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FILIAL NORTE
Gua de prcticas
2017-II
Responsable Blgo Lezama Vigo, Hlmer, MSc
Profesores Blgo. Murrugarra Bringas, Victoria, Mg. (Coordinador)
Blgo. Nolasco Crdenas, Oscar, MSc.
Ing.Qum. Quionez Chapon,Liliana
Md. Soto Cabanillas, Rosario
Qum. Pumachagua Huertas, Rodolfo
Md. Llimpe Mitma, Rafael
Md. Gordillo Carbonel, Johnny
Blgo. Loayza Estrada, Carolina
Md. Snchez Castillo, Jampieer
Blgo. Quionez Esquerre, Jess
Blgo. Morales Ramos, Jorge, Mg
APELLIDOS, NOMBRES:_________________________________________
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INTRODUCCIN
La biologa es la ciencia de la vida que estudia la estructura y funcin de los organismos vivos y sus
componentes. Las aplicaciones de la investigacin bsica en biologa molecular son numerosas, desde la
tecnologa para trasplantar corazones, manipular genes, disear frmacos contra microorganismos
patgenos hasta actividades como incrementar la produccin mundial de alimentos.
La gua de prcticas del curso de Biologa Celular y Molecular tiene como objetivo entrenar al
estudiante en los procedimientos de laboratorio y desarrollar su pensamiento cientfico, de manera que lo
lleve a comprender los trminos bsicos de la Biologa Molecular.
El estudiante debe emplear esta gua en cada prctica de laboratorio y estar informado sobre la
prctica que se llevar a cabo en cada sesin, anticipadamente.
La gua se ha dividido en tres partes de acuerdo a cada evaluacin parcial. La primera parte
comprende la clula y componentes celulares. La segunda parte incluye procesos celulares como
respiracin, permeabilidad, divisin celular y la visualizacin de organelas. En la tercera parte se analizara
el proceso de meiosis, comprensin del cdigo gentico y tcnicas de manipulacin de cidos nucleicos.
El alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada prctica. As mismo debe
presentar su gua de prctica terminada la misma, con las actividades requeridas en la sesin de prctica,
debidamente desarrolladas.
PROGRAMACIN DE CONTENIDO
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PRCTICA N I.1
(SEMANA 1)
BIOSEGURIDAD
El trabajo en el Laboratorio requiere de la observacin de una serie de normas de seguridad que
eviten posibles accidentes debido al desconocimiento de lo que se est haciendo o a una posible
negligencia de los alumnos que estn en un momento dado, trabajando en el Laboratorio.
A continuacin se enumeran una serie de medidas e indicaciones de seguridad que deben tomarse
durante las prcticas de laboratorio.
NORMAS PERSONALES
1. Lea con atencin, antes de cada prctica, las indicaciones de su gua. Siga todas las instrucciones a
menos que el profesor realice alguna modificacin.
2. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Se trabajar con
cuidado y de manera organizada. As mismo se mantendr cada mesa de trabajo limpia, seca y
ordenada.
3. Es obligatorio la utilizacin de mandil que le cubra brazos, piernas, torso y pies. Estn prohibidos el
uso de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos cortos, etc. en el laboratorio. La persona
inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio no podr ingresar.
4. No se debe llevar las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar contaminadas.
5. Si tienes el pelo largo, deber estar recogido.
6. Est terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas y comer.
7. En caso de derrame, accidente o dao avise inmediatamente al profesor.
8. Al trmino de cada prctica limpiar el rea de trabajo y lavar los materiales utilizados con agua de
cao. Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabn. Finalmente cerciorarse que las llaves de
gas y agua estn cerradas.
REACTIVOS QUIMICOS
1. Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos qumicos peligrosos que puedan salpicar o
derramarse.
2. Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de su necesidad, fijarse bien en el rtulo.
3. Como regla general, no coger ningn producto qumico. El profesor o profesora te lo proporcionar.
4. Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor.
5. Es muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se viertan en la pila de desage,
aunque estn debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
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6. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos.
7. No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succin.
8. Los cidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el cido
sobre agua.
9. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay
que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama.
10. Manipule con precaucin los solventes voltiles e inflamables como el ter, acetona y metanol.
Nunca evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de condensacin
eficiente.
11. Si se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate inmediatamente con mucha agua y
avisa al profesor.
12. Al preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado convenientemente.
13. Encienda fuego en el laboratorio solo si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona
que encienda el fuego debe primero verificar que no exista otra persona que este trabajando con
solventes inflamables en el laboratorio.
MATERIAL DE VIDRIO
-Ten sumo cuidado y cercirate que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningn compaero.
Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo que podras ocasionar un accidente.
-Calienta por la pared lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente (mira la
figura).
EQUIPOS ELCTRICOS
1 Manipule cualquier equipo elctrico con las manos secas y asegrese que el rea de trabajo tambin
este seca.
2 Ningn cordn elctrico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
3 Cuando desconecte algn equipo del tomacorriente, jlelo por el enchufe y no por el cordn.
UTILIZACION DE BALANZAS
1 Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza, se colocar papel sobre los platos
de la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizar una luna de reloj.
2 Se debe evitar cualquier perturbacin que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes,
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aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.
MANIPULACIN DE ESPECMENES
1 Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con cuidado extremo.
Siempre utilice tcnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estriles, etc.).
2 Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.
BARRERAS DE CONTENCION
Los laboratorios presentan diversas barreras de contencin que previenen el escape y dispersin
de agentes biolgicos de riesgo.
Barrera primaria: Es aquella que protege al personal y al ambiente inmediato del agente de riesgo
(vestimenta de uso exclusivo, cabina de bioseguridad y equipos provistos de dispositivos de seguridad).
Barrera secundaria: Es aquella que protege el ambiente externo contra los agentes de riesgo (diseo del
laboratorio e implementacin de equipos de seguridad de acuerdo al nivel de Bioseguridad).
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Barrera qumica: Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del contacto con substancias
irritantes, nocivas, txicas, corrosivas, lquidos inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes
oxidantes y sustancias explosivas. En este caso se recomiendan una cabina de seguridad qumica.
Barrera fsica: Son dispositivos o sistemas de proteccin individual o colectiva que protegen contra las
radiaciones ionizantes, no ionizantes, ruidos, carga calrica, quemaduras y vibraciones excesivas.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD
De acuerdo con el nivel de riesgo, el tipo de laboratorio, la barrera de contencin requerida, los
procedimientos y tcnicas a usar, se han establecido los siguientes niveles de Bioseguridad.
Nivel de Bioseguridad II: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio
bsico, por personal adiestrado en el manejo de agentes de riesgo del grupo II. Es similar al nivel I y en l
se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel I en las
siguientes caractersticas:
1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes patgenos.
2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est realizando algn trabajo.
3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzo cortantes contaminados.
4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en
cabinas de trabajo microbiolgico.
