UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA

ESPECIALIDAD TERAPIA FISICA Y REHABILITACION

FISIOLOGIA

III CICLO
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA

Definicin de Bioseguridad:

Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar

seguridad al personal que trabaja en salud frente a los diferentes riesgos
producidos por agentes: biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos.
Agentes de riesgo o causantes de dao: agentes biolgicos trasmitidos por
ingesta, inhalacin, inoculacin, y por contacto directo a travs de piel y
mucosas.
Agentes fsicos y mecnicos: Temperaturas extremas, radiaciones ionizantes,
contacto y conexiones elctricas, defectuosas, vidrios rotos.
Agentes qumicos: corrosivos, txicos, carcinognicos, inflamables, explosivos.
La Bioseguridad implica una accin de conjunto: Todos deben cumplir las
normas de Bioseguridad: "El descuido de una persona es el riesgo de todos"
Riesgo Biolgico: es la probabilidad de infectarse con un agente patgeno
(agente patgeno se llama a toda aquella noxa que es capaz de producir una
enfermedad en la actividad laboral.
Exposicin: Es un contacto que implica riesgo con un patgeno capaz de
trasmitirse por la va donde se est produciendo la exposicin.

Propsito de la Bioseguridad:

Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las

actividades de cada rea de trabajo en salud para prevenir las exposiciones a
fluidos con riesgo biolgico y vigilancia del cumplimiento de las normas de
bioseguridad. Adems promover, sugerir y establecer polticas que apoyen la
educacin continua de los trabajadores de salud.
Debe tenerse un suministro oportuno y continuo de insumos necesarios para la
proteccin. La disponibilidad de agua potable es primordial.
Disponibilidad de lavamanos cerca del rea de atencin de pacientes
Laboratorio de trabajo.

Prcticas de seguridad

Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiolgico o ingresa a l debe seguir

reglas de seguridad. Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no
solamente para la acreditacin acadmica, sino porque consisten en prcticas que
otorgan seguridad y proteccin al personal, alumnos e investigadores que trabajan en
los laboratorios bioqumicos, fisiolgicos, bacteriolgicos, biolgicos, qumicos, etc.
Muy especialmente en el campo mdico donde trabajamos con muestras material
biolgico que es considerado potencialmente patgeno patgeno. La mxima
seguridad y proteccin es necesaria en estos casos

Practicas generales

Se prohbe fumar, comer y aplicarse cosmticos, para evitar la diseminacin de

agentes infecciosos o productos qumicos txicos de las mallas hacia la boca.
Con el fin de evitar el contacto con agentes infecciosos o diseminarlos, debe

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Y REHABILITACION
utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo, mandil,
la bata de laboratorio. Estas prendas de proteccin externa no deben usarse
fuera del laboratorio. Los zapatos han de ser de punta y taln cerrado. No es
conveniente que las personas que trabajan en el laboratorio usen lentes de
contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que
pueden producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que
las sustancias permanezcan ms tiempo en la crnea.
Se recomienda el uso de lentes de proteccin o protectores para la cara a las
personas que usan lentes de contacto, en particular si hay alto riesgo de
vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyera de tipo colgante, el cabello largo y
barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u
otras superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con
movimiento, como mquinas rotatorias o centrifugas. Se prohbe estrictamente
pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier otra
sustancia biolgica debern usarse pipetas manuales automticas.

Derrames . .

Es necesario desarrollar y tener polticas escritas y procedimientos para instruir

a los alumnos y a los empleados acerca de la manera de manejar derrames
qumicos y biolgicos. Existen en el comercio estuches con insumos para ambos
tipos de derrames. Si no existen tales normas en la institucin el laboratorio
debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.

Lavado de manos

El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminacin

de agentes infecciosos. Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es
necesario. Porque es posible que stos tengan huecos microscpicos. Al tratar
con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.

Limpieza

No debe permitirse que la basura, los desperdicios biolgicos, infecciosos. y el

material de vidrio sucio se acumulen en grandes cantidades en el laboratorio.
Los recipientes con muestras de desecho y agentes etiolgicos deben taparse
cuando no se estn empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las
superficies de trabajo con algn desinfectante al comenzar y terminar cada
turno. El personal de laboratorio fisiolgico es responsable de mantener el rea
de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya servicio de limpieza adicional por
parte de la institucin.

Etiquetas y seales

Todos los recipientes que contienen productos qumicos deben etiquetarse con
claridad, indicando el nombre del producto y cualquier precaucin para su
manejo. Las reas en que se almacenan productos inflamables, peligrosos o
txicos y carcingenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas
claramente. Las reas en que se almacenan o analizan sangre o lquidos
corporales deben estar marcadas claramente con el signo de riesgo biolgico.
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Y REHABILITACION
Desecho de desperdicios

Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biolgicos. El

desecho de materiales biolgicos, como desperdicios infecciosos, se examina y
regula en la actualidad por leyes especficas del Ministerio de Salud Pblica.

Agujas y objetos puntiagudos

Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo fsico de infeccin

potencial para el personal de laboratorio fisiolgico. Todas las agujas
desechables y dems objetos punzantes deben colocarse en un reclpl9nte
resistente a la perforacin y a prueba de fugas, marcado con el smbolo de
riesgo biolgico.
Estos recipientes se descartan, siguiendo las polticas de la institucin, cuando
estn llenos hasta la mitad o las tres cuartas partes. La mayora de las
instituciones incineran los recipientes que contienen objetos punzantes.
Inmediatamente despus de usada una aguja deber incinerarse y para ello
existen en la actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados
destructores de agujas. Nunca, deber refundarse volverse a colocar la
cubierta de las agujas a menos que se utilice algn dispositivo como pinzas
diseadas para este fin, para evitar la puncin cutnea accidental. Las agujas
nunca deben cortarse, ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de
otros lquidos al medio.

SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS

Tipos de Incendio

En el laboratorio Fisiolgico u otros laboratorios biolgicos se requieren

lquidos inflamables y combustibles para ciertos procedimientos, y en ellos
tambin existe el riesgo potencial de incendios elctricos y de basura. El
cientfico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de
afrontarlos en caso de urgencia. Los incendios se clasifican de la clase A a la D.
Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios, como madera o
papel; los de la clase B ocurren con lquidos inflamables; en los de la clase C
participan circuitos elctricos energetizados, sin importar el combustible; y los
de la clase D, son producidos por metales combustibles como el sodio. Para
cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuado con el
fin de controlar de manera eficiente el fuego y evitar que se ste se extienda.

Extintores Extinguidores para incendios. Clases.

Los extintores contra incendios contienen diferentes sustancias y estn

marcados segn el tipo de incendio para el que deben emplearse. Los
extintores clase A estn llenos de agua y nunca deben utilizarse para incendios
de tipo elctrico. ya que el agua puede conducir la electricidad de regreso a la
persona que tiene el extintor en las manos. Los extintores clase B contienen
productos qumicos secos, espuma acuosa que forma una capa (AFFF) o dixido
de carbono. Los extintores clase C estn llenos de dixido de carbono o Halon;
los de la clase D de un polvo seco especial que contiene un enlazante
termoplstico que permite que el agente forme una corteza slida al
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Y REHABILITACION
calentarse. Hay extintores que pueden emplearse para Incendios de clases A ,B
y C. Contienen un polvo seco y pueden utilizarse con eficacia y seguridad para
las tres clases de incendios. Generalmente este tipo de extintores es el que se
compra para uso en el hogar o en las oficinas. Sin embargo, si se emplea para
incendios de equipo elctrico en el laboratorio, es probable que sea difcil o
imposible eliminar posteriormente dicho polvo de los instrumentos. Por tanto,
se recomiendan los extintores de dixido de carbono para incendios de equipo
elctrico.

Causas de incendio y su Prevencin

Las causas fundamentales de incendios en el laboratorio son descuido, falta de

conocimiento acerca de los productos qumicos que se utilizan, permitir que se
efecten procedimientos sin la vigilancia adecuada, sobrecarga de circuitos elctricos,
llamas de gas abiertas. Es necesario impartir peridicamente conferencias para
instruccin sobre seguridad en el trabajo, con el fin de recordar a los empleados la
manera segura de proceder para evitar incendios y otros tipos de accidentes.

En caso de que se produzca un incendio es necesario ponerse en contacto con el

departamento de bomberos y solicitar ayuda antes de intentar extinguirlo, Se pierde
tiempo importante cuando se trata de apagar el incendio primero, y despus se solicita
ayuda. Los pasos que deben seguirse en caso de incendio son:

1. Rescatar a cualquier persona que se encuentre en peligro.

2. Aislar el incendio cerrando alguna puerta.

3. Solicitar ayuda.

4. Intentar extinguido.

5. Evacuar las instalaciones en caso de que no se pueda apagar el fuego

Por supuesto, cuando hay varias personas presentes, estos pasos pueden llevarse a
cabo de manera simultnea y rpida en un esfuerzo conjunto. Es necesario adiestrar al
personal de laboratorio en el uso de los extintores contra incendios. En general, el
departamento de incendios de la localidad o el comit de seguridad de la institucin
proporciona este entrenamiento.

SEGURIDAD BIOLOGICA

Proteccin Personal

La dispersin epidmica del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha

revivido la preocupacin acerca de las enfermedades que se transmiten por la
sangre entre las personas que trabajan en el laboratorio. Se sabe que las
personas que laboran en los laboratorios mdicos en general, fisiolgicos,
bacterilogos, bilogos y otros relacionados con la salud en general, conforman
un grupo de alto riesgo para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas
con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana (HIV). En 1987 el Centro de
Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron recomendaciones
para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de
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 EPTM TERAPIA FISICA
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adquirir la infeccin por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. Entre las
recomendaciones se aconseja que "se tomen precauciones congruentes al
manejar sangre y lquidos corporales de todos los pacientes y las muestras que
se obtengan".
Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen
el uso de equipo para proteccin personal, como guardapolvos, mandiles,
batas, guantes descartables y protectores para los ojos al manipular sangre y
lquidos corporales en el laboratorio. La revisin de los CDC en 1988 recomend
usar equipo de proteccin personal para manejar todas las sustancias
biolgicas y animales. Deben tratarse todas las secreciones y excreciones
corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras enfermedades
adems de HBV y HIV que se transmiten a travs de diversos lquidos del
organismo humano y de los animales.
En 1991 la OSHA public una regulacin final la Occupational Exposure to
Bloudborne Pathogens (Exposicin ocupacional a patgenos que se transmiten
por la sangre). Esta regla indica que el patrn debe proporcionar equipo de
proteccin personal que no permita que los materiales potencialmente
infecciosos entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del
trabajador en condiciones normales de uso. La regla tambin indica la manera
correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biolgico y seala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el
tratamiento tras alguna exposicin a todos los empleados que corran este
riesgo.
Adems de describir equipo de proteccin personal, dicha norma incluye
instrucciones para el lavado de manos, transporte de muestras, uso de pipetas,
forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y descontaminacin del
equipo.

Derrames

Es necesario que las personas que limpian algn derrame biolgico utilicen
guantes descartables y bata de laboratorio. Se colocan toallas desechables
sobre el derrame y se vaca desinfectante sobre ellas. Tras dejarlo reposar
algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material
absorbente (los cojinetes absorbentes son tiles para derrames grandes) A
continuacin se coloca el material contaminado en un recipiente para riesgos
biolgicos: bolsas plstico grueso color rojo en el Per y bolsa de color negro
para basura domstica.
Despus de absorber la mayor parte de material, el rea se limpia con un
desinfect8nte de fuerza intermedia o alta, por ejemplo, dilucin de Leja 1:10.
La solucin desinfectante se absorbe con material desechable. El rea se
enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente
preparar un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biolgico
que contenga todos los materiales necesarios para efectuar la limpieza de este
tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan dichas muestras.

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

SEGURIDAD QUIMICA

Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales

En Agosto de .1987.)a OSHA enmend la norma Federal Hazard Communication

Standard 29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard), hacindola extensiva a
todas las industrias, incluyendo las instalaciones para el cuidado de la salud. Esta
norma establece que los responsables de cada rea determinen si se utilizan
productos qumicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados hojas
con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente
los recipientes que contienen el producto, indicando el riesgo, y se mantendr una
lista de productos qumicos peligrosos, es decir, un inventario de productos
qumicos, y proporcionen al empleado informacin y entrenamiento, y desarrollen
un programa de comunicacin de riesgos por escrito.

Informacin que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material grupo de
sustancias relacionadas, de uso en Laboratorio fisiolgico y otros Laboratorios
biolgicos.

1. Identificacin del producto qumico (nombre qumico, y sinnimo y/o

nombre vulgar.)

2. Ingredientes peligrosos

3. Datos fsicos

4. Datos de incendios y explosiones

5. Informacin de riesgos para la salud

6. Datos de reactividad

7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho

8. Informacin de proteccin personal.

9. Precauciones especiales y comentarios

OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
ANIMALES Y SERES HUMANOS

MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACION

Manejo de Animales

La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de

laboratorio es la instruccin prctica directa. Pueden enunciarse aqu algunos
principios generales.
El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos.
cobayas. ratones)., pequeos araazos cuando el animal trata de escapar; pero
raras veces intenta ste lesionar al operador. En el caso de las ratas, las cosas
cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir
mordeduras peligrosas, Tambin los monos deben manejarse con cuidado. En
cualquier caso, es indispensable que aun los pequeos araazos de animales se
traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con material
patolgico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas
medidas para proteger al personal contra las consecuencias de la mordedura.
Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse mdicamente cualquier
lesin, por pequea que sea.

Toma de Muestras de Sangre

La muestra de sangre para las pruebas de laboratorio pueden tomarse en

diferentes sitios: capilar o perifrica, venosa y ocasionalmente arterial. Esta
muestra se utiliza para la valoracin de diversos parmetros del medio interno
que puede llevarse a cabo en sangre completa o una fraccin de la misma. sea
plasma o suero. Si la muestra sangunea no se recoge con una tcnica adecuada
puede ocurrir que los exmenes proporcionen informacin inexacta o
incorrecta bien que la muestra se rechace y sea necesario repetir la puncin.
Deben tomarse precauciones en todos los casos por lo que la obtencin y
manipulacin de las muestras se harn con guantes quirrgicos descartables.

Sangre Capilar o Perifrica

La sangre que suele llamarse capilares, al menos parte arteriolar se obtienen

por o general de: a). La yema del dedo; b). el borde del lbulo de la oreja; y c).
el taln en los nios pequeos En cualquier de estos sitios el rea debe de estar
tibia (ni fra ni congestionada) ya que de otra manera la composicin de la
sangre varia por la xtasis o la dilucin. Sin embargo debe recordarse que aun
ejecutando una buena toma, los valores de los parmetros difieren entre la
sangre capilar y la venosa. Usar alcohol y lancetas descartables.

TECNICA

1. Limpie la piel con una torunda de algodn con alcohol de 70 o con otro
desinfectante adecuado y deje secar.
2. Haga una puncin profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estril
desechable. La puncin debe efectuarse de un golpe y rpidamente para
que resulte casi indolora (sobre todo el borde del lbulo de la oreja).
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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
3. La primera gota de sangre se elimina porque contiene desechos tisulares. La
sangre no debe exprimirse o se obtendr una muestra diluida; peso s
puede hacerse presin a distancia del sitio de la puncin. Tras concluir la
toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que debe
presionar sobre el sitio de lesin.

SANGRE VENOSA

Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas ante cubitales, pero con
frecuencia tambin se puncionan las venas de las manos las muecas o
cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes prematuros es posible
punzar las venas del cuero cabelludo la yugular externa o la femoral) Las
venas deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con
facilidad se descartan. Para facilitar el examen se usa un torniquete de jebe.

Equipo

Las muestras se toman previa desinfeccin con alcohol y con jeringas

desechables con aguja de calibre 19 20 x1 (cuanto ms bajo es el nmero
mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar la muestra
y las de mayor grosor se reservan para la obtencin de sangre para
transfusiones).

Tcnica

1. El paciente debe estar acostado o sentado cmodamente y con el brazo

apoyado en una mesa o soporte. Algunas pacientes en especiales los jvenes
pueden sufrir malestar o incluso desmayarse. Por tanto mantngase alerta
ante seales como palidez o piel fra.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fcilmente. No
efectu demasiada presin ya que puede detener la circulacin arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puo un par veces para obtener mayor
distensin de las venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se
palpan.
4. Una vez elegido el sitio de puncin se procede a limpiar con alcohol y se deje
secar. Enseguida se fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano
mientras se estiran y comprimen con el pulgar y los tejidos blandos situados
justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta entre el pulgar y los
tres ltimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo ndice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como
gua. El bisel de la aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada
horizontal y dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una
sensacin de crujido. Cuando el acceso a la vena no es tan perceptible, la
puncin se efecta en dos tiempos: primero se punza la piel y luego la vena.
Para que la sangre entre a la jeringa se hace una traccin ligera sobre el embolo
evite realizar una traccin excesiva porque la vena puede contraerse e impedir
el paso de la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la
vena; entonces debe retirarse ligeramente la aguja al verificar la entrada de la
sangre. Esta operacin puede producir hematomas; si se advierte seales de
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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
extravasacin de sangre a los tejidos, retire la aguja de inmediato y aplique
presin local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el
puo. En cuanto se adquiera la destreza necesaria, esta ltima operacin se
efecta cuando la sangre termina de entrar a la jeringa. El paciente debe
mantener la presin con una torunda en el sitio de la puncin y el brazo
flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtencin de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de
metal y con un movimiento de torsin y con la ayuda de otra pinza se coloca el
extremo del embolo sobre la pared interna del tubo. Nunca realizar el
reenfundamiento de la aguja sin pinzas. La sangre se vaca suavemente para
evitar que se forme espuma y produzca hemlisis. Si la determinacin que se va
efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con
anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en
cambio se desea obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de
37 C para que el cogulo se forme ms rpido. La retraccin del cogulo
puede acelerarse separando de la pared del tubo con un aplicador de madera.
Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos.

USO DE VACUTAINER

En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para

obtener las muestras de sangre venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos estn
sellados con un tapn de goma y extraen un volumen de sangre
predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el
tapn de goma alcanc justo la lnea gua. La aguja ms corta se mete dentro
del tapn de goma, pero no penetra y por lo tanto no rompe el vaci. Una vez
que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo
hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vaco y la sangre entra al tubo.
Cuando el flujo cesa, el tubo se retira y si se desea puede sustituirse por el otro
para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer para dosaje de gases
arteriales.

SANGRE ARTERIAL

Para la determinacin de gases se requiere puncin arterial. En esos casos la

arteria se ubica localizado el latido por palpacin muy cuidadosa. La puncin es
necesariamente ms profunda y se requiere mayor cautela para impedir
hematomas. Debe practicarla el mdico.

Anticoagulantes

Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y
potasio, citrato trisodico, Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros
impiden la coagulacin al sustraer el calcio del plasma sanguneo por
precipitacin o fijacin en forma no ionizada, e inhibe la activacin de los
factores de la coagulacin.
El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulacin de la sangre destinada
a transfusiones. El Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin,

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Y REHABILITACION
pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica. La mezcla de oxalato de
amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de
sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina,
hematocrito y recuentos globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada
a los primeros minutos por que se desarrollan con rapidez formas dentadas en
los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los granulocitos y artefactos en
los ncleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre
tomada con esta mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para
determinados qumicas de nitrgeno ni potasio.
El citrato trisdico en solucin acuosa al 3.8%, se mezcla a razn de 1/9 con
sangre para investigaciones de coagulacin. El Sequestrene (EDTA) se emplea
en una concentracin de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal di sdica o di potsica
de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea
para el recuento de las clulas sanguneas. Hay que mezclarlo minuciosamente
con la sangre. Para el estudio del hematocrito es equiparable al oxalato y para
estudios morfolgicos lo supera, ya que impide la deformacin y artefactos
incluso despus de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun
cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24 hs si la sangre se refrigera. Tambin es
posible realizar el recuento de plaquetas aun despus de unas pocas horas.
La heparina, a razn de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamao
corpuscular ni el hematocrito. Es el mejor anticoagulante para prevenir la
hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica. No resulta satisfactoria
para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones
de sangre por que en este segundo caso produce un fondo azul en las
preparaciones teidas con el colorante de Wright.

