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Commission
2011 UNESCO
Las denominaciones utilizadas en esta
publicacin y la presentacin de los datos
que figuran en ella no entraan por parte
de la Secretara de la UNESCO ni de la
COI ninguna toma de posicin acerca de
la condicin jurdica de los pases y
territorios ni de sus autoridades, ni con
respecto al trazado de sus fronteras o
lmites.
En referencias bibliogrficas, la
presente obra debe citarse de la
siguiente manera:
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Prefacio
Los eventos de floraciones algales nocivas (FAN) productoras de toxinas constituyen una amenaza para la salud
pblica y para la explotacin de recursos marisqueros y la pesca artesanal en zonas de arrecifes coralinos. Los
reportes de impactos socio-econmicos de las FAN en los pases de Amrica Latina y el Caribe estn creciendo
en paralelo con la creciente explotacin de sus zonas costeras por las actividades tursticas y la acuicultura.
En 1992, ante la alarma de los pases miembros de la Comisin Oceanogrfica Intergubernamental (COI) de la
UNESCO por el creciente impacto de las floraciones algales nocivas, se estableci el programa internacional
Harmful Algal Blooms (HAB). El objetivo global del programa HAB es promover el manejo efectivo y la investigacin
cientfica sobre las floraciones algales nocivas con el objeto de comprender sus causas, predecir su aparicin y mitigar sus efectos. El
programa HAB consta de elementos educativos, de investigacin y operacionales. Los objetivos de los elemen-
tos operacionales del programa son: a) Proteccin de los recursos: desarrollar y mejorar los mtodos que
minimicen las consecuencias ambientales y econmicas de las FAN; b) Monitoreo: promover y facilitar el
desarrollo e implementacin de programas adecuados de monitoreo y c) Salud Pblica y Seguridad Alimentaria:
proteger la salud pblica y asegurar la calidad de los productos marinos de consumo humano.
El OIEA ha desarrollado tcnicas radiactivas que constituyen potentes herramientas, muy sensibles y selectivas,
para la investigacin y control de las FANs. Estas tcnicas se transfieren a los estados miembros a travs de los
programas de Cooperacin Tcnica.
En el ao 2009, el OIEA inici un proyecto de 4 aos sobre Diseo e implementacin de sistemas de alerta temprana
y evaluacin de la toxicidad de los florecimientos de algas nocivas (FAN) en la regin del Caribe aplicando tcnicas nucleares
(RLA/7/014). El objetivo del proyecto es: Transferir el uso de tcnicas basadas en istopos radiactivos para su
aplicacin en: a) Deteccin temprana y cuantificacin de toxinas paralizantes (PSP) y ciguatera (CFP); b) Recons-
truccin de la historia de aparicin de eventos txicos en la regin mediante el fechado de sedimentos e
identificacin de quistes fsiles presentes en ellos. Este proyecto est alineado con los objetivos del OIEA en
medio ambiente, en particular facilitando el uso sostenible de los recursos naturales mediante la aplicacin de
tcnicas radioactivas que mejoren el conocimiento de sistemas naturales y que permita la prediccin de tenden-
cias futuras globales a partir del pasado y la evaluacin global de recursos. En el proyecto RLA/7/014 parti-
cipan Chile, Colombia, Costa Rica, Cuba, Repblica Dominicana, El Salvador, Hait, Honduras, Mxico, Nica-
ragua, Uruguay y Venezuela, con el apoyo de Espaa y Estados Unidos, y en colaboracin con la COI. Se
espera que los resultados del proyecto ayuden a reforzar las capacidades de los pases de Amrica Latina y el
Caribe para el manejo de las FAN y la mitigacin de sus efectos.
Este manual ha sido elaborado para los cientficos latinoamericanos responsables de implementar programas
de monitoreo de la presencia de microalgas potencialmente txicas en sus aguas dedicadas a explotaciones de
mariscos y peces, y de la presencia de las toxinas producidas por stas en los productos marinos destinados al
consumo humano. Constituye una introduccin a las tcnicas fundamentales a aplicar y a los criterios a conside-
rar para disear un plan homogneo de muestreo de microalgas (planctnicas y bentnicas) y factores ambien-
tales. Esto permitir obtener datos comparables entre los pases de la regin y una mejor evaluacin del riesgo
de episodios de algas potencialmente txicas.
Para ello, el OIEA organiz el Curso de formacin OIEA-COI sobre identificacin taxonmica de microalgas potencialmente
txicas y diseo e implementacin de programas de seguimiento. El curso se desarroll en la UNAM (Mxico, Mazatln),
coordinado por Ana Carolina Ruiz y Rosalba Alonso, del 26 de Octubre al 6 de Noviembre de 2009. Este
manual recoge las enseanzas prcticas impartidas as como los protocolos de muestreo acordados para el
diseo e implementacin del programa de monitoreo. Se utiliza un lenguaje sencillo y didctico de forma que
las actividades aprendidas se puedan reproducir fcilmente incluso por expertos colaboradores en el proyecto
que no tuvieron la oportunidad de asistir al curso.
El OIEA quiere expresar su agradecimiento a los expertos de Colombia (Laura Victoria Perdomo y Andrs
Leonardo Malagn), El Salvador (Jaime Espinoza) y Guatemala (Leonel Carrillo) por la revisin y crtica
constructiva de este manual. Al COI-IEO Centro Cientfico y de Comunicacin sobre Algas Nocivas (Vigo, Espaa) por
la edicin tcnica y montaje del documento. Germn Ramrez-Resndiz (UNAM, Mazatln) contribuy con su
1
Prefacio
pericia en informtica y estadstica a la comparacin de resultados de los conteos de microalgas durante el curso
y a la preparacin de anexos de este documento.
Agradecemos la revisin de algunos apartados del manual por los expertos Isabel Bravo (seccin 2.3), Jos M.
Franco y Pilar Riob (seccin 2.4) y Mnica Lion (seccin 2.2.5) de Vigo (Espaa).
Esta gua fue producida dentro del proyecto de cooperacin tcnica del OIEA Diseo e implementacin de sistemas
de alerta temprana y evaluacin de la toxicidad de los florecimientos de algas nocivas (FAN) en la regin del Caribe aplicando
tcnicas nucleares RLA/7/014 en colaboracin con la COI, con la Sra. Jane Gerardo-Abaya, del Departamento
de Cooperacin Tcnica de Viena, como Oficial de Manejo del Programa y la Sra. Florence Boisson, del
Laboratorio de Medio Marino del OIEA en Mnaco, como Oficial Tcnico.
Carlos M. Alonso-Hernndez
Coordinador Regional del Proyecto ARCAL RLA/7/014
Este documento no ha sido editado por el personal de los servicios editoriales del OIEA
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Gua de monitoreo de microalgas txicas
4. Pasos que deben seguirse para la identificacin de las microalgas agentes de eventos
txicos ...................................................................................................................................................... 44
4.1 Anlisis de toxinas en los moluscos ..................................................................................................... 44
4.2 Anlisis de toxinas en el plancton ........................................................................................................ 44
4.3 Anlisis de toxinas en cultivos monoalgales ....................................................................................... 45
4.4 Interpretacin de resultados y relacin de errores frecuentes ......................................................... 45
ANEXOS
Anexo 1. Listado de especies de microalgas txicas consideradas en el proyecto RLA 7014
Anexo 2. Descripcin estaciones de muestreo y su localizacin
Anexo 3. Planilla de recoleccin de datos en los muestreos de microalgas
Anexo 4. Planilla (hoja Excel) para anlisis cuantitativos de microalgas
Anexo 5. Preparacin de carne de molusco para anlisis de toxinas
Gua de monitoreo
Fig. 1. Marea roja (izda.) del ciliado fotosinttico Mesodinium rubrum (dcha.) en la Baha de Mazatln, Sinaloa, Mxico. Esta discoloracin, sin
efecto nocivo aparente sobre la biota, se observ del 11 al 20 de enero de 2009 (Foto R. Alonso).
5
Introduccin
hay que mencionar que existen FANs causadas por microalgas Ciguatoxinas (CTX = Ciguatoxins), producidas por di-
bentnicas, que viven adheridas a macroalgas (epfitas) o a noflagelados bentnicos del gnero Gambierdiscus.
otro tipo de substratos. Las ms conocidas son las causantes
del envenenamiento por consumo de peces llamado Cigua- Cianotoxinas producidas por cianobacterias.
tera (CFP = Ciguatera Fish Poisoning), sndrome endmico de Existen tambin floraciones microalgales ictiotxicas,
regiones tropicales y subtropicales, causado por microalgas productoras de toxinas hemolticas o de substancias oxidantes
(Gambierdiscus spp.) que viven asociadas a los arrecifes de coral (ROS = Reactive Oxygen Species) que se liberan al medio y cau-
y se trasmiten, a travs de pequeos peces herbvoros, a peces san mortandades de peces silvestres o en cultivo. La prolifera-
comestibles de mayor tamao (barracudas y otros). Otro ejem- cin de estas especies puede tener efectos devastadores en las
plo de FAN bentnicas son las floraciones de Ostreopsis spp. granjas de peces cultivados en jaulas marinas. Son muy cono-
cuyas toxinas, liberadas al agua de mar, pasan al aerosol mari- cidas las mortandades de salmnidos y otros peces cultivados
no y causan irritaciones de la vas respiratorias y la piel de los causadas por floraciones de pequeas flageladas rafidofceas,
baistas. Por ltimo, hay que mencionar el impacto de las tales como Heterosigma akashiwo (conocidas en Chile como
floraciones de cianobacterias en ambientes dulceacucolas y marea caf) y varias especies del gnero Chattonella, causantes
salobres. de mortandades de peces en el Golfo de California (Mxico).
