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Matria de Gentica

DNA
DNA o cido desoxirribonucleico, componente orgnico que contm as informaes que
coordenam o desenvolvimento e funcionamento das clulas de nosso organismo. Ele composto
de trs partes: grupo fosfato, pentose (desoxirribose) e uma base nitrogenada (amina, timina,
guanina e citosina).
Existem vrias ligaes responsveis por manter a conformao do DNA. A ligao entre a
pentose e a base nitrogenada a glicosdica covalente, estabelecida entre o C1 da pentose e N1
(no caso da base pirimdica) e N9 (base prica). A ligao entre fosfato e pentose, por sua vez,
a fosfodister, estabelecida entre o fosfato ligado a C5 de um nucleotdeo e o C3 de outro
nucleotdeo. ela quem estabelece a polaridade do DNA. A ligao entre duas bases
nitrogenadas, formando a dupla fita, constitui-se de pontes de hidrognio, sendo que adenina e
timina ligam-se por duas pontes e citosina e guanina por trs pontes. Mutaes podem alterar
essas bases, formando tautmeros (adenina forma citosina e timina forma guanina), o que altera
a conformao da molcula. A dupla hlice mantm-se unida por duas foras: as pontes de
hidrognio entre bases complementares e interaes hidrofbicas, nas quais as bases escondem-
se da gua dentro da hlice.
Alm da estrutura linear, o DNA adquire estruturas secundrias. No caso do DNA mitocondrial
e procaritico, consta o formato circular, podendo ser relaxado ou superenrolado.
Existem vrias formas de DNA j constatadas: a forma B, mais comum, altamente hidratada
e compacta, apresentando 10 nucleotdeos por volta e hlice voltada para a direita; a forma Z,
menos hidratada que B, apresenta 12 nucleotdeos por volta, sua hlice voltada para a esquerda
e no apresenta funo conhecida; a forma A, por fim, apresenta 11 nucleotdeos por volta, hlice
voltada para direita e a forma adquirida por certas molculas de RNA.
O DNA no esttico! Apresenta flexibilidade conformacional determinada por diversos
fatores: sequncia gnica, grau de hidratao e enrolamento, modificaes qumicas etc. Sob P
= 7 e temperatura ambiental, apresenta aspecto viscoso. pHs mais extremos, por sua vez, tornam-
no menos viscoso: no Ph cido, o excesso de ons H+ condicionam sua interao com a hidroxila
das pontes de hidrognio. Como consequncia, a fita torna-se positivamente carregada e repele
a base complementar. Sob Ph alcalino, por sua vez, os ons OH- atraem os prtons das bases
nitrogenadas, tornando a fita negativamente carregada e rompendo as pontes de hidrognio. Esse
processo conhecido como desnaturao e tambm se faz por alteraes na temperatura. Tm
a temperatura necessria para a dissoluo de simples fita de metade das fitas da amostra. O
retorno s condies iniciais conhecido como renaturao, podendo esta ser de forma lenta (pelo
casual encontro entre as bases complementares) ou rpida (pela formao de pontes de
hidrognio e retorno conformao 3D).
O DNA tambm apresenta a capacidade de absoro de luz UV, permitindo a quantificao
de cidos nucleicos em uma amostra. A simples fita apresenta uma maior capacidade que a dupla
fita (55mimg/ml > 30 mimg/ml) e esse processo pode contar com a presena de agentes
intercalantes (brometo de etdeo ediamidino-2-phanylindole) que, sob luz UV, intercalam-se entre
as bases nitrogenadas e absorvem a luz UV no processo de espectrofotometria.
CICLO CELULAR
O ciclo celular refere-se s diferentes fases pelas quais uma clula passa em seu ciclo vital.
G1, a mais predominante, a fase de sntese de organelas e protenas. A partir dela, a clula pode
seguir para S (fase de duplicao do DNA) ou, no caso de clulas que no se proliferam, Go, uma
fase quiescente. Aps S, a clula segue para G2, uma fase de preparao para a mitose. Nela,
so produzidos os microtbulos. Em M, por fim, a clula sofre cariocinese e citocinese, dividindo-
se em duas clulas filhas com a mesma quantidade de material gentico que o incio do processo.
A regulao do ciclo se faz por diversos fatores: a interao da clula com fatores mitgenos
induz a traduo de ciclinas que, em associao com CPK, formam um complexo que regula as
diferentes fases do ciclo. A ciclina produzida em gradiente, ou seja, cada estgio possui seu
complexo regulador especfico. Por exemplo: no incio de S, ocorre a formao de um complexo
entre a ciclina D e o CPK 4, inativando a protena Rb, inibidora do processo de replicao. Alm
da ciclina e do CPK, constam fatores de crescimento de alta especificidade afetando uma classe
de clulas como, por exemplo o PDGF Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas e de baixa
especificidade afetando uma clula especfica, e fatores de transcrio, que induzem a
expresso de protenas importantes para o progresso do ciclo. Constam, ainda, fatores que
bloqueiam o ciclo celular, atuantes no ponto de checagem entre G1 e S: diante de um DNA lesado,
o fator p53 ativa o gene p21, o qual interage com a protena estimuladora da diviso celular (cdk2),
interrompendo o ciclo celular. Mutaes neste desencadeiam o cncer. P16, em associao com
p27, associam-se s ciclinas e CDK durante a fase S, impedindo sua atividade indutora; Prb, por
sua vez, inibe a transcrio de genes envolvidos na diferenciao celular e no progresso do ciclo,
bloqueando a entrada em fase S. Por fim, consta a APC (Anaphase Promoting Complex),
responsvel por destruir as coesinas e separar as cromtides. Ela atua na montagem, ativao e
desmontagem do complexo Ciclina-CDK.
Complexos Ciclina-CDK por checkpoint
Entre G2 e M: B-I
Entre M e G1: D-4
Entre G1 e S: E-2
Ataxia Telangiectasia: defeito no ciclo celular.

