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1 IDENTIFICAO DE RAA E TIPO HG DE POPULAES DE NEMATOIDE


2 DE CISTO DA SOJA

3
4 Almeida, J. A.; Souza, J. C.; Arajo, F. G.
5
6 Janaina Alves de Almeida; Jean Cramenak de Souza; Fernando Godinho de Arajo
7 Instituto Federal Goiano campus Uruta. (jana_ba_tera@hotmail.com). Instituto Federal
8 Goiano campus Uruta (jeancramenak@gmail.com). Instituto Federal Goiano campus
9 Uruta (godinhoaraujo@hotmail.com)

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11 RESUMO

12 Sabendo-se que para a tomada de decises sobre o uso de cultivares resistentes


13 necessrio conhecer a raa do nematoide presente na rea, o objetivo desse trabalho foi
14 caracterizar geneticamente, em raa e Tipo HG, populaes do nematoide de cisto da soja
15 (Heterodera glycines) provenientes do municpio de Ipameri GO. O experimento foi
16 conduzido em ambiente protegido, em Uruta GO, em delineamento inteiramente
17 casualizado (DIC) em esquema fatorial 8 (cultivares diferenciadoras) x 2 (populaes de
18 NCS) com oito repeties. Foi avaliado, trinta dias aps a inoculao, o nmero de fmeas
19 presentes no sistema radicular de cada cultivar diferenciadora. A classificao em raa e
20 Tipo HG foi realizada com base no ndice de fmeas (IF), onde IF = (NMF da
21 diferenciadora / NMF da cultivar Lee). A populao da rea 1 foi identificada como
22 raa 6 e Tipo HG 0-, enquanto que a populao 2 foi raa 14+, sendo o Tipo HG 1.3.8-
23 (provisrio em funo do NMF na Lee 74 ter sido muito baixo).

24 Palavras-chave: caracterizao gentica. Glycine max. Heterodera glycines.

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26 ABSTRACT

27 Knowing that for making decisions about the use of resistant cultivars is necessary to
28 know the race of this nematode in the area, the purpose of this study was to characterize
29 genetically, on race and HG Type, soybean cyst nematode populations (Heterodera
30 glycines) from the municipality of Ipameri - GO. The experiment was conducted under
31 greenhouse conditions in Uruta - GO, in a completely randomized design (CRD) factorial
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32 8 (differential cultivars) x 2 (populations SCN) with eight replications. Was evaluated


33 thirty days after inoculation, the number of females present in the root system of each
34 cultivar distinctive. The classification of race and HG Type was based on a female index
35 (IF), where IF = (MNF differentiating / MNF cultivar 'Lee'). The population of the area 1
36 has been identified as race 6 and HG Type 0- while the population 2 was race 14+, and
37 the HG Type 1.3.8- (working on the basis of MNF in 'Lee' 74 have been too low).

38 Key-words: genetic characterization. Glycine max. Heterodera glycines.

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40 INTRODUO

41 Dentre os problemas fitossanitrios, que limitam a obteno de altos rendimentos


42 da cultura da soja destaca-se o nematoide Heterodera glycines, devido aos prejuzos
43 causados e a facilidade de disseminao, garantida pelos cistos (Embrapa, 2015). O H.
44 glycines, conhecido como nematoide de cisto da soja (NCS), foi detectado pela primeira
45 vez no Brasil na safra de 1991/1992 (Lima et al., 1992; Lordello et al., 1992; Monteiro &
46 Morais, 1992) e desde ento vem afetando negativamente o cultivo da soja no pas.

47 Nos locais onde foi detectado o NCS, os prejuzos na lavouras foram


48 significativos, variando de 10 a 100 % (Sinclair, 1982; Silva, 1998). Nos anos de 2003 a
49 2005, nos Estados Unidos, houve perdas de produtividade respectivamente 2,9; 3,47 e
50 1,93 milhes de toneladas, provocadas pelo nematoide, dando nfase a severidade da
51 doena (Wrather & Koenning, 2006). Dhingra et al. (2009) alertaram que as perdas de
52 produtividade de gros podem atingir 90 %, em combinao com o grua de infestao e
53 raa do nematoide, fertilidade do solo e suscetibilidade da cultivar.

