MEJORA Y CONSERVACIN DE LOS OLMOS IBRICOS

L. GIL; A. SOLLA; M. BURN, J.C. LPEZ; D. LPEZ; S. IGLESIAS

(1) (1) (1) (1) (1) (2)

(1) Unidad de Anatoma, Fisiologa y Mejora Gentica. ETSI de Montes. UPM.

Paseo de las Moreras s/n, 28040-Madrid (lgil@montes.upm.es).
(2) Servicio de Material Gentico. DGCONA. Ministerio de Medio Ambiente.
Gran Va de San Francisco 4, 28005-Madrid (salustiano.iglesias@gvsf.mma.es).

RESUMEN

A finales de los setenta entra en Espaa el hongo Ophiostoma novo-ulmi, responsable de la grafiosis
agresiva de los olmos. En 1986, como respuesta a la gran mortalidad de ejemplares de Ulmus minor Mill. y de U.
glabra Huds. a lo largo del pas, la Direccin General para la Conservacin de la Naturaleza inici junto a la
Universidad Politcnica de Madrid un programa de conservacin y mejora. Sus objetivos fueron preservar la mayor
variabilidad de olmos nativos y seleccionar rboles resistentes a la enfermedad. Los individuos seleccionados
procederan de la bsqueda en zonas afectadas por la grafiosis o de los cruzamientos controlados de U. minor con U.
pumila, sus hbridos u otro material de resistencia comprobada.

En la actualidad se conservan ms de 300 genotipos procedentes de 45 provincias, la mayora de los cuales

han sido caracterizados en cuanto a su morfologa y fenologa. Sobre una poblacin de cruzamiento definida se han
practicado cruzamientos controlados, y los brinzales obtenidos ya se han empezado a inocular, mostrando algunos
resistencias aceptables. Las actividades del programa tambin se han enfocado hacia el desarrollo de tcnicas de
seleccin precoz mediante cultivo in vitro, el estudio de parmetros anatmico-fisiolgicos relacionados con la
resistencia y el conocimiento de la biologa reproductiva. Se han utilizado marcadores moleculares para diferenciar el
germoplasma ibrico del forneo y para evaluar la diversidad gentica de algunas poblaciones de olmos. En la
actualidad se colabora con otras 14 instituciones en un programa conjunto cuyo objetivo principal es coordinar las
tareas de mejora y conservacin de los olmos en nueve pases europeos.

P.C.: conservacin, mejora gentica, resistencia, Ulmus minor, Ulmus glabra, Ulmus pumila,
Ophiostoma novo-ulmi.

SUMMARY
Towards the end of the nineteen-seventies the fungus responsible for aggressive Dutch elm disease,
Ophiostoma novo-ulmi, appeared in Spain. In 1986 a conservation and breeding programme was set up by the
DGCONA and the UPM in response to the high death rate of Ulmus minor Mill. and U. glabra Huds. trees nation-
wide. Their objectives were to preserve the greatest genetic diversity of native elms and to select trees which were
resistant to the disease. The selected individuals would come from searching the zones affected by Dutch elm disease
or from the controlled pollination of U. minor with U. pumila, their hybrids, or other sources with proven resistance
to the disease.

To the present day, more than 300 genotypes from 45 provinces have been conserved, most of which have
been classified according to their morphology and phenology. Controlled pollination has been carried out on a
crossing population and inoculation of the obtained seedlings has begun, with some showing acceptable levels of
resistance. Some of the programmes activities have also focused on the development of early selection through in
vitro techniques, the study of anatomical-physiological parameters related to resistance, and improving knowledge of
reproductive biology. Molecular markers have been used to differentiate the Iberian and foreign germoplasms and to
evaluate genetic diversity in some elm populations. Currently, there is collaboration with 14 other institutions in a
joint programme in which the main objective is to co-ordinate efforts to improve and conserve elms in nine European
countries.

K.W.: conservation, breeding, resistance, Ulmus minor, Ulmus glabra, Ulmus pumila,
Ophiostoma novo-ulmi.

1
INTRODUCCIN
El olmo ha sido, durante siglos, uno de los rboles ms caractersticos de la Pennsula
Ibrica. Su presencia en la prctica totalidad de los bosques de rivera hacen de l un elemento
fundamental en el paisaje espaol. Debido a su belleza, porte majestuoso y frondosidad de su
copa se le ha plantado en numerosas plazas, parques y avenidas. Dos especies son autctonas
en la Pennsula: el olmo comn (Ulmus minor Miller sensu latissimo) y el olmo de montaa
(Ulmus glabra Huds.). Una tercera especie, el olmo siberiano (U. pumila L.), procede de Asia
y se encuentra actualmente asilvestrado. En contacto con U. minor se hibrida y da lugar a la
aparicin de individuos con formas intermedias. Las tres especies se distinguen de visu entre
s, aunque no fcilmente, siendo las hojas y smaras del olmo de montaa las de mayor
dimensin (figura 1). El olmo siberiano tiene las hojas ms claras y los ramillos son menos
densos y ms pndulos, lo que le resta valor ornamental.

Los hongos de la grafiosis, conocidos como Ophiostoma ulmi (Buisman) Nannf. y O.

novo-ulmi Brasier, han causado los peores daos conocidos en los olmos. Debido a la mayor
virulencia de O. novo-ulmi, tambin se denominan especie no agresiva y especie agresiva
respectivamente. En Espaa, la no agresiva se detect por primera vez a comienzos de los aos
treinta, eliminando y debilitando una parte considerable de las olmedas existentes. La especie
agresiva se asla por primera vez en 1978 y origina, durante la siguiente dcada, la casi total
desaparicin de los olmos adultos del pas.

