INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLGICAS

LABORATORIO DE MTODOS DE ANLISIS

Efecto del pH y la concentracin en la intensidad de

fluorescencia de riboflavina

SECCIN: 3
5VQ2

Avila Laguna Nelly Aidee

FECHA DE ENTREGA: 18/09/2017

 OBJETIVOS:

Levar a cabo la tcnica de cromatografa por adsorcin en columna para la

separacin de azul de metileno y fluorescena.
Saber que compuesto es ms susceptible a separar.

FUNDAMENTO DE LA TCNICA

Se entiende por cromatografa como un mtodo de separacin de dos o ms solutos por

medio de un soporte y en el est presente una fase mvil y una estacionaria.

Un rasgo caracterstico de la cromatografa es la presencia de dos fases; dispuestas de

tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del sistema (fase
estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de l (fase mvil). La clave de la separacin
en cromatografa es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su
afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribucin).

En general, los componentes ms afines a la fase estacionaria avanzan lentamente (ms

retenidos) mientras que los ms afines a la fase mvil (menos retenidos) se mueven con
mayor rapidez. Por consecuencia, el medio cromatogrfico (columna, placa o papel)
funciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla,
logrando as su separacin y mediante el uso de un detector, su caracterizacin qumica.

RESULTADOS

Volumen de Absorbancia Absorbancia

elucin (ml) 495 (nm) 668 (nm)
3 0,036 0
6 0,002 0
9 0,09 1,443
12 0,056 0,533
Azul de metileno
15 0,083 0,045
18 0,108 0,09
21 0,082 0,058
24 0,031 0,014
27 0 0
30 0,076 0,04
33 0,003 0
36 0 0
39 0,027 0
42 0,065 0,032
45 0,062 0,047
48 0,012 0
51 0,053 0,019
54 0,035 0 Fluorescena
57 0,134 0
60 0,24 0
63 0,344 0,015
66 0,308 0,021
69 0,322 0
72 0,301 0
75 0,214 0
78 0,111 0
81 0,072 0
DISCUSIN

El primer colorante en separase fue el azul de metileno ya que es ms afn al agua, el

colorante fue arrastrado rpidamente es por esto que no se tard en salir de la columna y
hubo algunas recolecciones incoloras hasta que se separ completamente aparte de que
este compuesto no es afn con la almina ambas tiene cargas positivas y se repelen esto
ayudo a tambin ayudo a que migrara primero. En cuanto a la fluorescena ya que no
haba azul de metileno se procedi a cambiar la fase mvil por regulador de fosfatos por
que como la fluorescena es polar tiene carga contraria a la almina esto hace que se
atraigan por lo que no la permiti salir con el agua pero con el regulador se alcaliniza la
almina rompiendo las fuerzas que las mantena unidas.

Al registrar los datos en la tabla y posteriormente llevados a una grfica se puede

observar que cada compuesto tiene su mayor absorbancia el azul de metileno en 668
(nm) a 9 ml y la fluorescena en 443 (nm) a 63 ml, la separacin se logr con xito con
base a resultados tericos como se observa en la Figura 1 ya que los picos de cada
compuesto estn separados conforme el orden de la separacin de los mismos.

CONCLUSIONES

La separacin entre ambos colorantes fue considerable ya que la mayor

absorbancia a diferentes volmenes y absorbancia fue distinta.
La almina y el azul de metileno no tienen afinidad ya que tiene misma carga en
su estructura y se repelen.
La almina y fluorescena tiene una gran afinidad ya que por tener cargas distintas
se atraen.
La fluorescena tiene una mayor absorbancia a 443 (nm) a 63 ml de volumen de
elucin.
El azul de metileno tiene una mayor absorbancia a 668 (nm) a 9 ml de volumen de
elucin.

PREGUNTAS EXTRAS

1. Especifique y defina los elementos del sistema cromatgrafo para esta separacin.

Fase mvil: agua y regulador de fosfatos

Fase estacionaria: almina

Soporte: columna

2. Defina el trmino adsorcin y, empleando formulas, esquematice que fuerzas

intermoleculares participan en el proceso de separacin de los solutos.

Fenmeno fisicoqumico en el cual las molculas se adhieren a la superficie.

 3. Considerando las propiedades de solubilidad de los colorantes, indique qu
modificaciones hara para invertir el orden de la elucin.

En lugar de utilizar almina acida por bsica u otro soluto diferente que sirviera en esta
cromatografa pero que sea de igual manera bsico as emigrara primero la fluorescena y
el azul de metileno se retiene en la primera fase mvil se usara regulador de fosfatos y
para el azul de metileno el agua.

4. A explicacin no pedida: acusacin manifiesta

Significa que uno se justifique antes de que se le pregunte lo delata.

REFERENCIAS

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf.
Consultado 26/08/2017
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html. Consultado
26/08/2017