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BACTERIOLOGA Y VIROLOGA
LA MICROBIOLOGA:
LA FITOPATOLOGA:
Las enfermedades de las plantas se pueden clasificar en varias formas, tomndose en cuenta
diversos aspectos. Uno de los mtodos ms comunes de clasificacin es el tipo de agente y
de esta manera se clasifican en: enfermedades infecciosas (todas aquellas provocadas por
parsitos como: hongos, bacterias, virus, nemtodos, fitoplasmas, espiroplasmas, viroides,
rikettsias, plantas parsitas, etc.) y enfermedades no infecciosas (provocadas por efectos del
medio ambiente).
FITOBACTERIOLOGA:
Ciencia que se encarga del estudio de las bacterias que inducen enfermedades a los
vegetales.
La palabra BACTERIA proviene de las letras griegas: BACTERIE, que significa varita o
bastn.
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1.2.- HISTORIA DE LA FITOBACTERIOLOGA.
El hombre debe de tener un mejor modo de vida, tiene que buscar la verdad, no
tener dudas, tener determinacin an en condiciones adversas, preguntarse que he hecho
para mi persona y que he hecho para mi pueblo. Vivan felices por todo lo que han hecho
para la humanidad.
TOMS BURRIL (1880).- Investigador que relacion por primera vez a las
bacterias como fitopatgenas, siendo la bacteria Micrococus amylovorus, hoy conocida
como Erwinia amylovora, causante del tizn de fuego del peral y del manzano.
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WAKER (1883).- Trabajando en el laboratorio de DE Bary, aisl y comprob la
patogenicidad de Xanthomonas hyacinty la cual ocasiona la enfermedad del
amarillamiento del jacinto.
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2.- Importancia de las bacterias en la geomicrobiologa.
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Las funciones principales de los fitopatlogos son el diagnstico de las
enfermedades de las plantas, la determinacin de su causa y el desarrollo de mtodos de
control. Siendo una herramienta ms la sintomatologa inducida por las bacterias.
Son muy pocas las especies de plantas cultivadas que no estn propensas al ataque
de los agentes fitopatgenos; sin embargo, existen bacterias o especies que son compatibles
a una sola especie de planta, aunque tambin existen especies de plantas que son
susceptibles a ms de una especie de bacterias a la vez.
Los sntomas pueden indicar la existencia de una enfermedad, pero ellos no son en
s la enfermedad, estos son utilizados como guas para diagnosticar la naturaleza o causa de
una enfermedad en particular. Entre las enfermedades bacterianas encontramos variados
tipos de sntomas, los cuales son divididos en cuatro categoras:
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3.- Desarrollo anormal del crecimiento: Ocasionado por alteraciones en las
sustancias reguladoras del crecimiento ya sea aumentando o disminuyendo su
concentracin.
Los mtodos serolgicos, a juzgar por la cantidad de trabajos que se han realizado y
los resultados que se han obtenido, son de un valor incalculable para la identificacin y
diagnosis de rutina, as como un mtodo cuantitativo para el estudio de algunos
microorganismos. Por lo anterior, es indispensable conocer las ventajas y limitaciones de la
serologa. Con las tcnicas serolgicas se detectan microorganismos en bajas
concentraciones en tejidos vegetales, pero para esto se requiere contar con el antisuero
especfico y la obtencin de este es minuciosa y lleva tiempo.
Con el fin de producir antisueros especficos para una determinada bacteria, dicha
especie de bacteria completamente purificada e inactivada se debe de inyectar a un animal,
de preferencia a un conejo. Para obtener antisueros bien concentrados (ttulos altos), por lo
general se emplean procedimientos que hayan sido exitosos en otras ocasiones. Despus de
un tiempo prudencial, en el cual se considera (se detecta) que se ha formado la mayor
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cantidad posible de anticuerpos, se extrae la sangre del animal inmunizado y se separa la
fraccin suero. Este antisuero es valorado seguidamente para determinar su ttulo.
Para tener la certeza de que las bacterias murieron al ser expuestas a esta
temperatura, se toma una muestra de la suspensin tratada y se siembra en una placa de
medio artificial.
