5. Vestimenta

Recomendada
Avental longo (at os joelhos)
Cala comprida
Sapato fechado
culos de segurana
Luvas de material adequado
Cabelo comprido preso
No recomendada
Bermuda ou short
Calado aberto (sandlia, chinelo)
Uso de lente de contato
Uso de braceletes, correntes ou
outros adereos
Cabelo comprido solto

6. No permitido no Laboratrio:
Fumar, comer e beber
Sentar no cho, sentar ou debruar na bancada
Correr
7. No deixar livros, blusas, etc., jogados nas bancadas; coloque-os
longe do local do experimento.
8. Quando houver quebra ou danos nos materiais ou aparelhos, comunique
aos professores.
9. Certifique-se da localizao dos itens de emergncia, principalmente:
chuveiro de emergncia, lava-olhos, extintores de incndio, sadas de
emergncia.
 6

II. ANTES DO EXPERIMENTO

1. Leia as prticas com antecedncia para obter melhor aproveitamento das

aulas.
2. Vista o avental (guarda-p, bata).
3. Organize o seu campo de trabalho.
4. Verifique se o material est em condio adequada para uso (no
utilize material de vidro trincado ou quebrado).

III. DURANTE O EXPERIMENTO

III.A. Manuseio dos reagentes

1. No troque os reagentes de uma bancada para outra.

2. Leia duas vezes o rtulo dos frascos de reativos, antes de utiliz-
los. Nunca utilize um reagente que no esteja identificado ou
rotulado.
3. No manuseie slidos e lquidos desconhecidos apenas por curiosidade.
4. Identifique imediatamente qualquer reagente ou soluo preparada.
5. Para evitar contaminao das solues:
- Antes de introduzir pipetas nas solues, certifique-se de que
esto limpas;
- Use sempre uma pipeta para cada reagente;
- No troque as rolhas ou tampas dos frascos dos reagentes;
- Nunca devolva a soluo para o frasco estoque;
- No use a mesma vidraria para medir substncias ou solues
diferentes.

6. Nunca teste amostras ou reagentes pelo sabor. No leve boca qualquer

reagente, nem mesmo o mais diludo.
7. Para verificar o odor da substncia, nunca leve o rosto diretamente
sobre o frasco. Os vapores devem ser abanados com uma das mos em
direo ao nariz, enquanto se segura o frasco com a outra mo.
8. No leve a mo boca ou aos olhos enquanto estiver manuseando
produtos qumicos ou biolgicos.
9. Reagentes volteis ou txicos devem ser manuseados na capela.
10.Nunca deixe ou abra frascos de lquidos inflamveis (ter, lcool,
acetona, benzeno, etc.), nas proximidades de chamas.
11.Para medir substncias corrosivas ou txicas, obturar a extremidade
superior da pipeta com um pouco de algodo, ou usar uma bureta, que
mais seguro.
12.Quando pipetar sangue, cido concentrado ou solues alcalinas
concentradas lavar imediatamente com gua o material utilizado.
13.No pipetar solues ou amostras com a boca, use pipetador ou pra de
suco.

III.B. Preparo de solues

1. Solues cidas: para preparar solues de cidos fortes (sulfrico,

clordrico, ntrico, etc), verter sempre o cido sobre a gua, nunca a
gua sobre o cido, porque provoca reao exotrmica violenta.

2. Solues alcalinas (NaOH, KOH, etc.): tome bastante precauo pois a

reao exotrmica e corrosiva. Mantenha o frasco em banho de gelo
 7

para evitar quebras. No aspirar os vapores desprendidos, usar a

capela). Acondicionar em frascos plsticos.

3. Solues alcolicas: o lcool e a gua devem ser medidos separadamente

e depois reunidos, porque h diminuio do volume total.

III.C. Medida do volume de lquidos

1. O lquido no interior da vidraria forma menisco. A leitura deve ser

feita na parte inferior do menisco, e na altura da linha dos olhos.
2. O material volumtrico vem calibrado com gua destilada a uma dada
o
temperatura, conforme vem registrado (15, 20, 25 C).
3. As pipetas volumtricas tm maior preciso que as graduadas, sendo
utilizadas para preparo de solues padres e molares.
4. Para uso das pipetas graduadas, observar o quadro abaixo:

para medir volumes entre usar pipeta de

0 e 1 mL 1 mL (graduada ao centsimo)
1 e 2 mL 2 mL (graduada ao centsimo)
2 e 5 mL 5 mL (graduada ao dcimo)
5 e 10 mL 10 mL (graduada ao dcimo)

Acima de 10 mL recomenda-se o uso de proveta ou bureta.

III.D. Aquecimento de lquidos em tubo de ensaio e chama de bico de

Bnsen

1. Para aquecer o tubo de ensaio na chama direta, no bico de Bnsen,

observe se o tubo est externamente seco, caso contrrio, seque o
mesmo antes de efetuar a operao.
2. Segure o tubo com o auxlio de pina adequada, de madeira ou metal, e
mantenha-o em constante agitao, em cima da chama e fora dela, para
que o aquecimento seja uniforme.
3. Dirigir a boca do tubo para o lado oposto ao seu, nunca em direo a
si mesmo ou ao colega, pois poder ocorrer um esguicho e com isto
atingi-lo.
4. Aquecer lentamente, sem permitir que a chama aquea o vidro na parte
sem lquido, para evitar o superaquecimento e a quebra do tubo.
5. Espere sempre que o vidro quente volte a esfriar antes de peg-lo.
Lembre-se, o vidro quente parece sempre estar frio.
6. Terminado o uso do bico de Bnsen, verifique se as torneiras do gs
esto bem fechadas, evitando assim exploses e intoxicaes.

IV. DEPOIS DO EXPERIMENTO

- Descartar os reagentes conforme recomendado em cada aula.

- Passe gua de torneira nos tubos e outros materiais utilizados e
deix-los em bacia na pia.
- As pipetas devem ser colocadas dentro das cubas.
 8

V. ACIDENTES MAIS COMUNS EM LABORATRIOS E PRIMEIROS SOCORROS

CORTES
- Lavar o ferimento em gua corrente abundante e em seguida comprimir
com ajuda de algodo/gaze.
- Sempre que possvel, elevar a parte ferida acima do nvel do corpo.

QUEIMADURAS

- Superficiais: quando atingem algumas camadas da pele.

- Profundas: quando h destruio total da pele.

A)QUEIMADURAS TRMICAS - causadas por calor seco (objetos aquecidos ou

chama)

A1) Tratamento para queimaduras leves - pomada picrato de butesina,

paraqueimol, furacim soluo, etc.
A2) Tratamento para queimaduras graves - elas devem ser cobertas com
gaze esterilizada umedecida com soluo aquosa de bicarbonato de
sdio a 1%, ou soro fisiolgico, encaminhar logo assistncia
mdica.

B) QUEIMADURAS QUMICAS - causadas por cidos, lcalis, fenol, etc.

B1) Por cidos: lavar imediatamente o local com gua em abundncia. Em

seguida, lavar com soluo de bicarbonato de sdio a 1% e,
novamente com gua. (ATENO: no caso de contato da pele com cido
sulfrico concentrado, primeiramente enxugue a regio com papel
absorvente, para somente depois lav-la com gua).
B2) Por lcalis: lavar a regio atingida imediatamente com gua. Tratar
com soluo de cido actico a 1% e, novamente com gua;
B3) Por fenol: lavar com lcool absoluto e, depois com sabo e gua;

ATENO: No retire corpos estranhos ou graxas das leses.

No fure as bolhas existentes.
No toque com as mos a rea atingida.
Procure atendimento mdico com brevidade.

C) QUEIMADURAS NOS OLHOS

Lavar os olhos com gua em abundncia ou, se possvel, com soro
fisiolgico, durante vrios minutos, e em seguida aplicar gaze
esterilizada embebida com soro fisiolgico, mantendo a compressa, at
atendimento mdico.

ENVENENAMENTO POR VIA ORAL

A) A droga no chegou a ser engolida: Deve-se cuspir imediatamente e

lavar a boca com muita gua. Levar o acidentado para respirar ar
puro.
B) A droga chegou a ser engolida: Deve-se chamar um mdico imediatamente.
Dar por via oral um antdoto, de acordo com a natureza do veneno.

INTOXICAO POR VIA RESPIRATRIA

Retirar o acidentado para um ambiente arejado, deixando-o descansar.

Dar gua fresca. Se recomendado, dar o antdoto adequado.
 9

"A CALMA E O BOM SENSO SO AS MELHORES PROTEES CONTRA ACIDENTES NO

LABORATRIO"

VI. Principais vidrarias e materiais utilizados nas aulas prticas

 10

Exemplos de utilizao dos materiais de laboratrio

 11

PREPARO DE SOLUES
I. INTRODUO

Soluo uma mistura homognea, constituda por dois ou mais

componentes por exemplo: gua salgada, gasolina, vinagre, ar. As solues
podem ser slidas, gasosas ou lquidas. As mais empregadas so as
solues lquidas aquosas (ou simplesmente solues aquosas), nas quais o
solvente a gua.
Uma soluo lquida consiste de duas partes: o material que foi
dissolvido (soluto) e um material lquido no qual este foi dissolvido
(solvente). Se dissolvssemos 1 g de cloreto de sdio e de acar em 100
g de gua, referir-nos-amos gua como solvente e ao NaCl e acar como
soluto. Pode-se pensar no solvente como o componente no qual as
partculas do soluto encontram-se dispersas ao acaso.
Dois outros termos bastante empregados quando se refere a solues
so: concentrado e diludo. So termos relativos e geralmente usados para
dar uma indicao qualitativa da concentrao de um soluto em uma
soluo. Assim, uma soluo concentrada de NaCl tem uma proporo maior
de NaCl do que uma soluo diluda de NaCl. A palavra concentrado
tambm empregada para especificar certas solues disponveis
comercialmente. Por exemplo, cido sulfrico concentrado se refere
soluo que fornecida pelos laboratrios fabricantes de produtos
qumicos, constituda de cerca de 95% de cido sulfrico e 5% de gua, em
massa.
A quantidade de soluto (em massa ou moles) contida no volume da
soluo, ou seja, a concentrao da soluo, pode ser expressa por
diferentes unidades de concentrao. As mais utilizadas em Bioqumica
so: mol/L, g/mL, ppm, %(m/v). Essas unidades descrevem de forma
quantitativa a composio de uma soluo.

II. FORMAS DE EXPRESSAR A CONCENTRAO DAS SOLUES

II.A. Molaridade
Molaridade (M) o nmero de moles do soluto (n) dissolvido por
litro de soluo. Ela calculada tomando-se a relao do nmero de moles
do soluto pelo volume da soluo em litros, e expressa em mol/L.

M (mol/L) = n sendo que n = massa (gramas)

V (litros) massa molecular (g/mol)
 12

Exemplo 1:
Um aluno dissolveu 8,70 g de NaCl (M.M. = 58 g/mol, pureza = 100%)
em gua destilada suficiente para preparar 100 mL de soluo. Qual
a molaridade da soluo?

a. Calcular o nmero de moles.

n = m = 8,70 g = 0,15 moles
M.M. 58 g/mol

b. Converter o volume para litros.

V = 100 mL = 0,1 L

c. Calcular a molaridade.
M = n = 0,15 moles = 1,5 mol/L
V 0,1 L

II.B. Concentrao da soluo expressa em porcentagem

Porcentagem em massa por volume (%m/v): indica a massa do soluto

(em gramas) presente em cada 100 mL de soluo. A unidade utilizada
o smbolo de porcentagem (%), que pode ser seguido pela notao
m/v (massa/volume).