Nivel de Bioseguridad III: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de
contencin. El personal debe contar con adiestramiento especfico para el manejo de agentes de alto
riesgo clasificados en el grupo de riesgo III. En el laboratorio se realiza trabajo con agentes que pueden
causar un dao serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos.
El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al operador y al
ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin siguiendo
protocolos rigurosos. Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a
impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente.
Nivel de Bioseguridad IV: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de
contencin mxima. Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos clasificados en el
grupo de riesgo IV por representar un alto riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para
la vida. Los agentes nuevos que presentan caractersticas antignicas, patognicas u otras similares a
agentes de nivel III y IV son confinados a nivel IV hasta que exista suficiente informacin cientfica para
establecer a cual grupo de riesgo pertenecen.
El personal que trabaja en los laboratorios de nivel IV tiene entrenamiento especfico y extensivo en el
manejo de agentes infecciosos, y cuenta con entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y
controlado. El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al
operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de
proteccin de caractersticas superiores a las exigidas para el trabajo en un laboratorio de nivel III. Los
trajes estn diseados para cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiracin individual
asociado y una leve sobrepresin interna para evitar as la entrada accidental de partculas infecciosas.
Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes
nocivos escapen al ambiente.
TIPOS DE LABORATORIOS
En relacin con el grado de riesgo los laboratorios combinan las caractersticas de diseo,
construccin, medios de contencin, equipo, prcticas y procedimientos de operacin necesarios para
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trabajar con agentes patgenos de los distintos grupos de riesgo. De esta manera los laboratorios se
clasifican en 3 categoras:
Laboratorio bsico: Dividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad 1;y el de nivel de bioseguridad 2;
Laboratorio de contencin: con nivel de bioseguridad 3, y
Laboratorio de contencin mxima: con nivel de bioseguridad 4.
TRABAJO GUIADO
1.-Complete los nombres de los distintos smbolos de bioseguridad que se presentan a continuacin.
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FIRMA/ SELLO
FECHA ACTITUDINAL MATERIAL PARTICIPACIN
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PRACTICA N I.2
(SEMANA 2)
MICROSCOPA Y ENFOQUE DE
MUESTRAS
I. FUNDAMENTO
MICROSCOPIO COMPUESTO
El microscopio es un instrumento ptico que se compone de una serie de lentes para conseguir
imgenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeez no son visibles al ojo humano.
Dado que la imagen del microscopio no es real sino virtual, se han determinado algunos trminos
de medida microscpica:
El mximo poder de resolucin del microscopio ptico es de 0,2 micrmetros (0,2 m), debido a
que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 m) es un factor limitante. El ojo humano tiene un
poder de resolucin de aproximadamente 100 micrmetros.
El lmite de resolucin puede definirse como la distancia mnima que debe existir entre dos puntos
para que se puedan distinguir como separados. El lmite de resolucin se puede calcular a partir de la
siguiente ecuacin:
K
L.R. = --------------- K = constante = 0.61
A.N
= longitud de onda de luz AN = apertura numrica de cada lente
objetivo es su capacidad para captar la mxima cantidad de la luz
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difractada por el objeto. Depende del ndice de refraccin del medio.
Recuerda: A menor lmite de resolucin mayor ser el poder de resolucin
Resolucin y magnificacin Mximas
II. OBJETIVOS
En el laboratorio encontrars:
- Microscopio compuesto
- Aceite de inmersin
- muestras fijadas
IV. PROCEDIMIENTO.
Se reconocern las partes de un microscopio ptico. Sealar las partes del mismo en el dibujo adjunto.
Objetivos: sistema de lentes convergentes que acta como una lente que se encuentran montados en el
revolver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos ( 4x,
10x, 40x, 100x) los que se clasifican en:
Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y
forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto nmero de veces (X veces,
segn se indica en el propio ocular). Los aumentos ms comunes son 10X y 16X.
2.-SISTEMA DE ILUMINACIN.
Condensador: Sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparacin.
Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.
3.-SISTEMA MECANICO
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Tubo ptico: Cilndrico ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos
montados en el revlver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa.
Revlver: Pieza metlica situada en la parte inferior del tubo que por rotacin sita los diferentes
objetivos en posicin de trabajo.
Platina: Superficie plana con una perforacin central para permitir el paso de la luz hacia preparacin.
Posee un carro que sostiene la preparacin y que puede desplazarla hacia delante y hacia el
lado izquierdo o hacia el lado derecho.
Base o Pie: Estructura slida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento.
Columna: Vstago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el mecanismo
de movimiento del mismo.
NOTA IMPORTANTE. Presta mucha atencin al manejo del microscopio que tienes a tu cargo. Debes
hacerlo cuidadosamente porque son aparatos muy delicados y dejars a consigna tu documento de
identificacin.
TRABAJO GUIADO
1.- Indique todas
las partes del microscopio
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FIRMA/ SELLO
FECHA ACTITUDINAL MATERIAL PARTICIPACIN
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PRACTICA N I.3
(SEMANA 3)
La coloracin implica la penetracin del colorante por fenmeno osmtico y su fijacin se debe a
fenmenos de absorcin de partculas o iones. Qumicamente la coloracin es la unin de las molculas
del colorante con los elementos constituyentes de la clula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino
y se tien con los colorantes cidos; otros tienen pH cido y se tien con colorantes bsicos. Sin embargo
es necesario sealar que tanto el ncleo como el citoplasma tienen caractersticas anftericas de manera
que se pueden teir, el ncleo con algunos colorantes cidos y el citoplasma con algunos colorantes
bsicos.
Los preparados microscpicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que
tienen por objeto identificar en forma rpida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la
finalidad de resolver algn problema de inters particular. Los preparados microscpicos ms frecuentes
en Biologa son:
Preparados en fresco
Preparados en seco
Los preparados en Fresco son preparaciones microscpicas acuosas, que se caracterizan por que
la sustancia examen, no est adherida de un modo fijo a la superficie de la lmina portaobjeto y por lo
tanto, al ser manipulada sta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el
preparado.
Los preparados en seco son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensin, fijacin y
coloracin), y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lmina
portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada sta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la
muestra.
II. OBJETIVO.
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2. Realizar coloraciones con muestras biolgicas
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio.
- Microscopio ptico - Safranina
- Pipetas pasteur - Eosina
- Goteros - Violeta de genciana
- Agua destilada - Wright
- Mechero - Fucsina
- Azul de metileno - Verde de Janus
- Giemsa - Hematoxilina
IV. PROCEDIMIENTO
PREPARADOS EN FRESCO
1. Colocar una gota de agua estancada en una lamina
2. colocar una laminilla cubreobjetos
3. observar
PREPARADOS EN SECO
1. Colocar la muestra en la lamina
2. Realizar la coloracin respectiva
3. Secar al medio ambiente
4. observa la microscopio
PARTE 2: OBSERVACIN Y
RECONOCIMIENTO DE CLULAS
PROCARIOTES
I. FUNDAMENTO
La principal caracterstica de la clula procariota es que carece de ncleo celular. Las bacterias,
los organismos procariotes ms representativos, comprenden
por una parte, especies de importancia mdica puesto que
producen una serie de infecciones y padecimientos en el
hombre y en los animales pero, por otra parte, una gran
mayora representa beneficios para la agricultura, la industria y
la salud humana y animal.
