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Facultad de Ciencia, Tecnologa y Ambiente

Departamento de Ciencias Bsicas


Coordinacin de Ciencias Naturales
Asignatura: Quimiometra e Instrumentacin

Unidad III: Quimiometra e Instrumentacin

I. Objetivos

1. Diferenciar correctamente los diferentes mtodos cromatogrficos de


anlisis
2. Cuantificar las concentraciones de un analito a travs del mtodo de
patrn externo, patrn interno y normalizacin de reas
3. Identificar las aplicaciones de los diferentes detectores en HPLC y
cromatografa de gases
4. Interpretar la naturaleza de las fases estacionarias y mviles en HPLC y
cromatografa de gases

II. Explique

a) Fase mvil
b) Fase estacionaria
c) Eluyente
d) Elusin
e) Patrn externo e interno
f) Normalizacin de reas
g) Parmetros de cuantificacin en HPLC y cromatografa de gases
h) Tipos de detectores en HPLC y cromatografa de gases
i) Tipos de mtodos cromatogrficos
III. Resuelva:

1. Las reas de los picos y las respuestas relativas del detector se deben
emplear para determinar la concentracin de las cinco especies de una
muestra. Para ello se emplea el mtodo de normalizacin de rea. Con los
datos de la sig. tabla calcule el porcentaje de c/u de los componentes de la mezcla:

Compuesto rea relativa de pico Respuesta relativa del


detector
A 32,5 0,70
B 20,7 0,72
C 60,1 0,75
D 30,2 0,73
E 18,3 0,78

2. Las reas relativas de pico obtenidas por cromatografa de gases de las


muestras A, B y C son: 16,4; 45, 2; y 30,2 respectivamente. Calcular el
porcentaje de cada compuesto si las respuestas relativas del detector fueron
respectivamente 0, 60; 0,70 y 0,88.

3. Se toman 25 mL de una muestra de cerveza para determinar el contenido de


Nitrosodimetilamina y se le agrega como patrn interno
Nitrosodipropilamina. Se encuentra que el factor de respuesta es 1,9.
Calcule la concentracin de Nitrosodimetilamina en la muestra de cerveza
con los datos que se presentan a continuacin:

Masa aadida de NDPA: 0,09 g


rea del pico de Nitrosodimetilamina(NDMA): 16099
rea del pico de patrn interno (NDPA): 14500

4. Para las siguientes especies A y B se obtuvieron los siguientes datos:


tr, min W, min
A 10,0 0,76
B 13,4 1,06

Calcule la resolucin de la columna

5. En un matraz de 250 mL se pesan 0,052 g de cido ascrbico. Se enrasan con


agua. Se toman 5 mL y se enrasan a 50 mL. De esta solucin se inyectan 20 L
al cromatgrafo HPLC dando una rea de 101. Cinco gramos de muestra de mermelada
se agitan con 100 mL de agua y el extracto se analiza directamente dando un rea de
125. Calcule el contenido de vit. C en mg/kg en la mermelada

6. Complete la siguiente tabla:


Muestra Detector Fase movil Fase Mtodo
estacionaria cromatogrfico
Azcares en
miel
Vit. C
DDT
Ocratoxina

7. En la siguiente tabla se muestra el factor de retencin k para cuatro gases de


refinera, estudiados a tres temperaturas diferentes en una misma columna capilar
(longitud 30 m y dimetro interno 250 m) cuya fase estacionaria es del tipo
SE-30. El cromatgrafo est equipado con un accesorio criognico.

Compuesto Temp. Ebullic. Temperatura de la columna (oC)


(oC) -35 25 40

Etileno -104 0,249 0,102 0,0833


Etano -89 0,408 0,148 0,117
Propeno -47 1,899 0,432 0,324
Propano -42 2,123 0,481 0,352

a) Segn el orden de elucin, se puede decir si la fase SE-30 es polar o no?


b) Calcular el factor de separacin para la pareja propeno-propano a las tres
te4mperaturas indicadas
c) Cul es la cantidad de platos tericos de la columna para el propano a
40oC, sabiendo que a esta temperatura la resolucin para esta pareja es
igual a 2? Calcular los platos tericos correspondientes

8) Cual es el orden de elucin de los siguientes cidos en HPLC con una


columna cuya fase estacionaria es de tipo C18 y la fase mvil es un tampn
formiato de concentracin 20 mM a pH 9?

