Introduccin
parte de los genes que se portan en los
En las clulas eucariontes, la longitud de la
molcula de DNA es unas 100,000 veces
mayor que el dimetro del ncleo. Por
consiguiente, el DNA tiene que estar muy
plegado y compactado en el ncleo celular.
El complejo de la cromatina consiste en
DNA y protenas estructurales. Entre las
protenas de la cromatina estn histonas y
protenas no histonicas.
La cromatina no se presenta en las clulas
como un filamento de nucleosoma muy
extendido, sino que se compacta en niveles
superiores de organizacin. Cada partcula
nuclear del nucleosoma contiene una
molcula de histona H1 unida al DNA.
Tanto el ncleo como las histonas H1
median la interaccin entre los
nucleosomas vecinos que generan fibras
de 30 nm, que representan un nivel
superior de organizacin de la cromatina.
Las fibras de 30 nm se organizan a su vez
en dominios en forma de asas, que se
visualizan cuando los cromosomas
mitticos se someten a procedimientos que
remueven las histonas. Los cromosomas
mitticos representan el estado ms
compactado de la cromatina. Cierta
fraccin de la cromatina, llamada
heterocromatina, permanece en un estado
muy compactado a travs de la interfase.
La heterocromatina se clasifica como
heterocromatina constitutiva, que se
mantiene condensada en todas las clulas
todo el tiempo, y heterocromatina
facultativa, que se inactiva de manera
especfica durante ciertas fases de la vida
de un organismo.
Las clulas de los machos tienen un
pequeo cromosoma Y y un cromosoma X
mucho ms grande. Como los cromosomas
X y Ytienen pocos genes en comn, los
machos poseen una sola copia de la mayor
cromosomas sexuales. Aunque las clulas
de las hembras contienen dos cromosomas
X, slo uno de ellos ejerce actividad
transcripcional.
El otro cromosoma X permanece
condensado como un cmulo de
heterocromatina de tipo facultativa que se
denomin corpsculo de Barr en honor del
investigador que lo descubri en 1949. La
formacin del corpsculo de Barr asegura
que las clulas tanto de hembras como de
machos tengan el mismo nmero de
cromosomas X activos y por tanto
sinteticen cantidades equivalentes de
productos codificados por los genes que
estn incluidos en el cromosoma X.
Inactivacin del cromosoma X Con base
en sus estudios de la herencia del color del
pelaje en el ratn, la genetista britnica
Mary Lyon, en 1961 propuso lo siguiente:
1. La heterocromatizacin del cromosoma
X en hembras de mamferos ocurre
durante la fase temprana del desarrollo
embrionario y conduce a la inactivacin de
los genes en ese cromosoma.
2. La heterocromatizacin en el embrin es
un proceso aleatorio en el sentido de que
los cromosomas X que derivan del padre y
los cromosomas X que derivan de la madre
permanecen con igual probabilidad de
convertirse en inactivos en cualquier
clula determinada. En consecuencia, en el
tiempo de la inactivacin, el X paterno
puede inactivarse en una clula del
embrin y el X materno puede hacerlo en
una clula vecina. Una vez que se ha
desactivado un cromosoma X, su estado
heterocromtico se transmite a travs de
muchas divisiones celulares, de modo que
el mismo cromosoma X es inactivo en
todas las descendientes de esa clula en
particular.
3. La reactivacin del cromosoma X
heterocromatizado tiene lugar en clulas
germinales antes del inicio de la meiosis.
En consecuencia, los cromosomas X son
activos durante la oognesis y todos los
gametos reciben un cromosoma X
eucromtico.
El mecanismo que ocasiona la inactivacin
de X es un foco de atencion desde un
informe de 1992 que sugiere que la
inactivacin la inicia una molcula de
RNA no codificante (ms que una
protena), que se transcribe desde uno de
los genes (llamado XIST en humanos) en
el cromosoma X que se convierte en
inactivo. El RNA de XIST es una
transcripcion muy larga (ms de 17 kb de
longitud), que se distingue de otros RNA
no codificantes que tienden a ser muy
pequeos. El RNA de XIST no se difunde
en el nucleoplasma, sino que se acumula a
lo largo de los cromosomas justo antes de
su inactivacin. El gen XIST es necesario
para iniciar la inactivacin, pero no para
mantenerla de una generacin de la clula
a la siguiente. Esta conclusin se basa en
el descubrimiento de que las clulas
tumorales de ciertas mujeres contienen un
cromosoma X inactivado cuyo gen XIST
se elimin. Se cree que la inactivacin del
X se mantiene mediante metilacin de
DNA y modificaciones histonicas.
Materiales y mtodos
Reactivos
-Alcohol 95%
-Acetorcena
-Colorante Wright
-Buffer de Wright
-Aceite de inmersion
Materiales
-6 portaobjetos
-2 cubreobjetos
-2 Abatelenguas
-2 Lancetas
-Algodn
*Mechero
-Microscopio ptico
El material para la prctica se entreg
limpio. Se obtuvieron clulas de la mucosa
interna de la mejilla mediante raspado con
abatelenguas de un voluntario del equipo
de sexo femenino, adems se obtuvieron
clulas de sexo masculino de otro equipo.
El voluntario se enjuago la boca en
repetidas ocasiones con agua, el primer
raspado fue para limpiar la zona de
muestra, el segundo se utiliz para el
frotis. El portaobjetos se dividi en dos de
manera arbitraria, en un extremo se
colocaron las clulas del individuo
masculino y, en el otro, clulas del
individuo femenino, el portaobjetos se fij
al calor por medio de una plancha
elctrica. Se agreg el colorante
Acetorcena en ambos frotis y se cubrieron
con el cubreobjetos. Con la tincin con el
colorante orcena se observa el ncleo de
la clula teido en color rosa y en la
periferia de la membrana nuclear una masa
oscura teida en color rosa oscuro. Las
clulas se observaron a 10X y 40X para
encontrar un campo adecuado, y en 100X
para identificar en una clula el corpsculo
de Barr en el caso de clulas de la mucosa
de origen femenino. La muestra del
individuo masculino se tom como control
negativo en la identificacin del
corpsculo de Barr.
Se realiz la identificacin del corpsculo
en clulas de un frotis sanguneo,
especficamente de neutrfilos debido a
Enjuagar la boca de quien donar la El material debe estar limpio (
muestra. portaobjetos y cubre objetos)
Realizar un primer raspado de la
mucosa interna de la mejilla con un
extremo del abatelenguas (Eliminar
Repetor la operacin en el mismo
sitio con el extremo opuesto del
el primer raspado ,permite limipiar la abatelenguas.
zona de toma de muestra).

