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Aula 7 Testes rpidos

A ampliao do acesso ao diagnstico um desafio aos programas de sade pblica.

Os testes laboratoriais convencionais so operacionalmente complexos, requerem profissionais


especializados e infraestrutura laboratorial apropriada. Alm disso, o prazo para entrega dos
resultados desses testes pode ser longo, levando o indivduo a se desinteressar pelo resultado do
teste e consequente perda deste pelo sistema de sade.

Ao final da dcada de 1980, uma nova estratgia diagnstica surgiu. Chegaram ao mercado,
os testes rpidos. Com o avano das tecnologias de desenvolvimento e produo, esses testes
revelaram-se eficientes na investigao de doenas infectocontagiosas. Desde 2005, a utilizao
dos testes rpidos permite atender crescente demanda pelo diagnstico de agravos relevantes
sade publica, visto que sua utilizao aumenta a agilidade da resposta aos indivduos e permite
seu rpido encaminhamento para assistncia mdica e incio de tratamento.

!
Testes rpidos so aqueles cuja execuo, leitura e interpretao
dos resultados so feitas em, no mximo, 30 minutos. Alm
disso, so de fcil execuo e no necessitam de estrutura
laboratorial.

Testes rpidos so, primariamente, recomendados para testagens presenciais. Podem ser feitos
com amostra de sangue total obtida por puno venosa ou da polpa digital, ou com amostras de
fluido oral. Dependendo do fabricante, podem tambm ser realizados com soro e (ou) plasma.

A execuo dos testes rpidos, habitualmente, muito simples e a capacitao de pessoal pode
ser realizada presencialmente, ou por meio de ensino a distncia (EAD).

Diagnstico da Sfilis - Aula 7 1


Vantagens dos testes rpidos

A primeira vantagem significativa dos testes rpidos que eles possibilitam a liberao dos
resultados e a assistncia ao paciente em uma nica consulta.

Os testes rpidos no necessitam de estruturas laboratoriais ou de profissionais graduados para


sua execuo, assim como dispensam o transporte de amostras e a necessidade de coleta de
sangue venoso. Alm disso, a aplicao de testes rpidos auxilia na preveno da transmisso
vertical, facilita o diagnstico em populaes-chave e promove o acolhimento imediato, dentro da
estrutura assistencial do SUS.

Esses testes, que podem ser realizados durante atendimento ou consulta em qualquer local,
aumentam a resolutividade do SUS ao facilitar, ao indivduo, o conhecimento de sua situao
imunolgica.

A seguir, esto listadas situaes e locais em que se indica a utilizao dos testes rpidos.

Rede de servios de sade sem infraestrutura laboratorial, ou localizados em regies de


difcil acesso.
Programas do Ministrio da Sade (MS), como o Rede Cegonha, o Programa de Sade da
Famlia, o Consultrio na Rua e o Quero Fazer, dentre outros.
Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) e Unidade de Testagem Mvel (UTM).
Segmentos populacionais flutuantes.
Laboratrios que realizam pequenas rotinas (rotinas com at cinco amostras dirias para
diagnstico).
Prontos-socorros.
Maternidades.
Segmentos populacionais mais vulnerveis.
Parcerias sexuais.
Gestantes que no tenham sido testadas durante o pr-natal, ou cuja idade gestacional no
assegure o recebimento do resultado do teste, antes do parto.
Parturientes e purperas que no tenham sido testadas no pr-natal, ou quando no
conhecido o resultado do teste, no momento do parto.
Abortamento espontneo, independentemente da idade gestacional.
Pessoas em situao de violncia sexual.
Pacientes com diagnstico de tuberculose.

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Acidentes biolgicos ocupacionais. Notas:
Comunicantes de portadores de hepatite B.
1
1 - Comunicantes:
contatos intradomiciliares,
Comunicantes1 de portadores de hepatite C. sexuais ou qualquer um
que compartilhe objetos
Outras situaes especiais definidas pelo Departamento de DST, de uso pessoal do
Aids e Hepatites virais da Secretaria de Vigilncia em Sade do portador das hepatites
virais (escova de dente,
Ministrio da Sade (DDAHV) para aes de vigilncia, preveno lmina de barbear e outros
e controle das doenas sexualmente transmissveis. objetos de uso pessoal).
No caso de usurios de
drogas, esto includos
aqueles que compartilham
quaisquer materiais para
o uso (seringas, agulhas,
Tipos de testes rpidos canudos, cachimbos etc.).

