Scientia Chromatographica Vol.

2, N1, 13-25, 2010

PREPARO DE AMOSTRAS Instituto Internacional de Cromatografia
ISSN 1984-4433

Extrao em Fase Slida: Fundamentos Tericos e

Novas Estratgias para Preparao de
Fases Slidas
Isabel Cristina Sales Fontes Jardim

Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica

13083-970 Campinas (SP)

Resumo

A extrao em fase slida (EFS), atualmente, uma das tcnicas mais utilizadas para extrao e/ou
concentrao de amostras complexas, permitindo que analitos em concentraes muito baixas sejam
detectados por mtodos como cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), cromatografia gasosa (CG)
e eletroforese capilar (EC). Este artigo tem o objetivo de discutir os fundamentos da EFS e apresentar novas
estratgias de preparo de fases slidas, desenvolvidas no
Laboratrio de Pesquisas em Cromatografia Lquida (LabCrom) Palavras-chave
do Instituto de Qumica da Unicamp, e suas aplicaes. A fase
slida preparada pela deposio de um polmero sobre suporte Extrao em fase slida, fase
slida ou sorvente, preparao de
de slica seguida de imobilizao usando radiao gama ou micro-
amostra, cartuchos de extrao
ondas ou tratamento trmico. O mtodo desenvolvido uma em fase slida preparados no
aplicao da qumica verde, uma vez que no h resduos txicos laboratrio
aps o preparo.

Abstract

Solid phase extraction (SPE) is nowadays a much used technique for extraction and/or concentration
of complex samples, so that the analytes present in low concentration become detectable by methods such
as high-performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography (GC) and capillary electrophore-
sis (CE). This article aims to discuss the fundamental aspects of SPE and presents new strategies for prepa-
ration and application of the solid phases developed by the Laboratory for Research in Lquid
Chromatography (LabCrom) of the Institute of Chemistry of Uni-
camp. The solid phases are prepared by depositing a polymer on Keywords
the silica support followed by immobilization using gamma irra-
diation, microwave radiation or thermal treatment. The method is Solid phase extraction, solid
an application of green chemistry, since there are no toxic resi- phase or sorbent, sample prepara-
tion, lab-made solid-phase ex-
dues after the preparation.
traction cartridges

