Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
DE INGENIERIA
LABORATORIO # 4 DE MICROBIOLOGIA
INTRODUCCION:
Existen algunos microorganismos que producen enzimas capaces de dividir molculas de gran
complejidad de polisacridos, protenas o lpidos. Estas enzimas son extra celulares y acompaan la
rotura de los de sus respectivos sustratos mediante electrolisis carbohidratos hidrolizables,
polisacridos y azucares, protenas hidrolizables, pptido y aminocidos, lpidos hidrolizables
(grasas) y cidos grasos.
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, qumicamente son protenas, como
catalizadores los enzimas actan en pequea cantidad y se recuperan indefinidamente. No llevan a
cabo reacciones que sean energticamente desfavorables, no modifican el sentido de los
equilibrios qumicos, sino que aceleran su consecucin.
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
CATALIZADOR:
Es una sustancia que acelera una reaccin qumica, hasta hacerla instantnea o casi instantnea.
Esto lo consigue disminuyendo la energa de activacin.
CLASIFICACION DE ENZIMAS
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
1. Sxido-reductasas
DE INGENIERIA
(Reacciones de oxido-reduccin).
Si una molcula se reduce, tiene que haber otra
que se oxide
2. Transferasas
(Transferencia de grupos
funcionales) grupos aldehidos
grupos acilos
grupos glucosilos
enlace glucosimidico
enlace peptimidico
enlace C-N
4. Liasas
(Adicin a los dobles enlaces)
Entre C y C
Entre C y O
Entre C y N
5. Isomerasas
1
(Reacciones de isomerizacin)
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
FERMENTACIN:
La fermentacin tpica es llevada a cabo por las levaduras. Tambin algunos metazoos y protistas
son capaces de realizarla. El proceso de fermentacin es anaerbico ya que se produce en ausencia
de oxgeno; ello significa que el aceptor final de los electrones del NADH producido en la gluclisis
no es el oxgeno, sino un compuesto orgnico que se reducir para poder reoxidar el NADH a NAD+.
El compuesto orgnico que se reduce (acetaldehdo, piruvato,...) es un derivado del sustrato que se
ha oxidado anteriormente.
Desde el punto de vista energtico, las fermentaciones son muy poco rentables si se comparan con
la respiracin aerobia, ya que a partir de una molcula de glucosa slo se obtienen 2 molculas de
ATP, mientras que en la respiracin se producen 36. Esto se debe a la oxidacin del NADH, que en
lugar de penetrar en la cadena respiratoria, cede sus electrones a compuestos orgnicos con poco
poder oxidante.
En la industria la fermentacin puede ser oxidativa, es decir, en presencia de oxgeno, pero es una
oxidacin aerbica incompleta, como la produccin de cido actico a partir de etanol.
Las fermentaciones pueden ser: naturales, cuando las condiciones ambientales permiten la
interaccin de los microorganismos y los sustratos orgnicos susceptibles; o artificiales, cuando el
hombre propicia condiciones y el contacto referido.
USOS:
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
La fermentacin tiene algunos usos exclusivos para los alimentos. Puede producir nutrientes
importantes o eliminar antinutrientes. Los alimentos pueden preservarse por fermentacin, la
fermentacin hace uso de energa de los alimentos y puede crear condiciones inadecuadas para
organismos indeseables. Por ejemplo, avinagrando el cido producido por la bacteria dominante,
inhibe el crecimiento de todos los otros microorganismos.
De acuerdo al tipo de fermentacin, algunos productos (ej. alcohol fusel) pueden ser dainos para
la salud. En alquimia, la fermentacin es a menudo lo mismo que putrefaccin, significando
permitir el pudrimiento o la descomposicin natural de la sustancia.
LUGOL:
El lugol o solucin de Lugol es una solucin de yodo diatmico|I 2 (1%) en equilibrio con yoduro de
potasio|KI (2%) en agua destilada. Fue nombrada en honor al mdico francs Jean Guillaume
Auguste Lugol. G. A. Lugol. Este producto
se emplea frecuentemente como desinfectante y antisptico, para cubrir deficiencias de yodo, y
para la desinfeccin de agua en emergencias. En microbiologa, es empleado en la tincin de Gram
para retener el colorante cristal violeta. El I 2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en
solucin acuosa con el cristal violeta. JHA Este reactivo reacciona con algunos polisacridos como
los almidones, glucgeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusin termolbil que se
caracteriza por ser colorido, dando color diferente segn las ramificaciones que presente la
molcula.
El yoduro de potasio es agregado para aumentar la solubilidad del yodo diatmico por formacin
del anin triatmico I3-.