% em massa/volume = massa do soluto (g) X 100

volume da soluo (mL)

Exemplos:
- soluo de dextrose a 5%(m/v) contm 5 g de dextrose em cada 100
mL de soluo.
- concentrao do soro fisiolgico: NaCl 0,9% ou NaCl 0,9%(m/v) [cada 100
mL de soluo contm 0,9 g de NaCl]

Porcentagem em massa (%m/m): indica a massa de soluto (em gramas)

presente em 100 g de soluo.

% em massa = massa do soluto (g) X 100

massa da soluo (g)

Exemplo: uma soluo de cido ntrico a 70%(m/m) contm 70 g de

cido ntrico em cada 100 g de soluo.

Porcentagem em volume (%v/v): indica o volume do soluto (em mL)

presente em cada 100 mL de soluo. usada para expressar a
concentrao de uma soluo que consiste de lquidos apenas.

% em volume = volume do soluto (mL) X 100

volume da soluo (mL)

Exemplo: uma soluo de formol a 10%(v/v) contm 10 mL de formol em

cada 100 mL de soluo.

Quando no houver anotao aps o smbolo de %, entende-se por

(massa / volume).
 13

II.C. Partes por milho (ppm)

Uma unidade empregada para expressar baixas concentraes ppm

(partes por milho). Mais recentemente, tem-se adotado a notao
microgramas por mililitro (g/mL). Uma parte por milho equivalente a 1
mg/L ou 1 g/KL. (ver converso de unidades no quadro 2, pgina 16)

Exemplo 2: Um frasco contm 200 mL de soluo de NaF a 0,5 mol/L.

Qual a concentrao da soluo de NaF em %(m/v) e em ppm? E qual a
concentrao do on Fluoreto em %(m/v) e em ppm? (massas atmicas:
Na = 23; F = 19).

* Concentrao da soluo: refere-se concentrao do sal (Na+F-)

a. Massa molecular do NaF.

M.M. = 23 + 19 = 42 g/mol

b. Nmero de moles de NaF contidos em 200 mL de soluo.

0,5 mol/L ____ 0,5 mol de NaF ___ 1000 mL de soluo
x ___ 200 mL de soluo
x = 0,1 mol de NaF

c. Massa do NaF em 200 mL de soluo.

1 mol NaF ___ 42 g
0,1 mol NaF ___ Y
y = 0,42 g de NaF

d. Concentrao em %(m/v): massa (g) em 100 mL de soluo.

0,42 g de NaF ___ 200 mL de soluo
z ___ 100 mL de soluo
z = 0,21 g de NaF
Portanto, a concentrao da soluo de NaF de 0,21% (m/v).

e. Concentrao em ppm (g/mL).

0,42 g de NaF ___ 200 mL de soluo
z ___ 1 mL de soluo
z = 0,0021 g de NaF

1 g ___ 1000000 g
0,0021g ___ w
W = 2100 g
Portanto, a concentrao da soluo de NaF 2100 g/mL ou 2100 ppm.

*Concentrao de flor: refere-se apenas concentrao do on F-.

a. Massa molecular do NaF.

M.M. = 23 + 19 = 42 g/mol

b. Nmero de moles de NaF contidos em 200 mL de soluo.

0,5 mol/L ____ 0,5 mol de NaF ___ 1000 mL de soluo
x ___ 200 mL de soluo
x = 0,1 mol de NaF
c. Massa do F em 200 mL de soluo.
1 mol NaF ___ 19 g de F
0,1 mol NaF ___ y
y = 0,19 g de F
 14

d. Concentrao em %(m/v): massa (g) em 100 mL de soluo.

0,19 g de F ___ 200 mL de soluo
Z ___ 100 mL de soluo
Z = 0,095 g de F
Portanto, a concentrao de F na soluo de 0,095% (m/v).

e. Concentrao em ppm (g/mL).

0,19 g de F ___ 200 mL de soluo
Z ___ 1 mL de soluo
Z = 0,00095 g de F

1 g ___ 1000000 g
0,00095g ___ w
W = 950 g
Portanto, a concentrao de F na soluo de 950 g/mL ou 950 ppm.

III. INFORMAES SOBRE O REAGENTE

III.A. Porcentagem de pureza do reagente

comum encontrar, no laboratrio, reagentes que no so 100% puros
contendo percentuais variados de outros componentes (geralmente indicado
no rtulo do frasco). A porcentagem de pureza de um reagente X, seja ele
slido ou lquido, refere-se massa do composto X (em gramas) contida em
100 gramas do reagente.
Exemplos de reagentes slidos: fluoreto de sdio, cloreto de
clcio, hidrxido de sdio, cido ctrico, glucose.
Exemplos de reagentes lquidos: cido sulfrico, cido clordrico,
dimetilsulfxido, dimetilformamida.

Pureza do reagente NaCl igual a 95%

REAGENTE
significa que cada 100 g do reagente contm
NaCl 95 g de NaCl
pureza: 95% 5g de impurezas

NaCl
impurezas

Exemplo 3:
Suponha que o reagente NaCl utilizado pelo aluno, no exemplo 1, era
de pureza igual a 80%. Qual a molaridade da soluo preparada?

a. Calcular a massa de NaCl contida no reagente pesado

80% de pureza: 100 g do reagente ____ 80 g de NaCl
8,70 g do reagente ____ x
x = 6,96 g de NaCl
b. Calcular o nmero de mols
n = m = 6,96 g = 0,12 mols
M.M. 58 g/mol

c. Converter o volume para litros

V = 100 mL = 0,1 L

d. Calcular a molaridade
M = n = 0,12 mols = 1,2 mol/L
V 0,1 L
 15

III.B. Densidade
Uma das propriedades que servem para caracterizar uma substncia
a sua densidade. Ela expressa a quantidade de matria contida em uma dada
unidade de volume.
Empregando unidades mtricas, as densidades dos slidos so
comumente expressas em unidades de gramas por centmetro cbico (g/cm3),
as dos gases em gramas por litro (g/L), e as dos lquidos em gramas por
mililitro (g/mL) ou quilogramas por litro (Kg/L).
Para os reagentes lquidos, a densidade indica a razo entre a
massa da soluo e o seu volume.
d = m
V

Os reagentes lquidos geralmente no podem ser pesados. Assim, para

preparar solues a partir de um reagente lquido fundamental conhecer
o valor da sua densidade, pois a partir dele obtm-se o valor do volume
do reagente a ser medido.

Exemplo 4:
Preparar 1 L de soluo de cido actico a 0,1 mol/L.
(d = 1,058 g/mL; M.M. = 60,05; pureza = 90%).

a. Calcular a massa terica de cido actico

1 mol de cido actico ____ 60,05 g
0,1 mol de cido actico ____ y
y = 6,0 g

b. Calcular a massa real de cido actico a ser utilizada no

preparo da soluo, considerando a porcentagem de pureza do
reagente.
90% de pureza: 100 g do reagente ____ 90 g de cido actico
z ____ 6,0 g de cido actico
z = 6,7 g do reagente

c. Calcular o volume do reagente a ser medido

d = m ou V = m = 6,7 g = 6,3 mL
V d 1,058 g/mL

d. Importante: seqncia de passos para preparar a soluo

1. Colocar no balo volumtrico cerca de 500 mL de gua destilada
2. Adicione o volume de cido calculado (6,3 mL)
3. Completar o volume para 1 litro com gua destilada

IV. DILUIO DE SOLUES

IV.A. Frmula geral

Solues aquosas so freqentemente preparadas por diluio, ou
seja, pela adio de gua a uma soluo mais concentrada, cuja
concentrao conhecida. Quando dilumos uma soluo, evitamos o ato de
pesar e dissolver a quantidade necessria de soluto. Visto que a
quantidade de soluto no se altera, uma equao simples permite calcular
a nova concentrao:

C1 x V1 = C2 x V2

C1 e V1 so os valores iniciais de molaridade e volume

C2 e V2 so os valores finais de molaridade e volume
 16

Ateno: as unidades de C1 e de C2 devem ser as mesmas, e as

unidades de V1 e V2 tambm devem ser as mesmas.

Exemplo 5: qual o volume de H2SO4 18 mol/L necessrio para preparar

500 mL de uma soluo a 0,15 mol/L?

C1 x V1 = C2 x V2
18 mol/L x V1 = 0,15 mol/L x 500 mL
V1 = 0,15 x 500
18
V1 = 4,2 mL

- Procedimento para diluio: em um frasco volumtrico de 500

mL, colocar um pouco de gua, pipetar 4,2 mL de H2SO4 18 mol/L
e completar para um volume final de 500 mL.

IV.B. Diferena entre diluio A:B e mistura na proporo A:B

Para descrever o procedimento de obteno de uma soluo de uma
determinada concentrao a partir da diluio de uma soluo de
concentrao maior, duas expresses comumente usadas so diluio A:B e
mistura na proporo A:B.
Ambas tm a mesma representao grfica (A:B), o que causa uma
certa confuso, mas significado qumico diferente (veja abaixo). Por
isso, deve-se prestar bastante ateno na palavra que antecede a notao
A:B.

* Diluio A:B
- Pegar um volume A e adicionar o solvente para obter o volume final B
- Volume final = B

* Mistura A:B
- Pegar um volume A e adicionar um volume B
- Volume final = A + B

Exemplo 6:
Uma aluna est no laboratrio preparando solues para avaliar a
atividade de enzimas salivares. Ela precisa de soluo aquosa de
NaCl na concentrao de 0,9%. Entretanto, ela no dispe do sal na
forma slida, apenas de solues de NaCl mais concentradas. Os
rtulos dos frascos contm informaes para diluio. Qual o
procedimento de obteno da soluo a 0,9%?
 17

Soluo A:
Concentrao: NaCl 3,6 %(m/v)
Instruo do rtulo: diluir 1:4 com gua para obter NaCl 0,9%
Procedimento para diluio:
- Pipetar 1 mL da soluo de NaCl 3,6%
- Transferir para uma proveta ou balo volumtrico
- Adicionar gua destilada at obter o volume de 4 mL
- Volume final: 4 mL

Soluo B:
Concentrao: NaCl 4,5 %(m/v)
Instruo do rtulo: misturar com gua na proporo 1:4 para
obter NaCl 0,9%
Procedimento para diluio:
- Pipetar 1 mL da soluo de NaCl 4,5%
- Transferir para uma proveta
- Adicionar 4 mL de gua destilada
- Volume final: 5 mL

Exemplo 7:
Considerando o exemplo 6: A aluna estava distrada, e inverteu os
procedimentos para preparar as solues. Quais as concentraes
finais das solues preparadas?

soluo A: NaCl 3,6 %(m/v) - ao invs de diluir 1:4 com gua, Maria
misturou com gua na proporo 1:4
CA x VA = CB x VB
3,6% x 1 mL = CB x 5 mL
CB = 0,72%

soluo B: NaCl 4,5%(m/v) - ao invs de misturar com gua na

proporo 1:4, Maria diluiu 1:4 com gua
CA x VA = CB x VB
4,5% x 1 mL = CB x 4 mL
CB = 1,13%

Exemplo 8:
O volume de soluo preparado pela aluna no exemplo 6 foi
insuficiente para o ensaio. Ela precisa preparar mais 100 mL de
NaCl 0,9%, partindo das solues A e B. Como ela deve proceder?

