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IFCE - Campus Maracana

Curso Engenharia Ambiental


Disciplina Microbiologia Bsica
Profa. Cynara Reis Aguiar

Unid. IV Reproduo e Crescimento


Microbiano
O que crescimento???

 Aumento ordenado de todos os componentes do sistema

biolgico;

 Aumento da massa celular;

 Multiplicao celular;

 Aumento do nmero de indivduos;

 Microbiologia: aumento de populao;

 Crescimento populacional: aumento da massa microbiana.

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Crescimento

Qual a importncia de se estudar o crescimento???

 Microrganismos desejveis - melhoria nos processos de


produo;
 Produo de compostos de interesse;
 Tratamento de efluentes.

 Microrganismos indesejveis - favorecer inibio e


eliminao;
 Patgenos;
 Deteriorantes.
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Diviso bacteriana

Diviso Bacteriana
 As bactrias dividem-se
por fisso binria
transversa, e aumentam o
seu nmero de forma
geomtrica: populao
duplica a cada tempo de
gerao.

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Crescimento microbiano
Outras formas de crescimento microbiano

5
Crescimento bacteriano
Iniciando com 1 nica bactria, temos:

1 2 4 8 16 32 ...

Aumento expresso em progresso geomtrica

1 21 22 23 24 25 ... 2n

n n de geraes (duplicaes)

N = 2n n total de clulas aps crescimento ativo

Crescimento exponencial crescimento ativo sem morte


celular

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Crescimento bacteriano

 Tempo de gerao (g) - intervalo de tempo necessrio

para que uma clula se duplique;

 Bactrias g de 1 a 3 ou mais de 24 h;

 Varia de acordo com a espcie;

 fortemente influenciado:

 Composio nutricional do meio;

 Condies fsicas de cultivo.

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Crescimento bacteriano

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Crescimento bacteriano

Expresses matemticas do crescimento


 Crescimento populacional - Aumento do nmero ou massa
microbiana;
 Pode ser quantificado atravs do n de geraes em um
perodo de incubao.
 Taxa de crescimento - variao do nmero ou massa por
unidade de tempo n geraes/h.
 Importncia:
 Utilizao dos microrganismos em pesquisas e
aplicaes industriais;
 Predizer e controlar a quantidade de crescimento.

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Crescimento bacteriano

A E. coli tem tempo de gerao


(g) de 20 min. Aps 20
geraes em quanto o n de
clulas vai aumentar??? Em
quanto tempo???

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Crescimento bacteriano

Populao Total (N)


(1) N= 1 x 2n , mas o n inicial clulas inoculadas no tempo
zero >1, ento:
(2) N= No x 2n , onde:
N= nmero final de clulas
No= nmero inicial de clulas
n= nmero de geraes
Aplicando logaritmo (log10):
(3) log N= log No + n log 2
n = (log N log No) / log 2
n = (log N - log No) / 0,301
(4) n = 3,3 (log N - log No)
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Crescimento bacteriano

 A partir da equao 4 possvel calcular o nmero de geraes


(n) que ocorreram em uma cultura se o n inicial e final de
clulas for conhecido;
 Ex: No = 1.000 clulas e N = 100.000.000 clulas
n = 3,3 (log 100.000.000 log 1.000)
n = 3,3 (8 3) = 16,5 geraes
 Tendo-se o valor de n pode-se calcular o tempo de gerao (g)

g = t/n (5)

 Ex: 16,5 geraes ocorreram em 5h, ento:


g = 5h/16,5 g = 0,3 h para duplicao da populao.
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Crescimento bacteriano

 Taxa de crescimento (R) geraes por hora durante o


crescimento exponencial:

R = n/t = 1/g (6)

 Ex: se o tempo de gerao 0,3 h, ento:

R = 1/0,3 = 3,33 geraes/h

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Crescimento bacteriano
 Escherichia coli

Tempo de gerao 20 min condies ideais de cultivo

Aps 20 geraes 1.000.000 de clulas em g = 7 horas

Aps 30 geraes 1.000.000.000 de clulas em g = 10 h

Aps g = 24 h 1.000.000.000.000.000.000.000

Dificuldade na representao grfica

Uso de escalas logartmicas

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Crescimento bacteriano

Representao grfica logartmica e


aritmtica da curva de crescimento
de uma populao em fase de
crescimento exponencial.

-------- logartmica
_____ aritmtica

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Crescimento bacteriano
Curva de crescimento de
bacteriano em sistema
fechado
 Clulas microbianas crescem
em sistema fechado (frasco,
tubo);
 Nenhum novo nutriente
adicionado;
 Produtos metablicos no
so removidos.
 Fases de crescimento:
representao grfica em
escala logaritmica do n de
clulas viveis x t.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase Lag
 Fase de adaptao das bactrias quando inoculadas num
novo meio;
 Pouca ou ausncia de diviso celular;
 Taxa de crescimento igual a zero;
 Clulas em estado de latncia fisiologicamente ativas

Intensa atividade metablica


- Sntese de enzimas e molculas variadas.

