Introduccin

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para observarse a

simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.

Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de nutricin,

estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es por ello que se emplea el
estudio microscpico el facilita notablemente la observacin; principalmente en las
bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan tambin la
observacin de ciertas estructuras celulares.

En este informe vamos a distinguir la estructura intracelular de algunos microorganismos,

tal es el caso de la sarcina, Klecciela, Bacilo Serium entre otros. Desarrollamos los
mtodos de tincin y damos a conocer un anlisis de los resultados obtenidos en la
prctica.

Objetivos

Aprender las tcnicas de preparacin del frotis, de fijacin y coloracin ms utilizadas en

el estudio macroscpico de cultivos bacterianos, para poder as dar pauta a la
identificacin de las principales formas bacterianas y comprender la importancia de las
tinciones y su adecuado uso.

GENERAL:

Identificar las principales estructuras microbianas mediante coloraciones

especiales.

ESPECFICO:

Realizar montajes para observacin microscpica de bacterias.

Aplicar diferentes tcnicas de tincin.

Identificar esporas en el mtodo de Wirtz- Conklin.

Identificar capsulas en el mtodo de tincin negativa.

Hallar corpsculos meta cromticos en la saliva.

Observar la pared celular en el Mtodo de Robinow.

Observar la membrana celular en el Mtodo de Knaysi.

Observar el ncleo en las levaduras.

1.- MENCIONE LOS FACTORES QUE AFECTAN TODA TECNICA DE COLORACION.

FACTORES QUE AFECTAN A TODA TECNICA DE TINCION

las tcnicas de coloracin constituyen una practica diaria en el laboratorio de
microbiologa por los cuales se deber considerar una serie de factores que puedan
alteras los resultados de los mismos. Asi pues los principales factores son:

Pureza del colorante.- a mayor grado de impurezas mayor error y menor calidad
de tincin.

Concentracin del colorante.- a mayor concentracin mayor error en la tincin;

igual que a menor concentracin.

El pH del colorante.- este es un factor fundamental ya que depende de las

estructuras que se desee observar para elegir el pH adecuado.

Conservacin del colorante.- se debe conservarse en lugares frescos, secos, y

obscuros; envasados y etiquetados.

Tcnica Empleada.- se deber seguir rigurosamente paso a paso cada tcnica de

tincin.

Temperatura.- en la mayora de los casos se utiliza la temperatura ambiental pero

si existe algunas tcnicas que requieran de temperatura adecuada.

Cantidad de la muestra.- deber ser representativa y homognea pero no muy

grande.

Realizar correctamente el frotis.- se debe fijarse bien para que cuando se les
aada los colorantes mordientes y decolorantes no arrastren a los
microorganismos que se desee observar.

Soluciones mordientes.- en ciertos casos son necesarios ya que actan como

fijadores y ayudan a la fijacin del colorante a las correspondientes estructuras .

Tiempos de Tincin.- es necesario que todas las sustancias se mantengan en la

preparacin un tiempo preciso y variable segn la tincin.

2.- DESCRIBA LOS COMPONENTES DE UN COLORANTE

Los colorantes utilizados en Microbiologa son compuestos orgnicos que contienen

grupos cromforos y auxocromos unidos a anillos aromticos .

Un cromforo es la parte o conjunto de tomos de una molcula responsable de su color.

Tambin se puede definir como una sustancia que tiene muchos electrones capaces de
absorber energa o luz visible, y excitarse para as emitir diversos colores, dependiendo
de las longitudes de onda de la energa emitida por el cambio de nivel energtico de los
electrones, de estado excitado a estado fundamental o basal

3.- indique a que se denomina MORDIENTE, mencione algunos ejemplos

Substancia que tiene una afinidad tanto con el material tintreo como con el material que
va a ser teido. Acta como un puente entre ambos y de esta manera ayuda a que el tinte
se fije permanentemente en la fibra

(por ejemplo el cido oxlico presente en las hojas de Ruibarbo , el alumbre (sulfato de
aluminio), cremor trtaro (potasio) xidos de hierro

4.- por que es importante el colorante y las coloraciones

Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar estructuras en tejidos
biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios.
Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definicin y examinar
grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo),
poblaciones celulares(por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o incluso
para resaltar organelasdentro de clulas individuales.

1.- que funcion cumple el lugol en la coloracion gram

2.- composicin del lugol

El lugol es una solucin de yodo (1%) y yoduro de potasio (2%) en agua destilada. Este
reactivo reacciona con algunos polisacridos como los almidones, glucgeno y ciertas
dextrinas, formando un complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por ser
colorido, dando color diferente segn las ramificaciones que presente la molcula.

