Avaliao dos efeitos biolgicos adversos dos frmacos anti-hipertensivos

Losartan e Valsartan em ourio-do-mar Lytechinus variegatus

(ECHINODERMATA, ECHINOIDEA).
Nathlia Sayuri Yamamoto1, Camilo Dias Seabra Pereira1,2 , Fernando Sanzi Cortez1, Fabio
Hermes Pusceddu1, Aldo Ramos Santos1 , Walber Toma1 , Luciana Lopes Guimares1.
1
Laboratrio de Ecotoxicologia, Universidade Santa Ceclia, 11045-907, Santos, SP, Brasil.
2
Instituto do Mar, Universidade Federal de So Paulo, 11030-400, Santos, SP, Brasil.

Os frmacos anti-hipertensivos so amplamente utilizados no mundo todo, tendo evidncias

da ocorrncia destes compostos como o Losartan e o Valsartan em baixas concentraes em
matrizes ambientais e nos efluentes domsticos. Devido a esses fatos, este estudo avaliou os
efeitos dos frmacos Losartan e Valsartan por meio de ensaios de toxicidade para avaliar os
efeitos crnicos em ourio-do-mar Lytechinus variegatus. Os ensaios crnicos foram
realizados de acordo com a norma NBR 15350/2012, para os frmacos Losartan e Valsartan,
onde revelaram os valores de CENO (Concentrao de Efeito No Observado 50 mg.L-1) e
CEO (Concentrao de Efeito Observado 70 mg.L-1) para o Losartan e de (CENO 12,5
mg.L-1 e CEO 25 mg.L-1) para o Valsartan, diferenas que poderiam ser justificadas pelos
valores de Kow destas molculas. Estes resultados demonstram a improvvel ocorrncia de
risco ecolgico destes frmacos no ambiente, por se tratar, de concentraes de efeito
superiores aos j relatados no ambiente aqutico.

Palavras-chave: Ecotoxicologia; Losartan; Valsartan; Lytechinus variegatus.

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Assessment of adverse biological effects of antihypertensive drugs Losartan

and Valsartan on urchin Lytechinus variegatus (ECHINODERMATA,
ECHINOIDEA).
The antihypertensive drugs are widely used worldwide, with evidence of the occurrence of
these compounds as Losartan and Valsartan in low concentrations in environmental matrices
and domestic effluents. Due to these facts, this study evaluated the effects of drugs Losartan
and Valsartan through toxicity tests to assess the chronic effects on sea -urchin Lytechinus
variegatus. Chronic assays were performed according to NBR 15350/2012, for
pharmaceuticals Losartan and Valsartan, which showed values NOEC (No Observed Effect
Concentration - 50 mg.L-1) and (CEO Concentration Effect observed - 70 mg L-1) for Losartan
and (NOEC - 12.5 mg. L-1 and CEO - 25 mg L-1) for Valsartan, differences that could be
justified by the values of Kow these two molecules. These results demonstrate the unlikely
occurrence of ecological risk of these drugs in the environment, because it is, in effect
concentrations higher than those already reported in the aquatic environment.

Keywords: Ecotoxicology, Losartan, Valsartan and Lytechinus variegatus.

Original received on December, 2013

UNISANTA BioScience p. 27 - 32; Vol. 3 n 1, (2014) Pgina 27

Introduo

Os frmacos e produtos de higiene pessoal so produzidos e consumidos em grandes

quantidades no mundo todo. Estes compostos so utilizados na cura e no tratamento de
doenas e, dessa forma, so produzidos para serem persistentes e manterem suas propriedades
qumicas tempo suficiente para atender um propsito teraputico. Aps o consumo, cerca de
50 a 90 % de uma dosagem de um frmaco excretada inalterada (MULROY, 2001) e a outra
parte dessas substncias so metabolizadas e excretadas pelas fezes e urina. Assim, esses
resduos de frmacos alcanam o ambiente natural atravs de lanamentos de esgotos in
natura, ou ento por meio de lanamentos de efluentes aps tratamento convencional nas
estaes de tratamento de esgoto (ETEs), os quais no removem completamente essas
substncias (BELISRIO et al., 2009).