Existem vrios formatos de TR. Os mais frequentemente utilizados


so: imunocromatografia de fluxo lateral; imunocromatografia de
dupla migrao (ou de duplo percurso DPP); dispositivos de
imunoconcentrao; fase slida (Figura 1).

Figura 1 Exemplos de testes rpidos (TR): (1a) imunocromatografia de fluxo lateral; (1b)
imunocromatografia de dupla migrao DPP; (1c) imunoconcentrao; (1d) fase slida.

Os testes rpidos podem ser realizados com amostras de sangue, soro,


plasma ou fluido crevicular gengival.

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Sangue, soro, plasma e fluido crevicular gengival
O sangue circula pelo corpo humano atravs do corao, de artrias, capilares e veias. Sua
principal funo o transporte de oxignio, gs carbnico, hormnios e nutrientes, bem como de
resduos do metabolismo at os rgos de excreo.

Alm disso, o sangue tem papel regulador na distribuio de calor, do equilbrio cido-bsico e do
equilbrio osmtico, sendo formado por uma fase slida e por outra lquida.

A fase slida contm os glbulos brancos (neutrfilos, eosinfilos, basfilos, linfcitos e


moncitos), os glbulos vermelhos (hemcias) e as plaquetas. A fase lquida do sangue o
plasma, no qual a fase slida est suspensa.

Denomina-se sangue total a amostra coletada por puno venosa em tubo contendo
anticoagulante ou mesmo o sangue coletado por puno digital. Quando se utiliza uma amostra
de sangue total, significa que no houve a separao da parte slida e da parte lquida do sangue.

O plasma um lquido de cor amarelada, que compe cerca de 55% do volume total do sangue.
Contm gua, sdio, gases, nutrientes, hormnios, enzimas e protenas, como fibrinognio,
globulinas e albumina. O plasma obtido por meio da coleta de sangue, em um tubo contendo
substncia anticoagulante.

Por sua vez, o soro a parte lquida obtida aps a coagulao do sangue, coletado em tubo sem
anticoagulante. Na formao do cogulo, o fibrinognio consumido.

O fluido crevicular gengival o lquido encontrado no sulco gengival, contendo protenas


plasmticas e anticorpos. Obtm-se esse fluido pressionando a gengiva acima dos dentes. Alguns
testes rpidos podem ser feitos com essa amostra biolgica.

O Quadro 1 sintetiza informaes sobre as amostras biolgicas utilizadas em testes rpidos.

Sangue total Soro Plasma Fluido crevicular gengival


Obtido na coleta Obtido na coleta de Obtido na coleta Lquido encontrado
de sangue em tubo sangue em tubo sem de sangue em tubo no sulco gengival.
contendo algum tipo anticoagulante. No contendo algum tipo de Obtido por meio de um
de anticoagulante, ou contm fibrognio. anticoagulante. Contm dispositivo especfico
por coleta com puno fibrognio. (Swab), pressionando
digital. a gengiva acima dos
dentes. Conhecido
popularmente como
fluido oral. Contm
protenas plasmticas e
anticorpos.

Quadro 1 Sangue total, soro, plasma e fluido crevicular gengival

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Metodologias e funcionamento dos
testes rpidos mais utilizados no Brasil
Os testes rpidos podem ser usados para pesquisar antgenos ou anticorpos contra os agentes
infecciosos para os quais foram projetados. Caso o teste seja para pesquisa de anticorpos,
haver antgenos (usualmente protenas sintticas) imobilizados, na membrana de nitrocelulose,
para a captura dos anticorpos presentes na amostra. Caso a pesquisa seja para antgenos, haver
anticorpos imobilizados para a captura dos antgenos presentes na amostra.

!
Para fins didticos, os testes sero apresentados considerando-se
a investigao de anticorpos contra os agentes infecciosos.

Testes por imunocromatografia de fluxo lateral


Caractersticas: utilizam uma membrana de nitrocelulose subdividida em quatro reas.

rea de amostra (A), onde aplicada a amostra e a soluo tampo.


rea intermediria (I), que contm o conjugado, geralmente composto de ouro coloidal
ligado a anticorpos (imunoglobulinas).
rea de teste (T), que contm os antgenos fixados membrana de nitrocelulose, onde se
l o resultado da amostra testada.
rea de controle (C), local de controle da reao e que permite a validao do teste.