Los grupos de toxinas de origen microalgal causantes de los
Sobre la base de los daos que ocasionan, hacemos una clasi-
sndromes mencionados son:
ficacin de las FAN aqu comentadas, en:
Toxinas de tipo paralizante (PST = Paralytic Shellfish
Floraciones algales de elevada biomasa, no txicas, que
Toxins), producidas por dinoflageladas de los gneros
pueden causar daos de tipo fsico-qumico
Alexandrium, Gymnodinium y Pyrodinium.
Floraciones productoras de toxinas que se transfieren a
Toxinas lipoflicas (DST = Diarrhetic Shellfish Toxins, pec-
travs de la cadena trfica;
tenotoxinas y yesotoxinas). Las toxinas diarreicas (cido
ocadaico y dinophysistoxinas) son producidas por Floraciones algales ictiotxicas;
dinoflageladas del gnero Dinophysis y especies bentnicas
del gnero Prorocentrum; las pectenotoxinas por Dinophysis Floraciones de microalgas productoras de toxinas que se
spp. y las yesotoxinas por Gonyaulax spinifera, Lingulodinium transfieren a travs del aerosol marino y causan irritaciones.
polyedrum y Protoceratium reticulatum.
Floraciones de Cianobacterias (CHAB = Cyanobacterial
Toxinas de tipo amnsico (AST = Amnesic Shellfish Toxins), Harmful Algal Blooms)
producidas por diatomeas del gnero Pseudo-nitzschia.
Hay que sealar que algunas FAN pueden causar mltiples
Toxinas neurotxicas (NST = Neurotoxic Shellfish Toxins), efectos nocivos. El ejemplo ms notorio lo constituyen las
producidas por especies del gnero Karenia, tales como K. floraciones del dinoflagelado Karenia brevis en el Golfo de
brevis en el Golfo de Mxico. Mxico: sus neurotoxinas (NSP = Neurotoxic Shellfish Poisoning)
son transferidas a travs de la cadena trfica, causando incluso
Fig. 2. Marea roja de Noctiluca scintillans en Punta del Este, Uruguay, noviembre de 2003. Esta FAN no caus ningn dao aparente a los
humanos o la fauna marina pero s alarma social por tratarse de una importante zona turstica. (Foto M. Gallardo cedida por S. Mndez).
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Gua de monitoreo
la muerte de mamferos marinos; sus floraciones de elevada En ms de una ocasin, la ignorancia sobre los organismos
biomasa causan muertes masivas de organismos marinos de causantes de eventos txicos ha disparado la alarma social y el
fondo y adems sus toxinas se transfieren al aerosol marino, cese de consumo de productos marinos ante la mera aparicin
causando irritaciones en las vas respiratorias y piel de los ba- de una mancha de plancton (constatada ms tarde como to-
istas (ver Informe de Mxico en IOCARIBE-ANCA 2007). talmente inocua) y el efecto alarmista de los medios de comu-
nicacin. Tal fue el caso tras la formacin de una marea roja (>
1.2. Floraciones Algales Nocivas en Amrica 2 106 cel L-1) del dinoflagelado Gonyaulax cf polygramma en la
Latina y el Caribe Baha de Cartagena (Colombia) en mayo de 2010 (Fig. 3). En
otros pases, los programas de monitoreo se limitan al con-
trol sanitario de los moluscos y peces destinados a la exporta-
Los reportes de impactos socioeconmicos de las FAN en los
cin, ya que la falta de controles estandardizados impedira el
pases de Amrica Latina y el Caribe estn creciendo en paralelo
ingreso de sus productos a los Estados Unidos, la Unin
con la creciente explotacin de sus zonas costeras por las acti-
Europea y otros mercados. Mientras tanto, la poblacin que
vidades tursticas y la acuicultura. En la regin se dan ejemplos
recolecta bivalvos y peces para su consumo familiar se expone
de todas las clases de FAN (IOCARIBE-ANCA, 2007; IOC-
a elevados riesgos sanitarios al consumir productos marinos
FANSA, 1995) citadas en el apartado anterior, pero las que
no controlados.
tienen un mayor impacto socioeconmico son las FAN pro-
ductoras de toxinas que, incluso a moderadas concentraciones
no formadoras de manchas, se acumulan en los bivalvos y los Uno de los principales retos a los que se han de enfren-
peces y se transfieren a travs de la cadena trfica. Estos even- tar los expertos es el hacer tomar conciencia a las autori-
tos de microalgas txicas constituyen una amenaza para la dades sanitarias y pesqueras de sus respectivos pases
salud pblica y para la explotacin de los recursos marinos. La sobre la naturaleza del problema y la necesidad de esta-
situacin puede ser especialmente grave: a) en zonas costeras blecer programas de alerta temprana. Estos programas
donde mariscos y peces son parte habitual de la dieta local y no contribuiran a:
existe un programa de salubridad (seguridad alimentaria) de
los productos de la pesca; b) si la falta de estos controles 1. Mejorar el manejo de los eventos txicos que conlle-
sanitarios dan lugar a una prohibicin de las exportaciones a van incluso la prdida de vidas humanas.
terceros pases (Estados Unidos, Unin Europea) con estric- 2. Disear planes de contingencia y mitigar el impacto
tas medidas regulatorias. de los eventos txicos en la explotacin de los recur-
La acumulacin de toxinas paralizantes en bivalvos (PST) aso- sos marisqueros, las pesqueras artesanales y el turis-
ciadas con las floraciones de Pyrodinium bahamense var. compressum mo.
en la costa Pacfica y de Gymnodinium catenatum, tanto en las
costas del Pacfico como en las del Caribe, han causado cientos
de casos de personas intoxicadas y cerca de cien vctimas mor- 1.3. El Proyecto OIEA-ARCAL RLA/7/014 y sus
tales en las ltimas dcadas (Mee et al. 1989, Rosales-Loessner
1989, IOCARIBE-ANCA 2007). La ciguatera, causada por el objetivos
consumo de ciertas especies de peces tropicales que se alimen-
tan en zonas de arrecifes coralinos, es sin duda la principal En 2009 se puso en marcha el proyecto OIEA-ARCAL RLA/
fuente de intoxicaciones humanas asociadas a productos ma- 7/014 sobre Diseo e Implementacin de Alerta Temprana y Eva-
rinos en la regin. La ciguatera es un sndrome endmico en el luacin de la Toxicidad de Floraciones Algales Nocivas en Amrica
Caribe donde constituye una seria amenaza para la salud p- Latina y el Caribe. Aplicacin de tcnicas nucleares avanzadas, evalua-
blica, las pesqueras locales y el turismo (Tester et al., 2009). ciones radioecotoxicolgicas y bioensayos en las costas de Chile,
Todos los aos se registran varios cientos de casos, pero mu- Colombia, Costa Rica, Cuba, Repblica Dominicana, El Sal-
chos otros pasan desapercibidos por el desconocimiento de vador, Hait, Honduras, Mxico, Nicaragua, Uruguay y Vene-
los mdicos y la poblacin en la identificacin de sus snto- zuela.
mas. Adems, la ciguatera es un sndrome recurrente en los
pacientes que lo sufren, y si bien raras veces es mortal, causa El principal objetivo de este proyecto de 5 aos de duracin,
trastornos gastrointestinales y neurotxicos a las vctimas y supervisado por el Departamento de Cooperacin Tcnica de
repercute econmicamente en considerables prdidas de jor- Viena con el apoyo del Laboratorio de Medio Marino del
nadas de trabajo (Tosteson en informe IOCARIBE-ANCA, OIEA en Mnaco es:
1998).
En algunos pases de la regin LAC (Latinoamerica y el Cari- Transferir el uso de tcnicas basadas en istopos
be) no existe ningn programa establecido de seguimiento o radiactivos para su aplicacin en:
monitoreo de microalgas potencialmente txicas y ficotoxinas
a) Deteccin temprana y cuantificacin de toxinas pa-
para garantizar la salubridad de los productos marinos y sal-
ralizantes (PSP) y ciguatera (CFP).
vaguardar la salud pblica. Con frecuencia, el apoyo espordi-
co de las autoridades y el esfuerzo de los expertos para llevar a b) Reconstruccin de la historia de aparicin de even-
cabo muestreos de fitoplancton y biotoxinas se ponen en tos txicos en la regin.
marcha demasiado tarde, es decir, cuando aparece una mancha
de plancton sospechosa o cuando tiene lugar un brote txico.