*e-mail: icsfj@iqm.unicamp.br 13
 Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010
1 Introduo
Na maioria das anlises qumicas, sobre-
tudo nas anlises de resduos, nas quais os analitos
se encontram em nvel de traos, g kg-1 a
ng kg-1,1 devido s concentraes serem muito
baixas, os analitos apresentarem propriedades qu-
micas distintas e a matriz ser complexa, faz-se
necessria a realizao de uma etapa prvia de
preparo de amostra. Os principais objetivos do
preparo de amostra so promover a extrao e,
muitas vezes, a concentrao dos analitos de inte-
resse e a remoo, tanto quanto possvel, dos in-
terferentes. Essa a etapa mais onerosa e demora-
da envolvida no processo analtico, consumindo
cerca de 80% do tempo total de anlise, e pode
introduzir erros, principalmente devido perda do
analito e contaminao da amostra.2-4
Se os interferentes no forem eliminados,
o resultado poder ser falso. Em se tratando de
determinaes realizadas por meio do emprego de
tcnicas cromatogrficas, como a cromatografia
gasosa (CG), cromatografia lquida de alta eficin-
cia (CLAE) ou eletroforese capilar (CE), o prepa-
ro de amostra, alm de evitar que interferentes da
matriz coeluam com os compostos de interesse,
importante na remoo de interferentes para ga-
rantir a longevidade das colunas analticas ou dos
capilares e evitar limpezas constantes no sistema
de injeo.5
A escolha adequada de uma tcnica de
preparo de amostra um fator chave na obteno
de resultados confiveis e exatos, portanto as sele-
es da tcnica e das condies experimentais
devem ser conduzidas cuidadosamente. Tal esco-
lha depende da natureza da amostra, da matriz,
das caractersticas do analito e da tcnica analtica
que ser empregada na determinao, requerendo
praticamente um desenvolvimento caso a caso.6
Considerando a matriz, devem ser analisados o
seu estado fsico (slido, lquido ou gasoso), o
tamanho da amostra pH, os contedos de matria
orgnica, gordura, pigmentos, protenas, etc. e o
pH. Quanto ao analito, devem-se analisar as suas
propriedades fsicas, suas propriedades qumicas
(massa molar, carga, polaridade, volatilidade,
pKa), propriedades que permitam a sua deteco
(absoro UV-Vis, fluorescncia, eletroatividade)
e sua concentrao.
A escolha e a otimizao de um mtodo
adequado de preparo de amostra no so fceis,
principalmente com matrizes altamente complexas
como os fluidos biolgicos (plasma, soro, sangue
14
total, liquor, urina, etc.) ou outras matrizes natu-
rais como alimentos, extratos de plantas e amos-
tras provenientes do meio ambiente. Idealmente, o
mtodo de preparo de amostra deve ser to sim-
ples quanto possvel, no somente porque reduz o
tempo de anlise, mas tambm porque um nmero
grande de etapas aumenta a possibilidade de intro-
duo de erros; seletivo, ou seja, conter o menor
nmero possvel de interferentes, proporcionando
maior detectabilidade; rpido; empregar instru-
mentao de baixo custo; permitir a automao;
incluir, quando necessrio, uma etapa de concen-
trao do analito a fim de obter uma concentrao
adequada para atingir o nvel de deteco do ins-
trumento utilizado e consumir quantidades mni-
mas de reagentes e solventes, atendendo a Qumi-
ca Verde. Esse termo foi usado a primeira vez em
1991 por Anastas7 em um programa especial lan-
ado pela Agncia de Proteo Ambiental dos
Estados Unidos (US Environmental Protection
Agency - EPA). Qumica Verde uma abordagem
s snteses, aos processamentos e aos usos de pro-
dutos qumicos que reduzem os riscos impostos
populao e ao meio ambiente como um todo.8
2 Extrao em Fase Slida: Fundamentos
Tericos
A extrao em fase slida (EFS) foi intro-
duzida em 19769 para suprir as desvantagens apre-
sentadas pela extrao lquido-lquido e, hoje,
consiste no mtodo mais popular de preparo de
amostra, sendo utilizada pela maioria dos croma-
tografistas em anlises de rotina. Possui um vasto
campo de aplicao como anlises de frmacos,
alimentos e meio ambiente e nas reas de bioqu-
mica e de qumica orgnica. Essa tcnica foi revi-
sada por Hennion10 e por Fontanas et al.11
As vantagens apresentadas pela EFS em
comparao com a extrao lquido-lquido clssi-
ca so: menor consumo de solvente orgnico, no
formao de emulses, facilidade de automao,
altas porcentagens de recuperao do analito, vo-
lumes reduzidos de resduos txicos, capacidade
de aumentar seletivamente a concentrao do ana-
lito e disponibilidade comercial de muitos equipa-
mentos e sorventes para EFS.6 A EFS apresenta
como desvantagens o tempo elevado de anlise, os
altos custos dos cartuchos e dos dispositivos co-
merciais multivias (manifolds) e, eventualmente, a
dificuldade em selecionar o sorvente adequado pa-
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Extrao em Fase Slida
ra a aplicao desejada. Alm disso, os cartuchos
so utilizados uma nica vez e, geralmente, h
baixa reprodutibilidade de lote para lote de cartu-
cho.12
Os principais objetivos da EFS so a re-
moo de interferentes da matriz, a concentrao e
o isolamento dos analitos. O fator de concentrao
obtido pela razo entre o volume inicial de
amostra aplicado no cartucho e o volume final de
soluo concentrada. A concentrao pode ser
aumentada por um fator de 100 a 5000, tornando
possvel a anlise qualitativa e quantitativa a nvel
de traos.
As fases slidas, ou sorventes empregados
em EFS, so similares quelas utilizadas em cro-
matografia lquida em coluna, consequentemente,
os mecanismos de separao tambm so simila-
res. Os principais mecanismos so: adsoro, par-
tio (fase normal e reversa), troca inica e exclu-
so. Esses mecanismos esto associados a proces-
sos qumicos, fsicos e mecnicos que atuam du-
rante a separao. Dentre as principais foras qu-
