UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA
Facultad de Industrias Alimentarias-Dpto. Ingeniera de
Alimentos y Productos Agropecuarios

PRCTICA N 8

ESPECTROFOTOMETRIA

CURSO:
Anlisis de alimentos

PROFESOR:
Patricia Glorio Paulet

ALUMNOS:
Alania Ureta, Jos

Carhuavilca Solano, Ricardo

Curasma De La Cruz, Norma

Llactacndor Orccori, Noem

2016 - I
 I. INTRODUCCIN

La espectrofotometra se basa en la absorcin o emisin selectiva de energa

electromagntica a determinada longitudes de onda. Estas pueden ser la luz ultravioleta
(200-400 nm), luz visible (400-700 nm) e infrarrojo prximo (700-800nm).

Para el caso de la absorcin, se produce por las pequeas vibraciones inducidas en los
tomos o molculas por la incidencia de la luz. En la emisin, se debe a la excitacin
trmica (por la accin de una llama) fotmetros de llama de emisin o tras la
incidencia de luz ultravioleta fluoromtrica (Mompn, 1988).

Para la determinacin de azcares reductores, en la prctica se us el mtodo de DNS.

Basado en la reduccin del cido dinitrosalislico a cido 3-amino-5nitrosaliclico por el
grupo carbonilo libre de los azcares reductores. El complejo que se forma es medido
espectrofotomtricamente a 540 nm, siendo la densidad ptica proporcional a la
concentracin de azcares reductores.

El objetivo de esta prctica es conocer el mtodo DNS para la determinacin de azcares

reductores.

II. REVISIN DE LITERATURA

2.1. Espectrofotmetro

La palabra espectrofotmetro deriva de la palabra latina Spectrum, que significa imagen, y

de la palabra griega phos o potos, que significa luz. El espectrofotmetro utiliza las
propiedades de la luz y su interaccin con otras sustancias, para determinar la naturaleza
de las mismas. En general, la luz de una lmpara de caractersticas especiales es guiada
a travs de un dispositivo que selecciona y separa la luz de una determinada longitud de
onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de luz que sale de la muestra es
captada y comparada con la intensidad de luz que insidio en la muestra y a partir de esto
se calcula la transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentracin
de la sustancia. (Manual de mantenimiento para equipo de laboratorio)

Fuente: Universidad Girona

Tipos de espectrofotometras

Se muestra una clasificacion de los principales tipos de espectrofotometrias agrupados

segn ell tipo de interaccion luz-molecula (absorvancia o emision) y segn la zona del
espectro en la que se trabaja.
 Cuadro 1: Clasificacin de espectrofotometras
UV VIS
Molecular IR
ABSORCIN RMN
Atmica Llama (EAA)
Plasma (ICP)
Atmica Llama (EEAA)
EMISIN Plasma (ICP)
Molecular Fluorescencia (FS, XRF)
Turbidimetria
OTROS Refractometria
Polarimetra
Espectroscopia masas
Fuente: Universidad Girona

Quesada (2007) indica que cuando un haz de luz (Io) de determinada longitud de onda ()
incide sobre una muestra, parte de esta luz es absorbida y la otra parte es reflejada o
trasmitida (I), la cantidad de luz absorbida por la muestra ser directamente proporcional a
la concentracin de la muestra ( a mayor concentracin mayor absorcin y menor
transmisin) y la longitud del cuerpo atravesado por el haz (ancho de la cubeta); lo
mencionado anteriormente es como trabaja un espectrofotmetro y lo cual rige la ley de
Lambert-Beer, lo que se representa en la figura 1, en donde se establece lo siguiente:

A = Log Io = a.b.c

En donde:

A = Absorbancia

Io = Radiacin incidente o radiacin transmitida por el blanco.

I = Radiacin transmitida por la muestra.

a = Coeficiente de absorbancia (absortividad) las unidades dependen de las

unidades utilizadas para la determinacin de la concentracin.

b = Longitud de la celda usualmente en centmetros.

c = Concentracin de la muestra en las unidades apropiadas.

Encontrando dos trminos:

Transmitancia
Es la fraccin de la radiacin incidente transmitida por la solucin y est determinada por
la siguiente expresin:

I = transmitancia

Io

La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:

%T = I x 100

Io

Absorbancia

Es la cantidad de intensidad de luz que absorbe la muestra y est determinada por la

siguiente expresin:

- Log I = absorbancia de la muestra

Io

Figura 1: Ley de Lambert-Beer

Io I

Fuente: Quesada (2007)

 2.2. Aplicaciones de espectrofotometra

Segn Juanito (2003), encontramos los siguientes usos que se le da a la

espectrofotometra:

Para realizar anlisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un

laboratorio de investigacin.
Para la estandarizacin de colores de diversos materiales, como plsticos y
pinturas.
Para la deteccin de niveles de contaminacin en aire y agua.
Para la determinacin de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos.

Ventajas de la espectrofotometra frente a otros mtodos

De la Torre (2002) menciona que la espectrofotometra es ms rpida, precisa, verstil,

fcil de usar y con una eficiencia en costo en comparacin con otros mtodos.

2.3. Curva de Calibracin

Denominamos espectro de una sustancia a la representacin de absorbancia (A) en

funcin de longitud de onda (), este grfico presenta ondulaciones con mximos y
mnimos. Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de
onda correspondiente a un mximo, pues el error de medicin es mnimo y la sensibilidad
mxima. Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibracin; absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la
longitud de onda elegida (Brunatti y Martn, 2006).