En el ciclo de la grafiosis intervienen tres sistemas biolgicos: el de los hongos

patgenos, los escoltidos vectores, y el de los olmos, especie que los sustenta (figura 2)
(PAJARES & GIL 1985). Los cuerpos de fructificacin del hongo (figura 3) producen
abundantes conidios y ascosporas. Estas esporas se depositan en los imagos de los escarabajos
transmisores al final de su desarrollo en el floema de un olmo muerto y antes de que el insecto
excave el orificio de salida para volar hacia las copas de olmos sanos, donde se alimentar en
las ramas ms jvenes. El potente aparato bucal del escoltido (figura 4) perfora la corteza
hasta llegar al sistema vascular de la planta. En este momento el hongo se hace sistmico a
travs de su difusin por los vasos del anillo del xilema del ao y, stos se colapsan. Sigue un
marchitamiento foliar con amarilleamiento previo, y se observan defoliaciones y ramas secas.
Una vez que el rbol est muerto o moribundo por la enfermedad, hembras de escoltidos
horadarn una galera hasta los tejidos del floema y efectuarn su puesta. Las galeras
excavadas por las larvas entrarn en contacto con los cuerpos de fructificacin del hongo, y
con la propagacin del mismo por los imagos, en otros olmos, se iniciar un nuevo ciclo.

Los mtodos de control de la enfermedad fueron revisados por MARTNEZ DE

AZAGRA et al. (1988). Estos tratamientos presentan los inconvenientes de que han de ser
aplicados con continuidad, resultan caros y no son compatibles con la actual conciencia
medioambiental. El control biolgico tuvo gran auge en la dcada anterior, pero la
incongruencia de resultados y su escasa efectividad han limitado su utilizacin. Ante el
problema de la grafiosis, los programas de conservacin, mejora y seleccin de individuos
resistentes son la mejor alternativa a largo plazo para la supervivencia de los olmos. En 1985,
el antiguo ICONA, hoy Direccin General para la Conservacin de la Naturaleza, comenz a
promover junto a la E.T.S.I. de Montes de la Universidad Politcnica de Madrid un programa
para el control de la grafiosis. En el presente trabajo se exponen los resultados conseguidos hasta
la fecha, tras 15 aos de trabajo, que han permitido, entre otros, la realizacin de cuatro tesis
doctorales (PAJARES 1987; IPINZA 1989; DEZ 1996; SOLLA 2000).

2
Figura 1. Tallo y fruto de las tres especies de olmos presentes en la Pennsula Ibrica.

Figura 3. Coremios de
Ophiostoma novo-ulmi.

Figura 2. Ciclo biolgico de la enfermedad de la grafiosis. Figura 4. Aparato bucal de

Scolytus mutistriatus.

Estudio de los agentes Conservacin de los Obtencin de Colaboracin con 14

implicados en la grafiosis recursos genticos individuos resistentes instituciones europeas

Recogida de olmos en campo Inoculacin Base de datos compartida

Hospedante
Definicin de Estudios moleculares y
Propagacin y reproduccin
una poblacin F0, F 1, ... de diversidad gentica

Patgeno Cruces controlados

Plantacin y caracterizacin Caracterizacin y
Plantacin e inoculacin conservacin conjunta
Conservacin en parcelas y
Seleccin
Vector bancos clonales Difusin de resultados
(Seleccin precoz)
Figura 5. Trabajos realizados para la conservacin y mejora de los olmos ibricos.

3
OBJETIVOS
Los trabajos realizados en el programa se enmarcan en cuatro objetivos generales cuyo
esquema se recoge en la figura 5. A corto plazo fue prioritario conservar los recursos genticos
de los olmos ibricos an existentes e iniciar la obtencin de individuos resistentes a travs de
ciclos de mejora gentica (IPINZA & GIL 1989), partiendo del material seleccionado en las
olmedas ibricas o bien mediante su cruzamiento con olmos asiticos o procedentes de otros
centros europeos. A largo plazo se espera difundir en la naturaleza el mayor nmero de olmos
resistentes capaces de reproducirse mediante la va sexual.

En 1996 se estableci, junto a otras 14 instituciones europeas, un programa conjunto

financiado por la UE. La finalidad principal es coordinar las tareas de conservacin de
recursos genticos de los olmos en 9 pases de Europa.

ESTUDIO DE LOS AGENTES IMPLICADOS EN LA GRAFIOSIS

Entre 1985 y 1989 el objetivo principal fue conocer, tras la revisin de una amplia
bibliografa, los agentes implicados en la enfermedad y su situacin en las condiciones
particulares de la Pennsula Ibrica. Tambin se llev a cabo la evaluacin de diferentes
tratamientos qumicos para el control de los vectores de la enfermedad.

En primer lugar se aproxim la extensin e impacto de la enfermedad. A partir de la

informacin recogida en el Ier Inventario Nacional Forestal se eligieron las 17 provincias con
mayor nmero de olmedas, destacando Guipzcoa, Madrid, Navarra, Valladolid y Guadalajara.
Se elabor una base de datos a partir de 460 olmedas, considerndose como campos principales
la ubicacin, exposicin, pendiente, tipo de propiedad, uso, forma y calidad de la masa y rea
basimtrica. En 1986 se visitaron 216 olmedas y se obtuvo que solo el 18 por ciento no estaban
infectadas y un 25 por ciento presentaban ms de la mitad de sus olmos muertos por grafiosis.
Soria y Guadalajara fueron las provincias ms afectadas.

