Universidad Autnoma de Chihuahua

Facultad de Ciencias Qumicas

Laboratorio de Bacteriologa medica
Practica 1:
Anlisis de cepas de referencia relacionadas
a infecciones del tracto gastrointestinal.
Equipo 2:
Luis Andrs Carrillo Quezada 291921

Jesus Manuel Rohan Mancha 282346

Nayely Edith Ortiz Caldera 271837

Resumen:

Se cultivaron 5 diferentes cepas de bacterias que pueden afectar el tracto

gastrointestinal en medios de cultivo con diferente sustrato para poder observar
su morfologa tanto macroscpicamente como microscpicamente y se
emplearon pruebas bioqumicas para confirmar la especie de la cepa.

Introduccin:

La familia Enterobacteriaceae son regularmente bacilos gram negativos

aerobios facultativos con importancia clnica, estos gneros son clasificados
segn sus propiedades bioqumicas, estructura antignica y secuencia de su
material gentico. A pesar de ser una familia de bacteria muy compleja, un
menos de 20 especies son responsables de ms del 95% de las infecciones en
el hombre.

Salmonella spp.

La Salmonella est formada por bacilos gram negativos, son anaerobios

facultativos, disponen de flagelos periticos que rodean al microorganismo y no
desarrolla cpsula ni espora. Las bacterias crecen ptimamente a 37C y
pueden catabolizar la D-glucosa y otros carbohidratos con produccin de cido
y gas. Estos microorganismos son oxidasa negativos y catalasa negativos,
crecen en citrato como nica fuente de carbono, generalmente producen cido
sulfhdrico, descarboxilan la lisina y ornitina, y no hidrolizan la urea. Es la
responsable de casi la mitad de los casos de infecciones de origen alimentario
que se diagnostican en los hospitales. La salmonella puede ser cultivada en
XLD, SS. Hecktoen, VB, Sulfito bismuto para proceder a hacer pruebas
bioqumicas.
Shigella spp.

La Shigella es un gnero de bacterias con forma de bacilo, Gram negativa, no

mvil, no formadoras de esporas, no descarboxilan la lisina, no fermentan la
lactosa. No utilizan el citrato como nica fuente de carbono. No crecen en el
medio cianuro potsico y su actividad bioqumica es muy reducida. Puede ser
cultivada en SS, MacConkey, XLD.

Sus brotes se relacionan con la falta de higiene y se transmite fcilmente, bien

directamente de persona a persona o a travs de las manos, insectos o por
contaminacin fecal.

Tras su ingestin esta bacteria libera una endotoxina que afecta a la mucosa
intestinal. Tanto el periodo de incubacin como los sntomas son muy variables:
dolores abdominales, diarreas, escalofros, nuseas y cefaleas de diferentes
grados de gravedad.

Yersinia spp.

La Yersinia es un gnero de bacterias con forma de bacilo, gram negativas,

aerobios o anaerobios facultativos, mviles a 22C, pero no a 37C con flagelos
anfitricos, no formadoras de esporas o capsulas pose 7 especies de las cuales
tres son patgenos muy importantes de humanos y animales. Siendo estas:

Yersinia pseudotuberculosis (Provoca una enfermedad parecida en

animales.)
Yersinia enterocolitica (Provoca enterocolitis)
Yersinia pestis (Peste negra)

Vibrio spp.

El Vibrio pertenece a la familia Vibrionaceae, son bacilos gram negativos,

anaerobios facultativos con morfologa de curva. Posen un flagelo polar, por lo
tanto son motiles, no forman esporas y oxidasa positiva. Algunas especies de
Vibrio son patgenas en el hombre, causando alguna enfermedad en el aparato
gastrointestinal. Se utiliza el medio TCBS para su aislamiento, especialmente
para la especie cholerae.

Materiales y mtodos:

Material:

Portaobjetos
Mechero de Bunsen
Asa de nicromio
Cepas:

Salmonella enteritidis
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Yersinia enterocolitica
Vibrio parahaemolyticus

Medios de cultivo:

Agar MacConkey
Agar Salmonella Shigella
Agar XLD
Agar Sulfito Bismuto
Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa

Pruebas bioqumicas:

TSI
LIA
Citrato
Caldo Rojo de Metilo
Caldo Voges Proskauer
Caldo Urea
Caldo malonato
MIO
SIM

Mtodo:

Se utilizaron las tcnicas aspticas correspondientes.