Soluo A:
Concentrao: NaCl 3,6 %(m/v)
Instruo do rtulo: diluir 1:4 com gua para obter NaCl 0,9%

C1 = 3,6% C2 = 0,9% V2 = 100 mL V1 = ?

Resoluo 1
C1 x V1 = C2 x V2
3,6% x V1 = 0,9% x 100 mL
V1 = 25 mL
 18

Resoluo 2
Diluir 1:4 ___ 1 mL NaCl __ 4 mL soluo
x __ 100 mL soluo
x = 25 mL NaCl

Procedimento para diluio:

- Medir 25 mL da soluo de NaCl 3,6% em pipeta ou proveta
- Transferir para uma proveta ou balo volumtrico
- Adicionar gua destilada at obter o volume de 100 mL

Soluo B:
Concentrao: NaCl 4,5 %(m/v)
Instruo do rtulo: misturar com gua na proporo 1:4 para
obter NaCl 0,9%

C1 = 4,5% C2 = 0,9% V2 = 100 mL V1 = ?

Resoluo 1
C1 x V1 = C2 x V2
4,5% x V1 = 0,9% x 100 mL
V1 = 20 mL

Resoluo 2
Misturar na proporo 1:4 ___ 1 mL NaCl __ 5 mL soluo
x __ 100 mL soluo
x = 20 mL NaCl

Procedimento para diluio:

- Medir 20 mL da soluo de NaCl 4,5% em pipeta ou proveta
- Transferir para uma proveta ou balo volumtrico
- Adicionar gua destilada at obter o volume de 100 mL

V. MEDIDA DO VOLUME DE SOLUES

Quando adicionamos solues aquosas em provetas, buretas e pipetas,

observamos que: a superfcie de separao entre o lquido e o ar no
plana, mas geralmente tem formato cncavo. Essa superfcie denominada
menisco. O mesmo pode tambm ser observado na poro alongada de um balo
volumtrico, quando completamos o volume da soluo. A leitura do volume
em tais vidrarias deve ser realizada na parte inferior do menisco.
 19

VI. PROCEDIMENTO GERAL PARA USO DE PIPETAS

Quando usar uma pipeta (graduada ou volumtrica), coloque um

pipetador adequado na parte superior do tubo de suco. Nunca use a boca
para encher as pipetas, e jamais coloque uma pipeta nos lbios, seja qual
for o lquido que esteja sendo medido.
1. Antes de medir o volume do lquido, lave a pipeta com uma pequena
quantidade do lquido.
2. Encha a pipeta com o lquido, levando-o at 1 a 2 cm acima da
marca da graduao.
3. Remova o pipetador, e coloque o dedo indicador para fechar a
extremidade superior da pipeta.
4. Com o auxlio de um papel absorvente, remova todo o lquido que
aderiu parte externa da haste inferior.
5. Mantenha a pipeta na posio vertical e a marca no nvel do seus
olhos.
6. Deixe o lquido escorrer lentamente at que a parte inferior do
menisco fique na posio correta.
7. Encoste a ponta da pipeta na parte interna do recipiente de
trabalho (proveta ou balo volumtrico), remova o dedo da parte
superior e deixe o lquido escoar.
8. Remova a pipeta e lave-a sob gua corrente ou conforme
recomendaes especficas.

Quadro 1. Resumo dos conceitos relacionados ao preparo de solues

Para uma soluo X

concentrao em molaridade: n. de mols do composto X / volume em litros
concentrao expressa em %
% massa/volume: massa em g do composto X em 100 mL de soluo
% massa: massa em g do composto X em 100 g de soluo
% volume: volume em mL do composto X em 100 mL de soluo
concentrao em ppm: 1 ppm = 1 g/mL = 1 mg/L = 1g/1000 L

Para um reagente Y
% de pureza do reagente Y
(slido ou lquido): massa em g do composto Y em cada 100 g de reagente
densidade (lquido): massa em g do composto Y / volume em mL

Diluio de solues
frmula geral: C1 x V1 = C2 x V2
(C1 e V1: valores iniciais; C2 e V2: valores finais)
diluio (A:B) : V1 = A ; V2 = B
mistura na proporo (A:B) : V1 = A ; V2 = A + B
 20

Quadro 2. Resumo de converses mtricas

Converses de massa Converses de volume

1 g = 0,001 Kg = 1 x 10-3 Kg 1 L = 0,001 KL = 1 x 10-3 KL

1 g = 1000 mg = 1 x 103 mg 1 L = 1000 ml = 1 x 103 mL
1 g = 1000000 g = 1 x 106 g 1 L = 1000000 L = 1 x 106 L

1 mg = 0,000001 Kg = 1 x 10-6 Kg 1 mL = 0,000001 KL = 1 x 10-6 KL

1 mg = 0,001 g = 1 x 10-3 g 1 mL = 0,001 L = 1 x 10-3 L
1 mg = 1000 g = 1 x 103 g 1 mL = 1000 L = 1 x 103 L

1 g = 0,000000001 Kg = 1 x 10-9 Kg 1 L = 0,000000001 KL = 1 x 10-9 KL

1 g = 0,000001 g = 1 x 10-6 g 1 L = 0,000001 L = 1 x 10-6 L
1 g = 0,001 mg = 1 x 10-3 mg 1 L = 0,001 mL = 1 x 10-3 mL
 21

TITULAO

I. DEFINIO DE TERMOS

Anlise titrimtrica: anlise qumica em que se determina o volume de uma

substncia de concentrao exatamente conhecida necessrio para reagir
com um volume definido de uma amostra. Anteriormente, era denominada
anlise volumtrica.

Titulante: soluo cuja concentrao exatamente conhecida, sendo tambm

chamada de soluo padro ou soluo padronizada. adicionado com o
auxlio da bureta.

Titulado: amostra (soluo de concentrao desconhecida).

Titulao: o nome da operao de adio do titulante ao titulado at

que a reao se complete.

Ponto estequiomtrico ou ponto de equivalncia: o volume exato do

titulante necessrio para reagir com toda a amostra.

Ponto final da titulao ou ponto de viragem: o momento em que o

titulante acabou de reagir com toda a amostra.

Indicador: um reagente auxiliar que permite identificar o ponto final

da titulao, geralmente por mudana de cor. adicionado na amostra,
antes do incio do procedimento.

bureta

titulante
garra
(soluo padronizada)
suporte
titulado universal
(amostra)
+ erlenmeyer
indicador

Figura 1. Esquema ilustrativo dos componentes de uma anlise titrimtrica.

II. PREPARO DO TITULANTE

Quando se dispe de um reagente com alto grau de pureza, fcil de

obter, purificar e secar, que no absorva umidade da atmosfera ou perca
umidade facilmente, a soluo do titulante pode ser preparada pesando-se
uma massa conhecida, dissolvendo o material em um solvente apropriado
(geralmente gua) e completando com solvente at um volume conhecido. O
titulante obtido por este procedimento tambm denominado soluo padro
primria ou padro primrio.
 22

Algumas substncias adequadas ao preparo de solues padres

primrias: carbonato de sdio, hidrogenoftalato de potssio, tetraborato
de sdio, hidrogenoiodato de potssio, oxalato de sdio, nitrato de
prata, cloreto de sdio, cloreto de potssio, iodato de potssio, iodo,
bromato de potssio, nitrato de chumbo, iodato de potssio.
Quando o reagente no est disponvel em pureza suficiente, como
ocorre com a maior parte dos hidrxidos bsicos, alguns cidos
inorgnicos e vrias substncias higroscpicas (que absorvem umidade
atmosfrica) ou deliqescentes (que perdem umidade facilmente), prepara-
se inicialmente uma soluo de molaridade prxima desejada. Em seguida,
esta soluo padronizada, isto , o valor exato da sua molaridade
determinado por titulao com um padro primrio. O titulante obtido por
este mtodo tambm denominado soluo padro secundria ou padro
secundrio.
Emprega-se este mtodo indireto, por exemplo, na preparao de
solues da maior parte dos cidos, hidrxido de sdio, hidrxido de
potssio, hidrxido de brio, permanganato de potssio, amnia,
tiocianato de potssio, tiossulfato de sdio.

III. TITULAO CIDO-BASE

A titulao cido-base envolve reaes de neutralizao, onde um

cido e uma base reagem, formando sal e gua. Este procedimento
utilizado para determinar a concentrao de uma soluo cida ou bsica.
HCl + NaOH NaCl + H2O

A determinao da concentrao de uma soluo bsica atravs da

adio de um cido padro denominada acidimetria. O oposto, ou seja, a
determinao da concentrao de uma soluo cida atravs da adio de
uma base chamada alcalimetria.
Na titulao de uma soluo de um cido de concentrao
desconhecida, um volume medido do cido adicionado a um erlenmeyer e
uma soluo de concentrao conhecida de base, adicionado com o auxlio
de uma bureta at que o ponto de equivalncia seja atingido. Este o
ponto no qual todos os ons H+ provenientes do cido foram neutralizados
pelos ons OH- provenientes da base, formando gua.
No procedimento mais simples, o ponto de equivalncia indicado
pela mudana de cor de um indicador adicionado antes do incio da
 23

titulao. Normalmente, o pH no ponto de equivalncia muda bruscamente

com a adio de volumes muito pequenos de titulante. Assim, uma ntida
mudana de cor fornece uma indicao clara do ponto de equivalncia.
Um indicador de pH um par conjugado de cido e base de Brnsted-
Lowry cujo cido apresenta uma colorao e a base outra. A maioria dos
indicadores so molculas orgnicas com estruturas relativamente
complexas. Portanto, usaremos simplesmente a abreviao HIn para
-
representar a forma cida e In a forma bsica conjugada de um indicador.
Assim, em soluo aquosa,

Indicador HIn + H2O In- + H3 O+

(forma cida) (forma bsica)

Fenolftalena pH cido pH bsico

incolor rosa

Como pode ser observado nesse equilbrio, o indicador existe na

forma cida em solues mais cidas e na forma bsica em solues menos
cidas, ou mais bsicas.
Em titulaes cido-base, o ponto de equivalncia no ocorre
necessariamente em pH 7,0. Isto significa que deve ser escolhido um
indicador adequado antes de ser iniciado o procedimento. Normalmente, o
pH aproximado no ponto de equivalncia pode ser previsto, desta forma o
problema se resume em escolher um indicador adequado para este pH.

Tabela 1. Exemplos de indicadores de pH e suas mudanas de colorao.

Indicador pK indicador intervalo de pH mudana de cor

aproximado para correspondente
mudana de cor
azul de bromofenol 3,8 3,0 4,6 amarelo para azul
vermelho de clorofenol 6,0 5,2 6,8 amarelo para vermelho
Fenolftalena 9,4 8,0 10,0 incolor para rosa
Timolftalena 10,0 9,4 10,6 incolor para azul
 24

NaOH

soluo do cido
+
fenolftalena

incio da titulao final da titulao

(incolor) (rosa)

Figura 2. Titulao de um cido com uma base, empregando fenolftalena como indicador.

Figura 3. Exemplos de curvas de titulao. A: cido forte-base forte (HCl/NaOH).

B: cido fraco-base forte (CH3COOH/NaOH).