Seguidamente se estudi, mediante taxonoma numrica, la variabilidad morfolgica del

olmo comn. A lo largo de 25 provincias se eligieron 340 rboles tipo. El taxn Ulmus minor
var. vulgaris fue el ms abundante en la zona muestreada, seguido de Ulmus minor var. minor.
Se tomaron cinco brotes cortos en cada rbol y se midieron diversos parmetros morfolgicos
para probar distintos algoritmos de clasificacin, tiles para identificar taxonmicamente a los
rboles tipo. Los algoritmos se evaluaron de acuerdo con su capacidad de prediccin, y los ms
adecuados se utilizaron para construir un programa informtico (TAXMIN), en Basic, capaz de
clasificar los olmos ibricos.

El estudio de los hongos responsables de la grafiosis comenz en 1987 a partir de

aislamientos en 32 olmos ubicados en las provincias ms afectadas. El cultivo in vitro de las
cepas permiti caracterizar a las especies Ophiostoma ulmi y O. novo-ulmi a travs de su
morfologa, crecimiento y tipo de unin. Por entonces, ambas especies se aislaban con la misma
frecuencia. En la actualidad, O. ulmi se ha visto desplazada por la especie agresiva, en su forma
NAN, y se encuentra en peligro de extincin. Notables esfuerzos se han dedicado a conservar
una coleccin con cerca de 90 aislamientos y a tratar de que no pierdan virulencia con el tiempo.

Las especies Scolytus scolytus (F.), S. multistriatus (Marsh.) y S. kirschii Skal. son, por
su abundancia y distribucin, los vectores de la grafiosis en Espaa. Las dos primeras
especies destacan por su mayor tamao, que permite una mayor carga de esporas y las
convierte en principales responsables para la difusin de la enfermedad. El muestreo en 12
provincias espaolas permiti identificar estos taxones, adems de otros seis: Scolytus

4
pygamaeus (F.), S. intrincatus (Ratz.), S. rugulosus (Mll.), S. mali (Bech.), Pteleobius
vittatus (F.) y P. kraatzi (Eichh.). Una clave para la identificacin de los mismos se halla en
PAJARES & GIL (1990). En 1985 se procedi a estudiar los ciclos biolgicos en poblaciones
de Revenga (Segovia) y Puerta de Hierro (Madrid). A lo largo de todo un ao se capturaron
imagos y se extrajeron larvas de troncos en olmos abatidos. Se observaron entre tres y cuatro
generaciones anuales solapadas en el tiempo. Como parsitos de Scolytus spp. se encontraron
caros, nemtodos e himenpteros de las familias Braconidae, Chalcididae, Bethylidae. Entre
los predadores destacaron algunos dpteros del gnero Medetera (PAJARES 1987).

Los esfuerzos iniciales para combatir la grafiosis estuvieron orientados hacia el control
de las poblaciones de escoltidos y hacia la prevencin de las infecciones mediante
tratamientos fitosanitarios. Para la captura masiva de insectos se ensay la capacidad de
atraccin de tres tipos de feromonas sintticas comerciales. Las mayores capturas de S.
multistriatus se lograron mediante un cebo emisor compuesto de 4-metil-3-heptanol, ? -
multistriatn y ? -cubeneno en las proporciones de emisin 32:20:1 y 4:8:1. La prevencin de
las infecciones en ramillos de olmos se ensay mediante la aplicacin de tratamientos con
isecticidas a diferentes concentraciones de metoxicloro y de cloropirifos. Paralelamente se
realizaron bioensayos consistentes en trocear ramillos y depositarlos en placas de Petri junto a
ejemplares de S. multistriatus. Tras registrarse el nmero de insectos muertos y el nmero de
mordeduras observadas en los ramillos se concluy que el metoxicloro al 1 por ciento en agua
protege eficazmente a los olmos durante 72 das.

Los resultados de los trabajos anteriores se integraron en un libro, editado por el

antiguo ICONA (GIL 1990). En dicha publicacin se incluyeron captulos dedicados a la
botnica, paleobotnica, e historia de los olmos ibricos y se establecieron las bases de
actuacin para la conservacin de los recursos genticos del olmo y la obtencin de
individuos resistentes a la grafiosis.

CONSERVACIN DE LOS RECURSOS GENTICOS DEL OLMO

Para conservar los recursos genticos de los olmos ibricos se recogieron individuos
en campo. Una vez propagados, bien a travs de semillas, de estaquillas de raz o de tallo,
fueron llevados a bancos clonales o a parcelas de conservacin. Para lograr su conservacin y
evitar que mueran por infecciones naturales de grafiosis se controlan las poblaciones de
escoltidos y se aplican una serie de tratamientos fitosanitarios.

Recogida de individuos en campo

Desde 1990 se realizan campaas anuales de seleccin de olmos en campo,
recorrindose el territorio espaol para identificar ejemplares vivos. Recientemente se ha
elaborado una pgina web, a ubicar en el servidor del Ministerio de Medio Ambiente
(www.mma.es), en la que se solicita la colaboracin ciudadana para que aporte informacin
de este tipo. Personal del Servicio de Proteccin contra Agentes Nocivos (DGCONA)
participa en la bsqueda de olmos sanos e informa sobre el grado de afeccin de las olmedas
enfermas. La colaboracin con las CCAA se efecta a travs del Comit Tcnico de Mejora y
Conservacin de Recursos Genticos Forestales creado al amparo de la Estrategia Forestal
Espaola. Hasta la fecha se ha recogido material vegetal, para propagar o reproducir, de un
total de 585 olmos ubicados en 220 localidades de 45 provincias (figura 6).