AMILASA:
La amilasa, denominada tambin ptialina o tialina, es un enzima hidrolasa que tiene la funcin de
digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples, se produce principalmente en las
glndulas salivares (sobre todo en las glndulas partidas) y en el pncreas. Tiene un pH de 7.
Cuando una de estas glndulas se inflama aumenta la produccin de amilasa y aparece elevado su
nivel en sangre. Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833,
quien la bautiz en un principio con el nombre de diastasa.
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
En pocas palabras, en biologa es una enzima presente en la saliva, que hidroliza el almidon de
todo alimento.
-AMILASA:
En fisiologa humana tanto la procedente de la saliva como la pancretica son -Amylasas. Puede
encontrarse en algunas plantas, hongos y bacterias. Pero esto es a tempertura ambiente
AMILASA:
Otra forma de amilasa, la -amilasa es tambin sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Acta
desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrlisis del segundo enlace -1,4,
rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) a la vez. Durante el proceso de maduracin de la
fruta la -amilasa rompe el almidn en azcar dando lugar al sabor dulce de la fruta. La amilasa
presente en el grano de cereal es la responsable de la produccin de malta. Muchos
microorganismos tambin producen amilasa para degradar el almidn extracelular. Los tejidos
animales no contienen -amilasa, aunque puede estar presente en microorganismos saprfitos del
tracto gastrointestinal. Tiene un pH ptimo de 12.
- AMILASA:
USOS:
Las enzimas amilasas son empleadas en la fabricacin de pan para romper azcares complejos
como el almidn (presente en la harina) en azcares simples. La levadura puede entonces
alimentarse de esos azcares simples y convertirlos en productos de fermentacin alcohlica. Este
proceso da sabor al pan y hace elevar la masa. Las clulas de la levadura contienen amilasas pero
necesitan tiempo para fabricar la suficiente cantidad para romper el almidn. Este es el motivo de
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesaria una hidrlisis
extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias
elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio.
ALMIDON:
El almidn es la sustancia con la que las plantas almacenan su alimento en races (yuca), tubrculos
(patata), frutas y semillas (cereales). Pero, no slo es una importante reserva para las plantas,
tambin para los seres humanos tiene una alta importancia energtica, proporciona gran parte de
la energa que consumimos los humanos por va de los alimentos.
El almidn es una sustancia que se obtiene exclusivamente de los vegetales que lo sintetizan a
partir del dixido de carbono que toman de la atmsfera y del agua que toman del suelo. En el
proceso se absorbe la energa del sol y se almacena en forma de glucosa y uniones entre estas
molculas para formar las largas cadenas del almidn, que pueden llegar a tener hasta 2000 o
3000 unidades de glucosa.
El almidn est realmente formado por una mezcla de dos sustancias, amilosa y amilo pectina, que
slo difieren en su estructura: la forma en la que se unen las unidades de glucosa entre si para
formar las cadenas. Pero esto es determinante para sus propiedades. As, la amilosa es soluble en
agua y ms fcilmente hidrolizable que la amilo pectina (es ms fcil romper su cadena para liberar
las molculas de glucosa).
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
En realidad, la estructura del almidn es muy parecida a la de la celulosa, otro polisacrido que
producen las plantas. Pero mientras el almidn es parte del alimento de muchos animales y se
descompone fcilmente por accin de las enzimas digestivas, la celulosa es parte del tejido de
sostn de las plantas y muy difcil de digerir, algo que la mayora de los animales aprenden
rpidamente.
En los animales, el equivalente al almidn, como sustancia de reserva energtica, es otra sustancia
de estructura parecida que recibe el nombre de glucgeno.
El almidn se puede identificar fcilmente gracias a que la amilosa en presencia de yodo forma un
compuesto azul estable a bajas temperaturas.
El almidn es importante porque forma parte de nuestra dieta. Se encuentra en las patatas, el
arroz, los cereales, las frutas, etc. En una dieta sana, la mayor parte de la energa la conseguimos a
partir del almidn y las unidades de glucosa en que se hidroliza.
El almidn tambin es muy utilizado en la industria alimentaria como aditivo para algunos
alimentos. Uno ms de los muchos utilizados. Tiene mltiples funciones entre las que cabe
destacar: adhesivo, ligante, enturbiante, formador de pelculas, estabilizante de espumas,
conservante para el pan, gelificante, aglutinante, etc. El problema surge porque muchas veces no
se nos informa de su uso. As, por ejemplo, se utiliza en la fabricacin de embutidos y fiambres de
baja calidad para dar consistencia al producto.