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
CUIDADO, INOCULACIN Y SANGRIA DE LOS ANIMALES y DIAGNOSTICO DE SUS
ENFERMEDADES

Fundamentos

1. Para determinadas investigaciones de laboratorio fisiolgico es indispensable

disponer de los animales apropiados.
2. Los animales habrn de ser sanos y seleccionados con cuidado y estar
instalados con limpieza y comodidad, as como adecuada y suficientemente
alimentados.
3. Pocos mtodos de inyeccin y sangra producen mayor dolor que los similares
empleados en los seres humanos, y todos los mtodos operatorios de
importancia habrn de efectuarse con el animal anestesiado. Por otra parte
estos animales habrn de ser tratados con la solicitud que merecen por los
servicios que prestan a la humanidad.

Alojamiento de los animales

Las jaulas para los animales pequeos, como conejos, cobayos, ratones y ratas
deben construirse y disponerse de modo que los animales se conserven sanos
y cmodos. Se evitara atestar las jaulas con lotes demasiados numerosos.
Convendr disponer de jaulas separadas para los animales normales que no se
utilicen.
Los animales recin llegados al laboratorio debern ser examinados
cuidadosamente, a fin de comprobar que no estn enfermos, antes de
colocarlos en las jaulas de los normales. Si se dispone de suficiente espacio
ser conveniente guardarlos en aislamiento durante una semana a diez das.
Las jaulas se construirn de modo que permitan la limpieza y desinfeccin mas
completas y posean suficiente luz y ventilacin, deben construirse
expresamente para fines experimentales fisiolgicos.
Debe disponerse de compartimientos, y jaulas de aislamiento para los
animales inoculados y debern estar solos, en jaulas aparte, para protegerlos
de las molestias o herida que entre ellos pudieren infligirse.
Los compartimientos de animales deben estar bien iluminados y ventilados .Se
procurara conservar a una temperatura uniforme, da y noche.

Identificacin de los animales

Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificacin de los

animales. La prctica de rotular las jaulas sirve para la distincin de los lotes
numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro completo
conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo,
descripcin, etc.

Chapas

Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeas chapas de

aluminio que se fijan a una oreja de animal por medio de una grapa o un hilo
metlico que perfore estos rganos y atraviese tambin los orificios de las
chapas.
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Y REHABILITACION
Para los animales de mayor tamao pueden adquirirse identificadores
especiales. Pueden obtenerse en las casas de artculos veterinarios.

Descripcin.

Cuando se use nicamente este mtodo de identificacin y haya que alojar

juntos en una misma jaula varios animales, deben seleccionarse los que
presenten seales o colores diferentes .Para facilitar el registro debe
disponerse de sellos de goma con dibujos de ratn, cobayo o conejo. Este
mtodo se utiliza junto con el de la chapa metlica a fin de asegurar la
identificacin si la chapa se perdiera. Asimismo, debe anotarse
cuidadosamente cualquier deformidad o sea particular .El sexo debe
registrarse en la descripcin (macho y hembra).
Seales o marcas para identificacin de animales
Los animales pequeos, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o
en la cola pintndose la piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohlicas
saturadas de fucsina o cido pcrico).Las jaulas habrn de rotularse.

PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LOS ACCIDENTES EN LOS LABORATORIOS

Las personas que trabajan en los laboratorios fisiolgicos se hallan rodeadas de

mltiples peligros, de modo especial a causa de las infecciones que pueden
contraer durante el manejo de los animales de experimentacin, durante el
trabajo mismo con ellos como actos quirrgicos, exposicin de rganos, u otros
trabajos que as lo demanden los experimentos fisiolgicos, al manipular
productos spticos durante las investigaciones o sufrir quemaduras o la
deglucin accidental productos biolgicos producirse a heridas consecutivas
rotura de cristales ,etc. A estos peligros estn principalmente expuestos los
investigadores poco experimentados que los ignoran o se entretienen o
distraen mientras trabajan con animales de experimentacin con productos
infecciosos. con cidos, lcalis, etc.

PREVENCION DE LOS ACCIDENTES

Deben emplearse siempre guantes de goma descartables en los experimentos,

el investigador ha de tener especial cuidado en no herirse los dedos con las
agujas y evitar cortarse con los instrumentos afiliados, como bisturs, sierras,
etc. Deben usarse pipetas automticas manuales de volmenes regulables con
punteras descartables.
Las pipetas de vidrio, en caso de ser usadas, aunque no es recomendable
hacerlo, habrn de tener la parte bucal tapada con algodn de modo
obligatorio y tendrn bulbos de goma para aspiracin, y nunca aspirar con la
boca. Pueden utilizarse asimismo diversas jeringas. De igual modo, al aspirar
cidos, lcalis y otras soluciones peligrosas por medio de pipetas, deben usarse
pipetas con bulbos de goma de aspiracin y nunca hacerlo con la boca. Vale la
redundancia, el alumno deber tomar todas estas preocupaciones con el

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
mximo cuidado. Es de suma importancia preocuparse del trabajo sin conversar
ni distraerse.
Las manos del operador habrn de estar libres de cortes y escoriaciones,
particulares en la proximidad de las uas, debiendo lavarse cuidadosamente
con jabn y agua y luego sumergirlas en una solucin desinfectante antes y
despus de haber manipulado productos infecciosos y antes de las comidas.
Una vez terminado el experimento deber lavarse la superficie de las mesas
con una solucin desinfectante; algunas veces es recomendable trabajar sobre
una toalla humedecida en una de estas soluciones, como por ejemplo lisol o
tricresol al 2 por 100.
Las pipetas, tubos de ensayo y dems instrumentos empleados en la
experimentacin fisiolgica tambin se desinfectarn con una solucin lisol o
tricresol al 2 por 100, o se esterilizarn inmediatamente por ebullicin durante
20 minutos o autoclave que es lo ideal.
Los recipientes, lminas portaobjetos u otro material contaminado con orina
heces secreciones biolgicas de los animales, contaminados con productos
biolgicos humanos, no se volvern a tocar por ningn concepto sino que se
sometern a un proceso de desinfeccin inmediata, como hemos indicado
lneas ms arriba
Los calentadores y dems aparatos elctricos se comprobarn con frecuencia
para verificar la exactitud de su funcionamiento, reparando sin prdida de
tiempo sus averas a fin de evitar cortos circuitos incendios .El mechero de
Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables
.Siempre se verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de
retirarse del Laboratorio , igualmente se asegurar de cerrar la llave del baln
contenedor del gas la llave general del gas del Laboratorio de ser el caso. El
ter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto
elctrico. Es obligacin del servicio de mantenimiento realizar revisiones
peridicas de mantenimiento preventivo.

14
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

PRACTICA DE LABORATORIO N 1

FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE

FRAGILIDAD OSMTICA

A. Introduccin

Todas las clulas del organismo estn rodeadas de una membrana limitante, a travs
de la cual obtienen sus alimentos y el oxgeno y excretan sus productos de deshecho y
el C02 resultante de su metabolismo. La membrana celular tiene propiedades bien
establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan y solo deja salir las
secreciones, los productos de desecho y las sustancias no indispensables, en otras
palabras, es semipermeable. Estas funciones las realiza a travs de diversos
mecanismos, que hemos revisado con detalle en las clases tericas. En la presente
prctica trataremos de una de ellas que es la Osmosis. En general la osmosis significa el
paso de lquidos a travs de una membrana semipermeable. Cuando dos soluciones de
diferentes concentraciones estn separadas por una membrana semipermeable, el
solvente y los solutos atraviesan la membrana siguiendo las leyes que rigen el
fenmeno de la smosis.

El agua es transportada a travs de la membrana celular por una fuerza hidrosttica

llamada presin osmtica, dicho de otro modo, la presin osmtica es la fuerza de
atraccin que ejercen las partculas sobre el agua atrayndola. La osmolaridad
depende del nmero de partculas que se encuentran es solucin. La Unidades de
Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O, en medicina usamos el sub mltiplo mili Osmol
/Kg H20

Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partculas que se
encuentran en 1 Litro Kg de solucin. Cada partcula (tomo) ejerce una presin
osmtica independientemente; por ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg
(litro) de agua ejerce una presin osmtica de 1 Osmol /kg agua; en cambio un mol de
ClNa disuelto en un litro de agua ejercer una presin Osmtica de dos Osmoles
debido a las dos partculas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )

La capacidad de una partcula para producir un flujo de agua a travs de la membrana

celular se llama tonicidad.

Una solucin extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la clula
haciendo que sta se hinche se llama hipotnica (Hipo osmolar)

Una solucin que permite que el agua fluya hacia fuera de la clula se llama
hipertnica. (Hiper osmolar)

La membrana del glbulo rojo nos servir en la presente prctica para demostrar este
fenmeno y asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos lmites de resistencia
normales a variaciones de la tonicidad en el medio interno.

15
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Aplicacin clnica.

Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana

que generan hemlisis por mayor fragilidad de la membrana, son defectos genticos
heterogneos que afectan a las protenas constitutivas de la membrana del eritrocito.
La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la en la cual se ha demostrado una
disminucin de la protena membranal Espectrina del hemate, y el grado de dficit de
la protena Espectrina parece asociarse con la gravedad clnica de esta enfermedad,
pues los hemates son muy frgiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.

B. Fundamento

Se llama resistencia globular osmtica a la que presentan los hemates suspendidos en

soluciones salinas hipotnicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y
suspendemos dentro de ellas los hemates veremos que stos se conservan sin
alteracin durante varias horas, y que una vez sedimentados (espontneamente por
centrifugan), el lquido que sobrenada es claro y transparente como la misma solucin
salina. Pero si efectuamos suspensiones de hemates en soluciones de cloruro sdico a
concentraciones progresivamente decrecientes observaremos que al llegar a una
determinada concentracin empiezan a destruirse, liberndose la Hb, lo que confiere
al lquido una ligera coloracin rojiza que no desaparece por centrifugacin. Esto se le
llama hemlisis inicial o resistencia mnima, que normalmente se presenta entre las
concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemlisis de los hemates va aumentando en
cantidad a medida que la solucin de cloruro sdico va siendo ms hipotnica hasta
presentarse una hemlisis total. Esta hemlisis total se observa entre las
concentraciones de 0.34 a 0.30 %

Esta prctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glbulos rojos
a la hemlisis en presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas
hipotnicas a temperatura ambiente y veremos en cul de ellas se presenta hemlisis
inicial y total.

C. Reactivos y Equipos Necesarios

1. Solucin salina al 0.9 %

2.-Pipetas graduadas:

- 1 ml al 0.01
- 10 ml al 0.1
- 5 ml al 0.1

3.- Micropipetas de 0.1 ml

4.- Fiola de 100 ml

6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada hemates lavados.

7.- Agua destilada

8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde

D. Mtodo
16
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 19,
segn la tabla adjunta, haciendo las diluciones con agua destilada segn lo
indicado:

Marcar 19 tubos de prueba y repartir as:

Solucin Agua
El alumno calcular la
NaCl Mezclar % NaCl de Osmolaridad
N Destilada
Por la sol. correspondiente a cada uno de
Tubo 1% ml
inversin resultante los tubos ( expresaren
Ml unidades mOsm/Kg H20)

1 1.0 9 S 0.10 %

2 2.0 8 S 0.20 %

3 2.5 7.5 Si 0.25 %

4 3.0 7.0 Si 0.30 %

5 3.5 6.5 Si 0.35 %

6 3.75 6.25 Si 0.375 %

7 4.0 6.0 Si 0.40 %

8 4.25 5.75 Si 0.425 %

9 4.50 5.5 Si 0.45 %

10 4.75 5.25 Si 0.475 %

11 5.0 5.0 Si 0.50 %

12 5.5 4.5 Si 0.55 %

13 6.0 4.0 Si 0.60 %

14 6.5 3.5 Si 0.70 %

15 7.0 3.0 Si 0.70 %

16 7.5 2.5 Si 0.75 %

17 8.0 2.0 Si 0.80 %

18 8.5 1.5 Si 0.85 %

Control de hemolisis total para

19 ------ 10.0 --- 0 %
comparacin visual.

NOTA: EL NUMERO 19 ES CONTROL DE HEMOLISIS TOTAL (100% HEMOLISIS)

17
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
2.- Una vez hecha la distribucin anterior, mezclar bien, por inversin cada uno
de los tubos. NO OLVIDAR ESTE PAS.

3.- Recin ahora, despus de haber mezclado, aadir 0.1 ml de sangre venosa
desfibrinada cada uno de los tubos.

4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversin suave.

5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a

mezclar por inversin suave.

6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.

Examinar por simple inspeccin visual en cual de los tubos se inicia la hemlisis
(hemlisis leve), generalmente a partir del tubo N 8, de 0.425 % NaCl (lo que
se manifiesta por el color ligeramente rojizo del lquido) y luego examinar en
qu otro tubo la hemlisis es intensa (aproximadamente en 0.36 % NaCl).

En el Tubo N 19 se producir hemlisis total y corresponde al 100% de

Hemlisis. (Destruccin total de los hemates y no deja nada de sedimento).

Valores Normales:

1. Hemlisis inicial (leve) (empieza Hemlisis): 0.44 % + -- 0.02

2. Hemlisis Total (Hemlisis completa): 0.32 % + -- 0.02

a) Causas de aumento de la fragilidad osmtica globular:

Los hemates son ms frgiles que lo normal, tienen poca resistencia ante
ligeras hipotonas, y se hemolizan muy fcilmente.

- Anemia Hereditaria Esferoctica, en la Enfermedad Hemoltica del recin

nacido por incompatibilidad ABO
- Despus de alguna injuria trmica (quemaduras)
- Anemias Hemolticas sintomticas en algunos casos de Linfoma Maligno,
Leucemias, Cncer, Cirrosis, etc.

b) Causas de disminucin de la fragilidad osmtica

Los hemates son ms resistentes que lo normal a la hipotona:

- En la primera Infancia, tempranamente en la infancia.
- En algunas Anemias por deficiencia de Hierro
- Talasemia mayor ( anemia de Cooley, anemia del Mediterrneo )
- Anemia Drepanocitica ( Hoz, Sickle cell anemia)
- Anemia Megaloblstica Nutricional
- Post Esplenectoma y algunas hepatopatas con ictericia

c) Fragilidad en medio acido:

- En la Hemoglobinuria paroxstica nocturna, que cursa con anemia

hemoltica, usualmente la fragilidad globular realizada en sol. Salina
18
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
solamente es NORMAL, PERO la fragilidad globular realizada en MEDIO
CIDO (pH cido) S ESTA AUMENTADA .

d) La fragilidad mecnica

- Est aumentada en la Ovalocitosis hereditaria ( Eliptocitosis), en los casos

que evolucionan con anemia hemoltica.

19
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 2

ESTIMULACIN MUSCULAR

A. Introduccin

Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a

estmulos, es decir variaciones del medio qumicas o fsicas, tales como alteraciones de
la temperatura, deformacin mecnica, etc.

En los fenmenos estmulo respuesta, la respuesta depende de las caractersticas del

estmulo y de las condiciones del tejido estudiado. La descripcin correcta de la
relacin entre estmulo y respuesta requiere el control de la duracin , intensidad y
frecuencia del estmulo.

Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en funcin al tiempo y al espacio.

B. Material
- 10 Sapos grandes
- 10 Tabla de fijacin para batracios
- Estimulador elctrico
- 10 Alambre de zinc
- Equipo de diseccin
- 10 Alambre de cobre

C. Mtodo

Experimento N 1

Se anestesia al sapo por destruccin del cerebro y la mdula espinal.

Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la regin anterior homloga al tronco.
Se contina la incisin de la piel en cinturn. Una vez completado el cinturn, se
desprende la piel de un tirn hacia abajo. En la regin dorsal se debe tener
cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.

Se levanta el urostilo con la pinza de diseccin y se seccionan los elementos

paravertebralmente y en direccin ceflica, fracturando el proceso del iliaco
paralelo al urostilo que se articula con el proceso transverso de la novena
vrtebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se
introducen por tres races ms arriba en la columna vertebral. Estas estructuras
son los nervios citicos. Por debajo se observa la aorta dorsal con sus
bifurcaciones.

Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o

lesionar los dos nervios citicos.

Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios citicos y se realiza una
ligadura lo ms proximal posible a la columna vertebral. En este momento se
observa una reaccin muscular.

20
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Se secciona el nervio proximalmente a la mdula, entre la columna vertebral y la
ligadura. Con la ayuda del hilo se puede efectuar la diseccin del nervio citico, no
siendo necesario manipularlo con ningn instrumento.

Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el msculo piriforme, despus se

lo asla por diseccin roma entre el semimembranoso por dentro y el bceps por
fuera. A todo lo largo del nervio se ir seccionando sus colaterales y se lo aislar
hasta la rodilla, comprobando que exista conexin funcional entre el nervio y el
msculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que
se seque humedecindolo constantemente en solucin fisiolgica.

Experimento N 2: Experimento de Galvani

Se fabrica un asa con alambre de cobre y alambre de zinc. Con el alambre de cobre
se toca la piel del animal y con el zinc el nervio.

Experimento N 3

Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar,
amarrndola fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza
la diseccin de la aponeurosis, que en el sapo se contina hacia la pierna por el
tendn de Aquiles que tiene un sesamoideo.

Se libera el tendn de Aquiles por diseccin roma y se separa el gastronemio hasta

llegar a su insercin superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo
de la rodilla y el fmur un poco por encima de esta. Se libera el fragmento de
fmur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.

Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la

preparacin neuromuscular.

Con el estimulador elctrico se realiza el estmulo de menor intensidad y se

incrementa gradualmente hasta obtener una contraccin muscular este es el nivel
de umbral que genera la respuesta de contraccin. Con el estmulo elctrico de
esta misma intensidad se continuara la estimulacin durante todo el experimento
(estimulo superior al umbral).

Humedecer constantemente la preparacin con un gotero.

Experimento N 4: fenmeno de la escalera

Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulacin y despus se

disminuye el voltaje para obtener el estmulo subliminal.

Luego de repetir la estimulacin por un tiempo se observar que las contracciones

son cada vez ms amplias, de mayor intensidad hasta alcanzar un valor mximo.
Este incremento progresivo de la amplitud es lo que se denomina el fenmeno de
la escalera.

Experimento N 5: tetania

21
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Se realizaran estimulaciones intensas, muy rpidas y/o continuas y se obtendr
una serie de contracciones sucesivas de modo que las estimulaciones no permitan
que termine la sacudida anterior y continuaremos as hasta obtener una
contraccin sostenida, permanente, intensa y que es lo que denominamos tetania.

Experimento N 6: Relacin longitud - tensin

Emplearemos la fuerza muscular que ejerce el musculo gastronemio cuando se

anudan ambos extremos del musculo antes disecado en una balanza con pesas
graduadas en gramos. Un extremo del musculo ser anuda en la parte inferior del
platillo de la balanza y el otro extremo se anudara en el brazo de la nuez del
soporte de fierro, estando el fiel de la balanza en cero se desplazara la nuez hacia
debajo de modo que el musculo no quede ni mu flojo ni muy tenso de tal forma
que pueda responder al estmulo con una contraccin. A continuacin se estimula
para que el msculo se contraiga sin vencer ninguna resistencia (pesa deslizante
en cero) al obtenerse respuesta de contraccin el fiel de la balanza se deslizara
hacia arriba. Ahora incrementamos gradualmente de dos en dos gramos y al
mismo tiempo la longitud el musculo bajando la nuez de la balanza y repetimos el
estmulo y el fiel de la balanza volver a moverse hacia arriba, llegara el momento
en que el estmulo a medida que aumentamos el peso y la longitud del musculo el
fiel de la balanza no se desplazara. Esta es la longitud a la cual corresponde la
mxima tensin capaz de ser ejercida por el musculo. El alumno realizara una
grfica que ilustre la relacin longitud vs tensin.

22
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

PRCTICA DE LABORATORIO N 3

SHOCK ESPINAL, REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS

SHOCK ESPINAL

Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal y efecto de la ablacin

medular.-

A. Material
- 10 Sapos
- Beakers, estilete de acero,
- Carrete de Runckford
- Acido sulfrico diludo 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
- Suero fisiolgico
- Equipo de diseccin, guantes ltex descartables
- Sol. Ringer para batracio.

B. Mtodo

Experimento N 1: PREPARACIN DEL SAPO ESPINAL

Observar la postura, los movimientos espontneos y respuesta a los diversos

estmulos, movimientos respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotacin
y posicin de espalda del sapo normal.