La especie U. minor est presente de forma espontnea en toda la Pennsula y

Baleares, aunque es poco frecuente en las provincias de Almera, Cdiz y Pontevedra. Ha sido
introducida en Gran Canaria y Tenerife. El conocimiento de la distribucin a nivel nacional de

5
la especie U. glabra es poco preciso, pues las pocas citas existentes aparecen en trabajos de
alcance regional o provincial. Con el objetivo de incluir ejemplares de U. glabra en el
programa, se realiz un estudio corolgico de la especie (ROSSIGNOLI 1999). A partir de
citas bibliogrficas, herbarios, estudios florsticos y salidas al campo se precis su rea de
distribucin (figura 7).

Figura 6.
Ubicacin de los
olmos
seleccionados y de
las plantaciones a lo
largo del territorio
espaol. Los
rboles pertenecen
a los taxones Ulmus
minor (?), U.
glabra (? ), U.
pumila (? ), U.
minor x U. glabra
(? ) y U. minor x U.
pumila (? ). Las
plantaciones son
bancos clonales ( ),
parcelas de familias
( ), parcelas de
adaptacin ( ) y
parcelas de
inoculacin ( ).

Figura 7. Distribucin de Ulmus glabra (?) en la Pennsula Ibrica. Figura 8. Banco clonal de olmos
situado en Puerta de Hierro, Madrid.

Propagacin y reproduccin
Se han reproducido asexualmente con xito 288 olmos, bien por estaquillado de raz
(GMEZ-REINO, 1988; ROLDN, 1988) o por estaquillado areo, obtenindose una
propagacin en nmero de estaquillas por genotipo, del 38 por ciento y del 22 por ciento
respectivamente. Muchos genotipos, en un nmero cercano al 50 por ciento, ya fuera por su
elevada edad o una escasa disposicin para el estaquillado, no permitieron este tipo de
propagacin. El injerto de yema proporciona una mejor respuesta, permitiendo reproducir la

6
mayora de los rboles en que se practica. El injerto se ha aplicado en 94 olmos, con una
media del 50 por ciento de injertos prendidos. La puesta a punto de la micropropagacin
mediante cultivo in vitro no present problemas a partir de hojas. En los genotipos utilizados
se consigui enraizar el 45 por ciento de los explantos.

La recogida de smaras en 343 olmos ha posibilitado obtener un total de 201 familias.

La tercera parte de los olmos presentaron casi la totalidad de sus smaras vanas, si bien las
semillas embrionadas germinaron en un 90 por ciento (BUTLER 1988). Este problema limita
la conservacin y mejora de los olmos ibricos y de ah que merezca una atencin especial. Es
un objetivo estudiar el comportamiento reproductor de U. minor. Entre los problemas que
presenta esta especie, con relacin a su reproduccin sexual cabe destacar:

- Presencia de malformaciones florales. El gineceo de U. minor est normalmente

constituido por dos carpelos que protegen a un nico vulo. En un buen nmero de olmos
espaoles resulta frecuente, sin embargo, que solo se desarrolle un carpelo y que ste
carezca de vulo (figura 9). En algunos individuos se ha observado que casi la mitad de
sus flores presentan malformaciones de este tipo.

- La degeneracin inmediata del gineceo a los pocos das de ser receptivo. Este fenmeno
se presenta incluso tras el aporte de polen cuya viabilidad ha sido comprobada.

1 1 2

2 3 4

e
e

Figura 9. Gineceo bicarpelado (1) y
gineceo monocarpelado no ovulado (2).
Figura 10. Desarrollo embrionario en Ulmus minor: embrin en los
primeros estadios del desarrollo (1); embrin globular (2), embrin
acorazonado (3); semilla abortante con gran contraccin de la testa en
la parte superior, embrin (e) degenerado y acompaada de necrosis
(n) (4). En 1 y 2, barra = 50 ? m. En 3 y 4, barra = 200 ? m.

7
- El aborto de la semilla es tambin frecuente en algunos genotipos. A la fecundacin le
sigue un desarrollo inicial del embrin, pero la semilla no completa su desarrollo, aunque
s se diferencia la smara. No se conoce en detalle la razn de este aborto pero se tiene la
hiptesis de que est relacionado con el endosperma, el cual compite con el embrin por
el agua y el alimento. A travs del estudio histolgico se ha observado que el desarrollo
del endosperma impide que el embrin alcance un tamao normal y adquiera reservas.
Tras este proceso la testa se contrae y se producen estrechamientos muy visibles en la
semilla, a veces acompaados de necrosis (figura 10).

Se puede afirmar que el comportamiento reproductor del olmo carece de un patrn

determinado. Los problemas que presentan numerosos olmos en el desarrollo del gineceo y de
la semilla hacen que su capacidad de actuar como progenitores femeninos se vea muy
reducida. Por ello, y aunque U. minor se describa como una especie monoica, a efectos
prcticos el comportamiento de muchos ejemplares confiere a la especie la condicin de
androdioica.

De los olmos propagados, el 78 por ciento pertenecen a la especie U. minor, el 16 por

ciento son hbridos de U. minor x U. pumila, el 2 por ciento a U. pumila, un 1 por ciento son
U. glabra, y el 3 por ciento restante, hbridos U. minor x U. glabra. Los brinzales o
estaquillas obtenidas son aviveradas durante un ao antes de su plantacin en parcelas.