Materiales:
placas petri
inoculadores
tubos de prueba
mecheros bunsen
Gradilla
Agar almidon: 15 ml x 5 = 75ml
Caldo lauril 15 x 10 = 150 ml
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
Procedimiento:
Colonia
Agar almidn
Fermentacin de carbohidratos:
Colonia
Tubo de fermentacin
Cultivo B
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
Tubo de fermentacin
HIDRLISIS DEL ALMIDON: En un inicio sta era la tabla de resultados del laboratorio # 4.
PLACA RESULTADOS
GRUPO N 1: Colonias de bacterias del laboratorio Cultivo A: no hay hidrlisis
de microbiologa Cultivo B: si hay hidrlisis (queda color del
colorante)
GRUPO N 2: Colonias de bacteria del bao de Cultivo A: no hay hidrlisis
arquitectura Cultivo B: no hay hidrlisis
GRUPO N 3: Colonias de bacterias del bao FIA Cultivo A: no hay hidrlisis
Cultivo B: no hay hidrlisis
GRUPO N 4: Colonias de bacterias del bao FIA Cultivo A: no hay hidrlisis
Cultivo B: no hay hidrlisis
GRUPO N 5: Colonias de bacterias del laboratorio Cultivo A: no hay hidrlisis
de microbiologa Cultivo B: no hay hidrlisis
UBOS A B PROCEDENCIA
CRUPO N 1
-Cantidad de ESCAZO ESCAZO BAO FIA
Crecimiento
-Formacin de gas NO SI
-Formacin de anillo NO NO
GRUPO N 2
-Cantidad de NO Moderado BAO FAUA
crecimiento
-Formacin de gas NO No
-Formacin de anillo NO si
GRUPO N 3
-Cantidad de NO HAY NO HAY BAO FAUA
crecimiento
-Formacin de gas NO HAY NO HAY
-Formacin de anillo NO HAY NO HAY
GRUPO N 4
-Cantidad de ESCASO NO ESTANQUE DEL
crecimiento PABELLON CENTRAL
-Formacin de gas NO NO
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
-Formacin de anillo NO NO
GRUPO N 5
-Cantidad de NO NO ESTANQUE DEL
crecimiento PABELLON CENTRAL
-Formacin de gas NO NO
-Formacin de anillo NO NO
Pero despus se cambio por esta otra tabla que a continuacin se presenta.
TUBO A TUBO B
Como se muiestra en la tabla se llega a un resultado inesperado y por lo tanto se concluye que no
se lleg a inocular.
CUESTIONARIO:
Enzima: Las enzimas son unas sustancias (la mayora proteicas) que actan como catalizadores o
sea facilitan y aceleran muchsimas reacciones qumicas que se producen en nuestro organismo sin
que ellas mismas sean cambiadas o destruidas durante esa accin. Se encuentran en todos los
tejidos de nuestro organismo.
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
Las enzimas ayudan a que muchas funciones de nuestro organismo se hagan ms rpidas y de un
modo ms eficaz.
Hidrlisis:
Proceso por el cual la clula degrada un sustrato (almidn, protenas, etc) por adicin de agua, esto
lo hace con las exoencimas y con la finalidad de hacer que los sustratos (de peso molecular alto) se
transformen en otros de una composicin mas simple de manera que le sea factible atravesar la
pared celular.
Fermentacin:
Proceso en el que la clula, por accin de enzimas intracelulares, realiza el proceso de oxidacin de
manera anaerobia para la obtencin de la energa necesaria para que la clula realice sus
funciones. En este caso la oxidacin, el aceptor de electrones de un compuesto orgnico.
Enzimas intracelulares: Son los responsables de los procesos de degradacin celular. En estos
procesos se obtienen nutrientes elementales a partir de los materiales estructurales propios de las
clulas cuando el aporte mediante la dieta se interrumpe (por ejemplo, durante el ayuno), o
cuando la clula no puede utilizar los nutrientes de la sangre.
Enzimas extracelulares: Son aquellas que se activan por fuera de la membrana plasmtica o pared
celular de clulas, muchas de ellas cumplen procesos metablicos catalticos destinados a la
degradacin de la materia en energa qumica, un ejemplo notorio de estas enzimas son las que
por exocitosis ( adherencia de membrana entre el lisosoma y la membrana plasmtica de la clula)
en forma de una vacuola excretora libera el contenido enzimtico para degradar la materia
orgnica o bien para realizar la fagocitosis por fuera de la clula( digestin extracelular) en el caso
de que los virus puedan ingresar a la clula husped, este es el principal mecanismo de defensa, la
liberacin de enzimas lisosmicas.