Se fija al animal con la mono izquierda y se determina las siguientes lneas: una
lnea transversal a nivel del lmite posterior de la membrana timpnica ( A-B),
Una segunda lnea entre el ojo y la membrana timpnica (X-Z). Se toma una
tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo decapita
con un solo golpe, procurando que en este momento el sapo se encuentre con
el dorso hacia abajo, a lo largo de la lnea X-Z Realizar hemostasia por
compresin y realizar las mismas observaciones que en el sapo normal. Este es
el sapo descerebrado. En este caso, el sapo puede realizar movimientos
complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la
posicin normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulacin
elctrica y luego realice el corte a lo largo de la lnea A-B. Inmediatamente se
observa el tono y la actitud postural del animal y se efecta el pinzamiento de
uno de sus dedos. Se objetivar la depresin motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, adems no se encuentra los resultados del
sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural
del animal y se efecta el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar las
respuestas motoras.
23
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Experimento N 2: leyes de Pfluger
Se pasa un hilo a travs de un orificio hecho en el piso de la boca y se cuelga al sapo
espinal de un estativo.

A continuacin se efecta una secuencia de estmulos graduados, los que producen

respuestas determinadas:

a) Ley de UNILATERALIDAD.- Se pellizca suavemente un dedo y se produce

contraccin de la misma pata solamente.
b) Ley de SIMETRA.- Se pellizca con mayor intensidad el dedo y se produce
contraccin de la misma pata y de la pata opuesta.
c) Ley de IRRADIACIN.- Se pellizca fuertemente un dedo y se produce
contraccin de la misma pata, de la pata opuesta y finalmente de las
extremidades anteriores.
d) Ley de GENERALIZACIN.- Se pellizca muy fuertemente un dedo y el animal se
contrae y se mueve enrgicamente.

Experimento N 3: experiencia de Turck

Se emplea la preparacin de sapo espinal. Se la cuelga de un estativo y se espera que
est en reposo.

Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de CIDO SULFRICO desde

0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 y 1%. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas
soluciones, empezando por la de menor concentracin; se espera y se registra el
tiempo necesario para la respuesta. Una vez que se haya producido la respuesta, se
lava la pata del animal en suero fisiolgico antes de pasar a la solucin siguiente.

Se observa y se registra las caractersticas y tipo de respuesta en cada caso.

Experimento N 4: sumacin temporal

Se sumerge la pata del animal en una solucin de cido sulfrico al 0.1% varias veces.
Se observa el incremento progresivo de la respuesta.

Experimento N 5: sumacin espacial

Se sumerge en una solucin de cido sulfrico al 0.1% primero la punta del dedo, luego
el dedo completo, la pata y la rodilla. Se observa la mayor intensidad de las respuestas.

Experimento N 6
Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la mdula. Despus se
repite las mismas estimulaciones hechas previamente.-

24
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE

A. Introduccin

Los mecanismos reflejos estn constituidos por un rgano receptor, un rgano

efector y una red de comunicaciones entre ambos. La accin refleja se inicia por un
estmulo de entrada y tiene como resultado una respuesta de salida. La accin
refleja abarca el reflejo axnico sencillo hasta los reflejos complejos en los que
existe intervencin cerebral.

El sistema nervioso comprende un gran nmero de arcos reflejos. Cualquier

estmulo produce una respuesta. El estmulo puede originarse en los rganos
internos y afectar la parte visceral del sistema nervioso. El sistema puede
originarse en el exterior y afectar la parte somtica del sistema nervioso. Un mismo
arco reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somticas.

Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia, mientras que los reflejos
somticos pueden ser percibidos conscientemente. Muchos reflejos pueden
considerarse como parte de un programa, puesto que la respuesta adecuada
parece estar prevista dentro del sistema nervioso.

Los reflejos espinales, que requieren transmisin del estmulo desde la periferia
hasta la mdula y de all regresar al rgano efector, son de este tipo. Los reflejos
espinales no requieren de intervencin del sistema nervioso central y funcionan
igualmente bien en un animal cuya mdula se ha seccionado por encima de la
localizacin de las neuronas de los nervios correspondientes.

Las inserciones tendinosas de los msculos poseen receptores sensitivos especiales

que responden a ala distensin y envan la informacin al sistema nervioso central
sobre la posicin de un msculo o de un miembro. Cuando estos receptores
tendinosos son estimulados por una distensin rpida y brusca, mandan impulsos a
la mdula espinal y, a travs de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva
el msculo. Esta neurona manda impulsos al msculo y produce una sacudida
rpida.

La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de

excitacin de la mdula espinal. Esta facilitacin puede conseguirse haciendo que
el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.

B. Material

- 15 Sujetos de prueba
- 15 Martillos de reflejos

C. Mtodo

Experimento N 1: reflejo rotuliano

Se sienta al sujeto en una posicin cmoda y cruza las piernas. La pierna superior
debe estar relajada. Por palpacin, se localiza el tendn rotuliano y se da un golpe

25
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
seco con el martillo de reflejos. La respuesta adecuada es la contraccin del
cudriceps, lo que produce extensin de la pierna.

Experimento N 2: reflejo aquiliano

El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin
contraccin de los msculos de las pantorrillas. Se busca el tendn de Aquiles y se
estimula. La respuesta apropiada es la contraccin de los msculos gemelos y del
sleo, lo que produce extensin del pie.

Experimento N 3: reflejo bicipital

El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el

antebrazo. Se busca el tendn del bceps con el pulgar de la mano que sostiene el
antebrazo, se deja el pulgar sobre el tendn y se da un golpe sobre el pulgar. la
respuesta apropiada es la contraccin del bceps, lo que produce flexin del
antebrazo.

Experimento N 4: reflejo tricipital

El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el

antebrazo. Se palpa el tendn del trceps, inmediatamente por encima de su
insercin en el codo, y se golpea el tendn con el martillo. La respuesta apropiada
es la contraccin del trceps, lo que produce extensin del pie.

Experimento N 5: reflejos radial y cubital

Se golpea los tendones insertados sobre los extremos inferiores de ambos huesos,
por encima de la mueca. El examinador sostiene el brazo del sujeto. La respuesta
adecuada para el reflejo cubital es la pronacin de la mano y para el reflejo radial la
flexin del antebrazo.

26
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 4

EVALUACIN DE LA PERCEPCIN SENSORIAL Y SENSACIONES NOCICEPTIVAS:

EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR

A. Introduccin

La estimulacin de un receptor tctil de la piel es transmitida por la va del asta

posterior (sensitiva) hasta la corteza somestsica. En esta la excitacin del receptor
activa un determinado nmero de neuronas que constituye su campo cortical. Sin
embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma
mxima y las de la periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite
localizar el punto exacto de estimulacin.

Las capacidades tctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de

discriminar dos puntos de estimulacin sobre la piel.

Las diferencias en las capacidades de discriminacin en las diferentes zonas del

cuerpo se deben al nmero de receptores que exista en esa zona y a la
representacin cortical que stos poseen. Los dedos estn profusamente poblados
de receptores y el rea de corteza a que llega la informacin proveniente de ellos
es amplia, de ah su mayor posibilidad de discriminacin. Otras zonas del cuerpo
tienen menor densidad de receptores siendo ste uno de los factores que conlleva
a que la informacin que llega al rea de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea
menor su posibilidad de discriminacin.

Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitar de forma
mxima al centro de su campo cortical; pero como los campos se superponen
parcialmente, la resultante ser una excitacin mayor, aunque se mantienen los
mximos de excitacin separados.

El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y fro, que pasan del fro
glacial, al fro, al fresco, a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y
quemante.

B. Objetivos

1. Discriminar procesos y modalidades de percepcin sensorial en el ser

humano de tal manera que pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribucin anatmica de los receptores cutneos y la
importancia fisiolgica de dicha distribucin.
3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad.
4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas
observaciones debern ser correlacionadas con sus conocimientos
neuroanatmicos y neurofisiolgicos.

EXPERIMENTO 1: IDENTIFICACIN DE CAMPO RECEPTIVO SENSORIAL

27
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
a) Materiales

1 Sello especial
1 Hoja de papel
15 Pelos de cerda (pelo de Von Frey)
Sujeto experimental (alumno 1)
Sujeto experimentador (alumno 2)

b) Procedimiento

1. Por medio de un sello especial marcar un rea en la piel de un compaero:

cara, dorso del cuello, antebrazo, dorso de la mano.

2. Sellar en una hoja de papel un rea similar y proporcional

3. Luego el sujeto experimental deber cerrar los ojos y se le aplica por medio
de un instrumento sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera
presin en cada uno de los cuadrantes del rea delimitada por el sello.

4. El sujeto experimental deber reportar las modalidades de sensaciones que

percibe en la piel de cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).

5. Marcar con notacin diferente, en un esquema, los puntos

correspondientes.

6. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones
investigadas.

c) Resultados

28
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

EXPERIMENTO 2: DISCRIMINACIN DE DOS PUNTOS

a) Materiales

Comps de doble punto.

Regla.
Sujeto experimental (alumno 1).
Sujeto experimentador (alumno 2).

b) Procedimientos

Para la realizacin de estos experimentos los estudiantes se dividirn por parejas,

actuando cada uno como sujeto experimental y como experimentador.

1. Indique a su compaero que cierre los ojos y se concentre en las

sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del comps de forma tal que lleguen
simultneamente al rea de piel estimulada. Se deber estimular las
siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separacin de las puntas del comps se aplicarn de forma
tal que la diferencia entre ellas sea diferente y, alternante, mantenindose
constante para cada zona corporal esto es 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicacin de las agujas, pregunte al compaero cuantos puntos
discrimina y anote su respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.

c) Resultados

Distancia de separacin de las puntas del comps

rea de la Piel
( cm )
Estimulada
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0

Yema de los dedos

Antebrazo

Cara

Dorso del Cuello

Dorso de mano

SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIN DEL UMBRAL DEL DOLOR

A. Introduccin

29
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
El dolor es un mecanismo de proteccin y por tanto puede definirse como una
respuesta de defensa corporal, el cual aparece siempre que un tejido est siendo
lesionado y obliga al individuo a reaccionar para suprimir el estmulo nocivo.
Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor
e inmediatamente retiramos el brazo para evitar un mayor dao tisular.
La respuesta al dolor puede expresarse en trminos conductuales, tales como el
retiro de la fuente del estmulo o la fuga; puede haber una respuesta verbal, como
el quejido y la expresin del dolor; y puede haber una respuesta fisiolgica como
cambios en la presin sangunea, sudoracin y taquicardia.
El dolor es una respuesta sensorial medible, su magnitud vara con la intensidad del
estmulo. Todo ser viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado
nivel, denominado umbral, en que el dolor es insoportable. El dolor puede tambin
ser socialmente determinado, se dice que hay grupos tnicos ms sensibles al dolor
que otro, y el sexo femenino es ms resistente al dolor que el sexo masculino.
El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rpido, que aparece
en menos de una dcima de segundo, no se percibe en los tejidos ms profundos
del cuerpo, se transmite a travs de fibras de tipo A y la seal dolorosa llega al
sistema nervioso central va el haz neoespinotalmico. 2) Dolor Lento, aparece
despus de un segundo o ms y aumenta lentamente en el curso de varios
segundos o minutos, suele ir acompaado de destruccin tisular, se percibe en la
piel como en cualquier rgano o tejido profundo, se transmite a travs de fibras
tipo C y las seales dolorosas llegan al sistema nervioso central va el haz
palioespinotalmico.
El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vas neurales especficas.
Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de
estmulo al cual responden y bsicamente son de tres clases:
1) Los mecanociceptores responden a estmulos mecnicos muy intensos de la
piel como apretar, pellizcar, pinchar, etc. Tambin pueden responder a
estmulos trmicos repetitivos, entre 45 y 55C.
2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas, menos de 10C, y
altas temperaturas, por encima de 42-45C, y asimismo responden a
estmulos mecnicos intensos.
3) Los nociceptores polimodales responden a estmulos dolorosos mecnicos,
trmicos y qumicos.

El estmulo doloroso (E) acta sobre un terminal nervioso que lleva su axn
hacia la neurona sensorial primaria (1) en las astas posteriores de la mdula
espinal. El mediador excitatorio de esta informacin dolorosa es la sustancia P,
aunque tambin pueden participar otras sustancias como el cido glutmico, la
somatostatina y el polipptido intestinal vasoactivo (VIP).

Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisin del dolor (2)
ascienden en dos tractos diferenciables tanto anatmica como funcionalmente;
el tracto Pleo-espino-talmico con proyecciones amplias y difusas; y el tracto
Neo-espino-talmico con proyecciones menores y circunscritas. La va neuronal
30
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
del neo-espino-talmico es responsable de la localizacin certera en la
superficie corporal de los dolores agudos, siendo pequeo el nmero de las
fibras que la componen. Los axones del Pleo-espino-talmico se enlazan
sinpticamente con neuronas del tronco enceflico en especial con la
informacin reticular tegmental y los cuadrigminos (Tracto espino-tectal),
mientras que otras de sus fibras alcanzan directamente a los ncleos talmicos
intramamilares. Hasta este nivel no hay participacin de la corteza cerebral en
las sensaciones del dolor.

En el tlamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3)

que provienen de los ncleos intramamilares del tlamo y que se proyectan
enviando sus axones al frontal superior de la corteza cerebral. Igualmente
existen neuronas de tercer orden en el ncleo ventro-basal y grupo posterior
del tlamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza
cerebral. Es aqu, donde ocurre la modulacin del dolor, y donde
socioculturalmente puede variar la expresin del dolor

EXPERIMENTO N 1: SENSACIONES TRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR

a) Materiales:
- Hervidor elctrico con agua
- Termmetro y gotero.
b) Procedimiento

1. Introducir el termmetro en el hervidor elctrico y registrar la temperatura

del agua.
2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro
elctrico.
3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar
caer unas dos o tres gotas en el dorso de la mano hasta que el sujeto de
experimentacin perciba un cambio en la temperatura del agua en relacion
a la temperatura inicial del primer minuto.
4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota
en la palma de la mano sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs.
Temperatura y determine el umbral del dolor.

c) Resultados

TIEMPO (MIN) TEMPERATURA C DOLOR

31
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

EXPERIMENTO N 2: ISQUEMIA LOCAL Y DOLOR

a) Materiales

- 03 Tensimetro.
- 03 Cronmetro.
- Sujeto Experimental (alumno 1).
- Sujeto Experimentador (alumno 2).

b) Procedimiento

1. El sujeto de experimentacin deber sentarse cmodamente, colocando el

brazo sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazn.
2. Coloque el manguito del esfigmomanmetro, completamente desinflado,
alrededor del brazo de manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el
pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una
presin de 200 mm Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentacin que abra y cierre rtmicamente ambas
manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el
momento en que el dolor se torna insoportable.
6. Disminuir rpidamente la presin del sistema, abriendo la vlvula de la pera
insufladora.
7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor.
8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda.

c) Resultados

BRAZO

Derecho Izquierdo

Inicia el dolor

Dolor insoportable

32
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Desaparece el dolor

UMBRAL DEL DOLOR

DOLOR TIEMPO (MIN) TEMPERATURA (C)

Insoportable

ISQUEMA LOCAL Y DOLOR

BRAZO

Derecho Izquierdo

Inicia el dolor

Dolor insoportable

Desaparece el dolor

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 5

FISIOLOGA CARDIOVASCULAR

CORAZN IN SITU: PROPIEDADES DEL CORAZN

A. Fundamento

El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad,

conductibilidad y contractilidad que le permite al corazn trabajar como bomba, de
una manera adecuada a las necesidades del organismo. Tiene inervacin autnoma
y sistema de conduccin elctrica organizada.

La actividad elctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la
superficie corporal y graficarse en ondas por medio del Electrocardigrafo. Existe
una correlacin entre la actividad elctrica y el ciclo cardiaco.

B. Objetivos

a. Reconocer la anatoma del corazn y vasos

b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-caractersticas del msculo cardiaco
c. Detectar la actividad elctrica del corazn (Electrocardiograma)
d. Relacionar la actividad elctrica y el ciclo cardiaco
e. Demostrar los efectos de estmulos fsicos y qumicos (adrenrgicos y
colinrgicos) sobre el corazn
f. Conocer el efecto vagal

C. Materiales

- Animal para experimentar- 10 sapos - Tablilla de fijacin

- Electrocardigrafo - Tubos de ensayo (03)

- Quimgrafo - Agua caliente (40), fra (80)

- Migrafo para cardiografa por suspensin - Sol. Ringer.

- Carrete de estimulacin elctrica - Adrenalina 1/2000

- Equipo de diseccin y 2 pares de guantes) - Acetilcolina 1/5000

- Sol. CIK 1% - Sol. C12Ca 1%

- Propranolol 1/1000 - Atenolol 1/1000

34
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
D. Experimentos

N 1: Exposicin del corazn-anatoma- ciclo cardiaco

- Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y mdula espinal

- Colocar al sapo en la tablilla en decbito dorsal-fijarlo con alfileres
- Cortar la piel del trax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca
hasta la porcin media del abdomen
- Humedecer permanentemente las vsceras y tejidos con Sol. Ringer
- Reconocer la punta del esternn y cortar por su lado izquierdo
- Con tijera cortar el esternn en su lnea media
- Exponer al corazn e identificar el pericardio, cortarlo y observar las
partes del corazn y vasos- reconocer las fases del ciclo cardiaco
- Colocar el Electrocardigrafo y tomar un basal; relacionarlo con el ciclo
cardiaco

N 2. Experimento de Gaskel- Estmulo fsico (temperatura) al corazn

- Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo);
identificar la pared posterior del corazn.

- Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurculas y Ventrculo)

- Con tubo de ensayo (agua fra) tocar el Seno venoso y observar los
latidos
- Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de
ensayo con agua caliente; observar latidos
- Interpretar los eventos que acontecen

N 3. Cardiografa directa por suspensin- Efecto Vagal y Farmacolgico

Fase A: Disecar el nervio vago derecho:

- Cortar piel y subcutneo hasta llegar al ngulo externo del maxilar

- Identificar y cortar y transversalmente al msculo cutneo pectoral
derecho
- Colocar el brazo derecho a 45 con respecto al eje del cuerpo
- Observar debajo de la mandbula a dos nervios :glosofarngeo(lateral) y
el hipogloso (medial), individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la
lnea media , en donde cambian de direccin y se dirigen al piso de la
boca
- Entre los dos nervios, reconocer la arteria cartida primitiva (en el
ngulo externo de la mandbula). Desplazarla hacia arriba e identificar
por debajo al nervio vago derecho.
- Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol. Ringer

Fase B: Proceder a los siguientes experimentos:

a) Cardiografa directa- Efectos del vago en el corazn

35
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- Colocar el clamp del Cardigrafo en al punta del ventrculo ; Aproximar
el Quimgrafo a la palanca y obtener un trazado
- Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud del trazado ; relacionarlo con
el ciclo cardiaco
- Dibujar un grfico, sealando sus caractersticas
- Desconectar Electrocardigrafo.Estimular al nervio vago ( usar los
electrodos del carrete de induccin ), observar los cambios en el latido
(Durante/estimulacin desconectar / Electrocardigrafo)
- Estimular con una aguja a las aurculas y al ventrculo y reconocer la
contraccin prematura morfologa y la pausa compensadora.

b) Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina

- Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol.

Ringer
- Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar

c) Ligadura de Stannius- Conduccin elctrica automatismo

- En el surco en el Seno venoso y las aurculas colocar un hilo

humedecido con sol. Ringer y ligar. Observar efectos en el ECG. Analizar

- Una segunda ligadura entre las aurculas y el ventrculo ; ligar y

observar ECG
- Observar la frecuencia de contraccin de aurcula y el ventrculo
(Bloqueo aurculo- ventricular)

E. Graficar, analizar e interpretar los experimentos realizados

36
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRESIN SANGUNEA EN EL HOMBRE ADULTO

A. FUNDAMENTO

El volumen sistlico produce en la circulacin perifrica cambios en el flujo y

presiones intravasculares; presin arterial, presin venosa. Estas presiones estn
relacionadas con la longitud y radio del vaso y con la viscosidad de la sangre;
factores que producen resistencia al flujo. La presin arterial tiene un pico mayor
denominado presin sistlica y un nivel inferior denominado presin diastlica. La
presin promedio se denomina presin arterial media. La presin arterial puede
determinarse en forma indirecta por medios de un aparato Esfigmomanmetro de
mercurio o aneroide.

B. OBJETIVOS

a. Determinar la presin arterial sistlica, diastlica, en forma indirecta

b. Determinar los cambios de la presin arterial cuando se expone factores, fsicos
(temperatura), cambios de posicin y de actividad fsica
c. Calcular la presin arterial media-El alumno tendr competencia para saber:

- Cules son los factores mecnicos y humorales que determinan la presin

arterial?
- Relacionar presin hidrosttica y onctica con la PA
- Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean
vasodilatoras.

Cmo actan? Cmo se regulan?