7
Introduccin
Fig. 3. Marea rojass ocurridas Colombia, 2010, ambas sin efectos nocivos sobre la salud humana o la fauna marina. A) Mancha producida por
Gonyaulax sp. en mayo, asociada con niveles de oxgeno, amonio y fosfatos altos respecto a los registros histricos. B) Marea roja de gran
extensin generada por Cochlodinium polykrikoides en el rea de la Baha de Santa Marta, en octubre. (Fotos INVEMAR).
Los mtodos que se desarrollarn son el radioensayo (Receptor identificacin taxonmica de microalgas potencialmente txi-
Binding Assay, RBA) y el fechado de sedimentos mediante el cas y diseo e implementacin de programas de seguimiento.
anlisis de quistes contemporneos y fsiles. Adems se me- El curso se desarroll en la UNAM (Mxico, Mazatln), del 26
jorarn las capacidades de los pases integrantes del proyecto de octubre al 6 de noviembre de 2009. Este manual recoge las
para el seguimiento de microalgas potencialmente txicas y enseanzas prcticas impartidas, as como los protocolos de
ficotoxinas. La informacin generada contribuir muestreo acordados para el desarrollo del proyecto. Los obje-
significativamente a mitigar los impactos socioeconmicos tivos parciales que se esperan alcanzar son:
causados por las intoxicaciones de tipo paralizante (PSP) y la
ciguatera en Latinoamrica.
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Gua de monitoreo
Referencias ioc-unesco.org/hab/index.php?option=com_oe&task=
view DoclistRecord&doclistID=61
COI 1995. Segundo Taller Regional de Planificacin Cientfica Mee LD, Espinosa M, Daz G. 1986. Paralytic shellfish
sobre Floraciones de Algas Nocivas en Sudamrica. Mar poisoning with a Gymnodinium catenatum red tide on the
del Plata, Argentina, 30 octubre-1 noviembre 1995. Infor- Pacific coast of Mxico. Marine Environmental Research 19:
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Pars. http://ioc-unesco.org/hab/index.php?option=
com_oe&task=view DoclistRecord&doclistID=60 Rosales-Loessener F, Porras E de, Dix MW. 1989. Toxic
shellfish poisoning in Guatemala. In T Okaichi, DM
COI 1998. I Sesin del Grupo de Trabajo sobre Algas Noci- Anderson, T Nemoto (eds), Red Tides: Biology,
vas en el Caribe y Regiones Adyacentes. La Habana, Cuba, Environmental Science and Toxicology. Elsevier, Amsterdam,
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COI 2007. IV Taller Regional Cientfico de la COI sobre Tester PA, Feldman RL, Nau AW, Faust MA, Litaker RW.
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de San Andrs, Colombia, 22-24 Mayo de 2007. http:// Smithsonian Contributions to the Marine Sciences 38: 301-311.
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Diseo de un plan de monitoreo
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Gua de monitoreo de microalgas txicas
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Material y mtodos para el muestreo
2.2 Material y mtodos para el muestreo 3. Se baja el disco de Secchi y se anota la profundidad (m) a la
de fitoplancton y condiciones ambientales que deja de verse.
Tabla de campo y estadillo (planilla) para anotacin de da- a) si el arrastre se va a observar poco tiempo despus (1-2 h),
tos (ver Anexo 3). verter el arrastre en el recipiente, con tapn de rosca, en el
que vaya a ser transportado.
Sondas multiparamtricas, CTD, u otro equipo disponi-
ble para toma de datos in situ de salinidad, temperatura, b) si se va a observar horas despus de la recogida, conviene
pH, oxgeno disuelto, clorofila, etc. (seccin 2.2.1). filtrar el arrastre a travs de malla de 150 m para eliminar
organismos zooplanctnicos que consumen el fitoplancton
Termmetro de inmersin con escala de 0.1C (en caso de y diluir el arrastre con agua de superficie para que se man-
fallo de la sonda). tenga en mejores condiciones.
Disco de Secchi con peso y cuerda marcada a cada 1 m y a c) si el arrastre no se va a poder observar hasta el da siguiente
cada 25 cm (2.2.2). y/o resulta difcil mantenerlo fresco, verter el arrastre en el
frasco con tapn de rosca donde ser transportado y fijarlo
Red de plancton de 20 m con un peso (plomo) para con formol (4% de concentracin final).
asegurar el descenso y soga, con nudos o cintas marcadoras
cada metro para conocer la profundidad a la que se baja 6. Lanzar la manguera muestreadora lentamente, con todas
durante el arrastre vertical (2.2.3). las llaves abiertas, hasta llegar a la marca de superficie (ver
seccin 2.2.5). Cerrar la llave de paso del extremo superior
Botella oceanogrfica (si ha sido escogido como mtodo e izar la manguera lentamente cerrando la llave de cada
de muestreo en vez de manguera) con cuerda y mensajeros segmento hasta recuperarla completamente en la superficie
(2.2.4). del barco.
Tubo o manguera muestreadora con los segmentos nece- 7. Vaciar el contenido de la manguera, abriendo la llave de
sarios para cubrir la longitud mxima de la columna de paso de cada seccin y vertiendo el contenido en el recipien-
agua de los sitios de muestreo (2.2.5). te de plstico con ayuda del embudo.
Recipiente de plstico de boca ancha con tapa de rosca (100- 8. Mover suavemente y tomar una alcuota (250-500 mL) en
200 mL) para la recogida del arrastre. el frasco etiquetado (fecha, estacin de muestreo, tipo de
muestra) y fijar con lugol.
Frasco lavador (pizeta) con agua de mar filtrada.
Consideraciones:
Malla de 150 m.
Se suministran los pasos para el muestreo bsico de
Recipientes de plstico para vaciar las muestras de la man- fitoplancton acordado para el proyecto ARCAL RLA/7/
guera. 014. Puede ser que algunos laboratorios dispongan de
medios para adems tomar muestras para medir otros
Frascos ahumados o resistentes al UV, etiquetados, para parmetros (nutrientes, clorofila, oxgeno disuelto, etc.)
muestras de agua destinadas a anlisis cuantitativo de que no se explican aqu.
plancton.
Los arrastres de red se deberan observar in vivo siempre
Pipetas (o dosificadores automticos) y soluciones fijadoras que fuera posible, ya que algunas especies desnudas son
(formol, lugol). difciles de reconocer en muestras fijadas. Las observacio-
nes de arrastres de red permiten hacer un listado cualitati-
Rotuladores o plumones indelebles y etiquetas. vo de las especies presentes. Esto es muy importante, ya
Recipiente con aislamiento trmico para transporte de que algunas especies potencialmente txicas pudieran estar
muestras. presentes en concentraciones por debajo del nivel de detec-
cin de los mtodos cuantitativos empleados. As pues,
Mtodo: permite tener elementos para una alerta temprana de la
1. Una vez situados en el sitio de muestreo se corroboran las presencia de especies peligrosas que se encuentren por de-
coordenadas con el GPS, y se anotan las posibles desvia- bajo del nivel de deteccin de los mtodos cuantitativos
ciones de las coordenadas del punto de muestreo. empleados.
2. Se anota la hora, estado de marea y toda la informacin Se acord que se tomara una sola muestra integrada de
meteorolgica posible (vientos, cobertura del cielo, lluvias manguera en cada estacin. No obstante, en la seccin 2.2.5
en das previos). se describe la manguera divisible de Lindahl (1986), que
consta de 4 segmentos de 5 m cada uno. La manguera de
12
Gua de monitoreo de microalgas txicas
varios segmentos es ms fcil de manipular y da informa- Algunos participantes del proyecto han escogido estacio-
cin sobre diferencias entre el ambiente superficial y el de nes de muestreo muy someras (de unos pocos metros de
fondo. Adems, aqullos con ms inters/posibilidades profundidad) que debern ser muestreadas con tubos rgi-
de estudiar la ecologa de las FANs en su regin, pueden dos de PVC (1-2 m) con vlvula de retencin (vlvula check)
vaciar los segmentos de la manguera en recipientes separa- que permite la entrada de agua pero no la salida o un tapn
dos y tomar muestras de distintos rangos de profundidad de goma en la parte superior; con botellas oceanogrficas,
(0-5, 5-10, 10-15, 15-20 m) de la columna de agua. o incluso con un cubo si se trata de una zona de agua bien
mezclada.
13
Temperatura y salinidad - Sondas multiparamtricas y CDTs
2.2.1 Temperatura y salinidad. Sondas nutrientes y el agua aflorada del fondo, mas fra y rica en
multiparamtricas y CTDs nutrientes.
