TESTE DE EFICCIA DE

CONSERVANTES DE
MEDICAMENTOS E
COSMTICOS

Felipe Rebello Loureno

Outubro/2016
DEFINIO DE
CONSERVANTES
So substncias com efeito antimicrobiano
utilizadas para conservao microbiana de
produtos farmacuticos e cosmticos

So substncias intrinsecamente txicas,

portanto a concentrao utilizada deve ser
pequena

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BIOCIDAS VS.
BIOSTTICOS
Biocida = mantm ou reduz o nvel de
contaminao por meio da destruio/morte
microbiana

Biosttico = mantm ou reduz o nvel de

contaminao por meio da inibio o
crescimento, porm no destri/mata

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MECANISMO DE AO
DOS CONSERVANTES
Combinao com grupamentos qumicos dos
conservantes com as protenas microbianas
Ao competitiva com determinados
processos enzimticos
Destruio ou inativao funcional de
material gentico
Reao ou desorganizao da membrana
celular

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CARACTERSTICAS IDEAIS
DOS CONSERVANTES
Apresentar amplo espectro de ao
Ser efetivo em extensa faixa de pH
Ser compatvel com os demais componentes da
frmula
No afetar as caractersticas do produto como cor,
odor e sabor da formulao
Ser seguro, ou seja, atxico, no irritante, nem
sensibilizante
Custo baixo

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CARACTERSTICAS IDEAIS
DOS CONSERVANTES
Ter adequado coeficiente de partio leo em gua,
de modo a permitir concentrao efetiva em ambas
as fases
Inativar rapidamente os contaminantes prevenindo a
adaptao microbiana
Estar de acordo com a legislao vigente
A concentrao do conservante deve ser mantida
durante o perodo de validade do produto

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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
Conhecimento das propriedades dos
antimicrobianos - estrutura qumica, aspectos
legais, combinaes
Conhecimento dos componentes da
formulao
Compatibilidade com o material de
acondicionamento

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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
CLORETO DE BENZALCNIO
Classe do composto:
R
quaternrio de amnio +
Estabilidade: boa, estvel a Cl N
condies de autoclavao
Incompatibilidade: tensoativos
aninicos, citratos, nitratos,
iodetos, metais pesados,
lcalis, alguns oxidantes,
algumas misturas de borracha,
protenas, sangue e alguns
tipos de plsticos
Concentrao de uso: 0,01% a
0,25%
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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
LCOOL BENZLICO
Classe do composto: lcool
Estabilidade: estvel a
condies de autoclavao,
levente oxidvel (benzaldedo e
OH cido benznico) ao ar,
reduzido por solues
saturadas com nitrognio,
desidrata a pH baixo
Incompatibilidade: agentes
oxidantes e inativado por
tensoativos no inicos
Concentrao de uso: 1%

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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
CLOROBUTANOL
Classe do composto: lcool
Estabilidade: decompe-se
quando aquecido em soluo
aquosa, especialmente em
Cl3C OH
condies alcalina
Incompatibilidade: alguns
tensoativos no ionicos e
lcalis, adsorvido por
recipientes de polietileno e H3C CH3
polipropileno
Concentrao de uso: 0,3% a
0,5%

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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
ETANOL
Classe do composto: lcool
Estabilidade: solues aquosas

OH
estveis a autoclavao em
recipientes fechados
Incompativilidade: usado como
solvente solvente ou co-
solvente em preparaes
farmac~euticas e cosmticas, e
como base na preparao de
tinturas
Concentrao de uso: 60% a
70%

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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
O OR PARABENOS
Classe do composto: ster do
cido benzico
Estabilidade: estvel, sofre
hidrlise em pH fortemente
alcalino e temperaturas
elevadas, solues cidas
podem resistir a condies de
autoclavao, sensvel a
exposio excessiva a luz

OH
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ESCOLHA DO SISTEMA
CONSERVANTE
O OR Incompatibilidade: agentes
aninicos, tensoativos no
inicos, metilcelulose, gelatina,
povidone e protenas podem
reduzir a atividade, incompatvel
com lcalis e sais de ferro
Concentrao de uso: acima de
0,4% para ster nico ou 0,8%
oara mistura de steres,
geralmente 0,2% de
metilparabeno, 0,15% de
etilparabeno, 0,02% de
propilparabeno e butilparabeno
OH e 0,006% de benzilparabeno

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ASSOCIAES DE
CONSERVANTES
Aumento do espectro de ao,
Utilizao de concentraes mais baixas,
podendo resultar em reduo dos efeitos
txicos,
Preveno do desenvolvimento de
resistncia microbiana em relao aos
componentes individuais,
Possibilidade de efeito sinrgico
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OBJETIVO E IMPORTNCIA DO
SISTEMA CONSERVANTE
Objetivo:
Evitar a proliferao microbiana

Importncia:
Assegurar a estabilidade do produto
Evitar que o uso inadequado destes produtos
acarrete doenas no consumidor