Plantacin y caracterizacin
Hasta el momento se han instalado 22 parcelas para la conservacin de un total de
6.083 olmos (figura 6; tabla 1). Las plantaciones se agrupan en tres categoras: bancos
clonales, parcelas de conservacin y parcelas de adaptacin. Cada tipo de plantacin posee
distintas finalidades.

Tres bancos clonales (figura 8; tabla 1) han sido instalados, el ms importante en

cuanto a efectivos y a edad de los clones en el Centro de Mejora Gentica Forestal Puerta de
Hierro, Madrid. Los otros dos bancos se ubican en el Centro Nacional de Mejora Forestal de
Valsan, Segovia, y contienen rplicas de los clones del anterior banco y de clones forneos.
Los olmos se sitan con un espaciamiento de 5 x 5 m para que adquieran una buena
configuracin de su copa y permitan los cruzamientos controlados y otros aspectos del
programa, como aplicar descriptores para caracterizar su morfologa y fenologa (SOLLA et
al. 2000a). La informacin del material existente est disponible en una base de datos; entre
otros incluye: procedencia del rbol, tipo de material propagado y fecha, caractersticas
morfolgicas, fenologa, valor ornamental y en algunos casos atraccin a Galerucella luteola
Mll., Scolytus sp. y/o resistencia a Ophiostoma novo-ulmi. En la actualidad se contina el
seguimiento de la fenologa reproductiva (GMEZ-REINO 2001).

Hasta la fecha se han instalado 13 parcelas de conservacin (tabla 1) que suman unas 9
ha e incluyen a varios millares de olmos pertenecientes a 85 familias. Estas plantaciones
sirven de reservorio gentico y ofrecen informacin sobre el comportamiento de las progenies
en distintas ubicaciones. La plantacin ms reciente se ha realizado en Gran Canaria
(municipio de Teror), isla que por carecer de grafiosis es un lugar idneo para la conservacin
de olmos.

Seis parcelas de adaptacin (tabla 1) permiten observar el comportamiento, en la

Pennsula Ibrica, de olmos procedentes de otros pases y programas de mejora. Destacan las
establecidas en 1989 con 22 genotipos procedentes del programa de mejora gentica holands

8
(Instituto Dorshkamp). Rplicas de estos genotipos se han plantado en Madrid, Guadalajara y
Cdiz, con un diseo de tres bloques completos al azar (n = 12). En base a criterios de
supervivencia, estado sanitario, valor ornamental, sensibilidad a heladas y xito de
reproduccin por semilla, se eligieron los seis genotipos de mejor comportamiento. En la
actualidad se ensaya el mtodo y las condiciones de propagacin para difundir a gran escala
estos olmos dentro de la Pennsula. Adems, se dispone de una coleccin de 11 procedencias
chinas de U. pumila y rplicas de 94 genotipos franceses enviados por el INRA.

Tabla 1. Plantaciones realizadas para la caracterizacin y conservacin de los olmos ibricos.

Ubicacin Ao Superficie N Material vegetal1 (procedencia 2 )
(ha) olmos
CMGF de Puerta de Hierro, Madrid 1992 0,83 435 209 (E), 11 (F), CL (H) y 10 (PO)
Bancos
clonales

1994 0,46 232 91 (E), 16 (F) y 10 (CH)

CMGF de Valsan, Segovia
1998 0,50 300 70 (E) y 47 (I)
Manut, Escorca 1993 0,10 60 17 (E)
Binifald I, Escorca 1993 0,23 58 17 (E)
Binifald II, Escorca 1995 1,27 291 43 (E)
Sa Coma de Binifald, Escorca 1995 1,50 356 18 (E)
Mortitx, Escorca 1995 0,57 350 18 (E)
conservacin

Tossals Verds, Escorca 1995 0,35 243 18 (E)

Parcelas de

San Isidre, Mahn 1995 1,50 1.086 18 (E)

Valsan, Segovia 1994 0,45 198 33 (E)
Villamarciel, Valladolid 1994 1,72 445 65 (E) y 7 (H)
La Yutera, Palencia 1995 0,26 88 11 (E)
Quart de Poblet, Valencia 1995 0,24 96 24 (E)
Mas de Ascle, Castelln 1995 0,31 103 35 (E)
Teror, Gran Canaria 2000 0,28 94 49 (E)
Vivero Migascalientes, Madrid 1989 0,60 252 21 (H)
CNMF El Serranillo, Guadalajara 1989 0,84 252 21 (H)
Parcelas de
adaptacin

La Almoraima, Cdiz 1989 0,80 252 21 (H)

La Almoraima, Cdiz 1989 0,93 628 11 (CH)
Villamarciel, Valladolid 1996 0,32 94 94 (F)
Cabanillas, Guadalajara 1998 0,80 170 20 (F)
1
Clones en los bancos clonales y familias de polinizacin abierta en las parcelas de conservacin
2
China (CH), Espaa (E), Francia (F), Holanda (H), Italia (I) y Portugal (P).