REPLICAO
A replicao um processo semi-conservativo, ou seja, as fitas mes atuam como molde
para fitas recm-sintetizadas, formando novas molculas de DNA.
Ela inicia-se no ponto de origem, em que o DNA abre-se para a formao de duas forquilhas
de replicao, pelas quais segue a DNA pol por sentidos opostos. O ponto de origem reconhecido
por ORC, ao qual se ligam as protenas CDT1 e CDC6 para o incio da replicao. O processo
inicia-se com a atuao da helicase, responsvel pelo rompimento das pontes de hidrognio. Em
seguida, a tenso formada nas fitas ainda enroladas reduzida pela topoisomerase, Por fim, a
SSB liga-se s novas fitas, impedindo a reunio por PH e a ao de endonucleases. A replicao
do DNA inicia-se por um RNA primer produzido pela DNA primase, uma vez que a DNA pol III
s introduz nucleotdeos a partir de uma hidroxila exposta. A partir dele, DNA pol III adiciona novos
nucleotdeos complementares s sequncias encontradas na fita me, com auxlio da DNA pol I
que, no final da replicao, retira o RNA primer. As DNApol compem um replissomo.
A sntese de DNA em eucariotos se d sempre no sentido 5 > 3. Portanto, em uma das fitas,
ela se faz de forma descontnua. Enquanto no molde 3 >5 a DNA pol III adiciona os nucleotdeos
continuamente a partir de um RNA primer, o molde 3 > 5 segue um sentido contrrio abertura
das duplas fitas, o que exige a insero de mais de um RNA primer. Cada fragmento sintetizado
vai se denominar Fragmento de Okazaki. Aps a formao dos fragmentos, a DNA pol I vai retirar
os RNAs primers e sintetizar cdigos de DNA complementares sequncia dessas pores,
enquanto a DNA ligase vai unir esses fragmentos.
Aps a replicao da cromatina, ocorre a dissociao ou fosforilao de um complexo CDK-
ciclina e subsequente degradao de protenas de ligao impedindo novas replicaes at o
processo de mitose.
TELMEROS
O final da replicao ocorre pelo reconhecimento de telmeros, os quais compem as
extremidades de um cromossomo e so constitudos de sequncias repetitivas, no codificando
protenas. Estes possuem a funo de proteger a clula da ao de endonucleases. No entanto,
sofrem encurtamento conforme a clula realiza suas divises. Quando o encurtamento atinge o
Limite de Hayflick, a clula atinge um estado de quiescncia e cessam as divises celulares. Esse
limite associa-se a suscetibilidade a certas doenas durante a senilidade.
Certas clulas, como clulas-tronco, possuem as enzimas telomerases ativas permitindo a
contnua adio de novas sequncias repetitivas e impedindo a clula de atingir o Limite de
Hayflick. A ativao dessa enzima em clulas comuns caracteriza o cncer.
Progeria o envelhecimento prematuro, relacionado ao encurtamento precoce de telmeros.
GENOMA
Consiste no conjunto completo de informao gentica codificadora e no-codificadora de um
organismo. composto de DNA na forma de cromossomos e protenas associadas (p. ex.
Histonas, ricas em Lisina e Arginina). Esses cromossomos atingem diferentes graus de
compactao (heterocromatina altamente compactada e eucromatina pouco compactada).
Nucleossomo consiste em um par de cada histona enrolado em aproximadamente 146 pares de
bases.
Gene a sequncia ordenada de nucleotdeos, transmissveis como unidade hereditria,
necessria para sntese de um polipeptdeo funcional ou de uma molcula de RNA. Um gene
localiza-se em um locus.
Estrutura de um gene
PROCARITICO: cromossomo circular e plasmdeos (elementos extras). Composto de um
promoter (stio de ligao com RNApol), uma sequncia reguladora e um operon (unidade
operacional com genes estruturais e sequncias reguladoras). No contm ntrons.