Para el sangrado del conejo, manualmente se le quita el pelo de una oreja hasta
descubrir una vena; a esta vena, con una navaja de afeitar nueva y flameada, en la regin
ms alejada de la cabeza se le practica una pequea herida longitudinal. La sangre se recoge
con cuidado en un vaso de precipitado, tratando de que las gotas escurran por la pared
interna del recipiente con el fin de que no golpeen y se rompan los glbulos rojos. Esta
sangre obtenida se deja en reposo durante 1 hr, 20 min y despus, con una esptula se
separa el cogulo de las paredes del vaso; despus de una noche de refrigeracin, por
decantacin se obtiene el suero, que se debe de observar de color amarillo, ya que si se
observa rojo, significa que se rompieron glbulos rojos y entonces es necesario centrifugar
para clarificar el suero.
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Programa para la inmunizacin del conejo en contra de una bacteria especfica.
Se preparan 10 tubos de ensayo con solucin salina al 0.85% (dos con 0.9
mL y el resto con 0.5 mL) y se esteriliza con presin y calor hmedo.
Nota: A otro tubo de ensayo con 0.9 mL de solucin salina biolgica, se le adiciona
0.1 mL del suero normal; se desechan 0.5 mL y despus se le adicionan 0.5 mL del
antgeno. Este es el tubo que se utilizar como testigo.
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Algunas pruebas serolgicas son la aglutinacin, doble difusin en agar,
inmunofluorescencia, ltex y ELISA.
2.1.- MORFOLOGA
2.1.2.- Tamao.- el tamao de las clulas de las bacterias fitopatgenas vara de 0.6
a 4.5 micras de longitud por 0.5 a 1.0 micras de dimetro.
2.2.- ESTRUCTURA
Es una estructura que esta formada por capas de protenas, lpidos y enzimas. Las
bacterias Gram + tienen dos capas y las Gram tienen cuatro.
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2.2.4.- Citoplasma. Est definido como un HIDROGEL COLOIDAL, es un fluido
que contiene sustancias disueltas y partculas en suspensin como los ribosomas. El 80%
del citoplasma corresponde a agua y el resto lo componen cidos nucleicos (AN), protenas,
carbohidratos, lpidos, iones orgnicos, compuestos de bajo peso molecular y partculas
diversas. En este fluido espeso ocurren muchas reacciones qumicas tales como la sntesis
del material celular a partir de los nutrientes (anabolismo). El pH del citoplasma es de 7.0 y
7.5 (neutro).
Cada grupo o especie de bacteria sintetiza una sola categora de sustancias y sta
puede ser: almidn, glucgeno, sustancias carbonatadas y Nitrgeno.
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ESTRUCTURA CELULAR DE UNA BACTERIA FITOPATGENA
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que est involucrada con la patogenicidad, ya que algunos mutantes avirulentos carecen de
este muclago; adems le da adherencia a la clula y sirve de reserva de carbohidratos
Las bacterias siempre tienen un nmero de necesidades comunes, como son las
necesidades elementales (N, H2O, fuentes de energa) y otros que son capaces de utilizar
ciertos elementos, requieren de sustancias orgnicas que son capaces de sintetizar, por
ejemplo, los aminocidos, vitaminas, bases puricas y pirimdicas y stos son los que
conocemos como FACTORES DE CRECIMIENTO.
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Temperatura.- Ya que el proceso de desarrollo de las bacterias depende de
reacciones qumicas y la velocidad con que se efectan estas reacciones es influida por la
temperatura, el patrn de desarrollo bacteriano puede ser influido profundamente por esta
condicin. La temperatura puede, en parte, determinar la velocidad de crecimiento y el
grado total de desarrollo de los microorganismos. Las variaciones en la temperatura
tambin pueden influir en los procesos metablicos y en la morfologa celular.
Cada especie de bacterias crece a temperaturas que estn dentro de ciertos lmites.
De acuerdo a las necesidades de temperatura para la nutricin y crecimiento las bacterias se
pueden dividir en los siguientes grupos:
Gases.- Los gases principales que afectan el desarrollo bacteriano, son el oxgeno y
el dixido de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxgeno
libre, y sobre esta base se dividen en cuatro grupos:
pH.- En la mayor parte de las bacterias el pH ptimo de crecimiento est entre 6.5 y
7.5, aunque algunas bacterias pueden desarrollarse a pH extremo, en la mayor parte de las
especies los lmites mnimos y mximos corresponden a cualquier punto entre pH 4 y 9, en
cuanto a necesidades de pH hay bacterias:
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IV.- PROCESOS DE COMPATIBILIDAD E INFECCIN DE LAS
FITOBACTERIAS.