54 Em reas com a presena do H. glycines as trs principais estratgias de manejo


55 se baseiam na rotao de culturas, manejo do solo e uso de cultivares resistentes
56 (Embrapa, 2015). Para Rigss & Schmitt (1993), a rotao de culturas eficiente no
57 controle do nematoide pelo nmero limitado de hospedeiros, sendo as culturas do milho,
58 sorgo, trigo, cana de acar, algodo e girassol as mais empregadas (Yorinori, 2000).

59 O uso de cultivares resistentes o mtodo mais empregado no mundo para o


60 controle do NCS devido eficincia e viabilidade econmica (Niblack et al., 2002) e
61 vrias fontes de resistncia j foram identificadas e so utilizadas no melhoramento de
62 soja (Dias et al, 2009). Porm, pelo fato da maioria dos materiais resistentes ter genes de
63 Peking (raas 1, 3 e 5) e da PI 88788 (raas 3 e 14) (Hartwig, 1985; Rao-Arelli, 1994),
3

64 o patgeno supera com facilidade a resistncia dessas cultivares. Conhecer a raa do


65 patgeno presenta na rea fundamental para escolher os materiais resistentes a fim de
66 evitar a presso de seleo, visto que esse nematoide possui grande variabilidade gentica
67 (Riggs & Schmitt, 1993).

68 Estudos identificando raas e/ou tipos do NCS em reas contaminadas so


69 escassos e isso tem ocasionado graves problemas na utilizao da resistncia gentica no
70 manejo do nematoide de cisto. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi caracterizar
71 geneticamente, em raa e Tipo HG, populaes do nematoide de cisto da soja (Heterodera
72 glycines) provenientes do municpio de Ipameri GO.

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74 MATERIAL E MTODOS

75 O experimento foi conduzido em ambiente protegido, no Instituto Federal Goiano


76 Cmpus Uruta no municpio de Uruta GO, tendo como suporte o Laboratrio de
77 Fisiologia Vegetal e do parasitismo da prpria instituio. O arranjo experimental adotado
78 foi inteiramente casualizado (DIC) em esquema fatorial 8 (cultivares diferenciadoras) x
79 2 (populaes de Heterodera glycines) com oito repeties.

80 Para o teste de raas utilizou-se as linhagens de soja diferenciadoras Pickett,


81 Peking (PI 548402), PI 88788 e a PI 90763, o qual permite a caracterizao de at 16
82 raas (Riggs & Schmitt, 1988). E, para o teste de tipo (HG Type) descrito por Niblack
83 et al. (2002) que classifica as populaes de H. glycines em tipo, no foi completo neste
84 experimento pois, faltaram duas linhagens; utilizou-se as indicadoras 1 (Peking), 2 (PI
85 88788), 3 (PI 90763), 4 (PI 437654), 5 (PI 209332), 8 (Hartwig). Em ambos os testes, a
86 cultivar Lee 74 foi utilizada com padro de suscetibilidade (Niblack et. al., 2002).

87 Amostras de solo contendo cistos de H. glycines foram coletadas em reas


88 naturalmente infestadas no municpio de Ipameri GO e posteriormente, acondicionadas
89 em vasos de cermica e semeadas sementes de soja suscetvel ao nematoide (BRS Valiosa
90 RR) para multiplic-los durante 30 dias. Depois os sistemas radiculares das plantas foram
91 submetidos extrao das fmeas e posteriormente de ovos, seguindo a metodologia
92 proposta por Tihohod (2000) para obteno da suspeno de ovos +J2 do nematoide.