EUCARITICO: apresenta um promoter (stio de interao da RNA pol e fatores de controle


de expresso). Essas protenas esto ligadas aos enhancers, sequncias atuantes em clulas
especficas que, ligadas a determinadas protenas, causam uma curvatura no DNA e permitem um
acesso mais fcil das protenas da maquinaria de transcrio a um determinado promotor. O
contato com o promoter promove o incio da transcrio. Alm do promoter, contam xons e ntrons
que, juntos a ele, formam a unidade de transcrio. xons so sequncias transcritas e
traduzidas, enquanto ntrons so sequncias transcritas mas nem sempre traduzidas podem
formar um ncRNA.
Organizao das sequncias que codificam os genes
Existem genes que aparecem uma nica vez em um organismo so denominados os genes
de cpia nica. Constam, ainda, as Famlias gnicas, conjunto de genes provenientes da
duplicao de um gene ancestral albumina, histona, imunoglobulina, por exemplo. Mutaes
podem inativar uma dessas cpias, formando Pseudogenes sequncias similares a um gene
real e funcional mas que no apresentam os elementos necessrios para a sua expresso.
Ademais, constam as sequncias repetitivas, responsveis por codificar histonas, RNAr e RNAt.
Estas podem estar dispostas em tandem (lado a lado) ou randomicamente.
Doena de Gauche: fuso entre gene funcional e seu pseudogene.
Sequncias dispostas em tandem diferenciam-se em
Satlites (5 a 50 bp repetidas em milhes de vezes, prximas a centrmeros e telmeros e
predominantes em Y)
Minissatlites (15 a 100 pb repetidas mil vezes, utilizada em testes de paternidade)
Microssatlites (1 a 5 bp repetidas variadamente, de 50 a 100 vezes, ricas em dinucleotdeos
e utilizadas para estudos populacionais);
Genes de cpia mltipla (5 bp repetidos em 280 vezes, codificam RNAr e RNAt, usados
para medir divergncia evolutiva de organismos);
Telmeros: rica em guanina e citocina em cada uma das fitas.
Centrmeros: monmeros de 177 pb de DNAs satlites.
A importncia dessas sequncias a facilidade de deteco, o que justifica sua ampla
funcionalidade.
Em relao s sequncias repetidas randomicamente, constam os elementos genticos
mveis, os quais movimentam-se pelo cromossomo por recombinao homloga. Essa
movimentao faz-se por transposio indireta: forma-se um RNA hbrido, feito por transcriptase
reversa, o qual codificado em DNA e reintegrado a outro ponto do cromossomo
(Retrotransposons); ou transposio direta, em que o segmento de DNA desligado e religado
em outro ponto do genoma.
Retrotransposons podem ser semelhantes a retrovrus por apresentarem o LTR (Longas
Sequncias de Repetio) caractersticas de retrovrus que codificam a enzima transcriptase
reversa, sem, no entanto, apresentarem as sequncias gnicas que codificam as partculas virais.
Podem, ainda, ser LINES elementos longos intercalantes, codificando, por exemplo, fatores
de coagulao ou SINES elementos curtos intercalares codificando, por exemplo, o elemento
Alu, associado a doenas hereditrias.
A movimentao do genoma promove a recombinao, interrupo de genes ou novas
localizaes de genes no genoma, permitindo a sua EVOLUO.

GENOMA MITOCONDRIAL
Consiste em um DNA circular sem histonas ou ntrons, herana materna e de cdigo gentico
diferente do universal. No tem mecanismo de reparo eficiente.
Apesar de ter seu prprio DNA, a mitocndria altamente dependente de genes nucleares
para ser uma organela funcional.
TRANSCRIO
a sntese de um RNA simples fita a partir de uma fita de DNA.
RNA existem de vrias formas:

RNAhn um RNAm imaturo.