Fig. 1. Izda., uso de termmetro de inmersin introducindolo directamente en la botella oceanogrfica; Centro, sonda multiparamtrica
YSI para medir temperatura y salinidad; Dcha. Sonda multiparamtrica CTD (Conductivity, Temperature, Depth) colgada del torno del barco
antes de ser lanzada.
14
Gua de monitoreo de microalgas txicas
15
Redes de plancton
2.2.3 Redes de plancton Si fuera a transcurrir mucho tiempo (varias horas) desde la
colecta hasta la observacin, se recomienda fijar una alcuo-
ta de la muestra con formol (al 4% final), ya que las mues-
El fitoplancton se presenta normalmente en densidades mo- tras de arrastre se estropean rpido, en especial si son muy
deradas o bajas que dificultan su observacin directa al mi- densas y cuando la temperatura ambiente es elevada.
croscopio ptico, por lo que se necesita una concentracin de
la muestra. Las redes de plancton troncocnicas constituyen el
mtodo ms tradicional de muestreo empleado para concen- La muestras obtenidas con arrastres de red no son ade-
trar muestras de campo (Fig. 1). cuadas para anlisis cuantitativos, pues la red es un
mtodo selectivo (selecciona a las especies de tamao
superior a la abertura de malla y deja escapar gran parte
Para los muestreos rutinarios de programas de
de las pequeas). No obstante, la gran cantidad de agua
monitoreo de FANs se emplearn redes de plancton
filtrada con un simple arrastre vertical en la capa de agua
con una apertura de malla de 10-20 m. Se har un
iluminada, podr permitir la deteccin temprana de es-
arrastre vertical, desde la profundidad de la capa ftica
pecies potencialmente txicas que son poco abundan-
(estimada a partir de la profundidad de visin del disco
tes (ej. Dinophysis spp.) o que se encuentren en la fase
de Secchi) hasta superficie.
inicial de desarrollo de la floracin (ej.: Alexandrium spp)
en concentraciones inferiores al lmite de deteccin me-
Al llegar al sitio de muestreo, los pasos a seguir son: diante la tcnica de Utermhl (20-40 cel L-1 si se em-
plean columnas de sedimentacin de 25-50 ml).
Se baja la red de plancton de la embarcacin con su colector,
peso o plomo y cabo (soga) con marcas de longitud.
Se asegura que la red no haya acumulado bolsas de aire que Es muy aconsejable mantener la muestra de arrastre sin fijar
impiden su descenso vertical y la hacen flotar. En el ltimo para su observacin microscpica in vivo tan pronto como se
caso, purgar la red, es decir, hacer que entre agua por la llegue al laboratorio, ya que hay especies desnudas cuya identi-
boca y salga por el colector, izarla y bajarla de nuevo. ficacin es mucho ms fcil de esta manera. Las muestras se
mantendrn en frascos de vidrio y en un recipiente termoaislante
Cuando la red llega a la profundidad deseada, comenzar a porttil. Si la coloracin del arrastre denotara una elevada con-
izarla lenta y cuidadosamente (la malla es un material muy centracin de plancton, se diluir la muestra con agua de la
delicado que se rompe con facilidad). misma estacin hasta que adquiera una tonalidad muy ligera.
En el caso de manchas, se puede muestrear directamente con
Una vez recuperada la red, desenroscar (o desmontar) el
un recipiente (sin red) y conviene diluir con agua ms clara de
colector y verter el contenido en el recipiente donde ser
otra profundidad, si se pretende que las clulas lleguen vivas al
transportado in vivo al laboratorio.
laboratorio. Si por otra parte se observa una concentracin
Fig. 1. Izda. Red de plancton con colector con llave acoplada para la descarga de la muestra. Dcha. Red de plancton con colector o copo y
peso acoplado para el descenso en el agua (modelo suministrado a los participantes en el proyecto RLA/7/014).
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Gua de monitoreo de microalgas txicas
muy elevada de organismos zooplanctnicos, conviene pasar contrario, la malla se ir obstruyendo paulatinamente, y per-
la muestra por una malla de 150 m para eliminar a los gran- der eficiencia de filtrado. No se recomienda el uso de sopor-
des filtradores (si bien corremos entonces el riego de perder tes o aros metlicos, que acortan la vida de la red por proble-
dinoflagelados de gran tamao, como Noctiluca spp., o las mas de corrosin, siendo satisfactorios los soportes de PVC y
cadenas largas de algunos Alexandrium spp. y Gymnodinium la sujecin con fuertes hilos de algodn graso o de nylon. El
spp.). colector puede ser un cilindro de PVC, con fondo cerrado, que
causar menos friccin a las clulas que en el caso de colectores
Las redes se enjuagarn despus de su uso con agua dulce con con fondo desmontable de red. Existen diseos modernos
ayuda de una manguera. A veces puede ser necesario lavar la de red cuyo colector lleva una llave en el extremo inferior, lo
red (sin el colector y los aros de sujecin) con una pequea que facilita sobremanera la recolecta dela muestra.
cantidad de detergente neutro (o en una lavadora domstica
con un ciclo de lavado para prendas delicadas o lana). De lo
17
Botellas oceanogrficas
2.2.4 Botellas oceanogrficas Las antiguas botellas Nansen llevaban pares de termmetros
de inversin acoplados. Cuando eran golpeadas por el men-
sajero giraban 180, lo cual haca que se cortara la columna de
Las botellas oceanogrficas son equipos diseados para to- mercurio del termmetro de inversin para que se mantuvie-
mar muestras de agua a una profundidad especfica de la co- ra la medida de temperatura tomada in situ. De esta forma, se
lumna de agua. La botella, que es un cilindro metlico o pls- obtena agua y se meda la temperatura de la misma a una
tico con dos tapas, se sujeta a un cable con sus dos tapas profundidad determinada. La diferencia de lectura entre el ter-
abiertas y sujetas de forma que se disparen y cierren cuando se mmetro encapsulado (resistente a la presin) y el otro no
presione el dispositivo de cierre por el mensajero. protegido, permita hacer estimaciones de presin. Actualmente
Los pasos a seguir son (Fig. 1): se usan las botellas Niskin, que no giran al ser golpeadas, y la
temperatura se mide con sondas multiparamtricas
Sujetar la botella al cable, con las dos tapas sujetas en modo (termosalinmetros, CTD, etc.). En campaas oceanogrficas
abiertas se usan las rosetas o dispositivos circulares que agrupan
hasta 24 botellas Niskin en un mismo lance (Fig. 1).
Hacer descender la botella en el agua mediante el cable; una
vez alcanzada la profundidad requerida, se lanza a travs
del cable un peso metlico denominado mensajero. Cuan- Las botellas oceanogrficas suministran muestras de
do el mensajero golpea el dispositivo de cierre, las dos agua apropiadas para anlisis cualitativo y cuantita-
tapas se cierran inmediatamente, y la botella atrapa el agua tivo de fitoplancton en una profundidad determi-
de la profundidad a la que se encontrab. nada de la columna de agua. Si se lanza un nmero
suficiente de botellas por estacin de muestreo, permi-
Izar el cable y recuperar la botella. Se pueden fijar en el cable ten describir la distribucin vertical de las especies
una secuencia de botellas y mensajeros a intervalos deter- fitoplanctnicas de inters y de los organismos que las
minados de forma que se tomen simultneamente, en un acompaan.
mismo lance, muestras de distintas profundidades.
Fig. 1. Izda., botella oceanogrfica armada antes de ser lanzada, con las tapas abiertas. b) Centro, botella recuperada tras lanzar el mensajero
e izarla. c) Dcha., roseta con 24 botellas oceanogrficas.
18
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Material y Mtodos
19
Mangueras muestreadoras
Manguera, sujeta por el extremo superior, Llave de paso preparada para su Operacin de largado de la manguera con las llaves
enrollada en la cubierta de la embarcacin. descenso en el agua, en posicin de de paso en posicin de abierto (Paso 1).
abierto.
Operacin de recuperacin/izado de la manguera llena de agua. Se Recipientes de plstico con rangos de profundidad marcados (0-5,
cierran las llaves de paso a medida que van apareciendo al izar la 5-10, 10-15, 15-20) para verter el contenido de los distintos tramos de
manguera. la manguera.
Vaciado de un tramo de manguera en el Toma de una alcuota, para anlisis cuantitatvo de fitoplancton u
recipiente que le corresponde, tras abrir la otros anlisis, en frasco debidamente etiquetado (fecha, estacin,
llave de paso. rango de profundidad).
20
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Referencias
Fig. 6. Detalles de la vlvula check de piso utilizada en los muestreos con el tubo de 2 pulgadas de dimetro (Foto INVEMAR, Colombia)
21
Fijadores/conservantes de las muestras de plancton
Tabla 2. Receta para preparacin del formaldehdo neutro (Throndsen 1978; Andersen & Throndsen 2004). Filtrar despus de una semana
de preparado para eliminar precipitados.