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GRAM POSITIVAS: se tien fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloracin violeta.
GRAM NEGATIVAS: se tien muy superficialmente por lo que fcilmente se decoloran con solventes
orgnicos. Se utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste,
adquiriendo una coloracin rosada.
II. OBJETIVOS
Reconocer los distintos tipos de bacterias segn se tian o no con la Tincin Gram.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio:
Microscopio ptico - Alcohol acetona
Soluciones para la tincin: - Fucsina o safranina
- Violeta de genciana
- Aceite de inmersin
- Lugol
- Mechero de alcohol
IV. PROCEDIMIENTO
La tincin Gram se realizar sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre que los alumnos
traern.
El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas
(cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el
tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica
con el enfoque del microscopio.
El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la fermentacin espontnea del
vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La acetificacin del vino es producida por bacterias
aerbicas del cido actico, principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.
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El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Est
constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que
se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose
observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
Realizar los siguientes pasos para la tincin Gram de cada una de las 3 muestras indicadas.
PARTE PRACTICA
1.- completar el grafico
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2.-Dibuje todas las muestras observadas en la prctica
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
FIRMA/ SELLO
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PRACTICA N I.4
(SEMANA 4)
OBSERVACIN DE
CLULAS EUCARIOTES
I. FUNDAMENTO
En 1939, en base a observaciones realizadas por los cientficos alemanes Schleiden y Schwan, se
plasm la teora celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biolgicas. Esta teora postula
que los cuerpos de todos los animales y vegetales estn formados de clulas y que solo pueden
aparecer nuevas clulas por divisin de las clulas preexistentes. De ah que los organismos por muy
sencillos que sean estn constituidos por unidades vivas denominadas clulas.
II. OBJETIVOS
Observar y caracterizar clulas eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa bucal).
Observar y caracterizar clulas eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
Microscopio ptico Formol
Cubeta de tincin Eosina
Lugol Sudan III
Frasco lavador
Mechero de Alcohol Cubeta de tincin
Alcohol absoluto
Lanceta estril
Hematoxilina
Lminas portaobjeto y cubreobjeto
Cebolla Gotero
Hisopos Bistur u hoja de afeitar
Tocino Levadura de pan
Agua estancada en frasco oscuro
Materiales de diseccin: tijera, pinza, estilete.
IV. PROCEDIMIENTO
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coloreadas.
1 Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana
epidrmica que cubre la parte interna de la cebolla y extindala en el portaobjetos.
2 Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porcin de medio centmetro cuadrado, cbrala con una
gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio.
3 Reconozca las partes de la clula vegetal.
1 Coloque una gota de agua estancada sobre un porta objeto y cubran con una laminilla.
2 Observe con el objetivo de menor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma, tamao y movimiento de los organismos unicelulares (ver figura adjunta).
1 Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) con agua destilada, en un tubo
de ensayo.
2 Observe con el objetivo de mayor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma y tamao de estos organismos.
El azul de metileno tie intensamente el ncleo y con menos color el citoplasma de las clulas. ste
suele ser algo granuloso.
El Sudan III es un compuesto que tie lpidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que contiene
gran cantidad de grasas, se observarn los adipocitos teidos por el Sudan III.
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un solo ncleo que ocupa casi todo el glbulo. -Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes
normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis. -
Polimorfonucleares: ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinfilos, con abundantes
granulaciones teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos.
Los eosinfilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el ncleo teido de color azul marino.
Estos glbulos aumentan su nmero en caso de parasitosis o procesos alrgicos.
Los basfilos presentan un ncleo teido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy
oscuro. -Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial de tincin.
Efecta los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina:
1 Con ayuda de una lanceta desechable, realice una puncin del pulpejo del dedo anular de la mano
izquierda, previa desinfeccin con algodn y alcohol.
2 Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto
3 Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posicin totalmente horizontal.
1 Coloree con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo
nmero de gotas de agua destilada y mezclar rpidamente, soplando suavemente hasta que se
forme una capa plateada.
2 Dejar reposar la mezcla por 8 - 10 minutos, observando la intensidad de color.
3 Lave con agua corriente y dejar secar al medio ambiente, si es posible con la lamina en forma
vertical.
4 Observe al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observacin de las clulas y ncleos.
5 Diferencie las diferentes formas de ncleo en los neutrfilos, basfilos eosinfilos, monocitos y
linfocitos.
6 Dibuje cada forma de ncleo.
1 Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y
dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin.
2 Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del
colorante agregando ms lquido.
3 Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto.
4 Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
5 Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.
6 Observar al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observacin de las clulas y ncleos.
DESARROLLO
1.- Por qu los eritrocitos se tien con Eosina y los Leucocitos con Hematoxilina?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________
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3. Dibuje las distintas muestras observadas en la prctica
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
FIRMA/ SELLO
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21
PRACTICA N I.5
(SEMANA 5)
OBSERVACIN DE
PERMEABILIDAD CELULAR
I. FUNDAMENTO
El volumen celular cambia cuando el agua penetra o sale de la clula por un proceso denominado
osmosis.
En trminos osmticos las soluciones o medios separados por una membrana se pueden clasificar
como hipertnicas, isotnicas e hipotnicas; se dice que un medio es hipertnico, cuando la concentracin
del soluto en la solucin es mayor en relacin con otro medio de solucin. Por ejemplo, si tenemos dos
soluciones, la solucin 1 con agua destilada y la solucin 2 con una solucin de azcar al 10%, se dice
que la solucin 2 de azcar es hipertnica en relacin a la solucin 1. Por el contrario, la solucin 1 es
hipotnica en relacin a la solucin 2 azucarada, es decir que la concentracin del soluto es menor en
relacin con el otro medio. Y una solucin isotnica, se cuando la concentracin de soluto es igual a la
concentracin de soluto de la otra solucin.
II. OBJETIVO.
III. MATERIALES
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Encontrars en el laboratorio.
- Microscopio ptico - Agua destilada
- Tubos de ensayo - Algodn
- Gradillas - Marcador de vidrio
- Solucin hipotnica NaCl 0.065 M - Ligadura
- Solucin hipertnica NaCl al 2% - Alcohol corriente
-Azul de metileno
- Solucin isotnica de NaCl al 0.9% (suero fisiolgico)
IV. PROCEDIMIENTO
Parte A
2 Obtener 2ml de sangre venosa con la lanceta hematolgica en un tubo limpio con heparina
3 Dejar caer 5 gotas de sangre en cada uno de los tubos con un gotero.
4 Agite los tubos y dejar en reposo durante 2 3 minutos.
5 Con un gotero coloque en una lmina portaobjeto una gota de cada uno de los tres tubos.
6 Luego examine en el microscopio su aspecto. Observar qu efecto ha tenido las distintas soluciones
sobre la morfologa del eritrocito y explicar por qu.