micas e fsicas atuantes entre as molculas do ana-
lito e do sorvente, destacam-se as ligaes de hi-
drognio, interaes dipolo-dipolo, dipolo-dipolo
induzido, dipolo induzido-dipolo induzido e inte-
raes inicas.5
Na maioria das aplicaes, os dispositivos
de EFS mais empregados so os cartuchos nas
formas de seringa ou barril, que sero descritos
detalhadamente na prxima seco. Outro tipo de
dispositivo o disco de extrao, nos quais as par-
tculas ativas so imobilizadas em uma matriz
inerte e estvel de microfibras de politetrafluoreti-
leno (PTFE) ou vidro. Um disco tpico tem 47 mm
de dimetro interno e 0,5 mm de espessura, con-
tendo 500 mg de sorvente. Os dimetros dispon-
veis variam de 4 a 90 mm e so definidos segundo
o volume da amostra. Os discos possuem vanta-
gens, como ter leito mais homogneo, requisitar
presses menores durante a aplicao da amostra e
na eluio, com ausncia de caminhos preferenci-
ais e possibilidade de utilizar vazes mais altas e
menores volumes de eluentes na remoo dos ana-
litos. Outros formatos tm surgido recentemente
com o intuito de melhorar o desempenho da EFS,
principalmente facilitando a automao e dimi-
nuindo o tempo de anlise, o que permite reduo
de custos por anlise, maior flexibilidade, etc..
Uma dessas variaes consiste em utilizar uma
mistura de cartucho e disco. Nesse caso, o disco
colocado dentro de um cartucho de EFS, e o pro-
cedimento de anlise similar quele usado para
discos, possibilitando o uso dos dispositivos e sis-
Isabel Jardim
temas de automao empregados para cartuchos
convencionais.13 Ainda um outro formato, parti-
cularmente interessante quando anlises rpidas
so desejadas, uma vez que permite o uso de va-
zes bastante elevadas, o cartucho contendo uma
camada fina de partculas (as mesmas usadas em
EFS convencional).13
Os avanos mais recentes em termos da
tcnica de EFS seguem a tendncia no campo de
preparo de amostra no sentido de reduo de rea-
gentes, solventes, quantidade de amostra e tempo
de anlise. Nesse contexto, tem-se a extrao em
fase slida miniaturizada que utiliza placas que
contm 96 reservatrios (ou mais), cada um com
uma coluna de EFS recheada com um disco ou
com uma camada fina ou fazendo uso de ponteiras
plsticas de pipetas contendo discos de EFS.13,14
As placas so de grande utilidade para a indstria
farmacutica e de biotecnologia, pois permitem a
anlise de um grande nmero de amostras simulta-
neamente, porm h grande facilidade de contami-
nao da amostra. As ponteiras de pipetas tm
como principal vantagem a dificuldade de conta-
minao, uma vez que so descartveis e tambm
permitem um fluxo bidirecional do solvente e dis-
pensam o uso de dispositivo a vcuo.13
A EFS pode ser conduzida nos modos off
-line e on-line. No modo off-line, o processamento
das amostras e a separao cromatogrfica ou ele-
trofortica so conduzidos separadamente. Aps a
etapa de pr-tratamento, a amostra introduzida
de modo convencional no sistema cromatogrfico.
O modo off-line o mais utilizado em EFS. Atual-
mente, existem equipamentos comerciais para ex-
traes mltiplas. Alguns deles fazem o processo
de extrao mecanicamente, porm a transferncia
da amostra para o injetor cromatogrfico manu-
al , como nos sistemas manifolds (sistema mecani-
zado). No sistema on-line, o mesmo equipamento
incorpora os dispositivos para extrao, clean-up e
eluio da amostra e o cromatgrafo (sendo o cro-
matgrafo a lquido o mais comum), resultando
em uma operao sequencial e automatizada. Os
sistemas on-line so extremamente convenientes
para rotina analtica.
3 Procedimento de Extrao em Fase
Slida
A EFS uma tcnica de separao lquido
-slido extensamente usada para extrair analitos
semivolteis e no volteis de amostras lquidas,
15
 Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010
mas tambm pode ser usada para amostras slidas
pr-extradas com solventes.12 A EFS, na sua for-
ma mais comum, emprega fases slidas (FS) tam-
bm denominadas de sorventes, recheadas em car-
tuchos, nas formas de barril ou seringa, e os meca-
nismos de reteno so idnticos queles envolvi-
dos em cromatografia lquida em coluna.5,14 Um
cartucho tpico formado por um tubo de polipro-
pileno contendo cerca de 50 a 500 mg de sorvente,
com 40 a 60 m de tamanho de partcula, fixado
no tubo por meio de dois filtros de tamanho de
poros de 20 m. A amostra, contendo o analito de
interesse, colocada no topo do cartucho e aspira-
da com pequeno vcuo ou pressionada levemente
com uma seringa ou gs, de forma a penetrar no
cartucho. Contudo, no fcil controlar a vazo e
deve-se tomar cuidado para impedir que o materi-
al contido no cartucho seque antes da aplicao da
amostra, pois pode ocorrer o problema de forma-
o de caminhos preferenciais. Em geral, a EFS
pode ser usada para trs importantes propsitos:
extrao e/ou concentrao do analito, isolamento
da matriz e estocagem da amostra. Assim, o pri-
meiro propsito refere-se aos analitos que ficam
retidos na FS para posterior eluio, e o segundo,
aos que so eludos diretamente, enquanto as
substncias interferentes ficam retidas, sendo que,
nesse caso, tem-se o clean-up da amostra e no a
concentrao do analito.
Em geral, os procedimentos de extrao
em fase slida contm quatro etapas: 1) condicio-
namento do sorvente com solvente adequado para
ajustar as foras do solvente de eluio com o sol-
vente da amostra; 2) introduo da amostra, quan-
do ocorre a reteno do analito e s vezes de al-
guns interferentes; 3) limpeza da coluna para reti-
rar os interferentes menos retidos que o analito,
etapa esta conhecida como lavagem com solvente
ou clean-up; 4) eluio do analito.5,15 O solvente
empregado no condicionamento depender do
