IDENTIFICACIN DE LPIDOS

UNIVERSIDAD DE SUCRE
Luis ngel Salcedo Baldovino, Elas Antonio Das Raad, Ramiro Rafael Suarez.
Luis Enrique Ruiz Meneses Ingeniero Agroindustrial - Universidad de Sucre Msc Ciencia y Tecnologa de Alimentos
- Universidad de Puerto Rico
Facultad de ingeniera Agroindustrial
Programa de Bioqumica

Resumen

Los lpidos constituyen un grupo de biomolculas estructuralmente muy

heterogneos, pero con caractersticas comunes de solubilidad (son molculas
hidrfobas). Existen numerosas clasificaciones de los lpidos y muchas de ellas
son ms o menos complicadas; quizs la ms sencilla es aquella que considera en
principio solo dos grandes grupos los lpidos complejos y simples. De esta
manera, utilizando grasas comunes como aceite vegetal, aceite animal y la leche;
se realizo distintas pruebas (solubilidad, tincin, saponificacin y Lieberman-
bucherd) para evaluar dichas grasas. El cual resulto fueron: el aceite vegetal y
animal son insoluble en agua, pero si en disolvente orgnico; la leche puede
formar jabn; la presencia de lpidos en los aceites vegetal y animal; por ltimo
que el huevo posee colesterol en el.

Introduccin

Los lpidos con esta denominacin se incluyen compuestos muy diversos desde el
punto de vista de su composicin qumica, pero que poseen caractersticas fsicas
y biolgicas comunes. As una caracterstica fundamental de este grupo de
molculas es ser insolubles en agua y solubles en disolventes apolares como el
cloroformo, ter, hexano, etc. Los lpidos suelen ser molculas de elevado peso
molecular, con un nmero relativamente alto de tomos de carbono, hidrgeno,
bajo nmero de tomos de oxgeno y algunos de ellos contienen tomos de
nitrgeno, fsforo o azufre. Los lpidos suelen ser molculas de elevado peso
molecular, con un nmero relativamente alto de tomos de carbono, hidrgeno,
bajo nmero de tomos de oxgeno y algunos de ellos contienen tomos de
nitrgeno, fsforo o azufre. Sus funciones biolgicas son muy diversas, pero se
pueden reunir en los siguientes grupos: a) Estructural: Forman parte de las
membranas celulares, dentro de este grupo tendramos los fosfolpidos y los
glicolpidos. b) Energtica: Tienen un elevado poder energtico y suponen un
incremento de peso mnimo si lo comparamos con el que tendra si esa energa se
acumulara en forma de glucgeno. La combustin de 1 g de estos compuestos
genera alrededor de 9,3 kcal. c) Reserva: Estos compuestos se almacenan donde
es necesario disponer de grandes cantidades de energa a largo plazo, adems se
encuentran rodeando a diversos rganos sirvindoles de proteccin y aislante
frente a la prdida de calor en ambientes fros. d) Reguladora: Las hormonas
esteroideas, las prostaglandinas y las vitaminas liposolubles son lpidos, que
actan regulando distintas actividades fisiolgicas1. (Teijon, J.M. Garrido, A. Olmo,
R. Teijon, C. Blanco, M. 2009)

Durante la prctica se empleo diversos mtodos para estudiar caractersticas que

poseen los lpidos las cuales fueron: prueba de solubilidad, saponificacin, ensayo
de tincin y finalmente la prueba de Lieberman-Buchard. Esto se realizo con el fin
de identificar la presencia de lpidos de origen vegetal o animal en una muestra
que se estudie en el laboratorio.

Metodologa

Para realizar esta prctica se utilizo los siguientes materiales: 2 pipetas graduadas
de 2 y 5 ml, 1 beaker de 50 o 100 ml, aceite vegetal, leche, 6 tubos de ensayo; 1
pinza para los tubos de ensayo, grasa animal usada; un mechero, solucin de
sudan III, tinta roja y un huevo.

En la prueba de solubilidad se empleo cuatro tubos de ensayo enumerados del

1 al 4 en los cuales se les preparo una mezcla de: 2 ml de aceite vegetal con 2 ml
de agua destilada, 1 ml de aceite vegetal con 1 ml de cloroformo, 1 ml de aceite
animal usada con 1 ml de agua destilada y 1 ml de grasa animal usada con 1 ml
de cloroformo, respectivamente. Finalmente se agito fuertemente y se dejo
reposar.