Los agentes cambiantes de enfermedad son muy cambiantes porque sus poblaciones
genticamente no son estables ni uniformes, de ah que cultivos de plantas resistentes a una
raza de un patgeno, con el tiempo llegan a perder su resistencia.
Las plantas influyen sobre los parsitos en forma fsica y qumica. Cuando en las
hojas existe mucha cera y esta es de calidad, el agua de roco o de lluvia resbala impidiendo
que se presente una pelcula de humedad que favorezca el establecimiento preintroductorio
del parsito; lo anterior es un ejemplo de influencia fsica. La influencia qumica se da de
muchas formas, como ejemplo se puede mencionar la produccin y exudado de sustancias
(aminocidos, azcares, vitaminas, toxinas, etc.) ya sea por las races o partes areas de las
plantas que favorecen o desfavorecen al microorganismo; en ocasiones estos exudados son
txicos para algunos microorganismos y para otros no, otras veces inhiben la germinacin
de estructuras de resistencia del parsito o actan como atrayentes o repelentes de los
mismos.
Las clulas bacterianas individuales son muy frgiles y estn desprotegidas, por lo
tanto deben de encontrar con rapidez un ambiente propicio para su proliferacin y as evitar
la muerte. Los requerimientos inmediatos son alta humedad relativa y un sustrato
nutricional adecuado; aunque una nutricin mnima y alta humedad relativa con frecuencia
son suficientes para establecer la infeccin, la temperatura ptima y la presencia de ciertos
factores de crecimiento aumentan la velocidad de proliferacin. Los procesos de infeccin
incluyen:
Migracin de la bacteria desde el lugar de multiplicacin o sobrevivencia
hasta el hospedante.
Reconocimiento y contacto de la bacteria con su hospedante.
Penetracin y establecimiento de la bacteria en los tejidos hospedantes.
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4.1.- INOCULACIN.
4.2.- PENETRACIN.
Se requiere de una pelcula de agua sobre los rganos del vegetal para que las
bacterias puedan nadar y llegar a los sitios especficos de penetracin. Esta humedad se
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proporciona por lluvia, roco, riego, liberacin natural de agua por las aberturas naturales de
las plantas y por el escape de agua por heridas producidas por agentes extraos. Adems de
la humedad, tambin el sustrato nutricional adecuado y una temperatura apropiada
favorecen la penetracin de las bacterias. Las bacterias tienen que penetrar rpidamente en
sus hospedantes por que al no tener capacidad de producir estructuras de resistencia, las
clulas bacterianas se desecan con facilidad y en poco tiempo, en la superficie de los
rganos de las plantas.
Las plantas presentan una variedad de aberturas naturales para realizar algunas de
sus funciones esenciales como es la transpiracin, intercambio de gases, eliminacin de
exceso de agua o de sustancias nocivas, secrecin de nctar, entre otras. Estas aberturas son
los estomas, que se localizan en las hojas, tallos, races y tubrculos en sustitucin de los
estomas: axilas de hojas, pecolos, etc.; y los hidtodos, que estn presentes en los bordes o
pices de las hojas o lbulos, o bien en las puntas de prolongaciones piliformes.
Penetracin por estomas.- Los estomas son diminutas aberturas que se localizan
en la epidermis de los rganos verdes de las plantas, regulan la transpiracin y el
intercambio de gases con el ambiente. Al ser las hojas los rganos ms expuestos de las
plantas, los estomas son orificios que las bacterias utilizan con frecuencia para penetrar a
los tejidos vegetales, principalmente cuando se presentan lluvias o roco que elevan la
humedad relativa del ambiente.
La bacteria Pseudomonas syringae pv. tabaci (P. tabaci) que causa la enfermedad
conocida como quemazn o fuego silvestre del tabaco y soya, penetra por estomas
aunque tambin puede penetrar por hidtodos y por heridas producidas por insectos y otros
agentes.
Otras bacterias que pueden penetrar por estomas son: Xanthomonas campestris pv.
citri (X. citri), cncer bacteriano de los ctricos; P. syringae pv. phaseolicola (P.
phaseolicola), tizn del halo del Frijol; X. campestris pv. phaseoli (X. phaseoli), tizn
comn del Frijol; X. campestris pv. vesicatoria (X. vesicatoria), mancha bacteriana del
tomate y chile, y muchas otras especies ms.