Parte B
1. Colocar los tres huevos en un vaso de precipitacin de 1 litro y verter el vinagre hasta cubrir
completamente los huevos. Debe realizarse este proceso 48 horas antes de la prctica.
2. Al momento de la prctica lavar con mucho cuidado con agua de cao.
3. Frotar cuidadosamente con los dedos para sacar la cscara por el lado de cmara de aire. Realizar
este proceso hasta tener casi un tercio del huevo libre de cscara.
4. Coloquen agua de cao en uno de los vasos de precipitacin de 100ml y ubiquen all uno de los
huevos. El agua debe cubrir al huevo.
5. En otro vaso de precipitacin colocar un huevo en la mezcla muy concentrada de sal en agua y colocar
all otro de los huevos.
6. Llenar el tercer vaso con agua destilada y poner all el tercer huevo.
7. en cada frasco se adicion unas gotas de agua de metileno
8. Dejar por una hora y observar membrana y el contenido interno del huevo.
NOTA: En todos los vasos de precipitacin, los huevos deben quedar sumergidos en el lquido.
DESARROLLO
1. Mencione y dibuje las diferencias encontradas en cada uno de los huevos sometidos a cada proceso.
TABLA: Observacin de resultados
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Solucin de Sal Agua de cao Agua destilada
Huevo
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
FIRMA/ SELLO
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24
PRACTICA N I.6
(SEMANA 6)
El hialoplasma es un medio dinmico, ya que puede pasar del estado de sol a gel acumulando
molculas que establecen enlaces entre si y aumentando la viscosidad; pueden invertirse el proceso
pasando el hialoplasma a sol al diluirse hasta que se separan las molculas, esto permite la creacin de
corrientes internas o Ciclosis y algunas clulas pueden emitir prolongaciones del citoplasma o
SEUDOPODOS como rganos de desplazamiento.
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontraras en el laboratorio
- microscopio compuesto
- Lugol
- Hoja de Elodea
IV. PROCEDIMIENTO
Todas las funciones intracelulares (sntesis de protenas, replicacin de DNA y rutas metablicas
en general) son realizadas gracias una compleja organizacin de las organelas. Una clula eucariota
tpica contiene organelas membranosas (retculo endoplasmtico, aparato de golgi, peroxisomas,
mitocondrias, etc.) y organelas no membranosas (ribosomas, proteosomas, etc.). Todas ellas efectan
una funcin puntual en la clula que le permite su supervivencia y replicacin.
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio:
- Microscopio ptico
- Verde de Janus
- Agua destilada
- Lugol
- Gotero
IV. PROCEDIMIENTO
La pulpa del tomate nos muestra las clulas generalmente bastante sueltas unas de otras. En el
citoplasma se percibe una serie de grnulos rojizos-anaranjados que son los cromoplastos. El ncleo
puede llegar a observarse por su tpico aspecto y tamao. Es frecuente la presencia de grnulos de
almidn de forma arrionada. En las clulas menos alteradas por la compresin se ven grandes
vacuolas incoloras.
1 Cortar con el bistur un pequeo trozo de uno o dos milmetros de grosor, de la parte pulposa del
tomate.
2 Llevarlo sobre un portaobjetos, sin poner agua.
3 Poner el cubre-objeto y comprimir suavemente la preparacin.
4 Observar al microscopio
1 En un portaobjetos coloque una porcin pequea de hoja de Elodea y agregue una gota de agua.
2 Cubrir la muestra con una lmina portaobjetos.
3 Aprecie la forma de los cloroplastos y el movimiento de estos.
26
1 Preparar un frotis de epitelio bucal con un hisopo.
2 Secar al medio ambiente.
3 Agregar unas gotas de Verde de Janus y dejar reposar por 3 minutos.
4 Elimine el exceso del colorante con agua destilada.
5 Observe al microscopio y describa la forma de las mitocondrias en la clula.
PARTE PRACTICA
1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la prctica. Mencionando el aumento total.
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
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FECHA ACTITUDINAL MATERIAL PARTICIPACIN
PROFESOR
27
PRACTICA N II.1
(SEMANA 7)
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Las enzimas son protenas cuya funcin es acelerar (catalizar) reacciones qumicas que ocurren
dentro de la clula y que en ausencia de ellas no se llevaran a cabo o de lo contrario tomaran
muchsimo tiempo. Como se aprecia en la siguiente figura, las enzimas son especficas para sus
sustratos, los cuales quedan unidos complementariamente al sitio de unin de la enzima donde son
modificados enzimticamente, liberndose al final de la reaccin los productos respectivos.
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La
funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una
molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo
descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. La reaccin de la catalasa sobre el
H2O2, es la siguiente:
II. OBJETIVO.
2.1 Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
- Gradillas
28
- Pipetas-tubos de ensayo
- Hgado de pollo
- Agua oxigenada
IV. MTODOS
Mediante esta experiencia vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina, presente
en la saliva. Esta enzima acta sobre el polisacrido almidn, hidrolizando el enlace O-glicosdico, por lo
que el almidn se terminar por transformar en unidades de glucosa. Es importante que recuerdes las
reacciones caractersticas de glcidos para comprender esta experiencia.
II. OBJETIVOS. Comprobar que slo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan
ptimamente catalizando una reaccin enzimtica con su sustrato.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio.
- tubos de ensayo - Bao mara
-gradillas - Vaso de precipitados
-solucin diluida de almidn y sacarosa - Lugol
IV. MTODOS
Nota: Para ayudarte y formar ms saliva, piensa en un limn o en algo que te apetezca mucho comer...
As favoreces que se forme ms saliva.
DESARROLLO
29
1.-En qu parte de las clulas encontramos la enzima catalasa y cul es la funcin de dicha enzima?.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
5. Dibuje las reacciones observadas en la prctica. e incluya alguna observacin a sus resultados
________________________
________________________
________________________
________________________
__________________________
__________________________
__________________________
__________________________
FIRMA/ SELLO
FECHA ACTITUDINAL MATERIAL PARTICIPACIN
PROFESOR
30
SEMANA DE EVALUACIONES
(SEMANA 8)
SEMANA DE LA MEDICINA
(SEMANA 9)
PRACTICA N II.2
(SEMANA 10)
METABOLISMO
ANAEROBIO:
FERMENTACIN ALCOHLICA
I. FUNDAMENTO
La fermentacin, por el contrario, es un proceso anaerobio que implica la ruptura de alimentos por
un proceso de degradacin qumica que no requiere oxgeno. Los alimentos no son degradados
completamente hasta CO2 y H2O (como ocurre en la respiracin), sino hasta compuestos intermedios
tales como cido lctico (fermentacin lctica) o alcohol (fermentacin alcohlica). Esta ruptura
incompleta de los alimentos significa que menos energa es disponible durante la fermentacin que el
31
liberado durante la respiracin.
