1. ANTIBIOGRAMA: MUELLER HILTON.

LECTURA.

OBJETIVOS.

Determinar la sensibilidad a diversos antibiticos de un determinado

microorganismo.
Comprender el concepto de antibitico y su especificidad de accin sobre
determinadas bacterias.
Conocer el concepto de sensible o resistente.
Entender el concepto de halo de inhibicin.

INSTRUMENTOS:

Mechero.
Pinzas.
Isopo.
Fsforos.
Caja de Petri (Mueller Hilton).
Antibiticos.
Incubadora.

ANTIBIOTICOS:

Amoxicilina: AML
Gentamicina: CN
Carbennicilina: CB
Vancomicina: VA
Penicilina: P

PROCEDIMIENTO:

Seleccionamos una colonia para sembrar, en este caso se escogi la colonia 6

(bacilos gram +) y la sembramos con el isopo esparcindola muy bien por todo el
agar, luego quemamos el isopo con el mechero para evitar contaminacin en el
laboratorio. Procedemos a poner los antibiticos uno por uno en el agar con las
pinzas, posteriormente marcamos la caja de Petri con los respectivos nombres y
se lleva a la incubadora a 37C durante 18 horas.
PUNTOS CLAVE

El estudio de la sensibilidad de los microorganismos a los antimicrobianos

se realiza principalmente por tcnicas de dilucin o de difusin.
Las tcnicas de dilucin proporcionan resultados cuantitativos
(concentracin mnima inhibitoria, CMI) y las de difusin cualitativos
(sensible, intermedio, resistente). Ambos mtodos son comparables ya que
hay una correlacin directa entre el dimetro del halo de inhibicin con un
disco y la CMI.
Las tcnicas bioqumicas y genticas permiten detectar el mecanismo o el
gen de resistencia en minutos u horas.
La realizacin de un antibiograma se basa en el patrn de resistencia de
cada bacteria. As, los antibiticos a los que esa bacteria es
intrnsecamente resistente o cuya sensibilidad puede inferirse por otros, no
suelen informarse en el antibiograma.
Los patrones de antibiograma poco frecuentes o imposibles requieren
confirmacin, ya que no responden a mecanismos de resistencia
conocidos.

El estudio de la sensibilidad a antimicrobianos de las diferentes bacterias

aisladas en muestras biolgicas tiene 2 objetivos fundamentales: guiar al clnico
en la eleccin del mejor tratamiento individual, y monitorizar la evolucin de la
resistencia bacteriana con objeto de revisar el espectro del antimicrobiano y
poder actualizar los tratamientos empricos. Este estudio se realiza mediante el
antibiograma, que mide la sensibilidad de una bacteria frente a diferentes
antimicrobianos in vitro y a partir de estos resultados predice la eficacia in vivo.

Con un antibiograma se pueden obtener resultados cualitativos que indican si la

bacteria es sensible o resistente a un antibitico, o cuantitativos que determinan
la concentracin mnima (CMI) de antimicrobiano que inhibe el crecimiento
bacteriano.

TCNICAS DE ESTUDIO DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS.

El estudio de la sensibilidad in vitro de las bacterias a los antimicrobianos se

realiza mediante mtodos fenotpicos (tcnicas de dilucin y de difusin),
bioqumicos y genticos.

Los mtodos fenotpicos (antibiograma) son los ms utilizados. Consisten en

enfrentar un inculo bacteriano estandarizado a una nica o a diferentes
concentraciones de antibitico. La interpretacin de los resultados obtenidos
permite clasificar a los microorganismos en categoras clnicas: sensibles,
intermedios o resistentes. Hay que tener en cuenta que no siempre un valor de
CMI ms bajo indica mayor actividad de este antimicrobiano, ya que las CMI que
definen la sensibilidad o resistencia son diferentes para cada especie bacteriana
y cada antimicrobiano.