Conservacin
La preservacin de los olmos ibricos tiene lugar en los bancos clonales y en las
parcelas de conservacin. Evitar que este material se vea afectado por la enfermedad es
objetivo prioritario en los bancos clonales. Los olmos se revisan peridicamente y se fumigan
con alfacipermetrn (0,0015 %, p/v) antes y durante el periodo de vuelo de Scolytus spp. En
las proximidades de los bancos se tienen instaladas trampas para la captura de estos
colepteros, a fin de conocer la fecha de inicio del vuelo y los picos de poblacin (LPEZ et
al. 2000). Si un ejemplar presenta indicios de estar infectado con grafiosis es inmediatamente
saneado mediante podas radicales. Con la intencin de inducir resistencia en los olmos frente
a la grafiosis se probaron tratamientos preventivos con el hongo Verticillium dahliae Kleb.
Entre otras cepas se utiliz la denominada WCS850 (Dutch Trig? ), comercializada en
Holanda como vacuna para prevenir los daos por grafiosis. Durante la primavera se
introdujo, mediante un inyector (figura 11), una suspensin de esporas del hongo en el anillo
ms reciente. En ensayos realizados se obtuvo que rboles tratados con V. dahliae y
posteriormente infectados con grafiosis se marchitaron menos que rboles no tratados (P ?
0,01). Se observ, sin embargo, que el ligero debilitamiento originado por V. dahliae atrajo
masivamente el vuelo de los escoltidos, que acaban infectando al rbol y produciendo su
muerte en aos posteriores. Esto ltimo ha motivado que se abandonara este tratamiento. Un

9
nuevo producto ha sido desarrollado en la Universidad de Toronto y est en vas de ensayo.
Se denomina ELMguard? y acta en el olmo promoviendo la produccin de mansononas y
otras substancias que le confieren proteccin ante la grafiosis.

Una segunda estrategia frente a las posibles infecciones por grafiosis es mantener los
olmos a modo de seto bajo, a una altura inferior a 1 m. Ejemplares de talla baja no son
detectados por los escoltidos. Este mtodo ha dado buenos resultados en olmos conservados
por el CEMAGREF, en Francia y es el empleado en la actualidad en el recin instalado banco
clonal de Valsan.

OBTENCIN DE INDIVIDUOS RESISTENTES A LA GRAFIOSIS

En 1993 se inici, dentro del programa, el primer ciclo de mejora para la obtencin de
individuos resistentes a la grafiosis. Entre los olmos incluidos en el programa de conservacin
se seleccionaron los ms singulares, bien por motivos histricos, vigor o rasgos ornamentales,
bien por carecer de sntomas dentro de un rea afectada por grafiosis. Rplicas de estos
individuos y/o brinzales obtenidos a partir de sus smaras fueron plantados en parcelas para
evaluar su resistencia. Tras definirse una primera poblacin de cruzamiento (F0 ) se realizaron
cruces controlados. La semilla obtenida dio lugar a olmos cuya resistencia fue evaluada a
travs de inoculaciones artificiales con Ophiostoma novo-ulmi. Una segunda seleccin ha
permitido definir una F1, con la cual se iniciar un nuevo ciclo (figura 5).

Definicin de una poblacin de cruzamiento

Al ser el olmo un rbol utilizado como ornamental, adems de la resistencia se tienen
en cuenta aspectos estticos y el crecimiento. Se pretende que los olmos ibricos vuelvan a ser
plantados en jardines y en avenidas, frente al actual uso del olmo siberiano. Tambin
interesan individuos cuya capacidad de propagacin sea alta, tanto vegetativa como
sexualmente; la primera conviene al viverista para propagar fcilmente el material
seleccionado, y al mejorador le interesa que el rbol produzca semilla frtil para seguir nuevos
ciclos. Difundir en la naturaleza el mayor nmero de genotipos resistentes y capaces de
propagarse mediante la va sexual, constituye un objetivo bsico para la conservacin de la
especie. De acuerdo con estos criterios se defini una primera poblacin de cruzamiento,
seleccionndose nueve olmos de un total de 72 (SOLLA 2000). Esta seleccin rene a
individuos con unos caracteres substancialmente mejores que la media de los genotipos
utilizados (tabla 2).

Tabla 2. Poblacin de cruzamiento definida a partir de la caracterizacin de rplicas y progenies de 72 olmos

preseleccionados.
Genotipo Especie Marchitamiento (%)1 Valor ornamental2 Crecimiento (m/ao) Germinacin3
CO-PS 2 U. minor 4 2.4 0.46 -
CR-PB 1 U. minor 11 3,1 0,69 67
M-DV 2 U. minor 19 3,8 0,90 97
CU-AL 1 U. minor 35 2,9 0,76 64
M-MJ 1 U. minor 37 2,0 0,65 28
M-CC 1 U. minor 42 4,5 0,84 45
M-CP 1 Hbrido 8 2,0 0,84 84
GU-SE 1 Hbrido 23 3,6 0,58 50
M-PZ 3 Hbrido 29 2,8 1,26 63
Poblacin de cruzamiento (n = 9) 23 3,0 0,77 62
Poblacin utilizada (n = 72) 54 2,4 0,60 41
1
Porcentaje de marchitamiento foliar tras 60 das de la inoculacin en la parcela de mayor severidad.
2
Valor comprendido entre 0 y 5 en orden creciente de belleza.
3
Producto del tanto por uno de smaras no vanas por el porcentaje de germinacin de las semillas.