22
Gua de monitoreo de microalgas txicas
2.3 Material y mtodos para el muestreo de debe hacer nfasis en los estudios taxonmicos de estos orga-
microalgas bentnicas nismos (Litaker et al. 2009).
23
Muestreo de microalgas bentnicas
24
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Sonda multiparamtrica con sensores de temperatura, pH, se debe tomar rodeando la macroalga o especie sustrato con la
salinidad, oxgeno disuelto y clorofila a. bolsa de plstico antes de arrancarla para que no se pierda el
Sistema global de posicionamiento (GPS) para marcar los material adherido. Asegrese de que la bolsa est apropiada-
sitios de colecta. mente etiquetada (fecha, sitio de colecta, estacin) con tinta
indeleble. Selle la bolsa con la muestra de macroalgas y agua de
Embarcacin con el equipo de seguridad apropiado (para
mar circundante para su posterior procesamiento.
colectas en aguas alejadas de la costa).
Seleccin de las estaciones de muestreo (Fig. 2). Datos y muestras complementarios
Para la seleccin de los sitios de muestreo debe tenerse en Se considera importante tomar datos complementarios sobre
cuenta que sean sustratos representativos de las comunidades los factores ambientales en los sitios de muestreo:
bentnicas: arrecifes, pastos marinos, comunidades de ma-
croalgas, manglares, etc., segn las caractersticas del rea de
estudio. La ubicacin del sitio debe grabarse con un GPS. Para
definir el sitio de colecta, es importante tomar en cuenta la
informacin epidemiolgica de la ciguatera en las comunida-
des locales.
Frecuencia de muestreo
La periodicidad mensual de muestreo permite alcanzar un
nivel de descripcin aceptable. No obstante es deseable una
mayor frecuencia para estudios de dinmica del sistema.
25
Muestreo de microalgas bentnicas
Aspecto del agua (presencia de natas, espumas, acumula- Agregue Lugol cido (hasta obtener un color coac o whis-
ciones de algas). ky) para la fijacin de la muestra..
Temperatura, salinidad, turbidez, pH, oxgeno disuelto.
Macronutrientes y clorofila a.
Muestra-sustrato para su identificacin, fijada con formol
al 4% final.
Tngase en cuenta que la solucin comercial de formol es al
40%. Por tanto, una concentracin final al 4% se consigue
mezclando una parte de la solucin de formol comercial y 9
partes de la muestra.
26
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Agitar vigorosamente la bolsa durante 2 minutos NOTA: Los tamices de 250 m y 150 m tienen la funcin de
limpiar la muestra del exceso de residuos (detrito, restos de
macroalgas, etc). En el caso de no contar con stos, se pueden
utilizar tamices de mayor luz de malla, incluidas mallas de uso
domstico. En el caso de no contar con el tamiz de 20 m,
toda el agua de mar filtrada en los tamices de 250 m y 150
m, se conservar y se medir su volumen para ser procesada
en el paso 3 (proceso de recuento)
27
Muestreo de microalgas bentnicas
en la que:
en la que:
Agregar lugol cido para la conservacin de la muestra s: rea de la placa de sedimentacin barrida (mm2)
28
Gua de monitoreo de microalgas txicas
caribaeus, Gambierdiscus carolinianus, Gambierdiscus carpenteri Lassus, G Arzul, P Erard-Le Denn, P Gentien, C.
and Gambierdiscus ruetzleri (Gonyaulacales, Dinophyceae). Marcaillou-Le Baut (eds), Harmful Marine Algal Blooms.
Phycologia 48: 344390. DOI:10.2216/07-15.1 Lavoisier Intercept Ltd, Paris, pp. 815-820.
Littler DS, Littler MM. 2000. Caribbean Reef Plants: An Yasumoto T, Nakaijima I, Bagnis RA, Adachi R. 1977. Finding
identification Guide to the Reef Plants of the Caribbean, Bahamas, of a dinoflagellate as a likely culprit of ciguatera. Bulletin of
Florida and Gulf of Mexico. Offshore Graphics Inc., Flori- the Japanese Society of Scientific Fisheries 43: 10211026.
da, US, 542 pp.
Quod JP, Turquet J, Diogene G, Fessard V. 1995. Screening of
extracts of dinoflagellates from coral reefs (Reunion Island,
SW Indian Ocean) and their biological activities. In: P
29
Protocolo de recogida y transporte de muestras
2.4 Material y mtodos para el muestreo de 2. Se vierte el arrastre en una jarra con asa o similar y se pasa
fitoplancton y fitobentos para anlisis de por malla de 100-150 m para eliminar organismos gran-
des del microzooplancton que interfieren en el anlisis;
toxinas asegurarse de que el material est bien mezclado. Si la mues-
tra no se filtra a bordo, diluir el arrastre con agua de mar de
Protocolo 1 superficie, guardar el arrastre en un recipiente de vidrio y
mantener en nevera porttil o sitio fresco; de lo contrario
las clulas del arrastre pueden empezar a romperse y el
Este protocolo permite relacionar el contenido de toxinas de contenido de toxinas se libera al agua y se pierde.
la muestra recogida en un filtro con la concentracin estimada
de clulas potencialmente txicas por unidad de volumen del 3. Antes del filtrado se toma una alcuota (submuestra) de
material filtrado. As pues, permite llegar a una estimacin del 100 mL en frasco ahumado o protegido contra los rayos
contenido de toxina por clula. Las toxinas sern extradas UV, y se fija con solucin de Lugol al 0.5%. En caso de
por el qumico analtico en el mismo tubo de fondo cnico mancha o de cultivo se toma un volumen mucho menor
tipo Falcon (Fig. 1) en el que se guard la muestra. La muestra (10 mL). Esta muestra es para anlisis cuantitativo de las
de partida puede ser: microalgas.
a) Una muestra de plancton concentrado. La concentracin 4. Tomar un volumen fijo (medido con la probeta) de arras-
puede llevarse a cabo mediante arrastre de red de plancton; tre (o suspensin de bentnicos o de cultivo) y filtrarlo a
filtrado de agua tomada con bomba a travs de mallas travs de filtro de fibra de vidrio con bomba de vaco
superpuestas; filtrado de un volumen conocido de agua a (Millipore u otras) asegurndose de que la muestra final
travs de un filtro. haya filtrado bien toda el agua. Anotar el volumen (V)
filtrado. Apoyndose en el portafiltros, sujetar el borde del
b) Una mancha de plancton (marea roja), que debido a su filtro con la pinza, doblarlo sobre s mismo, 2 o ms veces,
densidad no necesita concentracin previa. y con la misma pinza, sujetar el filtro doblado e introdu-
c) Una muestra de dinoflagelados bentnicos resuspendidos cirlo cuidadosamente dentro de un tubo de fondo cnico
en agua de mar filtrada (ver seccin 2.3). y tapn de rosca (tipo Falcon).
d) Un cultivo de laboratorio. 5. Verter, hasta que el filtro quede bien empapado, un volu-
men medido de: a) metanol (p.a.) si se van a realizar anli-
Material sis de toxinas lipoflicas (DSP, Ciguatera, etc.) o b) solucin
Red de plancton de 20 m de apertura de malla y malla de clorhdrico (H Cl) 0.1 N si es para anlisis de toxinas
adicional de 100-150 m para eliminar el zooplancton. hidroflicas (PSP).
Pinzas de laboratorio.
Congelador de -20C.
Mtodo
1. Se hace un arrastre vertical de plancton con red de 20 m de
apertura de malla; en el caso de mancha de plancton (marea Fig. 1. Tubos Falcon de 15 ml y de 50 ml. Ideales para centrifugacin
roja) o cultivo monoalgal, se procesa la muestra directa- de muestra concentrada de plancton y tratamientos posteriores para
mente sin necesidad de concentracin previa. extraccin de toxinas. Tambin podemos utilizarlos para colocar en
ellos el filtro doblado.
30
Gua de monitoreo de microalgas txicas
6. Guardar inmediatamente la muestra en un congelador a (paso 3) horas antes de que se haga el filtrado (paso 4),
una temperatura de -20C hasta el momento de transpor- pues las clulas presentes en una y otra muestra no coinci-
te/anlisis. diran (clulas del arrastre o mancha que mueren y revien-
tan durante la espera).
7. Estimar la concentracin (C) en cel/mL (conteo con cma-
ra Sedgewik-Rafter; media de 3 conteos de 1 mL) de clulas En lugar del arrastre, se podran filtrar directamente mues-
potencialmente txicas por unidad de volumen de mues- tras de agua de mar. No obstante, si las clulas potencial-
tra de arrastre/mancha/resuspensin bentnicos/cultivo. mente txicas estn presentes en concentraciones bajas
(< 103 cel/L), o con mucho material acompaante, se nos
8. Estimar el nmero (N) de clulas potencialmente txicas pueden atorar los filtros mucho antes de haber filtrado
contenido en el filtro una cantidad de clulas txicas que permita su deteccin
con los sistemas de anlisis disponibles.