3. Qu es el almidn y la protena?
El almidn: Es una sustancia que se obtiene exclusivamente de los vegetales que lo sintetizan a
partir del dixido de carbono que toman de la atmsfera y del agua que toman del suelo. En el
proceso se absorbe la energa del sol y se almacena en forma de glucosa y uniones entre estas
molculas para formar las largas cadenas del almidn, que pueden llegar a tener hasta 2000 o
3000 unidades de glucosa.
El almidn est realmente formado por una mezcla de dos sustancias, amilosa y amilopectina, que
slo difieren en su estructura: la forma en la que se unen las unidades de glucosa entre s para
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
formar las cadenas. Pero esto es determinante para sus propiedades. As, la amilosa es soluble en
agua y ms fcilmente hidrolizable que la amilopectina (es ms fcil romper su cadena para liberar
las molculas de glucosa) .
En realidad, la estructura del almidn es muy parecida a la de la celulosa, otro polisacrido que
producen las plantas. Pero mientras el almidn es parte del alimento de muchos animales y se
descompone fcilmente por accin de las enzimas digestivas, la celulosa es parte del tejido de
sostn de las plantas y muy difcil de digerir, algo que la mayora de los animales aprenden
rpidamente.
Protenas:
Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms verstiles
y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo.
Las protenas son los materiales que desempean un mayor nmero de funciones en las clulas de
todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos (msculos,
tendones, piel, uas, etc.) y, por otro, desempean funciones metablicas y reguladoras
(asimilacin de nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de
materiales txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada
ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de
reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario.
Las protenas de todos los seres vivos estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con
excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin
gentica determina en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo.
Las protenas se sintetizan dependiendo de cmo se encuentren regulados los genes que las
codifican. Por lo tanto, son susceptibles a seales o factores externos.
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
La respiracin celular es una parte del metabolismo, concretamente del catabolismo, en la cual la
energa contenida en distintas biomolculas, como los glcidos, es liberada de manera controlada.
Durante la respiracin una parte de la energa libre desprendida en estas reacciones exotrmicas,
es incorporada a la molcula de ATP, que puede ser a continuacin utilizado en los procesos
endotrmicos, como son los de mantenimiento y desarrollo del organismo (anabolismo).
La respiracin celular podra dividirse en dos tipos, segn el papel atribuido al oxgeno:
* Respiracin aerbica: Hace uso del O2 como aceptor ltimo de los electrones desprendidos de
las sustancias orgnicas. Es la forma ms extendida, propia de una parte de las bacterias y de los
organismos eucariontes, cuyas mitocondrias derivan de aqullas. Se llama aerobios a los
organismos que, por este motivo, requieren O2.
* Respiracin anaerbica: No interviene el oxgeno, sino que se emplean otros aceptores finales de
electrones, muy variados, generalmente minerales y, a menudo, subproductos del metabolismo de
otros organismos. Un ejemplo de aceptor es el SO42- (anin sulfato), que en el proceso queda
reducido a H2S.
Para el almacenamiento de la energa, las clulas producen polisacridos insolubles que luego
pueden oxidarse produciendo ATP. Como ejemplo se pueden citar los polmeros de poli glucosa,
glicgeno y almidn, el polmero lipdico poli- beta, as como el azufre. Estos polmeros se
depositan dentro de la clula como grandes grnulos que a menudo se pueden observar por
microscopia ptica o electrnica. En ausencia de una fuente de energa externa, las clulas pueden
oxidar estos polmeros y ser capaces de hacer nuevo material celular o simplemente disponer del
nivel de energa de mantenimiento, incluso cuando el medio ambiente no se dispone de sustancias
capaces de suministrar energa.
CONCLUSIONES:
Segn el procedimiento, cuando se agrega el lugol, nos indica lo siguiente: la parte que ha
consumido almidn tiene que estar transparente.
Cuando no hay hidrlisis persiste el almidn en los cultivos.
Si colorea azul quiere decir que no ha utilizado almidn.
Comprobamos si el cultivo de la colonia A o B fermenta y para eso tiene que producir gas.
Entonces como en ninguno de los casos nos sali lo correcto quiere decir que no se llego a
inocular bien.
en ninguno de los tubos de ensayo se produjo gas.
Entonces la conclusin final es que se fracaso en este laboratorio.
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
RECOMENDACIONES:
1
UNIVERSIDAD NACIONAL MICROBIOLOGIA SANITARIA I
DE INGENIERIA
Bibliografa:
http://proteinas.org.es/que-son-las-proteinas
http://www.slideshare.net/octaviolopez/concepto-de-enzima enzimas
http://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3n#Tipos_de_fermentaciones
http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna#Reacciones_de_reconocimiento protenas.
http://es.wikipedia.org/wiki/Hidr%C3%B3lisis hidrlisis.