Em diversas partes do mundo, estudos recentes sobre a identificao de compostos

farmacuticos em matrizes ambientais (gua de abastecimentos, guas superficiais e em
sedimentos) tm demonstrado a ocorrncia de muitas classes de frmacos encontrados em
concentraes que variam de pg.L -1 at mg.L -1 (BILA & DEZOTTI, 2003).
Os anti-hipertensivos representam uma das principais classes de frmacos com
potencial risco de causar efeitos biolgicos em organismos aquticos, seja pelo uso difundido
em todo mundo, ou ainda pela atuao em seus respectivos alvos moleculares. O frmaco
Losartan, um anti-hipertensivo pertencente classe dos antagonistas dos receptores (tipo
AT1) da angiotensina II (OPARIL et al., 2001), foi identificado por Larsson et al. (2007) em
efluentes na ndia em concentraes de at 2,5 g.L -1. Guimares et al. (2012), identificaram
alguns frmacos em gua superficial marinha na rea adjacente ao descarte do efluente do
emissrio submarino de Santos (So Paulo, Brasil), dentre eles o Losartan e o Valsartan.
A presena destes compostos farmacuticos no ambiente leva a necessidade de conhecer os
efeitos adversos que podem causar biota aqutica. Assim, torna-se importante realizar
estudos com o emprego de ensaios ecotoxicolgicos, sendo possvel observar os efeitos que
os efluentes industriais e domsticos, substncias qumicas, frmacos, entre outros
contaminantes, podem causar nos sistemas biolgicos.

Alguns animais marinhos tm sido utilizados como organismos-teste em ensaios de

toxicidade, como o ourio-do-mar Lytechinus variegatus, esta espcie normalmente
encontrada desde a Carolina do Norte (Estados Unidos) at a costa sudeste do Brasil (ABNT
NBR 15350, 2012). Os ourios-do-mar so considerados bons bioindicadores ambientais por
terem alta sensibilidade s mudanas que ocorrem no ambiente, alm disso, estes
invertebrados marinhos so animais com forma de vida sedentria, o que permite investigar a
contaminao de um determinado local ao longo do tempo (VENTURA et al., 2007). Os
estgios, embrionrio e larval, de invertebrados marinhos so menos tolerantes ao txico do
que o estgio adulto, por isso tem sido utilizado para avaliar a qualidade da gua marinha e
dos sedimentos (BELLAS et al., 2005).
Diante destes fatos, este estudo tem como objetivo analisar os efeitos biolgicos dos
frmacos Losartan e Valsartan por meio de ensaios de toxicidade para avaliao dos efeitos
crnicos em ourio-do-mar Lytechinus variegatus.

Materiais e Mtodos

Substncias teste

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 As estruturas qumicas do Losartan (CAS 124750-99-8) (2-butil-4cloro-1-[[2-(1H-
tetrazol-5-il)[1,1-bifenil]-4-il]metil]1H-imidazol-5-metanol) de valor de log Kow
(Coeficiente de Partio octanol/gua) igual 1,19 (ao pH 7,0), e do Valsartan (CAS 137862-
53-4) (n-(1-oxopentil)-n-[[2-(1H-tetrazol-5-il)[1,1-bifenil]-4-il]metil]-L-valine) de log Kow
igual a 3,65 esto apresentadas na figura 1 (FDA, 2002).

Losartan Valsartan

Figura 1. Estrutura qumica do Losartan e Valsartan.

Fonte: Hazardous Substances Data Bank (2013).

Ensaio de toxicidade para avaliar o efeito crnico (Embriolarval) de curta durao com
Lytechinus variegatus (ECHINODERMATA, ECHINOIDEA).
Os ensaios crnicos foram realizados de acordo com a ABNT/NBR 15350/2012 e
consiste na exposio de embries de ourio-do-mar (Lytechinus variegatus) por um perodo
de 24 a 28 horas, a vrias diluies da substncia que ser analisada durante o perodo de
desenvolvimento embriolarval.
Inicialmente, gametas de L. variegatus foram obtidos atravs de uma injeo de KCl
0,5 M. Aps induzir a liberao dos gametas, as fmeas foram acondicionadas em recipiente
menor que o seu dimetro com a superfcie aboral voltada para baixo, onde os ovcitos, de
colorao amarelo-alanajados, foram mantidos at o momento da fertilizao. Os machos
foram estimulados e os espermatozoides (de colorao branca) foram coletados com uma
pipeta Pasteur e colocados em bqueres de 30 mL. Em seguida, foi preparada uma soluo de
0,5 mL de espermatozoide avolumada para 25 mL com gua de diluio. Essa soluo foi
agitada para evitar a formao de grumos. Aps este procedimento, foi adicionado de 1,2 mL
a 2 mL da soluo de espermatozoides no recipiente com os ovcitos, com leve agitao
durante 10 minutos para fertilizao. Aps este perodo, foram retiradas trs alquotas de 10
L desta soluo para observao em cmara de Sedgwick-Rafter para verificar a taxa de
fertilizao dos ovcitos, a qual, pelos critrios de aceitabilidade do ensaio, deve ser de no
mnimo 80%.