EXEMPLO:
Suponha que voc queira determinar a concentrao de cido actico
numa amostra de vinagre atravs de titulao. O procedimento experimental
geral o seguinte:
1. Enchemos uma bureta com uma soluo de base de concentrao
conhecida, digamos NaOH 0,5 mol/L. A bureta nos permite dispensar
precisamente volumes variveis de soluo.
2. Em um erlenmeyer, colocamos um volume medido de vinagre, por exemplo:
10 mL, e adicionamos algumas gotas de soluo de um indicador de pH
apropriado,tal como fenolftalena.
 25

3. Depois adicionamos lentamente o titulante, contido na bureta, sobre a

amostra (vinagre) at que o indicador mude de cor. No se esquea de
manter a amostra sob agitao.
4. Assim que o indicador mudar de cor, fechamos a torneira da bureta.
Podemos ento ler o volume de base que foi adicionado. Suponha que
foram necessrios 17,1 mL de NaOH 0,5 mol/L para neutralizar o cido
actico do vinagre.
5. O clculo da concentrao de cido baseado na razo molar de cido
para base. Escrevemos a equao da reao:

CH3COOH + NaOH CH3COONa + H2O

CH3COO- + H+ + Na+ + OH- CH3COO-Na+ + H2O

Resoluo 1:
a. Inicialmente, calculamos o nmero de mols de NaOH contidos em
17,1 mL.
NaOH 0,5 mol/L __ 0,5 mol de NaOH ____ 1000 mL de soluo
x ____ 17,1 mL de soluo
x = 0,00855 mol de NaOH

b. Pela equao da reao, verificamos que cada mol de NaOH reage

com um mol de cido. A partir dessa relao, podemos calcular o
nmero de mols de cido actico contidos no volume titulado
(10 mL).
1 mol de NaOH ____ 1 moL de CH3COOH
0,00855 mol de NaOH ____ Y
y = 0,00855 mol de CH3COOH

c. No final, calculamos a concentrao do cido actico em mol/L.

0,00855 mol de CH3COOH ____ 10 mL de amostra
z ____ 1000 mL
z = 0,855 mol de CH3COOH

d. Portanto, a concentrao de cido actico na amostra de vinagre

0,855 mol/L.

Resoluo 2:
a. Como a reao envolve nmeros iguais de moles de cido e
base, podemos tambm obter a concentrao do cido actico no
vinagre de modo direto, utilizando a relao:
CA x VA = CB x VB
sendo:
CA e VA - concentrao e volume do cido
CB e VB - concentrao e volume da base

CA x VA = CB x VB
CA x 10 mL = 0,5 mol/L x 17,1 mL
CA = 0,855 mol/L

b. Portanto, a concentrao de cido actico na amostra de vinagre

0,855 mol/L.
 26

CAPACIDADE TAMPONANTE

I.DISSOCIAO DA GUA

A gua pura apresenta uma condutividade eltrica definida, como

conseqncia de sua habilidade de sofrer autodissociao. A dissociao
da gua pode ser escrita como:

H2 O H+ + OH-
ou como: H2O + H2O H3 O+ + OH-

Para esta dissociao, a condio de equilbrio pode ser escrita

como
[H+].[OH-] = K
[H2O]

ou como: [H3O+].[OH-] = K
[H2O]2

Em qualquer um dos casos, como a concentrao de molculas de H2O

essencialmente constante,
[H+].[OH-] = [H2O] . K = Kw

ou: [H3O+].[OH-] = [H2O]2 . K = Kw

O valor de Kw 1,0 x 10-14 a 25C. Kw a constante de dissociao

da gua, tambm chamada de produto inico da gua.

II. RELAO ENTRE [H+] e [OH-] EM SOLUES AQUOSAS E O VALOR DO pH

A equao [H+].[OH-] = Kw = 1 x 10-14 (a 25C) aplica-se no somente

gua pura, mas tambm s solues aquosas, nas quais as [H+] e de [OH-]
podem ser diferentes. Podemos afirmar, ento, que o produto da
concentrao de ons hidrognio e ons hidrxido em soluo aquosa uma
constante, e que temperatura ambiente (25C, usual em laboratrio)
igual aproximadamente 1 x 10-14. Se a [H+] ou a [OH-] for conhecida, a
outra poder ser calculada.

Exemplo 1:
Suponha que voc tem uma soluo de HCl 0,01 mol/L, que est
completamente dissociado em H+ e Cl-. Determinar a concentrao de
H+ e OH- na soluo.
HCl H+ + Cl-

Considerando-se que o cido est totalmente dissociado, ento [H+] =

[HCl] = 0,01 mol/L ou 1 x 10-2 mol/Le a [OH-] na soluo ser:

[H+].[OH-] = 1 x 10-14
1 x 10-2+.[OH-] = 1 x 10-14
[OH-] = 1 x 10-12 mol/L
 27

Exemplo 2:
Para uma soluo de NaOH 0,0001 mol/L, que est completamente
dissociado, qual a concentrao de H+ e OH- na soluo?

NaOH Na+ + OH-

Considerando-se que a base est totalmente dissociada, ento
[OH-] = [NaOH] = 0,0001 mol/L ou 1 x 10-4 mol/L.

[H+].[OH-] = 1 x 10-14
[H ].1 x 10-4 = 1 x 10-14
+

[H+] = 1 x 10-10 mol/L

Pode-se observar que existe uma relao inversa entre [H+] e [OH-]
em solues. Quando uma delas aumenta, a outra diminui. Geralmente,
expressa-se o valor de [H+], e no de [OH-].
A concentrao total do on hidrognio em uma soluo, ou [H+],
expresso pelo valor do pH. Matematicamente, o pH definido como o valor
negativo do logaritmo (log) da concentrao do on hidrognio:

pH = - log[H+] ou pH = log 1/[H+]

Deve-se lembrar que os valores de pH so funes logartmicas das

concentraes reais de ons H+. Portanto, uma diferena de pH de uma
unidade representa uma diferena de 10 vezes na concentrao real de H+.
Exemplos:
pH = 3 [H+] = 0,001 mol/L
pH = 4 [H+] = 0,0001 mol/L

A acidez ou a alcalinidade de uma soluo determinada pelas

propores de H+ e OH- presentes. Assim,

soluo neutra: [H+] = [OH-] pH = 7

soluo cida: [H+] > [OH-] pH < 7
soluo alcalina: [H+] < [OH-] pH > 7

Por que o pH de uma soluo neutra igual a 7?

Em uma soluo neutra [H+]=[OH-].
Assim, a concentrao hidrogeninica, [H+], em uma soluo neutra

Kw = [H+].[OH-] = 1,0 x 10-14

como [H+]=[OH-]: [H+].[H+] = 1,0 x 10-14

[H+]2 = 1,0 x 10-14

[H+]= 1,0 x 10-7 mol/L

pH = -log [H+] = - log 1,0 x 10-7 = -(-7) = 7

O pH de uma soluo contendo 1 mol/L de H+ zero e uma contendo 1 mol/L

de OH- 14. A escala de pH de 0-14 cobre a faixa de acidez e
alcalinidade das solues normalmente encontradas.
 28

Tomando-se o logaritmo
negativo da equao: [H+][OH-] = Kw = 1 x 10-14

Tem-se: -log[H+] -log[OH-] = -logKw = 14

Como: -log[H+] = pH; -log[OH-] = pOH, -logKw = pKw

Pode-se escrever: pH + pOH = pKw = 14

III. TEORIA DE BRNSTED-LOWRY PARA CIDOS E BASES

Brnsted, Lowry e colaboradores desenvolveram um conceito amplo de

cidos e bases que muito til. cido qualquer substncia que doa
prtons (ons H+) e base qualquer substncia que combina com prtons.
Em outras palavras, cidos so doadores de prtons e bases so aceptores
de prtons.
Exemplos:
cido base
HCl H+ + Cl-
HCN H+ + CN-
CH3COOH H+ + CH3COO-
H2CO3 H+ + HCO3-
HCO3- H+ + CO32-
H2SO4 H+ + HSO4-
HSO4- H+ + SO42-
NH4+ H+ + NH3
+
NH3 H + NH2-
HOH H+ + OH-
H3O+ H+ + H2 O

De acordo com essa viso, um cido se dissocia em um prton e uma

base, enquanto a base combina com um prton para formar um cido. Um
doador de prton e o seu correspondente aceptor de prtons formam um par
cido-base conjugado. Assim HCN produz H+ e CN-, onde HCN o cido e CN-
a base conjugada. A base conjugada correspondente ao cido actico
(CH3COOH) o on acetato (CH3COO-). HSO4- a base produzida por
dissociao de H2SO4; entretanto, HSO4- tambm o cido correspondente
base SO42-.

HCN H+ + CN-
cido base conjugada
(fraco) (forte)

HCl H+ + Cl-
cido base conjugada
(forte) (fraca)
 29

De acordo com a teoria de Brnsted-Lowry, o cido mais fraco tem a

base conjugada mais forte, e o cido mais forte tem a base conjugada mais
fraca. Assim, HCN um cido fraco porque sua base conjugada forte, CN-,
combina-se firmemente com prtons, enquanto que HCl um cido forte
porque sua base conjugada, Cl-, combina-se fracamente com prtons.
Uma substncia que atua tanto como cido quanto como base chamada
anfotrica ou anftero. Exemplos: gua, hidrxido de zinco, amnia,
aminocidos.
NH3 + H+ NH4+
NH3 H+ + NH2-

H2 O H+ + OH-
H2O + H+ H3 O+

IV.DISSOCIAO DE CIDOS FRACOS

cidos e bases fortes esto completamente ionizados (dissociados)

em solues aquosas diludas. Os cidos e as bases fracas no se ionizam
completamente quando dissolvidos em gua. Os ltimos so mais comuns em
sistemas biolgicos e desempenham importantes funes no metabolismo e
sua regulao.

Exemplo 3:
Considere as solues de CH3COOH 0,2 mol/L (1% dissociado) e de HCl
0,2 mol/L. Calcular o pH de cada uma delas.

a) HCl um cido forte, portanto est completamente dissociado em

soluo. Isso significa que a concentrao de H+ igual a
concentrao de HCl.

HCl H+ + Cl-
0,2 mol/L 0,2 mol/L

pH = -log [H+] = -log 0,2 = 0,7

b) CH3COOH um cido fraco, portanto, no est completamente

dissociado em soluo. A porcentagem de dissociao informada,
correspondente a 1%, significa que a concentrao de H+ igual a 1%
ou 0,01 da concentrao de CH3COOH.
-
CH3COOH CH3COO + H+
0,2 mol/L 0,2 x 0,01 = 0,002 mol/L

pH = -log [H+] = -log 0,002 = 2,7

A dissociao de cidos fracos ocorre de acordo com a lei de ao

das massas. As equaes de equilbrio podem ser formuladas para sua
dissociao. Tais equaes no se aplicam para dissociao de cidos
fortes. Considerando que a frmula geral para qualquer cido fraco
monobsico HA, sua equao de dissociao :

HA H+ + A-
 30

De acordo com a lei de ao das massas, o equilbrio pode ser

expresso matematicamente como:
[H+][A-]= Ka
[HA]

Onde Ka chamada de constante de dissociao do cido.