Ambos procesos pueden tomar lugar en las clulas a la vez. Adems, los primeros pasos en la
ruptura de la glucosa en la respiracin, son anaerbicos.
Anaerbica
Glucosa cido lctico
Aerbica
Glucosa CO2 + H2O
Ciertas bacterias y hongos derivan todo sino parte de su energa de la fermentacin y los
productos finales son frecuentemente el alcohol y CO 2, el proceso en este caso es denominado
fermentacin alcohlica. Las levaduras y bacterias, las cuales conducen a la fermentacin son capaces
de emplear sus sistemas enzimticos para liberar energa anaerbicamente a partir de carbohidratos,
particularmente almidn y azcar.
GLUCOSA
1 ETANOL
II. OBJETIVOS
2.1 Comprobar que ante la presencia de oxgeno, el azcar es oxidado hasta CO 2 y agua.
2.2 Comprobar que en ausencia de oxgeno, el azcar es convertido en etanol y CO 2 por las
levaduras, mediante el proceso de fermentacin alcohlica.
2.3 Comparar cualitativamente un proceso fermentativo vs. Respiracin.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
-Tubos de ensayos -Reactivo de Fehling A y B
- Gradillas - Bao Maria
- Probetas -Algodn -Tiras de medidas de pH -Dicromato de potasio
-Soluciones al 2% de fructosa, glucosa, almidn y sacarosa
-Acido sulfrico diluido
IV. MTODOS
Fermentacin alcohlica
32
1. Preparar los tubos como lo indica la tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5 6
2. La muestra con glucosa sola nos servir para realizar la reaccin de Fehling y comprobar que es
glucosa por su poder reductor.
3. Para colocar la levadura en el tubo, previamente se tiene que disolver una punta de esptula de
la cepa de panificacin de Sacharomyces cerevisae en un poco de agua.
4. Llenar los tubos cuidando que no queden burbujas de aire, para conseguir un ambiente de
anaerobiosis. Colocar un globo en la boca de los tubos para que el sistema quede cerrado
hermticamente.
5. Llevar todos los tubos a 37C por 30 min.
6. Anotar la formacin de CO 2 para cada tubo (La fermentacin se evidenciar por la presencia de
burbujas en el tubo y el globo hinchando, debido a la produccin de CO 2.
7. Detectar la presencia de glucosa aplicando reactivo de Fehling A y B, llevando a Bao Maria por
8 minutos
8. Medir el pH del medio.
9. Opcionalmente, el profesor del grupo detectar cuidadosamente la presencia de etanol en las
muestras. Hay que tener mucho cuidado porque hay que manipular cido sulfrico y puede ser
peligroso el manejarlo. Se tomarn 2 ml. de la solucin del tubo hermticamente cerrado y la
ponemos en otro tubo de ensayo. Aadimos unos cristalitos de dicromato potsico y a
continuacin 2 ml. de acido sulfrico diluido. Al calentar al bao Mara debe formarse un
compuesto aromtico caracterstico, y se pone de manifiesto porque cambia de color de
amarillento a verdoso. Es una reaccin que nos indica que existe etanol.
10. Observar, comparar y discutir los resultados de los experimentos planteados.
DESARROLLO
1.- Complete el dibujo y la tabla.
.
33
CO2
glucosa
pH
etanol
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
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34
PRCTICA N II.3
(SEMANA 11)
FECUNDACIN
I. FUNDAMENTO
El vulo es una clula redonda de gran tamao. Posee un ncleo donde se alojan los
cromosomas portadores de la informacin gentica materna, y un citoplasma que posee sustancias
nutritivas para alimentar al embrin en sus primeras etapas, en el caso de que ocurra la fecundacin.
a) Fecundacin EXTERNA, cuando tanto el macho como la hembra liberan sus gametos al medio
externo, que es el agua, de manera que los espermatozoides nadan en el agua hasta encontrar a los
vulos. Es lo tpico de todos los animales invertebrados acuticos, y en los vertebrados se da en los
peces y en los anfibios.
35
dimorfismo sexual de modo que externamente no se les puede diferenciar a las hembras de los
machos. Las gnadas femeninas son de color rojo vinoso y las gnadas masculinas son de color
amarillo grisceo. En ambos casos se encuentran en las zonas interambulacrales (celoma) ubicado
en el interior del hemisferio superior. A travs de las glndulas genitales (5), las gnadas se
comunican al exterior mediante el poro genital, por donde son derramados los huevos. La
fecundacin es externa porque los gametos se encuentran fuera de la cavidad genital y el vulo se
fecunda externamente.
II. OBJETIVOS
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
- Microscopio
- Placa Petri
- Pipeta
- Bagueta
Traer el alumno
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Goteros
- Materiales de diseccin: tijera, pinza, estilete.
- Erizos de mar VIVOS en baldes con tapa y con agua de mar
IV. PROCEDIMIENTO
1. Usando el material de diseccin, cortar las pas del erizo a nivel del ecuador todo el contorno radial e
introducir la punta de la tijera para perforar y cortar transversalmente el caparazn por la zona
cortical, obteniendo 2 mitades: el aboral y el ventral; en el aboral (lado superior) en las placas
interradiales (5) del celoma es donde se encuentra las gnadas en sus respectivas masas genitales
de color crema para los MACHOS y rojo vinoso para las HEMBRAS.
2. Luego echar las gnadas en un petri con agua de mar y con la ayuda de una bagueta se trozan los
ovarios para liberar los vulos. En otro cristalizador, se hacen exactamente lo mismo con los
testculos
1. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con vulos y observar su forma y color
36
2. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con espermatozoides y observar su forma, tamao,
flagelo, etc.
3. Despus de observar esta preparacin coloque una gota del colorante cristal violeta sobre los
gametos masculinos y observe nuevamente
4.3 Fecundacin
1. De las muestras obtenidas, coloque en un portaobjeto una gota con vulos y otra con
espermatozoides y mezclar.
3. Observar con detenimiento los cambios que sufre el vulo una vez fecundado.
DESARROLLO
1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la prctica. Mencionando el aumento total.
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
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37
PRACTICA N II.4
(SEMANA 12)
DIVISIN CELULAR:
MITOSIS y MEIOSIS
PARTE I MITOSIS
I. FUNDAMENTO
II. OBJETIVOS
38
Reconocer las distintas fases del ciclo celular en clulas somticas de raz de cebolla.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
- Placa Petri
- Orcena actica
- Pinza de madera
- Microscopio
- Mechero de alcohol
- Acido Actico
- Etanol
IV. PROCEDIMIENTO
Preparacin de la Muestra
1 Disponer de gran nmero de races de cebolla, haciendo cortes de la parte terminal
(aproximadamente de 0.5cm.) y depositar en una placa Petri.