sorvente a ser ativado e da matriz a ser processa-
da, optando-se por um solvente com caractersti-
cas similares ao solvente no qual a amostra est
dissolvida. O volume de amostra utilizado pode
variar de alguns L a mL. Para que se obtenha a
eficincia mxima de extrao, necessrio deter-
minar o volume de breakthrough, VB, ou seja, o
volume mximo de amostra que deve ser proces-
sado para que se obtenha a maior recuperao
possvel do analito. A velocidade de aplicao da
amostra pode ser crtica em alguns casos, sendo
determinada pela velocidade desejada para anli-
se. Idealmente, essa etapa deve ser lenta, com va-
16
zo menor que 2 mL min-1. Na etapa de clean-up,
deve-se utilizar um solvente que tenha fora sufi-
ciente para arrastar os interferentes, porm no os
analitos. O solvente ideal o prprio solvente da
amostra, desde que ele no remova os analitos de
interesse. Geralmente, a soluo para a eluio
dos interferentes contm menos solvente orgnico,
menor concentrao salina ou encontra-se em um
pH ideal para eluio apenas dos interferentes.
Para eluir o analito de interesse, deve-se utilizar
um volume pequeno de eluente, de forma que a
soluo eluda j se encontre em concentrao
apropriada para anlise; se isso no for possvel,
utilizar um solvente voltil para eluio, de modo
que ele possa ser facilmente evaporado e o extrato
ressuspendido em um volume pequeno de fase
mvel. O eluente deve eluir os analitos de interes-
se, mas no permitir a eluio dos interferentes
que no tenham sido eliminados na etapa anterior,
por estarem muito retidos no sorvente. O solvente
de eluio deve ter maior fora de eluio que o
solvente usado na etapa anterior, clean-up, o que
obtido aumentando-se a quantidade de solvente
orgnico ou a concentrao salina ou ainda alte-
rando-se o pH da soluo de eluio. Na prtica,
observa-se que, de forma anloga extrao lqui-
do-lquido, o uso de duas alquotas do eluente, em
vez de uma nica em volume maior, aumenta a
eficincia de extrao.5 Na Figura 1, podem ser
visualizadas as principais etapas envolvidas na
EFS quando o objetivo isolar e/ou concentrar o
(s) analito(s) de interesse.
Figura 1 - Etapas da EFS no modo de concentrao ou
isolamento do(s) analito(s) de interesse.
4 Fases Slidas ou Sorventes
Em geral, os materiais usados como fase
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Extrao em Fase Slida
empregados em CLAE. A maioria dos sorventes
disponveis comercialmente baseia-se em grupos
orgnicos, como C18, C8, C2, cicloexil, fenil,
cianopropil, aminopropil (NH2), ligados quimica-
mente slica.
Outros sorventes incluem as fases polim-
ricas, como o metacrilato entrecruzado, o copol-
mero poliestireno divinilbenzeno, que se destaca
pela rea superficial especfica elevada (700 a
1200 m2 g-1), estabilidade na faixa de pH 1 14 e
maior capacidade de reteno de compostos pola-
res que as fases C18. As fases slidas de carbono
grafitizado caracterizam-se como materiais com
resistncia mecnica baixa, entretanto so alta-
mente homogneos, com rea superficial especfi-
ca baixa (100 200 m2 g-1), possuem estrutura
cristalina e tm capacidade de atuar em EFS como
fases reversas, com retenes superiores s obti-
das com fases C18. Os sorventes de modo misto
contm em sua estrutura tanto cadeias alquilas
(fase reversa) como ligantes trocadores inicos.
Essas fases slidas realizam, em uma nica etapa,
a extrao e o clean-up de matrizes biolgicas. Os
analitos ionizados sofrem uma interao forte com
os stios inicos, possibilitando que a etapa de
limpeza seja eficiente e sem grandes perdas. Em
um segundo momento, troca-se o solvente, com
um pH que permita o rompimento das interaes
inicas entre o analito e o sorvente. Como fases
mais seletivas, tm-se os imunossorventes, as fa-
ses de polmeros impressos molecularmente, co-
nhecidos como MIP, e as fases de acesso restrito
(RAM). Os imunossorventes baseiam-se nas rea-
es especficas entre antgeno e anticorpo, em
um suporte slido, como agarose ou slica, usando
o mesmo princpio da cromatografia por afinida-
Tabela 1 - Guia geral para seleo de fase slida e eluente, empregando amostras orgnicas contendo analitos com
massas molares inferiores a aproximadamente 2000 daltons.16
Mecanismo Sorvente
C18, C8, C2, cicloexil,
apolar (fase reversa)
fenil, cianopropil, poli-
partio e adsoro
mrico
polar
Slica, diol, ciano,
(fase normal) partio
aminopropil, diamino
e leos
adsoro
forte (cido sulfnico) grupos funcionais car-
troca catinica ou fraco (cido carbo- regados positivamente
xlico)
forte (tetra alquilam-
troca aninica
nio) ou fraco (amino)
Isabel Jardim
de. Os MIP so obtidos por meio da preparao de
polmeros com stios de reconhecimento sintticos
e tm uma seletividade pr-determinada para um
ou mais analitos. Tais stios de reconhecimento
so obtidos pelo arranjo de monmeros funcionais
polimerizveis ao redor das molculas do analito.
Dessa forma, so formados complexos, por meio
da interao molecular, entre o analito e o mon-
mero precursor. Os complexos so fixados por
meio de reaes de entrecruzamento de polmeros.
A remoo do analito da matriz polimrica forma
lacunas (stios de reconhecimento) que iro exibir
afinidade pelo analito. O potencial desse tipo de
material alto por oferecer resistncia mecnica
temperatura e presso e por ser inerte em condi-
es extremas de cidos, bases, ons metlicos e
solventes orgnicos.15
Os sorventes base de slica apresentam
como desvantagem o fato de serem instveis no
intervalo 8 < pH < 2 e tambm por conterem os
grupos silanis residuais que podem reter irrever-
sivelmente compostos bsicos.12
A seleo da fase slida em EFS segue, na
maioria das vezes, as mesmas regras utilizadas
para a escolha da fase estacionria em CLAE. O