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TIPOS DE
PRODUTOS

Injetveis e Oftlmicos de Mltipla Dose

Produtos Orais

Produtos de Uso Tpico

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ATIVIDADE DE GUA EM
PRODUTOS FARMACUTICOS
FORMA FARMACUTICA ATIVIDADE DE GUA
Anti-cidos 0,99

Cremes 0,97

Solues Orais 0,90

Suspenses Orais 0,87

Pomadas 0,55

Supositrios 0,30

Comprimidos 0,36

Cpsulas 0,30

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ATIVIDADE DE GUA E
CRESCIMENTO MICROBIANO
BACTRIAS ATIVIDADE DE GUA FUNGOS ATIVIDADE DE GUA
Pseudomonas aeruginosa 0,97 Rhyzopus nigricans 0,93

Bacillus cereus 0,95 Mucor plumbeus 0,92

Clostridium botulinum 0,95 Rhodotorula mucilaginosa 0,92

Escherichia coli 0,95 Saccharomyces cerevisiae 0,90

Clostridium perfringens 0,95 Paecilomyces variotti 0,84

Lactobacilus viridescens 0,95 Penicilllium chrysogenum 0,83

Salmonella sp 0,95 Aspergillus fumigalis 0,82

Enterobacter aerogenes 0,94 Penicillium glabrum 0,81

Bacillus subtilis 0,90 Aspergilus flavus 0,78

Micrococcus lysodekticus 0,93 Aspergillus niger 0,77

Staphylococcus aureus 0,83 Zygosachharomyces rouxii 0,62

Halobacterium halobium 0,75 Xeromyces bisporus 0,61

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TESTE DE EFICCIA DO
SISTEMA CONSERVANTE
Desafio do sistema
conservante do
produto: contaminao
intencional com
quantidades altas de
microrganismos
especficos e avaliao
da carga sobrevivente
em intervalos de tempo
definidos

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POR QUE REALIZAR
O TESTE?
Quantidade insuficiente:
pode resultar em crescimento microbiano,
comprometendo a estabilidade do produto

Quantidade excessiva:
pode causar reaes indesejveis,
comprometendo a segurana do paciente

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QUANDO REALIZAR
O TESTE?
Produtos em desenvolvimento / novos

Estabilidade do produto

Alterao da frmula

Alterao do sistema conservante

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MANUTENO DO
SISTEMA CONSERVANTE

Degradao dos
conservantes

Degradao dos
conservantes
(hidrlise ou oxidao)
Compatibilidade com
material de embalagem

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COMPATIVIDADE COM
MATERIAL DE EMBALAGEM
QUANTIDADE DE PARABENO ABSORVIDA POR GRAMA DE MATERIAL POLIMRICO

Parabenos Polietileno Polipropileno Policarbonato Polimetacrilato Poliestireno

(0,003 mM)

Metilparabeno 0,6% 0,4% 4,8% 1,0% 0,0%

Etilparabeno 1,2% 0,2% 5,9% 0,8% 0,3%

Propilparabeno 1,5% 2,4% 1,4% 2,9% 2,8%

Butilparabeno 6,6% 5,7% 7,8% 6,5% 2,1%

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PROCEDIMENTO PARA O
TESTE DE EFICCIA

Determinar a carga
microbiana em
Amostra determinados
intervalos de tempo

Microrganismo

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MICRORGANISMOS
EMPREGADOS NO TESTE
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)
Escherichia coli (ATCC 8739)
Staphylococcus aureus (ATCC 6538)
Candida albicans (ATCC 10231)
Aspergillus niger (ATCC 16404)

Outros, inclusive isolados de rea produtiva

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CONDIES PARA
O TESTE DE EFICCIA
Quantidade da amostra:
no menos que 20 g ou mL

Carga do inculo: 105-106 UFC/ g ou mL

(no mais que 1% do volume da amostra)

Intervalo de tempo aps a inoculao: inicial,

6 horas, 1 dia, 2 dias, 7 dias, 14 dias e 28 dias

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PREPARO DO INCULO
PARA O TESTE
Preparo do inculo a partir de culturas
recentes
Microrganismos com no mais que 5
passagens

Bactrias: 30 -35C por 24 horas

Leveduras: 20 -25 C por 48 hora
Bolores: 20 -25 C por 5 a 7 dias

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MEIOS DE CULTURA E
CONDIES DE INCUBAO
Bactrias:
Meio de cultura: Agar de casena-soja (TSA)
Incubao: 30-35C por 3-5 dias
Leveduras:
Meio de cultura: Agar sabouraud-dextrose (SDA)
Incubao: 20-25C por 3-5 dias
Bolores:
Meio de cultura: Agar sabouraud-dextrose (SDA)
Incubao: 20-25C por 5-7 dias
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CONSERVANTES VS.
INATIVANTES
CONSERVANTE INATIVANTE
CLORETO DE BENZALCNIO LECITINA E TWEEN 80