- Relacione los cambios de PA y FC en relacin con el ejercicio y la postura

corporal
- Qu importancia tiene la PAM? Cmo la determina?
- Relacionar gasto cardiaco, resistencia vascular, vol. Sistlico, frecuencia
cardiaca, Inotropismo, precarga, volumen sanguneo, capacidad venosa,
presin venosa central, regulacin de agua y sodio por el rin

C. MATERIAL
- Sujeto de prueba: alumnos
- Tensiometro de mercurio o anaeroide
- Estetoscopio
- Beakers
- Agua fra (5 C)

D. EXPERIMENTO

a. Experimento 1: Determinar la presin arterial

- Sujeto de prueba en posicin sentada, brazo descubierto a la altura del

corazn
- Esperar 5 minutos
- Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
37
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
- Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
- Desinflar el manguito lentamente y
- Registrar la presin sistlica con el primer ruido de Korotkoff
- Registrar la presin diastlica con el quinto ruido de Korotkoff
- Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O

b. Experimento 2: Efecto del ejercicio fsico sobre la presin arterial

- Realizar un ejercicio fsico intenso ( 20 abdominales o 20 cuclillas)

- Tomar la presin inmediatamente, a los dos y cinco minutos
- Registrar la frecuencia cardiaca en el basal y post ejercicio
- Interpretar los cambios

c. Experimento 3: Efecto de la posicin del cuerpo sobre la presin arterial

- Registrar la presin arterial y frecuencia cardiaca en la posicin de

decbito dorsal, sentado y de pie; previo descanso entre cada posicin
- Interpretar los resultados

d. Experimento 4: Efectos del fri sobre la presin arterial

- Sumergir la mano en agua fra (5 C) por 30 a 60 segundos, hasta cubrir

la mueca
- Determinar la PA
- La prueba se considera positiva si la PAS sube ms de 20mmHg y la PAD
ms de 15 mmHg.

38
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 6

FISIOLOGIA RESPIRATORIA

ESPIROMETRA: VOLMENES Y CAPACIDADES PULMONARES

TESTS DE FUNCIN VENTILATORIA.

A. Introduccin

La medicin de los volmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometra.

Este procedimiento permite determinar todos lo volmenes pulmonares, excepto
el volumen residual, cuya medicin se realiza por mtodos indirectos.
Emplearemos el Espirmetro Pneumotacmetro Fleich Datospir 120
En esta prctica el alumno adquirir competencia para entender:

1. Cantidad de Aire inspirado y expirado normalmente: Volumen Tidal

2. Volmenes pulmonares: V. espiratorio forzado(VEF); V. Inspiratorio
Forzado(VIF) ; Volumen residual (VR)
3. Capacidades Pulmonares (relacin de dos ms volmenes): Capacidad Vital
(CV); Capacidad funcional residual (CFR); Capacidad pulmonar Total (CPT)
4. Espacio Muerto (EM): relacin con el VT
5. Espacio Muerto fisiolgico (EMF): ejemplos
6. Volumen alveolar (VA) - Relacin entre VA, EM y VT
7. Ventilacin: (volumen de aire por minuto): tipos
8. Ventilacin alveolar: FR x VA
9. Ventilacin Pulmonar: FR x VT
10. Volumen Espiratorio Forzado al primer segundo (VEF1) (80% de la CV)
11. Diferencias procesos Obstructivos de Restrictivos pulmonares.

B. Equipo

- Pinza Nasal
- Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
- Equipo espirmetro neumotacmetro fleich datospir

C. Mtodo

a) Obtencin del Espirograma

Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al

neumotacmetro. Constatar que no haya fugas de aire por la boca, borde de
los labios, ni nariz.

Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para
que se acostumbre a ella. Una vez que la frecuencia respiratoria se ha vuelto
constante y la profundidad de la respiracin uniforme, conectar al espirmetro
para obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). A
continuacin solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras segn
39
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
instrucciones del profesor de Prcticas:

- Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima y luego
respirar normalmente. .
- Al final de una espiracin normal (FEN) realizar una inspiracin mxima y luego
respirar normalmente.
- Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima seguida
de una inspiracin mxima, luego respirar normalmente.

b) Mediciones de la capacidad ventilatoria.

CAPACIDAD VITAL FORZADA (CVF)

Es la mxima espiracin forzada y rpida realizada despus de una inspiracin
profunda.

VOLUMEN ESPIRATORIO FORZADO DEL PRIMER SEGUNDO (VEF1)

Es el volumen de aire espirado durante el primer segundo de la espiracin de
una CVF. Los valores normales son: 83% para el primer segundo, 94% para el
segundo segundo y 97% para el tercer segundo.

FLUJO ESPIRATORIO FORZADO DE 25% AL 75% (FEF 25-75%)

Es la medicin del flujo espiratorio considerando el 50% del medio de la CVF.
De esta medicin se obtiene el flujo espiratoria mximo medio, cuyo valor
normal para un sujeto joven es de 150L/minuto.

MXIMA VENTILACIN VOLUNTARIA (MVV) o mxima capacidad ventilatoria

o mxima capacidad respiratoria
Es el mximo volumen de aire que pueden movilizar voluntariamente los
pulmones en un minuto.

Velocidad del flujo medio respiratorio mximo (MMEFR) o velocidad del flujo
espiratorio forzado (FEF 25-75%)
Es la relacin del medio de la CVF y el TEM. Es el test ms sensible para el
diagnstico de la enfermedad obstructiva.
Se discutirn los trazados obtenidos con los respectivos profesores de Prcticas
en cada mesa.

40
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 7
PULSOXIMETRIA: SATURACION ARTERIAL DE OXIGENO

A. Introduccin

En los seres humanos como en todos los mamferos, la hemoglobina, constituye el

principal componente del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del
99.2% de oxigeno presente en la sangre. Tambin juega un papel importante en el
transporte de di6xido de carbono (C02) y del ion hidr6geno (H+).

La hemoglobina es una protena conjugada con un peso molecular de 68000.

Est formada por cuatro subunidades de peso molecular cercano a 17000. Cada
subunidad est constituida por un grupo heme y una cadena polipeptdica. La
molcula de hemoglobina, por lo tanto, est integrada por cuatro grupos "heme" y
cuatro cadenas polipeptdicas, que en su conjunto constituye la globina.

La globina constituye el 96% de la molcula de hemoglobina y est compuesta por

cuatro cadenas polipeptdicas que aparecen como dos pares no idnticos. La
hemoglobina A, la principal hemoglobina en los adultos, consta de dos cadenas y
dos cadenas siendo su estructura 2 y 2 , y representa el 90% del total de la
hemoglobina. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2, y representa el 2.5%
del total, y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (2 y 2 ) Adems de estas
dos hemoglobinas, otras seis formas adicionales se encuentran en pequeas
cantidades y cuyo significado fisiolgico aun falta precisar.

Adems de la heterogeneidad presente a nivel individual, se observa una

heterogeneidad de la hemoglobina durante el ciclo vital. Durante la vida embrionaria
aparece la hemoglobina embrionaria ( HbE ), en la cual las 2 cadenas a estn
combinadas con las 2 cadenas epsilon (a2E"z); rnientras que durante la vida fetal, la
principal protena transportadora es la hemoglobina Fetal (HbF) donde las cadenas
alfa estn combinadas con cadenas gamma (2 2)

Un tercer tipo de heterogeneidad de la hemoglobina, resulta de mutaciones de genes

que controlan la secuencia de aminoacidos en las cadenas alfa y beta, dando lugar a la
aparicin de hemoglobinas anormales.

El grupo "heme" constituye el 4% de la molcula de hemoglobina; y es una

rnetaloporfirina que resulta de la combinacin de un metal, el hierro, con una
porfirina. EI hierro puede estar en el estado de oxidacin ferroso (+2) o en el ferrico
(+3), y las formas correspondientes de hernoglobina se denominan ferrohemoglobina
y ferrihemoglobina o metahemglobina, respectivamente; y solamente la
ferrohemoglobina puede captar oxigeno.

La hemoglobjna presenta las siguientes caractersticas:

1) Cada atomo de, hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno
molecular (Oz) y logra fijar una molcula de oxigeno por cada tomo de hierro, de lo
que podemos deducir que una molecula de hemoglobina puede transportar cuatro

41
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
moleculas de oxigeno.

Para que esta reaccin ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe 2+o
ferroso). Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina:
existe oxigenacin y no oxidacin de la hemoglobina. Cuando el tomo de hierro es
oxidado a su forma trivalente (frrico), como ocurre en la metahemoglobina, no
reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de transportarlo. En
condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molcula en estado ferroso.

2) La hemoglobina tambin se combina con el monxido de Carbono (CO2), unin

que se realiza, al igual que con el oxgeno, con el hierro. Cada tomo de hierro puede
fijar una molcula de monxido. EI producto resultante recibe el nombre de
"carboxihemoglobina".

Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de monxido de carbono, compuesto
producido por la combustin incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de
alumbrado, motores a explosin). El monxido de carbono se combina ms fcilmente
con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el oxigeno. El peligro de la intoxicacin
con monxido de carbono radica en el hecho de que la carboxihemoglobina no
tranporta oxigeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta ocupada con
monxido de carbono aparecen las cefaleas y vmitos; si lo esta un 50 %, la vida
peligra; si lo est un 60-70 %, se produce la muerte por asfixia.

3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidacin,

formndose la metahemoglobina. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por
da. La conversin de una fraccin de hemoglobina en metahemoglobina tiene un
efecto similar al de la carboxihemoglobina, es decir, pierde la capacidad de
transportar oxigeno. En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es
reducida a hemoglobina por accin de la diaforasa del eritrocito, enzima que permite
acoplar la NADH2 generada por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasa en la
reaccin de Embden-Meyerhoff

Entre los factores que ocasionan una acumulacin excesiva de metahemoglobina se

encuentra: a) La metahemoglobinemia hereditaria, por disminucin de la actividad de
la diaforasa o bien por sntesis de hemoglobinas anormales, y b) La
metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai ingesta de
frmacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se
suspende la administracin de las drogas.

4) La hemoglobina se combina con el dixido de carbono, producindose la

carboxihemoglobina. Esta combinacin se efecta con la globina de la molcula,
mediante la formacin de compuestos carbamnicos, reaccin que aumenta
considerablemente cuando desciende la saturacin con oxgeno.

5) La combinacin de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxgeno da lugar a la formacin

de oxihemoglobina (HbO2). Esta combinacin es reversible y la proporcin de
desoxihemoglobina que se transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con
el oxigeno depende de la presin parcial de oxigeno (PO2) del medio que rodea a la
42
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
molcula. Cuando toda la hemoglobina est como oxihemoglobina, se dice que el
contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de oxigeno" del
compuesto, pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la
capacidad de oxigeno, el contenido de oxgeno se expresa en trminos de porcentaje
de saturacin (SO2).

La saturacin arterial de oxgeno (SaO2), es la cantidad de oxgeno unida a las

molculas de hemoglobina en relacin a la cantidad total de molculas presente en la
sangre arterial. Contenido/ capacidad x 100

La medicin de la saturacin arterial de oxgeno requera de mtodos invasivos,

puncin vascular arterial, que hacan difcil su utilizacin en estudios dinmicos y en
estudios poblacionales. Esta limitacin se ha superado en la actualidad gracias al
advenimiento de mtodos no invasivos, como la oxirnetra de pulso.

La oximetra permite medir la cantidad de hemoglobina que es capaz de unirse

reversiblemente al oxgeno [hemoglobina funcional u oxihemoglobina (HbO 2)], en
relacin a la totalidad de hemoglobina presente en sangre (oxihemoglobina,
deoxihemoglobina, carboxihemoglobina y metahemoglobina). En la mayora de
circunstancias clnicas la carboxihemoglobina y la metahemoglobina, forrnas
disfuncionales de la hemoglobina, constituyen tan slo una fraccin insignificante de
la hemoglobina total. De tal forma que la medicin de la saturacin arterial de oxgeno
puede ser representada por la siguiente frmula:

[HbO2 ]
Saturacin (%) = ---------------------------- x 100
[HbO2] + [ Hb ]

La oximetra de pulso mide la fraccin de luz transmitida a travs de los tejidos. La

oxihemogobina absorbe ms luz cerca del infra-rojo (vg. 900 nm); mientras que la
deoxihemoglobina absorbe ms luz roja (vg. 660 nm). Por lo tanto, la absorcin de luz
por la oxihemoglobina y la deaxihemoglobina es diferente en estas dos longuitudes de
ondas.

Los oxmetros de pulso (figura 1) basicamente estn constituidos por dos diodos que
emiten luz en forma intermitente, y una clula fotosensitiva, capaz de medir por
separado y en forma secuencial la luz transmitida a travs de la piel, en el orden de mil
veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que emite luz roja y luego el diodo que
emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en ambas longitudes
de onda, son cuantificadas y cornparadas por la clula fotosensitiva para determinar el
porcentaje de la saturacin arterial de oxgeno.

La saturacin arterial de oxgeno normalmente vara entre 95 a 100% en sujetos de

nivel del mar y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes
alturas. En recin nacidos vara entre 85 a 90%. Valores que se modifican con el
ejercicio fsico y la altitud de residencia.

43
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Experimento N 1:

MEDIDA DE LA SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO

a) Materiales:

- 10 Oxmetros de pulso
- Sensores de Oxgeno (Fig. 2)
- Algodn
- Alcohol

b) Procedimiento:

1. Encender el oxmetro de pulso.

2. Limpiar y secar el dedo ndice, con algodn y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxgeno en el dedo ndice.
4. Leer y registrar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, tres
veces.

c) Resultados:

Saturacin (%) Fr. Cardiaca

1ra. Medicin

2da. Medicin

3ra. Medicin

Promedio

5. Determinar si la saturacin arterial de oxgeno vara en los diferentes dedos de

la mano derecha e izquierda
Saturacin (%) Fr. Cardiaca

Derecha Izquierda Derecha Izquierda

Dedo Pulgar

Dedo ndice

Dedo Cardinal

Dedo Anular

Dedo Meique

44
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
6. Determinar si la postura modifica la saturacin arterial de oxgeno.
Saturacin (%) Fr. Cardiaca

Posicin Decbito

Posicin Sentado

Posicin de Pie

Experimento N 2: EFECTO DEL EJERCICIO FISICO SOBRE LA SATURACIN ARTERIAL

DE OXIGENO

a) Materiales:

- Oxmetro de pulso
- Sensor de oxgeno
- Algodn
- Alcohol
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)

b) Procedimiento:

1. Con el sujeto experimental cmodamente sentado, monitorizar registrar la

saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, hasta lograr valores
constantes con un + 5% de variacin (Medicin Pre-Ejercicio).
2. Desconectar el oxmetro y solicitar al sujeto experimental que abra y cierre
rtmicamente ambas manos durante 10 minutos.
3. Al final del ejercicio motorizar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia
cardiaca (Medicin Post-Ejercicio)
4. Cada dos minutos monitorizar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca
hasta obtener valores similares a las condiciones basales (Pre-Ejercicio) (1ra.-
10ma. Medicin).

45
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
c) Resultados:

Tiempo (min.) saturacin (%) Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio

Post-Ejercicio

1ra. Medicin

2da. Medicin

3ra. Medicin

4ta. Medicin

5ta. Medicin

6ta. Medicin

7ma. Medicin

8va. Medicin

9na. Medicin

10ma. Medicin

Experimento N 3: ISQUEMIA Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO

a) Materiales:

- Tensimetro
- Cronmetro.
- Oxmetro de pulso.
- Sensor de oxgeno.

b) Procedimiento:

1. El sujeto experimental deber sentarse cmodamente, colocando los brazos

sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazn, medir la saturacin
arterial de oxigeno en el dedo ndice de ambas manos (1ra. Medicin).
2. Coloque el manguito del tensimetro, completamente desinflado, alrededor
del brazo derecho, de manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el
pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una
presin de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente la mano derecha
hasta que el sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la
saturacin arterial en el dedo ndice de la mano derecha y luego en el dedo
ndice de la mano izquierda (2da. Medicin).

46
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rtmicamente la
mano derecha hasta el momento en que el dolor sea insoportable y medir
nuevamente la saturacin arterial en ambas manos (3ra. Medicin).
6. Disminuir rpidamente la presin del sistema abriendo la vlvula de la pera
isuflora y retirar el tensimetro.
7. Medir y registrar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos
minutos durante 10 min. hasta obtener valores similares al de las condiciones
basales. (4ta.-6ta. Medicin).

c) Resultados:

Saturacin (%) Frecuencia Cardiaca

ndice ndice ndice ndice

Derecho Izquierdo Derecho Izquierdo

1ra. Medicin

2da. Medicin

3ra. Medicin

4ta. Medicin

5ta. Medicin

6ta. Medicin

47
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO

INFORME DE PRCTICA
Nombre:............................................................................................................................

Fecha:....../....../......

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

ANTECEDENTES PERSONALES:

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Nombre:..................................................................................Sexo:..................
Edad:..............aos

Peso:............Kg Talla:.............. mts Peso Ideal:...............Kg

Lugar de Nacimiento:...............................................................

T. Resd. Lima:.......................

Actividad Fsica:1) Sedentaria: ..........

2) Ocasional: ..........

3) Frecuente: ..........

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

EJERCICIO FSICO Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO:

Saturacin (%) Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio

Post-Ejercicio

Tiempo (min.) de
Recuperacin

ISQUEMIA LOCAL Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO:

Saturacin (%) Fr. Cardiaca

BRAZO DERECHO:

Basal

Iniciar Dolor

Dolor Soportable

48
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Tiempo (min.) de
Recuperacin

BRAZO IZQUIERDO:

Basal

Inicia Dolor

Dolor Soportable

Tiempo (min.) de
Recuperacin

49
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 8

FISIOLOGIA DE LA SANGRE

HEMATOCRITO

Es la relacin porcentual entre la cantidad de glbulos rojos y el plasma sanguneo en

relacin a la sangre total. Esta determinacin es muy til para del diagnstico
diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.

A. Reactivos , Material de Vidrio y Equipos

Anticoagulante de Wintrobe: Oxalato de potasio 0.8 gm y oxalato de amonio 1.2

gm y agua dest. csp. 100 ml.) Colocar 0.5 ml en cada frasquito de vidrio y
desecarlos en estufa a 56 C. Cada frasco as preparado servir para anticoagular 5
ml de sangre.

- Sangre venosa anticoagulada .

- Pipetas Pasteur y Tubo de Wintrobe
- Tubos capilares para microhematocrito con y sin heparina.
- Jeringas y agujas descartables.
- Desinfectante para piel..
- Guantes descartables
- Centrfuga Clnica
- Centrfuga para Microhematocrito
- Existen 2 mtodos: Macro y Micromtodo para determinar el Hematocrito.

B. Procedimiento:

Macromtodo de Wintrobe.
- Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca
100.
- Evitar formacin de burbujas.
- Centrifugar el tubo (contrapesado), a 3000 rpm. durante 30 minutos.
- Lectura en la escala ascendente en el lmite del paquete globular, excluyendo
los glbulos blancos y plaquetas.
- Expresar el Hematocrito en valor porcentual.

Valores Normales:

Hematocrito Valores

Referenciales %

Recin Nacidos 60

Infantes 35 a 44

Varones Adultos 41 a 52

Mujeres Adultos 38 a 46

50
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

Mtodo MICROHEMATOCRITO.

- Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con
plastilina.
- Centrifugar a 12,000 rpm en la centrfuga para microhematocrito, durante 10
min. Lectura en la tabla Ad-hoc para este efecto. Expresar el valor porcentual.

HEMOGLOBINA

Es una molcula de estructura cuaternaria, tetramrica proteica, es el pigmento rojo

portador del Oxgeno de los hemates. Est formada por un ncleo Hem y una protena
llamada Globina.

MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:

A. Materiales:
- Jeringa y agujas descartables.
- Desinfectante.
- Algodn.
- Ligadura.
- Alcohol.
- Anticoagulante de Wintrobe.
- Pipeta de Sahl de 0.02 ml
- Tubos de prueba.
- Solucin de HCl 0.1 N
- Espectrofotmetro.

B. Procedimiento
- Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la
pipeta de Sahl (0.02 ml). Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para
eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta. Vaciar en contenido de la
pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
- Mezclar, por inversin, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el
Espectrofotmetro, en Long. Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotmetro en
0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la lectura de Absorbancia.

CALCULOS:

Absorbancia del Problema X Factor de Calibracin = gm Hb %

51
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Valores Referenciales:

Hemoglobina Valores

Referenciales

gm %

Recin Nacidos 17 a 25

Infantes 10 a 15

Hombre Adulto l4a17

Mujer Adulto 12 a 16

Hombre de Altura 16.4 a 18.8

ndices Hematolgicos o Constantes Corpusculares

Los ndices hematolgicos, son elementos de juicio muy importantes para clasificar las
anemias, en relacin a su contenido de hemoglobina, volumen globular y valor
porcentual de la concentracin de hemoglobina en cada uno de los glbulos en
promedio.