N=CxV
El equipo de filtracin y los filtros que se emplean en esta
donde N es el nmero de clulas potencialmente txicas con-
tcnica son los mismos (excepto el tamao de poro, que
tenidas en el filtro; V es el volumen filtrado (mL) y C es la
para clorofilas es de 0.45 m) que los que se emplean para
concentracin de clulas potencialmente txicas (cel/mL) pre-
filtracin de agua para anlisis de clorofilas. No obstante, si
sentes en la muestra filtrada.
no se dispone de este equipo, y sobre todo cuando se
Antes del transporte/envo: filtran muestras densas de cultivos de laboratorio, se pue-
Tapar la boca del tubo con parafilm para prevenir prdidas den utilizar pequeas bombas de filtracin manuales o
por evaporacin y cerrar con el tapn de rosca asegurndo- incluso montarse una trompa de vaci propia conectando
se de que queda bien apretado. el portafiltros a un grifo de agua corriente (Figs. 2 y 3).
Fig. 2. Equipo de filtracin (portafiltro) con trompa de vaco acoplada a la llave de agua del fregadero. La foto de la dcha. muestra la
coloracin del plancton acumulado en el filtro de fibra de vidrio. (Foto P. Riob)
31
Protocolo de recogida y transporte de muestras
3. Resuspender la pellet con metanol (toxinas lipoflicas) o Igual en todo que el protocolo 1 excepto que la muestra de
con H Cl 0.1 N (toxinas hidroflicas) para extraer las toxi- concentrado de arrastre/mancha/resuspensin bentnicos/
nas en el mismo tubo donde se centrifug. cultivo se liofiliza. As pues, se sustituye el paso 4 del protoco-
lo 1 por la liofilizacin de un volumen conocido de concentra-
4. Guardar en congelador a -20C hasta el momento de an- do de microalgas (arrastre/mancha/resuspensin bentnicos/
lisis/transporte. cultivo).
Precauciones a considerar: Consideraciones:
Muy importante: examinar el sobrenadante al microsco- Muy cmodo para el transporte de muestra y altamente reco-
pio para asegurarse de que todas las clulas han sedimenta- mendado para procesar muestras voluminosas de carne de
do. En caso contrario, sera necesario cuantificar la concen- bivalvo. Para muestras pequeas de plancton, las muestras
tracin de clulas del sobrenadante y restarlos del nmero liofilizadas a veces presentan interferencias en el anlisis debi-
de clulas N que se estim que haba en la pellet. Si no se do a transformaciones de las protenas y lpidos durante la
cumpliera esta precaucin, no se obtendran estimaciones liofilizacin.
cuantitativas fiables de cantidad de toxina por clula.
Fig. 3. Izda., bomba de vaco manual. Dcha., sistema de filtracin con trompa de agua.
32
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Fig. 1. Microscopio ptico invertido con sistema de Fig. 2. Microscopio compuesto directo.
epifluorescencia acoplado.
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Fig. 1. Izda., cmaras de sedimentacin simples de 25, 10 y 5 mL; dcha. cmaras de sedimentacin compuestas: columnas de 10, 25, 50 y
100 mL y placa de sedimentacin con el cubre cuadrado (izda.) y llave (dcha.) para desenroscar el anillo metlico.
37
Mtodo Utermhl
38
Gua de monitoreo de microalgas txicas
placa, de derecha a izquierda, hasta que la columna quede fluorocromo calcoflor, ha supuesto un enorme avance para
situada encima del orificio de desage y la parte superior de la identificacin de especies tecadas. Las placas de celulosa tei-
la placa est perfectamente cubierta por el cubre cuadrado. das con calcoflor fluorescen color azul cuando se observan al
microscopio de epifluorescencia con un filtro de luz UV (ver
Las muestras deben dejarse sedimentar en un lugar a tempe- Anexo 6). Estas observaciones permiten describir detalles re-
ratura estable (controlada si fuera preciso), protegidas de ex- queridos para la identificacin de especie segn la nomencla-
posicin directa a los rayos solares, corrientes de aire etc. Cual- tura de placas.
quier perturbacin fsica podra crear corrientes de conveccin
en el lquido de la muestra, formacin de burbujas y otros Si no se dipone de sistema de epifluorescencia, el mtodo
inconvenientes que afectaran a la sedimentacin homognea alternativo (usado tradicionalmente) consiste en tratar la mues-
de las partculas. tra de clulas tecadas con hipoclorito sdico (leja) y observar-
las con campo claro al microscopio ptico.
Se recomienda ver las excelentes ilustraciones sobre este proce-
so presentadas en Villafae & Reid (1995) y disponibles en A la hora del conteo, resulta de gran ayuda disponer de un
I n t e r n e t : w w w. e f p u . o r g . a r / P D F _ p a p e r s / 1 9 9 5 / micrmetro ocular calibrado (para medir el tamao de los
Villafa%F1e95_Concepcion.pdf especmenes) y un ocular equipado con un accesorio que cons-
ta de dos lneas paralelas y otra perpendicular que delimitan
Limpieza de las cmaras de sedimentacin un transepto (para facilitar los barridos de un lado a otro de la
Las cmaras de sedimentacin se deben limpiar, inmediata- base de la cmara) (Fig 3A). Tambin es conveniente equipar
mente despus del anlisis de la muestra, para evitar la precipi- uno de los oculares con una retcula que facilita el conteo de
tacin de sales y el deterioro de los componentes metlicos de pequeas reas de organismos abundantes de muy pequeo
las mismas. Se utilizar un suave pincel, como los utilizados
en dibujo, y detergente neutro. El margen de la base circular de
la placa se puede limpiar con un palillo de dientes y si fuera
necesario, desenroscando el anillo metlico con la llave que se
suministra al comprar el conjunto de cmaras y sus accesorios.
El microscopio invertido
Fig. 3. Accesorios que se colocan en los oculares para facilitar el Fig. 4. Arriba, micromtrico ocular, situado encima de una cadena
barrido y conteo de especmenes. A) Segmentos paralelos y uno de Cochlodinium sp., para medir los especmenes observados al
vertical para barridos diametrales. B) Retculos (Tomado de Edler & microscopio. Centro y abajo, micromtrico objetivo tal como se ve
Elbrchter 2010). desde el ocular y en la mano.
39
Mtodo Utermhl
si en s hay n clulas
en S habr N
N = n x S/s = n x f
n es el n de clulas contadas en la superficie s del
transepto
N ser la cantidad estimada para todo el fondo de la
base (S)
El factor f (S/s) es distinto para cada objetivo del mi-
croscopio empleado
Una vez estimado el factor f , habr que multiplicar por
un factor de conversin, que vara segn el volumen de
la columna empleada, para estimar la concentracin en
Fig. 5. Arriba, esquema del recorrido a seguir con el objetivo clulas por litro:
durante el barrido de todo el fondo de la placa de sedimentacin. X 10 (columnas de 100 mL), X 20 (col. 50 mL), X 40
Abajo, esquema de distintas posibilidades de barridos: todo el
fondo de la placa (izda.), transeptos diametrales (centro) y una serie (col. 25 mL) o X 100 (col. 10 mL).
de cuadrculas (dcha.), (imgenes tomadas de Edler &
Elbrachter 2010).
40
Gua de monitoreo de microalgas txicas
Tabla 1. Relacin entre el nmero de clulas contadas y el lmite de to, desde el punto de vista estadstico, es decidir que las clulas
confianza, con un nivel de significacin del 95% (tomado de
en contacto con el borde superior del transepto se cuentan,
Andersen & Throndsen 2004).
mientras que las que se encuentran en el borde inferior se
omiten (o viceversa). En el caso de barrido de cuadrados,
contar las que tocan el lado superior y el izquierdo y obviar las
que tocan el lado inferior y el derecho (o viceversa).
Referencias
Andersen P, Throndsen J. 2003. Estimating cell numbers. In:
GM Hallegraeff, DM Anderson, AD Cembella (eds). Ma-
situarse en la tangente de la placa de sedimentacin que se nual on Harmful Marine Microalgae. Monographs on
vea como una lnea recta (no curva), lo que indicar que nos Oceanographic Methodology 11. UNESCO, Paris, pp. 99-
encontramos en el extremo del dimetro. 129.
5. Por ltimo, se hace el barrido de varios cuadritos (retculas) Edler L, Elbrachter M. 2010. The Utermhl method for
para enumerar los especmenes de menor tamao. quantitative phytoplankton analysis. In B Karlson, C
Cusack, E Bresnan (eds). Microscopic and molecular methods
6. Se debe anotar cuidadosamente el nmero de clulas de
for quantitative phytoplankton analysis. IOC Manuals and
cada taxn y el factor a aplicar (que depender del rea barri-
Guides 55 (IOC/2010/MG/55), UNESCO, Paris, 110 pp.
da) en la hoja de clculo EXCEL para facilitar las estimacio-
(English only) http://ioc-unesco.org/hab.
nes de concentraciones celulares (Cuadro II).
