DETERMINAO DE GLICOSE

Protocolo de Aula Prtica

Disciplina: Bioqumica Fisiolgica
Prof. Alexandra Latini

Bolsistas: Paulo Silveira

Roberta de Paula Martins

Mtodo: Teste Enzimtico-Colorimtrico

Fundamento: A glicose oxidase (GOD) catalisa a oxidao da glicose para

cido glicnico e perxido de hidrogenio. Atravs de uma reao oxidativa de
acoplamento catalisada pela peroxidase (POD), o perxido de hidrogenio
formado reage com 4-aminoantipirina e fenol, formando um complexo de cor
vermelha (quinoneimina), cuja absorbncia medida em 500 nm, diretamente
proporcional concentrao de glicose na amostra.
GOD
Glicose + H20 cido Glicnico + H2O2
POD
2 H2O2 + 4-aminoantipirina + Fenol Quinoneimina + 4 H20

GOD
Gli cos e + 1/2 H 2O
cido Glicnico + H 2 O2
POD
2 H 2O2 + 4 a min oantipirin a + Fenol
Quinonei min a + 4 H 2O

Amostra: Soro, plasma, lquor e outros lquidos biolgicos

Mtodo:

1. Leitura em espectrofotmetro
Comprimento de onda: 500 20 nm.
Cubeta: 1cm.
Temperatura: ambiente
Medida: Contra o branco

2. Reagentes

1. Padro - Contm Glicose 100 mg/dL.

2. Reagente de Cor - Contm tampo pH 7,5 de fosfato 70 mmol/L, fenol

5,0 mmol/L, glicoseoxidase 10000 U/L, peroxidase > 1000 U/L e 4-
aminoantipirina 0,4 mmol/L.
Procedimento Manual

1- Deixar os reagentes atingirem a temperatura ambiente ou a do banho-maria

antes da realizao do teste.
2- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", "Teste" e "Padro" e proceder:

Tubos Branco Teste Padro

Amostra 10 L
Padro (1) 10 L
Reagente de Cor (2) 1000 L 1000 L 1000 L

Clculo dos Resultados

Concentrao do Padro = Cp = 100 mg/dL Concentrao do Teste = Ct

Absorbncia do Padro = Ap Absorbncia do Teste = At

Exemplo: Cp = 100 mg/dL Ap = 0,222 At = 0,208

Fc = Cp = 100
Ap 0,222

FC = 450 Ct = At x FC = 0,208 x 450 = 94 mg/dL

Valores de Referncia

Interpretao dos resultados da glicemia de jejum

1 Glicose entre 60 e 99 mg/dL : Normal
2 Glicose entre 100 e 125 mg/dL: Alterada (Pr-Diabetes)
3 Glicose 126 mg/dL: Diagnostico provisrio de Diabetes Mellitus

Referncia: Bula do kit Glicose - PP (ANALISA Diagnstica)