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UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA
FACULTAD DE EDUCACIN
LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES: BIOLOGA, FSICA Y QUMICA
NEIVA HUILA
2017
II
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UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA
FACULTAD DE EDUCACIN
LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES: BIOLOGA, FSICA Y QUMICA
NEIVA HUILA
2017
3III
DEDICATORIA
AGRADECIMIENTOS
A mi madre, Martha Msmela Ramrez, por todo su apoyo incondicional durante toda mi vida.
A la Bacteriloga Clnica Rosa Alcira Carreo Ruiz por estar presente en todo el desarrollo de
este trabajo, por ser una gua constante en cada uno de los procedimientos que se realizaron, de
igual manera a la Microbiloga Sonia Echeverry Hernndez por brindarme el espacio en su
semillero de investigacin VIRHOBAC el cual me permiti adquirir el gusto y el amor por la
microbiologa y a todas las personas que tienen a cargo en el laboratorio de Microbiologa en la
Facultad de salud, en especial a la Auxiliar Fabiola Gmez.
Al Dr. Salim Mattar quin colabor y me brind ayuda en su Laboratorio para el anlisis
molecular de las diferentes especies de microorganismos encontrados.
Pgina de Aceptacin
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Firma Presidente del Jurado
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Firma del Jurado
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Firma del Jurado
Contenido
Introduccin .................................................................................................................................. 14
Planteamiento del problema .......................................................................................................... 16
Antecedentes ................................................................................................................................. 18
Fundamento terico ...................................................................................................................... 21
Clasificacin taxonmica de Mosca domstica ........................................................................ 22
Ciclo biolgico .......................................................................................................................... 23
Transmisin de patgenos ......................................................................................................... 24
Moscas eusinantrpicas ............................................................................................................. 25
Moscas endoflicas. ............................................................................................................... 25
Moscas exoflicas. ................................................................................................................. 25
Justificacin .................................................................................................................................. 26
Objetivos ....................................................................................................................................... 27
Objetivo General ....................................................................................................................... 27
Objetivos especficos................................................................................................................. 27
Metodologa .................................................................................................................................. 28
Criterios de inclusin ................................................................................................................ 28
ndice de infestacin.................................................................................................................. 29
Anlisis microbiolgico de la determinacin de enterobacterias .............................................. 29
Identificacin de bacterias ......................................................................................................... 30
Fase1. Campo (captura, recoleccin) ............................................................................................ 32
Recoleccin de muestras en el restaurante la Venada ............................................................... 32
Elaboracin de trampas artesanales........................................................................................... 33
Procesamiento de la muestra (macerado, filtracin y siembra en caldo nutritivo) ................... 34
Siembra en caldo nutritivo ........................................................................................................ 35
Fase 2. Laboratorio: Procesamiento de Patas ............................................................................... 50
Fase 3: Laboratorio (repique, tincin, descripcin, y PCR) ......................................................... 56
Resultados y Discusin ................................................................................................................. 58
Conclusiones ................................................................................................................................. 63
Referencias bibliogrficas e infogrficas ...................................................................................... 65
7
VII
Lista de tablas
Lista de figuras
Lista de Apndices
Resumen
estudiantil La Venada, se trabaj en conjunto con Bienestar Universitario al hacer una campaa
masiva divulgando la informacin recolectada de este proyecto de investigacin mediante una
cartilla o folleto.
Abstract
Globally, house fly is a vector of pathogens and with concentration in urban areas of
human populations, this risk has increased. It is a proven transmitter of more than 30 viruses, 175
bacteria, 8 species of spirochetes, 3 rickettsias, 19 fungi, among others. Musca domestic L., is
attracted by substrates: food, waste, secretions, etc., making it an efficient mechanical vector of
pathogens. The objective of the study is to estimate the population sizes of the microorganisms in
the domestic M., to evaluate the role of them as a vector in the transport of enterobacteria and
other microorganisms of public health importance, ) Of foodstuffs and recognize the effect of
these microorganisms on human health. Three stages will be carried out.
During the first stage, the individuals were caught in handmade traps with chloroform,
three days (weekdays) in the sector of the restaurant La Venada. The second stage consists of the
microbiological analysis for the determination of enterobacteria. Maceration of insects in
different bacterial culture media such as MacConkey agar (agar selective for enterobacteria) and
blood agar (enriched culture medium recommended for the isolation and development of Gram-
positive and Gram-negative bacteria ), Incubated for 24 hours at 37 C. Then, colony
morphology and Gram staining are performed to determine bacterial morphology.