2.4. Mtodo del DNS

Tena y Jorrn (2009) definen que esta prueba se basa en la reduccin del DNS (de color
amarillo) por la glucosa u otro azcar reductor al cido 3-amino-5-nitrosaliclico (de color
rojo ladrillo), cuya presencia puede detectarse por lectura de la Absorbancia en la zona de
540-570 nm.
Bello et al. (2006) mencionan que este mtodo ha sufrido varias modificaciones a travs
de los aos para adecuarse al anlisis de diferentes materiales y su principal ventaja
radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un mtodo
espectrofotomtrico; adems enfatizan en que este mtodo no es recomendable utilizarlo
para la determinacin de azcares reductores en muestras intensamente coloreadas
como mieles y caldos de fermentacin que la contengan.
 Figura 2: Mtodo del DNS

Fuente: Tena y Jorrn (2009)

III. MATERIALES Y MTODOS
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Cuadro 2: Resultados de la muestra estndar

ALCUOTAS Glucosa %(p/v) Abs_1 Abs_2 Abs Prom Desv. Std CV

7 ml 0.056 0.717 0.711 0.714 0.004 0.594

9 ml 0.072 0.903 0.900 0.902 0.002 0.235
11 ml 0.088 1.016 1.017 1.017 0.001 0.070
14.5 ml 0.116 1.165 1.198 1.182 0.023 1.975
18 ml 0.144 1.322 1.382 1.352 0.042 3.138
22 ml 0.176 1.627 1.577 1.602 0.035 2.207

Figura 3: Curva de calibracin

1.800

1.600

1.400 y = 6.9968x + 0.3676

R = 0.991
ABSORBANCIA (550 NM)

1.200

1.000

0.800

0.600

0.400

0.200

0.000
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2
[GLUCOSA] %(P/V)
 Cuadro 4: Resultados de las muestras
[Azcares
reductores]
MUESTRA Dilucin Repeticin Absorbancia %[Glucosa] Prom %[Glucosa]
como
glucosa
R1 1.7 0.1904
R2 1.5 0.1618
Pera 1.17ml/100ml 0.1797 15.360
R3 1.7 0.1904
R4 1.6 0.1761
R1 0.670 0.0432
Jugo de
0.9ml/100ml R2 0.584 0.0309 0.0529 5.878
naranja
R3 0.959 0.0845
R1 0.023 -0.049
Nctar de
0.9ml/100ml R2 0.022 -0.049 -0.049 ERROR
durazno
R3 0.023 -0.049

Conociendo la ecuacin lineal de la muestra estndar, se determin la

concentracin de las muestras trabajadas

Segn Syed (2001) y Salunkhe (1995), las Peras contienen 8.2% y 8.6% de
azcares reductores respectivamente, los cuales difieren con los resultados
obtenidos en laboratorio. Esto puede deberse a la variedad y estado de
maduracin del fruto, ya que se observ que la muestra con la que se trabaj,
faltaba madurar.

Segn beda (2012) la cantidad de azucares reductores (glucosa y fructuosa) en

el jugo de naranja es de 5.2%, esta informacin se aproxima a la reportada en la
prctica que fue un valor de 5.878 g por cada 100 g de la solucin, as mismo nos
menciona que este valor se da gracias a que el jugo de naranja durante el
tratamiento y almacenamiento se va hidrolizando la sacarosa en azcares
reductores: glucosa y fructosa. Cuando la sacarosa se hidroliza el sabor dulce
aumenta porque los monosacridos (glucosa y fructosa) libres aportan ms dulzor
que la sacarosa.

Segn LaRue y Scott (1989), como se muestra en el anexo 1, el porcentaje de

azucares reductores por cada 100gr de durazno se encuentra en relacin de 2 a
3.2 %, al comparar con el resultado obtenido en el laboratorio que fue un valor
negativo significando un error en el procedimiento, pero la muestra trabajada fue
 nctar de durazno, por lo cual tambin debera obtener azucares reductores ya
que la fruta por si misma lo presenta en su composicin.

V. CONCLUSIONES

Se logr graficar la curva estndar, pudiendo a partir de all, determinar el

contenido de azcares reductores mediante el mtodo de DNS en muestras
lquidas.

VI. BIBLIOGRAFA

LARUE, J. y SCOTT, J. 1989. Peaches, plums, and nectarines. University of

California. Oakland, California.
MANUAL DE MANTENIMIENTO PARA EQUIPO DE LABORATORIO.
Espectrofotmetro. Encontrado en: www.bvsde.paho.org
MOMPN, J. 1988. Introduccin a la bioingeniera. Serie: Mundo electrnico.
Editorial Marcombo. Barcelona, Espaa.
UNIVERSIDAD GIRONA. Fonaments Quimics. Espectrofotometra. Encontrado en:
www.bioquimica.ucv.cl
SALUNKHE, D y KADAM, S. 1995. Fruit science and technology. Editorial CRC
Press.New York.
SYED, A y SHARMA S. 2001.Fruit and Vegetable juice therapy. Editorial Pustak
Mahal. New Delhi.
BEDA, G. 2012. Anlisis del perfil de azcares en la autentificacin de zumos de
frutas. Universidad Politcnica De Cartagena Escuela Tcnica Superior De
Ingeniera Agronmica. Encontrado en: repositorio.upct.es
VII. ANEXOS

Anexo 1:

Fuente: LaRue y Scott (1989)

Anexo 2:

Fuente: Salunkhe y Kadam (1995)