Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronoma
rea tecnolgica
Subrea manejo y mejoramiento de plantas
Curso: Fitomejoramiento
Catedrtica: Ph. D. Jennifer Silva

Descripcin de cuatro marcadores de seleccin y cuatro marcadores

reporteros

Chal Sipac, Juan Sebastian

201400466

Guatemala 19 de septiembre de 2017

 Marcadores de Seleccin

1. aadA

1.1 Modo de accin como antibitico

Codifica la enzima aminoglucsido 3 adeniltransferasa que confiere

resistencia a los antibiticos espectinomicina y estreptinomicina. (1)

1.2 Mecanismo para proporcionar presin de seleccin

Figura 1. presin de seleccin del marcador aadA

Fuente: American Association of Plant Biology, www.aspb.org.com

2. hpt

2.1 Modo de accin como antibitico

Codifican para enzimas que confieren resistencia a los antibiticos

higromicina respectivamente, causando la muerte de las clulas no
transformadas. (2)
 2.2 Mecanismo para proporcionar presin de seleccin

Construccin de plsmidos de expresin para la transformacin de arroz. (A)

Diagrama de dos plsmidos de expresin utilizados para la
transformacin. hpt , gen fosfotransferasa de higromicina; pAg7, regin 3
'terminal del gen de la sintasa agropina; (B) secuencia de aminocidos
parcial en regiones variables de glutelinas. Estn subrayados los residuos de
aminocidos sustituidos en subunidades cidas, mientras que los de la
subunidad bsica son doble subrayado. Los nmeros indican la posicin de
los residuos de aminocidos que comienza desde el codn de iniciacin de
la traduccin de los precursores de glutelina; El asterisco significa codn de
parada. (2)

Figura 2. Mecanismo de presin de seleccin del marcador hpt

Fuente: American Association of Plant Biology, www.aspb.org.com

3. ntpll

3.1 Modo de accin como antibitico

El gen nptII, procedente del transposn bacteriano Tn5 codifica la enzima

neomicina fosfotransferasa que confiere resistencia al antibitico
kanamicina. La enzima desactiva la sustancia antibitica mediante
fosforilacin. (1)
 4. pmi

4.1 Modo de accin como antibitico

De la bacteria Escherichia coli, que codifica para la enzima fosfomanosa

isomerasa, cuya expresin en las clulas vegetales transformadas les permite
utilizar como fuente de carbono al azcar fosfomanosa. Pmi permite la
seleccin positiva de clulas que expresan el gen pmi. La fosfomanosa
isomerasa transforma la manosa-6- fosfato en fructosa-6-fosfato, un azcar
metabolizable, que entra directamente en la ruta de la glicolisis. (3)

4.2 Mecanismo para proporcionar presin de seleccin

La expresin del gen selector est regulada por el promotor y el primer intrn
del gen de la poliubiquitina, que permite la expresin constitutiva en
monocotiledneas. (3)

Marcadores Receptores

1. CAT

Otro de los genes marcadores utilizados es el denominado cat (Li et al. 2010).
La enzima bacteriana cloranfenicol acetiltransferasa acta desactivando el
antibitico cloranfenicol, el cual detiene la sntesis proteica en las
mitocondrias, por lo que confiere resistencia ha dicho antibitico. (4)

2. GPF

2.1 Modo de accin como gen reportero

Procedente de la medusa Aequorea victoria, codifica una protena que

genera un cromforo en presencia de oxgeno, el cual emite fluorescencia
verde cuando se excita con luz azul o con luz ultravioleta, podemos
identificar las que son transgnicas, ya que emitirn fluorescencia verde. (6)

2.2 Como medir su actividad como reportero

En la figura 2 se muestra la actividad de expresin del marcador GFP en

tejidos vegetales
 Figura 2. Expresion del gen GFP en tejidos vegetales
Fuente: /2012/12/genes-marcadores.html.com