The third stage is the identification and subsequent confirmation of bacteria (genus),
conventional molecular biology PCR tests were performed. For the comparison of contamination
routes (food-vector) of the food products served at the restaurant La Venada, a triangulation of
data was carried out from the studies culminated in food sold in the restaurant and its
surroundings.
Keywords: Microbiological analysis, maceration, house fly, molecular biology PCR test
and artisanal trap.
14
Introduccin
Las infestaciones por miembros del Orden Dptera, tanto en los animales domsticos
como en el ser humano, son de gran importancia debido a las prdidas econmicas que conlleva,
al provocar la disminucin del rendimiento de productos y subproductos de origen animal. En el
expendio pblico de alimentos en Colombia, se encuentra la frecuente interaccin de la mosca y
los humanos. Mundialmente, se conoce a este insecto, como vector de agentes patgenos y con la
concentracin en reas urbanas de las poblaciones humanas, este riesgo se ha aumentado. Las
moscas, se consideran importantes vectores de infecciones entricas, que afectan a personas y a
los animales domsticos. Es un transmisor comprobado de ms de 30 virus, 175 bacterias, 8
especies de espiroquetas, 3 rickettsias, 19 hongos, ms de 30 protozoarios y numerosos
helmintos.
Las Enfermedades Transmitidas por los alimentos (ETAs) ocupan el segundo lugar entre
las diez primeras causas de morbimortalidad en el mundo, y segn la OMS (1996) el 70% de los
casos reportados corresponden a diarreas. El nivel de salud de la poblacin est relacionado
directamente con la higiene y seguridad de los alimentos que puedan adquirirse (Gambirazio,
2002). Se considera que las comunidades propias de reas climticas con predominio de altas
temperaturas, con malos hbitos de higiene, tienen mayor riesgo de contraer algunas ETAs
(Almeida, C. 1996).
Los principales agentes etiolgicos de las diarreas son los virus, protozoarios y bacterias,
la ms frecuentes pertenecen a los gneros de Salmonella, Shigella, Escherichia y Vibrio, las
cuales pueden transmitirse por la va ano-mano-boca o por la ingesta de alimentos y aguas
contaminadas (Olarte, J. 2008). La mayor parte de las diarreas infecciosas agudas son leves y
autolimitadas, siendo la rehidratacin oral el instrumento ms efectivo en el tratamiento del
sndrome diarreico (Luzmilla, Flores, Mendoza y Mundarain, 2007).
En la actualidad, existen distintas enfermedades que ocasionan diarreas, las cuales son
responsables de la gran morbilidad y mortalidad que existe en el pas con un resultado
impactante en la salud pblica.
Entre los diferentes factores que incrementan estas enfermedades, como la ausencia de un
abastecimiento adecuado de agua potable y una buena disposicin de excretas, se agrega el papel
que cumple un grupo de seres vivos muy diferentes entre s, pero conocidos en conjunto como
vectores.
Los vectores, que facilitan la difusin del agente infeccioso al transportarlo en su interior,
a veces con cambios morfolgicos (biolgicos), o por su adherencia a estructuras pilosas del
abdomen o patas (mecnicos), merecen ser estudiados por su amplia relacin y contacto con los
alimentos. Uno de ellos, la mosca comn (Musca domestica), muy frecuente en las actividades
del hombre incluyendo su alimentacin, ha sido elegida para este estudio.
La Universidad Surcolombiana al ser una entidad pblica que cuenta con servicios de
cafeteras y restaurante y que los brinda tanto para estudiantes como para la comunidad
educativa, es de vital importancia que el Bienestar Universitario como ente encargado vele por la
calidad de vida de la Comunidad Surcolombiana al hacer un seguimiento a la calidad de los
alimentos que se ofrecen a diario dentro y fuera de la Universidad, con el objetivo de evitar
posibles enfermedades transmitidas por vectores que contaminan los alimentos generando y
promoviendo diferentes programas, estrategias y proyectos que permitan adquirir estilos de vida
saludables.
Por lo tanto, teniendo en cuenta que la mosca es una especie cosmopolita que constituye
un problema de salud pblica en reas urbanas y explotaciones animales con un manejo sanitario
inapropiado, y de comportamiento polfago, es decir, ser atrada por diferentes sustratos
(alimentos, desperdicios, secreciones, y excretas) para alimentarse.