10
Cruces controlados
Los cruces controlados se realizan durante los meses de febrero y marzo sobre
ejemplares del banco clonal de Puerta de Hierro. Hasta la fecha se han realizado 156 cruces.
El polen se consigue mediante el forzado de varas que portan yemas florales. Las varas se
disponen con su extremo basal sumergido en agua en el interior de habitculos independientes
(figura 12), dentro de una habitacin. La temperatura se mantiene entre 15 y 25 C. El polen
emitido se filtra y se almacena. Su conservacin se lleva a cabo en un desecador puesto en
nevera a 4 C. Poco antes de la aparicin del estigma se aslan flores en los rboles madre,
utilizndose bolsas de tela que permiten la aireacin pero no la entrada de polen externo. Las
polinizaciones se realizan con un insuflador conectado a una jeringa. Se practican dos
polinizaciones por bolsa, con una separacin en el tiempo de tres a cinco das.

Progenitor
masculino Obtencin de polen Filtrado

Conservacin

Figura 11. Inyector para inocular el

hongo de la especie Verticillium
dahliae Kleb. Progenitor
Polinizacin Bolsa
Insuflador
femenino

Figura 12. Etapas a seguir para la

realizacin de un cruce controlado.

Las semillas se ponen a germinar desde abril hasta mayo, una vez secas y desaladas.
Se siembran al exterior, pero la capacidad de germinacin se evala dentro de placas de Petri.
En las placas, las semillas se mantienen sobre papel de filtro hmedo a 20 C durante 5 a 8
das y luego se transplantan a cajoneras en sombra. Al ao siguiente se procede a su
plantacin en parcela.

Plantacin e inoculacin
Un total de 7.829 olmos han sido plantados en 16 parcelas de inoculacin, a fin de
evaluar su crecimiento, valor ornamental y resistencia a la grafiosis. La metodologa de
inoculacin utilizada consiste en inyectar durante la primavera, y en el anillo del ao, una
suspensin de esporas de O. novo-ulmi a concentraciones mayores de 103 conidios/ml. El
marchitamiento foliar a los dos meses de inocular es el principal parmetro utilizado para
estimar la resistencia de un individuo. Ahora bien, este marchitamiento est en ocasiones
condicionado por factores externos que resulta importante conocer para evitarlos y poder
realizar una correcta seleccin. Dentro del programa se han estudiado factores como la
composicin del inculo infectivo, la repeticin de las inoculaciones, la humedad del suelo
(SOLLA 2000), la edad de la planta y las dimensiones de los vasos del xilema (RUZ-
VILLAR 2000; SOLLA & GIL 2001a). Se dedujo la conveniencia de inocular una sola cepa
de O. novo-ulmi durante dos aos consecutivos, en plantas de cuatro savias. Para favorecer el
desarrollo de sntomas se estimularn los crecimientos de los olmos durante los aos previos a

11
su inoculacin. Resulta adecuado, adems, regar las parcelas en abundancia durante las
inoculaciones y suspender los riegos cuando la planta comience a mostrar sntomas.

Seleccin
Ms de 4.000 olmos han sido evaluados y, en la actualidad se dispone de un total de
53 genotipos seleccionados por su resistencia, crecimiento y belleza. Olmos como MA-CM
1.8, GU-SE 1.21 o M-MT 1 x VA-VV 22.26 han mostrado marchitamientos inferiores al 10
por ciento tras su segundo ao de inoculacin y unos rasgos morfolgicos muy similares a los
considerados como propios de la especie U. minor. Los rboles seleccionados se conservan en
un banco de olmos resistentes, y sern utilizados, una vez florezcan, como progenitores en
sucesivos cruces controlados.

Dado que un ciclo de mejora requiere un perodo de seis a nueve aos, dentro del
programa se han dedicado esfuerzos al desarrollo de otros mtodos de seleccin precoz. Por
un lado se expusieron clulas de olmo cultivadas in vitro a filtrados de las especies O. ulmi y
O. novo-ulmi, pero no se observ una relacin positiva entre el crecimiento de las clulas y la
resistencia in vivo de los olmos. Esta respuesta estuvo motivada por la interaccin entre los
compuestos empleados en los filtrados (DEZ & GIL 1999, 2001). Tambin se utilizaron
como posibles marcadores de seleccin las enzimas PAL, TAL y CAH, implicadas en la
activacin del metabolismo fenilpropanoide para la defensa ante patgenos. Sin embargo, de
los ensayos realizados tampoco se desprendi su validez para la seleccin (DEZ 1996; DEZ
& GIL 1998). Por otro ltimo se buscaron, en olmos jvenes, relaciones entre la
susceptibilidad a la grafiosis y algunos parmetros fisiolgicos (potencial hdrico,
transpiracin, conductancia estomtica o conductancia hidrulica especfica foliar). La falta
de correlacin hallada no permite utilizar estos parmetros para la seleccin precoz (SOLLA
et al. 2001b).

COLABORACIN CON CENTROS EUROPEOS

Desde 1997 se colabora con otros equipos de investigacin para caracterizar y
conservar los recursos genticos de los olmos en Europa (SOLLA et al. 2000b). Los pases e
instituciones con los que se trabaja son Alemania (NFV, HLFWW, LAF, FVA), Blgica
(IBW), Francia (CEMAGREF, ENGREF, INRA), Grecia (FRI), Gran Bretaa (UG, RBGE),
Italia (CNR), Suecia (SKS), y Portugal (EFN). En el marco de un proyecto de cinco aos de
duracin se tienen como objetivos: 1), elaborar una base de datos compartida; 2), estudiar la
diversidad gentica existente; 3) caracterizar y conservar siguiendo un protocolo comn; y 4),
difundir los resultados obtenidos.

