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RECOMBINAO DE GENES

1. SEGREGAO INDEPENDENTE
Processos meiticos que causam recombinao:

a) SEGREGAO INDEPENDENTE dos genes em pares


diferentes de cromossomos.
b) CROSSING-OVER entre genes no mesmo par de
cromossomos.

A B a b
P
X
A B a b

Gametas A B a b

F1 A B

a b

B A;B Parental
A
b A;b Recombinante

B a;B Recombinante
a
b a;b Parental

Freqncia de recombinantes (RF)= + = = 50%

RF = 50% segregao independente

Genes ligados < 0,5 > Genes no ligados


Dois tipos de Dibridos

DIBRIDOS CIS alelos mutantes dos dois genes esto no


A B mesmo homlogo parental
Heterozigoto envolvendo dois stios
mutantes dentro de um gene ou dentro
a b de um grupo gnico

CIS AB/ab

DIBRIDOS TRANS alelos mutantes dos dois genes esto em


A b homlogo diferentes
Heterozigoto com dois stios mutantes
dentro de um gene ou grupamento de genes
a B
TRANS Ab/aB

COMO SABER COM QUAL DOS ARRANJOS (CIS OU TRANS)


ESTAMOS TRABALHANDO ?

(1) Em geral os genitores so dibridos puros, o que determina


a disposio allica na sua prole.

P. Ab/Ab X aB/aB
Gametas: Ab aB

F1 Ab/aB Dibrido TRANS

P. AB/AB X ab/ab
Gametas: AB ab

F1 AB/ab Dibrido CIS

(2) Trabalhar reversamente a partir das propores da prole

Ex: usando um dibrido CIS (AB/ab)


Recombinantes Ab e aB
2. MAPAS DE LIGAO
IMPORTNCIA
LOCALIZAR ONDE UM GENE EST SITUADO NO GENOMA
POSSIBILIDADE DE FAZER ANLISE MOLECULAR DO
GENE E IDENTIFICAR A PROTENA PRODUZIDA
CONSTRUO DE LINHAGENS ESPECIAIS PARA FINS
EXPERIMENTAIS ESPECFICOS

TCNICAS DE MAPEAMENTO
ANLISE DE RECOMBINAO

Alfred Sturtevant 1911 , publicao 1913

Estudante de graduao no laboratrio de Thomas Hunt Morgan

Olho Asas
Vermilion rudimentares
Olho branco
Corpo Asas
Preto miniatura

0 1,0 30,7 33,7 57,6


Cromossomo X de Drosophila

FREQUNCIA DE RECOMBINANTES (RF)


Proporcional a distncia fsica entre os genes no cromossomo
1% = 1u.m. =1cM 106 pares de base (1000Kb)

UNIDADE DE MAPA (u.m.) GENTICO = CENTIMORGAN (cM)


Distncia entre genes para os quais um produto de meiose,
em cada 100 , recombinante.

A 5u.m. B C 3u.m. A 5u.m. C

A 3u.m. C A C B
3u.m. 2u.m.
MAPEAMENTO USANDO UM CRUZAMENTO TESTE
TRIBRIDO = CRUZAMENTO TESTE DE TRS PONTOS

DROSOPHILA
(1) v olhos vermelion
+
v olhos vermelhos

(2) cv (crossveinless) ausncia de veias cruzadas na asa


cv+ presena de veias cruzadas na asa

(3) ct (cut) bodas cortadas nas asas


ct+ bordas normais das asas

INICIALMENTE no sabemos se os genes esto ligados e eles


no podem ser escritos em nenhuma ordem em particular.

ESTOQUES PARENTAIS DISPONVEIS:


a) moscas duplamente homozigotas recessivas com gentipos:
v+/v+ . cv/cv . ct/ct
b) moscas recessivas nicas com gentipo:
v/v . cv+/cv+ . ct+/ct+

P. v+/v+ . cv/cv. ct/ct X v/v . cv+/cv+. ct+/ct+


Gametas: v+. cv. ct v. cv+. ct+

F1 Tribrido : v/v+ . cv/cv+ . ct/ct+

TRIBRIDO X TRIPLA RECESSIVA cruzamento teste

v/v+ . cv/cv+ . ct/ct+ X v/v. cv/cv. ct/ct

3 pares de alelos 2x2x2 = 8 gentipos gamticos possveis


nas fmeas
EXEMPLO:

Genes autossmicos de Drosophila

P = vermelho
Cor do olho
p = prpura

V = longa
Tamanho das asas
v = vestigial

P V

11cM

CRUZAMENTO TESTE:

Dibrido TRANS: Pv/pV X pv/pv

Gametas: PV pv
Pv
pV
pv

5,5%
11% recombinantes 89% no recombinantes
5,5%

Gametas PV Pv pV pv
pv PV/pv Pv/pv pV/pv pv/pv
44,5% 5,5% 5,5% 44,5%

DIBRIDO DE GENES LIGADOS

RF estar entre 0% e 50%


v cv+ ct+ 580
v+ cv ct 592 Parentais
v cv ct+ 45
v+ cv+ ct 40
v cv ct 89
v+ cv+ ct+ 94
v cv+ ct 3
v+ cv Ct+ 5 Duplos recombinantes
1448