1) cido linoleico: CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH


2) cido araqudico: CH3(CH2)18COOH
3) cido oleico: CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH

9) Se desea estudiar por HPLC la separacin de dos compuestos A y B con una


columna de tipo RP-18. La fase mvil es una mezcla binaria de agua y acetonitrilo. Se
admite que existe una relacin lineal entre el logaritmo del factor de retencin y el
porcentaje de acetonitrilo de la mezcla binaria agua/acetonitrilo utilizado. Las
ecuaciones de las dos rectas obtenidas a partir de dos cromatogramas que utilizan
como fase mvil, uno una mezcla agua/acetonitrilo 70/30 v/v y oro una mezcla
agua/acetonitrilo 30/70 v/v, son:

Para el compuesto A: log kA= -6,075x10-3 (% MeCN) + 1,3283


Para el compuesto B: log kB= -0,0107 (% MeCN) + 1,5235

a) Encontrar la composicin de la fase binaria que dar lugar a un factor de


separacin de 1
b) Se supone que para cada compuesto la anchura a media altura del pico
correspondiente en el cromatograma es la misma y que la eficacia de la columna
no se modifica siguiendo la composicin de la fase mvil. La resolucin entre los
dos picos es mejor para la fase mvil que contiene un 70% de agua o un 30% de
agua? Mostrar el inters practico de la eleccin precedente.

10) Considere una columna de 50 cm de longitud con una altura del plato de 1,5 mm, que
proporciona un nmero de platos tericos de 333, con un gasto de 3 mL/min y VM=1,0 mL.
a) Cul es el tiempo de retencin del soluto y el volumen de retencin cuando k es 1, 2,
3 y 10?.
c) Cul es el ancho de pico en la lnea base para cada uno de los anteriores valores
de k?

11) El anlisis de fase inversa de una mezcla de las siguientes diaminas: H2N(CH2)4NH2 y
H2N(CH2)3NH2 da dos picos con muy pobre separacin cuando se utiliza como fase
mvil metanol-solucin reguladora (60/40, pH 2). Qu modificaciones en el
procedimiento se necesitaran para lograr una resolucin prcticamente a la lnea
base?

12. En una fase enlazada C18 un compuesto en particular se mueve muy despacio con
un disolvente metanol/acetonitrilo (50/50) Qu ajuste se debe hacer en la proporcin
de los disolventes?

13. Durante una separacin de carbohidratos utilizando un grupo funcional aminoalquil


enlazado, al aumentar la concentracin de agua en la fase mvil acetonitrilo/agua reduce
la retencin. Est la fase actuando en el modo de fase normal o de fase inversa?

14. Mencione las principales diferencias entre la cromatografa de gases y lquidos.

15 El anlisis del par ciclohexano/benceno se efectu a 65<c en una columna SCOT


preparado con escualeno como fase liquida. 1) a la velocidad optima del gas
transportador (18 cm/s) y 2) a la velocidad practica optima (60 cm/s) utilizando helio
como gas transportador. El facto de separacin es de 1,24. Para el pico de ciclohexano
k=1,41. La altura del plato fue de 0,56 para la condicin (1) y de 1,80 cm para la
condicin (2). La resolucin deseada es de 1.5. Calcular:

a) El nmero de platos requeridos para cada condicin de operacin


b) Las longitudes de la columna
c) Los tiempos de anlisis necesarios

16. La areas de pico obtenidas por cromatografa de gases para una mezcla de acetato
de metilo, propionato de metilo y butirato de metilo fueron 17,6; 44,7; y 31,1
respectivamente. Calcular el porcentaje de cada compuesto si las respuestas relativas de
deteccin fueron respectivamente: 0,65;0,83 y 0,92.

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