Extraccin con buffer carbonato: Se mezclaron 200 mg de harina y 1.

5 mL de
buffer carbonato 50 mM con 0.15 M de NaCl pH 9.6. Se homogeniz y
posteriormente se dej en agitacin constante durante 60 minutos a 1000 rpm. Los
extractos se centrifugaron a 13 000 rpm por 15 minutos, los sobrenadantes fueron
almacenados a -20 C (27).
Extraccin con sonicacin y buffer PBS: Se pesaron 200 mg de harina y se
mezclaron con buffer fosfato de sodio (PBS) y 0.5 % de Tween (pH 7.4). La
suspensin se agit durante 60 minutos y posteriormente se le aplic sonicacin
durante 20 y 30 minutos (28). Los extractos se centrifugaron a 13 000 rpm por 15
minutos y los sobrenadantes se almacenaron a -20 C.
Extraccin con sonicacin y buffer Carbonato: Se mezcl 200 mg de harina y
1.5mL de buffer carbonato 50 Mm con 0.15 M de NaCl se agit durante 60 minutos
y posteriormente se le aplico sonicacin durante 20 y 30 minutos. Los extractos se
centrifugaron a 13 000 rpm por 15 minutos y los sobrenadantes se almacenaron a -
20 C.
Extraccin con sonicacin y NaCl 1 M: Se pesaron 200 mg de harina y se
mezclaron con solucin de NaCl 1 M La suspensin se agit durante 60 minutos y
posteriormente se le aplico sonicacin durante 20 y 30 minutos. Los extractos se
centrifugaron a 13 000 rpm por 15 minutos y los sobrenadantes se almacenaron a -
20 C.
Extraccin alcalina: Para la extraccin alcalina se disolvieron 200 mg de harina en
2mL de agua destilada pH 12 manteniendo una relacin final harina/solucin de
extraccin de 1:10 p/v. Despus la mezcla se centrifug a 13 000 rpm durante 20
minutos y se conserv el sobrenadante -20 C (29).
Extraccin con Tritn X-100: Se mezclaron 200 mg de harina y 1.5 mL del buffer
(20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 137 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 1 mMCaCl2, 1 % Tritn X-
100 10 % glicerol), la mezcla se agit durante 90 minutos y seguidamente se
mantuvo en hielo durante 30 minutos, luego se centrifug para eliminar sustancias
insolubles (13 000 rpm por 15min) y se conserv el sobrenadante -20 C.
Extraccin con SDS: La extraccin con buffer fosfato sdico 0.05 M y 1 % SDS se
realiz disolviendo 200 mg de harina en el buffer, se agit durante 90 minutos y
posteriormente se centrifugaron los extractos a 13 000 rpm por 15 minutos; los
sobrenadantes fueron almacenados a -20 C (28).
Extraccin con buffer fosfato de sodio (PBS): Se disolvieron 200 mg de harina
en 1.5 mL de buffer fosfato de sodio y 0.5 % de tween 20, se agit durante 60
minutos. Los extractos se centrifugaron a 13 000 rpm por 15 minutos y los
sobrenadantes fueron almacenados a -20 C