DETERMINACIN DE LA DOSIS DISCRIMINANTE DEL FENTHION A PARA EL DIAGNSTICO

DE SUSCEPTIBILIDAD EN Haematobia irritans

*Osorio M. J., Martnez I.F.

*Jorge Osorio Miranda. Centro Nacional de Servicios de Constatacin en Salud Animal. CENAPA-
SENASICA-SAGARPA. Carretera Cuernavaca Cuautla No 8534, Col. Progreso, Jiutepec, Morelos,
Mxico. C.P. 62550. Tel 01 (55) 59051000 ext. 53124. e-mail: joalu_osorio@yahoo.com
jorge.osorio@senasica.gob.mx
Modalidad: Oral rea: Enfermedades Parasitarias

RESUMEN
Se obtuvo la Dosis Discriminante (D.D.) del Organofosforado (OF) Fenthion (Fen) de gran
utilidad para el diagnstico de susceptibilidad en Haematobia irritans en campo. El estudio se
realiz en el Departamento de Ectoparsitos y Dpteros del Centro Nacional de Servicios de
Constatacin en Salud Animal (SENASICA-SAGARPA-CENAPA). Se utiliz el cultivo de H. irritans
cepa Susceptible de referencia. El objetivo del presente estudio fue determinar en H. irritans cepa
Susceptible, las Concentraciones Letales (CL 50,90,99) del Fenthion para determinar la D.D. y
establecer un Kit para el diagnstico de resistencia en campo. Se utilizaron residuos de
insecticidas impregnados en hojas de papel filtro para determinar las CL 50,90,99 seleccionando lo
ms homogneo posible en edad y nmero de especmenes, moscas en buen estado de 3 a 7 das
de emergencia, el sexo es indistinto. Se trabajaron de 7 a 12 diferentes concentraciones en g/cm 2
de Fenthion. Se transfirieron con un aspirador 20 moscas por caja Petri usando tres replicas por
concentracin y su testigo con un tiempo de exposicin de 60 minutos. Los valores de mortalidad
fueron sometidos al anlisis Probit usando el programa Polo PC LeOra software para estimar las
CL50,90,99 y determinar la D. D. buscada. Los resultados mostraron una Heterogeneidad del estudio
= 5,4137; Chi Cuadrada = 51,17676; pendiente = 6,66 0,48 y CL 50,90,99 con valores de 0.066009,
0.302409 y 1.466216 g/cm2 respectivamente con una probabilidad al 95% de confianza (P <0.05).
La D.D. encontrada fue 2.93 g/cm 2. La aplicacin frecuente de Fenthion puede reducir la
efectividad biolgica del insecticida. Es importante desarrollar estrategias de manejo de control
integral de H. irritans para prevenir la emergencia del fenmeno resistencia, incluyendo control
biolgico, mecnico, parasitoides o enemigos naturales, rotacin de productos y aplicacin de
larvicidas para romper el ciclo biolgico del parsito.

INTRODUCCIN
La mosca del cuerno Haematobia irritans irritans (Linnaeus) es una de las plagas del
ganado bovino de mayor importancia econmica a nivel mundial. Es un ectoparsito obligado que
se alimenta da y noche de sangre casi exclusivamente de ganado. En los Estados Unidos, Las
prdidas anuales son de entre US $700 y $1 mil millones, adicionalmente se gastan US $ 60
millones en insecticidas para su control (Kunz et al. 1991, Byford et al. 1992, Cupp et al 1998).
Las moscas adultas pueden vivir de 4-8 semanas (Bruce 1964). H. irritans fue introducida
de Francia a Amrica del Norte en 1887 (Bruce 1938), se encuentra en el continente americano,
as como en Europa, Asia y las regiones no tropicales de frica. El estircol fresco de bovino es el
hbitat para completar su ciclo biolgico, las hembras se separan del husped slo para poner sus
huevos en las heces frescas eclosionando entre uno y dos das (Foil y Hogsette 1994). Las larvas
se alimentan del estircol, desarrollando tres estadios en cuatro a ocho das, los adultos miden de
6,5 a 7,5 mm (Lysyk 1992). La maduracin plena de las pupas se realiza en seis u ocho das (Foil y
Hogsette 1994). El tiempo requerido para completar el ciclo de vida de una mosca de los cuernos
es de entre 10 y 20 das, dependiendo de la temperatura y la poca del ao (Campbell 2006).