17
Antecedentes
Segn Estrada S., Ceballos M.T., Vanegas C., et al., 2011., en Bacterias identificadas
en la superficie de M. domstica y su potencial patogenicidad para el humano en la Universidad
de Antioquia, el objetivo que cumpli este estudio fue el de identificar las bacterias que
colonizan la superficie de Musca domstica y su potencial patogenicidad para los humanos,
realizando un estudio descriptivo exploratorio. Donde las moscas fueron atrapadas en diferentes
lugares, stas fueron procesadas con un procedimiento establecido: inicialmente se introdujo la
mosca en un tubo de ensayo seco, hasta que la mosca muri, luego se sumergi en un caldo de
BHI, como medio de enriquecimiento, el caldo se incubo y luego se sembr en diferentes agares,
donde se obtuvo crecimiento de varios gneros de bacterias, las cuales fueron identificadas,
siguiendo el proceso que tiene el Laboratorio Clnico Congregacin Mariana para la
identificacin de bacterias aerobias. A partir de este se concluy que la Musca domestica porta
una gran variedad de bacterias en su superficie, las cuales tienen la capacidad de producir en el
humano una gran variedad de enfermedades.
Segn Ramrez O.Y., Carvajal F.M., Ortega Y.R., Reina A.Y., Rojas M.I., 2012, en
Mosca domstica como vector mecnico de enterobacterias en expendios de embutidos de Tunja
(Boyac Colombia) realizado por la Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia
UPTC, el objetivo que cumpli este estudio fue la identificacin de enterobacterias transportadas
de forma mecnica por moscas recolectadas en expendios de embutidos de la plaza sur en Tunja
(Boyac); donde noventa moscas fueron capturadas y procesadas, aislando e identificando las
bacterias colonizantes, empleando tres tcnicas: a partir de patas y alas, de macerado y de
autosiembra. Obteniendo como resultado un total de ocho cepas encontradas, de las cuales cinco
fueron enterobacterias: Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp., Proteus
mirabilis y Yersinia sp, las dems cepas pertenecen a los gneros Aeromonas, Staphylococcus y
Streptococcus.
19
Segn Quiceno J., Bastidas X., Rojas D., Bayona M., 2010, en la mosca domstica
como portador de patgenos microbianos, en cinco cafeteras del norte de Bogot realizado por
la Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A., el objetivo que cumpli este
estudio fue establecer y demostrar los riesgos microbiolgicos de ambientes en donde concurre
la mosca domstica. Se realiz un estudio descriptivo de corte transversal, en cinco cafeteras del
norte de Bogot. La poblacin universo correspondi a las moscas presentes en los servicios de
alimentacin, de una zona del norte de Bogot-Colombia, en las que se practic anlisis
taxonmico y microbiolgico, correspondiente a la determinacin de enterobacterias, parsitos y
hongos.
Segn Moissant E., Tkachuk O., Romn R., 2004, en deteccin de agentes
bacterianos en adultos de Musca domstica (Diptera: Muscidae) recolectadas en Maracay, Estado
Aragua, Venezuela. El objetivo fue detectar la presencia de agentes bacterianos en adultos de
Musca domestica recolectadas en Maracay, Estado Aragua, Venezuela. Los ejemplares fueron
individualmente capturados, con trampas domesticas especiales para moscas, elaboradas con
frascos de vidrio de 500 cc, lavados y esterilizados en autoclave a 121 C, 15 lb de presin,
durante 15 minutos. En tres ambientes: galpn con animales, cuarto de basura y restaurante. Se
recolectaron 27 moscas adultas, de las cuales siete efectuaron una autosiembra espontnea en el
medio de cultivo Agar B.H.I. Los resultados bacteriolgicos indican la presencia de bacterias
aerbicas gram negativas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. De las siete moscas
20
Segn Bjar V., Chumpitaz J., Pareja E., Valencia E., et al. 2006, en Musca
domestica como Vector Mecnico de Bacterias Enteropatgenas en mercados y basurales de
Lima y Callao. El objetivo fue demostrar que la mosca domstica (Musca domestica) es un
vector mecnico de bacterias enteropatgenas en distritos de Lima y Callao. El estudio fue de
tipo descriptivo transversal. Entre mayo de 2004 y julio de 2005 se realiz un muestreo en
diferentes distritos de las provincias de Lima y el Callao teniendo en cuenta el ndice de
infestacin de cada zona elegida. Se recolectaron moscas de mercados, periferia y basurales
aledaos. En el laboratorio fueron procesadas en medios de cultivo para aislamiento de
enterobacterias y su identificacin. De un total de 780 moscas domsticas se aisl Escherichia
coli enteropatgena, Salmonella typhi, Shigella flexneri y Yersinia enterocolitica. Se estableci
una relacin directa entre el hallazgo de bacterias enteropatgenas y las zonas de mayor grado de
infestacin (>20 moscas/hora de observacin). El aislamiento de bacterias enteropatgenas en
Musca domestica permiti demostrar su papel vector.