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se producen grietas o fisuras que son invadidas por algunas bacterias, antes de presentarse
la suberizacin, para as introducirse en los tejidos de las plantas.
Aun cuando las siguientes bacterias y otras muchas pueden penetrar de otra forma,
aprovechan las lenticelas para introducirse a tallo y tubrculos: P. syringae pv. tabaci (P.
tabaci); Erwinia carotovora pv. carotovora (E. carotovora), pudriciones blandas de
rganos carnosos; Erwinia carotovora pv. atroseptica (E. atroseptica), pudriciones
blandas y pierna negra o pi negro de la papa; E. amylovora, tizn del fuego del peral y
manzano.
Penetracin por nectarios.- Los nectarios son rganos con abertura que secretan
nctar y pueden ser florales o extraflorales. Algunas bacterias como Erwinia amylovora, P.
syringae pv. syringae (P. syringae), cncer bacteriano y gomosis de rboles de fruto de
hueso respectivamente, utilizan los nectarios para introducirse a las plantas y causar
infeccin.
Penetracin por hidtodos.- Los hidtodos son rganos secretores foliares que
segregan soluciones acuosas muy diluidas. Se localizan en el pice de algunas vellosidades
o de las nervaduras de las hojas. Por los hidtodos se realiza la gutacin. Por la maana
cuando sale el sol, el agua expulsada por gutacin puede ser absorbida por los hidtodos y
si en estas gotas de agua se han depositado algunas clulas bacterianas, tambin son
introducidas a las plantas. Xanthomonas campestris pv. oryzae (X. oryzae), tizn bacteriano
del arroz; y Xanthomonas campestris pv. campestris (X. campestris), pudricin negra de
las crucferas, se introduce a las plantas por los hidtodos.
Penetracin por la base de los pelos glandulares.- Los tricomas son proyecciones
epidermales de diferente forma y funcin, uni o multicelulares, muy frgiles y que pueden
secretar algunas sustancias o humedad, factores que favorecen la sobrevivencia de algunas
bacterias durante condiciones secas. Clavibacter michiganense pv. michiganense, cancer
bacteriano del tomate; y P. syringae pv. tomato (P. tomato), peca bacteriana del tomate,
son favorecidas por las secreciones de tricomas y probablemente penetran por la base de los
mismos.
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Las Erwinias del grupo carotovora, pudriciones blandas, penetran por heridas, lo
mismo que Clavibacter sepedonicum, pudricin anular de la papa; X. campestris pv.
campestris (X. campestris), pudricin negra de las crucferas; P. syringae pv. syringae (P.
syringae), cncer bacteriano y gomosis de rboles de fruto de hueso; y Clavibacter
michiganense pv. michiganense, cancer bacteriano del tomate.
Rhizobium spp., la bacteria vive en simbiosis con las leguminosas, penetra a la raz
a travs de las heridas que se practican cuando se estn desarrollando races secundarias.
4.3.1.- INVASIN.
Muchas infecciones causadas por bacterias son locales, o sea que comprenden a una
sola clula, a unas cuantas clulas o a una pequea zona de la planta y se mantienen
localizadas durante toda la estacin de crecimiento, aunque a veces se pueden extender
ligeramente y a un ritmo tambin lento. Otras infecciones se propagan ms o menos con
cierta rapidez y se pueden extender a todo un rgano de la planta (flor, hoja, fruto, etc.) o
incluso llegar a infectar a la planta completa.
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En primeros estados de la enfermedad es raro que las bacterias lleguen al interior
de las clulas vivas, ya que primero tienen que atravesar las paredes celulares que
funcionan como una barrera fsica; por esta razn las bacterias fitopatgenas primero son
intercelulares y despus intracelulares. Aparentemente existen tipos especficos donde se
une la bacteria con la planta; las bacterias aparentemente, reconocen estos sitios especficos
para la unin, que se localizan en la pared celular (si los sitios especficos de
reconocimiento llegaran a ser ocupados por cepas avirulentas de bacterias, despus las
cepas virulentas ya no pueden establecerse y por lo tanto la infeccin tampoco se realiza).