Si un microorganismo es sensible indica que con las dosis habituales se espera

una evolucin favorable de la infeccin, siempre que se alcancen valores
adecuados en el lugar de la infeccin, lo que en ocasiones no es posible (p. ej.,
en el sistema nervioso central). Por el contrario, si el microorganismo es
intermedio o resistente, es probable que la evolucin sea desfavorable. La
interpretacin de la sensibilidad predice mejor el fracaso (cuando es resistente)
que el xito de un tratamiento.

Entre los mtodos fenotpicos, las tcnicas de dilucin determinan la CMI

utilizando un medio lquido (dilucin en caldo) o un medio slido (dilucin en
agar) para disolver las diferentes concentraciones del antimicrobiano. El medio
estandarizado para la realizacin del antibiograma es el medio Mueller-Hinton, al
que se le aade sangre u otros suplementos para bacterias que no crecen en l.
La CMI es la dilucin ms baja de antimicrobiano en la que no se observa
crecimiento bacteriano.

Las tcnicas de difusin emplean discos de papel impregnados con una solucin
estandarizada de antibitico que se disponen sobre la superficie de un medio
slido previamente inoculado en su superficie con una suspensin bacteriana.
Tras un perodo de incubacin de 18 h, el dimetro del halo formado est en
relacin con el grado de sensibilidad del microorganismo. La carga del disco est
ajustada para que los halos de inhibicin permitan diferenciar los
microorganismos sensibles de los resistentes y pueda establecerse una
correlacin con los valores de CMI: halos pequeos se relacionan con valores
altos de CMI (resistentes) y halos grandes con CMI bajas (sensibles).

LECTURA INTERPRETADA DEL ANTIBIOGRAMA.

El anlisis de los resultados de sensibilidad es un aspecto esencial para una

adecuada informacin del antibiograma y tiene una gran trascendencia clnica.
En este sentido, la lectura interpretada del antibiograma analiza los fenotipos de
sensibilidad y permite deducir posibles mecanismos de resistencia. Adems, este
proceso permite inferir la sensibilidad de antibiticos no estudiados en el
antibiograma y la correccin, en su caso, de falsas sensibilidades observadas in
vitro, como ocurre en el caso del antibiograma de una enterobacteria con una
BLEE, en el que no siempre aparecen como resistentes todas las cefalosporinas,
si bien, en la prctica debe evitarse su uso. As mismo, favorece la adecuacin
del tratamiento, el control de las polticas de antimicrobianos, la deteccin de
nuevos mecanismos de resistencia y el conocimiento de su epidemiologa. Un
requisito esencial para poder realizar una adecuada lectura interpretada es
conocer la identidad del microorganismo estudiado, tanto el gnero como la
 especie, ya que sin ella el resultado puede llevar a errores en la utilizacin de los
antimicrobianos.

Otro requisito para poder realizar correctamente la lectura interpretada del

antibiograma es conocer el fenotipo de sensibilidad de un microorganismo, ya
que hay bacterias que siempre son resistentes a determinados antibiticos y
otras que siempre son sensibles, y la desviacin de estos patrones indica si el
patrn del antibiograma corresponde a un fenotipo habitual, raro o imposible. Los
fenotipos habituales son los aislamientos con mecanismos de resistencia cuya
presencia es epidemiolgicamente normal en el medio donde se realiza el
antibiograma. Los fenotipos raros son los que presentan resistencias poco
habituales, bien porque han sido recientemente caracterizadas o porque son muy
poco frecuentes en nuestro medio. Finalmente, los fenotipos imposibles no
responden a mecanismos de resistencia conocidos y, por tanto, es necesaria su
comprobacin. Estos fenotipos imposibles, en muchas ocasiones, representan un
error en la identificacin del microorganismo o bien problemas tcnicos en la
realizacin del antibiograma, pero tambin hay que tener en cuenta que la
repeticin de estos fenotipos en bacterias correctamente identificadas puede
suponer un nuevo mecanismo de resistencia.

RESULTADOS:

ANTIBIOTICO SENSIBLE RESISTENTE

Amoxicilina X
Gentamicina X
Carbennicilina X
Vancomicina X
Penicilina X

NOTA: La bacteria es resistente a la mayora de los antibiticos.

GLOBULOS ROJOS Y GLOBULOS BLANCOS.