Villafae EV, Reid FMH. 1995. Mtodos de microscopa para
Cuando se hacen conteos mediante barridos de toda la placa,
la cuantificacin del fitoplancton. In: K Alveal, ME Ferrario,
o de transeptos diametrales, es importante ser congruente en
EC Oliveira, E Sar (eds.). Manual de Mtodos Ficolgicos.
el criterio a aplicar sobre clulas que se encuentran en posicio-
Universidad de Concepcin, Concepcin, Chile, pp. 169-
nes ambiguas (por ejemplo, con parte de la clula dentro y
185. www.efpu.org.ar/PDF_papers/1995/
parte fuera de los limites del transecto). El criterio ms robus-
Villafa%F1e95_Concepcion.pdf
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Anexos
Anexo 1: Listado de especies de microalgas txicas consideradas en el
proyecto RLA 7014
Amphora coffeaeformis
Nitzschia navis-varingica
Pseudo-nitzschia australis X
Pseudo-nitzschia calliantha
Pseudo-nitzschia cuspidata
Pseudo-nitzschia delicatissima X
Pseudo-nitzschia fraudulenta X
Pseudo-nitzschia galaxiae
Pseudo-nitzschia multiseries X
Pseudo-nitzschia multistriata ? X
Pseudo-nitzschia pungens ? X
Pseudo-nitzschia seriata
Pseudo-nitzschia turgidula
Pseudo-nitzschia grupo delicatissima X X X X X X
Pseudo-nitzschia grupo seriata X X X X X X
DINOFLAGELADOS COL COS CUB ELS GUA MEX NIC DOM URU VEN
Dinophysiales
Dinophysis acuminata X ? X
Dinophysis acuta X
Dinophysis caudata X X X X X X X
Dinophysis fortii X ? X
Dinophysis infundibulus
Dinophysis miles
Dinophysis mitra X X ?
Dinophysis norvegica
Dinophysis ovum X X X X X
Dinophysis rapa X
Dinophysis rotundata X X X X X
Dinophysis sacculus
Dinophysis tripos X X X X X
Gonyaulacales
Alexandrium acatenella
Alexandrium andersonii
Alexandrium balechii
Alexandrium catenella X X X
Alexandrium fundyense
Alexandrium hiranoi
Alexandrium minutum ?
Alexandrium monilatum X X
Alexandrium ostenfeldii ?
Alexandrium tamarense X X X X
Alexandrium tamiyavanichii X X
Alexandrium sp X X X
Coolia monotis ? X
Coolia sp. X
Gambierdiscus australes
Gambierdiscus pacificus
Gambierdiscus polynesiensis
Gambierdiscus toxicus X
Gonyaulacales (cont.) COL COS CUB ELS GUA MEX NIC DOM URU VEN
Gambierdiscus yasumotoi
Gambierdiscus spp X X X X X X X
Gonyaulax spinifera X X X
Lingulodinium polyedrum ? X
Ostreopsis lenticularis X X
Ostreopsis mascarenensis
Ostreopsis ovata X X X
Ostreopsis siamensis X X X
Ostreopsis sp. X X X X
Protoceratium reticulatum X
Pyrodinium bahamense X X X X
Pyrodinium bahamense var compressum X X X X X
Peridini/Prorocentr/Gymnodiniales
Azadinium spinosum ?
Heterocapsa circularisquama X ?
Heterocapsa sp X X
Pfiesteria piscicida
Pfiesteria shumwayae
Protoperidinium crassipes X X X
Prorocentrum arabianum
Prorocentrum arenarium
Prorocentrum belizeanum X
Prorocentrum borbonicum
Prorocentrum cassubicum
Prorocentrum concavum X X X
Prorocentrum emarginatum ? X X X
Prorocentrum faustiae
Prorocentrum hoffmannianum
Prorocentrum lima X X X X X X
Prorocentrum maculosum
Prorocentrum minimum X X X X
Prorocentrum rhathymum X X X X
Amphidinium carterae X
Amphidinium operculatum ?
Amphidinium operculatum var. gibbosum
Amphidinium sp X
Cochlodinium polykrikoides X X
Cochlodinium sp X ? X X X
Gymnodinium catenatum X X X X X X
Gyrodinium corsicum
Karenia bicuneiformis
Karenia brevis X X
Karenia brevisulcata
Karenia concordia
Karenia cristata
Karenia digitata
Karenia mikimotoi X
Karenia papilionacea
Karenia selliformis
Karenia umbella
Karenia sp X
Karlodinium armiger
Karlodinium veneficum
Takayama cladochroma
HAPTOFITAS COL COS CUB ELS GUA MEX NIC DOM URU VEN
Chrysochromulina leadbeateri
Chrysochromulina polylepis
Phaeocystis globosa
Phaeocystis pouchetii
Phaeocystis sp. X X
Prymnesium calathiferum
Prymnesium faveolatum
Prymnesium parvum
Prymnesium patelliferum
Prymnesium zebrinum
RAFIDOFITAS COL COS CUB ELS GUA MEX NIC DOM URU VEN
Chattonella antiqua
Chattonella globosa
Chattonella marina X
Chattonella ovata X
Chattonella subsalsa
Chattonella verruculosa
Fibrocapsa japonica X
Fibrocapsa sp X
Heterosigma akashiwo X
CIANOFITAS COL COS CUB ELS GUA MEX NIC DOM URU VEN
Anabaena circinalis X X
Anabaena cf spiroides X
Anabaena sp. X
Anabaenopsis X
Aphanizomenon flos-aquae ?
Cylindrospermopsis raciborskii X
Lyngbya majuscula X
Microcystis aeruginosa X X X X
Microcystis spp. X
Nodularia baltica spumigena X
Trichodesmium X X X X
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Anexo 3: Planilla de recoleccin de datos en los muestreos de
microalgas (Ej. Mazatln).
Muestreo con sonda YSI 63
Participantes en la campaa:
Color o aspecto del agua (se puede aproximar el color sumergiendo unos centmetros el disco de
Secchi):
Intensidad de viento y direccin aproximada:
% de cobertura de nubes, neblina, bruma o lluvia durante el muestreo:
Problemas que se presentaron en la campaa:
Estacin:
Tipo de muestra Fecha:
botella (profundidad en m)
Ttubo o manguera (tramo en m)
LISTA ESPECIES HAB
N clulas
Factor *
cel L-1
http://www.marinespecies.org
GRUPO
',$720($6
Amphora coffeaeformis 0
Nitzschia navis-varingica 0
Pseudo-nitzschia australis 0
Pseudo-nitzschia calliantha 0
Pseudo-nitzschia cuspidata 0
Pseudo-nitzschia delicatissima 0
Pseudo-nitzschia fraudulenta 0
Pseudo-nitzschia galaxiae 0
Pseudo-nitzschia multiseries 0
Pseudo-nitzschia multistriata 0
Pseudo-nitzschia pseudodelicatissima 0
Pseudo-nitzschia pungens 0
Pseudo-nitzschia seriata 0
Pseudo-nitzschia turgidula 0
',12)/$*(/$'26
Order Dinophysiales
Dinophysis acuminata 0
Dinophysis acuta 0
Dinophysis caudata 0
Dinophysis fortii 0
Dinophysis infundibulus 0
Dinophysis miles 0
Dinophysis norvegica 0
Dinophysis ovum 0
Dinophysis rapa 0
Dinophysis rotundata 0
Dinophysis sacculus 0
Dinophysis tripos 0
Phalacroma mitra 0
Order Peridiniales incertae sedis
Azadinium spinosum 0
Heterocapsa circularisquama 0
Order Prorocentrales
Prorocentrum arabianum 0
Prorocentrum arenarium 0
Prorocentrum belizeanum 0
Prorocentrum borbonicum 0
Prorocentrum cassubicum 0
Prorocentrum concavum 0
Prorocentrum emarginatum 0
Prorocentrum faustiae 0
Prorocentrum hoffmannianum 0
Prorocentrum lima 0
Prorocentrum maculosum 0
Prorocentrum minimum 0
Prorocentrum rhathymum 0
Order Gymnodiniales
Amphidinium carterae 0
Amphidinium gibbosum 0
Amphidinium operculatum 0
Cochlodinium polykrikoides 0
Gymnodinium catenatum 0
Karenia bicuneiformis 0
Karenia brevis 0
Karenia brevisulcata 0
Karenia concordia 0
Karenia cristata 0
Karenia digitata 0
Karenia mikimotoi 0
Karenia papilionacea 0
Karenia selliformis 0
Karenia umbella 0
Karlodinium armiger 0
Karlodinium corsicum 0
Karlodinium veneficum 0
Takayama cladochroma 0
Order Gonyaulacales
Alexandrium acatenella 0
Alexandrium andersonii 0
Alexandrium balechii 0
Alexandrium catenella 0
Alexandrium cohorticula 0
Alexandrium fundyense 0
Alexandrium hiranoi 0
Alexandrium minutum 0
Alexandrium monilatum 0
Alexandrium ostenfeldii 0
Alexandrium peruvianum 0
Alexandrium tamarense 0
Alexandrium tamiyavanichii 0
Coolia tropicalis 0
Gambierdiscus australes 0
Gambierdiscus pacificus 0
Gambierdiscus polynesiensis 0
Gambierdiscus toxicus 0
Gambierdiscus yasumotoi 0
Gonyaulax spinifera 0
Lingulodinium polyedrum 0
Ostreopsis lenticularis 0
Ostreopsis mascarenensis 0
Ostreopsis ovata 0
Ostreopsis siamensis 0
Protoceratium reticulatum 0
Pyrodinium bahamense 0
+$372),7$6
Chrysochromulina leadbeateri 0
Chrysochromulina polylepis 0
Phaeocystis globosa 0
Phaeocystis pouchetii 0
Prymnesium calathiferum 0
Prymnesium faveolatum 0
Prymnesium parvum 0
Prymnesium patelliferum 0
Prymnesium zebrinum 0
5$),'2),7$6
Chattonella globosa 0
Chattonella japonica 0
Chattonella marina 0
Chattonella subsalsa 0
Fibrocapsa japonica 0
Heterosigma akashiwo 0
Heterosigma carterae 0
',&7,2),&($6
Pseudochattonella farcimen 0
Pseudochattonella verruculosa 0
ANEXO 5
El sellado de las muestras se hace por medio de una plancha o selladora elctrica, en
la cual, dependiendo de su tamao, se colocan 4 bolsas a la vez. Se debe cuidar que las
bolsas estn separadas unas de otras ya que el calor podra unir dos bolsas diferentes, el
planchando se hace rpida y suavemente para evitar que se queme la bolsa de la muestra.