Observe a Figura 2 a seguir.

Figura 2 Representao esquemtica de um teste de imunocromatografia de


fluxo lateral.

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Como funciona?

1. A amostra colocada no local indicado, na membrana (rea A).


2. A soluo tampo colocada sobre a amostra.
3. Os anticorpos da amostra fluem lateralmente pela membrana, passando pela rea I, onde
se inicia a ligao com o conjugado e prosseguem em direo rea de teste (T).
4. Na rea T, o complexo anticorpo-conjugado liga-se aos antgenos do agente infeccioso
investigado, formando uma linha (ou banda) colorida.
5. O conjugado no ligado ao anticorpo e o excesso do complexo imune continuam
a migrao, ao longo da membrana de nitrocelulose, em direo rea C, onde so
capturados por anticorpos anti-imunoglobulina, formando outra linha (ou banda) colorida.

Observe a Figura 3 a seguir.

Figura 3 - Ilustrao do funcionamento de um teste rpido de fluxo lateral.

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Resultado:

Reagente:
Quando houver formao de duas linhas coloridas: uma,
na rea de teste (T) e outra, na rea de controle (C).

No reagente:
Quando houver formao de uma linha colorida, somente
na rea de controle (C).

Invlido:
Quando no houver linha colorida, na rea de controle (C).

Quadro 2 Interpretao dos resultados do teste de imunocromatografia de fluxo lateral.

Sempre leia e interprete o resultado do teste em conformidade com as instrues que


acompanham o conjunto diagnstico, fornecidas pelo fabricante do teste rpido.

Os resultados do teste por imunocromatografia de fluxo lateral podem ser visualizados na forma
de ponto, linha ou banda colorida, dependendo do fabricante.

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Testes por imunocromatografia de dupla migrao, ou de duplo percurso
DPP (dual path plataform)
Caractersticas: utilizam uma membrana de nitrocelulose, na qual esto ligados antgenos e so
subdivididos em trs reas.

rea 1, onde se aplicam a amostra e o diluente.


rea 2, onde se aplica o tampo para permitir a migrao do conjugado.
rea 3, que contm os antgenos fixados e onde se faz a leitura do teste e do controle.

Como funciona?

1. A amostra e o tampo so aplicados na rea 1 do teste e migram, em direo rea 3.


2. Na rea 3, h antgenos fixados. Se houver anticorpos na amostra, eles iro se ligar a
esses antgenos.
3. Em seguida, adiciona-se o tampo na rea 2, que permite a migrao do conjugado
composto por protena A e partculas de ouro coloidal em direo rea 3. Essa migrao
ocorre perpendicularmente ao fluxo da amostra. Observe na Figura 5.
4. A protena A, componente do conjugado, liga-se s imunoglobulinas anticorpos que
j estavam ligados aos antgenos fixados na rea 3. Com a concentrao do ouro coloidal
nessa rea, possvel visualizar a presena de uma linha, de cor rosa ou prpura, que indica
a presena de anticorpos na amostra.
5. O conjugado continua o fluxo at ligar-se ao reagente da rea de controle, resultando no
aparecimento de uma linha rosa ou prpura, indicando que o resultado vlido.
Veja na figura 4 como funciona um teste DPP:

Figura 4 Imunocromatografia de dupla migrao DPP

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Resultados:

Reagente:
Quando houver formao de duas linhas coloridas: uma na rea
de teste (T) e outra na rea de controle (C).

No reagente:
Quando houver formao de uma linha colorida somente na rea
de controle (C).

Invlido:
Quando no houver linha ou banda colorida na rea de controle,
o resultado invlido.

Quadro 3 Interpretao dos resultados do teste de imunocromatografia de dupla migrao DPP

!
Para ser considerado vlido, um teste rpido deve sempre
apresentar a linha controle visvel, ao final da reao,
independentemente do resultado da amostra.

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Testes por imunoconcentrao (flow through)
Caractersticas: utilizam um dispositivo contendo os itens a seguir:

Uma membrana de nitrocelulose ou de nilon, na qual esto imobilizados antgenos do


agente infeccioso investigado.
Uma membrana absorvente, que est sob a membrana de nitrocelulose.
Conjugado composto de protena A conjugada com ouro coloidal.
Observe a figura 5 a seguir.