RNAm constitui a informao gentica responsvel para as sequncias de AA formadas.
RNAr compe os ribossomos.
RNAt identifica e transporta os aminocidos.
RNAsn atua no processamento do RNAm.
RNAsno atua no processamento do RNAr.
MicroRNA controla a expresso gnica

Consiste em um processo catalisado por RNA polimerases. As principais so:


RNA pol 1> produz RNAr
RNA pol II > produz RNAhn. sensvel a alfa-amantina (componente de antibitico),
acudina e actinomicina (agente intercalante). controlada pela sequnca de DNA e por
protenas (fatores de transcrio basais, ativadores e repressores).
RNA pol III > produz RNAr e RNAt

MECANISMO
A transcrio inicia-se com o reconhecimento de um promoter. Este apresenta o TATA box,
dada a sua composio de timinas e adeninas. Constam, ainda, fatores de transcrio,
responsveis por induzir o reconhecimento de promoter pela RNA pol II. Ademais, existem os
enhancers ou silenciadores
TATABOX, unido a TFIID (Fator de Transcrio) e uma de suas subunidades TBP, TBP liga-
se, ainda, a TFIIB, responsvel por ligar a RNA pol ao complexo. O complexo finaliza-se com a
ligao com TFIIF, TFIIH e TFIIE, formando o Complexo Basal de Transcrio.
Em seguida, inicia-se o processo de elongao: helicase quebra as PH, topoisomerase reduz
a tenso das fitas. O terminal C da RNA pol-II fosforilado e a enzima caminha pela fita de DNA,
produzindo uma sequncia de cidos ribonucleicos (hnRNA). Ao encontrar uma sequncia
consenso no gene, tica em timinas, o processo cessado. Est formado um RNAm imaturo, que
sofrer processamento.

FORMAO DE RNAm
Logo no incio da transcrio, a extremidade 5 sofre ao da guaniltransferase, formando um
cap 7-metil-guanosinatrifosfato. Isso protege a fita contra ataque de nucleases, estabiliza-a e
auxilia na ligao do RNAm com o ribossomo durante a traduo. Na unidade de transcrio,
ocorre a edio do RNAm como, por exemplo, a desaminao, formando uracila de citosina e
inosina de adenina. A Apolipoprotena B100, do fgado, forma a Apolipoprotena 828 do intestino.
Por fim, ocorre o splicing alternativo, caracterizado pela incluso ou excluso de xons e reteno
de ntrons. A alfa-tropomiosina sofre diferentes tipos de splicing conforme o tecido (msculo liso,
msculo esqueltico, msculo cardaco, crebro). Na extremidade 3 UTR, ocorre a adio da
cauda poli-adenina pela enzima ribonuclease poliadenilatociclase, permitindo a transio do
RNAm do ncleo para o citoplasma para posterior traduo.
REGULAO
1. Epigentica
Processos epigenticos podem ocorrer em dois lugares: na cromatina, a partir de uma
metilao com consequente silenciamento; e nas histonas, por acetilao e metilao.
A metilao de DNA ocorre na posio 5 do anel da citosina e nos nucleotdeos CpG,
localizados nas regies promotoras de genes. Esse processo interfere diretamente, formando uma
barreira fsica no DNA que impede o contato com fatores de transcrio, e indiretamente, atraindo
protenas que recrutam correpressores e desacetilases de histonas, inativando a cromatina ao
redor do gene e desligando-o.
Histonas so protenas associadas ao DNA nuclear. Modificaes nestas regulam as funes
da cromatina ao impedir a atuao de enzimas de transcrio em trans ou pelo recrutamento de
protenas que reconhecem essas alteraes. A acetilao das histonas H3 e H4, por exemplo,
aumenta a acessibilidade da maquinaria de transcrio. Esse sinal removido pela ao das
desacetilases de histonas (HDAC), que promovem a condensao da cromatina. A metilao de
histonas, por sua vez, permite interao com protenas repressoras, desacetilando as histonas,
compactando a cromatina e causando o silenciamento gnico. Concluindo: ACETILAO ATIVA,
METILAO INATIVA.
Cromatina frouxa (acesso a fatores de transcrio e RNA pol)

HAT
(histona
HDAC
acetiltransferase)
(histona desacetilase)

Cromatina compactada (acesso dificultado a sinais


de transcrio) = SILENCIAMENTO

Impriting genmico o processo de silenciamento natural de um dos alelos obtidos de nosso


pai ou me atravs da adio de radicais metil durante a formao de clulas reprodutoras
parentais. O alelo em questo ainda transmitido para a gerao seguinte mas permanece inativo.

O silenciamento gnico determina padres especficos nos tecidos e em estado de doena,


ocorrendo geralmente em genes que regulam transcrio, crescimento, metabolismo,
diferenciao e oncognese. Pode ser causado por estressores ambientais (microorganismos,
vrus e toxinas) e herdados na forma de imprinting.

2. Transcricional
A regulao durante o processo transcritivo faz-se por moduladores transcricionas.
Estes agem sobre sequncias regulatrias (os promoters e enhancers) e fatores de
transcrio (em especial relacionados ao RNA pol II). Esses moduladores so de
composio proteica- divididos em ativadores e repressores. Trata-se de um comit de
protenas, essenciais para a expresso de um determinado gene e atuando em resposta
a uma dada condio, no tempo certo e nvel requerido.

Dentre os ativadores, constam: os gerais, expressos em uma variedade de tecidos, os


coativadores, mediando a interao proteica entre os ativadores, e os tecido-
especficos.