que es ms fcil identificarlo por su ncleo

segmentado, y el corpsculo se observa
como una protuberancia en forma de
palillo de tambor. Para esto, se realiz una Extender sobre el portaobjetos el
segundo raspado y fijar al calor Aadir una gota de acetorceina y
puncin con una lanceta en el dedo ndice (tener cuidado de no quemar las cubrir muestra con el cubreobjetos.
clulas).
de la mano izquierda de una integrante del
equipo (en este caso de sexo femenino), la
sangre se deposit en el extremo izquierdo
del portaobjetos y se realiz un frotis con
ayuda de otro portaobjetos. El frotis se Observar a seco dbil hasta encontar
un campo en donde se localicen
Observar despues a inmersin para
identificar el corpsculo de Barr.
clulas.
dej sacar al aire; se ti con Wright toda
la laminilla dejando el colorante por 10
minutos y despus de agreg el Buffer de
Identificacin del corpsculo de Barr en
Wright (agua) por 5 minutos, la laminilla
neutrfilos de un frotis sanguneo
se lav con chorro de agua indirecto y se
dej secar. Por ltimo, se observ la
Lavar portaobjetos con alcohol Desinfectar con alcohol el dedo
laminilla en 40X hasta encontrar un campo al 95%. ndice de la mano izquierda.

en el que estuvieran neutrfilos, cuando se

identific se observ en objetivo de
inmersin para identificar el corpsculo de
Poner una gota de sangre sobre
Hacer una puncin con la
Barr. El control negativo en esta lanceta.
uno de los extremos del
portaobjetos.

identificacin fue el frotis sanguneo de un

individuo de sexo masculino.
Diagrama de flujo Hacer un frotis sanguneo con
Dejar secar el frotis al aire.
ayuda de otro portaobjetos.

Identificacin del corpsculo de Barr en

clulas de la mucosa oral
Teir con Wrigth cubriendo Agregar el buffer para Wrigth
toda la laminilla (10 min.) (5 min.)