primeiro critrio a ser considerado refere-se es-
trutura qumica do analito, s propriedades do sor-
vente e composio da matriz da amostra. Isso
definir o mecanismo a ser empregado e, conse-
quentemente, ajudar na seleo da fase slida.
Uma fase slida com seletividade tima, ou seja,
com capacidade de discriminar entre o analito e os
outros componentes, encontrada analisando os
grupos funcionais do analito que no esto presen-
tes na matriz da amostra e em outros interferentes.
A Tabela 1 apresenta um guia geral para escolha
Tipo de Analito Tipo de Matriz Eluente do Analito
solventes polares
grupos funcionais
solues polares como metanol, aceto-
apolares como
(tampo aquoso) nitrila e gua com
alquilas e aromticos
pH ajustado
grupos funcionais pola- solventes apolares
solventes apolares,
res como aminas e como hexano e diclo-
hidroxilas rometano
aquosa, fora inica tampo como acetato,
baixa citrato e fosfato
como aminas
grupos funcionais car-
aquosa, fora inica tampo como fosfato e
regados negativamente
baixa acetato
como cidos orgnicos
17
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de uma fase slida apropriada para analitos org- 5 Desenvolvimento de Novas Fases Slidas
nicos com massas molares inferiores a aproxima-
damente 2000 daltons. 16 ou Sorventes
Para facilitar essa seleo, na Figura 216
encontra-se um esquema geral da seleo das fa-
A maioria das fases slidas empregadas
ses slidas e solventes para eluio de amostras
do tipo C18, quimicamente ligado, preparado a
contendo analitos com massas molares inferiores a
partir da reao da slica com um reagente orga-
2000 daltons, para evitar efeitos de excluso que
nossilano que ser responsvel pelas caractersti-
possam bloquear os poros das fases slidas. Os
cas da fase slida. Apesar das inmeras vantagens
solventes recomendados para eluio devem ser
que a consolidaram mundialmente na preparao
considerados como uma primeira aproximao. A
de fases estacionrias quimicamente ligadas para
aplicabilidade de outros solventes ou misturas de
CLAE e tambm como fase slida para EFS, esse
solventes determinada pela polaridade requerida
tipo de reao apresenta desvantagens com relao
para a separao. Inicialmente, as amostras so
ao custo dos reagentes organoclorossilanos, ao
divididas em dois grandes grupos: as solveis em
procedimento trabalhoso de sntese que envolve
gua e as solveis em solvente orgnico. As
grandes quantidades de solventes txicos, atmos-
amostras solveis em gua so primeiramente di-
fera inerte, temperatura elevada e tempo longo de
vididas em inicas e no inicas. As amostras no
sntese.
inicas solveis em gua so classificadas de
Algumas alternativas promissoras para
acordo com a sua polaridade: apolar, moderada-
preparao de sorventes para EFS tm sido estu-
mente polar e polar. No caso de analitos apolares
dadas no meu grupo de pesquisa, baseadas no su-
a escolha inicial de uma fase slida recai nas fases
cesso e na experincia adquirida em mais de uma
reversas como C18, C8, C4, C2, cicloexil, fenil,
dcada, no Laboratrio de Pesquisas em Cromato-
cianopropil, e o solvente de eluio do analito de-
grafia Lquida (LabCrom) do Instituto de Qumica
ve apresentar caractersticas mais polares que a
da Unicamp, na preparao de fases estacionrias
fase slida, como acetonitrila, lcoois, diclorome-
para CLAE, que consistem na soro de polis-
tano, etc.. Para analitos moderadamente polares, a
siloxanos sobre slica. A descrio detalhada das
fase slida inicialmente escolhida deve ser polar,
fases estacionrias para CLAE pode ser encontra-
como a slica, e o solvente de eluio do analito
da nas revises publicadas por Faria et al.17,18 e
deve ser menos polar, clorofrmio, diclorometano,
Collins et al.19
acetato de etila, lcoois e gua. Em se tratando de
Nos estudos realizados por Jardim e cola-
analitos polares, a fase slida selecionada ser do
boradores20-30, visando novas estratgias na prepa-
tipo fase normal, em que a FS mais polar que o
rao de sorventes, a reao qumica foi substitu-
solvente de eluio, como cianopropil, diol, ami-
da pela deposio de um polmero sobre suporte
nopropil, diaminopropil e o solvente de eluio do
de slica seguido de imobilizao por radiao
analito menos polar, como clorofrmio, dicloro-
gama, micro-ondas ou tratamento trmico.
metano, etc..5 As amostras inicas solveis em
A preparao da fase slida lab-made
gua so classificadas em catinicas e aninicas.
consiste na ativao do suporte de slica irregular,
Os analitos carregados positivamente so extra-
de tamanho de partculas de 0,040-0,063 mm (200
dos em FS trocadores catinicos fortes (cido sul-
-400 mesh) e tamanho de poro de 10 nm, em estu-
fnico) ou fracos (cido carboxlico). Os analitos
fa sob temperaturas de 120 a 140 oC por 12 a 24 h.
carregados negativamente so extrados em FS
Uma quantidade adequada de slica e de polmero
trocadores aninicos fortes (tetra alquilamnio) ou
so suspendidos separadamente em solventes co-
fracos (amino). Os solventes de eluio para troca
mo n-pentano, clorofrmio ou diclorometano, de-
inica so, geralmente, solues cidas, alcalinas
pendendo da solubilidade do polmero, na propor-
ou tampo.
o de 12 mL de solvente para 1 g de FS. A sus-
Os analitos solveis em solvente orgnico
penso de slica adicionada de polmero, lenta-
tambm so classificados de acordo com a sua
mente, e essa mistura permanece sob agitao por
polaridade e seguem os mesmos critrios usados
3h temperatura ambiente, a fim de que o polme-
na seleo da FS para amostras solveis em sol-
ro se distribua uniformemente sobre o suporte.
ventes aquosos.5
Aps essa etapa, o solvente evaporado lenta-
mente exausto, temperatura ambiente.
Aps o preparo, o polmero imobilizado