As constantes de dissociao de cidos e bases fracas podem ser

calculadas a partir dos dados obtidos pela medida da condutividade
eltrica de suas solues ou pela determinao do valor do pH de suas
solues. O valor de Kw da gua geralmente calculado a partir da medida
de condutividade. Quanto maior o valor de Ka, mais ionizado est o cido
e, portanto, maior a sua fora relativa.
Freqentemente, encontramos os valores de pKa, ao invs dos valores
de Ka.
pKa = - log Ka ou pKa = log 1/Ka

Por exemplo, no caso do cido actico, temos:

[H+][CH3COO-] = Ka = 1,86 x 10-5 = 0,0000186 (pKa = 4,73)
[CH3COOH]

Para o cido ciandrico:

[H+][CN-] = Ka = 7,20 x 10-10 = 0,00000000072 (pKa = 7,14)
[HCN]

O valor do Ka para CH3COOH (1,86 x 10-5) milhares de vezes maior

que o valor do Ka para HCN (7,20 x 10-10); em contrapartida, o valor de
pKa do cido actico (4,73) menor que o pKa do cido ciandrico (7,14).
Dessa forma, podemos determinar a fora relativa de cidos atravs da
consulta de uma tabela de Ka ou pKa.
Assim, quanto mais forte um cido, maior a sua tendncia de
dissociar um prton. Portanto maior a sua constante de dissociao (Ka) e
menor o seu pKa.
Os cidos polibsicos, que contm mais de um hidrognio ionizvel,
dissociam-se em estgios, e h uma equao de equilbrio e uma constante
de dissociao para cada estgio. Isto pode ser ilustrado pelo caso do
cido fosfrico:
H3PO4 H+ + H2PO4-
H2PO4- H+ + HPO42-
HPO42- H+ + PO43-

As equaes de equilbrio para cada estgio de dissociao so:

[H+][ H2PO4-] = K1 = 1,1 x 10-2

[H3PO4]

[H+][ HPO42-] = K2 = 2,0 x 10-7

[H2PO4-]

[H+][ PO43-] = K3 = 3,6 x 10-13

[HPO42-]

Onde K1, K2 e K3 so designadas primeira, segunda e terceira

constantes de dissociao do cido.
 31

V. SOLUO TAMPO

V.A.Aspectos gerais
O pH da gua pura (uma soluo neutra) 7,0. Se um cido
adicionado gua, o seu pH diminui; se uma base adicionada gua, o
pH aumenta para mais que 7,0. O quanto o pH se afastar de 7,0, em cada
caso, depender da quantidade de cido ou de base adicionados e de suas
foras.
Contudo, quando pequenas quantidades de cido ou base so
adicionadas a uma soluo tampo, o seu pH no varia apreciavelmente. Uma
soluo tampo definida como uma soluo que resiste s variaes de
pH, quando ocorre a adio de pequenas quantidades tanto de cidos como
de bases.
As solues tampo usualmente so constitudas de:
Um cido fraco (HA) e um sal correspondente a esse cido (A-).
ex: cido actico e acetato de sdio
CH3COOH CH3COO- + H+
CH3COONa CH3COO- + Na+

Um sal de carter cido e um sal de carter bsico

ex: di-hidrogenofosfato de sdio e mono-hidrogenofosfato de sdio.
NaH2PO4 Na+ + H2PO4-
Na2HPO4 2Na+ + HPO42-

Uma base fraca (B) e um sal correspondente a essa base (BH+).

ex: hidrxido de amnia e cloreto de amnia
NH4OH NH4+ + OH-
NH4Cl NH4+ + Cl-

V.B. Como funciona uma soluo tampo

Em uma soluo contendo cido actico e acetato de sdio, por
exemplo, tm-se as seguintes equaes de dissociao:
CH3COOH CH3COO- + H+
CH3COONa CH3COO- + Na+

Os ons acetato provenientes da dissociao do cido so poucos em

comparao com as molculas do cido no dissociado. Por outro lado, o
nmero de ons acetato provenientes do acetato de sdio igual ao nmero
de molculas do sal dissolvido, devido ionizao.
O mecanismo qumico pelo qual os tampes funcionam podem ser
ilustrados pelas modificaes provocadas pela adio de NaOH e HCl ao
tampo cido actico/acetato de sdio.
Adio de NaOH: O doador de prton, o cido actico (HAc), contm
uma reserva de H+ ligado, que pode ser liberada para neutralizar
uma adio de OH- ao sistema, formando H2O; em conseqncia, a
concentrao de CH3COOH no tampo diminui e a concentrao de
CH3COONa aumenta.
Adio de HCl: a base conjugada, o on acetato (Ac-), pode reagir
com ions H+ adicionados ao sistema, formando CH3COOH; em
conseqncia, a concentrao de CH3COONa no tampo diminui e a de
CH3COOH aumenta.
 32

Kw = [H+] [OH-]

OH- H2O

cido actico HAc Ac- Acetato

(CH3COOH) (CH3COO-)

Figura 1. Esquema simplificado do

H+ mecanismo de ao do tampo cido
[H+] [Ac-] actico/acetato de sdio, frente adio
Ka =
[HAc] de cidos (H+) e bases (OH-).

Portanto, o sistema capaz de absorver tanto H+ quanto OH- devido

reversibilidade da dissociao do cido actico. A ao tamponante
simplesmente a conseqncia de duas reaes reversveis ocorrendo
simultaneamente e alcanando seus pontos de equilbrio conforme expresso
por suas constantes de equilbrio Ka e Kw.

Cada par cido-base conjugado tem uma zona de pH caracterstico na

qual efetiva como tampo: pH = pKa 1. Por exemplo, o par H2PO4-/HPO42-
tem um pKa de 6,86 e serve como tampo efetivo entre aproximadamente pH
5,9 epH 7,9; o par NH4+/NH3, com um pKa de 9,25, atua como tampo entre
aproximadamente pH 8,3 e pH 10,3.

Figura 2. Curvas de titulao ilustrando as zonas de tamponamento de

diferentes pares cido-base conjugados.
 33

V.C. A equao de Henderson-Hasselbach

A equao de Henderson-Hasselbach derivada da expresso da
constante de dissociao de um cido, conforme descrito abaixo.

Escreve-se a equao de dissociao de um cido fraco:

HA H+ + A-

A respectiva constante de dissociao:

Ka = [H+].[A-]
[HA]
Isola-se o termo [H+]:
[H+] = Ka .[HA]
[A-]
Tira-se o logaritmo negativo de ambos os lados:
-log[H+] = -logKa -log[HA]
[A-]

Substitui-se -log[H+] por pH e logKa por pKa:

pH = pKa -log[HA]
[A-]

Inverte-se termo -log[HA]/[A-], para obter a equao de Henderson-

Hasselbach:
pH = pKa + log[A-] ou: pH = pKa + log [base conjugada]
[HA] [cido conjugado]

A equao de Henderson-Hasselbach descreve o formato da curva de

titulao de qualquer cido fraco e permite deduzir diversas relaes
quantitativas importantes. Por exemplo, possvel verificar por que o
pKa de um cido fraco igual ao pH da soluo no ponto mdio de sua
titulao, neste ponto [HA]=[A-], ento:

pH = pKa + log[A-] = pKa + log[A-] = pKa + log 1,0 = pKa + 0

[HA] [A-]
pH = pKa

A equao permite calcular:

O pKa, quando o pH e a razo molar entre o doador e o aceptor de
prtons so conhecidos;
o pH, quando o pKa e a razo molar entre o doador e o aceptor de
prtons so conhecidos;
a razo molar entre o doador e o aceptor de prtons, quando o pKa e
o pH so conhecidos.

VI. CAPACIDADE TAMPONANTE

VI.A. Aspectos gerais

As solues tampo, ou simplesmente tampes, so encontrados em
todos os fluidos corporais (sangue, saliva, lgrimas, urina, etc.) e so
responsveis pela manuteno do pH apropriado desses fluidos. Dois termos
importantes que se referem a essas solues:
 34

Efeito tampo: a propriedade de uma soluo de resistir a

mudanas de pH (concentrao de ons hidrognio) ao se adicionar
pequenas quantidades de cido ou base.
Capacidade tamponante: o quanto uma soluo tampo resiste s
mudanas de pH, quando se adiciona pequenas quantidades de cido
ou base.

A capacidade tamponante de uma soluo indicada pela alterao de

pH provocada pela adio de cido ou base. Quanto menor a alterao de pH
causada pela adio de uma dada quantidade de cido ou base, maior a
capacidade tamponante da soluo, ou vice-versa.

VI.B. Capacidade tamponante da saliva

A saliva constitui um dos sistemas de defesa natural da cavidade
oral contra o desenvolvimento de cries dentrias. Estas ocorrem devido
desmineralizao do esmalte e da dentina causada pelos cidos produzidos
pelo metabolismo bacteriano de acares. A saliva desempenha um
importante papel contra a desmineralizao, porque ajuda a repor clcio e
fosfato na superfcie do dente. Em pH 7, a saliva est supersaturada com
esses dois minerais, o que favorece a deposio de clcio nas reas
desmineralizadas. A crie ocorre quando a remoo de minerais dentrios
maior que a reposio.
O pH da saliva depende dos tipos de cidos e bases secretados pelas
glndulas salivares. O pH da saliva pode variar de 5,6 na saliva no-
estimulada at 7,8 quando o fluxo salivar alto, como na saliva
estimulada.
Outra importante funo da saliva o tamponamento dos cidos
produzidos, por meio de diversos sistemas tampes. O sistema fosfato de
menor importncia na saliva estimulada, devido sua baixa concentrao,
mas de maior importncia na saliva no estimulada. O sistema tampo mais
importante na saliva estimulada o cido carbnico/bicarbonato. Alguns
trabalhos indicam que uma boa capacidade tamponante da saliva, associada
a um elevado fluxo salivar, contribuem para uma menor incidncia de
cries.

VI.C. Clculo da capacidade tamponante

A capacidade tamponante pode ser calculada com o uso da frmula:
+
Cap. tamponante = = 2,3 Ka [H ] [C]
+ 2
(Ka + [H ])
onde:
Ka : constante de dissociao do cido
[H+] : concentrao hidrogninica do tampo
[C] : concentrao do tampo
: nmero de mols/litro de H+ ou OH- necessrios para causar
mudana de 1 unidade no valor do pH do tampo
 35

VII. RESUMO

VII.A. Itens levados em considerao na elaborao de uma soluo tampo:

* O par cido-base conjugado. Os elementos do par podem ser usados

separadamente, ou haver a formao de um a partir do outro.
+ -
Ex.: HA H + A
cido base

* O pKa do cido do item acima.

* A regio de tamponamento desejada: pKa + 1
* Os clculos de concentrao e de pH, utilizando as equaes:
a)Henderson-Hasselbach
pH = pKa + log [base conjugada]
[cido conjugado]

b) [tampo] = [cido conjugado] + [base conjugada]

VII.B. Principais equaes citadas neste captulo

HA H+ + A-

Ka = [H+][A-]
[HA]

pKa = log 1/Ka = -logKa

pH = log 1/[H+]= -log[H+]

[H+] = 10-pH

[H+].[OH-] = Kw = 1 x 10-14 (a 25C)

pH + pOH = pKw = 14

pH = pKa + log [base conjugada]

[cido conjugado]

[tampo] = [cido conjugado] + [base conjugada]

+
Capacidade tamponante = = 2,3 Ka [H ] [C]
+ 2
(Ka + [H ])

VII.C.Regras matemticas envolvendo logaritmos

Log a.b = loga + logb

Log a/b = loga logb
Log 1/a = - loga
log ab = b.loga
log 1 = 0
 36

VIII. EXEMPLO DE PREPARO DE UMA SOLUO TAMPO

Preparar 500 mL de tampo fosfato 0,8 mol/L pH 7,4, empregando

Na2HPO4 (M.M.=142,0) e NaH2PO4 (M.M.=120,0). pKa = 6,9.

a. Montar as equaes de dissociao dos sais, para identificar o cido

e a base conjugada que compem o sistema tampo.

