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PRACTICANo.2:LeydeBeerLambertII1.

CurvasdeCalibracinyMtodoEstadsticodeMnimosCuadrados.

PalabrasClave:CurvadeCalibracin,BlancoAnaltico,MtododeMnimosCuadrados,CoeficientedeCorrelacinLineal.

Introduccin:
La gran mayora de mtodos instrumentales requieren una calibracin, proceso que
relaciona la seal analtica medida con la concentracin del analito. Los tres mtodos ms
frecuentementeutilizadosson:larealizacinyelusodeunacurvadecalibracin,elmtodode
laadicinestndaryeldelpatrninterno1.
Para realizar el Mtodo de la Curva de Calibracin se procede a realizar una serie de
solucionesdeconcentracinconocidadeanalito,loscualesseintroducenenelinstrumentoyse
registralasealinstrumental.Normalmenteestasealsecorrigepormediodelasealdeun
BlancoAnalticoenelqueseestableceelcerodeabsorbancia,esteblancocontienetodoslos
componentes de la matriz del anlisis (Ejemplo: agua destilada, agua/etanol) a excepcin del
analitoquesedeseamedir.Elblancoespreparadoenelinstanteenquesepreparanlasdems
muestrasadeterminarseyadebeimitarlascondicionesdeanlisisalasquesecometenstas
ltimas.

Fundamento:
La absorcin de la luz por una solucin diluida, viene dada por la ley de Beer, que
relacionalaconcentracindelafaseabsorbenteconlaradiacin.Larelacinentrelaabsorcin
delaluzyelcaminorecorridoporsta(osea,elespesordelacubeta,vienedadoporlasleyes
de Lambert. La fusin de estas leyes empricas nos da la absorbancia total por un cuerpo,
cuandointeraccionaconunhazmonocromado.
MedianteunmtodoqueobedezcalaleydeBeerLambertsepuederealizarunanlisis
cualitativo de cualquier especie en solucin, conociendo por supuesto la longitud de onda de
mxima absorbancia del analito, esto por medio de la determinacin de la absorbancia en
funcin de soluciones de concentracin conocida a travs de la elaboracin de una curva de
calibracinquelasrelacionedemaneraproporcionalylinealmente,paraloqueserequierede
unmtodoestadstico.Elmtodoestadsticoclsicoyqueseadecuaalascaractersticasparala
realizacindedichaactividadeseldelosMnimosCuadradosenlosquesegraficalaordenada
(la variable independiente) con los datos de la respuesta del aparato y la abscisa (variable
dependiente) en donde se coloca la concentracin o el tanto por ciento del analito, lo ms
habitual(ydeseable)esquelagrficaseaproximeaunalnearecta,sinembargopuededarseel
caso de que los valores no coincidan en una recta debido a errores aleatorios del proceso de
medida, el mtodo de los mnimos cuadrados nos sirve para intentar ajustar la mejor lnea
recta que conecte los puntos. La ecuacin cannica de la recta se expresa matemticamente
como:
Y=mx+b
y en el mtodo de mnimos cuadrados estos valores se obtienen realizando las siguientes
operacionesmanuales:
m= y,b=

1
Elaborada por Jorge Reyes y William Quiroa.
Donden,indicaelnmerodedatosylassumatoriascorrespondientesdelostrminos
tabulados.Estosesimplificaconelusodecalculadorascientficasencuyasopcionesestadsticas
seencuentraporloregularlaopcindecalculoderegresinlineal,aligualqueenprogramasde
ordenadorcomoExelyotrashojaselectrnicas.Laviabilidaddelmtododecurvadecalibracin
quedaestablecidaporelvalordelcuadradodelCoeficientedeCorrelacinLineal(r2),quedebe
sersuperiora0.998,pararealizarunestudiocualitativoadecuado.

Objetivos
1. Elaborar una curva de calibracin para relacionar la seal analtica medida con la
concentracindelanalito.
2. Conocerlaimportanciadelaelaboracindeunblancoparalarealizacindeunanlisis
espectrofotomtrico.
3. Aplicarmtodosestadsticosesencialeseinherentesalosmtodosinstrumentales.

