Determinacin de amilosa y amilopectina

1. Objetivo:

Desarrollar los parmetros necesarios para determinar el contenido de amilosa y amilopectina

en muestras de almidn.

2. Equipamiento:
- Espectrofotmetro
- Vortex
- Bao mara (capacidad de hasta 100C)
- Balanza analtica de 05 decimales

3. Procedimiento:
3.1. Preparacin de curva de calibracin:
3.1.1. Pesar y colocar 10 mg de amilopectina (estndar from potato starch) en un tubo
eppendorf de 2 mL de capacidad con 100 uL de etanol y 900 uL de NaOH 1 M (Procurar
no dejar muestra sobre las paredes del tubo). Colocar en bao mara a 92C por 15
minutos.
3.1.2. Pesar y colocar 10 mg de amilosa (estndar from potato starch) en un tubo eppendorf
de 2 mL de capacidad con 100 uL de etanol y 900 uL de NaOH 1 M (Procurar no dejar
muestra sobre las paredes del tubo). Colocar en bao mara a 92C por 15 minutos.
3.1.3. Dejar enfriar los tubos y transferir a fiolas de 10 mL de capacidad y aforar con agua ultra
pura, agitando vigorosamente. Tomar alcuotas de la solucin estndar patrn (amilosa
y amilopectina) y colocar en tubos Falcon de 15 mL con los siguientes reactivos y
volmenes:

Curva de Porcentaje NaOH Solucin Solucin Volumen Agua Lectura de

calibracin de 0,09 M Amilosa Amilopectina de Mili Q absorbancia
amilosa muestra
P1 (0%) 0% 200 mL 0 uL 1800 uL 0 0
P2 (10%) 10% 200 mL 200 uL 1600 uL 0 0
P3 (20%) 20% 200 mL 400 uL 1400 uL 0 0
P4 (30%) 30% 200 mL 600 uL 1200 uL 0 0
P5 (40%) 40% 200 mL 800 uL 1000 uL 0 0
P6 Blanco 0 200 mL 0 uL 0 uL 0 1800 uL
Muestra x 200 mL 0 0 1800 uL 0

3.1.4. Agitar el contenido de los tubos en un vortex y tomar una alcuota de 500 uL y transferir
a una fiola de 10 mL, la cual deber contener previamente 100 uL de cido actico 1 M,
agitar y adicionar 200 uL de solucin de iodo y completar el volumen a 10 mL, contar a
partir del primer baln (que debe ser el blanco): 20 minutos y leer en un
espectrofotmetro a 620 nm, dejando en oscuridad hasta el tiempo de lectura concluya.
3.2. Preparacin de la muestra:
3.2.1. Pesar por triplicado 10 mg de la muestra en un tubo de vidrio de 10 mL de capacidad y
proceder de la misma forma como para la curva de calibracin (tomar el volumen
indicado en la tabla descrita anteriormente).
3.2.2. Agitar el contenido de los tubos en un vortex y tomar una alcuota de 500 uL y transferir
a una fiola de 10 mL, la cual deber contener previamente 100 uL de cido actico 1 M,
agitar y adicionar 200 uL de solucin de iodo y completar el volumen a 10 mL, contar a
partir del primer baln (que debe ser el blanco): 20 minutos y leer en un
espectrofotmetro a 620 nm, dejando en oscuridad hasta el tiempo de lectura concluya.
Realizar tres lecturas por cada muestra.