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Fase Lag

Importncia
 Recuperao de clulas envelhecidas depleo de ATP,
co-fatores essenciais, enzimas e ribossomos.
 Estes compostos tm de ser sintetizados antes que o
crescimento possa comear.
 Tempo de recuperao relao entre condio do
microrganismo e natureza do meio;
 Longo culturas velhas ou meio muito diferente do que
estavam inoculadas;
 Curto transferncia de cultura jovem em fase de
crescimento exponencial para meio fresco de igual
composio.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase Log ou Crescimento exponencial

 Aps adaptao crescimento populacional em escala


exponencial ou logartmica;

 Clulas uniformes em composio qumica;

 Reproduo celular extremamente ativa;

 Tempo de gerao atinge valor constante reta no grfico;

 Perodo de maior atividade metablica da clula

 Estgio ideal para fins industriais produtividade.

 Microrganismos sensveis s mudanas ambientais ou


agentes antimicrobianos afetam desenvolvimento.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase estacionria

 Diminuio da velocidade de crescimento

 Decrscimo da atividade metablica;

 N morte celular = n clulas novas taxa crescimento


zero;

 Populao estvel.

 Porque isso acontece???

 Exausto de nutrientes;

 Acmulo de produtos metablicos txicos;

 Mudana de pH.

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Fases do crescimento bacteriano

Fase de Morte Celular

 Ocorre devido aumento dos produtos metablicos txicos e


ausncia de nutrientes;

 Taxa de morte acelerada taxa crescimento negativa

 Diminuio exponencial das clulas viveis, poucas


resistiro (fase senescente).

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Mtodos para determinao
do crescimento microbiano
Determinao do crescimento celular

Crescimento em culturas contnuas


 Muito usada nos processos industriais de obteno de
produtos microbiolgicos;
 Interesse em manter as clulas em fase log ou
estacionria.
 Utilizam-se fermentadores ou quimiostatos:
 Permitem crescimento em equilbrio dinmico controle
da densidade populacional e da taxa de crescimento.
 Controlados pela concentrao do nutriente limitante
(fonte de C ou N) e pela taxa de fluxo (taxa de diluio).

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Quimiostato

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Determinao do crescimento celular

 Quantificao indireta:
 Contagem proporcional de clulas;
 Turbidimetria;
 Atividade metablica;
 Peso seco.

 Quantificao direta:
 Contagem em placas;
 Filtrao;
 Mtodo do nmero mais provvel (NMP);
 Contagem direta ao microscpio.
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Mtodos indiretos

Contagem Proporcional de Clulas


 Anlise comparativa das culturas com suspenses padres;
 Padro da escala de MacFarland, tubos contendo uma
suspenso de BaSO4, em diferentes concentraes
diferentes graus de turvao.

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Mtodos indiretos

Turbidimetria

 Monitoramento do crescimento Turbidez da cultura;

 Aumento da densidade de clulas.

 Quantificao em espectrofotmetro ou colormetro

 Absorbncia (comprimento de onda 660 nm);

 Rpida confeco de uma curva padro;

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Mtodos indiretos

Turbidimetria

 Baixa sensibilidade;

 Suspenso deve ter entre 10 e 100 milhes de cl/mL.

 No h distino entre clulas viveis e clulas mortas;

 Grficos de crescimento bacteriano

 Absorbncia x tempo;

 Absorbncia x n de clulas.

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Turbidimetria

-A quantidade de luz que atravessa o detector inversamente


proporcional ao n de bactrias;
- luz transmitida n de bactrias.

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Mtodos indiretos

Massa de Clulas (peso seco)

 Estimativa atravs do peso seco;

 Baixa sensibilidade;

 Replicata diminuio da margem de erro;

 Procedimento:

 Filtrao da cultura lquida, secagem (100-160C / 16


horas) e pesagem.

 Utilizada para analisar crescimento de fungos filamentosos


e tambm para bactrias.

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Mtodos indiretos

Anlises Qumicas - Atividade metablica

 A quantidade de um certo produto metablico (cido ou


CO2) pode ser relacionada diretamente com o n de
bactrias presentes;

 Quantificao de protena, nitrognio ou atividade


metablica.

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Mtodos diretos

Contagem de Clulas Viveis - Contagem em placa e

diluio seriada

 Coleta de alquotas de uma cultura microbiana ou amostra

ambiental;

 Utilizao do mtodo da diluio seriada;

 Inculo em meio slido (spread plate ou pour plate);

 Contagem das colnias formadas (30 e 300 colnias);

 Diminuio do erro triplicatas ou quintuplicatas

(validao estatstica).

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Mtodo contagem
de colnias em placa

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Contagem de viveis em placa

 Spread plate
 Inculo 0,1 a 0,5 mL;
 Possibilita o uso de meios opacos;
 No existe choque trmico devido ao meio de cultura.