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 H. irritans se alimenta slo de sangre, presenta diapausa como pupa durante el invierno en
la mayora de las zonas subtropicales y templadas (Mendes y Linhares 1999). Su pico poblacional
disminuye a principios de verano, cuando el clima se vuelve caliente y seco. En otoo, las
poblaciones aumentan al empezar a bajar las temperaturas y aumentar las precipitaciones,
cayendo una vez ms despus de septiembre u octubre, cuando inicia el descenso de temperatura
a finales de otoo y principios de invierno (Baldwin et al. 2005).
Una mosca puede ingerir 1,5 mg, o 10 l, de sangre por alimentacin (Kuramochi y
Nishijima 1980), cada mosca toma entre 24 a 38 comidas de sangre por da (Foil y Hogsette 1994).
Se ha estimado que 500 moscas del cuerno en un bovino ocasionan una prdida de 7 ml de sangre
al da. Guillot et al (1988) report que las moscas adultas recin emergidas y no alimentadas se
dispersan ms fcilmente que las moscas viejas y que son capaces de dispersarse en un radio de
8-16 kilmetros en busca de su husped.
Los mtodos de control qumico van desde los tradicionales baos de aspersin e
inmersin, hasta los aretes impregnados con insecticida (Szalanski et al. 1991). El uso de
frotadores y bolsas de polvo insecticida aplicados cada dos a tres semanas, resultan eficaces para
el control de H. irritans adultas (Baldwin et al. 2005). Los endectocidas inyectados o aplicados por
va tpica, son absorbidos por el ganado y se excretan inalterados en estircol reduciendo el
nmero de fases inmaduras de moscas hasta por dos meses (Miller et al 1981, Lysyk y Colwell
1996, Floate et al 2001). El bolo de liberacin lenta, alcanza varias semanas de control de estados
inmaduros de H. irritans con un solo tratamiento. Ambas tcnicas no afectan moscas adultas y los
animales se pueden infestar de hatos cercanos sin tratar y no son la panacea (Baldwin et al. 2005).
El aumento en el uso de insecticidas para control de la mosca del cuerno, ha generado
resistencia por varios mecanismos, incluyendo insensibilidad del sitio blanco de accin y
detoxificacin metablica (Szalanski et al., 1991). Guerrero et al. (1999) demostr que poblaciones
de campo de H. irritans resistentes a OF presentaban niveles de esterasa ms altos y una
acetilcolinesterasa insensible a los OF que las colonias susceptibles de laboratorio. Se ha
demostrado que H. irritans resistente a los piretroides (PS) presentan susceptibilidad hacia los OF
y en campo los OFs proporcionan un control adecuado de cepas resistentes a los PS (Byford et al,
1998). Por consiguiente, un manejo integrado de plagas (MIP) utilizando varios mtodos de control,
permitir reducir eficazmente las poblaciones de adultos y larvas de la mosca del cuerno.
El control biolgico de H. irritans incluye hongos entomopatgenos como Metarhizium
anisopliae, Beauveria bassiana, y Paecilomyces fumosoroseus; las Bacterias Bacillus thuringiensis
Berliner (Bt) y los nemtodos Sterneinema capocapsae. Investigaciones recientes indican que
varias cepas de estos entomopatgenos son altamente txicos para las larvas de H. irritans
(Rodriguez, S. R y cols. 2004; C. A. Angel-Sahagn y cols. 2005; Lysyk et al. 2010), sin embargo
en la actualidad no existen biopreparados comerciales efectivos para su control en campo.
Como agentes reguladores de poblaciones de la mosca del cuerno estn los escarabajos
estercoleros de la familia Scarabaeidae, Staphylinidae e Histeridae como depredadores de larvas
en estircol (Hu y Frank 1996). La hormiga de fuego, Solenopsis invicta Buren, reduce el nmero
de estados inmaduros en heces (Summerlin et al 1984), pero puede matar otros depredadores y
picar al ganado (Hu y Frank 1996). Se han evaluado como potenciales agentes de control avispas
parasitoides de las familias Pteromalidae y Chalcididae (Geden et al 2006). As Spalangia y
Muscidifurax spp. ovipositan sus huevos en las pupas de moscas y la descendencia de las avispas
se alimentan internamente de la mosca y finalmente la matan.