El nmero de clulas bacterianas que se requieren para que una infeccin se inicie es
variable y depende de la especie de bacteria que se trate, por ejemplo, si se introduce una
sola clula de Agrobacterium tumefaciens en una planta, se forma un pequeo tumorcito,
pero si se introducen 100 clulas el tumor es mucho mayor; para que se desarrolle una
infeccin sistemtica y se cause un dao severo en manzano por E. amylovora, se requieren
de 150 a 200 clulas bacterianas, pero si el nmero es menor slo se producen daos
localizados.
Para penetrar las paredes celulares y causar infeccin las bacterias producen
enzimas, toxinas, polisacridos y sustancias hormonales. Estas sustancias son las
responsables directas de las alteraciones de los procesos fisiolgicos del hospedante y que
resultan en la manifestacin de la enfermedad. Influyen en la germinacin de las semillas,
interfieren en el desarrollo de la raz y en la absorcin de agua y nutrientes, en el transporte
de agua y translocacin de alimentos, reducen la fotosntesis, alteran los procesos de
reproduccin de las plantas, destruyen el material de reserva y alteran la integridad
estructural de los tejidos.
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En los marchitamientos vasculares inducidos por bacterias se presentan varios
elementos responsables del taponamiento y degradacin de los tejidos de conduccin. En
estos casos las enzimas pectolticas ocasionan disociacin de los tejidos de conduccin o de
las clulas que rodean estos tejidos y por lo tanto estn ntimamente involucradas con este
tipo de enfermedades. Algunas especies de bacterias que producen enzimas pectolticas son:
Erwinia carotovora, E. amylovora, E. stewartii, Pseudomonas syringae, P. solanacearum,
Clavibacter michiganense y Xanthomonas campestris.
4.3.2.2.- Toxinas.- son productos muy txicos secretados por organismos. Las
fitotoxinas bacterianas son compuestos de bajo peso molecular (aunque no siempre) que
afectan adversamente el metabolismo y funcin de la planta, ya sea hidrolizando protenas,
bloqueando sistemas enzimticos o siendo antagnico a algunos metabolitos esenciales, lo
cual repercute en la muerte de clulas (pueden actuar directamente sobre el protoplasma o
alterar el metabolismo del citoplasma o del ncleo); no son enzimas, ni hormonas o cido
nucleico, ni afectan la integridad estructural de la pared celular; son mviles en la planta y
activas en concentraciones muy bajas.
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Toxinas de hospedantes no especficos.- Son compuestos txicos para el
hospedante de la bacteria y para otras plantas no hospedantes de la bacteria, aunque en
algunos hospedantes la bacteria no produce la toxina. Son determinantes secundarios de
patogenicidad, por lo que no provocan la totalidad de los sntomas que el patgeno llega a
inducir en el hospedante, o sea que la toxina no influye en el establecimiento del patgeno,
aunque induce algunos sntomas del sndrome total de la enfermedad. Se dividen en
exotoxinas, son toxinas extracelulares o sea que son liberadas fuera de la pared celular de
la bacteria, y en endotoxinas, son toxinas que se liberan de la clula bacteriana hasta que
esta muere o es daada. Las toxinas de hospedantes no especficos pueden producir
manchas clorticas, halos clorticos y marchitez. Algunos ejemplos de este tipo de toxinas
son: Tabtoxina producida por P. tabaci (halo clortico); Faseolotoxina producida por P.
phaseolicola (halo clortico); Tagetitoxina producida por P. tagetis (evita la formacin de
cloroplastos); Siringomicina SR producida por P. syringae (cancro en rganos frutales y
provoca tiro de municin an sin estar presente la bacteria).
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A).- Auxinas.- (cido indol actico AIA-).- Actan en la elongacin celular,
diferenciacin celular, afectan la impermeabilidad de la membrana celular, aumentan la
respiracin de los tejidos y promueven la sntesis de ARN mensajero y as la sntesis de
enzimas y protenas estructurales. Los microorganismos patgenos pueden aumentar los
niveles de AIA, aunque algunos los disminuyen. Pseudomonas solanacearum induce el
aumento del 100% de AIA en plantas atacadas por lo que se afecta la permeabilidad de las
membranas celulares y por consiguiente se aumenta la transpiracin y se presenta
marchitamiento. Agrobacterium tumefaciens (agalla de la corona de muchas plantas)
provoca un estmulo conocido como principio de induccin al tumor (PIT) que transforma
a las clulas vegetales normales en tumorales; las clulas tumorales tienen alta cantidad de
AIA y citocininas producidas por ellas mismas y por las clulas bacterianas.