Segn Urdaneta S., Talavera S., Verdn M., et al. 2011-2012, en papel de la mosca
domstica (Musca domestica) como vector de Campylobacter Jejuni y Campylobacter Coli en
granjas de pollos de engorde de Espaa. El objetivo del presente estudio fue evaluar el papel de
las moscas (Diptera: Brachycera) como potencial vector para Campylobacter Jejuni y
Campylobacter coli mediante un estudio de campo longitudinal en 5 granjas de engorde
espaolas, de Abril a noviembre de 2011 y 2012. La prevalencia de moscas positivas a C. Jejuni
y C. coli se determin en 1.304 moscas capturadas de los alrededores de las naves de las granjas.
Tras su captura, las moscas se identificaron taxonmicamente y posteriormente se procedi al
aislamiento individual de Campylobacter. Para ello, las moscas se maceraron individualmente y
se realiz un pre-enriquecimiento en caldo Bolton durante 24 h a 42C. Diez microlitros del
sobrenadante se sembraron en agar selectivo (mCCDA). Las placas se incubaron en condiciones
de microaerofilia durante 48 h a 42C.
21
Fundamento terico
Figura
Las formas en que este insecto comn puede transmitir los patgenos son: a) a travs
de su superficie corporal; b) por regurgitacin de comida contaminada y c) por defecacin de
patgenos, siendo esta va muy importante debido al efecto protector que le da el interior de su
organismo al patgeno presente (Sasaki et al. 2000).
Clase Insecta
Subclase Pterygota
Orden Dptera
Suborden Cyclorrapha
Familia Muscidae
Genero Musca
Especie Domestica (Salazar, 1981).
Figura.
Ciclo biolgico
La mosca domstica posee varias partes en las cuales se divide su cuerpo (figura2), ojos
compuestos por poderosas lentes, el trax presenta las patas (6, es decir, 3 pares) que se dividen
en 3 (fmur, tibia, tarso), las antenas, donde se encuentra el olfato. El aparato bucal, que
bsicamente est formado por la trompa de tipo chupador y las alas (movidas por unos poderosos
msculos (escudete)). Pone de 100 a 150 huevos en una postura, la que realiza varias veces para
llegar a un total de alrededor de 600 huevos. Las heces frescas de caballos constituyen el medio
predilecto, pero puede hacerlo en heces de otros animales y del hombre o en otro tipo de materia
24
orgnica, principalmente de origen vegetal. Los huevos son color crema, de 1 mm de largo, de
forma alargada. La larva eclosiona en un periodo de12 a 24 horas, despus de 3 a 7 das alcanza
un tamao de 10 a 12 mm. El cuerpo de la larva es puntiagudo anteriormente y ancho
posteriormente. La distancia entre las dos placas estigmticas posteriores es menor que el ancho
de la placa y cada una presenta tres hendiduras. En el extremo anterior del cuerpo tiene un par de
ganchos conectados con el aparato cefalofarngeo.
Durante el desarrollo larvario, suceden tres mudas y la pupa conserva la ltima, sta
es rgida y de color caf. Permanece en el suelo y el desarrollo o metamorfosis tarda de 3 a 26
das, dando lugar a nuevos individuos (figura3). Despus ocurre la fecundacin y se inicia un
nuevo ciclo al comenzar la postura. El ciclo puede desarrollarse en 12 das en condiciones
favorables. Las moscas no hibernan, pero los huevos, las larvas y las pupas pueden sobrevivir al
fro del invierno (Quiroz ,1984; Vera y Domnguez., 1985). El nmero de larvas que se pueden
criar en las excretas es muy alto; Herms encontr un promedio de 685 por libra de estircol de
caballo.
Transmisin de patgenos
Como sucede con otras moscas, el adulto de la mosca domstica emerge de la pupa y se
abre camino a travs del medio en donde se desarroll como larva; por lo anterior, el insecto se
impregna fcilmente de restos de excremento y/o basura, condicin que lo hace un peligroso
portador de patgenos. Para dar una idea al respecto, ciertos investigadores han reportado que
slo un espcimen es capaz de llevar en las patas, alas, cuerpo y partes bucales de 2 hasta 6
millones de bacterias.
Moscas eusinantrpicas
Moscas endoflicas.
Moscas exoflicas.