MATERIAL Y METODOS
Se trabaj con el cultivo de H. irritans cepa Susceptible de referencia donada por el
Laboratorio Livestock Insect Research Laboratory, en Kerrville, Texas Estados Unidos de Amrica,
y establecida en el laboratorio del Departamento de Ectoparsitos y Dpteros del Centro Nacional

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de Servicios de Constatacin en Salud Animal SENASICA-SAGARPA (CENAPA). El objetivo fue
determinar la Dosis Discriminante (D.D.) del OF Fenthion y establecer un Kit para utilizarlo en el
diagnstico de susceptibilidad en la mosca del cuerno Haematobia irritans en campo.
Tcnica de Sheppard & Hinkle (1987): Desarrollada en la Universidad de Nebraska,
Denver, Colorado, por el Doctor J. Campbell. Se utilizan residuos de insecticidas impregnados en
hojas de papel filtro Whatman No. 1 de 9 cm de dimetro colocadas en el fondo de cajas Petri.
Permite determinar las CL50,90,99 de productos insecticidas y resulta prctica para comprobar
resistencia hacia los PS en H. irritans. Desde 1993 fue implementada en el Laboratorio de
Ectoparsitos y Dpteros del CENAPA para determinar el estado de susceptibilidad en la mosca del
cuerno hacia los insecticidas de uso comn en el campo.
Preparacin de diluciones e impregnacin de papeles: Se prepararon de 7 a 12
concentraciones de Fenthion en g/cm 2, impregnando papeles por triplicado con 1 ml cada
concentracin incluyendo un testigo impregnado con acetona, se identifican con el nombre del
producto, nmero de rplica y dosis. Se dejan secar por una hora y pueden ser utilizados
inmediatamente o mantenerse en refrigeracin envueltos en papel aluminio.
La edad de las moscas fue de 3 a 7 das de emergencia y se seleccionaron aquellas sin
malformaciones ni dao alguno. Para calcular la cantidad del producto se utiliz la siguiente
frmula: C.I. = (C. en g/cm2) (A). Dnde: C.I. = Concentracin Inicial; C. en g/cm 2 =
Concentracin en microgramos por centmetro cuadrado y A = rea del papel filtro de 63.6 cm 2. Si
deseamos preparar 10 ml de la D.D. = 2.93 g/cm 2, se pesar 1.9411 g de Fenthion con pureza de
96%, se disuelve en acetona y se afora a 10 ml. Las dems concentraciones se preparan como
decuples tomando 1ml de la concentracin inicial aforando a un volumen de 10 ml con acetona.
Llenado de cajas Petri, tiempo de exposicin al insecticida y Evaluacin de Resultados: Los
papeles impregnados se colocan en el fondo de las cajas petri, se introducen con un aspirador 20
moscas por caja. El tiempo de exposicin es de 60 minutos para realizar la lectura de moscas vivas
y muertas. Los resultados son sometidos al anlisis probit mediante el programa Polo PC LeOra
software se calculan las CL50,90,99 y se determina la D. D. buscada.

RESULTADOS
Los resultados de los bioensayos Dosis-Respuesta permitieron comprobar la repetibilidad y
reproducibilidad del parmetro mortalidad demostrando que el producto Fenthion provoca un efecto
letal a dosis relativamente altas, los valores encontrados para las CL 50,90,99 fueron 0.0660 g/cm2,
0.3024 y 1. 4662 g/cm2 respectivamente. La D.D. encontrando que para el producto Fenthion fue
de 2.93 g/cm2, el doble del valor promedio de la CL 99. El cuadro 1 muestra las concentraciones a
utilizar en el Kit de campo para el diagnstico de susceptibilidad en la mosca del cuerno
empleando un Factor de Dilucin (F.D.) de 0.1

Cuadro 1
Concentraciones de Fenthion para preparar el Kit de diagnstico de resistencia en la mosca del
cuerno Haematobia irritans para su uso en campo.