2 Colorear con orcena por 10 minutos: contiene orcena A que interrumpe el proceso si se est dando
en ese momento y reblandece la unin de las clulas muertas, as como orcena B que tie la
cromatina o material hereditario.
3 Luego calentar la muestra slo hasta que emane vapores por 2 veces consecutivas con intervalos de
enfriamiento.
4 Trasladar las races a diferentes portaobjetos, separar solo el pice (parte terminal de la raz) y
agregar una gotita de orcena y cubrir con el cubreobjeto.
5 Apretar la muestra suavemente con la yema de los dedos.
6 Secar el exceso de colorante con papel secante y llevar al microscopio para su observacin a menor
y mayor aumento.
7
39
Anafase Tarda Telofase Temprana Telofase Tarda Citocinesis
DESARROLLO
1.- dibuje las muestras observadas.
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
40
PARTE II. MEIOSIS
I. INTRODUCCIN
La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproduccin sexual, por el cual, la clula madre de
naturaleza diploide, da origen a los gametos de naturaleza haploide, de tal manera que en la
fecundacin se reestablece el nmero diploide de cromosomas. As, mientras la mitosis es un proceso
de divisin celular con formacin de dos ncleos hijos con el mismo nmero de cromosomas que la
clula original, en la meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reduccin del nmero de
cromosomas a la mitad.
La meiosis es un proceso citolgico que comprende dos divisiones celulares. En la primera divisin
meitica ocurre una serie de intercambios de material gentico entre los cromosomas homlogos. Este
fenmeno es un proceso complejo que comprende una larga profase en la que, para su mejor estudio y
comprensin, se distinguen los estadios: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis. Entre
la telofase I y el comienzo de la segunda divisin meitica, a diferencia con la mitosis, no hay un perodo
de sntesis y duplicacin del ADN, por lo dems la divisin meitica II, tiene lugar como la mitosis normal
en cada una de las clulas haploides (meiocitos de segundo orden), resultantes de la divisin meitica
I.
II. OBJETIVOS: Al finalizar la presente prctica los alumnos estarn capacitados para:
2.1 Reconocer y diferenciar los estados fisiolgicos por los que atraviesan los cromosomas
durante el proceso meitico en clulas animales.
- Microscopio
- Mechero de alcohol
- Cloroformo
- Carmn actico
- Carnoy
- Solucin salina 0.7%
- Placas petri
- Laminas, laminilla
- Algodn
- Papel filtro
- Estilete de punta fina
IV: PROCEDIMIENTO
- Anesteciar los animales en las placas petri, colocando dentro de un pedazo de algodn
embebido en cloroformo.
- Disecar el animal con la ayuda del estereomicroscopio o lupas, colocndolo en posicin dorsal.
Separar los testculos adicionndoles la solucin salina procurando no exponer los rganos al
aire para evitar posibles desecaciones.
- Seccionar los testculos en partes pequeas de 2 a 3 mm y colocarlos en un vial con fijador
carnoy por espacio de 30 min.
- Traspasar los fragmentos a una luna de reloj que contiene carmn actico y lleve al calor del
mechero hasta que entre en ebullicin por espacio de 15 segundos de 5 a 7 veces.
- Retire el fragmento del testculo con una pinza de punta fina y colquela sobre un portaobjetos y
agrguela una gota de carmn actico.
41
- Tape la preparacin con una laminilla cubre objetos y sobre esta ponga un papel absorbente.
Presione el cubre objetos con la yema del dedo pulgar y luego con la extremidad plana de un
lpiz presionar un poco ms fuerte hasta convertir el material del porta objetos en una capa
delgada (squash). Al realizar esta operacin, tenga cuidado para no romper el cubre objetos.
- Limpie el exceso de colorante del portaobjetos con papel higinico y lleve el preparado al
microscopio para su observacin a menor y mayor aumento.
- Observar y esquematizar.
42
1.- Dibuje las muestras observadas.
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
43
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloracin:_______ Coloracin:_______
Aumento:________ Aumento:________
FIRMA/ SELLO
FECHA ACTITUDINAL MATERIAL PARTICIPACIN
PROFESOR
44
PRACTICA N III.1
(SEMANA 13)
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la
clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido
molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene
ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor
proporcin.
1 Liberacin del ADN en forma soluble por medio de la destruccin de los sistemas membranosos de
los tejidos (membrana celular y nuclear).
2 Separacin de los complejos de nucleoprotena por denaturacin de la parte proteica.
3 Separacin del ADN de las otras macromolculas por solubilidad diferencial.
45
4 Precipitacin del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
II. OBJETIVOS
1 El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN
de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.
2 A partir de la longitud enorme de las fibras tambin se confirma que en el ncleo el ADN se encuentra
replegado.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio:
- 2 Tubos de prueba de 20 ml - Vaso de precipitacin de 500ml.
- 5 Baguetas
- 1 embudo - Medio de homogenizacin:
- Etanol helado - Lauril Sulfato de Sodio (SDS o -Hielo SLS) 50 g
- 5 Pipetas de 10ml - Cloruro de Sodio 8. 770 g
- Bao Mara - Citrato de Sodio 4.110 g
- Mortero con piln - EDTA 0.292 g
- Gasa estril
IV. PROCEDIMIENTO
Para la extraccin DE ADN del manto de choro, con etanol, seguiremos los siguientes pasos.
El mtodo para desintegrar el tejido debe estar adaptado a las caractersticas de ste. Para
grandes volmenes de tejidos blandos, suelen usarse licuadoras esencialmente iguales a las licuadoras
domsticas. Para volmenes menores, en general es suficiente un MORTERO y un piln.
Tejidos ms resistentes, como por ejemplo hueso o diente, necesitan tratamientos mecnicos
especiales. Aquellos tejidos con clulas cuya pared celular es resistente, como por ejemplo vegetales,
hongos o bacterias, requieren tambin condiciones drsticas. Uno de los mtodos ms utilizados
consiste en congelar la muestra en nitrgeno lquido y, mantenindola congelada, pulverizarla con un
mortero. As, adems de desintegrar la muestra, se logra que sta se mantenga a muy baja temperatura
durante el tratamiento, con lo cual se evita la accin de enzimas endgenas que pudieran degradar el
material de inters.
En esta prctica se emplear un mtodo de ruptura con mortero (sin congelamiento). La principal
ventaja de este mtodo es que se adapta bastante bien a tejidos muy diversos. Asimismo, dado que se
opera a temperatura ambiente, las ribonucleasas celulares pueden degradar parcialmente las molculas
de ARN. Para ayudar a la solubilizacin de los componentes celulares, a la ruptura de membranas y de
complejos proticos, la solucin de lisis contendr un detergente inico (dodecilsulfato de sodio, SDS).
Este detergente dispersa los componentes de las membranas y desnaturaliza las protenas.
La solucin de lisis contiene adems el agente quelante de cationes divalentes, EDTA. Esto
impide la accin de las ADNasas (dependientes de Mg 2+ ), aunque no tiene efectos sobre la mayor parte
de las ribonucleasas.