Justificacin
Existen tres formas en las cuales las moscas pueden transmitir patgenos: a travs de su
superficie corporal (patas, partes bucales), ya que estn cubiertas de espinas y cerdas en las
cuales el material contaminado puede ser atrapado y transportado, por regurgitacin de comida
como preludio al alimentarse, ya que es comn que una pequea gota de la comida ms reciente
sea vomitada sobre el substrato, puede ser una ruta importante de infeccin para patgenos
pequeos y por ingestin y defecacin de patgenos como una de las vas potenciales ms
importantes, ya que el agente infeccioso es protegido mientras se encuentra en el aparato
digestivo del insecto y mantenido por perodos de tiempo mayores que en las rutas anteriores
(Bjar, et al., 2006).
Objetivos
Objetivo General
Objetivos especficos
Metodologa
Figura.
Criterios de inclusin
Criterios de exclusin
Moscas de otras especies, moscas que no pertenezcan al lugar de estudio y moscas que no
tengan adecuada manipulacin durante su recoleccin, es decir, que no estn en las trampas
29
artesanales, o que no sean llevadas directamente al laboratorio para su estudio, con su respectiva
rotulacin.
ndice de infestacin
Para este anlisis, se efectu una siembra de la muestra (macerado de 120 moscas
capturadas) en caldo nutritivo enriquecido; del cual se filtran del macerado 15 ml de extracto
final con papel filtro y se distribuye de la siguiente manera: 10 primeros tubos de ensayo con 1
ml de extracto, del 11 al 15 con 0,5 ml de extracto, y del 16 al 20 con 0,5 ml de macerado
precipitado y del 21 al 25 con 1 ml del macerado precipitado, se lleva a la incubadora a 37C
durante 24 horas.
Identificacin de bacterias
Estratgicamente se ubicaron las trampas por cada esquina en el rea del restaurante, bajo
el mesn donde se sirven los alimentos, bajo algunas mesas, en las esquinas del servicio de
restaurante. En general, las trampas se dispusieron as:
Figura.
Figura.
Para la elaboracin de las trampas artesanales, lo primero que se hizo fue la recoleccin
de 30 frascos de gaseosa de 1,75 ml. Los cuales se recortaron justo por el borde superior donde
est pegada la etiqueta en el envase de gaseosa. Se procedi a realizar la mezcla de vinagre con
azcar y una rodaja de pltano como carnada, la cual se coloc en el fondo del recipiente, luego
se le abrieron unos agujeros al envase por donde ingresa la mosca y queda capturada. Se da la
vuelta a la tapa del frasco de gaseosa y se pega justo a la otra mitad del frasco de gaseosa.
Inicialmente esta tcnica de carnada es poco efectiva por lo que se cambia por pedazos de
carne suspendidos por un hilo dentro del recipiente con el cual se logra atrapar las moscas.
Figura.
Figura.
Figura.
Figura.
Figuras.
Figura.
Pasadas las 24 horas de los caldos nutritivos, se observa turbidez en los medios lo que
indica crecimiento bacteriano.
Se repican en los agares MacConkey y agar sangre, sembrando cada muestra en el medio
por la tcnica de agotamiento y utilizando toda la caja de agar (MacConkey y agar Sangre).
38
Figura.
Figura.
Figura.
Figura.
fermentadora por el color rosado o fucsia que presentan y las no fermentadoras son colonias de
color amarillo verdoso, para el agar Sangre solamente se observa el crecimiento y la morfologa
de la colonia.
Para purificar la bacteria, se toma una pequea muestra de la colonia y se siembra por
agotamiento en el agar MacConkey, que es un medio diferencial para grmenes Gram negativos,
lo cual nos ayuda a tener ms especificidad del microorganismo y facilita su identificacin al
estar puro.
Figura.
Figura.
Se toma de cada colonia encontrada en los diferentes medios una muestra con ayuda de
un hisopo estril se coloca sobre una lmina portaobjeto, se deja secar a temperatura ambiente y
se fija al calor, luego se colorea con colorante de Gram. Finalmente, se le agrega una gota de
aceite de inmersin y se observa en el microscopio con el objetivo de 100x, obtenindose:
43
Figura.
Para la segunda fase se delimit solo el macerado de una parte de la mosca, en este caso
las patas del insecto.