Procedimiento:
ElaboracindeunaCurvadeCalibracin.
PreparacindeSolucionesdeTrabajo.
1. Transvasar los 100 mL de solucin coloreada de la prctica 1 (o lo que queda de las
mismas)ytransvasarcuantitativamenteaunbalnaforadode250mL,asignarunvalor
nominaldeconcentracinarbitrarioacadauna(porejemplo:0.05N).[SolucinMadre]
2. Deestasolucinmadretomar4alcuotasde1,2,3,5,10respectivamenteydiluirlasen
balones de 100 mL (o del volumen que asigne el instructor) con agua destilada.
[SolucionesEstndar]
3. DeterminarlasconcentracionesdeestosestndaresmediantelaecuacinC1V1=C2V2.

ProcesodeCalibracin.
1. Ejecutar la calibracin del Spectronic 20 empleando el procedimiento descrito en la
seccindeTcnicasComplementarias.

Resultados.
1. Graficar respuesta del aparato (Absorbancia promedio) en eje Y, contra unidades de
concentracindelcoloranteenelejeX.
2. Ingresarlosvaloresaunacalculadoradecalculoderegresinlinealparadeterminarla
pendientemyelinterceptoenejex:bsegnlaecuacincannicadelarecta:y=mx+
b. Recuerde borrar las lecturas estadsticas de clculos pasados de la memoria de su
calculadoraantesdeingresarnuevosdatos.
3. Calcular el cuadrado del coeficiente de regresin lineal [r2], el valor deber estar
comprendidoentre0.990a0.999.Elvalornopuedesermayora1.Recordarqueesto
indicaquelasealorespuestadelinstrumentopuedeasociarsedeun99a100%conla
concentracindelanalito.

AnlisisdeResultados.
LaLeydeBeerLambertsedemuestraconelexperimentoqueserealiz?,Selogrdeterminar
la concentracin de la muestra desconocida por medio del mtodo?, Segn el coeficiente de
correlacin determinado para el anlisis cree que es confiable el valor de concentracin de
muestra desconocida, y si no se cree as por que razn existe cierto error? Por qu es
importantelaleydeBeer?
Los mtodos instrumentales incluyen procesos estadsticos, A la hora de medir el valor de la
absorbanciadelosestndaresylamuestradesconocidacreequeessuficientellevaracabosolo
una vez la medicin.? Podra medirse 2 o tres veces y realizar un promedio de absorbancia
paraincrementarlareproducibilidadoconfiabilidaddelmtodo?

Cuestionario.
1. Sienlugardelcolorasignadoenellaboratoriosehubiesetenidoquetrabajarconuna
solucindeotrocolorcomouncolorsecundariocomoelvioleta,seranecesariohacer
unbarridoparadeterminarelmximodeabsorbancia?
2. Silasolucinstockfueseincoloracreequesepuedellevaracabounadeterminacin
enelSpectronic20?
3. Silasolucinstockestuvieracoloreadaperoalmismotiempoextremadamenteturbia
comoafectaraestoelanlisis?


4. Qu es un cromforo y como se aplica en anlisis cuantitativos por la tcnica
espectrofotomtrica?

Bibliografa.
1. Skoog,D.A.,Holler,F.J.&T.A.Nieman(2001)PrincipiosdeAnlisisInstrumental.5ta
Edicin,EditorialMcGrawHill,Mxico.1028pp.
2. AmericanPublicHealth(APH)et.al.MtodosEstndarparaelExmendeAguasy
AguasdeDesecho,IncluyendoSedimentosBentablesyLodos.(1963)11Ed.Trad.
I.Q.PedroCaballero.EditorialInteramericanaS.A.Mxico,609pp.

Internet:Paramsinformacinpuedevisitar:
1. BeersLaw.Autor:SheffieldHallamUniversity.ltimaActualizacin:Desconocida.
[http://teaching.shu.ac.uk/hwb/chemistry/tutorials/molspec/beers1.htm]
2. BeerLabmbertCalculator.Autor:ChangBioscience.ltimaActualizacin:2004.
[http://www.changbioscience.com/calculator/BeerLambert.html]
TM
3. UseoftheSpectronic20 ataFixedWavelegth.Autor:DepartamentofChemistryofUniversity
ofWisconsinMadison.ltimaactualizacin:1997.
[http://inst.sfcc.edu/chemscape/catofp/measurea/concentr/spec20/spec20b.htm]

Estndar Concentracin Medidade%T %T Absorbancia Absorbancia


Promedio Promedio

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3


4


5