Observar a 40X hasta encontrar

un campo en donde se localicen
Lavar a chorro de agua y dejar
neutrfilos. Observar despues a
secar
inmersin para identificar el
corpusulo de Barr
Resultados
En el frotis de las clulas epiteliales de la
mucosa interna de la mejilla de la mujer se
observ a 10X (Fig.1) para encontrar un
campo donde estuvieran clulas
epiteliales, despus se observ a 40X
(Fig.2) para enfocar una clula, por ltimo,
al observar el frotis con el objetivo de
inmersin se encontr el corpsculo de
Barr, teido rosa fuerte unido a la
membrana nuclear (Fig. 3)
Figure 1 Clulas epiteliales de la mucosa oral femeninas,
10X. Las clulas estn sealadas con flechas negras.
Figure 2 Clulas epiteliales de la mucosa oral
femeninas, 40X.
Figure 3 Corpsculo de Barr en clula de la mucosa oral
femenina, indicado con flecha negra en la periferia de
la membrana nuclear, 100X
El control negativo para esta prueba fue el
frotis de, un individuo de sexo masculino,
clulas de la mucosa oral, en el cual no se
observaron los corpsculos de Barr en las
clulas.
Por ltimo, se analiz el frotis sanguneo
de origen femenino, para observar el
corpsculo de Barr en neutrfilos, en 40X
(Fig. 4) se eligi un campo adecuado para
encontrar neutrfilos, en 100X se
observaron los neutrfilos con mayor
detalle, observando en los mismos una
pequea protuberancia en forma de palillo
de tambor en su ncleo segmentado.
Figure 4 Frotis sanguneo femenino, flechas negras
neutrfilos, flecha azul linfocitos, flecha verde
eritrocitos, flecha roja basfilos, 40X.
El control negativo fue de igual manera
que para el frotis de la mucosa oral, de un
individuo de sexo negativo en el que no se
observ la protuberancia en el ncleo de
los neutrfilos del frotis sanguneo.
Discusin
La presencia de diferentes nmeros de
cromosomas X en los machos y en las
hembras constituye un problema especial
en el desarrollo. Dado que las hembras
poseen dos copias de cada gen ligado a X
y los machos solo una, el proceso de
transcripcin y el de traduccin sera el
doble en hembras que en los machos. Los
mamferos placentarios inactivan
completamente uno de los cromosomas X
de las hembras. El proceso de inactivacin
cromosmica es aleatorio. El cromosoma
que se inactiva se superhelicoidiza
formando heterocromatina facultativa a la
que se le llama corpsculo de Barr.
De acuerdo con lo dicho anteriormente, en
hembras debe estar el corpsculo de Barr
y en los machos no. En la prctica, la
tcnica para la observacin del corpsculo
de Barr en clulas de la mucosa oral y en
neutrfilos se realiz de manera rpida y
sencilla, se realiz en ncleos interfsicos,
no requiri cultivo celular y proporcion
informacin preliminar del estado de los
cromosomas sexuales de forma inmediata.
Los resultados obtenidos en la prctica
coincidieron con lo reportado en la
bibliografa, en las clulas de la mucosa
oral y en los neutrfilos del individuo de
sexo femenino se observaron los
corpsculos de Barr. En el caso de las
clulas de la mucosa oral, el corpsculo de
Barr aparece en forma de un grnulo
pequeo, ligeramente unido a la
membrana nuclear (en la periferia). Con la
tincin de orcena, se observ el ncleo de
la clula teido de rosa y a nivel de la
membrana nuclear una masa oscura
adherida a la membrana nuclear teida de
rosa oscuro (Fig. 3). En el frotis sanguneo
el corpsculo de Barr aparece como un
palillo de tambor (borde de la envoltura
nuclear con un apndice pequeo), en los
ncleos de los neutrfilos.
Para el caso de los controles negativos para
esta prueba, los resultados fueron de
acuerdo con la literatura, no se encontraron
corpsculos de Barr en las clulas de la
mucosa oral y tampoco en los neutrfilos
del frotis sanguneo del individuo de sexo
masculino.
La cromatina X es un examen solicitado
como mtodo diagnostico por diversos
especialistas, en particular Pediatras,
Gineco-Obstetras y Urlogos, a pacientes
en los que se sospecha alguna anomala de
los cromosomas X.
La hiptesis de Lyon sugiere que la
presencia de un numero variable de
cromosomas X no debe ser perjudicial en
mamferos porque cuando existe ms de
un cromosoma X se inactivan todos menos
uno. La hiptesis de Lyon no se cumple en
personas con sndrome de Turner (45, X),
ya que difieren de las mujeres normales, y
las personas con sndrome de Klinefelter
(47, XXY) difieren de los hombres
normales. Estos trastornos genticos
pueden probablemente surgir, como
consecuencia de que algunos genes X
escapan de la inactivacin.
Conclusin
Con base en el objetivo establecido para
esta prctica se observ la evidencia
citolgica del cromosoma X inactivo en
clulas somticas femeninas en interfase a
travs de la observacin del corpsculo de
Barr en preparaciones de clulas de
descamacin de la mucosa oral y en
neutrfilos de un frotis sanguneo.
Adems, se observaron las clulas de
descamacin de la mucosa oral y
neutrfilos de un frotis sanguneo de un
individuo de sexo masculino para
establecer un control negativo en la
prueba, debido a que las clulas de
individuos de sexo masculino no deben
presentar corpsculo de Barr.
Estos resultados nos indican un adecuado
mecanismo de inactivacin del
cromosoma X.
Bibliografa