46
las protenas asociadas a la cromatina y por otra parte la ruptura de membranas. El NaCl produce el
estallido de los ncleos para liberar as las fibras de cromatina. El EDTA es un agente quelante que
inactiva a las DNAasas.
3 Incubar la mezcla en un Bao Mara a 60C por 15 minutos exactos. El calor ablandar el tejido
permitiendo que los componentes de la solucin homogenizadora ingrese a la clula. Adems, esta
temperatura denatura muchas enzimas que interfieren con el procedimiento.
4 Filtrar el homogenizado empleando la gasa estril
5 Enfriar rpidamente la preparacin filtrada en una cubeta con hielo, por 10 minutos a fin de detener
cualquier proceso degradativo del ADN.
1 Lentamente, agregar etanol helado por el borde interno del recipiente hasta que comience a aparecer
una consistencia blanca que significa que el ADN ha precipitado.
2 Suavemente, a medida que se agrega el etanol helado, girar enrollando a la vez con una bagueta de
vidrio.
3 Reconoce 3 fases en tu solucin: la del alcohol (que flota en agua), la de tu tejido triturado (abajo del
todo) y la interfase entre los 2 que contiene ADN precipitado.
4 Poco a poco haciendo estos movimientos en una sola direccin, se lograr apreciar el ADN en la
bagueta, asemejando una madeja de un hilo sumamente fino o como copos de algodn.
Nota importante. El producto filamentoso obtenido de esta extraccin no es ADN puro ya que,
entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se realiza aadiendo
enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se unan al ADN (protocolos de
PURIFICACIN de ADN).
SEGUNTA PARTE:
ELECTROFORESIS
I. FUNDAMENTO
47
La electroforesis en geles de agarosa es una tcnica comn en los laboratorios de Biologa
Molecular. El proceso consiste en la aplicacin de una diferencia de voltaje a una muestra de ADN que
se encuentra inmersa en un gel de agarosa, y esta a su vez en baada por un buffer determinado. La
generacin de polos opuestos provoca la migracin del ADN del polo cargado negativamente (Ctodo) al
polo cargado positivamente (Anodo), debido a que el ADN tiene una carga neta negativa.
Los geles de agarosa son el medio ms popular para separaciones electroforticas de cidos
nucleicos de mediano y gran tamao. Las concentraciones ms tpicas de agarosa van de 0.3 hasta 2.5
%, y esta concentracin depende de los tamaos de los cidos nucleicos a separar. Aunque los geles de
agarosa carecen de fuerza mecnica (especialmente los ms diluidos), la manipulacin se facilita por el
uso de geles horizontales, los cuales pueden ser soportados por lmina de vidrio o de plstico
II. OBJETIVOS
DESARROLLO
48
M 1 2
En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una muestra distinta (M, 1 y 2). Los pocillos son
hechos en el gel para introducir ah la muestra de ADN.
FIRMA/ SELLO
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49
PRACTICA N III.2
(SEMANA 14)
CDIGO GENTICO Y
TRADUCCIN DE
PROTENAS
I. FUNDAMENTO
El ARNm porta los codones, tripletes de nucletidos, que codifican para un aminocido. Mientras
que los ARNt portan los anticodones, que le indican qu aminocido van a portar y llevar hasta el
complejo ARNm-ribosomas-enzimas. El cdigo gentico es la combinacin de tripletes que tienen la
informacin necesaria para codificar un aminocido. Existen 64 codones en el cdigo gentico, que
50
codifican para los 20 aminocidos que forman las protenas y que adems contiene 1 codn de inicio de
la traduccin y 3 codones de finalizacin de la misma.
II. OBJETIVOS
- Reconocer los codones y anticodones posibles para los aminocidos que forman las protenas.
- Analizar posibles mutaciones en los codones que alteren la secuencia de una protena y con ello su
funcin.
III. MATERIALES
51
IV. MTODOS
4.3. Los siguientes problemas debern ser solucionados en clase con ayuda del profesor:
Determine:
2. la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
___________________________________________________________________________________
52
3. Utilizando la tabla del cdigo gentico, deduzca la secuencia de aminocidos que codificar dicha
cadena (considerando que se incub el ADN en un extracto crudo de clulas de reticulocitos de
conejo que contena los respectivo ARNt, enzimas, ATP, GTP, etc.)
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
La secuencia de ADN del gen de transferrina, del problema 1, ha sufrido mutaciones por el efecto
de radiaciones UV. Se secuenci el gen mutado y la secuencia obtenida fue la siguiente:
Determine:
1. La secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
____________________________________________________________________________________
Se cuenta con parte de la secuencia del gen de la protena de Fe-S, que participa en la cadena
transportadora de electrones en la mitocondria, y que es codificada dentro de la misma. La secuencia es
de la cadena de ADN codante:
. 5 CCGTCAGAACTCGAAGCTCCGGACTTAGCT 3
Determine:
FIRMA/ SELLO
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53
PRACTICA N III.3
(SEMANA 15)
ESTUDIO DE RASGOS
GENTICOS EN EL
HOMBRE
I. FUNDAMENTO
De la misma manera que en otros, algunos rasgos humanos son determinados por genes
dominantes y otros por genes recesivos. Lo rasgos dominantes generalmente se encuentran con mayor
frecuencia que los que se deben a genes recesivos. En la transmisin de la mayora de los caracteres
hereditarios, estn involucrados varios genes, pero a menudo la variacin de un solo gen, produce la
variacin de una sola caracterstica lo que da lugar a dos formas distintas de expresin.
Algunos genes (y su manifestacin) estn ligados al sexo, es decir que la caracterstica respectiva
slo se expresa en uno de los sexos. Frecuentemente el masculino (hemofilia por ejemplo). En este caso
el gen en cuestin se encuentra localizado en el cromosoma X (el cromosoma Y se considera
genticamente vaco). En otros casos la manifestacin genotpica es influenciada por el otro sexo (p.e.
calvicie, es dominante en el varn y recesivo en la mujer).
En este caso los genes respectivos estn localizados en un cromosoma autosmico, pero su
expresin est condicionada a la accin secundaria de genes ubicados en el cromosoma X.
II. OBJETIVOS
III. MATERIAL
-Espejo
-Lupa
IV. PROCEDIMIENTO
1. Con la ayuda de un espejo o de un compaero determine un fenotipo para cada uno de los rasgos
genticos descritos a continuacin. Haga sus anotaciones en su cuaderno de trabajo.
2. Cuando se trata de una caracterstica dominante, no es posible determinar con certeza el genotipo,
pues pueden estar presentes dos genes dominantes para esta caracterstica (homocigosis) o un gen
54
dominante y uno recesivo (heterocigosis). En consecuencia utilizaremos un guin (-) para representar
el alelo desconocido. En cuanto al carcter recesivo, no hay dificultad en establecer el genotipo, los
dos genes alelomrficos son recesivos. Anote su genotipo en la hoja de trabajo.