Concentracin Factor de dilucin Concentracin Unidades

A 2.93
B 0.293
C 0.1 0.0293 g/cm2
D 0.00293
E 0.000293
Testigo -- -- g/cm2

El Cuadro 2 muestra los valores de Chi Cuadrada (51,17) rechazando la hiptesis nula de
que las variables son independientes, comprobando que las mortalidades dependen de las dosis

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utilizadas. Los valores de la prueba de heterogeneidad demuestran que la variabilidad en los
resultados encontrados es aceptable (5,41) y que los valores de la pendiente presentan un buen
ajuste de los datos mortalidad en la regresin lineal estimada mediante el probit (6,66 0,48). Nos
muestra adems los valores de las CL50,90,99 obtenidas para el producto Fenthion as como sus
lmites de confianza al 95% de probabilidad (P <0.05).

Cuadro 2
Bioensayos realizados con la mosca del cuerno H. irritans cepa "Susceptible" de referencia
desafiando el producto Organofosforado Fenthion para obtener la Dosis Discriminante (D.D.) a
utilizar para el diagnstico de resistencia.

DISCUSION Y CONCLUSIONES
El Fenthion, es un insecticida que basa su accin txica en el efecto inhibidor de la enzima
acetilcolinesterasa, ocasionando un aumento de acetilcolina que al ascender a niveles crticos
produce una tetanizacin y finalmente la muerte del insecto. A diferencia de las aplicaciones
convencionales de OF formulados para tratamiento por inmersin, aspersin o derrame dorsal para
el control de ectoparsitos en ganado, el Fenthion se administr por contacto diluyendo el
ingrediente activo en acetona.
El anlisis del bioensayo mediante la metodologa probit, nos brinda informacin til sobre
el comportamiento toxicolgico de una poblacin con relacin al estmulo aplicado, por tanto las
CL50,90,99 estimadas con el probit, son las nicas medidas cuantitativas mediante las cuales se
pueden inferir cambios en la respuesta toxicolgica posterior a la aplicacin de los insecticidas
como se interpreta en otros pases. En cuanto a la bondad de los datos obtenidos a partir del
anlisis probit, la metodologa es considerada confiable, completa y segura, ya que permite
establecer tendencias y plantear comparaciones en bioensayos sucesivos.
En Mxico se han realizado diversas evaluaciones de campo desafiando poblaciones
naturales de la mosca del cuerno Haematobia irritans con productos OF, PS y otras familias
qumicas como Lactonas Macrociclicas (LM), Fenilpirazolonas (Fp) y Bioreguladores del
crecimiento (IGRs), encontrando hasta el momento susceptibilidad hacia LM, Fp e IGRs, as como
una marcada resistencia hacia los PS en varios estudios realizados (Osorio et al 2015). Sin

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embrago la resistencia a OF no se encuentra ampliamente difundida, encontrando reportes solo
para el Noreste de Mxico (Kunz 1995, Almazan 2004). Esto podra favorecer una baja presencia
de resistencia cruzada hacia otros miembros de la familia de OF incluyendo el Fenthion.
No obstante que la obtencin de un Kit para el diagnstico de susceptibilidad en la mosca
del cuerno nos ayuda a detectar el problema, no lo soluciona de forma inmediata, sin embargo nos
brinda la oportunidad de aplicar estrategias de control ms adecuadas y nos ayuda a establecer
mapas de distribucin del fenmeno (Osorio et al 2015).
La D.D. del Fenthion ser una herramienta de utilidad prctica para detectar cambios en la
respuesta toxicolgica en poblaciones naturales de la mosca del cuerno. Los resultados del
bioensayo utilizando la metodologa probit, demuestran que la D.D. del Fenthion es = 2.93 g/cm 2.
La preparacin, aplicacin e interpretacin de los resultados obtenidos para utilizar el kit para el
diagnstico de resistencia hacia el Fenthion requiere de capacitacin y asesora tcnica.
La aplicacin frecuente de Fenthion para control de H. irritans, significativamente podra
reducir la efectividad biolgica de este recurso no renovable, existiendo adems la posibilidad de
presentarse resistencia cruzada entre los diferentes ingredientes activos de la familia de los OF lo
que podra acrecentar el problema de resistencia hacia la molcula.
Es importante trabajar en el desarrollo de estrategias de manejo integral (MIP) de la mosca
del cuerno Haematobia irritans para prevenir la presencia del fenmeno resistencia, lo que podra
incluir control biolgico, mecnico, manejo de excretas, uso de parasitoides o enemigos naturales,
rotacin de productos y la aplicacin de larvicidas o biorreguladores del crecimiento que afecten o
inhiban el desarrollo larvario de la mosca del cuerno rompiendo el ciclo de vida del parsito.

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