Como exemplo, consta o receptor de glicocorticoide que, ligado ao DNA, forma um


complexo com o hormnio esteroide e aumenta a expresso de genes nas clulas do
fgado.

3. Regulao ps-transcricional
Caracterizada por microRNAs ou RNAs de transferncia, localizados em ntrons das
UTRs e fora delas em todos os cromossomos, com exceo de Y. Estes ligam-se ao
RNAm, recrutando exo e endonucleases ou bloqueando a sua traduo.
Outras funes do microRNA: localiza-se em regies relacionadas ao cncer, so
superexpressos em portadores de doena coronariana e hipoexpressos em portadores
de hipertrofia cardaca e tm papel na inativao do cromossomo X ou Corpsculo de
Barr.
TRADUO

Trata-se da codificao de um polipeptdeo a partir da sequncia de um RNAm.


As enzimas atuantes so: RNAr, formador de ribossomos; RNAt, o qual reconhece e
transporta aminocidos aos ribossomos; RNAm, o qual especifica a sequncia correta
de aminocidos na protena.
A converso de RNA em protena faz-se possvel por conta do cdigo gentico universal.
Tal cdigo redundante, uma vez que um aminocido pode ser especificado por mais de
um cdon por degenerao na 3 base da trinca.
A sequncia de uma molcula de mRNA lida de 3 em 3 nucleotdeos, de uma maneira
no sobreposta. Ou seja, cada trinca de nucleotdeos, tambm chamada de cdon, lida
uma nica vez.

Pseudouniversalidade
Permite que genes de uma espcie possam ser transcritos e traduzidos em outra
transgnicos. No entanto, nem todo os sistemas biolgicos compartilham do mesmo
cdigo universal.
Alguns apresentam um cdon preferencial: por exemplo, a alanina preferencialmente
codificada em humanos por GCC, enquanto em Candida albicans o cdon preferencial
o GUG.

Componentes
Ribossomo: composto de uma subunidade maior, onde se localizam os stios de ligao
do aminocido Aminoacil, Peptidil e Exit; e uma subunidade menor, onde se localiza o
stio de ligao com RNAm.

RNAt: apresenta formato de trevo, com brao de anticdon. Neste, consta a posio de
Wobble, terceira base do cordo, a qual, por ser varivel, permite o pareamento do RNAt
com mais de um cdon de RNAm. Um eucarioto apresenta de 45 a 50 RNAt diferentes.

Mecanismo
Primeiramente, a subunidade 40S do ribossomo liga-se a fatores de iniciao e RNAt, associando-
se ao cap 7-metilguanosina do RNAm, formando o Complexo de Iniciao. Uma vez conectado
ao RNAm, 40S e RNAt-metionina percorrem at encontrarem o cdon de iniciao AUG (mas
pode ser UUG e CUG). A partir de ento, os fatores de iniciao dissociam-se da fita e 60S une-
se a 40S-RNAt-Metionina, formando a partcula ribossomal.
Inicia-se, ento a elongao. O RNAt est no stio P, enquanto um novo RNAt liga-se ao stio A,
produzindo um novo aminocido. O RNAt inicial libera a metionina, o ribossomo move-se e
metionina forma uma ligao peptdica com o novo aminocido no stio P. O stio A torna-se
desocupado e pronto para receber um novo RNAt, enquanto o RNAt dissocia-se do RNAm no stio
E. O processo segue at o reconhecimento de um cdon de terminao no stio A (UAA, UAG,
UGA). Um fator de liberao ocupa o stio A, induzindo a dissociao entre o polipeptdeo e o
RNAt. O ribossomo tambm torna-se fragmentado e est pronto para um novo processo de
traduo.
40S + fatores de + 7cap = COMPLEXO DE Dissociao FT e unio
Reconhecimento AUG
iniciao e RNAt - INICIAO 40S 60S

Translocao do
RNAt novssimo no stio
ribossoo. RNAt-Met no
RNAt-Met no stio P RNAt novo no stio A A, RNAt inicial se
stio E, libera Met pata
dissocia
RNAt novo no stio P

Reconhecimento cdon Fator de Terminao Polipeptdio dissocia-se


Ciclo se repete
de terminao ocupa stio A do stio P

Subunidades de
ribossomo se separam,
pronto para novo ciclo

AO DE ANTIBITICOS

INICIAO ELONGAO
Estreptomicina RNAt mimetizado
(Puromicina)

Ligao RNAt no stio A


(Tetraciclina)
Transferncia de AA para
stio P (Clotranfenicol,
Cicloheximida)
Regulao Translocao do cdon de A de traduo
para P (Eritromicina)
a. Protenas repressoras. Exemplo: baixa concentrao de Fe induz interao entre IRE-
BP a 5 URT, inibindo a traduo da ferritina.
b. Modulao da atividade de fatores iniciadores. Regulao global do fator iniciador elF-
2, o qual carrega aminoacil-RNAt para a subunidade 40S do ribossomo.
c. Degradao controlada via Ubiquitina-Proteassoma: protena clivada liga-se a
ubiquitina, atraindo proteassoma, o qual recruta proteases para a obteno de peptdeos
e Aa.