En la prueba de tincin se tomo 4 tubos de ensayos y se les adicion: en el Tubo

1: 2 ml de aceite vegetal seguidamente con 0.25 ml de solucin alcohlica de
sudan III, en Tubo 2: 1 ml de grasa animal usada ms 0.25 ml de solucin
alcohlica de sudan III; en el Tubo 3: 1 ml de leche con 0.25 ml de solucin
alcohlica de sudan III y el Tubo 4: 1 ml de aceite vegetal se le agreg 0.25 ml de
tinta roja

Para la prueba de saponificacin se tomaron en cuatro tubos de ensayo y se

desarroll el siguiente procedimiento: en un tubo 1: se adiciono 2 ml de aceite
vegetal y luego 2 ml de una solucin de NaOH al 20% p/v. en el segundo tubo se
aadi 2 ml de grasa animal usada seguidamente de 2 ml de una solucin NaOH
20% p/v y para finalizar el tubo 3 se tom 2 ml de leche con 2 ml de una solucin
de NaOH 20% p/v. a continuacin se agit fuertemente y se ubico los tubos en un
bao de mara por lo menos 20 minutos.

Para el ensayo de Lieberman burchard se empleo un beaker y se colocaron 10

ml de cloroformo y se le agreg 1 ml de yema de huevo. A un tubo de ensayo seco
 se le adicion 1 ml de la solucin anterior; posteriormente, se adicion 1ml de
anhdrido actico y enseguida se agreg 0.2 ml (4 gotas) de H2SO4 con
precaucin.

Un color verde azuloso indica una prueba positiva para colesterol; mientras, la
formacin rpida de un color rojo seala la presencia de ergosterol.

Resultados y discusin

1.1. Solubilidad

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

Solubilidad con
Dos fases Una fase Dos fase Una fase
agua
Tabla 1.1

Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se

dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que
es inestable, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotas de grasa
en una capa, que por su menor densidad, se sita por encima del agua. Es por
esto que en el tubo 1 y 2 de la tabla 1.1 no se disolvi en el agua y se evidencia en
la imagen 1.1 (los dos tubos del lado derecho). Por el contrario, en el tubo 2 y 3 de
la misma tabla si se disolvieron las grasas como se muestra en el primer y
segundo tubo de ensayo del lado izquierdo de la misma imagen 1.1; porque las
grasas son solubles en disolventes orgnicos como el cloroformo, ter, acetona,
benceno, etc. Y su solubilidad depender del tamao del mismo as como su
ramificacin (a mayor numero de carbonos mas solubles ser el lpido no as con
la ramificacin) y la presencia de grupos polares2. (Guarnizo, A. Martinez, P.
2009).

1.2. Prueba de Tincin

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

2 ml de aceite vegetal 1 ml de grasa
y se aadi 0.25 ml animal usada ms
de solucin 0.25 ml de solucin 1 ml de leche y aada 1 ml de aceite
alcohlica de sudan alcohlica de sudan 0.25 ml de solucin vegetal agregue
III III alcohlica de sudan III 0.25 ml de tinta roja
Tabla 1.2.

Como lo indica la tabla 1.2 el tubo 1 y 2 mostro una coloracin rojo la cual indica
que el colorante se disolvi en el aceite vegetal y la grasa animal de esta forma
se puede decir que en la solucin contiene triglicridos aunque tambin tie otros
lpidos.

En el tubo 3 se pudo observar que la leche no se tio de rojo en su gran mayora pero
se pudo apreciar una coloracin rosada en la parte superior del tubo, pero haciendo
referencia la cantidad de grasa presente en la leche de vaca esta solo se en cuenta en
un 3 al 4 por ciento del contenido slido de all se piensa que pudo dar positivos
para ciertas grasas presente en la leche.

El tubo 4 se pudo observar que la tinta china no se mezcl con el aceite vegetal
debido a que la tinta no es soluble en grasas por lo que se aprecia que el tinte
flota sobre el aceite esto es debido a que el tinte rojo tiene menor densidad es que
la del aceite.

1.3. Prueba de saponificacin

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

- Tubo 1: 2 de - Tubo 2: 2 ml de - Tubo 3: 2 ml de

aceite vegetal y grasa animal usada leche y aada 2 ml
aada 2 ml de una ms 2 ml de una de una solucin de
solucin de NaOH solucin NaOH 20% NaOH 20% p/v.
20% p/v p/v.
 Muestra inicial Muestra en bao de mara

Imagen 1.3.1 Imagen 1.3.2

Tabla 1.3.

Una de las clasificaciones de los lpidos es por la prueba de saponificacin en el

cual las grasas se someten a hidrlisis alcalina y los convierte en jabones. En el
tubo de ensayo 3 se presento la reaccin por lo cual se considera que es un lpido
saponificable y los que no reaccionaron entonces son lpidos insaponificables.
Como se muestra en la tabla 1.3.