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Extrao em Fase Slida Isabel Jardim

Figura 2 Guia para seleo de fases slidas e solventes de eluio de analitos com massas molares inferiores a 2000
daltons.16

19
 Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

por meio de radiao gama, tratamento trmico ou
radiao micro-ondas para aumentar a estabilidade
do polmero sobre o suporte, em doses ou tempe-
raturas e tempos pr-determinados.
Os materiais imobilizados so submetidos
ao processo de extrao com solventes, a fim de
eliminar o polmero que no tenha ficado aderido
ao suporte cromatogrfico. Para confeco dos
cartuchos, 500 mg da FS preparada so colocadas
em seringas de polipropileno de 5 mL e so reti-
dos por dois filtros de polietileno de porosidade de
20 m. As etapas de EFS, condicionamento, apli-
cao da amostra, clean up e eluio do analito
so realizadas usando um manifold a vcuo de 12
vias, com solventes apropriados.
As FS so caracterizadas por termogravi-
metria, espectroscopia de absoro na regio do
infravermelho e anlise de teor de carbono. O de-
sempenho da FS avaliado por meio da extrao
de amostras, gua Milli-Q e outras, fortificadas
com padres de agrotxicos ou de hidrocarbone-
tos policclicos aromticos (HPA). Para avaliar a
eficincia da extrao, calculam-se a porcentagem
de recuperao (R) e a estimativa de desvio-
padro relativo (CV). Na Tabela 2, encontra-se
um resumo das caractersticas e aplicaes de to-
das as fases lab-made preparadas no LabCrom.
6 Consideraes Finais
A EFS continua sendo o mtodo mais
popular empregado em anlises de rotina para ex-
trair e concentrar vrios analitos presentes em
amostras complexas.
O procedimento de deposio de um pol-
mero sobre suporte de slica seguido de imobi-
lizao por radiao gama, tratamento trmico ou
radiao micro-ondas consiste em uma estratgia
promissora para preparao de novos sorventes
para EFS em substituio aos materiais quimi-
camente ligados, uma vez que simples, demanda
poucas etapas, utiliza reagentes menos txicos e
disponveis comercialmente, reprodutvel, seu
custo final significativamente menor que os
cartuchos adquiridos comercialmente e, em co-
mum com outros procedimentos de EFS, reduzem
os resduos txicos gerados.

Tabela 2 Caractersticas e aplicaes das fases slidas lab-made preparadas no LabCrom

PMODS poli (metiloctadecilsiloxano) PMS poli(metilsiloxano) PMOS poli(metiloctilsiloxano)
PMTDS poli(metiltetradecilsiloxano)
PDMFS poli (dimetilsiloxano-co-metilfenilsiloxano) PMTFS poli(metil-3,3,3-trifluorpropilsiloxano) F=vazo

Porcentagem de Procedimento Recuperaco

FS/polmero Imobilizao Aplicao CV (%) Referncia
Carbono da FS(%) de EFS
(%)

Cond.: 10 mL
de MeOH + 3 determinao
mL de H2O por CLAE dos
Milli-Q agrotxicos
benomil, te-
irradiao ga-
C18/ butiurom, sima- Queiroz et
ma (60 e 80 12 73 - 103 < 16
PMODS zina, atrazina, al.20
kGy)
diurom e
Eluio: 1 ametrina em
mL de MeOH gua Milli-Q
fortificada

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Extrao em Fase Slida Isabel Jardim

Tabela 2 (continuao)

Porcentagem de Procedimento Recuperaco

FS/polmero Imobilizao Aplicao CV (%) Referncia
Carbono da FS(%) de EFS
(%)

Cond.: 10 mL
de MeOH + 5
mL de H2O
Milli-Q
determinao
tratamento
por CLAE dos
C18/ trmico-TT Pozzebon et
15 Lavagem: 5 agrotxicos 85 - 103 < 1,8
PMODS (120 oC por 4 al.21
mL de H2O diurom e linu-
h)
rom em urina

Eluio: 3
mL de
CH2Cl2

98,7 (amostra
de gua de
concentrao de lago)
Pb em gua de
lago e em
amostras bio-
lgicas usando
colunas de en-
tratamento Eluio: eta-
C18/ riquecimento Maltez et
trmico (120 15 nol F= 1,0 < 1,2
PMODS o em sistema de al. 22
C por 4 h) mL/min 97,9
injeo em
(amostras
fluxo e determi-
nao por biolgicas)
espectroscopia
de absoro
atmica

NH2 /PMS
NH2 - 12 NH2 NH2 NH2
aminopropil
Cond.: 2 mL
(55 - 143) (1,4 - 19)
de CH2Cl2

Eluio: 2 x 3
mL determinao
CH2CI2:MeOH por CLAE dos
95:5,v/v agrotxicos
tratamento
benomil, tebu- Melo et al.
C18/PMODS trmico (120 C18 - 15 C18 C18 C18 23
o tiurom, simazi-
C por 4 h)
na, atrazina,
Cond.: 5 mL diurom e ame-
de MeOH + 5 trina em uva
(8,0 - 103) (0 - 27)
mL de H2O
Milli-Q