Entre los efectos del etileno en las plantas se incluye la abscisin de las hojas, la
epinastia y la maduracin de los frutos. Especies de los gneros de Pseudomonas,
Xanthomonas y Erwinia producen etileno. Se ha comprobado que el contenido de etileno
aumenta en plantas de pltano cuando son atacadas por P. solanacearum y esto se
manifiesta en el amarillamiento prematuro de frutos.
4.4.- REPRODUCCIN.
4.5.- DISEMINACIN.
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insectos pueden llevar bacterias de unas plantas a otras incluso introducirlas en el vegetal;
en algunos casos, las bacterias dependen de los insectos para sobrevivir y diseminarse. Se
conocen 77 insectos que pueden transmitir bacterias. Algunos solo las transportan
externamente, otros lo hacen internamente, mientras que en otros puede presentarse
multiplicacin del patgeno en su interior, o incluso manifestarse cierta alteracin del
insecto, como es el caso de la mosca Dacus oleae, que transmite a P. savastanoi (agalla del
olivo) la cual le induce tumores en el tracto digestivo y vagina. E. tracheiphila y E.
stewartii son diseminadas por el escarabajo rayado de las cucurbitceas (Acalyma vittata) y
diabrticas (Diabrotica undecimpunctata), la primer bacteria y por la pulga saltona del
maz (Chaetocnema pulicularia), la segunda. Tambien E. amylovora se dispersa por las
abejas que visitan las flores de las plantas enfermas. E. chrysanthemi cuando hay daos
mecnicos en frutos de pia, ocasiona pudricin blanda; las hormigas son agentes
importantes en la dispersin de esta bacteria. El hombre disemina todo tipo de patgenos a
distancias variables y de muchas formas; disemina bacterias cuando manipula plantas
enfermas y sanas, las transporta en tierra que arrastra en sus pies, herramientas e
implementos agrcolas, las dispersa en semillas, plntulas de viveros, yemas, estacas,
tubrculos, etc. El viento arrastra polvo y en ocasiones restos de plantas los cuales pueden
transportar clulas de bacterias fitopatgenas para as dispersarlas en una regin. Otra
forma de dispersin de las bacterias puede ser el polen.
4.6.- SUPERVIVENCIA.
Las bacterias fitopatgenas, con la excepcin de las especies de bacterias que atacan
plantas perennes, permanecen parte de su vida en la planta como parsitas y parte en el
suelo o restos vegetales como saprfitas. El suelo les proporciona proteccin y nutrientes
cuando el hospedante est ausente; sin embargo muchas especies reducen sus poblaciones
cuando se encuentran en estas condiciones.
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rapidez por que han perdido capacidad de sobrevivencia en el suelo. X. phaseoli var.
fuscans en el suelo su poblacin desaparece en cuatro semanas. Otras, como A.
tumefaciens, que tambin incrementa su poblacin en la planta hospedante, al llegar al
suelo, dicha poblacin tambin disminuye aunque en forma gradual y se ha determinado
que llega a permanecer en el suelo hasta 40 aos en ausencia de las plantas que sean
hospedantes. Las Erwinias y Pseudomonas causantes de pudriciones blandas, pueden
incrementar su poblacin en el suelo.
P. syringae pv. tomato (peca bacteriana del tomate) puede sobrevivir en ambientes
calientes y secos como residente de las hojas hasta que se presenta humedad y temperatura
que le favorezcan, entonces la poblacin bacteriana se multiplica y la infeccin se
desarrolla.
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Parte 7. Bacilos y cocos aerobios, Gram negativo.
Familia Pseudomonadaceae
Gnero Pseudomonas y Xanthomonas
Familia Rhizobiaceae
Gnero Rhizobium y Agrobacterium
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LISTA APROBADA DE BACTERIAS FITOPATGENAS
a.- Incluye muchos patovares previamente reconocidos como especies. Todas las otras
especies no estn incluidas debido a descripciones inadecuadas.
b.- Streptomyces scabies esta listado como especies incertae sedis (especies no
reconocidas)
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GNEROS DE BACTERIAS RELACIONADAS CON LAS PLANTAS
Las especies del gnero Erwinia en plantas inducen amplio rango de sntomas,
como son: marchitamientos, tizones, cancros, muerte regresiva, manchas foliares, manchas
de frutos, pudriciones blandas y decoloracin de tejidos de conduccin.
