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Resumen
Artculo de investigacin
Abstract
In the present study the growth of two species of microalgae Chaetoceros gracilis and Isochrysis
galbana, with two types of agricultural fertilizers, is evaluated in laboratory conditions, in order to
determine the cell density (cells/mL), specific growth rate (divisions/day) and duplication rate (divisions/
day) of each species. Bioassays were conducted in 20 mL test tubes and 500 mL and 1000 mL bottles,
using the culture medium Guillard F/2 as control (T1) and Complefol agricultural fertilizers - Complefol
5 g/L (T2) solution and Complefol 10 g/L (T3) solution, and Stimufol - Stimufol solution 5 g/L (T4)
and 10 g/L (T5) solution, each with three replications. During the study, no significant differences
were observed in cell densities, nor in the specific growth rate and doubling time in both cultures of
microalgae, showing that higher cell densities, specific growth rate and doubling rate were obtained
in the Guillard/F2 medium, followed by Stimufol, with lowest values in Complefol, which shows that
agricultural fertilizers are a suitable alternative for use in the cultivation of microalgae, particularly
Stimufol, which achieves higher yields than Complefol.
Key words: Cell density, culture media, microalgae, specific growth rate, doubling time
Revista
44 N 16, julio-diciembre 2016, 44 - 55
ISSN: 1390-6895 e-ISSN: 2477-8982
Crecimiento de las microalgas Chaetoceros gracilis e Isochrysis
galbana con fertilizantes agrcolas, en laboratorio
Pesca
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N 16, julio-diciembre 2016, 44 - 55 45
ISSN: 1390-6895 e-ISSN: 2477-8982
Pesca Panta Vlez Rodolfo Patricio, Macay Garca Ana Gabriela,
Moncayo Zambrano Ermen Miguel, Juan Carlos Vlez Chica
Al combinar factores de estudio: especie y los Los medios de cultivo utilizados en este
tres tipos de fertilizantes se obtuvo 5 tratamientos experimento simple fueron el medio Guillard F/2
por cada especie (Tabla 2). como control y los fertilizantes agrcolas Stimufol
y Complefol con dos tratamientos cada uno: 5 g/L
Tabla 2. Tratamientos utilizados en el cultivo de y 10 g/L, cada uno por triplicado.
Chaetoceros gracilis e Isochrysis galbana en
laboratorio. Cada experimento se inici en tubos de ensayo
N Chaetoceros Isochrysis de 20 mL con tapa rosca, emplendose 30
Tratamiento gracilis galbana tubos durante toda la fase de cultivo. Una vez
T1 Medio Medio sembrados los tubos se pasaron despus de tres
Guillard/F2 Guillard/F2 das a botellas de 500 mL (30); luego de tres das
ms pasaron a botellas de 1 000 mL de volumen
T2 Solucin Solucin
Complefol 5 g/L Complefol 5 g/L til para el cultivo (30), en una distribucin
aleatoria.
T3 Solucin Solucin
Complefol 10 g/L Complefol 10 g/L Las microalgas Chaetoceros gracilis e Isochrysis
T4 Solucin Solucin galbana, adquiridas en el Centro Nacional
Stimufol 5 g/L Stimufol 5 g/L de Acuicultura e Investigaciones Marinas
T5 Solucin Solucin (CENAIM), fueron sembradas en medio Guillard/
Stimufol 10 g/L Stimufol 10 g/L F2 para obtener densidades celulares aptas
para el cultivo. Utilizando una micropipeta
estril previamente flameada en el mechero, se
El medio Guillard/F2 sirvi de control, y de transfirieron 3 mL del inculo de cada especie
cada uno de los fertilizantes se prepararon 2 de microalga a las unidades experimentales
soluciones de 5 y 10 gramos disueltas en un litro respectivas (30 tubos de ensayo de 20 mL)
de agua destilada. Luego se adicion 1 mL/L a agitadas y expuestas a la luz por tres das para
cada unidad experimental. posteriormente escalar el cultivo a los 500 mL
(30) repitiendo el procedimiento anterior hasta
Tipo de diseo
llegar a botellas de 1 000 mL (30).
En esta investigacin el diseo fue aleatorizado Densidad celular
(DCA) con tres repeticiones por cada tratamiento
dando un total de quince unidades experimentales La densidad celular (clulas/mL) fue evaluada
por cada especie de microalgas (Tabla 3). a diario en todos los tratamientos, empleando
Tabla 3. Nmeros de repeticiones en los diferentes tratamientos en el cultivo de Chaetoceros gracilis e Isochrysis
galbana en laboratorio
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galbana con fertilizantes agrcolas, en laboratorio
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Tabla 4. Densidad celular promedio (cel/mL) de Chaetoceros gracilis e Isochrysis galbana en los diferentes
tratamientos en el cultivo.