3. Tabule en la hoja de trabajo el nmero de alumnos con cada rasgo gentico estudiado DONDE SE
INCLUYA: rasgo estudiado, genes involucrados, dominancia o recesin, estado del gen expresado
(homocigoto o heterocigoto), etc.
1. Enrollar la lengua: algunas personas tienen la aptitud de enrollar la lengua en forma de U. Esto es
causado por un gen dominante (E). La gente que no posee este gen slo puede curvar la lengua
ligeramente hacia abajo.
2. Lbulos separados: un gen dominante (L) determina que los lbulos de la oreja estn separados, es
decir que no estn adheridos directamente a la cabeza. En otras personas los lbulos de las orejas
estn adheridos directamente al costado de la cabeza.
3. Pico de viuda: algunas personas muestran la caracterstica de que la lnea de pelo baja hasta un
punto definido en la mitad de la frente. Esto se conoce como pico de viuda, este rasgo resulta de un
gen dominante (V). El gen recesivo determina la caracterstica de una lnea contina en el pelo.
4. Meique doblado hacia adentro: Un gen dominante (B) hace que la ltima falange del meique se
flexione hacia el dedo anular. Descanse ambas manos tendidas sobre la mesa, relaje los msculos y
observe si su meique est flexionado o recto.
5. Iris pigmentado: Cuando una persona es homocigota para cierto gen recesivo (p) no hay pigmento en
la parte anterior de los ojos y en cambio se muestra una capa azul detrs del iris. Esto determina que
los ojos sean azules. Un alelo dominante de este gen (P) hace que el pigmento se deposite en la
capa anterior del iris y enmascara el color azul en grado variable. Otros genes determinan la
naturaleza y densidad exactas de este pigmento, originando los ojos pardos, violeta, verde y otros
colores. Nota: Algunas veces la capa detrs del iris es gris y esto deber considerarse como no
pigmentado.
6. Pelo de la falange media: algunas personas tienen pelo en la segunda falange de la mano mientras
otras personas no. La ausencia completa del pelo en todo, se debe a un gen recesivo (m) y su
presencia se debe a su alelo dominante (M). Parece que hay un nmero variable de estos alelos que
determinan si el pelo debe crecer en uno, dos, tres o cuatro dedos. Este pelo puede ser muy fino y
ser necesario usar una lupa y mirar cuidadosamente en todos los dedos, antes de decidir si est
ausente en alguno de los dedos.
7. Msculo palmar largo: Cuando una persona es homocigota para cierto gen recesivo (l), presenta un
msculo palmar largo, el cual puede ser detectado examinando los tendones que corren en la cara
interna del antebrazo (altura de la mueca) cierre el puo fuertemente y doble la mano hacia delante.
Palpe los tendones. Si hay tres, usted tiene el msculo palmar largo. Si solo hay dos (el medial ms
grande no existe) usted no tiene este msculo. Examine ambas muecas pues a veces est presente
en un brazo y no en el otro, a causa de las variaciones en la expresin de los genes. Si lo encuentra
en uno o ambos brazos, posee dos genes recesivos. Si no est presente en ambas muecas tiene el
gen dominante (L).
8. Forma del cabello: la forma natural del cabello de una persona puede ser lacia, ondulada o crespa,
con variantes intermedias. El mecanismo por el cual se origina la forma del cabello es algo complejo,
pero puede asumirse que los responsables de esta caracterstica son un par de genes con
dominancia incompleta. Asumiendo que la forma de su cabello no ha sido modificada por tratamiento
artificial, anote el genotipo respectivo segn el siguiente cdigo:
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cc= cabello lacio.
9. Pulgar desarticulable: algunas personas tienen la habilidad de desarticular las falanges de sus dedos
pulgares, a causa de que los ligamentos de esta articulacin son sumamente flojos, caracterstica que
es dominante sobre ligamentos firmes. Esta circunstancia permite retirar el dedo pulgar hacia atrs
sacndolo de su articulacin. Ensaye la posibilidad de desarticular el pulgar de cualquiera de sus
manos SIN ayuda de la otra mano e identifique su genotipo respectivo as: JJ o Jj = pulgar
desarticulable jj = pulgar no desarticulable.
10. Color del cabello: el color del cabello es determinado por la interaccin de un gran nmero de
factores; sin embargo, si consideramos solo las mayores categoras de color capilar, estas pueden
explicarse por la interaccin de dos pares de genes (herencia dihibrida): (D_) pigmento pardo
presente, (dd) pigmento pardo ausente, (rr) pigmento rojo presente. De acuerdo con la ley de la
distribucin independiente, un individuo cualquiera puede tener alguna de las siguientes
combinaciones de genes y color:
11. Segundo dedo ms corto que el cuarto: mantenga sus dedos juntos y ponga sus manos sobre una
hoja de papel, de modo que sus dedos descansen en ngulo recto con una lnea horizontal, que
usted ha trazado antes sobre el papel. Mueva su mano hacia arriba o hacia abajo hasta que el
extremo del cuarto dedo (anular) toque escasamente la lnea. Mire su segundo dedo (ndice) y vea si
toca la lnea si no lo hace el segundo dedo es ms corto que el cuarto. Se cree que este segundo
dedo ms corto es el resultado de un gen influenciado por el sexo del individuo. Segn esto el gen es
dominante en lo varones y recesivo en las mujeres. Sc para el gen correspondiente al segundo dedo
corto Sl para el gen correspondiente para el segundo dedo largo.
12. Voz para el canto: el tono de la voz para el canto es determinado por un solo par de alelos V y v que
muestran dominancia incompleta y estn influenciados por el sexo. Clasifique su voz par el canto
segn el siguiente cuadro:
Genotipos Fenotipos
Varn Mujer
VV Bajo Contraalto
Vv Bartono Meso soprano
vv Tenor Soprano
13. Calvicie: esta es otra caracterstica influenciada por el sexo y es controlada tambin por un par de
alelos. Aunque esta caracterstica no suele manifestarse antes de los 30 aos, sus posibilidades
personales de calvicie pueden presumirse por la presencia o ausencia de esta caracterstica entre los
miembros mayores de su familia tanto por la lnea materna o paterna. Establezca su probable
genotipo guindose por el siguiente cuadro:
Genotipos Fenotipos
Varn Mujer
HH calvo calva
Hh calvo normal
hh normal normal
LIGADOS AL SEXO
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14. Ceguera para el color (daltonismo): tipo ms comn de daltonismo es heredado como carcter
recesivo ligado al sexo. Puesto que el gen es portado solamente por el cromosoma X es necesario
indicar el cromosoma al especificar el genotipo. Son posibles genotipos y fenotipos:
Fenotipos Genotipos
Mujer Varn
Normal X NX n X NY
DESARROLLO
NOMBRE:______________________________
GRUPO:___________ MESA:___________ FECHA:_________
PROFESOR:_____________________________
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