Eluio: 10
mL de
CH2Cl2
21
 Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010

Tabela 2 (continuao)

Porcentagem de Procedimento Recuperaco

FS/polmero Imobilizao Aplicao CV (%) Referncia
Carbono da FS(%) de EFS
(%)
NH2 PMS
NH2 NH2 NH2
aminopropil
Cond.: 2 mL determinao
(45 - 99) (7,6 - 36)
de CH2Cl2 por CLAE dos
agrotxicos
Eluio: 2 x 3 benomil, tebu-
mL tiurom, simazi- Melo et al. 25
C18/PMODS idntico ref.23 Idem ref.23
CH2CI2:MeOH na, atrazina,
99:1,v/v diurom e ame-
trina em toma-
C18 (Idem
tes C18 C18
ref.23)

(6,0 - 70) (7,3 - 52)

Cond.: 10 mL
88-120 (TT)
de MeOH + 3
14 (TT) 82-115 (60 5-13 (TT)
mL de H2O
determinao kGy)
Milli-Q
por CLAE dos
agrotxicos
tratamento Eluio: 2 x benomil, tebu-
trmico (120 C 85- 114 (80 0-16 (60
18 (60 kGy) 0,5 mL de tiurom, simazi- Queiroz et
C8/PMOS por 4 h) ou radi- kGy) kGy)
MeOH na, atrazina, al.26
ao gama (60
diurom e ame-
e 80 kGy)
trina em gua 0-13 (80
17 ( 80 Milli-Q fortifi- kGy)
cada
kGy)

Cond.: 3 mL
de acetato de determinao
etila + 3 mLpor CLAE dos
de H2O Milli- agrotxicos
Q + 3 mL de imazetapir, ni-
tratamento H2O Milli-Q cosulfurom, Vigna et
C8/PMOS trmico (120 C 14 pH 2,5 72 - 111 < 15
diurom, linu- al.27
por 8 h)
rom, clorimu-
Eluio: 5 rom-etil em
mL ACN + 2 gua Milli-Q
mL acetato de fortificada
etila

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Extrao em Fase Slida Isabel Jardim

Tabela 2 (continuao)

Porcentagem de Procedimento Recuperaco

FS/polmero Imobilizao Aplicao CV (%) Referncia
Carbono da FS(%) de EFS
(%)
Cond.: 3 mL
de acetato de
etila + 3 mL determinao
de H2O deio- por CLAE dos
nizada + 3 agrotxicos
mL de H2O imazetapir, ima-
tratamento pH 3,0 zaquim, metsul-
C14/
trmico (110 C 8,3 furom-metil, 74 - 99 < 10 Faria et al.28
PMTDS
por 13 h) Famostra > 5 bentazona,
mL/min clorimurom-
etil, tebucona-
zol em gua
Eluio: 5 x 1 superficiais
mL acetato de
etila

Cond.: 2 x 6
mL de hexa-
no + 6 mL de
MeOH + 6
mL H2O dei-
onizada determinao
por CLAE dos
Famostra > 10 hidrocarbonetos
mL/min policclicos
tratamento aromticos
Fenil/ Marques et
trmico (150 C 7,7 (HPA), antrace- 59 - 75 1,4 - 16,9
PDMFS al.29
por 4,5 h) no,fenantreno,
fluoranteno,
Eluio: 2 x 3 pireno em gua
mL acetato de Milli-Q fortifi-
etila + 3 mL cada
de hexano + 2
x 3 mL aceta-
to de etila

Cond.: 5 mL
de CH2CI2 +
5 mL de H2O
deionizada Determinao
tratamento por CLAE dos
trmico (220 agrotxicos
C por 12 h) ou Famostra = 8 simazina, flu-
Fluorado/ Bodemeier
radiao micro mL/min dioxonil, fenari- 96,2 - 100,5
PMTFS et al.30
-ondas (1000 mol e difluben-
W, 150 C por zurom em gua
30 min) Eluio: 5 x 1 Milli-Q fortifi-
mL CH2CI2 + cada
5 x 1 mL
MeOH