Foram realizados trs ensaios crnicos com o Losartan e dois ensaios crnicos com o
Valsartan. Cada ensaio foi conduzido com quatro rplicas para cada diluio, em tubos de
ensaios de 10 mL. Os compostos foram diludos em gua marinha natural filtrada em uma
membrana de celulose (0,45 m de porosidade), com valores de pH, oxignio dissolvido e
salinidade dentro dos padres de aceitabilidade do mtodo. Para o Losartan foram
estabelecidas as concentraes de 3, 125; 6,25; 12,5; 25; 50; 100; 200 mg.L-1 e um controle
para os ensaios preliminares. E as concentraes definitivas (denominadas solues-teste)
para o Losartan foram de 50; 70; 98; 137,2; 192,08 mg.L -1 e um controle. Para as diluies do
frmaco Valsartan, foi necessrio a utilizao do solvente dimetilsufxido (DMSO) para a
solubilizao inicial deste frmaco. As concentraes estabelecidas para os ensaios definitivos

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com Valsartan foram de 1,562; 3,125; 6,25; 12,5; 25; 50; 100 mg.L-1 e um controle com gua
do mar e um controle com DMSO (nas concentraes finais dos ensaios com Valsartan).

Aps colocar os embries em cada frasco-teste (300 embries), os ensaios foram

mantidos em uma cmara de germinao por 24 a 28 horas, com temperatura de 25 2 C e
fotoperodo de 12 a 16 horas de luz. A partir do controle foi retirada uma alquota para
verificar se pelo menos 80 % das larvas atingiram o estgio de pluteus. Aps a verificao
desse estgio, o ensaio foi encerrado com 0,5 mL de formol tamponado com brax. A leitura
dos resultados foi realizada com auxlio de uma cmara de Sedgwick -Rafter, onde os 100
primeiros organismos foram analisados e o grau de desenvolvimento foi estabelecido como
normal ou retardado. Ao trmino dos ensaios, os dados foram analisados com o uso do
software TOXTAT 3.5 (WEST & GULLEY, 1996) para determinao da Concentrao de
Efeito No Observado (CENO) e Concentrao de Efeito Observado (CEO).

Resultados e Discusso
Os resultados obtidos nos ensaio de toxicidade para avaliao dos efeitos crnicos dos
frmacos Losartan e Valsartan so apresentados na tabela 1. Os valores foram expressos como
a mdia de trs ensaios para o Losartan e dois ensaios para o Valsartan.

Tabela 1 Toxicidade crnica (Embriolarval) dos frmacos Losartan e Valsartan para

Lytechinus variegatus.

CENO CEO

Losartan 50 mg.L-1 70 mg.L-1

Valsartan 12,5 mg.L-1 25 mg.L-1

CENO Concentrao de Efeito No Observado; CEO Concentrao de Efeito Observado.

Apesar de ambos os frmacos terem sido projetados para atuao no mesmo alvo
molecular (receptor AT1 para Ang II) as diferenas observadas para os valores de CENO e
CEO poderiam ser justificadas pelas diferenas nos valores de Kow para as duas molculas,
aonde se observam efeitos para o Valsartan, cujo valor de log Kow de 3,65, em
concentraes inferiores deste frmaco, enquanto os valores superiores observados para
CENO e CEO nos ensaios com o Losartan poderiam ser um reflexo do seu baixo valor de
log Kow, que de 1,19.

Dados relacionados farmacocintica so de fundamental importncia para a

avaliao do risco ambiental dos frmacos. Dentre os conceitos associados a esta linha
farmacolgica encontram-se os valores de Kow. Sabe-se que, a partir destes valores, possvel
correlacionar os parmetros farmacocinticos de uma molcula, tais como absoro,
distribuio, metabolizao e excreo no organismo humano, bem como a propriedade de
bioacumulao em organismos aquticos, contribuindo deste modo para anlises
ecotoxicolgicas. De acordo com esta viso, frmacos que apresentam maiores valores de Kow
possuem maior efeito bioacumulativo, aumentando deste modo, a possibilidade da gerao de
danos ecotoxicolgicos. Estas informaes podem ser visualizadas nos ensaios realizados
(Tabela 1), onde o frmaco Valsartan, que possui maior valor de Kow quando comparado ao
Losartan, demonstra menores valores de CENO e CEO. Tais dados podem confirmar a
hiptese de que Valsartan apresentaria maior risco de danos ambientais quando comparado
com a Losartan.
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 No entanto, improvvel a ocorrncia de efeitos adversos crnicos destes frmacos
em ambiente aqutico marinho, pois as concentraes de efeitos para estes dois frmacos so
superiores s concentraes j relatadas na literatura cientfica para o ambiente aqutico.

Concluses
O efeito crnico do frmaco Losartan nos ourios-do-mar Lytechinus variegatus foi
observado na concentrao de 70 mg.L-1 , j para o frmaco Valsartan observou-se efeitos a
partir da concentrao de 25 mg.L-1, diferenas que podem ser justificadas pelos valores de
Kow destes frmacos. improvvel a ocorrncia de efeitos adversos crnicos destes frmacos
no ambiente aqutico marinho, pois as concentraes de efeitos so superiores s
concentraes j relatadas em ambiente aqutico.

Referncias Bibliogrficas
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