93 Para conduo do experimento, as sementes das diferenciadoras foram pr-


94 germinadas em bandejas com areia estril e transplantas para tubetes contendo apenas
95 areia autoclavada a 120 C por 20 minutos. No momento do transplantio foi feita a
4

96 inoculao (Dias-Arieira, 2003), depositando-se uma suspeno aquosa contendo de


97 4.000 ovo +J2 no nematoide (populao da rea 1) e 2.000 ovos +J2 (populao rea 2)
98 ao substrato.

99 Trinta dias aps a inoculao, avaliou-se o nmero de fmeas presentes nos


100 sistemas radiculares de cada diferenciadora. No laboratrio as razes foram lavadas em
101 gua corrente sob conjunto de peneiras de 20 e 60 Mesh (Tihohod, 2000). Em seguida, o
102 material retido na peneira de 20 Mesh foi descartado e o que ficou retido na peneira de
103 60 Mesh foi recolhido em um bquer (com auxlio de uma piseta) e filtrado em papel
104 filtro sobre uma calha telada (Andrade et al., 1995). Em seguida, esse material filtrado foi
105 encaminhado um microscpio estetoscpio, com aumento de 15 x, para quantificar o
106 nmero de fmeas do nematoide.

107 A designao de raa descrita por Riggs & Schimitt (1988) (Tabela 1) bem como
108 Tipo HG (Tabela 2), designada por Niblack et al. (2002) se d em funo do nmero de
109 fmeas que se desenvolve sobre cada gentipo diferenciador, em relao ao nmero
110 encontrado na cultivar padro Lee. Desse modo, para cada uma das diferenciadoras
111 calculado o ndice de fmeas (IF). Se a diferenciadora apresentar um IF inferior a 10%,
112 ela classificada como resistente (-). No entanto, se apresentar um IF maior ou igual a
113 10%, tida como suscetvel (+).

114 Portanto, determinou-se as reaes nas diferenciadora com base no IF, onde IF =
115 (nmero mdio de fmeas presente a diferenciadora / nmero mdio de fmeas presente
116 a cultivar Lee)*100%. O IF foi utilizado para caracterizar o a raa e o Tipo HG de cada
117 populao avaliada, de acordo com Riggs & Schmitt (1988) pela tabela 1 e Niblack et al.
118 (2002) pela tabela 2.

119
5

Tabela 1: Reao das linhagens de soja diferenciadoras de raa de Heterodera glycine,


como proposto por Riggs & Schmitt, 1998.

120
121 Fonte: Dias et. al., 2009.

122

Tabela 2: Linhagens de soja indicadora utilizadas no teste HG Type para classificao


em tipo do Heterodera glycines de acordo com Niblack et. al. (2002).

Tipo Linhagens indicadoras


1 Peking'
2 PI 88788
3 PI 90763
4 PI 437654
5 PI 209332
6 PI 89772
7 PI 548316
8 Hartwig
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124 RESULTADOS E DISCUSSO

125 As populaes em estudo apresentaram raas distintas (Tabela 3), o que indica
126 habilidades diferentes de se desenvolver e reproduzir em cultivares suscetvel (Niblack et
127 al., 2002).

128 A populao da rea 1 de H. glycines foi caracterizada como raa 6 pois, o ndice
129 de fmeas (IF) s foi superior a 10 % na diferenciadora Pickett. J a populao da rea
130 2, o IF foi superior a 10 % nos hospedeiros Pickett, Peking, PI 90763 e na Hartwig
131 caracterizando a raa 14+. De acordo com Dias et. al. (2009) existe onze raas no Brasil
6

132 (1, 2, 3, 4, 4+, 5, 6, 9, 10, 14 e 14+). Ainda no foi relatado a presena da raa 14+ no
133 municpio de Ipameri GO, assim o ensaio para essa populao ser conduzido
134 novamente.