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 Scientia Chromatographica Vol.2, N1, 13-25, 2010
Entre as tcnicas de imobilizao em-
pregadas, a trmica considerada mais simples
que a radiao gama devido facilidade
de obteno do equipamento (estufa), que co-
mum em todos os laboratrios, seguido da radi-
ao por micro-ondas. Os cartuchos confecciona-
dos apresentam bom desempenho, fornecendo
porcentagens de recuperao e coeficiente de var-
iao geralmente dentro do intervalo citado na
literatura, que de 70-120% e CV 20%, respec-
tivamente31 e permitem a concentrao dos anali-
tos, agrotxicos e HPA, de forma que eles al-
cancem os limites mximos de resduos estabele-
cidos pelas agncias reguladoras. Alm disso, as
FS preparadas so bastante seletivas, podendo ser
aplicadas em diversos tipos de amostra, como am-
bientais, fluidos biolgicos, alimentos, frmacos e
produtos naturais.
7 Agradecimentos
A todos os alunos que contriburam para o
desenvolvimento das novas fases slidas.
FAPESP e ao CNPq pelo suporte financeiro.
Liane Maldaner, Milena P. Segato, Rafael T.
Marques e Carol H. Collins pelas discusses e
sugestes.
Referncias Bibliogrficas
1. H.F. DeBrabander, H. Noppe, K. Verheyden, J.V.
Bussche, K. Wille, L. Okerman, L. Vanhaecke, W.
Reybroeck, S. Ooghe, S. Croubels. J. Chromatogr.
A, 1216, 7964 (2009).
2. A. Hercegov, M. Dmtrov, E. Matisov. J.
Chromatogr. A, 1153, 54 (2007).
3. Y. Chen, Z. Guo, X. Wang, C. Qiu. J. Chromatogr.
A, 1184, 191 (2008).
4. O.D. Prestes, C.A. Friggi, M.B. Adaime, R. Zanel-
la. Quim. Nova, 32, no 6, 1620 (2009).
5. F.M. Lanas. Extrao em Fase Slida (SPE). Ri-
ma, So Carlos (2004).
6. J. Hernndez-Borges, T.M. BorgesMiguel, M..
24
Rodriguez-Delgado, A. Cifuentes. J. Chromatogr.
A, 1153, 214 (2007).
7. P.T. Anastas. Crit. Rev. Anal. Chem. 29, 167
(1999).
8. M. Tobiszewski, A. Mechlinska, B. Zygmunt, J.
Namiesnik. Trends Anal. Chem., 28, 943 (2009).
9. K.Yoshimura, H.Waki, S. Ohashi. Talanta, 23, 449
(1976).
10. M.C. Hennion. J. Chromatogr. A, 856, 3 (1999).
11. N. Fontanals, R.M. Marce, F. Borrull. Trends Anal.
Chem., 24, 394 (2005).
12. L. Novkov, H. Vlckov. Anal. Chim. Acta, 656, 8
(2009).
13. F.M. Lanas. Sci. Chromatogr., 0, 17 (2008).
14. T. Hytylinen. LCGC, 12, 6 (2009).
15. S.C.N. Queiroz, C.H. Collins, I.C.S.F. Jardim.
Quim. Nova, 24, no 1, 68 (2001).
16. Guide to Sample Preparation. Supplement to
LCGC. Outubro de 2008.
17. A.M. Faria, C. H. Collins, I.C.S.F. Jardim, J. Braz.
Chem. Soc., 20, no 8, 1385 (2009).
18. A.M. Faria, I.C.S.F. Jardim; K. E. Collins, C. H.
Collins. J. Sep. Sci., 29, 782 (2006).
19. C.H. Collins, C. R. Silva, A.M. Faria, A. M.; K.E.
Collins, I.C.S.F. Jardim. J. Braz. Chem. Soc., 20,
604 (2009).
20. S.C.N. Queiroz, L.F.C. Melo, I.C.S.F. Jardim. J.
Chromatogr. A, 948, 171 (2002).
21. J.M. Pozzebon, S.C.N. Queiroz, L.F.C. Melo, M.A.
Kapor, I.C.S.F. Jardim. J. Chromatogr. A, 987, 381
(2003).
22. H.F. Maltez, L.F.C. Melo, S.C.N. Queiroz, I.C.S.F.
Jardim, A.J. Curtius, E. Carasek. Microchim. Acta,
144, 17 (2004).
23. L.F.C. Melo, C.H. Collins, I.C.S.F. Jardim. J. Chro-
matogr. A, 1032, 51 (2004).
24. I.C.S.F. Jardim, K.E. Collins, C.H. Collins.
Microchem. J., 77, 191 (2004).
www. s c i en ti a ch ro ma to g r ap h i c a. co m
Extrao em Fase Slida
25. L.F.C. Melo, C.H. Collins, I.C.S.F. Jardim. J. Chro-
matogr. A, 1073, 75 (2005).
26. S.C.N. Queiroz, L.F.C. Melo, I.C.S.F. Jardim.
Quim. Nova, 29, no 4, 637 (2006).
27. C.R.M. Vigna, L.S.R. Morais, C.H. Collins,
I.C.S.F. Jardim. J. Chromatogr. A, 1114, 211 (2006).
28. A.M. Faria, L. Maldaner, C.C. Santana, I.C.S.F.
Jardim, C.H. Collins. Anal. Chim. Acta, 582, 34 (2007).
29. R.T. Marques, L. Maldaner, I.C.S.F. Jardim,
Preparao de cartuchos recheados com sorvente do
tipo fenil para extrao em fase slida de hidrocar-
bonetos policclicos aromticos. Trabalho apresentado
no 15o Encontro Nacional de Qumica Analtica e 3o
Congresso Iberoamericano de Qumica Analtica,
Isabel Jardim
(2009).
30. A.P. Bodemeier, L. Maldaner, I.C.S.F. Jardim, In-
fluncia da carga do polmero fluorado no preparo de
cartuchos para extrao em fase slida. Trabalho
apresentado no 15o Encontro Nacional de Qumica
Analtica e 3o Congresso Iberoamericano de Qumica
Analtica, (2009).
31. Comission of the European Communities
(SANCO), 2003, Document n SANCO/2007/3131.
Method Validation and Quality Control Procedures for
Pesticide Residues Analysis in Food and Feed, Brux-
elas, Blgica, 2007, http://ec.europa.eu/food/plant/
protection/resources/qualcontrol_en.pdf, acessado em
jan/2010.
25