VOLUMEN GLOBULAR MEDIO

Volumen Globular Medio = Hcrito x 10 = micras cbicas

GR
Valores Normales:

o Al nacer: 105 micras cbicas

o Infancia: 83 a 87 micras cbicas
o Adulto: 83 a 95 micras cbicas

HEMOGLOBINA MEDIA GLOBULAR

Hemoglobina media globular = Hb x 10 = Micro microgramos

GR
Valores Normales: 27 a 32 Micro microgramos

CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA

C Hb Glob Media = Hb gr% X 100

Hto

Valores Normales: 32 a 36%

52
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR

La Velocidad de Sedimentacin globular consiste en determinar la rapidez de cada

sedimentacin de los glbulos rojos de la sangre cuando est anticoagulada, esto se
realiza en un tubo de caracteristicas especiales llamado tubo de Wintrobe.

A. Materiales:
- Tubo de Wintrobe
- Algodn, alcohol, ligadura, agujas y jeringas descartables. Anticoagulante de
Wintrobe.
- Pipetas Pasteur.
- Guantes de ltex descartables.
- Gradilla tipo soporte vertical para el tubo Wintrobe, perpendicular a la
mesa (plomada).

B. Procedimiento

Llenar el tubo con sangre venosa anticoagulada hasta la marca 0 de lectura de la

Velocidad., empleando la pipeta Pasteur. Luego dejar en reposo vertical,
perpendicular, durante 60 min. Lectura en la escala de valores descendentes para
Velocidad de Sedimentacin.

Los Valores Referenciales de Velocidad de Sedimentacin, segn el mtodo

Wintrobe son:

- Hombres: 0 a 6.5 mm a la hora

- Mujeres: 0 a 15 mm a la hora

Grfica de Wintrobe y Landeberg para corregir la Velocidad de Sedimentacin

cuando existe Anemia Policitemia. La V. S. tiende a ser ms rapida en la anemia
intensa, y disminuir en la Policitemia. En presencia de una de estas anomalias debe
hacerse la correccin de los resultados obtenidos con la grfica diseada por el
mismo Wintrobe. Se corrgir la VS. en funcin del Hematocrito del paciente.

Valores Referenciales de Glbulos Rojos:

- Recin Nacidos: 6 000.000 pmm3

- Nios: 4 000.000 a 5 500.000 pmm3
- Hombres adultos: 4 500.000 a 6 000.000 pmm3
- Mujeres adultas: 5 200.000 a 5 400.000 pmm3

53
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
HEMOSTASIA Y COAGULACIN DE LA SANGRE

HEMOSTASIA: significa prevencin de la prdida de sangre. Cuando se lesiona o rompe

un vaso la hemostasia se consigue mediante:

A. ESPASMO o CONSTRICCION VASCULAR

B. FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO
C. COAGULACION SANGUINEA: FORMACION DE UN COAGULO DE FIBRINA
DEBIDO A LA COAGULACION DE LA SANGRE
D. PROLIFERACIN FINAL DE TEJIDO FIBROSO DENTRO DEL COGULO
SANGUNEO PARA CERRAR DE FORMA DEFINITIVA EL AGUJERO DEL VASO.

A) ESPASMO O CONSTRICCION VASCULAR: Ante un corte o lesin de un vaso

inmediatamente se produce el espasmo vascular que es el resultado de un reflejo
migeno local y factores humorales locales de los tejidos traumatizados y de las
plaquetas. Los reflejos nerviosos se inician por impulsos dolorosos o de otro tipo
originados en el vaso traumatizado o en los tejidos vecinos. La lesin directa de la
pared vascular genera la contraccin migena refleja de la pared vascular adems la
adrenalina ejerce accin vasoconstrictora.

En los vasos de menor calibre las plaquetas se acupan de la mayor parte de la

vasoconstriccin al liberar el vasoconstrictor Tromboxano A2.

Cuanto mayor es el vaso sanguneo mayor es el grado de espasmo, que en algunos

casos puede impedir una prdida mortal de sangre.

B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO: Ante un vaso daado las plaquetas se

hinchan, emiten pseudpodos y hacen pegajosas y se adhieren fuertemente al tejido
colgeno expuesto y se unen al Factor von Villebrandt, aumenta el ADP y se forma
Tromboxano A2.

ADP Y Tromboxano activan las plaquetas y aumentan su "Adherencia" y se van

"Agregando" en el sitio lesionado y se forma el "Tapn plaquetario".

C) COAGULACION SANGUINEA: Formacin del cogulo de fibrina debido a la

coagulacin de la sangre:

Teora bsica:

En la sangre hay sustancias que favorecen la coagulacin:

PROCOAGULANTES y sustancias que la inhiben: ANTICOAGULANTES.

La coagulacin de la sangre depende del equilibrio entre estos dos grupos de

sustancias.

En el torrente sanguneo normalmente predominan los anticoagulantes de forma que

la sangre no se coagula mientras est circulando en los vasos. Sin embargo cuando se
54
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
rompe un vaso, se "activan" los Procoagulantes del rea de la lesin tisular y anulan a
los anticoagulantes, con lo que se forma el cogulo.

MECANISMO GENERAL DE LA COAGULACION CASCADA de la Coagulacin.

La Coagulacin se realiza en TRES ETAPAS:

1.- Formacin del Complejo Activador de la Protrombina

2.- Conversin de la Protrombina en Trombina (conversin catalizada por el

Activador de la Protrombina).

3.- Conversin del Fibringeno en Fibrina (conversin catalizada por la

Protrombina).

Los mecanismos de la coagulacin se ponen en funcionamiento por:

1.- Traumatismo pared vascular o tejidos adyacentes (endotelio)

2.- Traumatismo de la sangre

3.- Contacto de la sangre con las clulas endoteliales daadas con colgeno y
otros elementos titulares en el exterior del vaso sanguneo.

En todos los casos LO PRIMERO QUE SE FORMA ES EL "ACTIVADOR DE LA

PROTROMBINA" que transforma la Protrombina en Trombina e inicia los pasos
posteriores de la Coagulacin (Va final comn).

Se considera que el "Activador de la Protrombina" se forma por las dos Vas, aunque
en realidad las dos vas interactan constantemente:

LA VA EXTRNSECA: Comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los

tejidos subyacentes (lesin tisular) o un tejido extravascular sufre un
traumatismo y entra en contacto con la sangre circulante. La clula endotelial
vascular daada libera un Factor Tisular llamado Tromboplastina Tisular III,
fosfolpidos y un complejo lipoproteico y se desata as la va Extrnseca. As
pues, el tejido lesionado ha liberado esta serie de sustancias o complejo de
factores (FACTOR TISULAR O TROMBOPLASTINA III TISULAR) que trabaja como
una verdadera enzima activando al Factor VII ----- VIIa. y ste en presencia del
Ca++ activan al Factor X ---- Xa, ste a su vez activa al V ----- Va el cual genera el
COMPLEJO ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA. (Observar las
retroalimentaciones enzimticas en el cuadro de la cascada). Luego
Fribringeno ---- Fribrina cogulo.

VA INTRNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la

exposicin de la sangre al propio tejido colgeno expuesto por el traumatismo
del vaso sanguneo lesionado, hay contacto de la sangre con epitelios distintos
del vascular normal: Se Activa el Factor XII --- XIIa y se liberan fosfolpidos
plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. Luego se activa el XI --- XIa

55
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
en presencia de Ciningeno. Se activa luego el IX..IXa, y el IXa junto con el
VIII..VIIIa activan al X ----- Xa.
El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE
LA PROTROMBINA. Y sigue luego la va final comn de conversin de la
Protrombina en Trombina y Fibringeno en Fibrina y el cogulo es consolidado
por el factor XIII.

Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulacin excepto en

los primeros pasos de la va intrnseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones
de calcio la sangre no se coagular por ninguna de las dos vas.

EVALUACION DE LA HEMOSTASIA Y LA COAGULACION DE LA SANGRE

TIEMPO DE COAGULACIN

Se denomina as al tiempo que transcurre desde que la sangre es extrada hasta que
pasa al estado de gel. Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular
en ausencia de factores provenientes de los tejidos (factor tisular). El trauma que
significa la obtencin de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo de tiempo entre la
obtencin de la muestra y su coagulacin es lo que se denomina Tiempo de
Coagulacin. Esta es en trminos generales una prueba grosera de la coagulacin. Sirve
para detectar groseramente alteraciones de la coagulacin que puedan alargarla. La
prolongacin del Tiempo de Coagulacin puede deberse a varias causas;:

1.- Disminucin de la Tromboplastina,

2.- Disminucin de la Protrombina,

3.- Disminucin del Fibrigeno

4.- A la presencia en la sangre de algn anticoagulante.

METODO DE LEE WHITE

A. Reactivos y Aparatos:
- Tubos de prueba de 8 mm dimetro, limpios y secos
- Agujas y jeringas para uso endovenosos descartables, estriles.
- Bao mara 37 C
- Reloj cronmetro

B. Procedimiento:
- Obtener 3 ml de sangre venosa, anotando la hora exactamente (Para controlar
el tiempo de inicio)
- Inmediatamente transferir 1.5 ml de sangre a cada uno de los tubos y
colocarlos en Bao Mara a 37C. Luego de tres min. de reposo ir sacando cada
uno de los tubos e ir inclinndolos suavemente en 90 cada minuto, hasta que
no se observe desplazamiento de sangre y pueda ser completamente invertido
el tubo sin caerse la sangre. Anotar el tiempo.

56
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

Valores referenciales:

Con este mtodo de Lee White los valores normales para hombres y mujeres vara
entre: 5 a 8 min.

Los valores referenciales dependen del dimetro del tubo empleado:

- Usando tubos de dimetro interno de 11 mm: 9 a 15 min.

- Usando tubos de dimetro interno de 8 mm: 6 a 10 min.

Existen otros mtodos para determinar el tiempo de Coagulacin por ejemplo el

mtodo del portaobjetos: Valor normal de 2 a 8 minutos.

MTODO DEL TUBO CAPILAR: Valor referencial de 3 a 7 min.

TIEMPO DE SANGRA

El tiempo de sangra depende de la elasticidad de la pared vasos sanguneos y de la

cantidad y capacidad funcional de las plaquetas.

El tiempo de sangra es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una

puncin standard profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aqul en que la
sangre deja de brotar de la herida.

METODO DE DUKE

A. Reactivos y Aparatos:
- Cronmetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.

B. Procedimiento:

Desinfectar la yema de un dedo (anular) el lbulo de una oreja y punzar con la

lanceta descartable standard de manera que la sangre fluya libremente, gota a
gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el tiempo de aparicin de la primera
gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30 segundos sin tocar
la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.

Valores Referenciales: 1 a 3 MINUTOS.

TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DETROMBOPLASTINA PARCIAL

En la presente prctica evaluaremos las dos vas de la coagulacin por separado:

Primero determinaremos la VA EXTRNSECA de forma global mediante la

determinacin del Tiempo de Protrombina o Tiempo de Quick, que determina los
factores involucrados en esta va como son: Factor VII llamado Proconvertina, el Factor

57
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
II Protrombina, el Factor V Proacelerina y el Factor X llamado Factor de Stuart-
Prower. Cualquier alteracin de estos factores ser detectado por la determinacin del
Tiempo de Quick. Esta prueba no detecta deficiencias en los factores de la va
intrnseca (VIII, IX, XI, XII).

Para el TP usaremos un exceso de Tromboplastina Tisular o Factor III (de cerebro) y

calcio. Puede usarse Simplastin de Warner Chilcota. El mtodo que emplearemos para
TP es el de la Casa Wiener que se llama Soluplastn y que es una Tromboplastina
tisular (de cerebro) de alta calidad e incluye cloruro de calcio y cloruro de sodio.

A. Materiales:
- Soluplastin (Tromboplastina clcica) Casa Wiener
- Lab. (Rosario. Argentina)
- Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm.
- Cronmetro
- Bao Mara 37 C
- Asa de alambre Nquel Cromo Nuevas (Bacteriolgicas)
- Micropipetas 100 y 200 lambdas.

Muestra de plasma sanguneo:

- En un tubo de ensayo contendiendo 0.5 mI de anticoagulante citrato trisdico

3.8 % u oxalato de sodio aadir 4.5 ml de sangre venosa
- Mezclar suavemente, centrifugar y separar el plasma.

B. Procedimiento para TP:

- Usar tubos de 13 x 100 mm:
- Pre incubar el plasma: en un tubo de ensayo, marcado (Px) colocar 1 ml del
plasma en BM 37 C, por 3 min. (El saldo del plasma refrigerarlo). (No pre
incubar mas de 10 min.)
- Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de
Soluplastin en cada uno y colocar en BM a 37 C por 3 min. (No pre incubar mas
de 10 min.).
- Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y aadir rpidamente al tubo
conteniendo los 0.2 ml de Soluplastin, disparando simultneamente el
cronmetro.

Soluplastin pre incubado 37C 0,2

( incluye calcio) ml

Plasma pre incubado 37C ml 0.1 y! cronmetro!!

Simultneamente,

de inmediato iniciar cronmetro Simultneo

Mezclar y esperar cogulo y de inmediato frenar

cronmetro

Anotar tiempo en segundos.

58
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

- Mantener el tubo dentro del Bao Mara cerca de una fuente de luz. Previo al
tiempo estimado de coagulacin sacar el tubo del bao e inclinar suavemente
por una o dos veces por segundo y detener el cronmetro en el momento
exacto de la aparicin del cogulo, que se manifestara por la aparicin de muy
discretos hilos de fibrina, en ese instante precisamente para el cronmetro.
- Repetir por triplicado esta prueba. Calcular el valor promedio en segundos.

Valores Referenciales:

11- 12 sgs. + - 2 segs del control Normal

El control Normal estar entre 10 a 13 segundos +- 0.5 2DS.

Con estos valores en segundos a travs de una curva de calibracin podemos

expresarlos en porcentaje de actividad protrombinica en relacin a los valores
normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra los valores porcentuales:

Tiempo Protrombina Actividad Protrombnica

en segundos Valores porcentuales

Respecto de lo Normal

11 - 12.5 100 %

13.5 60 %

15 50 %

17 40

19.5 30

22 25

24 36 20

37 40 10

55 65 5

El tiempo de Protrombina se encuentra alargado por defectos de Factor I

(Fibringeno), Factor H (Protrombina), Factor V (Proacelerina F. Lbil), Factor VII
(Factor Estable Proconvertina), y Factor X (Factor Stuart-Prower).

El TP se encuentra prolongado en pacientes con dieta deficitaria en Vit K, infantes

prematuros, infantes recin nacidos de madres que estn con deficits de Vit K (es la
enfermedad hemorrgica del recin nacido).

59
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
En la mala absorcin de las grasas, ictericia obstructiva, diarrea crnica, etc.

El TP est prolongado tambin en el dao heptico severo (envenenamientos,

hepatitis, cirrosis).

Por Drogas (tipo coumarnico de la terapia anticoagulante)

Presencia de anticoagulantes circulantes, hipofibrinogenemia adquirida o hereditaria.

En resumen, debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con

TRES fines:

1.- Para la evaluacin de los desrdenes de la Coagulacin: para investigar la

anormalidad de los factores involucrados en la va Extrnseca V, VII, X,
Protrombina y Fibringeno. Y debe ser usada junto con el tiempo de
Tromboplastina Parcial Activada.

2.- Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y
derivados indanedionas.

3.- Evaluacin de la funcin heptica: el test del Tiempo de Protrombina es uno de

los mas tiles para evaluar la capacidad del hgado en la sntesis de los factores
del complejo Protrombnico: II, VII, y X.

DETERMINACIN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO.

(TTPA APTT PTT).

El TTPA es un mtodo de investigacin de la VA INTRNSECA de forma global XII, XI, IX,

X, VIII, V, II y I. En esta prueba APPT se usa un activador especfico de la Va Intrnseca
(del Factor XII) y es un Fosfolpido CEFALINA activado con caoln slice micronizado. El
test de TTPA consiste en la recalcificacin del plasma en presencia de un exceso de
cefalina fosfolpido, (que es un sustituto de las plaquetas y factor plaquetario)
preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaoln tamponado. Esta
prueba usa este activador especfico de la va intrnseca que es el Factor plaquetario -3
sustituido por la cefalina fosfolpido de cerebro de conejo y que tiene adems un
activador kaoln en finsimas partculas slice micronizado (activador para el Factor
XII) de la va intrnseca solamente y un tampon de piperazida estanolsulfnico. Adems
este reactivo tiene una especial reactividad con la presencia de heparina lo cual lo hace
especial para el monitoreo de la teraputica con heparina.

Emplearemos en esta prctica el mtodo de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina
fosfolpido y que se llama reactivo APTTEST

METODO DE CASA WIENER LAB.

PTT APT TEST

A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l)
B. Reactivo de APTT: al vial del liofilizado, aadir el volumen de agua indicado
en el rasco que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversin,
queda as listo el homogenizado.
C. Obtencin de la muestra de sangre:
60
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
A 4.5 cc de sangre venosa aadirle 0.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio.
Centrifugar para separar el plasma.
D. Distribuir los reactivos en la siguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x
75 mm de dimetro o 13 x 100 ml:

TUBO 1 TUBO 2

Plasma desconocido 100 ul (LAMBDAS)

PLASMA CONTROL 100 ul (LAMBDAS)

NORMAL O ESTANDAR
REACTIVO DE APTT 100 ul (LAMBDAS) 100 ul (LAMBDAS)
(HOMOGENIZADO)

Mezclar e incubar por 3 minutos cada uno de los tubos a 37C.

Al tubo N 1 aadirle solucin de cloruro de calcio pre incubado a 37 C . 100 ul.

Inmediatamente disparar el cronometro, agitar suavemente y mantenerlo en el bao
mara por 25 segundos solamente y luego retirarlo para observar la formacin del
coagulo, que se manifestara por la aparicin de filamentos de fibrina inmediatamente
detener el cronmetro, este es el tiempo de Tromboplastina Parcial, valores normales
de 33 a 48 segundos.
Al tubo N2 que es el control normal le aadiremos luego Cloruro de calcio 100 ul y
procederemos exactamente igual que el caso anterior y servir como control normal,
cuyos valores normales van desde 33 a 48 segundos.

Tambin podemos emplear los reactivos de cefalina con caoln de la casa francesa
que vemos a continuacin.

A. Equipos, reactivos y materiales .-(idem que TP)

B. Procedimiento para APTT:

Emplearemos CK Prest activado (Cefalina con Kaolin) (APTT) (Diagnostica Stago-

Francia).

- Reactivo N 1: Cefalina
- Reactivo N 2: Kaoln tamponado :

Agitar el contenido del frasco N2 y transferido completamente dentro del frasco

N1. Dejar que repose 30 min. para embeber el gel. Y despus de la imbibicin,
agitar suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura.

Solucin de Cloruro de calcio (C12Ca): 0.025 M

Cl2 Ca anh ..1.38 gm

Agua destil..500 ml

Pipetas automticas de 100 lambdas

61
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

En un tubo ensayo 13 x 100mm que est previamente en el BM a 37 C colocar:

Plasma paciente 0.1 ml

Plasma paciente duplicado 0.1 ml

Plasma paciente triplicado Control Normal 0.1 ml

React 1 Cefalina Bien Reconstituido

0.1 ml
y resuspendido

Mezclar y pre incubar 37C

3 minutos
Exacto

Simultneamente: Aadir Cl2Ca 0.025M

0.1 ml
precalentado e INICIAR CRONOMETRO

Mezclar y esperar cogulo. Parar cronmetro

inmediatamente que aparezca el cogulo

Anotar tiempo en segundos EXACTO

Los valores referenciales varan de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relacin a

un control normal Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial est prolongado, pero el
Tiempo de Protrombina es Normal nos indica un a alteracin de alguno de los factores
de la va intrnseca de tipo congnito: VIII, IX (Hemofilias), XI, XII. Si todos estos
factores estn normales, puede haber una deficiencia de HMWK kiningeno (Factor
Fritgerald). Tambin se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas
condiciones anormales como: Enfermedades hepticas, Coagulopata por consumo,
anticoagulantes circulantes, en la terapia anticoagulante oral, o en la heparizacin.
en el tratamiento con inhibidores de la trombina como hirudina, argatroban., etc

62
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

Va Intrnseca Va Extrnseca

XII
FACTOR

Tiempo Pre K
TISULAR
Tromboplastina
Tiempo
Parcial HMWK
Protrombina
Activada VII
XI
Tromboplastinas
Celafina y kaoln
Tisulares:
IX

VIII

VA FINAL
COMUN

Protrombina Trombina

Fibriongeno Fibrina
XIII

63
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

GRUPOS SANGUNEOS Y FACTOR RH

A. Introduccin

En 1900, Landsteiner descubri que el suero de algunas personas aglutinaba los

glbulos rojos de otras y que ste fenmeno podra ser usado para clasificar a las
personas en diferentes fenotipos de grupos sanguneos. Se reconocen 4 fenotipos
cimunes: O, A, B, y AB. Tambin se han identificado antgenos de los subgrupos del
tipo A y B.