La sangre es esencial para los seres humanos. Representa casi un 8% del peso
corporal. Se compone de plasma y diferentes tipos de clulas, pero dos de los
ms importantes tipos de clulas sanguneas son los glbulos rojos y los glbulos
blancos.

GLOBULOS ROJOS:

Tambin llamados eritrocitos o hemates, son los elementos formes ms

numerosos de la sangre. Su forma es pequea y bicncava. La hemoglobina es
uno de sus principales componentes, y su funcin es transportar el oxgeno hacia
los diferentes tejidos del cuerpo. Los eritrocitos humanos, as como los del resto
de mamferos, carecen de ncleo y de mitocondrias, por lo que deben obtener su
energa metablica a travs de la fermentacin lctica. La cantidad considerada
normal flucta entre 4 500 000 (en la mujer) y 5 400 000 (en el hombre)
por milmetro cbico (o microlitro) de sangre, es decir, aproximadamente 1000
veces ms que los leucocitos. El exceso de glbulos rojos se
denomina policitemia y su deficiencia se llama anemia. Los Eritrocitos tienen la
habilidad de poder pasar por los pequeos vasos capilares.

La clula ha perdido su ARN residual y sus mitocondrias, as como

algunas enzimas importantes; por tanto, es incapaz de sintetizar
nuevas protenas o lpidos. Su citoplasma contiene en mayor parte el
pigmento hemoglobina, que se encarga del transporte de oxgeno y del dixido de
carbono. Asimismo, es el pigmento que le da el color rojo a la sangre.
Los eritrocitos derivan de las clulas madre comprometidas
denominadas hemocitoblasto. La eritropoyetina, una hormona de crecimiento
producida en los tejidos renales, estimula la eritropoyesis (es decir, la formacin
de eritrocitos) y es responsable de mantener una masa eritrocitaria en un estado
constante. Los eritrocitos, al igual que los leucocitos, tienen su origen en la mdula
sea, y se mantienen en circulacin con un vida til de aproximadamente 120
das.
GLOBULOS BLANCOS:

Los glbulos blancos o leucocitos son un conjunto heterogneo

de clulas sanguneas que son ejecutoras de la respuesta inmunitaria,
interviniendo as en la defensa del organismo contra sustancias extraas o
agentes infecciosos (antgenos), son nuestras defensas contra las enfermedades.
Se originan en la mdula sea y en el tejido linftico y se mantienen en circulacin
con un vida til de aproximadamente 7 a 9 das.
Los leucocitos son producidos y derivados de unas clulas multipotenciales en la
mdula sea, conocidas como clulas madre hematopoyticas. Los glbulos
blancos se encuentran en todo el organismo, incluyendo la sangre y el tejido
linfoide. Estn compuestos por granulocitos, linfocitos y monocitos.
Existen cinco diferentes y diversos tipos de leucocitos, y varios de ellos
(incluyendo monocitos y neutrfilos) son fagocticos. Estos tipos se distinguen por
sus caractersticas morfolgicas y funcionales.
El nmero de leucocitos en la sangre suele ser un indicador de enfermedad. El
recuento normal de glbulos blancos flucta entre 4000-11 000 glbulos blancos
por microlitro. Conforman, aproximadamente, el 1% del volumen sanguneo total
de un adulto sano. Al aumento del nmero de leucocitos por arriba del lmite
superior se le llama leucocitosis, y al decrecimiento por debajo del lmite inferior se
le llama leucopenia.

En comparacin con los glbulos rojos, los leucocitos son muy inferiores en
nmero, pero cuando se combaten infecciones; el cuerpo tiende a aumentar el
nmero de ellos. Los granulocitos y los linfocitos luchan contra las bacterias y
virus. Los glbulos blancos tambin se encargan de producir anticuerpos para
luchar contra cualquier elemento extrao.