NaH2PO4 Na+ + H2PO4-

Na2HPO4 2Na+ + HPO42-
- cido conjugado (doador de prton): NaH2PO4
- Base conjugada (aceptor de prton): Na2HPO4

b. Calcular as concentraes de cido e base conjugados

b1. pH = pKa + log [base conjugada]

[cido conjugado]

7,4 = 6,9 + log [base conjugada]

[cido conjugado]

log [base conjugada] = 0,5

[cido conjugado]

[base conjugada] = 100,5 = 3,162

[cido conjugado]

[base conjugada] = 3,162 x [cido conjugado] (equao 1)

b2. [tampo] = [cido conjugado] + [base conjugada]

0,8 = [cido conjugado] + 3,162 x [cido conjugado]
0,8 = 4,16 x [cido conjugado]
[cido conjugado] = 0,192 mol/L

b3. Voltando na equao 1:

[base conjugada] = 3,16 x [cido conjugado]
[base conjugada] = 3,16 x 0,192
[base conjugada] = 0,608 mol/L

Portanto, as concentraes de NaH2PO4 e de Na2HPO4 na soluo tampo

so, respectivamente 0,192 mol/l e 0,608 mol/L.

b. Calcular a massa de cada sal necessria para o preparo do volume

desejado de tampo (500 mL)
c.
para o NaH2PO4: para o Na2HPO4:

0,192 mol ____ 1000 mL tampo 0,608 mol ____ 1000 mL tampo
x ____ 500 mL tampo x ____ 500 mL tampo
x = 0,096 mol x = 0,304 mol

1 mol ____ 120 g 1 mol ____ 142 g

0,096 mol ____ Y 0,304 mol ____ y
y = 11,52 g y = 43,17 g
 37

d. Preparo da soluo:
- Pesar os sais de acordo com as quantidades calculadas
- Dissolver em bquer, com aproximadamente 400 mL de gua destilada
- Medir o pH
- Ajustar o pH se necessrio
- Transferir a soluo para um frasco volumtrico
- Completar o volume para 500 mL com gua destilada
 38

PROTENAS
I. INTRODUO

As protenas so macromolculas complexas, compostas de aminocidos, e

necessrias para os processos qumicos que ocorrem nos organismos vivos. So os
constituintes bsicos da vida. Tanto que seu nome deriva da palavra grega
"proteios", que significa "em primeiro lugar". A importncia das protenas,
entretanto, est relacionada com suas funes no organismo, e no com sua
quantidade.
Os aminocidos possuem um tomo de carbono assimtrico, ao qual esto
ligados um grupo amino livre, um grupo carboxila livre, um tomo de hidrognio e
uma cadeia lateral. Esta ltima diferente para cada aminocido.

Figura 1. Frmula estrutural

geral dos aminocidos.

Nas molculas proticas, os resduos de aminocidos ligam-se

covalentemente, formando longos polmeros no-ramificados. As ligaes
peptdicas, que unem um aminocido a outro, so formadas pela reao
entre o grupo amino de um aminocido e o grupo carboxlico do aminocido
subseqente, eliminando molculas de gua.

Figura 2. Reao geral da formao

de uma ligao peptdica.

Figura 3. Exemplo de
peptdeo, formado por
cinco aminocidos.
 39

II. REAES PARA AMINOCIDOS

As reaes orgnicas caractersticas dos aminocidos so aquelas de

seus grupamentos funcionais, isto , os grupos carboxlicos, os grupos
amino, e os grupos funcionais presentes nas diversas cadeias laterais.
Essas reaes permitem, por exemplo, a identificao de aminocidos nos
hidrolisados proticos, identificao da seqncia de aminocidos de uma
protena, identificao de aminocidos essenciais para a atividade de uma
enzima.
Uma reao bastante utilizada para verificar a presena de
aminocidos em pequenas amostras a Reao da Ninidrina, devido sua
elevada sensibilidade.

Princpio da reao da ninidrina: pelo aquecimento, o grupo -amino

de um aminocido reage com duas molculas de ninidrina, produzindo um
complexo de cor azul, denominado Prpura de Ruhemann.
A cor azul obtida na reao da ninidrina para todos os
aminocidos que apresentam um grupo -amino livre. Enquanto que a
prolina e a hidroxiprolina, em que o grupo -amino est substitudo,
produzem derivados com uma cor amarela caracterstica.

aminocido
ninidrina
Prpura de Ruhemann

(Complexo azul, formado pela reao

de 2 molculas de ninidrina com o N)

Figura 4. Reao da ninidrina.

III. REAES PARA IDENTIFICAO DE PROTENAS

Na literatura, podem ser encontrados vrios mtodos para

identificao e/ou quantificao de protenas. Eles so baseados em
alguma caracterstica da molcula de protena, tal como a presena das
ligaes peptdicas, o contedo de aminocidos aromticos ou de grupos R
fenlicos.
Uma reao bastante utilizada para verificar a presena de
protenas a Reao do Biureto, devido sua alta sensibilidade.

Princpio da Reao do Biureto: em meio moderadamente alcalino, os

ons Cu2+ do reagente de Biureto interagem com tomos de nitrognio das
ligaes peptdicas das protenas, formando complexos de cor violeta.
Para a formao do complexo so necessrias quatro ligaes
peptdicas para cada on Cu2+, conforme ilustrado na figura abaixo.
 40

A Reao do Biureto pode ser empregado tambm para determinar a

concentrao de protenas em uma amostra, pois a intensidade da cor
diretamente proporcional concentrao de protenas.

Figura 5. Esquema da reao do Biureto.

IV. SEPARAO DE PROTENAS POR PRECIPITAO

As protenas consistem em cadeias longas, nas quais os aminocidos

ocorrem em seqncias lineares especficas para cada tipo de protena. Os
tipos de aminocidos (polares ou apolares) e as seqncias em que eles se
encontram direcionam o enovelamento da cadeia polipeptdica, levando a
uma conformao tridimensional especfica, que indispensvel para sua
funo biolgica.
Devido s diferenas nessas caractersticas estruturais, as
protenas possuem diferentes propriedades fsico-qumicas, tais como:
tamanho, massa molecular, carga eltrica e solubilidade. Essas
propriedades, por sua vez, permitem que as protenas contidas em uma
mistura sejam separadas umas das outras.
Um mtodo bastante utilizado para separao de protenas de uma
amostra a precipitao, que pode ser realizada de diferentes maneiras.
Duas delas sero utilizadas nesta aula, e esto descritas a seguir.

IV.A. Precipitao pelos reagentes de alcalides

Os reagentes cidos utilizados para identificao de alcalides,
uma classe de compostos naturais, tais como: o cido tricloroactico
(TCA), combinam-se com partes positivas de protenas, formando complexos
insolveis, que precipitam na soluo. Esses reagentes tambm tm ao
desnaturante, ou seja, provocam a perda da conformao tridimensional da
protena de forma irreversvel. Conseqentemente, a protena separada por
esse mtodo perde a sua funo.
Esse mtodo bastante utilizado para remover protenas de amostras
de soro, plasma e leite, quando se deseja analisar a presena de
minerais, tais como clcio e magnsio, ou a contaminao por metais
pesados, tais como chumbo e nquel.
 41

IV.B. Precipitao fracionada por solues salinas concentradas

Os sais neutros tm efeitos pronunciados na solubilidade das

protenas globulares, podendo tanto aumentar quanto diminuir a
solubilidade da protena na soluo. A capacidade desses sais de
influenciar a solubilidade das protenas uma funo de sua fora
inica, que depende tanto de sua concentrao como do nmero de cargas
eltricas dos ctions e nions que formam o sal.
Entretanto, o efeito do aumento ou da reduo da fora inica na
solubilidade pode ser diferente para cada tipo de protena, o que permite
que elas sejam separadas de uma mistura apenas variando-se a concentrao
de sal na soluo.

SALTING-IN
Em concentraes reduzidas, os sais aumentam a solubilidade de
muitas protenas, um fenmeno denominado solubilizao por salificao ou
"salting-in".
Os sais de ons divalentes, tais como MgCl2 e o (NH4)2SO4, so mais
eficientes na solubilizao por salificao do que os sais de ons
monovalentes como NaCl e KCl.
Os efeitos da salificao na solubilidade so ocasionados por
alteraes na tendncia ionizao dos grupos R (cadeias laterais dos
aminocidos) dissociveis da protena.

SALTING-OUT
Por outro lado, medida que a concentrao do sal aumentada, a
solubilidade da protena se reduz gradativamente. Em foras inicas
suficientemente elevadas, uma protena pode ser quase completamente
precipitada de sua soluo, um efeito denominado precipitao por
salificao ou salting out.
Um dos fatores que a concentrao elevada de sais pode remover a
gua de hidratao das molculas de protena, reduzindo, dessa maneira,
sua solubilidade; porm outros fatores podem estar envolvidos.
Os precipitados proticos resultantes da precipitao por
salificao mantm sua conformao nativa e podem ser dissolvidos
novamente, em geral sem haver desnaturao. Conseqentemente, a funo da
protena pode ser recuperada aps o trmino do processo e remoo do sal.

Tabela 1. Perfil de precipitao das

protenas plasmticas em funo da
concentrao de (NH4)2SO4.

Frao % de saturao de (NH4)2SO4

Eletrofortica para precipitao
Albuminas 100
1- globulinas 46

2- globulinas 46

- globulinas 40

- globulinas 33
Fibrinognio 20
 42

GLICDEOS

I.INTRODUO

Os carboidratos, ou sacardeos, so mais simplesmente definidos

como poliidroxialdedos ou cetonas e seus derivados. Muitos possuem a
frmula emprica [CH2O]n, que originalmente sugere hidratos de carbono.
Os monossacardeos, tambm chamados de acares simples, consistem
numa s unidade poliidroxialdedica ou cetnica, de frmula emprica
[CH2O]n, onde n = 3 ou um nmero maior. O esqueleto de carbono dos
monossacardeos comuns no-ramificado e cada tomo de carbono, exceto
um, possui um grupo hidroxlico no tomo de carbono remanescente, h um
oxignio carbonlico. Se o grupo carbonlico estiver na extremidade da
cadeia, o monossacardeo um aldedo derivado, denominado aldose; se
estiver em qualquer outra posio, o monossacardeo uma cetona
derivada, denominada cetose. (figura 1).

D-glucose D-frutose

Figura 1. Exemplos de aldose (D-glucose) e cetose (D-frutose) com seis

tomos de carbono, mostradas em frmulas estruturais de cadeia aberta.