Una vez terminado este proceso las muestras se colocan en bolsas con cierre hermtico
etiquetadas con los datos del muestreo, estas se mantienen en congelacin a una
temperatura de -4 a -20C hasta su anlisis. Resguardar de la luz si las muestras se
destinarn a anlisis de toxinas amnsicas.
Quilliam, A.M. 2003. Chemical Methods for domoic acid, the amnesic shellfish
poisoning (ASP) toxin. In: G.M. Hallegraeff, D.M. Anderson & A.D. Cembella (Eds.),
Manual on Harmful Marine Microalgae, Monographs on Oceanographic Methodology,
Vol. 11, Chapter 9. Intergovernmental Oceanographic Commission (UNESCO), Paris, 247-
266.
IOC Manuals and Guides
No. Title
1 rev. 2 Guide to IGOSS Data Archives and Exchange (BATHY and TESAC). 1993. 27 pp. (English, French,
Spanish, Russian)
2 International Catalogue of Ocean Data Station. 1976. (Out of stock)
3 rev. 3 Guide to Operational Procedures for the Collection and Exchange of JCOMM Oceanographic Data.
Third Revised Edition, 1999. 38 pp. (English, French, Spanish, Russian)
4 Guide to Oceanographic and Marine Meteorological Instruments and Observing Practices. 1975.
54 pp. (English)
5 rev. 2 Guide for Establishing a National Oceanographic Data Centre. Second Revised Edition, 2008. 27 pp.
(English) (Electronic only)
6 rev. Wave Reporting Procedures for Tide Observers in the Tsunami Warning System. 1968. 30 pp. (English)
7 Guide to Operational Procedures for the IGOSS Pilot Project on Marine Pollution (Petroleum)
Monitoring. 1976. 50 pp. (French, Spanish)
8 (Superseded by IOC Manuals and Guides No. 16)
9 rev. Manual on International Oceanographic Data Exchange. (Fifth Edition). 1991. 82 pp. (French, Spanish,
Russian)
9 Annex I (Superseded by IOC Manuals and Guides No. 17)
9 Annex II Guide for Responsible National Oceanographic Data Centres. 1982. 29 pp. (English, French, Spanish,
Russian)
10 (Superseded by IOC Manuals and Guides No. 16)
11 The Determination of Petroleum Hydrocarbons in Sediments. 1982. 38 pp. (French, Spanish, Russian)
12 Chemical Methods for Use in Marine Environment Monitoring. 1983. 53 pp. (English)
13 Manual for Monitoring Oil and Dissolved/Dispersed Petroleum Hydrocarbons in Marine Waters and on
Beaches. 1984. 35 pp. (English, French, Spanish, Russian)
14 Manual on Sea-Level Measurements and Interpretation. (English, French, Spanish, Russian)
Vol. I: Basic Procedure. 1985. 83 pp. (English)
Vol. II: Emerging Technologies. 1994. 72 pp. (English)
Vol. III: Reappraisals and Recommendations as of the year 2000. 2002. 55 pp. (English)
Vol. IV: An Update to 2006. 2006. 78 pp. (English)
15 Operational Procedures for Sampling the Sea-Surface Microlayer. 1985. 15 pp. (English)
16 Marine Environmental Data Information Referral Catalogue. Third Edition. 1993. 157 pp. (Composite
English/French/Spanish/Russian)
17 GF3: A General Formatting System for Geo-referenced Data
Vol. 1: Introductory Guide to the GF3 Formatting System. 1993. 35 pp. (English, French, Spanish,
Russian)
Vol. 2: Technical Description of the GF3 Format and Code Tables. 1987. 111 pp. (English, French,
Spanish, Russian)
Vol. 3: Standard Subsets of GF3. 1996. 67 pp. (English)
Vol. 4: User Guide to the GF3-Proc Software. 1989. 23 pp. (English, French, Spanish, Russian)
Vol. 5: Reference Manual for the GF3-Proc Software. 1992. 67 pp. (English, French, Spanish, Russian)
No. Title
Vol. 6: Quick Reference Sheets for GF3 and GF3-Proc. 1989. 22 pp. (English, French, Spanish,
Russian)
18 User Guide for the Exchange of Measured Wave Data. 1987. 81 pp. (English, French, Spanish,
Russian)
19 Guide to IGOSS Specialized Oceanographic Centres (SOCs). 1988. 17 pp. (English, French, Spanish,
Russian)
20 Guide to Drifting Data Buoys. 1988. 71 pp. (English, French, Spanish, Russian)
21 (Superseded by IOC Manuals and Guides No. 25)
22 rev. GTSPP Real-time Quality Control Manual, First revised edition. 2010. 145 pp. (English)
23 Marine Information Centre Development: An Introductory Manual. 1991. 32 pp. (English, French,
Spanish, Russian)
24 Guide to Satellite Remote Sensing of the Marine Environment. 1992. 178 pp. (English)
25 Standard and Reference Materials for Marine Science. Revised Edition. 1993. 577 pp. (English)
26 Manual of Quality Control Procedures for Validation of Oceanographic Data. 1993. 436 pp. (English)
27 Chlorinated Biphenyls in Open Ocean Waters: Sampling, Extraction, Clean-up and Instrumental
Determination. 1993. 36 pp. (English)
28 Nutrient Analysis in Tropical Marine Waters. 1993. 24 pp. (English)
29 Protocols for the Joint Global Ocean Flux Study (JGOFS) Core Measurements. 1994. 178 pp . (English)
30 MIM Publication Series:
Vol. 1: Report on Diagnostic Procedures and a Definition of Minimum Requirements for Providing
Information Services on a National and/or Regional Level. 1994. 6 pp. (English)
Vol. 2: Information Networking: The Development of National or Regional Scientific Information
Exchange. 1994. 22 pp. (English)
Vol. 3: Standard Directory Record Structure for Organizations, Individuals and their Research Interests.
1994. 33 pp. (English)
31 HAB Publication Series:
Vol. 1: Amnesic Shellfish Poisoning. 1995. 18 pp. (English)
32 Oceanographic Survey Techniques and Living Resources Assessment Methods. 1996. 34 pp. (English)
33 Manual on Harmful Marine Microalgae. 1995. (English) [superseded by a sale publication in 2003, 92-3-
103871-0. UNESCO Publishing]
34 Environmental Design and Analysis in Marine Environmental Sampling. 1996. 86 pp. (English)
35 IUGG/IOC Time Project. Numerical Method of Tsunami Simulation with the Leap-Frog Scheme. 1997.
122 pp. (English)
36 Methodological Guide to Integrated Coastal Zone Management. 1997. 47 pp. (French, English)
37 Post-Tsunami Survey Field Guide. First Edition. 1998. 61 pp. (English, French, Spanish, Russian)
38 Guidelines for Vulnerability Mapping of Coastal Zones in the Indian Ocean. 2000. 40 pp. (French,
English)
39 Manual on Aquatic Cyanobacteria A photo guide and a synopsis of their toxicology. 2006. 106 pp.
(English)
40 Guidelines for the Study of Shoreline Change in the Western Indian Ocean Region. 2000. 73 pp.
(English)
2
No. Title