Para esta fase se procede a lo mismo que la fase anterior, se hizo la colecta o captura de
las respectivas moscas de cada uno de los sitios estudiados (restaurante La Venada). En total se
recolectaron 22 ejemplares de M. domstica. Luego estos se procesaron en un mortero
macerando solo las patas durante un minuto para formar una mezcla compacta del material. Se
agreg 2ml de agua destilada estril y luego se recolect todo el contenido en un beaker el cual
se recogi 2,7 ml final de sobrenadante del macerado y se trasvas del mortero al beaker con
ayuda de un papel filtro. Del proceso del macerado se obtuvo 2,7 ml de sobrenadante del
macerado el cual se sembr.
Figura.
Figura 22. Macerado, filtracin, siembra e incubacin de los caldos nutritivos de la muestra
52
Figura.
Figura.
Este medio por lo general es indicado pues conserva mejor las muestras de
microorganismos recolectadas, al aadir iones de Calcio y Magnesio, que ayudan a conservar la
permeabilidad de la clula bacteriana y la presencia de carbn en el medio neutraliza inhibidores
y toxinas bacterianas, y mejora la recuperacin de diferentes especies microbianas hacindolo un
medio de transporte eficaz para muestras.
Los medios de transporte AMIES con carbn activado ajustados y tapados se a incuban
48 horas para permitir que la colonia crezca y despus de esto son embalados segn las normas
de bioseguridad se envan a la ciudad de MONTERIA CRDOBA, al laboratorio de
Microbiologa y Biologa Molecular del Dr. Salim Mattar, quin gentilmente nos colabor en su
laboratorio. Para el anlisis bioinformtico de la amplificacin de ADN se realiz una PCR
convencional de las muestras aisladas de los microorganismos de la M. domestica como vector
de enterobacterias y bacterias en general.
58
Resultados y Discusin
MONTERIA NEIVA
Nmero Cdigo Microorganismos Microorganismos
1 1F E. coli E. coli
2 1 NF K. pneumoniae; Mezclada con
Proteus Proteus
3 2F E. coli E. coli
4 2 F 1 ml E. coli E. coli
5 3F E. coli E. coli
6 3 NF K. pneumoniae Mezclada con
Proteus
7 4F K. pneumoniae K. pneumoniae
8 4 NF K. pneumoniae; Mezclada con
Proteus Proteus
9 5F E. coli E. coli
10 5 NF K. pneumoniae K. pneumoniae
11 6F E. coli E. coli
12 6 NF K. pneumoniae K. pneumoniae
13 7F E. coli E. coli
14 8F K. pneumoniae E. coli
15 8 NF K. pneumoniae K. pneumoniae
16 9 NF E. coli E. coli
59
17 10 F E. coli E. coli
18 10 NF K. pneumoniae; Mezclada con
Proteus Proteus
19 11 NF K. pneumoniae No identificada
20 12 F K. pneumoniae K. pneumoniae
21 13 NF K. pneumoniae No identificada
22 14 NF K. pneumoniae No identificada
23 15 F K. pneumoniae No identificada
24 16 F E. coli E. coli
25 17 F E. coli K. pneumoniae
26 17 F 0,5 ml K. pneumoniae K. pneumoniae
27 17 NF 0,5 ml K. pneumoniae; Mezclada con
Proteus Proteus
28 18 F K. pneumoniae K. pneumoniae
29 19 F 0,5 ml E. coli E. coli
30 20 F K. pneumoniae No identificada
Fuente: Elaboracin propia, 2017
Al analizar el cuadro comparativo de las cepas que se encontr por el mtodo manual en
Neiva y los resultados de las mismas por PCR en Montera, podemos concluir lo siguiente:
progresar en algunos casos a diarrea sanguinolenta (colitis hemorrgica). Tambin puede generar
fiebre y vmitos.
Para el caso de la Klebsiella spp se aisl en la mayora de las comidas preparadas en las
ventas ambulantes y en los restaurantes de la Universidad con un (40%). Frente al (43,33%)
encontrado en la mosca, indicndonos que este puede encontrarse no solo en los humanos sino
tambin en un insecto que pudo haber contaminado la comida al posarse sobre ella.
Para el caso de Proteus spp se aisl a partir de dos jugos naturales y arepas de maz,
procedentes de las ventas ambulantes que se encuentran a las afueras de la Universidad y es
representando en un porcentaje del 11%. De la cafetera y el restaurante de la Universidad no se
aisl este microorganismo. Frente a un (16,66%) indicando que este microorganismo si vive
como husped en la mosca y es capaz de contaminar cualquier tipo de comida debido a que es
transportado por el insecto el cual lo transfiere por la regurgitacin al posarse sobre el alimento
que se encuentra servido en los platos y que puede causar una intoxicacin en las personas que
toman el servicio de alimentacin en el restaurante.