A partir de vrias consideraes qumicas, deduziu-se que os

monossacardeos (aldoses e cetoses) com cinco ou mais tomos de carbono
no so estruturas de cadeia aberta, mas estruturas cclicas. No caso da
D-glucose, formam-se estruturas cclicas de seis elementos, pela reao
do grupo hidroxlico alcolico do tomo de carbono 5 com o tomo de
carbono aldedico 1, conforme ilustrado na figura 2.
As formas isomricas dos monossacardeos, que diferem entre si
apenas na configurao ao redor do tomo de carbono carbonlico, so
denominadas anmeras ou anomricas, e o tomo de carbono carbonlico
denominado carbono anomrico.
O monossacardeo mais abundante o acar de seis carbonos D-
glucose, de onde muitos outros so derivados. A D-glucose o principal
combustvel para a maioria dos organismos, e faz parte da composio de
dissacardeos comuns, como maltose, lactose e sacarose, e de
polissacardeos abundantes na natureza, tais como o amido e a celulose.
As unidades de monossacardeos so unidas por ligaes
glicosdicas, as quais so formadas pela reao do carbono anomrico de
um monossacardeo com um grupamento hidroxlico de outro monossacardeo
(figura 3). Dessa forma, os dissacardeos consistem em dois
monossacardeos unidos por uma ligao glicosdica, e os
oligossacardeos e polissacardeos so cadeias de monossacardeos unidos
por ligaes glicosdicas.
 43

carbono
carbonlico

D -glucose

carbono
anomrico

-D -glucopiranose carbono
-D -glucopiranose
anomrico

Figura 2. Reao de ciclizao da molcula de glucose, produzindo as

formas anomricas e . A reao envolve o grupo hidroxila ligado ao
carbono 5 e o tomo de carbono carbonlico 1, formando molculas
cclicas com 6 tomos de carbono.

hemiacetal

lcool

hidrlise condensao

acetal hemiacetal

-D
D-glucopiranosil-(1 4)--D
4) D-glucopiranose
D

Figura 3. Exemplo da formao de uma ligao glicosdica entre duas

molculas de glucose, produzindo maltose. A ligao glicosdica
formada pela reao do carbono anomrico de um monossacardeo com um
grupamento hidroxlico de outro monossacardeo.
 44

II. PARTE EXPERIMENTAL

II.A. Preparao da soluo de amido

O amido encontrado nas clulas de vegetais (gros, frutas e
tubrculos) na forma de grnulos de gro. Com o aquecimento em gua, os
grnulos so rompidos, liberando o amido. Este, por sua vez, sofre
intensa hidratao, e a soluo adquire aspecto transparente ou
translcido, e torna-se levemente viscosa.

II.B. Pesquisa de amido na soluo preparada

Na maioria dos vegetais, o amido a principal forma de
armazenamento de combustvel. Ele constitudo de dois componentes
principais: amilose e amilopectina (geralmente na proporo de 1:3). A
amilose um polmero de glicose sem ramificaes, no qual todas as
unidades de D-glucose esto ligadas por ligaes (14). J a
amilopectina um polmero de glicose muito ramificado, no qual as
ligaes do esqueleto glicosdico so do tipo (14), mas os pontos de
ramificao so ligaes (16); possui uma massa molecular cerca de 20
vezes maior que a amilose.
O glicognio o principal polissacardeo de reserva das clulas
animais, assim como o amido o nas clulas vegetais. Semelhante
amilopectina, o glicognio um polissacardeo de D-glucose em ligao
(14). Contudo, uma molcula mais altamente ramificada e mais
compacta do que a amilopectina; as ramificaes ocorrem aps oito a doze
resduos de glicose. Nas ramificaes, as ligaes so (16).
Tanto no amido como no glicognio, a cadeia polissacardica assume
a forma helicoidal, em decorrncia do grande nmero de unidades de
glucose ligadas por ligaes do tipo (14). Devido a essa
caracterstica estrutural, ambos os polissacardeos formam complexos de
coordenao com o iodeto, presente na soluo de lugol.
Entretanto, a cor do complexo formado geralmente azul para o
amido e avermelhada para o glicognio. A cor varia de acordo com a
quantidade de polissacardeo que assume, quando em soluo, a
conformao de hlice.

amido + lugol Complexo azul

glicognio + lugol Complexo avermelhado

Quando se aquece a soluo de amido, a estrutura helicoidal se

desfaz, conseqentemente, no mais possvel a formao do complexo
entre o amido e o iodeto. Ao resfriar a soluo, o amido recupera a sua
forma helicoidal.
 45

AQUECER RESFRIAR
I3
LUGOL
I
I 33
- I
I 33
-
I3
I3

Amido amido + iodeto amido + iodeto

( incolor ) amido
( azul ) ( azul )
( incolor )

II.C. Obteno de glicose a partir da soluo de amido preparada

O aquecimento de uma soluo de amido com cidos fortes provoca a
quebra das ligaes glicosdicas, liberando unidades de monossacardeos.
De modo semelhante ao que se observa para uma reao enzimtica, a
hidrlise qumica do amido ocorre de forma gradual, ou seja, a
quantidade de substrato (amido) degradado depende do tempo de reao.

H+
Calor

Amido n nglucose
Glicose

II.D. Caracterizao qumica dos glicdeos

II.D.1. Reao com alfa-naftol (Teste de Molisch)

H um grande nmero de reaes colorimtricas para caracterizao
de carboidratos. A maioria delas emprega solues de cidos fortes, que
hidrolisa os polissacardeos, produzindo monossacardeos, e causam a
desidratao dos acares, produzindo furfurais. Esses furfurais so
aldedos derivados do furano, que tm a capacidade de reagir com fenis,
como orcinol e -naftol, produzindo compostos coloridos caractersticos.
Assim, essa reao detecta a presena de acares de um modo geral,
sejam eles monossacardeos, dissacardeos ou polissacardeos.

+ O

OH CHO H
HOH2C
OH HOH2C O O
C HOH2C
H C CH - 3H2O O - 2 H2O C
HO CH HC OH + H2SO4 + H2SO4
+ -naftol

HEXOSE HIDROXIMETILFURFURAL
HO3S SO3H
OH

COMPOSTO COLORIDO
 46

II.D.2. Pesquisa de sacardeos redutores (Reao de Benedict)

Os sacardeos cujo grupo hidroxila ligado ao carbono anomrico est
livre (ou seja, no est envolvido em ligaes qumicas), possuem a
capacidade de reduzir ons metlicos, tais com: Cu2+, Ag+ ou
ferricianeto, em meio alcalino. Os acares capazes de reduzir tais
agentes so denominados acares redutores. De modo geral, os
monossacardeos so acares redutores, enquanto que os sacardeos de
cadeia maior nem sempre apresentam essa propriedade.
O dissacardeo lactose encontrado no leite, no tendo outra
ocorrncia na natureza e sua hidrlise produz galactose e glucose. A
lactose um dissacardeo redutor, uma vez que possui um carbono
anomrico livre na unidade de glucose.
A sacarose, ou acar de cana, um dissacardeo de glucose e
frutose, sendo extremamente abundante no reino vegetal e conhecida
como acar de mesa. Em contraste com a maioria dos dissacardeos e
oligossacardeos, a sacarose no possui tomos de carbono anomrico
livres, uma vez que os tomos de carbono anomricos de ambos os
monossacardeos esto ligados entre si e no podem sofrer oxidao. Por
esta razo, a sacarose no age como acar redutor.

glucose lactose

frutose sacarose

Grupamento redutor Carbono anomrico

O amido e a sacarose so acares no-redutores, cujas ligaes

glicosdicas so hidrolisadas pelo tratamento com cidos fortes
quente, produzindo monossacardeos. Estes produtos, por sua vez, so
acares redutores, pois possuem uma hidroxila livre no carbono
anomrico. A comprovao da hidrlise cida do amido e da sacarose se d
pela positividade da reao de Benedict.

H+
amido glucose
calor

sacarose H+ glucose + frutose

calor
 47

REAO DE BENEDICT

A ao redutora de acares em meio alcalino bastante utilizada

para a determinao quantitativa e qualitativa de acares. Nesta aula,
utilizaremos o Reagente de Benedict, que contm ons Cu2+ ligados a
agentes complexantes, em meio alcalino.
Com o aquecimento do acar com grupamento redutor, em presena dos
ons Cu2+ e OH-, o Cu2+ reduzido a Cu+ e o acar oxidado, e ocorre a
formao de precipitados de Cu2O (xido cuproso). A cor do precipitado
depende do contedo de acar redutor.

Precipitado esverdeado -------- traos

Precipitado amarelado --------- 10 g/L
Precipitado vermelho -----------20 g/L

OH-
Cu++ + acar redutor Cu2O + acar oxidado

 48

LIPDEOS
I.INTRODUO

Lipdeos so biomolculas orgnicas insolveis na gua que podem

ser extradas de clulas e tecidos por solventes no polares, como, por
exemplo, clorofrmio, ter ou benzeno. Podem ser de origem animal ou
vegetal e possuem importantes funes biolgicas. Eles so componentes
estruturais de membranas, atuam como forma de armazenamento e transporte
de combustvel metablico. So precursores para biossntese de algumas
vitaminas, hormnios e mediadores inflamatrios, funcionam como isolante
trmico em animais como a foca.
A classificao dos lipdeos pode ser baseada na estrutura de seus
esqueletos. Os lipdeos simples no contm cidos graxos (ex: esterides,
prostaglandinas) enquanto que os lipdeos complexos so constitudos de
cidos graxos e diferem na estrutura dos esqueletos aos quais esses
cidos esto covalentemente ligados. Por exemplo:

Triacilgliceris ou triglicerdeos: cidos graxos ligados ao

glicerol, na forma de ster.
Fosfolipdeos ou Fosfoglicerdeos: cidos graxos ligados ao
glicerol-3-fosfato, com diferentes grupos ligados ao grupo fosfato.
Os diferentes tipos de fosfolipdeos so denominados de acordo com o
grupo ligado sua cabea polar. Ex: cardiolipina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, fosfatidilserina,
fosfatidilinositol.
Ceras: cidos graxos ligados a lcoois de cadeia longa, na forma de
ster.
Esfingolipdeos: cidos graxos de cadeia longa ligados a esfingosina
(aminolcool de cadeia longa). Ex:esfingomielina, cerebrosdeos.

II. CIDOS GRAXOS

Os cidos graxos possuem uma longa cadeia hidrocarbonada (cauda

apolar) e um grupo carboxlico terminal (cabea polar) (figura 1). Eles
ocorrem apenas em pequenas quantidades na forma livre; a quase totalidade
dos cidos graxos encontra-se ligada a diferentes compostos, geralmente
na forma de steres, conforme citado acima (figura 2).
A cadeia hidrocarbonada pode ser saturada, isto , com tomos de
carbono unidos apenas por ligaes simples; ou insaturada contendo uma ou
mais ligaes duplas ou triplas. Os cidos graxos diferem um do outro
primariamente no comprimento da cadeia e no nmero e posio de suas
ligaes insaturadas.
 49

Grupo carboxlico
(cabea polar)

Cadeia
insaturao hidrocarbonada
(cauda apolar)

cido graxo cido graxo Figura 1.Estrutura

simplificada de cidos
insaturado saturado graxos livres, saturados
e insaturados.

O
CH 2 O C R1
O
CH O C R2
O Figura 2. Frmula
CH2 O C R3 estrutural e representao
simplificada da estrutura
de um triacilglicerol.

O nmero relativo de ligaes duplas em uma dada amostra de cidos

graxos ou lipdeos pode ser determinado empregando-se compostos
halogenados, como iodo, cloro e bromo. Esses halognios adicionam-se s
duplas ligaes, sendo que a cada lado da dupla ligao se adiciona um
tomo de halognio. A quantidade de halognio absorvido , portanto,
proporcional ao nmero total de duplas ligaes.
Quando se empregam solues de iodo em clorofrmio, observa-se que
quanto maior o grau de insaturao do lipdeo, mais rpido ocorre o
desaparecimento da cor da soluo (figura 3).

O I O
R CH2 CH CH CH 2 C + I2 R CH 2 CH CH CH 2 C
OH OH
I

Figura 3. Reao de adio de iodo em duplas ligaes de cidos graxos

insaturados.
 50

III. PROPRIEDADES GERAIS

III.A. Solubilidade
Os glicerdeos de cidos graxos inferiores (menores), como o cido
butrico, so ligeiramente solveis em gua, enquanto os de cidos graxos
superiores so insolveis. Todos so solveis em ter, clorofrmio e
benzeno. So pouco solveis em etanol a frio, mas a solubilidade aumenta
muito em etanol quente.
Os lipdeos, por definio, so molculas de baixa polaridade,
portanto praticamente insolveis em solventes polares, como a gua. Desse
modo, a ordem de solubilidade esperada para o leo vegetal : ter>
lcool > gua.