3.- fundamento de las coloraciones diferenciales

Como su nombre lo indica, nos permiten diferenciar entre grupos de bacterias que tienen
distintas propiedades tintoriales

La diferenciacin entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas se establece en la

naturaleza y caractersticas de la pared celular bacteriana

Las bacterias Gram positivas poseen una gruesa capa de peptidoglicano que es capaz de
retener al complejo colorante-mordiente (cristal violeta-yodo). Durante la decoloracin con
alcohol acetona se provoca una deshidratacin de esta gruesa pared y se reduce la
porosidad, atrapando entonces al complejo en el interior de la clula.
Las bacterias Gram negativas, poseen una delgada capa de peptidoglicano no puede
impedir la salida del complejo colorante-mordiente (cristal violeta-yodo) y es entonces
fcilmente teida por el colorante secundario o de contraste.

4.- funcin de la fucsia fenicada en la coloracion ZIEHL NEELSEN

Su funcin es que al tener la batera resulta difcil alguna de ella, sin embargo el interior
de las clulas, rico en lpidos, fija la fucsina, un potente colorante con intervencin del
calor y son capaces de conservarlo resistiendo a la decoloracin.

5.- a que se denomina colorante primario y colorante de contraste

Primer colorante.- Un colorante bsico (+) que en contacto con las clulas cargadas
negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El ms utilizado es el cristal violeta.

Colorante contraste.- Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, por
ejemplo, la safrina.

6 menciones ejemplos de bacteria de G+ y G- por cada forma bacteriana

Ejemplos de bacterias grampositivas

1. Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones

localizadas y posibles gastroenteritis.

2. Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el trayecto

respiratorio, as como de fiebre reumtica.

3. Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal,

endometritis y neumona.

4. Streptococcus faecalis. Usual en infecciones en vas biliares y urinarias, habita

en el colon humano.

5. Streptococcus pneumoniae. Responsable de neumonas e infecciones en las

vas respiratorias, as como otitis, meningitis y peritonitis.

6. Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al torrente

sanguneo a travs de lesiones en su hbitat, la boca y la mucosa dental.

7. Clostridium tetani. Bacterias responsables de los ttanos, entran al cuerpo desde

el suelo por traumatismos en las extremidades.

8. Bacillus antracis. Se trata de la conocida bacteria del ntrax, tanto en su versin

cutnea como en la pulmonar.

9. Clostridium botullinum. Causante del botulismo clsico y el infantil, habita en el

suelo y en los alimentos mal conservados.
 10. Clostridium perfringes. Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la pared
celular, y es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis necrosante y la
endometritis.

Ejemplos de bacterias gramnegativas

1. Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y

meningocococemias, coloniza las vas respiratorias humanas y asciende a las
meninges por va sangunea.

2. Neisseria gonorrhoeae. Conocidsima por ser la causante de la gonorrea, comn

enfermedad de transmisin sexual.

3. Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, est involucrada en las
llamadas diarreas del viajero, as como en meningitis neonatal, sepsis e
infecciones urinarias.

4. Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida como fiebre

tifoidea, suele transmitirse por va fecal-oral: contaminacin de aguas, mala
disposicin de excretas o higiene defectuosa.

5. Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocoitis y septicemia con abscesos si

llega a pasar del intestino a la sangre.

6. Haemophilus influenzae. Bacilo usualmente aerobio, es responsable de

numerosas meningitis, otitis, sinusitis, bronconeumonas, celulitis y artritis sptica.

7. Bordetella pertussis. Causante de la enfermedad conocida como Tos ferina, de

alta mortalidad infantil.

8. Brucella abortus. Ocasiona la brucelosis, una enfermedad del ganado que se

transmite al hombre por contacto con los animales o por ingesta de lcteos sin
pasteurizar.

9. Francisella tularensis. Responsable de la llamada fiebre del conejo o tularemia,

se transmite al hombre mediante vectores (caros u otro tipo de exoparsitos) de
los conejos, ciervos y animales semejantes.

10. Pasteurella multocida. Bacilo anaerbico, transmitido por la mordedura de

animales domsticos infectados, tales como perros y gatos. Se disemina a travs
de la piel e infecta el sistema respiratorio, causando tambin celulitis.

Discusion de resultados de tincin de gram

se observo morfologuia de bacterias salivales como flagelos cocos y bicococos