Modificaes proteicas
Dividem-se em traducionais e ps-traducionais. As traducionais incluem a retirada do
aminocido metionina e adio de um grupo metil a importncia funcional desse
processo no reconhecida. As ps traducionais ocorrem no RE e Complexo de Golgi e
so:
Sumoilao: ligao covalente de protenas parte da famlia SUMO (Modificadores
Pequenos Semelhantes Ubiquitina) a resduos de Lys em protenas-alvo, gerando uma
cascata enzimtica anloga de ubiquitinao.
Glicosilao: adio de um carboidrato protena, comum em protenas que se integraro
membrana.
Lipidao: adio de um lipdio protena, tambm associada protenas de membrana.
ncoras de GP1 so lipdios que permitem a ligao de uma protena parte interna da
membrana.
Fosforilao: adio de um grupo fosfato protena. A fosforilao de um canal proteico
causa uma rotao de 180 e os ons entram em contato com o receptor no meio externo.
A desfosforilao, causada por um excesso de enzimas ligadas ao receptor, causa o
retorno do canal para o meio interno.
Metilao de histonas: aumento a condensao da cromatina, impedindo a interao com
fatores de transcrio. Causa o silenciamento do gene.
Protelise: clivagem da protena, ativando-a. Comum em grnulos de zimognio.

Quando penetra no retculo endoplasmtico, ocorre, ainda, a perda da sequncia sinal.

Enovelamento de protenas estruturas


A estrutura primria de uma protena se d pela ligao peptdica entre os aminocidos e
assume uma conformao linear. A estrutura secundria caracteriza a conformao local
de algumas regies do polipeptdeo, estabilizadas por pontes de hidrognio, podendo ser
na forma de alfa-hlice (rotaes em torno de um eixo) ou folha beta (formao em zig
zag paralela ou anti-paralela). A estrutura terciria, por fim, garante a conformao
tridimensional da protena, sendo estabilizada por pontes de hidrognio, ligaes
eletrostticas, interaes hidrofbicas e ligaes dissulfeto (interao exclusiva a Cys). A
estrutura quartenria, por sua vez, ocorre entre polipeptdeos.

Chaperonas so protenas que auxiliam no processo de enovelamento. Uma vez


interagindo com o ATP, estas, associadas ao polipeptdeo recm-formado, interagem
entre si, formando o enovelamento da protena. Tambm atuam no transporte (so
classificadas segundo a organela onde se inserem) e na estabilizao da conformao da
protena. Exemplo: hsp 70, ligando-se a aminocidos hidrofbicos antes destes deixarem
o ribossoma.

Placas amiloide: so fibras rgidas no ramificadas, caracterizadas por estruturas


tercirias e quartenrias no usuais. Quanto maior a quantidade de folhas beta, mais
solvel a placa. So caractersticas em casos de Alzheimer, forma adulta de diabetes,
cncer, infeces crnicas e envelhecimento.
Colgeno. Apresenta subtipos. O tipo I apresenta alta concentrao de Gli, hidroxiPro e
hidroxiLis. Sndrome de Ehler-Dahnos a diminuio de colgeno tipo I pela incapacidade
de clivar o procolgeno em colgeno. Causa pele e vasos frgeis e juntas supermveis.
Osteogenese imperfecta a mutao em resduos de Gli, inibindo a formao da fibra. O
tipo I menor mortal (exceto pelo risco de ataque cardaco e infarto) e tipo II causa fraturas
espontneas aps nascimento e a no-formao de ossos longos, sendo letal.

MUTAO
So alteraes na sequncia ou estrutura do DNA.
Crossing-over no mutao! a recombinao entre cromossomos homlogos.

Podem ser espontneas, provenientes de processos metablicos normais (erros na


replicao de DNA, ao de vrus e transposons) ou induzidas, resultantes de fatores
ambientais e agentes mutagnicos.

Em clulas germinativas, so transmitidas de gerao a gerao.


Em clulas somticas, causam doenas variadas.