AVALIAO POR LOCI dois loci de cada vez

a) Loci v e cv

RF = (45 + 40 + 89 + 94)/1448 x 100 = 26800/1448 = 18,5%

b) Loci v e ct

RF = (89 + 94 + 3 + 5)/1448 x 100 = 19100/1448 = 13,2%

c) Loci cv e ct

RF = (45 + 40 + 3 + 5)/1448 x 100 = 9300/1448 = 6,4%

Todos RF < 50% genes ligados

v ct cv
13,2 cM 6,4cM
PONTOS A OBSERVAR
(1) Ordem de genes diferentes da usada quando citamos os
gentipos parentais da prole. S foi possvel determinar a
seqncia no final dos clculos;
(2) O mapa pode ser invertido:
v ct cv cv ct v

(3) Quando somamos 13,2 cM + 6,4 cM = 19,6 cM 18,5 cM


No contamos os duplos recombinantes quando
calculamos a distncia entre v e cv
RF = (45 + 40 + 89 + 94 + 3 + 3 + 5 + 5)/1448 x 100 = 19,6%

(4) Apenas mapeamos os loci uns em relao aos outros. No


sabemos em que cromossomo especfico esto os genes.

3. INTERFERNCIA
Um CROSSING-OVER em uma regio afeta a
probabilidade de haver outro em uma regio
adjacente
v ------ ct RF = 0,132 Freqncia de recombinantes
ct ------ cv RF = 0,064 duplos igual ao produto das
0,132 x 0,064 = 0,0084 freqncias de recombinao nas
0,0084 x 1448 = 12 regies adjacentes

12 RECOMBINANTES DUPLOS ESPERADOS

4. COINCIDNCIA
Coeficiente de coincidncia (c.o.c)

No de recombinantes duplos observados


c.o.c =
No de recombinantes duplos esperados

Interferncia = 1 c.o.c 1- 8/12 1- 2/3 = 1/3

Interferncia = 33
ETAPAS DA CONSTRUO DE MAPAS DE LIGAO

1. CRUZAMENTO DE LINHAGENS PURAS

2. OBTENO DE DIBRIDOS F1

3. CRUZAMENTO TESTE OU AUTOFECUNDAO DA F1

4. CLCULO DA RF determinao da distncia entre os


genes

5. ESTUDOS CITOGENTICOS E MOLECULARES PARA


DETERMINAR EM QUE CROMOSSOMO ESTO OS
GENES

6. CONFECO DO MAPA DE LIGAO

EXEMPLO:

Larva causadora da miase Cochliomyia hominivorax

Verme parasita de feridas em mamferos


(rebanhos)

6 pares de cromossomos

11 fentipos variantes

(Figura 5.13)
2
5.TESTE DO (qui-quadrado)
No observados experimentalmente
Pesquisa comparar
No previstos baseados em alguma
hiptese

no observados suficientemente no esperados


prximos

muito prximo
no apresenta problemas
muito distante

nem muito prximo


dificulta a anlise
nem muito distante

2
ajuda a decidir se deve manter ou
rejeitar a hiptese

Esses resultados experimentais so compatveis com


a proporo 3:1 esperada, com base na hiptese de
autofecundao de um monobrido ?
HIPTESE NULA ausncia de ligao entre os genes

- no possvel testar a ligao diretamente


- no ter uma distncia exata de ligao para usar
na hiptese
POR QU ? - se os resultados observados causam rejeio
da hiptese no ligao, ento poder ser
aceito a ligao

2
um modo de quantificar os vrios desvios esperados por
acaso se a hiptese for verdadeira

HIPTESE proporo 1:1

Nem sempre esperamos uma proporo exata

Barril cheio de bolas de gude vermelhas e azuis


52 vermelhas
100 bola pequenos desvios
48 azuis

60 vermelhas
grandes desvios
40 azuis

rejeita se o desvio for < 5%

P. A/A . B/B x a/a . b/b

F1 A/a. . B/b

CRUZAMENTO TESTE: A/a. B/b x a/a . b/b

A.B 140 parental RF = (110+115)/500 x100


a.b 135 parental RF = 45%
A.b 110 recombinante RF < 50%
a.B 115 recombinante Parece genes ligados
2
= total de (O E)2 para todas as classes
E

O nmeros observados em uma classe


E nmero esperado para a mesma classe com base da
hiptese

HIPTESE NULA - alelos segregando independentemente


- cruzamento teste 1:1:1:1

Tabela de contingncia para


genes A/a e B/b
B b Total
A.B A.b
A O = 140 O = 110 250
E = 255 x 250/500 E = 245 x 250/500
= 127,5 = 122,5
a.B a.b
a O = 115 O = 135 250
E = 255 x 250/500 E = 245 x 250/500
= 127,5 = 122,5
Total 255 245