 Pour-plate
 Inculo 1,0 a 5,0 mL;
 No possibilita o uso de meios opacos;
 Deteco difcil de culturas no interior do meio de
cultura;
 Existe choque trmico na adio do meio de cultura.
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Mtodos diretos

Filtrao

 Amostras que contenham poucas clulas lagos e fontes


de gua;

 Concentrao do microrganismo na membrana do filtro,


aps passagem de 100 ml de gua;

 Filtro transferido para placa de Petri contendo um suporte


embebido em nutriente lquido que permite o crescimento
das colnias na superfcie da membrana;

 Usado para deteco de coliformes.

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Filtrao

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Mtodos diretos

Nmero Mais Provvel (NMP)


 Amplamente utilizado em laboratrios de microbiologia;
 Mtodo estatstico n de bactrias numa amostra ser
o n de diluies para eliminar o crescimento em tubos com
meio de cultura;
 Utilizao de volumes decimais de uma dada amostra (10,
1 e 0.1 ml);
 Rplicas correspondentes a 5 tubos, observando ou no
crescimento;
 Contagem de tubos positivos clculo pela Tabela do NMP;
 95% de confiabilidade estatstica.

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Mtodos diretos

Contagem Total de Clulas (microscpio)


 Contagem direta no microscpio - cmaras de contagem
 Amostra fixada e corada ou a fresco 0,01 mL da
suspenso de clulas;
 Cmara de Petroff-Hausser.
 No diferencia clula viva de clula morta;
 Necessrios 10 milhes de clulas para permitir contagem;
 Vantagem no h necessidade de incubao agilidade;

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Reproduo de microrganismos
eucariontes
Reproduo de eucariontes

 Na natureza a reproduo ocorre de 2 maneiras:

 Reproduo assexuada
 Basicamente resulta em novas clulas idnticas s
originais.

 Reproduo sexuada
 Permite a troca de material gentico gerao de um
novo ser.

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Reproduo assexuada

 No envolve unio de ncleos, clulas sexuais ou rgos


sexuais;

 No implica em variao gentica;

 Mais eficiente do que a reproduo sexuada na propagao


da espcie;

 Novos indivduos so produzidos por:

 Um organismos parental;

 Uma clula (organismos unicelulares).

 Fisso binria reproduo assexuada;

 Nos eucariontes reproduo mais complexa Mitose.

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Reproduo assexuada

Mitose
 uma forma de diviso nuclear;
 Todos os cromossomos da clula so duplicados;
 Os dois novos conjuntos se separam para formar os
ncleos-filhos idnticos;
 A clula se divide em 2 clulas-filhas cada uma recebendo
um ncleo;
 Cada clula-filha tem o mesmo nmero de cromossomos e
a mesma composio gentica que a clula-parental.
 um processo contnuo.

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Mitose

 Entre as mitoses Intrfase fase de repouso;


 Cromossomos no so visveis nas clulas-filhas;
 Ocorre duplicao do DNA, formao de organelas e
acmulo de energia para mitose.

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Mitose

 Fases da Mitose:

 Prfase

 Metfase

 Anfase

 Telfase

 A mitose permite o crescimento do organismo, a


substituio de clulas que morrem e a regenerao de
partes lesadas do organismo.

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Prfase

 Os cromossomos condensam-se, tornando-se visveis;


 A carioteca e os nuclolos desintegram-se;
 Os centrolos dividem-se e dirigem-se para os plos da
clula;
 formado o fuso de diviso (fibras proticas).

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Metfase

 Membrana nuclear desaparece;


 Cromossomos esto completamente condensados e
alinhados na regio equatorial do fuso;
 No final da metfase, os centrmeros se duplicam e se
dividem, de modo a deixar livres os cromossomos-filhos.

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Anfase

 Estgio mais curto da mitose;


 O cromossomo-filho se move para um dos lados da clula,
utilizando as fibras do fuso como guia.

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Telfase
 Os dois cromossomos chegam aos plos e se agregam;
 Os cromossomos descondensam-se e alongam-se em fitas
de cromatina;
 Membrana nuclear formada ao redor dos cromossomos;
 Citoplasma da clula se divide Citocinese.

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Reproduo sexuada

 Fuso de 2 clulas sexuais diferentes (gametas),


procedentes de dois pais de sexos diferentes ou tipo de
relao sexuada;
 Fuso de gametas Fertilizao zigoto

 Na reproduo sexual tem-se:


 Fuso de dois ncleos haplides;
 Formao de um zigoto (diplide);
 MEIOSE, resultando novamente em clulas haplides;
 Fuso das clulas haplides completando o ciclo;
 Ocorre nas clulas reprodutivas do organismos.

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Etapas da meiose

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Meiose

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Ciclo celular eucaritico
 Todas as clulas eucariticas
perfazem um ciclo celular
semelhante, com exceo dos
gametas;
 A durao do ciclo celular varia de
um tipo de clula para outra;
 As fases do ciclo:
 G1 - fase de crescimento - a
clula cresce e sintetiza
protenas;
 S - fase de sntese de DNA - a
clula continua a crescer e a
sntese de DNA ocorre no ncleo
at que a quantidade de DNA
seja duplicada;
 G2 - fase de crescimento -
atinge o seu mximo;
 M - mitose - a sntese de
macromolculas quase cessa e o
ncleo sofre mitose.
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