1. Mutao em genes individuais


a. Em nvel de DNA
TRANSIO: troca entre pricas e troca entre piramdicas.
TRANSVERSO: troca entre prica e piramdica,
INSERO/DELEO: perda ou ganho de uma ou mais bases de DNA. Comum
em sequncias repetitivas. Pode ser causada por:
Slippage entre fita nascente e parental.
Recombinao desigual entre cromtides irms.
Ao de agentes intercalantes de DNA.
b. Em nvel de protena
I. Substituio silenciona ou sinnima: base nucleotdica da trinca muda
mas no h modificao de DNA. Exemplo: TGT e TGC ambas codificam
As.
II. Sentido trocado: modificao de um nico AA.
Conservativa: cdon especifica AA quimicamente similar ao trocado.
Exemplo: AAA e AGA (ambos so bsicos).
No-conservativa: cdon especifica AA quimicamente diferente.
Exemplo: TTT e TCT (um apolar, outro polar).
III. Sem sentido: mutao produz terminao precoce. Mudana de
cdon convencional para stop cdon.
IV. Indel: terminao precoce ou mudana de fase de leitura por insero ou
deleo.
V. Pontual em regio aleatria: altera a transcrio dos genes. Alterao
no stio de ligao de protena regulatria (TATAbox, RNA pol, fatores de
transcrio) leva ao no reconhecimento e consequente no-ligao a
ele. Causada por alterao no momento da transcrio, quantidade do
transcrito, alterao no stio o promotor, sequncia e estabilidade do
RNAm e alterao no stio de splicing.

Efeitos fenotpicos da mutao: perda ou ganho de funo, hipo ou


hipermrfico (reduzida ou aumentada).

MUTAES ESPONTNEAS

1. Erros durante a replicao do DNA: mal pareamento de bases e


expanso de sequncias repetitivas.
a. Tautmeros: posio diferente de tomos e ligaes formam
compostos instveis, no detectados pela maquinaria de replicao.
Isso resulta em mal pareamento, causando distores na dupla
hlice.
Exemplos:
ENOL IMINO
Timina forma... Citosina
Guanina forma... Adenina
b. Expanso e deleo de sequncias de DNA replicado = Replication
slippage
Pareamento inadequado entre fita nascente e parental causa
delees e inseres ps-replicao perpetuados nas prximas
geraes.
Expanso de trincas repetitivas: Distrofia miotnica, Doena do X
Frgil e Doena de Huntington. Podem conferir nova funo
protena expandida e afetar exportao e transporte do Mrna.

2. Adio de gua:
Desaminao: hidrlise de bases = perda do agrupamento amino. P.ex.,
citosina sem amina vira uracila).
Ataque hidroltico = depurinao e depirimidinao. Causa quebra de
ligao glicosdica entre bases e acar. Durante a replicao, DNA pol
adiciona uma base qualquer.
3. Oxidao de bases: espcies reativas de oxignio causam interrupo
ou quebra nas fitas de DNA.
Leve formao de 8-oxoG > pareamento com Adenina.
Grave quebra de ligaes fosfodister.
4. Alquilao das bases: adio de grupos etil ou metil etilao ou
metilao por ao de transferases (etilmetanosulfato, p.ex.)
Adio de etil a citosinas no impede o pareamento, apenas inibe a
transcrio.

AGENTES MUTAGNICOS
Provocam substituio, alterao e danos irreversveis por mal pareamento, alterao da
proporo qumica, impossibilidade de pareamento.
Anlogos de bases. Exemplos: 5-bromo-uracil (anlogo a T); 2-aminopurina. Na forma enol,
pareiam com guanina, causando mal-pareamento.
Alquilantes: gs mostarda, etilmetanosulfonato.
Desaminantes: HNO2
Oxidantes: HClO, Cl2, Br, I, perxido
Agentes intercalantes: brometo de etdeo, acridina laranja. Causam distores na dupla hlice,
mudando a fase de leitura ou interrompendo precocemente a traduo.
Radiao ionizante: raios X, gama, csmicos. Fazem ons reativos de molculas instveis,
causando mutao pontual, quebra de DNA, translocaes e delees.
Radiao UV: formam anel de ciclobutano entre T e C dmeros de piramidina. Ligaes
covalentes entre T e C adjacentes tornam-se fotoprodutos reativos.
Calor: causa depurinao e quebra de DNA.

A maior parte das drogas de cura para o cncer causam danos ao DNA:
Cytoscan: alquilante; Platinol: causa crosslinks; Novantrione: inibe topoisomerase para replicao
e transcrio.

MECANISMOS DE REPARO
Dependem de tipo, idade e ambiente extracelular.
Incapacidade de reparar danos causa: senescncia (estado irreversvel de dormncia); suicdio
celular por apoptose ou morte celular programada; diviso celular desregulada (clulas
cancerosas).

1. Reparo de mal pareamento do DNA


Reconhecimento da base mal pareada > determinao de quais so as incorretas >
remoo e sntese de repato.
Enzimas: mutS, mutL, mutH (reconhecem e retiram base incorreta), maquinaria de
replicao (pol III, repara).
Defeito: cncer de colo no-poliposo, nucleotdeos ao redor podem tambm ser retirados.