Classe O E (O-E)2/E
AB 140 127,5 1,23
ab 135 122,5 1,28
Ab 110 122,5 1,28
aB 115 127,5 1,23
2
Total = = 5,02

2
Valor do convertido em um valor de probabilidade usando
2
a tabela do
Grau de liberdade: gl no de desvios independentes, (O-E) (12,5)
No de classes, representadas nas filas, menos um , vezes
o no de classes representadas nas colunas menos um
gl = (2 1) x (2 1) = 1
Probabilidade de obter um desvio do esperado deste tamanho (ou
maior) apenas por acaso 0,025 2,5% < 5% REJEITA HIPTESE
7. CROSSING-OVER MITTICO

- Seguimentos de cromossomos homlogos so


acidentalmente pareados em clulas no-sexuais, diplides

- Raro

- Importante fonte de variao para fungos que no tm ciclo


sexual

- Cncer humano permitem que as mutaes recessivas


se expressem

- Alelos recessivos expressos, inesperadamente, no fentipo


onde grupos de clulas tendem a permanecerem juntas
causando manchas ou pontos no corpo

8. O MECANISMO DO CROSSING-OVER

Ainda no bem conhecido

DNA Heteroduplex modelo mais aceito

Explica tanto o crossing-over quanto a converso gnica


supondo a produo de um trecho curto de DNA heteroduplex
(formado de ambos os DNAs parentais) na vizinhana de um
quiasma.
LIGAO, PERMUTA E MAPEAMENTO CROMOSSMICO
EXERCCIOS

1) No tomateiro a altura da planta devida a um gene com dominncia do


alelo D, que condiciona planta alta em relao a d para planta an. A
presena de pilosidade no fruto depende do alelo recessivo p, enquanto o
alelo P condiciona frutos lisos. Foi realizado um cruzamento teste e obtido o
seguinte resultado: an lisa 5; an pilosa 118; alta e pilosa 5; alta e lisa 161.
a) Qual a freqncia esperada de cada fentipo, no cruzamento teste,
se os genes apresentassem distribuio independente ?
b) Como voc explica os resultados obtidos ?
c) Qual a freqncia de permuta ?

2) No caupi, o alelo I, dominante, responsvel pela resistncia ao vrus da


mancha anelar e est ligado ao alelo C, tambm dominante, que confere
resistncia ao vrus do mosaico. O cruzamento de uma planta resistente s
duas doenas com outra suscetvel produziu a seguinte descendncia: 145
plantas resistentes aos dois vrus; 151 plantas suscetveis aos dois vrus;
450 plantas resistentes apenas ao vrus da mancha anelar; 440 plantas
resistentes apenas ao vrus do mosaico.
a) Qual a distncia entre os genes?
b) Indique os gentipos dos pais e dos descendentes do cruzamento.
c) Qual a fase de ligao dos genes, no progenitor resistente ?

3) A cor do aqunio(fruto seco indescente) em alface controlada por um


gene com dominncia do alelo que condiciona aqunio preto (W) sobre o
branco (w). A ocorrncia de folhas com bordos ondulados condicionada
por um alelo recessivo (fr) e o alelo dominante condiciona folha lisa (Fr).
Considerando que estes dois genes esto situados no mesmo cromossomo
a 34 cM, pergunta-se:
a) Qual a proporo fenotpica esperada na gerao F2 do seguinte
cruzamento: P1(aqunios pretos e folhas onduladas) X P2 (aqunios
brancos e folhas lisas)
b) Se fosse realizado o cruzamento teste, qual seria a proporo
esperada ?

4) Em soja o alelo dominante R confere nodulao normal e seu alelo


recessivo r restringe a nodulao. O alelo F , tambm dominante,
responsvel por caule cilndrico e seu alelo f , por caule fasciado. O
cruzamento entre o cultivar Clark e o T 248 produziu os seguintes
resultados:

Ndulo normal Ndulo normal Ndulo Ndulo


Gerao Caule Caule reduzido reduzido
cilndrico fasciado Caule Caule
cilndrico fasciado
P1 40 - - -
P2 - - - 20
F1 25 - - -
F2 820 228 227 52
RC1 250 - - -
RC2 102 68 72 108

a) Como voc interpreta esses resultados?


b) Qual a freqncia de permuta ?
c) Determine a fase de ligao dos genes.
d) Determine a distncia entre esses dois genes.

5) No cromossomo 5 do milho esto localizados os seguintes genes e


respectivas freqncias de recombinao:

lu gj - 5 gl ps - 5 lu ps -10
lu vp2 9 gl bv - 13 vp2 bv 9
ps bm - 2 bv ps - 8 bm bv - 6

a) Construa o mapa gentico mostrando a posio desses 6 genes.


b) Quais as distncias entre os genes lu bm ; lu bv ; gl vp2 ;
gl bm ; vp2 ps ; vp2 bm ?