Ahora para la elaboracin del material de divulgacin de la cartilla y/o folletos estos
surgen de la necesidad de crear conciencia y ensear a la comunidad educativa en el manejo de
las tcnicas correctas de asepsia y en la preparacin de los alimentos, para prevenir su
contaminacin al ser consumidos en el servicio de alimentacin del restaurante estudiantil La
Venada, donde se trabaj en conjunto con Bienestar Universitario al hacer una campaa masiva
divulgando la informacin recolectada de este proyecto de investigacin y los efectos que
producen estos microorganismos en la salud humana.
63
Conclusiones
Esta investigacin permiti comprender la importancia de conocer cules son los problemas
de salud en los que se ven afectados tanto estudiantes, y comunidad en general frente a la mala
manipulacin de los alimentos, utensilios y la propagacin de los insectos vector como lo es la
mosca, se ha presentado una seria problemtica en los ltimos aos de servicio que brinda el
restaurante La Venada, situacin que conlleva incluso a analizar porque no se han tomado las
medidas necesarias de control frente a la calidad del servicio que lleva prestando la universidad
y como se ve afectada la imagen de la misma, frente a su dficit en el manejo de estas
situaciones.
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Gambirazio, C. (2002). Control Sanitario de Alimentos Expendidos en la Va Pblica. Inf. Tc.
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TINCIN DE GRAM:
1. Realizar frotis, fijar al calor de la llama, dejar secar.
2. Agregar colorante de cristal violeta por 1 minuto.
3. Lavar con agua destilada
4. Agregar lugol de Gram por 1 minuto.
5. Lavar con agua destilada
6. Adicionar alcohol de acetona por 30 segundos.
7. Lavar con agua destilada
8. Agregar fucsina de Gram por 1 minuto y lavar con agua destilada. Dejar secar.
El cido en el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo fenol. A 6 horas de la
incubacin, la zona de la estra y el fondo del tubo tendrn un color amarillo (fermentador de
glucosa).
Si el fondo permanece rojo, no hay variacin de pH (no fermentador de glucosa). Al agotar la
glucosa la bacteria utiliza la lactosa o sacarosa. Despus de 18 - 24 h, el medio permanece
amarillo, reaccin cido sobre cido (A/A). Fermentador de lactosa. La produccin de gas
romper el agar o lo empujara hacia arriba. Reaccin A/A ms gas. Si no utiliza la lactosa, har
uso de protenas o aminocidos. El metabolismo proteico se produce en la superficie de la zona
inclinada donde el oxgeno es abundante. 18 - 24 h de incubacin: zona inclinada roja fondo del
agar amarillo (metabolismo anaerobio de glucosa inicial). Reaccin alcalina sobre cido K/A.
Para el crecimiento positivo de E. coli y Klebsiella, las colonias deben fermentar los tres
azucares (glucosa, lactosa y/o sacarosa), es decir, debe tener pico cido / fondo cido (A/A). Se
puede presentar ruptura del medio o burbujas lo que indica que el microorganismo produce gas.
En E. Coli y Klebsiella pneumoniae., la produccin de H2S resulta ser negativa, es decir, que no
ennegrece el medio.
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A/A: fermentacin de glucosa y lactosa (Pico de flauta cido/ profundidad cida). Caractersticos
de E. coli y grupo Klebsiella - Enterobacter.
Inoculacin del medio se da por picadura y estra, inculo liviano. La Temperatura para el
crecimiento bacteriano se da de 35 - 37C. El Tiempo de crecimiento se da de 18 24 h.
Para el crecimiento positivo de E. coli y Klebsiella pneumoniae, las colonias deben realizar una
desaminacin oxidativa o descarboxilacin de la lisina, es decir, debe tener pico alcalino / fondo
alcalino (k/k). Se puede presentar levantamiento del medio o burbujas lo que indica que el
microorganismo produce gas. En E. Coli y Klebsiella pneumoniae., la produccin de H2S resulta
ser negativa, es decir, que no ennegrece el medio.
Para el caso de Proteus mirabilis, este microorganismo no realiza la desaminacin, es decir, debe
tener pico rojo / fondo cido (R/A). Se produce gas y H2S, es decir, hay presencia de burbujas y
ennegrecimiento del medio.
Para microorganismos como E. coli, el medio permanece de color verde debido a que no hay
desarrollo bacteriano y no hay cambio de color. Para el caso de Klebsiella pneumoniae y Proteus
mirabilis, se registra crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
Caldo Urea:
Este medio es utilizado para la identificacin bacterias que hidrolizan urea. Es una diamida del
cido carbnico y se hidrolizan fcilmente, con liberacin de amoniaco y dixido de carbono. El
amoniaco reacciona en solucin para formar carbonato de amonio, lo que produce alcalinizacin
y aumento de pH del medio.