Cada tipo de glbulo rojo transporta un Antgeno determinado, especfico, que le

es caracterstico. El plasma de las personas tiene Aglutininas Naturales
Anticuerpos diferentes al de su propio grupo, as por ejemplo las personas del
Grupo A tienen aglutininas Anti B. El plasma de las personas del Grupo B tiene
Aglutininas (Anticuerpos naturales) Anti A. El plasma de las personas del Grupo O
tiene un ttulo bajo de Aglutininas Anti A y Anti B. (Es muy importante saber que
algunas personas del Grupo O pueden tener un ttulo elevado de aglutinininas Anti
A y Anti B y ser donantes peligrosos).

Es absolutamente necesario y obligatorio hacer siempre una prueba compatibilidad

mayor y menor entre el Donante y el Receptor antes de realizar una transfusin de
sangre cualquier sea el tipo de sangre y/o Rh.

El fenotipo ABO de una persona es determinado mediante reacciones de

aglutinacin de los hemates con antisueros monoclonales Anti A, Anti B, Anti AB y
antisueros de los Subgrupos correspondientes.

Determinacin del Grupo Sanguneo:

Este procedimiento se basa en la aglutinacin de los glbulos rojos (que transportan

un Antgeno especfico), que se produce cuando est en presencia de su
correspondiente anticuerpo especfico.

Los reactivos usados para la tipificacin de los grupos del Sistema ABO contienen
anticuerpos monoclonales IgM. Estos reactivos producirn aglutinacin directa de los
glbulos rojos que transporten el antgeno especfico correspondiente. La
determinacin del grupo sanguneo puede hacerse por el mtodo del tubo de ensayo
por el mtodo en lmina portaobjeto.

MTODO EN LMINA PORTAOBJETO:

B. Materiales y Reactivos:
- Suero monoclonal Anti A
- Suero monoclonal Anti B
- Suero monoclonal Anti AB
- Lmina excavada o lmina portaobjetos
- Lancetas descartables
- Muestra de sangre
- Algodn y desinfectante

64
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
C. Procedimiento para Determinar el Grupo Sanguneo

1.- Dividir una lmina portaobjetos en 3 secciones: izquierda, central y derecha

con lpiz de cera marcador.

La muestra de sangre puede obtenerse de la yema del dedo o por venipuntura.

Colocar una gota suero Anti A en el lado izquierdo y una gota del suero Anti B
en el centro y una gota del suero Anti AB en la derecha de una lmina de
vidrio plana.

Colocar una gota de sangre al lado de cada una de las gotas del antisuero
correspondiente sin tocar los reactivos !!, para evitar contaminacin cruzada, y
luego mezclar bien usando aplicadores o baguetas distintas.

2.- Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinacin
macroscpica. La aglutinacin se producir en unos pocos segundos. La lectura
deber hacerse antes de que se seque la mezcla. El tiempo mximo habitual es
de tres minutos.

INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS CON ERITROCITOS

EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUNEO

Grupo Suero Suero Suero

Sanguineo Anti - A Anti - B Anti - AB

O - - -

A + - +

B - + +

AB + + +

+: Indica aglutinacin macroscpica

- : Indica que no hay aglutinacin

FACTOR RHO (D)

Aparte de los Antgenos del sistema ABO, existe otro que es el sistema de Antigenos
del Rh que son de gran importancia fisiolgica y clnica.

El Factor Rh (Aglutingeno o Antgeno) llamado as por que fue estudiado por primera
vez en los monos del gnero Rhesius, es en realidad, un sistema compuesto por mucho
Antgenos: Ver Tabla

65
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Fisher-Race Wiener

Dce Rho

DCe Rh1

DcE Rh2

Dce rh (hr)

dCe rh

dcE rh

dCE Rhy

DCE Rhz

El factor D, es con mucho, el ms antignico y el trmino Rh Positivo, como

generalmente se usa, significa que el individuo tiene Aglutingeno D.

El individuo Rh Negativo no tiene antgeno D y solo forma la aglutinina Anti D cuando

se le inyectan clulas D positivas. El suero que se emplea rutinariamente para tipificar
el Rh es un suero Anti D.

El 85% de los caucsicos son Rh Positivos y el 15% restante Rh Negativos. Las personas
Rh negativas (D Negativas) que reciben una transfusin de sangre Rh Positiva (an
muchos aos antes) forman Anticuerpos Anti Rh y tienen ttulos Anti D apreciables y
dan reacciones transfusionales graves cuando reciben una transfusin de sangre Rh (D)
Positiva.

Igualmente sucede cuando una madre Rh (D) Negativa concibe un hijo D positivo,
porque pequeas cantidades de sangre del feto se filtran a la circulacin materna en el
momento del parto y desarrollan ttulos elevados de aglutininas Anti Rh durante el
post parto. Durante el embarazo siguiente las aglutininas desarrolladas contra el
antgeno RH cruzan la placenta y llegan al feto que ha heredado el antgeno Rh positivo
del padre y se produce la reaccin Antgeno-anticuerpo que produce hemlisis y la
Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido (Eristroblastosis Fetal).

DETERMINACIN DEL FACTOR Rh.

A. Materiales y Reactivos:
- Reactivo Antisuero Monoclonado Anti - Rho (Anti D)
- Lmina portaobjeto
- Varillas de vidrio aplicadores
- Lancetas descartables
- Desinfectante y Algodn
- Lpiz de cera marcador.

66
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
B. Procedimiento:
- En una lmina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema.
- Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh.
Mezclar bien. Observar inmediatamente para ver si existe o no aglutinacin.

C. Interpretacin:

Sangre total paciente + Suero Anti- Rh (D) RESULTADO

AGLUTINACIN Rh (D) POSITIVO

NO AGLUTINACIN Rh (D) NEGATIVO

INVESTIGACIN DE LA SENSIBILIZACIN DE LOS HEMATES

Cuando algn anticuerpo (por ej. Garnmaglobulina - IgG) se fija y recubre al glbulo
rojo se dice que el eritrocito est sensibilizado. Los eritrocitos pueden sensibilizarse in
vivo, y esto ocurre por ejemplo en la Eritroblastosis Fetal (EF), que es una enfermedad
del Feto y del Recin nacido y se caracteriza por aglutinacin y fagocitosis de los
eritrocitos del feto, que se produce cuando una madre siendo Rh Negativa y el esposo
Rh Positivo, concibe un nio Rh positivo.

El nio hereda el Rh Positivo del padre. Durante el embarazo la madre desarrolla

Aglutininas Anti - Rh por la exposicin al antgeno (Aglutingeno Rh) del nio. A su vez,
stas aglutininas Anti Rh de la madre difunden por la placenta al feto y recubren los
glbulos rojos del feto. Los hemates del nio estn ahora sensibilizados y esto
produce la aglutinacin y lisis de los hemates del propio hijo. Durante el primer
embarazo puede no producirse dao, pero durante el segundo embarazo el 3 %
presentarn E F; durante el tercer embarazo el 10 % presentarn EF, y as va
aumentando la incidencia.

Se puede investigar la presencia de estos anticuerpos (IgG- anti Rh) que recubren a los
hemates del nio mediante el Test de Coombs Directo (test de Antiglobulina directo)
y que es el objeto de la presente prctica.

TEST DE COOMBS DIRECTO:

Esta Prueba se realiza en los hemates del paciente.

A. Fundamento

Esta prueba se fundamenta en la aglutinacin de los eritrocitos humanos

sensibilizados por anticuerpos gamma-globulnicos que se produce cuando se les
coloca en presencia de un suero antihumano gamma-globulnico preparado en
conejos. Este suero antiglobulnico puede ser especfico para globulina IgG,
tambin puede ser un preparado monoclonalmente obtenido.

Esta Prueba DIRECTAMENTE demuestra la sensibilizacin de los eritrocitos que se

ha producido en vivo.

67
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
B. Materiales y Reactivos:
- Centrfuga Clnica y Microscopio Binocular
- Suero Antiglobulnico de Coombs (Gamma IgG) (Monoclonal)
- Hemates del paciente (Nio)
- Solucin Salina 0.85 % Tubos de prueba de vidrio 13 x l00 mm y 12 x 75 mm;
algodn, desinfectante de piel (Alcohol iodado), ligadura venosa, aguja y
jeringas descartables. Varillas de vidrio mondadientes de plstico, pipetas
Pasteur.

C. Procedimiento:

Lavado previo de los glbulos rojos:

1.- Medir aproximadamente 0.4 ml de sangre y colocar en el fondo de un tubo

de prueba de 13 x 100 mm, aadir luego 6 ml de solucin salina 0.85 %. Mezclar
suavemente por inversin.

2.- Centrifugar a 3400 rpm. Por 30 segundos hasta que las clulas se
empaqueten al fondo del tubo.

3.- Decantar la solucin salina completamente, limpiando la boca del tubo con
papel servilleta.

4.- Repetir el lavado dos veces mas, aadiendo una pequea cantidad de
solucin salina al comienzo y mezclar para suspender bien los eritrocitos; y
luego aadir una mayor cantidad de solucin salina lavando hacia abajo la
pared interna del tubo de prueba. Despus del tercer lavado el sobrenadante
debe estar completamente limpio de sangre, absolutamente lmpido y
transparente.

5.- Ahora, calcular (aproximadamente) el volumen de los glbulos rojos

lavados, anotar este volumen, y aadir una cantidad de solucin salina como
para hacer una suspensin de glbulos al 2%

6.- En otro tubo de prueba colocar 2 gotas de esta suspensin al 2 % y aadir 1

gota de 1 suero de Coombs.

7.- Centrifugar a 5000 rpm. durante 15 segundos.

8.- Muy suavemente, con gran cuidado, percuta con un dedo el fondo del tubo,
lo suficiente para dislocar el fondo celular y observar la aglutinacin tanto
macroscpica como microscpicamente con objetivo en seco a 40 X.

D. Resultado:

La presencia de aglutinacin indica una Prueba de Coombs Directa POSITIVA,

demostrando que los eritrocitos estn sensibilizados.

Ausencia de Aglutinacin: Test de Coombs Directo: NEGATIVO.

E. Interpretacin:

Esta Prueba Coombs Directa es POSITIVA en los casos de:

68
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Y REHABILITACION
- Eritroblastosis Fetal, Anemias Hemolticas Autoinmunes y sirve tambin para el
diagnstico de reacciones transfusionales debido a Incompatibilidad sangunea.

TEST DE COOMBS INDIRECTO

Detecta los anticuerpos presentes en el suero del paciente (madre) y para ello deben
sensibilizarse primero in vitro algunos glbulos rojos de otra persona de grupo
conocido (Tipo O por ejemplo) y luego de haber sensibilizado los glbulos rojos
escogidos se les aplica el Coombs Directo. Para sensibilizar a los para glbulos rojos
seleccionados (conocidos) se debe primero incubar el suero del paciente (madre) con
los eritrocitos seleccionados (grupo O por ejemplo) para que las clulas se sensibilicen
(es decir, se recubran con el anticuerpo srico) si es que est presente, y, despus
averiguar si estn sensibilizadas aplicndoles el test de Coombs Directo, tal como
hemos descrito lneas arriba..

TEST DE COMPATIBILIDAD CRUZADA

MUESTRAS Y REACTIVOS TUBO A TUBO B

Suero del Paciente

2 gotas 2 gotas
Receptor

Hemates del Dador

Suspensin al 2 % 2 gotas 2 gotas

En salina

Albmina Bovina --------

2 gotas
22% --

Centrifugar (serofuga
s s
a 1000 rpm) 1 minuto

- EXAMINAR ambos tubos por aglutinacin hemlisis.

- Luego INCUBAR ambos tubos A y B, en BM a 37 C por 15 minutos
- CENTRIFUGAR por 1 minuto a 1000 RPM. Lectura del tubo B por aglutinacin
hemlisis.
- Luego CONTINUAR con el tubo "A": Tres lavados en sol salina 0.9 %
- Aadir suero de Coombs 2 gotas
- Centrifugar a 1000 rpm durante 1 min
- Lectura por aglutinacin hemlisis
- Interpretacin de Anticuerpos:

TUBO "A": detecta incompatibilidad hacia: Sistema ABO , MN, P, Lewis

TUBO "B": detecta incompatibilidad: Antic. Rh, Duffy, Kidd, Cellano y Antic.calientes.

69
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

70
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 9

FISIOLOGIA RENAL

FUNCIN GLOMERULAR, DEPURACIN DE CREATININA ENDOGENA.

Es una medida muy aproximada de la funcin glomerular.

La filtracin glomerular es un proceso mecnico que se produce como resultado de un

juego de presiones:

1. La presin hidrosttica dentro del glomrulo es + 60 mmHg (70% de la presin

artica)

2. Se oponen a la filtracin:

a. La presin onctica proteica 32 mmHg -

b. La Presin Inters. caps. Bowman 18 mm Hg

Presin Neta de Filtracin

- 50 mm Hg
- +10 mmHg

El rin trata, dentro de ciertos lmites, de mantener una presin de filtracin eficiente
mediante mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente.

En 24 horas se filtran 180 litros de lquido por los glomrulos pero se excretan
solamente 1 a 1.5 litros de orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis
reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.

No solamente hay reabsorcin de agua a nivel tubular sino tambin de muchas otras
sustancias del filtrado glomerular y que son tiles al organismo como glucosa,
aminocidos, sodio, potasio, cloro, etc.

El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporcin que en

el plasma sanguneo exceptuando las protenas.

La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.

Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la accin tubular el organismo perdera

grandes cantidades de agua, sales, elementos tiles como glucosa, aminocidos, etc.
Junto con los productos finales del metabolismo de las protenas como la urea,
creatinina, cido rico, y otros.

Concepto de Clearance:

El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa
depuracin o limpieza y se entiende por Clearance o Depuracin renal de una
sustancia al nmero de centmetros cbicos de plasma que son liberados de dicha
sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el rin. Si una sustancia es
nicamente filtrada por el glomrulo, y no reabsorbida, ni secretada por el tbuli, su
71
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
depuracin medir el nmero de ml que los glomrulos filtran en un minuto. Es el caso
de la Inulina, el manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomrulo, pero no
se reabsorben ni secretan por los tbulis renales.

La depuracin de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia

excretada en la orina en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha
sustancia en un ml de plasma.

Llamemos V el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recoleccin en

minutos (cc/min.))
U a la concertacin de una sustancia x en orina mg/ml y

P a la concentracin de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml

SI MULTIPLICAMOS U x V , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1

min. Y LA FORMULA DE LA DEPURACIN SER: C=UxV
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.

Se escoge la CREATININA para medir la filtracin glomerular porque el manejo renal de

este metabolito es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuracin es
una medida muy aproximada de la filtracin glomerular, y se usa como ndice de
funcin glomerular.

EJEMPLO UN SUJETO TIENE 55 Kg. DE PESO Y MIDE 1.65 m, EL DOSAJE DE CREATININA

EN LA SANGRE ES 0.9 mg/dl EN SUERO.

Es decir 0.009 mg/ml entonces P = 0.009 mg/ml

El volumen urinario fue de 1500 cc en 24 horas: 1500/1440 1.04 ml/min., es decir V =

1.04 ml/min.

La concentracin de creatinina en la orina fue de 100 mg %, es decir 1.5 mg/ml.

La depuracin ser:

C = 1.0x1.04 = 115 ml/min.

0.009

Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomrulo han sido liberados de
toda su creatinina en 1 minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA:
1.65 m. le corresponde una ASC. de 1.60 m2 de acuerdo al Nomograma segn la
frmula de Du Bois.

Depuracin corregida = depuracin sin corregir x 1.73 / ASC = ml/min./1.73 m2 de ASC

ASC

115 mlmin 1.60 m2

X 1.73 m2

72
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

X= 115 x 1.73 = 124 ml/min./1.73 m2 ASC (DEPURACIN CORREGIDA)

1.60

METODO PARA EL DOSAJE DE CREATININA EN SANGRE Y ORINA

En esta prctica emplearemos el Mtodo espectrofotomtrico colorimtrico de la casa

comercial WIENER LAB. Que es el mtodo de Jaff modificado empleando picrato
alcalino en medio taponado con glicina, previa desproteinizacin de la muestra de
suero con cido pcrico directamente proporcional a la concentracin de creatinina
cuando se mide en 510 mm de Longitud de onda. Se comparar con la absorbancia de
un patrn de creatinina de concentracin conocida.

A. Equipos, Materiales y Reactivos

- 01 Espectrofotmetro y 01 Centrifuga clnica
- Jeringa descartables de 10 ml con aguja 20 x 1
- Algodn, alcohol yodado y ligadura
- 09 tubos de ensayo de 13 x 100 mm en cada mesa
- 01 tubo de ensayo de 12 x 75 mm en cada mesa
- 06 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100 en cada mesa
- 03 Pipetas de 5 ml graduadas al 1/10 en cada mesa
- Frasco con agua destilada 100 ml en cada mesa
- Pipetas Pasteur de Vidrio (capilares) con chupn jebe, para separar
sobrenadante.
- Frascos de boca ancha de 1 litro de capacidad beakers de plstico de 1 litro
para obtencin de muestras de orina.
- Reactivo N 1: cido Pcrico 41.4 mMol / Lt
- Reactivo N 2: Buffer de Glicina / Na OH 1 mol/Lt (pH = 12.4). Muy custico
(alcalino): Precaucin.
- Sol. Standard de Creatinina: 2 mg/dl

B. Procedimiento

Recolectar muestra de orina de 12 24 horas para dosaje de creatinina urinaria. Si

se recolecta en frasco estril, la muestra guardada en refrigeracin puede durar 4
das. Medir exacto el volumen y tiempo de recoleccin. Anotar

El mismo da de la recoleccin de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje

de Creatinina srica.

73
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

1.- Primer paso.- DESPROTEINIZACION de la muestra de suero:

- En un tubo prueba 13 x 100 mm 12 x 75:

- Medir 0.7 ml de suero y aadir 3.5 ml Reactivo N 1 (cido
pcrico)
- Mezclar por inversin y reposo 10 minutos.
- Centrifugar a 3000 RPM x 5 min.
- Separar el sobrenadante del suero con la pipeta Pasteur y
trasladarlo a otro tubo y marcarlo: Sobrenadante suero (SS).

2.- Disponer los tubos de prueba 13 x 100 mm segn la siguiente tabla y marcarlos
segn lo indicado:

Sobrenad Orina
Tubos Blanco Standard del Dilucin

Suero (SS) 1/50

Sobrenadante Suero SS ml 3

Sol St. : 2 mg/dl ml 0.5

Orina Dil 1/100 ml 0.5

Agua Destil. Ml 1.0 0.5 0.5

React N 1 (Ac.Pcrico 41.4 mMol/l)

2 2 2
ml

React N 2 (Buffer Glicina alcalino pH

0.5 0.5 0.5 0.5
12.4) ml

Mezclar por inversin. Reposar 15 min. a Temp. Ambiente.

3.- Lecturas: Colocar el Espectrofotmetro en 510 mm de Long. Onda, y colocando el

espectofotometro en 100% de T osea 0% de Absorbancia.

Leer la Absorbancia de cada uno de los tubos anotando las absorbancias de: Blank,
estndar, sobrenadante del suero (SS) y de la orina diluida.