135

136 Tabela 3: Nmero mdio de fmeas (NMF), ndice de fmeas (IF) e reao das dife-
137 renciadoras e linhagens de soja frente a duas populaes de NCS, coletadas em Ipameri
138 GO. Uruta GO, 2015.

Populao rea 1 Populao rea 2


Diferenciadoras
NMF IF (%) Reao NMF IF (%) Reao
Lee 74 574,63 100,0 S 11,88 100,0 S
Pickett 378,25 65,83 S 26,88 226,32 S
Peking 15,38 2,68 R 5,88 49,47 S
PI 88788 1,13 0,20 R 0,00 0,00 R
PI 90763 2,00 0,35 R 3,00 25,26 S
PI 209332 3,25 0,57 R 0,63 5,26 R
PI 437654 0,38 0,07 R 0,13 1,05 R
Hartwig 0,63 0,11 R 5,58 45,26 S
Raa 6 14+
139 NMF = nmero mdio de fmeas; IF = ndice de fmeas; S = suscetvel; R = resistente.
140

141 Quanto aos testes para classificar as populaes em Tipo HG, vale ressaltar que
142 estes foram incompletos por no ter testado as linhagens diferenciadoras PI 89772 e PI
143 548316. Assim sendo, a populao de H. glycines da rea 1 foi caracterizada como Tipo
144 0- pois, se mostrou resistente a todas as linhagens testadas (IFs menores que 10%) (Tabela
145 4).

146

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7

151 Tabela 4: Nmero mdio de fmeas, ndice de fmeas e Tipo HG de duas populaes do
152 NCS. Uruta GO, 2015.

IF (%)
NMF 1 2 3 4 5 6 7 8
Populao
Lee 74
PI PI PI PI PI PI PI TIPO
Hartwig
548402 88788 90763 437654 209332 89772 548316 HG
rea1 574,63 2,68 0,2 0,35 0,07 0,57 nt nt 0,11 0-
rea 2 11,88 49,47 0 25,26 1,05 5,26 nt nt 45,26 1.3.8-
153 NMF = nmero mdio de fmeas; IF = ndice de fmeas; nt = no testada.
154

155 Observa-se que nmero mdio de fmeas da Lee 74, na populao 2, foi muito
156 baixo (Tabela 4). Essa variao do nmero de fmeas presente na cultivar Lee 74, entre
157 as populaes, j era esperado em funo de ter inoculado a metade da quantidade de
158 ovos + J2 que foi inoculada da populao da rea 1. Para Niblack et al. (2002) quando
159 isso acontece, o resultado do teste Tipo HG torna-se provisrio. Ento, para a populao
160 da rea 2 (raa 14+) os diferenciadores PI 548402, PI 90763 e Hartwig foi sucetvel (IFs
161 maior ou igual a 10 %), portanto Tipo 1.3.8 (provisrio).

162 De acordo com Figueiredo (2008) a existncia de mais de um tipo e raa, indica
163 que as cultivares de soja utilizadas pelos produtores rurais exerceram significativa presso
164 de seleo sobre as populaes de NCS existentes anteriormente.

165

166 CONCLUSO

167 Os dados obtidos indicam raas distintas, nas reas de estudo em Ipameri GO,
168 (raa 6 e 14+) e quatro Tipo HG (0.1.3.8-).

169 Descoberta da raa 14+ no municpio de Ipameri GO.

170 O hospedeiro diferenciador Hartwig, utilizado como padro de resistncia,


171 mostrou-se suscetvel populao de H. glycines da rea 2 (raa 14+, Tipo 1.3.8-).

172

173 REFERNCIA
8

174 Andrade, P. J. M.; Asmus, G. L.; Silva, J. F. V. (1995). Um novo sistema para deteco
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178 Dias-Arieira, C. R. (2003). Nematologia prtica: mtodos de extrao e inoculao de


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181 Dias, W. P.; Silva, J. F. V.; Carneiro, G. E. S.; Garcia, A.; Arias, C. A. A. (2009).
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