2. Reparo por exciso de base: corrige bases modificadas quimicamente ou por oxidao
(exemplo: Uracila, Hypoxanthine, 8-oxoG)
Mecanismo: Reconhecimendo de base modificada > DNA glicosilase hidrolisa a ligao
> Base perdida > AP endonuclease reconhece stio apiramdico ou apurnico e cliva
ligaes fosfodister em regies adjacentes > DNA polimerase I insere nova base >
Integridade com ligao fosfodister corrigida pela DNA-ligase

3. Reparo por quebra unifilamentar: causada por radiao UV.


Enzima PARD reconhece e quebra > pontas so processadas por PNPK, PNE1 e pol beta
> sntese de lacuna por pol beta > Ligase I ou III religa os fragmentos (depende da
extenso).
4. Reparo por exciso de nucleotdeos (NER): danos por UV, leses que causam
distores na dupla-hlice.
Mecanismo: XPB, XPD percorrem a hlice e XPA reconhece a leso > Local do dano
desnaturado e endonucleases fazem a dupla inciso na cadeia > DNA polimerases
removem oligonucleotdeo com leso > Ressntese do DNA por DNA polimerase >
Religao da extremidade 5 pela DNA ligase.
Via curta: DNA polimerase remove e repe o nucleotdeo.
Via longa: DNA polimerase beta desloca uma srie de nucleotdeos e outras polimerases
reparam o espao.
Maquinaria sofre mutao: Xeroderma pigmentosum, Sndrome de Cockayne.
Tipos de maquinaria:
a) Global: reparo de stios transcricionalmente ativos ou inativos. Complexo de stio
ABC. Reconhecimento de dmeros de piramidina > atrao de protenas que retiram
a leso auxlio de helicase > sntese de reparo por DNA polimerase I > ao de
ligases
b) Acoplado transcrio: ao orquestrada por TFIIH e RNA pol III. Reparossomo,
complexo de 20 protenas, reconhece a leso, remove aprox.. 30 nt ao redor e
preenche espao usando fita complementar como molde
Defeito no reconhecimento da leso causado por mutao no gene XP: Xeroderma
pigmentosum.

5. Reparo direto
A exposio do DNA raios UV forma dmeros de piramidina, os quais no se encaixam
na dupla-hlice, impedindo a replicao e expresso gnica.
Mecanismo: DNA fotoliase liga-se ao dmero e desfaz o anel, refazendo as bases
piramdicas individuais (Fotorreativao)
MetilguaninaDNAmetiltransferase remove metil para cistena ativa, tornando-a inativa.
(Bases alquiladas).

6. Reparo de quebra bifilamentar: para danos mais graves. So formas mais grosseiras
de reparao, decorrentes aps a replicao.
Forquilha de replicao encontra leso, parando no ponto de quebra > recombinao
homloga entre dois duplexes de DNA ou juno de pontas no-homlogas.
a. Reparo por recombinao homloga.
Quinases, sensores de dano, nucleases e recombinases buscam homologia > DNA
pol sintetiza em cromossomo homlogo > Junes Holiday so formadas, transferindo
a nova sequncia para o stio de quebra do cromossomo lesado.
b. Juno de pontas no homlogas.
Ku70/80 associam-se s pontas > Quinases e nucleases so recrutadas para
justaposio e aparo > DNA ligase reintegra-as.
No um reparo adequado. Realizado por clulas tumorais para continuarem se
replicando.
7. Reparo por transleso: ocorre em stios apurnicos ou dmeros de piramidina.
DNA pol III encontra dmero de piramidina, cessa a replicao e recruta polimerases
desleixadas (pol IV e V em pro, pol N e t em eu) que inserem bases quaisquer > continua
a replicao e proliferao (maquinaria de replicao volta a atuar jusante do stio de
leso)
No h reparo. Menos eficiente, mais grosseira, atua quando h muita leso.

DOENAS ASSOCIADAS
Exciso de nucleotdeos: Xeroderma pigmentosum (mutao em helicase e
endonuclease)
Radiao UV em NA: Sndrome de Cockayne
Mutao em helicase: Sndrome de Werner e Bloom.
Cncer colorretal no-polipose hereditrio: Mutaes em genes de reparo de mal
pareamento.

Anemia falciforme: doena recessiva causada por substituio de um nico nucleotdeo


no gene da beta-hemoglobina. Talassemia a ausncia da beta-hemoglobina.
Mutaes espontneas so mais comuns em sequncias repetitivas de DNA.
Mutagnese stio-especfica uma tcnica PCR que utiliza primers com desparamento
intencionais de modo a ampliar e criar mutaes especficas.
Distrbios de Pron: Insnia Familiar Fatal e Creutzfeldt-Jakob