LCOOL BENZLICO DILUIO E TWEEN 80

CLOROBUTANOL DILUIO E TWEEN 80

ETANOL DILUIO

FENOL DILUIO E TWEEN 80

PARABENOS DILUIO E TWEEN 80

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CRITRIOS DE ACEITAO:
COMPARATIVO
Produtos Injetveis e Oftlmicos
Mtodo 6 horas 1 dia 2 dias 7 dias 14 dias 28 dias
Bactrias - - - 1 3 NA-14d
USP
Fungos - - - NA-I NA-I NA-I
2 3 - - - NC
Bactrias
BP / - 1 - 3 - NA-7d
EP - - - 2 - NA-7d
Fungos
- - - - 1 NA-14d
Bactrias - - - 1 3 NA-14d
FB
Fungos - - - NA-I NA-I NA-I

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CRITRIOS DE ACEITAO:
COMPARATIVO
Produtos de uso tpico
Mtodo 6 horas 1 dia 2 dias 7 dias 14 dias 28 dias
Bactrias - - - - 2 NA-14d
USP
Fungos - - - - NA-I NA-I
- - 2 3 - NA-7d
Bactrias
BP / - - - - 3 NA-14d
EP - - - - 2 NA-14d
Fungos
- - - - 1 NA-14d
Bactrias - - - - 2 NA-14d
FB
Fungos - - - - NA-I NA-I

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CRITRIOS DE ACEITAO:
COMPARATIVO
Produtos Orais
Mtodo 6 horas 1 dia 2 dias 7 dias 14 dias 28 dias
Bactrias - - - - 1 NA-14d
USP
Fungos - - - - NA-I NA-I

BP / Bactrias - - - - 3 NA-14d
EP Fungos - - - - 1 NA-14d

Bactrias - - - - 1 NA-14d
FB
Fungos - - - - NA-I NA-I

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CRITRIOS DE ACEITAO:
COMPARATIVO
Produtos Anticidos
Mtodo 6 horas 1 dia 2 dias 7 dias 14 dias 28 dias
Bactrias - - - - NA-I NA-I
USP
Fungos - - - - NA-I NA-I

Bactrias - - - - - -
BP /
EP Fungos - - - - - -

Bactrias - - - - NA-I NA-I

FB
Fungos - - - - NA-I NA-I

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CRITRIOS DE ACEITAO:
CTFA
Produtos para rea dos olhos e bebs
Bactrias: reduo > 99,9% (3 log) da contagem
inicial em 7 dias, com decaimento contnuo at a
finalizao do teste
Fungos: reduo > 90% (1 log) da contagem
inicial em 7 dias, com decaimento contnuo at a
finalizao do teste
Bactrias esporuladas: ao bacteriosttica
durante todo o perodo de teste

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CRITRIOS DE ACEITAO:
CTFA
Outros Produtos
Bactrias: reduo > 99,9% (3 log) da contagem
inicial em 7 dias, sem aumento da carga
microbiana at a finalizao do teste
Fungos: reduo > 90% (1 log) da contagem
inicial em 7 dias, sem aumento da carga
microbiana at a finalizao do teste

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MTODO DE
REGRESSO LINEAR
Mtodo alternativo - proposto por Orth
Quando uma determinada populao microbiana
exposta a um agente microbiano perde sua
viabilidade de modo regular e os sobreviventes
decrescem de forma exponencial com o tempo.
Valor D: tempo necessrio para a reduo de
90% da populao de microrganismo quando
submetido ao agente letal sob condies
constantes.

OUT/2016 Teste de eficcia de conservantes de medicamentos e cosmticos 36

MTODO DE
REGRESSO LINEAR
Quantidade de Amostra: 50 g ou mL
Volume do inculo: 0,1 mL
Inculo: 107 UFC/g ou mL
Intervalos de tempo
Bactrias: 2, 4, 24 e 48 horas
Leveduras: 4, 8, 24 e 48 horas
Bolores: 4, 8, 24, 48 horas e 7 dias

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MTODO DE
REGRESSO LINEAR
Critrios de Aceitao:
Bactrias patognicas:
Valor-D 4 horas
Bactrias no patognicas e Fungos:
Valor-D 28 horas
Bactrias formadoras de esporos:
Ao bacteriosttica

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MTODOS
AUTOMATIZADOS

Sistema Miniaturizado
Nmero mais provvel
Meio cromognico
Leitura automatizada

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REFERNCIAS
BIBLIOGRFICAS
BRITISH PHARMACOPEIA
EUROPEAN PHARMACOPEIA
FARMACOPIA BRASILEIRA
JAPANESE PHARMACOPEIA
UNITED STATES PHARMACOPEIA
PINTO, KANEKO & PINTO. Controle Biolgico
de Qualidade de Produtos Farmacuticos,
Correlatos e Cosmticos

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