3. GUS

3.1 Modo de accin como gen reportero

El gen de la B-glucuronidasa (uidA o gus), aislado de E. coli, que hidroliza B-

glucuronidos Esta enzima hidroliza beta-glucurnidos en presencia del
sustrato apropiado. Cuando el sustrato es el cido 5-bromo-4-cloro-3-indoxil-
beta-D-glucurnido (X-Gluc), se forma un producto que tie las clulas
transformadas de color azul. Cuando el sustrato es el 4-metil-umbeliferil beta-
D-glucurnido (MUG), se forma un producto fluorescente, la
metilumbeliferona (MU), cuantificable por fluorimetra. (1)

3.2 Como medir su actividad como reportero

En la figura 3 y 4 se muestran cmo se procede a medir la actividad como

reportero en este caso del marcador GUS. Se pueden observar la actividad
luminiscente en ciertos rganos de la planta como indicador de la actividad
antibitica que se lleva a cabo
Figura 3. Expresion del gen GFP en tejidos vegetales
Fuente: /2012/12/genes-marcadores.html.com

Figura 4. Expresion del gen GFP en tejidos vegetales

Fuente: /2012/12/genes-marcadores.html.com
 4. LUC

4.1 Modo de accin como gen reportero

El gen luc de la luciferasa de lucirnaga (firefly), que es uno de los

genes reporter usados con ms frecuencia y que permite monitorizar la
actividad promotora en el control de la expresin gnica. Los genes reporter
se usan ampliamente para estudiar los mecanismos de expresin y
regulacin gnica. Puesto que la mayora de genes expresados no son
fcilmente detectables, los genes reporter se introducen en el DNA celular
para investigar la funcin del gen mediante una propiedad fcil de medir:
la luminiscencia. La luciferasa tiene varias ventajas que la convierten en una
opcin muy interesante por encima de los ensayos basados en CAT (5)

Figura 1. Cuadro de resumen sobre los marcadores reporteros

Fuente: Gutierrez M. (2008), Obtencion y caracterizacion bioquimica de
una enzima de resistencia a antibioticos
5. REFERENCIAS

1. Vancanneyt G. Shmidt R., OConnor-Sanchez A., Willmitzer L. y Rocha-

Sosa M. (1990) Construction of an intron-containing marker gene:
Splicing of the intron in transgenic plants and its use in monitoring early
events in Agrobacterium-mediated plant transformation. Mol gen
Genet, 220:245-250.

2. Gutierrez L. Montserrat (2008) Obtencion y caracterizacion Bioquimica

de una enzima de resistencia a antibioticos, Universidad Compluyense
de Madrid. Disponible en
http://digital.csic.es/bitstream/10261/7430/1/Tesis%20Montserrat%20L
atorre.pdf

3. Lopez L. Nahikari (2011), Eliminacion del Gen Marcador de Seleccin

en Plantas Traspastomicas mediante la expresin transitoria de la
recombinasa CRE, Consultado el 19 de septiembre de 2017. Disponible
en http://academica-
e.unavarra.es/bitstream/handle/2454/4405/577647.pdf?sequence=1

4. Goldschmidt-Clermont, M. 1991, Transgenic expression of

aminoglycoside adenine transferase in the chloroplast: a selectable
marker of site-directed transformation of chlamydomonas. Nucleic
Acids Res, 11; 19(15): 40834089

5. Huang, F.C., Klaus, S., Herz, S., Zou, Z., Koop, H.U., Golds, T. 2002,
Efficient plastid transformation in tobacco using the aphA-6 gene and
kanamycin selection. Mol Genet Genomics 268, 1927

6. Hong Wang (2011), Desarrollo de un Protocolo de transformacin

Gentica de Albaricoquero Independiente del genotipo, Consultado
el 19 de septiembre de 2017, Disponible en
http://www.tesisenred.net/bitstream/handle/10803/42941/THW.pdf?s
equence=1