Se descarg cada cepa de referencia con la asa de nicromio en un
extremo de la caja Petri con el agar correspondiente.
Se incubo los medios de cultivo de manera invertida a 37 grados
centgrados.
Se observ en cada colonia aislada de cada cepa correspondiente y se
anot la morfologa macroscpica.
Se procedi a realizar la tincin de gram y se anotaron sus
caractersticas microscpicas.
Se llevaron a cabo las pruebas bioqumicas y se incubaron a 37 grados
centgrados durante 24 horas y finalmente se procedi a interpretar los
resultados de dichas pruebas bioqumicas.
 Resultados:

Salmonella enteritidis

Morfologa macroscpica

Cepa de salmonella enteritidis

referencia
Medio de MacConkey XLD SS SB
cultivo
Borde Irregular Regular Irregular Regular
Tamao Medianas Medianas Grandes Pequeas
Color Blancas Negras Negras centro Negras
transparentes
en la orilla
Elevacin Convexa Convexa Convexa Convexa
Forma Circular Circular Irregular Circular
Luz reflejada Si Si Si Si
Luz Si No No No
transmitida
Consistencia Viscosa Semislida Semislida Semislida
Sustrato Lactosa H2S H2S H2S

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Salmonella Resultados Referencias

enteritidis
TSI Fermentacin de glucosa con gas, Lactosa negativa, produce
produccin de H2S, fermentacin H2S, fermenta glucosa
de lactosa
LIA Descarboxilacion de lisina Descarboxila lisina, produce
positiva, desaminacion negativa, H2S
produccin de H2S positiva
Citrato Negativo Positivo
Rojo de Positivo Positivo
Metilo
Voges Negativo Negativo
proskauer
Urea Negativo Negativo
Malonato Negativo Negativo
MIO Ornitina positiva, indol negativo y Indol negativo, Ornitina
movilidad positiva positiva, Movilidad positiva
SIM Indol negativo y H2S positivo Indol negativo, H2S positivo

Salmonella typhimurium

Morfologa macroscpica

Cepa de salmonella typhimurium

referencia
Medio de MacConkey XLD SS SB
cultivo
Borde Irregular Regular Redonda Regular
Tamao Pequeas Medianas Pequeas Pequeas
Color Blancas Negras Blancas con Negras
un punto
negro
Elevacin Convexa Convexa Convexa Convexa
Forma Circular Circular Irregular Circular
Luz reflejada Si Si Si Si
Luz Si No Si No
transmitida
Consistencia Viscosa Semislida Slida Slida
Sustrato Lactosa H2S H2S H2S

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Salmonella Resultados Referencias

typhimurium
TSI Fermentacin de glucosa sin Fermentacin de glucosa sin
produccin de gas, produccin de gas,
produccin de H2S produccin de H2S
LIA Descarboxilacion y Descarboxilacion positiva
desaminacion negativa con
produccin de H2S
Citrato Negativo Negativo
Rojo de Metilo Positivo Positivo
Voges Negativo Negativo
proskauer
Urea Negativo Negativo
Malonato Negativo Negativo
MIO Ornitina positiva, indol Indol negativo, Movilidad
negativo y movilidad positiva positiva
SIM Movilidad positiva, H2S Indol negativo, H2S positivo,
positivo, Indol negativo Movilidad positiva

Shigella flexneri

Morfologa macroscpica

Cepa de Shigella flexneri

referencia
Medio de MacConkey XLD SS SB
cultivo
Borde Irregular Regular Redonda Regular
Tamao Medianas Medianas Pequeas Pequeas
Color Blancas Negras Transparentes Negras
Elevacin Convexa Convexa Convexa Convexa
Forma Circular Circular Irregular Circular
Luz reflejada Si Si Si Si
Luz No Si Si No
transmitida
Consistencia Semislida Semislida Viscosas Slida
Sustrato Lactosa H2S H2S H2S

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Shigella Resultados Referencias

flexneri
TSI Fermentacin de glucosa sin Sacarosa y lactosa negativa
produccin de gas o H2S sin produccin de gas pero
H2S positivo
LIA Desaminacion y descarboxilacion Desaminacion y
negativa sin produccin de H2S descarboxilacion negativa
con produccin de H2S
Citrato Negativo Negativo
Rojo de Positivo Positivo
Metilo
Voges Negativo Negativo
proskaue
r
Urea Negativo Negativo
Malonato Negativo Negativo
MIO Movilidad positiva, ornitina Indol positivo, Movilidad
negativa, indol positivo negativa, Ornitina negativa
SIM Movilidad positiva, indol positivo, Movilidad negativa, H2S
no H2S positiva