4.- Clculos.

a.- Creatinina Srica (Crs): mg/dl

Crs = Conc St X Abs suero = 2 X Abs suero Abs Blank = mg/dl

Abs St Abs blank Abs St Abs Blank

b.- Creatinina en Orina (CrO): mg/dl

74
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

Exactamente igual al anterior, sustituyendo las absorbancias del suero por las de la
orina y se multiplica ademas por 100 (factor de dilucin de la orina).

c.- Calcular la Depuracin Creatinina Endgena (Corregida por el ASC):

Segn: Depuracin = U x V X 1.73 m2

P ASC m2

Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los clculos

Por ejemplo:

U = CrO en mg/ml

V = Vol. Min ml/min

P = Crs mg/ml

Valores Referenciales

- Depuracin de Creatinina endgena:

Hombres: De 97 hasta 137 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Promedio 120 ml / min. / 1.73 m2 ASC (+/- 25)
Mujeres: De 88 hasta 128 ml / min. / 1.73 m2 ASC
Promedio 85 ml / min. / 1.73 m2 ASC
- Creatinina Srica Adultos Varones: 0.8 a 1.2 mg / dl
- Creatinina en Orina: 1.0 a 1.6 gm en 24 hs (15 a 25 mg/Kg. peso Corporal/24 hs)
- Depuracin de Creatinina Aumentada: Gestacin, Ejercicio fsico.
- Depuracin de Creatinina Disminuida:
- Insuficiencia renal glomerular Insuficiencia Cardiaca.
- Edad avanzada: Disminuye aprox. 1 ml / min. / Ao despus de los 40 aos.
- Medicamentos nefrotxicos
- Mala recoleccin urinaria

FUNCIONES DE CONCENTRACIN Y DILUCIN

A. Fundamento
El rin tiene una remarcable capacidad para regular el volumen urinario diario
concentrado y diluyendo la orina. Esta caracterstica fisiolgica es una de las ms
importantes del rin normal, y se conoce desde hace ms de 50 aos. Se realiza
segn un mecanismo de flujo a contracorriente multiplicador.

Adaptando el principio fisicoqumico del flujo trmico a contracorriente, a la

presin osmtica diremos que en el asa de Henle ocurre un fenmeno similar, lo
mismo que a nivel de la Vasa Recta, pero con electrolitos y que estudiamos con
detalle en nuestras clases tericas. Este mecanismo impide que se disipe la
gradiente de Osmolaridad llegando a tener as el intersticio medular y papila hasta
1200 mOsm/Kg. agua. (El Plasma tiene 280 a 290 mOsm/Kg. agua). El trasporte
activo de Cloro en el Asa de Henle es tambin responsable del sostenimiento de
esta alta osmolaridad en el interticio medular renal.
75
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Esta prctica tiene por objeto aprender a medir estas capacidades de concentracin y
dilucin de la orina por el rin a travs de los parmetros fisiolgicos siguientes:

Densidad Urinaria, relacin Uosm/Posm, Cosm, TcH2O sometiendo a una persona

sana a una dieta hidropnica primero y luego a una sobrecarga acuosa.

Definiciones previas.-
- Posm: Es la concentracin osmolar plasmtica, normalmente puede variar
desde 280 a 290 mOsm/Kg agua, es la concentracin de solutos en el plasma.
- Uosm: Es la concentracin Osmolar urinaria concentracin de solutos en la
Orina u osmolaridad Urinaria. Generalmente la orina es tres veces ms
concentrada que el plasma. El rin reabsorbe agua hasta concentrar el filtrado
glomerular unas tres veces ms que osmolaridad plasmtica. Los valores
normales pueden variar desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. agua.
- Uosm x V: Es la excrecin de solutos por minuto, es la cantidad de solutos
osmticos activos excretados por minuto.
- Cosm: Depuracin Osmolar: Uosm x V / Posm

Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo.

Representa la tasa a la cual las sustancias osmticas activas son aclaradas depuradas
del plasma. La depuracin basal endgena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 %
del filtrado glomerular.

CH2O: Es depuracin de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto.

Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar:

CH2O = V Cosm

La depuracin de agua libre es ese ncleo de agua en la orina en exceso de su

depuracin osmolar. Durante la diuresis de agua caracterizada por la excrecin de
gran volumen de orina diluida debido a la gran ingesta de agua, la diuresis se debe a la
inhibicin de la hormona antidiurtica de la neurohipfisis.

Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duracin magnitud, la orina consiste

de una mezcla de agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos
que es igual a la depuracin osmolar, mas un vol. de agua osmticamente libre, es
agua libre de solutos, literalmente es agua qumicamente pura, representada por
CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos trminos:

V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V Cosm

Tc H2O: Durante la concentracin urinaria (Antidiuresis) la orina se concentra por

encima de la Osmolaridad Plasmtica por sustraccin dependiendo de la de agua libre
de solutos del filtrado glomerular, es agua que el organismo se reinfunde. En este caso
el Vol. min. es menor que la dep. Osmolar.

TcH2O = Cosm V representa el volumen de agua reabsorbido a nivel tubular, esto

concentra la orina tubular.

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

B. Procedimiento

Para esta prctica se seleccion a una persona a quien el da anterior se le hizo un

dosaje de Osmolaridad Plasmtica y luego al da siguiente se le someti a una
prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresin total de lquidos pero con una
dieta normal en protenas, hasta conseguir en lo posible una disminucin del 3%
del peso corporal.

A las 6 de la tarde miccion (vejiga vaca), y se descart esta orina y se anot la

hora exacta. Luego empez a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco
hasta las 6 am del da siguiente.

Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente
a parte. En este momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad
Plasmtica. Aqu termina el test de Concentracin.

Inmediatamente se inici la Prueba de Dilucin, para ello se le dio a beber 20 ml de

agua x cada Kg. de peso corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir
la orina. Se recolectaron las muestras emitidas, cada una en frascos separados,
cada 20 30 minutos, segn el protocolo del cuadro adjunto, numerndose todas
las muestras emitidas durante casi tres horas.

Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para

determinar las Osmolaridades plasmticas, en el osmmetro. Para la prctica, a
partir de estas muestras calcularemos las Osmolaridades Urinarias a partir de las
densidades y con los datos obtenidos de Volmenes urinarios, tiempos de
recoleccin, Uosm, y Posm se determinarn, para cada muestra, los valores de U/P,
78
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Cosm, TcH2O, y CH2O.

Tabla-Protocolo de trabajo para las PRUEBAS de CONCENTRACIN Y DILUCIN

Urinaria

Tiempos N Posm Densi Uosm Tc

Vol.
Tiempo de Vol. CH2O
Minut
de mOsm Dad mOsm/ H2O
Acumulat Mue Orina U/P Cosm ml/
ml/
Recolecc. s Kg Urina Kg ml/
min ml min
min ria
(minutos) tra H2O H2O min

CONCEN

TRACIN
Prueba
Supres
De
lquidos

12 Hs 720 1a 432 298 ------

2 Hs 840 2 60 ------

Inges
Prueba Y se
De ta de
De Conti
DILU 20
ml Nu
Inmedia
agua Reco
to CION /
lec-
se hizo: Kg
cion
Peso

30 30 3 18 295 ------

25 55 4 200 ----

20 75 5 190 ----

22 97 6 209 294 ----

20 117 7 140 ----

18 135 8 126 ----

15 150 9 38 290 ----

A continuacin graficar en papel milimetrado:

Volumen Urinario (ordenada) vs Densidades (abscisa)
Cosm ((Ordenada) vs Vol. minuto (Abscisa), y determinar TcH20 y C H2O Interpretar
los resultados de cada prueba.
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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
REGULACION RENAL DEL EQUILBRIO ACIDO I BASICO
Acidificacin y/o alcalinizacin urinaria.

A. Introduccin: Bases Fisiolgicas:

Existen tres grandes procesos de regulaci6n del pH en los lquidos del organismo: el
mecanismo de intercambio i6nico (entre las clulas y los lquidos), el mecanismo
respiratorio y el mecanismo renal.
Los riones son los reguladores mas eficientes del equilibrio cido bsico, en vista de
que realizan la EXCRECION de los llamados cidos fijos propiamente dichos, los
HIDROGENIONES H+; mientras los H+ se excretan, circulan en la sangre en equilibrio
con los aniones correspondientes como el HC03- , con lo cual impiden cambios
importantes en el pH. La cantidad de Hidrogeniones producidos en el curso del
metabolismo es de hasta 100 mEq. diarios ( 4.1 mEq/hora), dependiendo de la dieta. El
Rin se encarga de excretarlos, al mismo tiempo que recobra el HC03- .La orina de un
sujeto sano, con una dieta normal mixta, es cida y su pH habitual es de 6.0; el filtrado
glomerular tiene un pH de 7.40. Esta disminucin en el pH urinario, se debe a que
estn siendo eliminados los Hidrogeniones por el rin. La magnitud de esta
eliminacin es variable de acuerdo con las exigencias fisiolgicas del momento y se
refleja en el pH de la orina que puede variar de 4,0 hasta 8.0, segn las necesidades del
organismo. Cmo se logra excretar una orina cida ? Se logra por la adicin de H+
secretados por las clulas de los tbulis renales hacia la luz tubular lo cual permite la
modificacin de algunos cidos que estn disociados en el plasma, pero que se
convierten en formas no disociadas, al aumentar la acidez del medio. Por ejemplo las
relaciones entre el Na2HPO4 y el NaH2PO4 es de 4 a 1 en el plasma y en el filtrado
glomerular donde el pH es 7.40. Si se baja el pH por la adicin de H+ esta relacin
disminuye hasta 4/100 (predominancia del Fosfato cido), y el pH urinario baja a 5.4.
Si la relacin bajase hasta 1/99 (mayor predominancia an del fosfato cido) el pH
llegar hasta 4.8.

El resultado neto de la produccin de una orina cida es la ganancia de un Na+ y SE

RECUPERA EL HCO3- La eliminacin del H+ a cambio de un Na+ permite as retener el
HC03- y tener reserva de HC03- para situaciones de emergencia. Puede as entonces el
rin eliminar constantemente H+ sin vaciar el Na+ extracelular ni perder su
bicarbonato en condiciones normales.
En el caso opuesto cuando hay alcalinidad aumentada se produce en el rin el
fenmeno inverso: Disminuye la excrecin tubular de H+, se reabsorbe menos
bicarbonato, se excretar fosfato en la forma Na2HPO4 y se pierden 2 Na+ y el efecto
neto ser la perdida de 2 Na+ (base), disminucin del HC03- del plasma y los cidos
orgnicos sern eliminados a un pH ms alto en equilibrio con ms Na+ que se pierden.
En resumen, pueden Ustedes pues darse cuenta que las diferentes funciones del
mecanismo renal responden a requerimientos especficos: en el caso de la acidosis,
hay un incremento de la excrecin de cidos y una conservacin de base; en la
alcalosis, hay un incremento de la excrecin de base y conservacin de cidos y el pH
de la orina cambiar correspondientemente y puede variar como les acabo de sealar
en muestras de orina random desde pH 4.5 hasta 8.2. Esta capacidad de excretar
cantidades variables de cido es de una gran importancia fisiolgica porque convierte
al rin en el mecanismo de defensa final contra cualquier cambia del pH corporal o de
la composicin anin-catin.
80
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

En la produccin de orina cida: Resultado neto: Ganancia de un sodio a cambio de

excrecin de de un H+. Se recupera el NaHCO3. Eliminacin constante de H+ sin vaciar
el Na+ del LEC.-

EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el rin es la EXCRECION DEL H+
EN LA FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGNESIS, a partir del NH3 de la
glutamina o los aminocidos. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado
glomerular y por lo tanto proviene de las clulas del tbuli renal. Sin embargo su
excrecin no es rpida sino tarda y solo empieza a funcionar despus de un lapso
prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por
medio de la excrecin del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual
con el NH3 proveniente de la desaminacin de aminocidos o de la glutamina, se
excreta como NH4+.

AMONIOGNESIS:

El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias cidas: NH3 + H+ NH4

Se conserva sodio por medio de la excrecin de NH4, el sodio ingresa en favor de la

salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4.
(ClNH4)
81
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
TEST DE SOBRE CARGA CIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres das)

Un da antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulacin Basal.

Luego se le prescribe una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso
corporal, durante tres das consecutivos y se va recolectando la orina de 24 horas cada
da, durante tres das. En cada una de las muestras de orina se medir el volumen y el
pH, Acidez de titulacin fosftica y acidez amoniacal. Se determinar el pH sanguneo
basal y al final del test.

A. Fundamento de la prueba de sobrecarga cida de Cloruro de amonio para

medir la capacidad de acidificacin del tbuli urinario:

El Cloruro de amonio ingerido extrae H+ de la clula.

El Hgado depura el amonio que llega por la circulacin portal y se produce la

siguiente reaccin que libera H+:

2 NH4+ + CO2 ----------- CO(NH2) 2 + 2 H+ + H2O

(La conversin de amoniaco en urea e

Acidificante.)

Acidificante

El H+ liberado se combina con el Na2HPO4 de la orina tubular:

Na2HPO4 + H+ NaH2PO4

Sal ms cida y baja el pH hasta

menos de pH 5.4 en la orina.

PRUEBA DE ACIDIFICACIN URINARIA MODIFICADA. (Durante de 6 horas).

Despus de un desayuno normal se recogen 2 muestras de orina con una diferencia de

una hora, luego se le administra al paciente cloruro amnico a la dosis de 0.1 gm / Kg.
Peso corporal por la va oral. Se dar en cpsulas de gelatina de 0.50 gm. De
preferencia con tostadas y mermelada, recogiendo la orina durante las 6 horas
siguientes. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas despus de la
administracin del Cloruro amnico. Con la carga administrada el pH urinario deber
descender por debajo de 5.4

En nuestra prctica solamente haremos una prueba de corta duracin (2 horas) del
siguiente modo:

A. Equipos, Materiales y Reactivos

- pH Meter para determinacin de pH sanguneo
- Potencimetro para determinar pH en soluciones.
- Cinta para determinacin universal de pH
- 06 Cilindros graduados de vidrio o plstico de 500 ml
- 08 beakers de 50 ml
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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- 02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0.1
- 02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100
- 03 Buretas para titulacin qumica
- 03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada
- Fenolsulfotalena indicador (PSP) sol alcohlica 1 % o Rojo fenol.
- Sol. NaOH 0.1 Normal titulada, Formol 40 % 50ml.

B. Procedimiento

Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea
(con deseos de orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH
sanguneo al inicio de esta prueba.

Administraremos luego 400 ml de una solucin de Cloruro de amonio al 0.5% en 15

minutos.

Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras

separadas durante dos horas.

Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.

Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez

Fosftica y Amoniacal urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado:

Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta
rosado.

Anotar gasto.

Corresponde a la acidez del Fosfato cido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+

Luego aadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez
amoniacal.

Hacer la sumatoria de acidez fosftica + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+)
urinaria en mMol / litro. Calcular la Depuracin de Hidrogeniones.

Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma

prueba anterior sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua
hervida y fra por kilo de peso corporal as:

Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea
(con deseos de orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH
sanguneo al inicio de esta prueba.

Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.

Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras

separadas durante 2 horas.

Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez
Fosftica y Amoniacal urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol.
valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la acidez amoniacal previo tratamiento
con formol taponado, todos los clculos tambin se harn exactamente iguales al caso
anterior.

CLCULOS:

En la prctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuracin de una

sustancia, entonces si hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo
determinado podemos calcular el Volumen minuto y si conocemos las concentraciones
de H+ urinarias y pH, y adems se conocemos el pH sanguneo estamos en condiciones
de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuracin del in
Hidrgeno.

CONCLUSIONES:

En la condicin Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min

En la Acidosis como la concentracin de H+ urinaria es mucho mayor que la sangunea

tendremos: Dep H+ ser > Vol. min. en la Alcalosis ser la inversa: Vol. min. > Dep
H+

Para estos clculos recordar que: D = U x V / Py pH = -log (H+)

(H+) = antilog pH-pH

(H+) = 10

EXAMEN QUIMICO DE ORINA

INVESTIGACIN DE ALBMINA:

Excrecin normal: Menos de 75 mg en 24hs. No detectable por los mtodos habituales

rutinarios.

Por mtodos especiales se detectan cantidades menores y se llama microalbuminuria.

Para detectar presencia de albmina se emplea el mtodo del cido Sulfosaliclico al

3% as:

Filtrar la orina a travs de papel de filtro.

Colocar 1 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo

Aadir 1 ml de cido sulfosaliclico. Reposar 5 minutos.

Si no se produce enturbiamiento no hay albmina: Negativo

Si aparece enturbiamiento indica presencia albmina.

El grado de turbiedad est en relacin con la cantidad e

albmina presente.
84
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Hacer un control negativo sustituyendo el cido sulfosaliclico
con 1 ml de agua destilada y proceder exactamente igual.
Comparar grados de turbidez.

Entre los mtodos rutinarios cualitativos, el ms simple: test de calor y acidificacin:

Filtrar la orina a travs de papel de filtro.

En tubo de ensayo hervir 3 ml orina filtrada, en mechero alcohol o Bunsen Bao

Mara hirviente. Un precipitado blanco floculante al hervir indica:

a). Protena fosfatos.

b). Para diferenciar: Fosfatos: si al aadir cido actico 5% desaparece la turbidez:
Fosfatos (Los fosfatos son solubles en medio cido). Si hay efervescencia: carbonatos
presentes.
Protenas: si al aadir cido actico 5% la turbidez aumenta.

INVESTIGACIN DE GLUCOSA

- Reaccin de Benedict Cualitativa: Por reduccin del cobre el solucin alcalina y

calor.
- Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Aadir 0.3 ml orina
- Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min.
- Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo
- Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado.
- Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas.

TEST PARA CIDOS BILIARES

- Los cidos biliares reducen la tensin superficial de los lquidos que las
contienen:
- Colocar 3 ml de orina en un tubo 18 x 150 ml.
- Espolvorese sobre la superficie peque cantidad de azufre pulverizado
finamente (flor de azufre). Si el azufre cae al fondo enseguida, la orina tiene
cidos biliares en cantidad mayor de 0.01 % ms.
- El cloroformo, alcohol, trementina, timol dan resultados falsos.

INVESTIGACIN DE CUERPO CETNICOS

- En tubo ensayo colocar 3 ml orina, aadir 3 gotas cido actico. Mezclar.

- Aadir 1 ml de agua oxigenada. Luego, aadir unos 500 mg de nitroprusiato en
polvo y agitar suave para disolver. Colocar en zona 1 ml de hidrxido de
amonio. Anillo verde en la interfase: positivo a cuerpos cetnicos.

85
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
LABORATORIO DE PRACTICA N 10

FISIOLOGIA GASTROINTESTINAL
ROL FISIOLGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIN DEL ALMIDN)

A. Fundamento Fisiolgico

El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticacin

que fragmenta las partculas grandes de alimentos y mezcla a ste con las
secreciones de las glndulas salivales. En las glndulas salivales los grnulos
secretorios (cimgeno) que contienen las enzimas salivales se descargan en los
conductos a partir de las clulas acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de
saliva y el pH es ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la
secrecin activa. La saliva contiene dos enzimas digestivas: la lipasa lingual,
secretada por la glndula de la lengua, y la alfa amilasa salival (ptialina) secretada
por las glndulas salivales. La saliva tambin contiene mucinas, que son
glucoprotenas lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Adems
contiene IgA, inmunoglobulina que viene a ser la primera defensa inmunitaria
contra bacterias y virus. La alfa amilasa salival ataca al almidn. Sin embargo, el pH
ptimo para esta enzima es de 6,7 y su accin es inhibida por el jugo gstrico cido
en el momento del ingreso del alimento al estmago. El activador de la amilasa
salival es el cloro; siendo su substrato el almidn hidroliza los enlaces alfa 1 - 4
para producir dextrinas, alfa-limitantes, maltotriosas y maltosa, siendo esta
funcin hidroltica la accin cataltica que estudiaremos en la presente prctica. El
almidn, polmero de la glucosa da color azul con la solucin de yodo. El almidn
est constituido por un 15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas.

B. Objetivo

Estudiar la accin de la amilasa sobre el almidn y determinar los substratos y

productos de la actividad alfa-amilsica salival y el efecto del pH y activador
enzimtico sobre esta reaccin enzimtica digestin hidroltica.

C. Procedimiento

Digestin del substrato por la alfa-milasa salival:

Tubo No. 1 2 3 4

Sol. almidn 1 % ml. 2,0 2,0 2,0 2,0

Tampn fosfato pH 6,8 ml. 1,0 1,0 1,0 ----

HCI 0,3 N ml. ---- ---- ---- 3,4

CIN a 0,9% ml. 3,0 2,4 ---- ----

Agua destil. ml. ---- ---- 2,4 ---

Bao Mara 37 C x 5'(Pre- si si si si

incubacin,no aadir saliva
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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
todava

Despus de los 5 minutos,recin aadir: ----

Sol. amilasa salival ( diluda 1/20) ml. 0,6 0,6 0,6

Bao Mara 37C x 20' si si si si

Luego se determinarn los substratos remanentes y los productos de degradacin

intermedia del almidn en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando
soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.