III.B. Saponificao
Os cidos graxos complexos so tambm denominados lipdeos
saponificveis, uma vez que produzem sabes, sais de cidos graxos, sob
hidrlise alcalina.
Os triglicerdeos, cidos graxos esterificados com glicerol,
decompem-se facilmente em glicerol e sais de cido graxo (sabes) por
ebulio em bases fortes como NaOH ou KOH. Como os lipdeos so
insolveis em gua, o processo facilitado adicionando-se soluo
alcolica da base.
Ao acidificar o meio de reao, o sal de cido graxo, que solvel
em gua, convertido em cido graxo. Este, por sua vez, no solvel em
gua, e separa-se do meio de reao. Alm disso, o cido graxo fica na
superfcie da soluo, pois menos denso que a gua, e o glicerol
permanece dissolvido na fase aquosa, devido sua natureza polar.
O cido graxo separado pode novamente ser convertido em sabo, pela
adio de uma base forte e sob aquecimento. Por esta razo, ao se agitar
o tubo contendo gua quente, soluo de NaOH 1 mol/L e o cido graxo
(insolvel), ocorre formao de espuma, que indicativa da presena do
sabo.

III.C. Propriedades dos sabes

Os sabes de metais alcalinos particularmente de Na e K so
solveis em gua. Os sabes de massa molecular mais alto so menos
solveis. Os de Ca2+ e Mg2+ so muito insolveis em gua e precipitam. Os
sais de Pb dos cidos graxos saturados possuem solubilidade limitada em
gua enquanto que os dos cidos graxos insaturados so muito mais
solveis (Isto pode servir para separar cidos graxos saturados de cidos
graxos insaturados).
Quando acrescentamos soluo saturada de cloreto de sdio no sabo,
este precipita o sabo por seqestrar a gua que envolve as molculas
deste, de modo semelhante ao fenmeno de precipitao de protenas por
soluo saturada de sulfato de amnio.
Os detergentes so estveis em gua dura (com Ca2+ e Mg2+) bem como
em solues cidas, o que no ocorre com o sabo.

R-COOH + 2H2 RCH2OH + H2O

R-CH2-O-SO2ONa
 51
O
CH2 O C R1
O
CH O C R2
O
CH2 O C R3
TRIGLICERDEO

KOH

O
CH2 OH + -
K O C R1
O SAPONIFICAO
CH OH + + -
K O C R2
O
CH2 OH + -
K O C R3
GLICEROL SABO
(sais de cidos graxos)

HCl

O
CH2 OH
HO C R1
SEPARAO DOS
KCl + CH OH + O
CIDOS GRAXOS
HO C R2

CH2 OH O
HO C R3
GLICEROL CIDOS GRAXOS
(solvel em gua) (insolveis em gua)

NaOH

O
+ - REDISSOLUO DOS
Na O C R1
O CIDOS GRAXOS
+ -
Na O C R2
O
+ -
Na O C R3
SABO
(sais de cidos graxos)
 52

SALIVA

I.INTRODUO

A saliva refere-se a mistura de secrees presentes na cavidade

bucal, e consiste de fluidos derivados das glndulas salivares
principais: partida, submandibular e sublingual, das glndulas salivares
acessrias da mucosa bucal e resduos do exsudato gengival. Este ltimo
no uma secreo glandular sendo, portanto, proposto o termo "fluido
bucal", que mais abrangente, em substituio a saliva.
Este fluido constitudo de cerca de 99% de gua, sendo que o
restante constitui-se de diversos compostos orgnicos e eletrlitos
(tabela 1). As principais funes da saliva esto listadas na tabela 2.

Tabela 1. Principais constituintes da saliva.

Componentes Componentes
Orgnicos mg/mL Inorgnicos mg %

Protenas 2,8 3,0 Cl- 0,5

Acares 0,009 H2PO4- 50
Uria 0,13 0,22 HPO42- 30
Aminocidos 0,0005 SO4- 10
Lactato 0,0214 S2- 9
Lipdeos traos F- 0,2
Mucinas traos HCO3-(CO2) 90-180
Ca++ 3-7
NH3+ 10
Na+ 78
K+ 98
Mg++ 0,5

Tabela 2. Principais funes da saliva.

Funo Mecanismos envolvidos
Lubrificao Lubrificao da cavidade oral. Facilitando a fala,
mastigao e deglutio dos alimentos.

Preveno de Promove o clearance oral.

cries dentrias Tamponamento de cidos.
Veculo para transporte de fluoreto e minerais para a
superfcie dental, participando do processo de
remineralizao.
Protenas salivares previnem a precipitao de ons
clcio, presentes em alta concentrao na saliva.

Preveno de Presena de imunoglobulinas, lactoferrina, lisozima,

infeces orais aglutininas e peroxidases, que tm propriedades
antibacterianas.

Sensao Slidos so solubilizados na saliva e transportados

gustativa para as papilas gustativas.

Digesto Atividade da amilase salivar inicia digesto do amido.

Hidrlise da sacarose pela invertase.
 53

II. ESTUDO DA ATIVIDADE DA AMILASE SALIVAR

Dentre as diversas funes citadas na tabela 2, nesta aula ser

estudada a atividade da amilase salivar na digesto do amido.
A amilase salivar uma alfa-amilase, a qual catalisa a hidrlise
das ligaes alfa-1,4-glicosdicas do amido, de forma casual, produzindo
uma mistura de glucose e maltose. De forma diversa das protenas ricas em
prolina, a amilase no tem alta afinidade pela superfcie dentria. A
finalidade desta enzima parece ser estritamente a catlise da digesto do
amido. Na maior parte das vezes, o contato do alimento com a amilase se
d por breve espao de tempo. No entanto, esta enzima est em alta
concentrao na saliva, tornando provvel que ao menos uma parte do amido
seja digerida na cavidade bucal.

II.A. Fatores que influenciam na atividade enzimtica

A parte da enzimologia que estuda a velocidade das reaes
enzimticas, e os fatores que influenciam nesta velocidade denominada
cintica enzimtica. A cintica de uma reao catalisada por enzima
estudada avaliando-se a quantidade de produto formado ou a quantidade de
substrato consumido por unidade de tempo de reao.
Nesta aula, a atividade da amilase salivar ser monitorada pela
medida do consumo do substrato (amido). O amido ser detectado atravs da
reao com soluo de lugol, que se baseia na formao de um complexo
azul, resultante da interao entre o iodeto (presente na soluo de
lugol) e a estrutura helicoidal do amido.

SUBSTRATO + ENZIMA PRODUTOS

I3 +
amilase

maltose glucose
glicose
amido

LUGOL

Estrutura do amido:

monossacardeos unidos
I3 por ligaes -1,4

pontos de ramificao
(ligaes -1,6)

Complexo de cor azul

(amido + iodeto)
 54

De modo geral, a atividade de uma enzima, expressa pela velocidade

de atuao da enzima sobre um determinado substrato, pode ser
influenciada por diversos fatores, tais como: temperatura, pH,
concentrao de substrato, concentrao de enzima, presena de cofatores
e/ou coenzimas, presena de inibidores, concentrao do(s) produto(s) da
reao e tempo de reao. Alguns deles sero estudados nesta aula.
Esses fatores podem ser ajustados experimentalmente, de modo que se
obtenham as condies timas para atuao da enzima. Uma condio tima
(de pH, temperatura, concentrao de substrato, etc.) aquela em que a
enzima atua com maior velocidade, ou seja, consome a maior quantidade de
substrato (ou forma a maior quantidade de produto) por unidade de tempo.

II.A.1. pH
A maioria das enzimas apresenta um pH caracterstico em que a sua
atividade mxima, denominado pH timo, Acima ou abaixo desse pH, a
atividade se reduz. Ainda que os perfis de atividade em funo do pH de
muitas enzimas tenham a forma em sino, eles podem variar
consideravelmente em forma.
A inter-relao da atividade enzimtica com o pH para qualquer
enzima depende do comportamento cido-bsico da enzima e do substrato,
bem como de outros fatores que so difceis de analisar
quantitativamente. Sabe-se que o pH afeta o estado de ionizao dos
resduos de aminocidos das protenas, levando a alteraes na
distribuio de cargas eltricas e grupamentos qumicos da molcula da
enzima, em especial do stio cataltico e tambm na conformao
tridimensional da protena. Essas alteraes podem prejudicar a interao
entre o stio ativo e o substrato, diminuindo a velocidade de atuao da
enzima. Em valores extremos de pH, h ainda a possibilidade de ocorrer
desnaturao da enzima.
O pH timo de uma enzima no necessariamente idntico ao pH de
seu meio intracelular normal, que pode estar situado na parte ascendente
ou descendente do seu perfil de atividade em funo do pH. Isso sugere
que a inter-relao pH-atividade enzimtica pode ser um fator de controle
intracelular da atividade enzimtica.

II.A.2. Temperatura
Tal como ocorre para a maioria das reaes qumicas, a velocidade
das reaes catalisadas por enzimas aumenta geralmente com a temperatura,
dentro de certa faixa de temperatura na qual a enzima estvel e mantm
atividade integral, at que se atinja a temperatura tima. A partir dessa
temperatura, a atividade enzimtica diminui medida que a temperatura
elevada, uma vez que as enzimas so desnaturadas pelo calor. Entretanto,
uma vez que a desnaturao um processo dependente do tempo, o formato
do grfico de atividade enzimtica X temperatura depender da quantidade
de tempo que a enzima foi mantida em determinada temperatura.

II.A.3. Concentrao de substrato

A formao e ruptura de ligaes qumicas por uma enzima so
precedidas pela formao de um complexo enzima-substrato. Em concentrao
constante da enzima, a velocidade de reao aumenta com o aumento da
concentrao de substrato at que a velocidade mxima alcanada. Em
concentrao de substrato suficientemente alta, os centros catalticos
esto cheios e assim a velocidade da reao alcana um mximo.
 55

II.A.4. Concentrao de enzima

Dentro de limites bastante amplos, a velocidade de uma reao
enzimtica proporcional concentrao de enzima. Este princpio pode
ser aplicado a uma grande variedade de enzimas, desde que no haja
interferentes na reao e a concentrao de substrato seja mantida
constante.

II.A.5. Presena dos cofatores e/ou coenzimas

Algumas enzimas no requerem nenhum grupo qumico, alm de seus
resduos de aminocidos para sua ao outras requerem um componente
qumico adicional chamado de cofator, os quais so ons inorgnicos como:
Fe2+, Mg2+, Mn2+ ou Zn2+, Cl-; chamado de coenzima se for uma molcula
orgnica complexa ou uma molcula metalorgnica. Algumas enzimas requerem
ambos a coenzima e o cofator para sua atividade.
Atividade Enzimtica

Atividade Enzimtica
Atividade Enzimtica

A B C
Relativa

Relativa

Relativa
0 2 4 6 8 10 0 10 20 30 40 50 60 70
Concentrao de Substrato
pH temperatura (C)
Atividade Enzimtica
Atividade Enzimtica

D E
Relativa

Com NaCl
Relativa

Sem NaCl

Concentrao da Enzima Tempo

Quadro 1. Exemplos da influncia de diferentes fatores na atividade da

amilase salivar. A: pH. B: temperatura. C: concentrao de substrato. D:
concentrao de enzima. E: presena do cofator.
 56

BIBLIOGRAFIA

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Ltda., 1a edio, So Paulo, SP, 1996.

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