Yersinia enterocolitica

Morfologa macroscpica

Cepa de yersinia enterocolitica

referencia
Medio de MacConkey XLD SS SB
cultivo
Borde Regular Regular Redonda Regular
Tamao Pequeas Pequeas Pequeas Pequeas
Color Blancas Blancas Transparentes Negras
Elevacin Convexa Convexa Convexa Convexa
Forma Circular Circular Regular Circular
Luz reflejada Si Si Si Si
Luz Si Si Si No
transmitida
Consistencia Semislida Aspecto seco Viscosas Slida
Sustrato Lactosa H2S H2S H2S

Morfologa microscpica

Forma Bacilos
Arreglo Simple
Afinidad tintorial Gram negativo

Pruebas bioqumicas

Yersinia Resultados Referencias

enterocoli
tica
TSI Fermentacin de glucosa sin Lactosa y sacarosa negativo,
produccin de gas o H2S, no produce gas ni H2S
LIA Desaminacion y descarboxilacion Desaminacion y
de lisina negativo, H2S negativo descarboxilacion negativo,
H2S negativo
Citrato Negativo Negativo
 Rojo de Positivo Positivo
Metilo
Voges Negativo Negativo
proskaue
r
Urea Negativo Positivo
Malonato Negativo Negativo
MIO Movilidad positiva, ornitina Ornitina positiva, Movilidad
positiva, indol positivo negativa, Indol positivo
SIM Movilidad positiva, indol positivo, Movilidad negativa, Indol
H2S negativo positivo, H2S negativo

Vibrio parahaemolyticus

Morfologa macroscpica Morfologa microscpica

Cepa de Vibrio
referencia parahaemolyticus Forma Bacilos
Arreglo Simple
Medio de TBCS Afinidad tintorial Gram negativo
cultivo
Borde Regular
Tamao Grandes
Color Transparentes
Elevacin Convexa
Forma Circular
Luz reflejada Si
Luz No
transmitida
Consistencia Slida
Sustrato

Pruebas bioqumicas

Vibrio Resultados Referencias

parahaemolyticus
TSI Fermentacin de glucosa sin Lactosa y sacarosa
produccin de H2S o gas negativa, fermentacin de
glucosa positiva
LIA Descarboxilacion de lisina Descarboxilacion positiva
positiva, desaminacion de ornitina, desaminacion
negativa sin produccin de negativa
H2S
Citrato Negativo Negativo
Rojo de Metilo Positivo Positivo
Voges proskauer Negativo Negativo
Urea Negativo Negativo
Malonato Negativo Negativo
MIO Movimiento negativo, ornitina Ornitina positiva, Indol
positiva, indol positivo positivo, movimiento
positivo
SIM Movimiento negativo, H2S Indol negativo, H2S
negativo negativo, movimiento
positivo

Conclusin:

Existieron varias pruebas bioqumicas que dieron un resultado errneo a la

hora de ser comparadas con los resultados de referencia.

Como lo es el caso de Salmonella enteritidis, donde en la prueba bioqumica

TSI hubo una fermentacin en el pico, esto hace referencia a una fermentacin
de lactosa / sacarosa mientras que en las referencias del libro, solo algunas
especies fermentan lactosa.

Este error se piensa que est relacionado a una mala lectura de las pruebas
bioqumicas ya que la Salmonella produce H2S, ennegreciendo todo el medio y
es difcil poder diferenciar si el pico es amarillo.

Tambin se debe al hecho que en las pruebas macroscpicas, no se tom nota

del color del agar MacConkey y por lo tanto no se puede diferenciar la
fermentacin de lactosa o sacarosa.

Otra prueba bioqumica fue en Citrato, donde en Salmonella poda utilizar

Citrato, pero ninguna de las pruebas fue positiva, se desconoce la causa de
esto y se piensa que tambin se debe a una mala lectura de la prueba.

En varias otras pruebas de las diferentes cepas, existieron diferencias entre los
resultados y las referencias, en la mayora de ellas se desconoce porque
sucedi esto, el mejor ejemplo es la Urea, donde la mayora de los equipos
recibi urea negativa en sus pruebas mientras que Yersinia enterocolitica es
urea positiva, aqu podemos decir que posiblemente las referencias del libro
Metabolismo microbiano pueden estar incorrectas o hubo problemas a la hora
de inoculacin o preparacin de la muestra, siendo la segunda opcin la mas
posible.

Bibliografa:

Michael, T., John, M. (2009). Biologia de los microorganismos. 12ed.

Viramontes, S., Portillo, M. (2011). Metabolismo microbiano. Universidad
Autnoma de Chihuahua.
Murray, R. (2006) Microbiologa Mdica. Mosby Elsevier Science.