* Letras iguales no muestran diferencias significativas entre los tratamientos (P > 0.05)
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Chaetoceros gracilis
8000000
7000000
Densidad celular (cel/mL)
6000000
5000000
4000000 a
3000000
2000000 b
b b
1000000 b
0
Medio F Complefol Complefol Stimufol Stimufol
5 g 10g 5 g 10 g
Figura 1. Densidad celular promedio (cel/mL) de Chaetoceros gracilis en los diferentes tratamientos del cultivo.
Isochrysis galbana
9000000
8000000
Densidad celular (cel/mL)
7000000
6000000
5000000 a ab
4000000
3000000 bc bc
2000000 c b
b
1000000
0
Medio F Complefol Complefol Stimufol Stimufol
5 g 10g 5 g 10 g
Figura 2. Densidad celular promedio (cel/mL) de Isochrysis galbana en los diferentes tratamientos del cultivo.
1.00E+07
Chaetoceros gracilis (cel/mL)
9.00E+06
8.00E+06
7.00E+06
6.00E+06
5.00E+06
4.00E+06
3.00E+06
2.00E+06
1.00E+06
0.00E+00
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Das de cultivo
Figura 3. Densidad celular (cel/mL) de Chaetoceros gracilis en los diferentes tratamientos del cultivo.
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galbana con fertilizantes agrcolas, en laboratorio
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Das de cultivo
Figura 4. Densidad celular (Cel/mL) de Isochrysis galbana en los diferentes tratamientos del cultivo.
Chaetoceros gracilis
Tasas de Crecimiento Especfico ()
(divisiones/da)
Tratamientos
mxima promedio acumulada
* Letras iguales no muestran diferencias significativas entre los tratamientos (P > 0.05)
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Chaetoceros gracilis
2
a a
a a
1 a
-1
-2
-3
Medio F Complefol Complefol Stimufol Stimufol
5 g 10 g 5 g 10 g
Figura 5. Tasa de Crecimiento especfico promedio (divisiones/da) de Chaetoceros gracilis en los diferentes
tratamientos del cultivo.
8,00
Tasa Especfica de Crecimiento ()
6,00
4,00
2,00
0,00
-2,00
-4,00
Das de cultivo
Chaetoceros gracilis
Figura 6. Tasa de Crecimiento especfico (divisiones/da) de Chaetoceros gracilis en los diferentes tratamientos
del cultivo
El valor ms alto de las tasas de crecimiento para el tratamiento 2 (solucin Complefol 5 g/L).
promedio () en el cultivo de I. galbana fue Los valores mximos de la tasa de crecimiento
de 0.67 0.42 divisiones/da obtenido con el correspondieron al tratamiento 4 (solucin
medio de cultivo Guillard/F2 y la ms baja fue Stimufol 5 g/L) con 1.85 1.38 divisiones/da
0.32 0.52 divisiones/da con el tratamiento y los menores en el tratamiento 2 (solucin
2 (solucin Complefol 5 g/L). La tasa de Complefol 5 g/L) con 1.46 1.56 divisiones/da
crecimiento acumulada en todo el cultivo fue (Tabla 6 y Figura 7).
de 6.05 5.53 divisiones/da para el medio
Guillard/F2, seguida de 5.10 4.55 divisiones/ En la figura 8 se presenta la tasa de crecimiento
da para el tratamiento 5 (solucin Stimufol 10 especfico diario (divisiones/da) de I. galbana en
g/L) y el mnimo de 2.98 4.47 divisiones/da los diferentes tratamientos de cultivo.
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Tabla 6. Tasa de Crecimiento Especfico promedio, mxima y acumulada (divisiones/da) de Isochrysis galbana
en los diferentes tratamientos del cultivo.
Isochrysis galbana
Tasas de Crecimiento Especfico ()
Tratamientos (divisiones/da)
mxima promedio acumulada
Medio Guillard/F2 1.77 4.49 a 0.67 0.42 a 6.05 5.53 a
Solucin Complefol 5 g/L 1.46 1.56 a 0.32 0.52 a 2.98 4.47 a
Solucin Complefol 10 g/L 1.79 1.06 a
0.46 0.48 a
4.11 4.47 a
Solucin Stimufol 5 g/L 1.85 1.38 a 0.45 0.41 a 4.07 3.50 a
Solucin Stimufol 10 g/L 1.66 -0.48 a 0.57 0.33 a 5.10 4.55 a
* Letras iguales no muestran diferencias significativas entre los tratamientos (P > 0.05)
Isochrysis galbana
Tasa de Crecimiento Especfica (divisiones/da)
2
a a a a a
1
-1
-2
-3
Medio F Complefol Complefol Stimufol Stimufol
5 g 10 g 5 g 10 g
Figura 7. Tasa de Crecimiento especfico promedio (divisiones/da) de Isochrysis galbana en los diferentes
tratamientos del cultivo.