Figura 5 Representao esquemtica de um teste de imunoconcentrao

Como funciona?

1. A amostra colocada sobre a membrana. Ao passarem pela rea onde esto imobilizados
os antgenos do agente infeccioso investigado, os anticorpos da amostra, quando esto
presentes, ligam-se, formando um complexo.
2. Em seguida, adicionado o conjugado. A protena A do conjugado vai se ligar aos
anticorpos do complexo e a concentrao do ouro coloidal permitir a visualizao de um
ponto colorido.
3. A reao ser vlida se houver o aparecimento de um crculo colorido, na rea de controle
(C).

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Resultado:

Conforme indicado pelo fabricante, na rea de reao existem dois locais para leitura do teste:

rea de controle (C);


rea de teste (T).

Observe adiante, no quadro 4, como voc deve interpretar o teste.

Reagente:
Quando houver formao de um crculo colorido na rea de
controle (C) e um crculo colorido na rea de teste (T).

No reagente:
Quando houver formao de um crculo colorido somente na
rea de controle (C).

Invlido:
O resultado de um teste rpido somente ser vlido, quando
houver formao de um crculo colorido, na rea de controle
(C). Quando no surgir cor na rea de controle, o resultado
invlido.

Quadro 4 Interpretao dos resultados do teste de imunoconcentrao

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Testes rpidos por aglutinao
Caractersticas: utilizam partculas em suspenso, como gelatina, ltex ou poliestireno, revestidas
com antgenos.

Como funciona?

1. Os anticorpos, presentes na amostra, ligam-se aos antgenos adsorvidos partcula,


aglutinando-os.
2. Essa aglutinao visualizada a olho nu.

!
Utilize controles positivos e negativos fornecidos pelo fabricante
e (ou) produzidos em seu laboratrio e interprete os resultados
segundo as orientaes contidas nas instrues de uso do teste.

importante saber que a interpretao dos testes por aglutinao apresenta maior grau de
dificuldade em comparao com outras metodologias. O padro de reatividade apresentado por
amostras fracamente reagentes muito similar ao apresentado por amostras no reagentes.

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Testes rpidos por fase slida 4 - ELISA (do ingls
enzyme-linked
Caractersticas: baseiam-se no princpio metodolgico de um ELISA4 immunosorbent assay)
um teste imunolgico com
indireto. A fase slida se apresenta na forma de um pente com 12 revelao enzimtica.
dentes. Cada dente contm os itens listados a seguir. do tipo indireto porque o
conjugado composto por
uma anti-imunoglobulina
Uma rea com anticorpos anti-imunoglobulina humana (para o humana ligada a uma
controle da reao). enzima.

Uma rea com antgenos.


Alguns kits podem apresentar mais antgenos no pente.

Figura 6 Representao esquemtica do pente de reao de um TR por fase slida

Como funciona?

1. O dente do pente colocado em um recipiente que contm a


amostra.
2. As imunoglobulinas (anticorpos) da amostra vo se ligar s
anti-imunoglobulinas da rea de controle e formaro um complexo.
Se estiverem presentes, os anticorpos vo se ligar rea com
antgeno, formando um complexo.
3. Em seguida, o pente ser colocado em outro recipiente, que
contm o conjugado (anti-imunoglobulinas conjugadas com uma
enzima), e haver a ligao das anti-imunoglobulinas do conjugado
com os complexos formados na etapa anterior.
4. Em seguida, o pente ser colocado em um terceiro recipiente,
que contm o substrato (cromgeno + H2O2). A presena dos
anticorpos ser revelada pela formao de crculos coloridos, na
rea do controle e nas reas que contm anticorpos.

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Resultado:

Conforme indicado pelo fabricante, na rea de reao existem trs locais para leitura do teste:
um na rea de controle (C) e dois na rea especfica com diferentes antgenos.

Confira a seguir como voc deve interpretar os resultados.

Reagente para HIV-1:


Quando houver formao de um crculo colorido na rea indicada para HIV-1 e
na rea de controle (C).

Reagente para HIV-2:


Quando houver formao de um crculo colorido na rea indicada para HIV-2 e
na rea de controle (C).

No reagente:
Quando houver formao de um crculo colorido somente na rea de controle
(C).

Invlido:
Quando no houver crculo colorido na rea de controle (C).

Quadro 5 Interpretao dos resultados do teste rpido por fase slida

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Referncias

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