A. DETERMINACION DEL SUSTRATO

TUBOS N 5 6 7 8

DIGERIDO DEL TUBO 1:ml 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 -

DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5

HCl 0.05 N : Mi 5 5 5 5

Sol. De Lugol: mI 0.5 0.5 0.5 0.5

Mezclar, reposar 15': Observar los resultados

B. DETERMINACION DEL PRODUCTO

TUBOS N 9 10 11 12 13

DIGERIDO DEL TUBO l:ml 0.5 - - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5 -

SOLUCION DE BENEDICT: mI 2 2 2 2 2

SOLUCION DE GLUCOSA 1 %: ml - - - - 0.5

Bao hirviente: 100 X 5'

- Enfriar en agua helada y observar los resultados.

- Conclusiones:
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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- Influencia del pH salival y gstrico en la digestin del almidn.
- Influencia del Cloro sobre la actividad de la amilasa salival.

- Verificar la ubicacin de los puntos de hidrlisis del almidn por accin de la

alfa amilasa salival

FUNCIN DE LAS CLULAS PARIETALES DEL ESTMAGO. ACIDEZ GSTRICA TOTAL

ESTIMULADA Y DBITO ACIDO/HORA.

El Gastroenterlogo A. W. Kay describi un mtodo con el objeto de lograr una

estimulacin mxima de las clulas apritales del estmago.

En el contexto de la fisiologa gstrica, se considera condicin basal aquella en la cual

el paciente est en completo ayuno despus de haber dormido unas 6 horas
tranquilamente, sin estar expuesto a ningn estmulo visual, ni olfativo, ni auditivo.

Bajo control fluoroscpico debe insertarse una sonda naso-gstrica de modo que la
punta de la sonda se encuentre en la parte ms baja del cuerpo del estmago. En
seguida el paciente se coloca en decbito lateral izquierdo y escupe toda saliva que
tenga durante toda la prueba. En estas condiciones la sonda se conecta a una bomba
de succin continua elctrica y el contenido del estmago es aspirado continuamente
a presin negativa de 30 a 50 mmHg, se aspira primero todo el contenido gstrico de la
noche anterior y se mide el volumen y pH u otro estudio para luego descartarlo. Se
recolecta luego J.G. cada 15 minutos durante una hora y se mide el volumen de cada
muestra, estas cuatro primeras muestras son llamadas basales que servirn para
titularlas independientemente. El flujo Gstrico debe ser chequeado a menudo lo
mismo que la succin. Luego debe inyectarse un antihistamnico como Clorotrimetn
20 mg Intramuscular (para disminuir en lo posible los efectos colaterales de una fuerte
dosis de Histamina que recibir luego). Se usa como estimulante de la clula parietal.

Fosfato de Histamina a una dosis de 0.04 mg x Kg. de peso, va subcutnea, mejor

Pentagastrina: 6 microgramos x Kg. peso.

Despus de haber estimulado se continua recolectando las muestras cada 15 minutos

para titularlas y las llamaremos Estimulado 15, Estimulado 30, estimulado 45,
estimulado 60.

Se medir la acidez de titulacin e cada una de las muestras empleando NaOH 0.1
Normal, hasta la neutralizacin, empleando indicador de Fenoltalena solucin
alcohlica al 1%.

A. Procedimiento
- Luego se titularn cada una de las muestras obtenidas por separado usando 10
ml de J.G. cada vez y empleando Solucin de NaOH 0.1 Normal, gota a gota,
agitando suavemente despus de la adicin de cada gota de NaOH, hasta la
aparicin de un color rosado muy tenue y persistente, color que indica la
completa neutralizacin del cido del Jugo Gstrico.

88
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
CALCULOS:

Ejemplo muestra basal de los primeros 15 min.: volumen obtenido 20 ml. Volumen
usado en la titulacin 10 ml. Se gast 2.40 ml en la titulacin de esta muestra.
Calcularemos el debito acido basal de estos primeros 15 minutos:

Raciocinio y clculos:

Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulacin indica 0.1 mEq. H+

2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarn ------------ X mEq. H+

2.4 x 0.1 = 0.24 mEq.H+

0.24. 10 ml de Jugo Gstrico usado x ............................. 20 cc de jugo

gstrico obtenido

0.24 x 20 = 0.48 mEqH+ en esta muestra de 20 cc. de Jugo Gstrico

10

Respuesta: El debito acido gastrico basal fue de 0.48 mEqH+/15 min.

En igual forma procederemos con cada una de las dems muestras basales y
estimuladas para hacer las sumatorias parciales y comparar los resultados con los
valores referenciales normales.

Valores Referenciales

Residuo Gstrico Despus de 12 hs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50

ml)

PH: 1.5 a 3.5

Acidez sin Estmulo: 1 a 4 mEq H+ / litro

Acidez post estmulo (Kay) Pentagastrina: 10 a 120 mEqH+ / litro

Dbito cido Basal/hora: Normal Hombres: 1 a 10.5 mEq/hora

Mujeres: 1 a 5.6 mEq/hora

Dbito cido Mximo/hora: Normal Hombres: 12 a 60 mEq/hora

Mujeres: 8 a 40 mEq/hora

89
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO N 11

MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL

A. Objetivo

El objeto de esta prctica es estudiar los movimientos peristlticos rtmicos del

aparato gastrointestinal y el control que el Sistema Nervioso Autonmico tanto
Simptico como Parasimptico ejercen sobre la motilidad gstrica e intestinal;
adems demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contraccin y relajacin de la musculatura lisa
gastrointestinal.

B. Introduccin

La actividad motora del estmago est gobernada fundamentalmente por dos

tipos de inervacin redes de fibras nerviosas: una intrnseca a la va
gastrointestinal y otra extrnseca.

a.-La inervacin intrnseca del estmago comprende dos plexos interconectados el

plexo Mientrico de Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la
pared estomacal, como lo hacen a travs de toda la va intestinal. Estos plexos son
directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como este
sistema es continuo entre el estmago y el duodeno, la peristalsis del antro
influencia la peristalsis del bulbo duodenal.

b.- La inervacin extrnseca es autonmica dual y proviene del Sistema Nervioso

Autnomo: la Simptica de actividad noradrenrgica inhibidora, va plexo celaco; y
la Parasimptica de actividad colinrgica excitatoria, va del Nervio Vago.

La inervacin simptica inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfnteres; y la

parasimptica estimula la contraccin de la fibra m. lisa pero relaja los esfnteres.
Estos dos sistemas juntos modifican la actividad motora coordinada que se origina
independientemente en el sistema intrnseco.

Existe adems un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del

estmago dentro de la capa muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable
del ritmo y frecuencia de las contracciones gstricas y genera una onda excitatoria
que tiene un ritmo elctrico basal (REB) de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. Cuando pasa por el cuerpo del estmago, y aumenta hasta
3-4 cm./seg. Cuando pasa por el antro.

El sistema nervioso entrico se conecta con el SNC mediante fibras simpticas y

parasimpticas, pero es capaz de funcionar de manera autnoma sin estas
conexiones. El plexo mientrico inerva las capas de msculo liso circular y
longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las clulas intestinales endocrinas y los
vasos sanguneos de la submucosa y adems est involucrado sobre todo en el
control de la secrecin intestinal. Los neurotransmisores en el sistema nervioso
entrico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina, Gaba, ATP, Oxido
ntrico, CO y numerosos pptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropptido Y,
VIP, etc.
90
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino
se elonga por el contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la va
gastrointestinal desde el esfago hasta el recto. Esta elongacin inicia una onda de
contraccin circular detrs del estmulo y una de relajacin en el frente de ste. Esta
onda de contraccin se mueve en direccin oral-caudal para impulsar hacia adelante
los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.

Aunque la actividad peristltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad

autnoma del intestino, su presencia es independiente de la inervacin extrnseca.

El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez
activan el plexo mientrico. Las neuronas colinrgicas que pasan en direccin
retrgrada en este plexo mientrico activan a las neuronas liberadoras de la sustancia
P, as como de acetilcolina y dan lugar a la contraccin del msculo liso. Al mismo
tiempo, las neuronas que pasan en direccin antergrada activan a las neuronas
secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajacin que precede al estmulo.

El REB del msculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65
y - 45 mV. Este REB se inicia en las clulas intersticiales de Cajal, que son clulas
mesenquimatosas estrelladas similares al msculo liso y actan como marcapasos,
estas clulas de Cajal envan mltiples prolongaciones hacia el msculo liso intestinal.
.El REB por s solo rara vez produce contraccin muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del
REB incrementan la tensin (contraccin) muscular. Las despolarizaciones se deben al
ingreso del Calcio y las repolarizaciones a la salida del K. Muchos polipptidos y
neurotransmisores afectan esta onda de ritmo elctrico basal por ejemplo la
acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensin (contraccin de la F m lisa)
en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensin. En el
estmago la frecuencia del REB es de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min.,
ciego 16/min. Por lo tanto el rol fisiolgico del REB es coordinar la actividad peristltica
y otras actividades motoras gastrointestinales. Las contracciones se producen
solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una vagotoma el
peristaltismo estomacal de hace irregular a veces catico. La motilidad
gastrointestinal y la secrecin es regulada tambin por polipptidos biolgicamente
activos que son segregados por las clulas nerviosas y las clulas glandulares de la
mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama hormonas
gastrointestinales, aunque sus efectos fisiolgicos son discretos, sin embargo sus
alteraciones pueden producir enfermedades del trnsito intestinal (ejemplo algunas
diarreas motoras).

Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:

- Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK ( CCK-PZ: Colecistoquinina-

pancreocimina)
- Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
- Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.

91
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

C. Materiales, equipos, animales de experimentacin y reactivos.- Para cada

mesa de trabajos prcticos:

Materiales: Reactivos:

01 sapo vivo Solucin de Ringer para anfibio fresca a

30 C
Tabla de corcho para soporte y fijacin
anfibio Col. Azul de metileno

Alfileres para sujecin extremidades Sol. Acetilcolina 1%

01 par guantes descantables Sol. Adrenalina 1%

Equipo de diseccin quirrgico Sol. Atropina 1%

Estilete para seccin medular y tijera, Prostigmine (Neostigmina): 0.5 mg / 1ml

algodn ampolla parasimpticomimtrico.

04 jeringas descartables de 3 ml

01 Aguja descartable de 18 G x 1

01 Aguja descart. doblada en 90

3 hilos blancos de 15 cm. largo N 50 para

las ligaduras

Cnula de vidrio 2mm dim. ad-hoc

D. Procedimiento

l.- El alumno realizar la preparacin de sapo espinal segn lo aprendido para

producir el shock espinal en el sapo (Ver prctica de reflejos en animal espinal)
y realizar la hemostasia con algodn por compresin.

2.- Diseccin: Sujetar luego el animal en posicin decbito dorsal en la tabla de

fijacin con los alfileres y realizar un corte en toda la lnea medio abdominal y
seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.

3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estmago

cardias, estmago, ploro e intestinos. Observar de inmediato y muy
cuidadosamente los movimientos peristlticos espontneos del estmago e
intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes
estimularlos mecnicamente.

4.- Con un algodn mojado en Ringer-Batracio a 30 mantener en todo

momento la preparacin bien hmeda con instilaciones abundantes de la sol.
Ringer.

5.- Aplicar sobre el estmago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de
92
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
las siguientes soluciones en el orden: a, b, c, d, e siguiente:

a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer

b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer

c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer

d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer

e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y

lavar con Ringer.

Graduar las observaciones visuales de relajacin o contraccin con cruces,

comparando con los movimientos peristlticos espontneos del inicio del experimento.

Conclusiones y Comentario

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

PRACTICA DE LABORATORIO N 12

FISIOLOGIA ENDOCRINA EFECTOS DE LA HORMONA TIROIDE EN RATONES

A. Introduccin
EI trabajo biolgico tiene como fuente de energa a los enlaces intramoleculares y
puede ser medido en condiciones de actividad o reposo. A esta ltima condicin se le
denomina METABOLISMO BASAL, que puede ser medido directamente por el mtodo
calorimtrico o indirectamente por el consumo de oxgeno.
Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal, el consumo de oxgeno
por los tejidos y la produccin de calor por el organismo. Estas hormonas activan los
procesos oxidativos celulares.
En humanos, extirpacin de la glndula tiroidea disminuye el consumo de oxgeno a
cifras inferiores, del 30 a 50% de lo normal. En los hipertiroideos aumenta el consumo
de oxgeno.
EI aumento o disminucin del metabolismo basal a partir de la determinacin del
consumo de oxgeno se emple como un mtodo diagnstico del hipertiroidismo y del
hipotiroidismo. En los sujetos hipertiroideos con sintomatologa definida el
metabolismo basal est incrementado en 40 a 60% y puede superar ms del 100%. Al
aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea
grasas para cubrir las necesidades metablicas. Este produce prdida de peso y
aumento de la temperatura corporal. Debido a que los mecanismos de disipacin de
calor estn sobrecargados, los sujetos hipertiroideos toleran muy mal los ambientes
clidos. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia cardiaca y la presin arterial
sistlica.
EI sujeto hipotiroideo presenta sntomas opuestos: metabolismo bajo, temperatura
inferior a la normal, depsito de grasa y reacciones lentas.
En la presente prctica se comparar los metabolismos de ratones hipotiroideos e
hipertiroideos con ratones eutiroideos ( normales).
Diez a quince das antes del experimento se toma ratones machos adultos jvenes, de
la misma edad y similar peso. Se los coloca en jaulas separadas, que se rotulan
eutiroideo, hipertiroideo e hipotiroideo. Los ratones sern pesados todos los das.
EI ratn hipertiroideo recibe diariamente 15 ug. D levotiroxina. EI ratn hipotiroideo
recibe diariamente 1.25 g de metimazol.

B. Material
- Ratones
- Jaulas
- Jaulas cmaras metab1icas
- Cal sodada Metimazol Levotiroxina
- Termmetro
- Plastilina

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Y REHABILITACION
C. Mtodo

Experimento N 1

Se coloca en tres jaulas metab1icas a un ratn eutiroideo, uno hipertiroideo y uno

hipotiroideo.
Las jaulas o cmaras metab1icas deben contener cal sodada. Se recomienda que los
animales reciban luz, ya que esta permite que se mantengan quietos, pues los ratones
son muy susceptibles a los ruidos a los movimientos bruscos.

Se coloca un termmetro dentro de cada jaula metablica. Se espera cinco minutos

para que se equilibre la temperatura dentro de la jaula y se registra.

Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con

agua jabonosa.

Se coloca una pelcula de espuma de jabn al final de la pipeta y se observara como, a

que medida que el animal va consumiendo el oxgeno, la pelcula de jabn va
moviendo a lo largo de la pipeta. EI CO2 producido ser absorbido por la cal sodada.
Con un cronmetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm 3 de oxigeno
y se convierte los segundos en fraccin centesimal.
A continuacin se calcula en consumo de oxgeno por minuto del animal y se convierte
litros por hora.
Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en
condiciones STPD de acuerdo a la siguiente frmula:

o Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb - PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)]

Donde: Vol = L/h

Pb= presin baromtrica.
PH2O= presin de vapor de agua Ts= temperatura del aparto
EI valor cal6rico del oxigeno varia segn el cociente respiratorio. Con una dieta
promedio el cociente respiratorio es 0.8 y el equivalente cal6ricodel Oxgeno es 4.8
Kcal/l, por 1o que el nmero de caloras por hora ser:

Cal/h = 4.8 cal/l x L/h

Dado que el nmero de caloras es proporcional al peso y a la superficie corporal,
entonces:

S=K x W 2/3 o
S = K x logW X 2/3

Dnde:
S = superficie corporal
K = constante de von Muralt

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 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Equivalentes calricos a diferentes
Cocientes respiratorios (R)
R no proteico Equivalente calrico en cal/L
0.70 4.69
0.75 4.74
0.80 4.80
0.85 4.86
0.90 4.92
1.00 5.05

Animal Constante de von Muralt

Hombre 12.3
Conejo 11.2
Caballo 8.5
Ratn 11.4

EI resultado esta expresado en centmetros cuadrados y debe convertirse a metro

cuadrados:
m2= cm2/10000

EI metabolismo es igual:
Metabolismo = (cal/h) / S en m2 o Metabolismo = cal/m2/h

Consideremos un ejemplo prctico:

MEDICIN DE LAS Kcal PRODUCIDAS EN UN RATN EN SU METABOLISMO

Peso del ratn: 28 g

1) Consumo de O2 en ml/min
Si el ratn en 40 seg consumi 1ml de O 2
en 60 seg cosumir x ml de O 2
(60 seg) (1ml de O2 )
xml O2 1,5 ml de O2 / min
40 seg

2) Consumo de O2, en ml/h , en condiciones ATPS

El ratn consume 1,5 ml de oxgeno en 1 min
El ratn consumir x ml de oxgeno en 60 min

(1,5 ml de O2 ) (60 min)

Consumo de O2 en 1 hora = x ml O2 / h 90 ml de O2 / h en
1 min
condiciones ATPS
3) Consumo de O2 en ml/h en condiciones STPD
a) 90 ml/h = 0,09 L/h

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Y REHABILITACION
b) Encontrar el factor de conversin: Si la presin baromtrica fue de 754 mm de
Hg y la temperatura fue de 37C encontramos en la tabla que el factor de
conversin es 0,867.
c) Multiplicando el consumo de O2 en ml/h por el factor de conversin
tendremos:
(0,09 L/h) (0,867)= 0,078 L de O2/h como consumo en condiciones STPD.
4) Cuntas Kcal se habrn producido cuando el ratn en su metabolismo consumi
0,078 L/ de oxgeno, en condiciones STPD?
a) Sabemos que en una dieta mixta el equivalente calrico del O2 es de 4,825
Kcal/L de oxgeno.
b) Entonces podemos calcular las Kcal/h producidas por nuestro ratn,
razonando as:
1L de 02 .equivale a 4,835 Kcal
0,078 L de O2 equivale ax Kcal
O sea:
0,078 L de O2 / h (4,825 kcal)
x Kcal 0,367 kcal / h
1 L de O2

c) Pero para poder comparar un indivduo con otro debemos referir este
resultado al rea de superficie corporal (ASC).
i) Calculo del ASC: peso del ratn de 28g de peso
ASC = 11,4( peso2 / 3 )

segn Moulnalt la K = 11.4

ii) Aplicando la frmula en nuestro ratn:

ASC 11,4 (282 / 3 ) 11,4(3 282 ) 11,4 (3 784) 11,4(9,22) 105,11cm 2

iii) Convertir los cm2 a m2:
1 m2 tiene 100 cm(100 cm)= 10.000 cm2
Luego nuestro ratn tiene como ASC:
105cm 2
0,01m 2 como ASC en m2
10.000
iv) Entonces nuestro ratn produce 0,376 kcal/h/0,01 m2

5) Cuntas Kcal por m2/h produce nuestro ratn?

Si el animalito produce 0,376 kcal por 0,01 m 2

Entonces producir x Kcal por 1,00 m 2

2 (0,376Kcal ) (1 m 2 )
X Kcal/m /h= N2
37,6 Kcal / mm m 2 / h (RESPUESTA)
0,01m

ATPS: Ambient Temperature Pressure saturated (con vapor de agua)

STPD: standard temperatura and pressure dry

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Y REHABILITACION
El consume de Oxgeno y CO2 producido son estandarizados a la temperatura
standard (0C) a la presin baromtrica a nivel del mar (760 mm de Hg) y a
condicin de gas seco.

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Y REHABILITACION

PRACTICA DE LABORATORIO N 13

TOLERANCIA A LA GLUCOSA

A. Introduccin
La glicemia en condiciones basales, vara entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L.
)En la diabetes mellitus se presenta elevacin de la glicemia en ayunas
En la prctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el
llamado test de Tolerancia a la glucosa..

B. Material
- Sujeto de prueba en ayunas.
- Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua ms zumo de tres limones.
- Glucmetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
- Balanza.
- Tallmetro.
- Tubos de prueba. Pipetas.
- Fiola de 100 ml. Matraz de 1000 ml.
- Reactivos para anlisis de glucosa en orina:
- Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3g
- Citrato de sodio o potasio (cristalizado)
173.0 g Carbonato de sodio
(cristalizado) 200.0 g
- Agua destilada, c.s.p. 1000.0 ml

Peso previo:
- Colocar el chip del glucmetro.
- Encender y ver el nmero de cinta reactiva que reconoce para su
uso.
- Colocar la tira reactiva en el glucmetro para su reconocimiento.

C. Mtodo

Experimento N 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinacin de glicemia en ayunas y despus administrar una solucin de
75 gr de glucosa. Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y
determinar la glicemia. Simultnea buscar presencia de glucosa en orina. Construir el
grfico correspondiente.

Experimento N 2: Test de Benedict

EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeas como 0.15 a 0.2 por
ciento de glucosa. La solucin de Benedict no es reducida por el cido rico, la
creatinina, c1oroformo aldehdos.

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