Para microorganismos como E. Coli, el medio permanece de color amarillo debido a que los
microorganismos no son capaces de hidrolizar la urea y esto hace que el medio permanezca del
mismo color que antes de la incubacin. Para el caso de Klebsiella pneumoniae. y Proteus
mirabilis, se registra crecimiento y por lo tanto se evidencia hidrlisis de urea, cambiando el
medio a color rosado - rojizo.
Produccin de Indol:
El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres
metabolitos principales: indol, escatol e indolactico. La formacin de indol se produce
solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono.
Movilidad:
Positiva: los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio
provocando turbiedad.
Negativa: Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra.
Agar MacConkey:
Las colonias de los microorganismos fermentadores de lactosa (coliformes) en agar MacConkey
son de color rojo ladrillo y eventualmente rodeadas por bilis precipitada. Este es un medio
selectivo para el crecimiento de enterobacterias. Contiene peptona, sales biliares, lactosa y rojo
neutro como indicador de pH (evidencia la fermentacin de la lactosa por el cambio de color a
fucsia o violeta y los no fermentadores a amarillo).
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Agar Sangre:
Se observa hemlisis de este medio: (hemlisis alfa) lisis parcial de los glbulos rojos, se
observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia. Es debido a la oxidacin de la
hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el perxido de hidrogeno
generado por los microorganismos. Est compuesto por la infusin musculo de corazn y
peptona, la cual permiten el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, incluso
algunos que tienen exigencias nutricionales. El cloruro de sodio es el encargado de mantener el
balance osmtico y el agar es el agente solidificante. (Hemlisis beta) en este caso la hemlisis
es total y el halo que rodea a las colonias es totalmente transparente. (Hemlisis gamma) no hay
hemlisis, el microorganismo en cuestin no es capaz de realizar la hemlisis y por tanto no
existe halo alrededor de la colonia.
Escherichia coli:
Colonias aisladas, medianas, circulares, convexas, bordes redondeados, lactosa positivas lo que
les da coloracin rosada con consistencia cremosa en agar MacConkey.
Klebsiella pneumoniae:
Colonias grandes planoconvexa, mucoides, forma irregular, tambin se observan redondeadas y
brillantes, bordes ondulados, lactosa positivo (consume el carbohidrato lactosa lo cual acidifica
el medio y el indicador rojo de fenol cambia rojo-rosado, por eso se ven de ese color en agar
MacConkey.
Proteus mirabilis:
En MacConkey las colonias son (no fermentadoras de Lactosa) transparentes o amarillas, se
forma una especie de ola alrededor de las colonias bacterianas y esta se desplaza de forma radial.
En agar sangre presenta el fenmeno se swarming, se caracteriza por la formacin de una
pelcula que se extiende por todo el medio de cultivo.
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Nmero Cdigo TSI H2S GAS LIA Cit. Urea Indol Motilidad Microorganismos
S.
1 1F A/A - + K/K - - + + E. coli
2 1 NF K/A + + K/A - + - + Mezclada con
Proteus
3 2F A/A - + K/K - - + + E. coli
4 2 F 1 ml A/A - + K/K - - + + E. coli
5 3F A/A - + K/K - - + + E. coli
6 3 NF K/A + + K/A - + - + Mezclada con
Proteus
7 4F A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
8 4 NF K/A + + K/A - + - + Mezclada con
Proteus
9 5F A/A - + K/K - - + + E. coli
10 5 NF A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
11 6F A/A - + K/K - - + + E. coli
12 6 NF A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
13 7F A/A - + K/K - - + + E. coli
14 8F A/A - + K/K - - + + E. coli
15 8 NF A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
16 9 NF A/A - + K/K - - + + E. coli
17 10 F A/A - + K/K - - + + E. coli
18 10 NF K/A + + K/A - + - + Mezclada con
Proteus
19 11 NF No identificada
20 12 F A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
21 13 NF No identificada
22 14 NF No identificada
23 15 F No identificada
24 16 F A/A - + K/K - - + + E. coli
25 17 F A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
26 17 F 0,5 A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
ml
27 17 NF K/A + + R/A - + - + Mezclada con
0,5 ml Proteus
28 18 F A/A - + K/K + + - - K. pneumoniae
29 19 F 0,5 A/A - + K/K - - + + E. coli
ml
30 20 F No identificada