En conclusin, los glbulos blancos y los glbulos rojos son muy diferentes entre
s. Se diferencian en su estructura, composicin y funciones. Los glbulos rojos no
contienen ningn ncleo, contrario a los leucocitos. Los glbulos rojos llevan
hemoglobina y liberan oxgeno en los tejidos. Por otra parte, los glbulos blancos
realizan tareas relacionadas con la inmunidad. Los Eritrocitos son de color rojo
gracias a la presencia de hemoglobina, mientras que los leucocitos son incoloros.

DIFERENCIAS CLAVE ENTRE GLBULOS ROJOS Y GLBULOS BLANCOS.

1. La estructura fsica de los glbulos rojos (Eritrocitos) es la de discos

bicncavos y sin ncleo en los mamferos, mientras que los glbulos
blancos (leucocitos) tienen forma irregular, ncleo y una capa exterior en
los mamferos.

2. La vida til de los glbulos rojos suele ser de 120 das; mientras que la de
los leucocitos puede ir de 7 a 9 das, dependiendo del cuerpo.

3. El recuento bajo de glbulos rojos es sinnimo de anemia (se reduce la

capacidad del cuerpo para transportar oxgeno a los tejidos), mientras que
el nmero bajo de glbulos blancos (leucopenia) puede comprometer las
funciones inmunitarias.

4. La funcin principal de los glbulos rojos es la de transportar oxgeno,

mientras que la de los glbulos blancos es la de proporcionar proteccin
contra materia y organismos extraos.

5. Slo hay un tipo de glbulos rojos, mientras que hay varios tipos de
glbulos blancos: los granulocitos, los monocitos y los linfocitos.

6. Los glbulos rojos representan un 40-45 % del volumen de la sangre,

mientras que los glbulos blancos apenas representan un 1% del volumen
de sta.

7. Los glbulos rojos generalmente se mueven en el sistema cardiovascular,

mientras que los glbulos blancos andan en el sistema cardiovascular
linftico. Algunos en los ganglios linfticos y se escapan de los vasos
sanguneos y viajan hacia los sitios donde hay infecciones o heridas.
GLOSARIO:

ANTIMICROBIANO: Es una sustancia que elimina microrganismos o inhibe su

crecimiento, tales como bacterias, hongos o parsitos. Basado en ello, los
siguientes pueden referirse a agentes microbianos, antibiticos, antimicticos
antiparasitarios etc.
BLEE: Son enzimas capaces de hidrolizar penicilinas, cefalosporinas de amplio
espectro y monobactmicos que derivan de enzimas tipo TEM y SHV
principalmente.

CEFALOSPORINAS: Son una clase antibiticos beta-lactmicos. Las

cefalosporinas actan de la misma manera que las penicilinas, interfiriendo en la
sntesis de peptidoglicano de la pared celular bacteriana, e inhibiendo la
transpeptidacin final, necesaria para la reticulacin. Esto genera un efecto
bacterioltico.

CMI: Es la concentracin ms baja de un antimicrobiano que inhibe

el crecimiento de un microorganismo despus de su incubacin. La concentracin
mnima inhibitoria es importante en diagnsticos de laboratorio para confirmar la
resistencia de microorganismos a un agente antimicrobiano y adems para
monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos.

DILUCIN: Es la reduccin de la concentracin de una sustancia qumica en

una disolucin.

ELEMENTOS FORMES: En hematologa se denomina elementos

formes o figurados a los componentes celulares de la sangre: los glbulos rojos,
los blancos, y las plaquetas. Los glbulos rojos se encargan de llevar el oxgeno a
todas las partes del cuerpo.

FENOTIPO: Es cualquier caracterstica o rasgo observable de un organismo,

como su morfologa, desarrollo, propiedades bioqumicas, fisiologa y
comportamiento.

HALO DE INHIBICIN: Zona alrededor de un disco de antibitico en un

antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar
inoculada con el germen. Es una medida de la potencia del antibitico frente al
germen.

IN VITRO: Se refiere a una tcnica para realizar un determinado experimento en

un tubo de ensayo, o generalmente en un ambiente controlado fuera de
un organismo vivo.
 INFORME LABORATORIO

Mnica Mara Garca Rincn

Universidad Autnoma de Manizales

Facultad de Salud

Odontologa

Manizales

2017