Base de datos compartida

En la actualidad se ha generado una base de datos que contiene informacin acerca de
1.851 olmos de toda Europa. Los campos se agrupan en un bloque con informacin de
pasaporte de los olmos (ortets), y en otro bloque con informacin relativa al material
propagado (ramets). El equipo espaol particip en la eleccin y definicin de los campos de
la base de datos, al aplicar la experiencia adquirida al elaborar la base del programa nacional.
La base europea incluye 288 ortets espaoles y se actualiza anualmente con los nuevos olmos
seleccionados o propagados.

Estudios moleculares y de diversidad gentica

Los estudios moleculares pretenden evaluar, en primer trmino, la diversidad gentica
existente a lo largo de la geografa europea. Representan una herramienta til para la
conservacin de los recursos genticos, pues identifican a los ejemplares de mayor

12
singularidad y permiten rechazar aqullos genticamente similares. A partir de muestras de
700 olmos y, mediante marcadores de ADNcp, se procedi al anlisis de las poblaciones
europeas. El mayor nmero de haplotipos se registr en los olmos de Italia (10), Grecia (9) y
Espaa (8), lo que indica que en estos pases existe una gran variabilidad gentica como
resultado de haber sido refugios de la especie durante las glaciaciones. La variabilidad
gentica de los 107 olmos espaoles analizados es elevada entre las poblaciones estudiadas y
tambin dentro de la poblacin (figura 13). Los olmos de pases como Noruega, Inglaterra y
Alemania solo presentaron 2, 2 y 5 haplotipos diferentes, respectivamente.

Con objeto de poder definir el grado de introgresin del olmo siberiano en el material
espaol, as como identificar con precisin los hbridos se analizaron las especies U. minor y
U. pumila mediante marcadores isoenzimticos. Para el estudio se utilizaron muestras de
ejemplares de U. minor ibricos (n = 104), de U. pumila introducidos (n = 70), de hbridos (n
= 83) y de U. pumila procedentes de China (n = 46) (COGOLLUDO 1999). Tras proceder a la
electroforesis y a la lectura de geles (figura 14), los loci 6Pgd2, Mdh1 y Prx 2 permiten
diferenciar ambas especies e identificar a los hbridos. Los ltimos se sitan ms cercanos
genticamente a U. pumila que a U. minor, quizs debido a que en la naturaleza se producen
ms retrocruzamientos con la primera especie (COGOLLUDO et al. 2000).

Caracterizacin y conservacin conjunta

Un total de 360 olmos de toda Europa se han seleccionado y propagado para
caracterizar, en sus rplicas (n = 8), y bajo un protocolo comn la resistencia a la grafiosis,
con el fin de poder comparar resultados entre los distintos pases. El equipo de la UPM
inocular 75 genotipos espaoles y 13 portugueses en una parcela ubicada en Puerta de
Hierro. Previamente se estudiarn la fenologa y los caracteres ornamentales de las plantas.

Figura 13. Distribucin de haplotipos encontrados en los olmos Figura 14. Eletroforesis de
analizados mediante marcadores de ADNcp. Smbolos distintos isoenzimas (arriba) y bandas sobre el
indican haplotipos diferentes. gel teido (abajo).

La conservacin conjunta de olmos consiste en establecer bancos clonales en Francia,

Italia, Alemania y Espaa que contengan rplicas de los mismos genotipos. Con la
conservacin ex situ se evita la prdida de genotipos que dara lugar si un determinado banco
se viera afectado por grafiosis. Se pretenden conservar a largo plazo 860 olmos procedentes
de los pases participantes. Espaa ha instalado su banco en el Centro Nacional de Mejora
Gentica Forestal de Valsan (Segovia), hasta el momento con olmos espaoles e italianos.

13
Para una mayor seguridad se conservan en fro yemas de 180 olmos, de las cuales se podrn
obtener, in vitro y en cualquier momento, nuevos ejemplares.

Difusin de resultados
Los resultados obtenidos en este proyecto se difunden a varios niveles, desde el
cientfico hasta el pblico en general, incluyndose a viveristas, horticultores y forestales.
Para ms informacin consltese http://www.cemagref.fr/Informations/Activities
/AxesRecherche/MilieuxTerrestres/ProjetGeneticResources/introduction.htm. Est prevista
una nueva edicin del libro Los olmos y la grafiosis en Espaa (GIL 1990), que incluya con
detalle los trabajos de investigacin realizados en el programa durante los diez ltimos aos.
Tambin se prepara una Conferencia Internacional del Olmo. Salvo imprevistos, se reunirn
en Valsan, en otoo del ao 2002, expertos de todo el mundo en la conservacin y mejora de
los olmos.

AGRADECIMIENTOS
La realizacin de estos trabajos ha sido posible por el impulso financiero y las
infraestructuras de la DGCONA, Ministerio de Medio Ambiente, desde el Servicio de
Material Gentico. Destaca el apoyo prestado por Manuel Tuero y Reina y en los primeros
aos del programa la colaboracin tcnica de M E. Garca-Nieto y Yolanda Menndez.
Muchas son las personas que han participado, entre otras, Sonia Martn, Juan Peuelas,
Antonio Garca, Javier Gordo, Miguel ngel Aguilar, Ramn Montoya, Gerardo Pea, Hans
Heybroek y Lorenzo Mittemperger. En los trabajos de investigacin fueron J. Pajares, R.
Ipinza, J. Dez, I. Butler, A. Garcas Puente, F. Roldn, M.. Cogolludo, A. Rossignoli, M.
Ruz-Villar y P. Gmez-Reino.

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