8.00
Tasa Especfica de Crecimiento ()
6.00
4.00
2.00
0.00
-2.00
-4.00
Das de cultivo
Isochrysis galbana
Figura 8. Tasa de Crecimiento especfico (divisiones/da) de Isochrysis galbana en los diferentes tratamientos
del cultivo.
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Tabla 7. Tiempo de duplicacin (Ln (2)/) (da) de Chaetoceros gracilis e Isochrysis galbana en los diferentes
tratamientos del cultivo.
Tiempo de duplicacin (Ln(2)/)
Tratamientos (da)
Chaetoceros gracilis Isochrysis galbana
Medio Guillard/F2 1.05 1.16 a 1.03 1.13 a
Solucin Complefol 5 g/L 2.50 1.40 a 2.09 1.40 a
Solucin Complefol 10 g/L 1.60 1.66 a 1.52 1.40 a
Solucin Stimufol 5 g/L 1.79 1.60 a 1.53 1.78 a
Solucin Stimufol 10 g/L 1.58 1.19 a 1.22 1.37 a
* Letras iguales no muestran diferencias significativas entre los tratamientos (P > 0.05)
5.00
4.00
Tiempo de Duplicacin (da)
3.00
2.00 a
1.00 a a a
a
0.00
Medio F Complefol Complefol Stimufol Stimufol
5 g 10 g 5 g 10 g
-1.00
Chaetoceros gracilis
Figura 9. Tiempo de duplicacin (da) de Chaetoceros gracilis en los diferentes tratamientos del cultivo.
5.00
4.00
Tiempo de Duplicacin (da)
3.00
2.00 a
a a
1.00 a a
0.00
Medio F Complefol Complefol Stimufol Stimufol
5 g 10 g 5 g 10 g
-1.00
Isochrysis galbana
Figura 10. Tiempo de duplicacin (da) de Isochrysis galbana en los diferentes tratamientos del cultivo.
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Chen (1991), Sato (1991) y Voltolina et al. El uso de fertilizantes agrcolas en la acuicultura
(1991) determinaron que el medio Guillard/F2 es una fuente nutritiva adecuada (Brito et
generalmente produce densidades por arriba al., 2013), y es una alternativa viable para el
de otros medios, lo cual fue confirmado en este mantenimiento de cepas y la obtencin de
estudio al obtener mayores densidades celulares inculos para volmenes mayores de produccin
en comparacin con los fertilizantes agrcolas. de microalgas (Valenzuela-Espinoza et al., 2005)
Asimismo, en la tasa de crecimiento especfica debido a que son muchos ms econmicos en
y el tiempo de duplicacin en ambos cultivos, relacin al medio Guillard/F2.
no existieron diferencias significativas entre los
tratamientos (P>0,05). Los fertilizantes agrcolas reflejaron ser fuentes
nutritivas, adecuadas y baratas para la produccin
El crecimiento de las microalgas se lleva a cabo masiva de estas dos especies de microalgas.
durante el periodo de luz debido a que a travs
de la fotosntesis se forma material orgnico y Conclusiones
energa suficiente para este proceso, mientras
que la divisin celular se da en el periodo de Los fertilizantes agrcolas son fuentes nutritivas
oscuridad. Sin embargo, en las diatomeas la adecuadas para la produccin masiva de
divisin celular tambin se realiza en luz continua microalgas, y son ms econmicos en relacin a
(Lpez-Elas et al., 2009). los medios tradicionales de cultivo acucola.
Los mayores rendimientos celulares del Se observ diferencias significativas entre los
fertilizante Stimufol con respecto al Complefol fertilizantes agrcolas, en comparacin con la
se deben a que el primero presenta una mayor densidad celular en el cultivo de Isochrysis
disponibilidad de nitrgeno (25 %) en comparacin galbana, no as en Chaetoceros gracilis que
con el segundo (15 %). El nitrgeno, junto con el difiere con el medio Guillar/F2.
fsforo, participa directamente en la formacin
de protenas y cidos nucleicos, mientras el Se observ diferencias significativas en los
potasio se desempea en el equilibrio del tratamientos utilizados en las densidades
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