La saponificacin consto de dos etapas, la descomposicin del aceite vegetal con

la grasa animal en la que el triglicridos reaccionaron con el hidrxido de sodio
para producir glicerina y las sales del cido graso que forman el jabn en la tabla
podemos observar que se form una mezcla heterogenia donde las sales fueron a
la parte superior y la glicerina fue al fondo, tambin se observ que la leche formo
una mezcla homognea de color oscuro de la cual no se pudo identificar lpidos
saponificables.

1.4. Ensayo de Lieberman-Bucherd

La determinacin cualitativa de colesterol, y de los esteroles en general, consiste

en un mtodo rpido, basado en la reaccin qumica de lieberman-buchard, en el
cual el colesterol es oxidado en un medio fuertemente acido, dando origen a un
producto coloreado como se muestra en la imagen 1.4. En donde la muestra se
torn a un verde oscuro e indica que la reaccin fue exitosa3. (Herrera, C. 2003)

Conclusin

Como los lpidos son un grupo de molculas con caracterstica similares desde el
punto de vista qumico. Una de estas particulares de ellos es su insolubilidad en el
agua como se demuestra en la imagen 1.1. De igual manera, se demuestra la
presencia de lpidos en las distintas muestras en proporciones diferentes de
acuerdo a su nivel de tincin producida como se puede ver en la tabla 1.2. Otro
distintivo de los lpidos es su capacidad para reaccionar en la reaccin de
saponificacin (tabla 1.3) para formar jabones un ejemplo es la leche y las otras
dos muestras entran en otra categoras de lpidos. Por otro lado, se puede
detectar lpidos simples o insaponificables por el mtodo de Lieberman-buchard
para esteroles como el colesterol en los productos que el ser humano consume.
Por lo que se identifica el colesterol si la muestra se torna verde oscuro como se
muestra en la figura 1.4.

Cuestionario

Reaccin de saponificacin

El proceso de fabricacin de jabn se lleva a cabo gracias a una reaccin qumica

llamada saponificacin. La saponificacin es la hidrlisis con catlisis bsica de
grasas y aceites para producir jabn. Los aceites vegetales y las grasas animales
son triglicridos (esteres de glicerina con cidos grasos), y al ser tratados con una
base fuerte como (NaOH) o (KOH) se saponifican, es decir se produce el jabn
(sal del cido graso) y la glicerina (glicerol)4. (Rojas, M)

Reaccin de Lieberman buchard

El colesterol reacciona con el acido anhdrido actico que contiene algo de acido
sulfrico, dando una coloracin purpura transitoria, que pasa de azul y finalmente
a verde, aunque muy intensa aparece lentamente. (Fieser, L. 1967)

Reaccin de sudann III

El reactivo Sudn III es utilizado fundamentalmente para detectar la presencia de
lpidos en una muestra, los cuales se colorean con dicho reactivo. Esto se debe a
que el compuesto Sudn III por su baja polaridad, es ms soluble en los lpidos
que en el solvente utilizado para su disolucin (etanol). Ello gracias a las
interacciones intermoleculares de tipo puente H y de London (cadena
hidrocarbonada) entre los lpidos y dicho reactivo.

No hay ningn enlace qumico con tal entre el cido esterico y el Sudan III, sino
una serie de interacciones de tipo lipoflico debido a que tanto el colorante como
lpido son de baja polaridad.

El cido esterico es insoluble en agua y tambin en soluciones alcohlicas como

la tinta roja. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen pequeas gotas
formando una ''emulsin'' de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece
en reposo, por reagrupacin de las gotas de grasa en una capa que por su menor
densidad se sita sobre la de agua. (Moreno, J. 2009)

No hay reaccin qumica, solo interacciones lipoflicas con el medio.

Bibliografa

[1] Teijon, J.M. Garrido, A. Olmo, R. Teijon, C. Blanco, M. Bioqumica Estructural

Conceptos y Test Segunda Edicin. Editorial: Tbar, S.L. Madrid. 2009.
[2] Guarnizo, A. Martinez, P. experimentos de qumica organica con enfoque en ciencias
de la vida. 2009. Armenia, Quindo, Colombia. Editorial: ELIZCOM S.A.S.
[3] Herrera, C. Bolaos, N. Lutz, G. Qumica de alimentos manual de laboratorio. 2003.
[4] Rojas, M. saponificacin. (Informacin tomada de [http://grasas-y-aceites-
vegetales.webnode.com.co/aplicaciones/saponificacion/] 26/09/2017)
[5] Fieser, L. experimentos de qumica organica. Editorial Revert.1967
[6] Moreno, J. Prcticas de Reconocimiento de Glcidos, Lpidos y Protenas Para
Alumnos de Secundaria y Bachillerato. (2009). Granada, Espaa.
Imagen 1.3

Imagen 1.2.2

Imagen 1.4

Imagen 1.3
Imagen 1.2.1

Imagen 1.1