Los miembros del gnero Erwinia son varillas rectas de 0.5 a 1.0 x 1.0 a 3.0 micras,
se les encuentra como clulas simples, en pares u ocasionalmente en cadenas cortas; son
Gram negativo (-), mtiles (con flagelacin pertrica, con excepcin de E. stewartii que es
trica) y anaerobias facultativas, aunque el crecimiento anaerbico en algunas especies es
dbil. La temperatura para el crecimiento ptimo es de 27 a 30 C, y el mximo est entre
32 a arriba de 40 C. Son fermentativas, oxidasa negativo y catalasa positivo; producen
cido de fructuosa, galactosa, glucosa y sucrosa. Sus colonias son cremosas, amarillas o
crema blanquecino.
E. amylovora E. cancerogena
E. rhapontici E. pulsifaciens
E: mallotivora E. tracheiphila
E. dissolvens E. cypripedii
E. salisis E. quercina
E. carnegieana E. nigrifluens
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Carcter / Grupo Herbicola Amylovora Carotovora
Pigmento amarillo soluble en agua + - -
Licuefaccin de pectatos (enzimas
pcticas) - - +
cido de lactosa - - +
Cuerpos biconvexos + - -
Simplasmata (agrupaciones en
forma de salchicha)
Fluorescentes Syringae
P. fluorescens P. syringae
P. marginales P. toloasii
P. putida P. viridiflava
P. aeruginosa P. coronofaciens
P. agarici P. glycinea
P. carica papaya P. lachrymans
P. cichorii P. mori
P. morsorunorum
P. phaseolicola
P. tabaci
P. tomato
P. savastanoi
- + L= Levana
+ - O= Oxidasa
+ +- P= Pudricin en Papa
+ - A= D. de Arginina
- +* T= Hipersen. En Tabaco
*Excepto P. tabaci y P. glycinea
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5.2.2.- Pseudomonas no fluorescentes.
P. cissicola P. pseudoalcaligenes
P. gladioli P. caryophylli
P. cepacia P. rubrilineans
P. avenae (alvoprecipitans) P. woodsii
P. amygdali P. andropogonis
P. solanacearum* P. cattleyae
P. corrugata
Las dos ltimas se han encontrado recientemente en China y no se conoce gran cosa
de ellas.
Las Xanthomonas son de forma de varilla, Gram negativo, mtiles con un flagelo
polar simple (tres a cinco veces ms largo que la clula bacteriana), producen un pigmento
amarillo (excepto X. maniotis colonias blancas-) insoluble en agua, son oxidativas, nunca
fermentativas; produce un polisacrido chicloso extracelular en medios a partir de glucosa.
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Las especies de Xanthomonas son:
X. campestris. En esta se incluyen como patovares (pv.) el resto de las 200 especies
X. ampelina
X. axonopodis
X. fragariae
X. albilineans
Para diferenciar a los cinco grupos (octavo manual de Bergey), el pigmento es muy
especfico en anlisis espectroscpicos como lo son los polisacridos producidos por otras
bacterias.
Fue creado en 1896 para poder acomodar al bacilo de la difteria. Algunas especies
de este gnero causan diversas enfermedades en las plantas cultivadas y pueden ser de
mucha importancia econmica. Los sntomas que llegan a inducir son marchitamiento,
cnceres, pudricin, manchas de frutos y fasciacin. Normalmente a cada especie se le
encuentra asociada con un solo tipo de hospedante.
Este gnero de bacterias tiene muy pocas especies fitopatgenas, aunque algunas
infecciones llegan a ser de mucha importancia, principalmente en plantas por las especies
patgenas de Agrobacterium; induce proliferacin anormal de clulas (hiperplasia) que
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resultan en formacin de tumores o en produccin excesiva de races adventicias.
Usualmente son habitantes del suelo y rizsfera.
Los miembros de este grupo son aerobias obligadas, Gram negativo, tienen forma
de varilla y miden de 0.6 a 1.0 x 1.5 a 3.0 micras y son mtiles con 1 a 6 flagelos pertricos
(cuando tienen uno solo ste es ms lateral que polar). Las colonias son blancas, lisas y
mucosas. En medios que contienen carbohidratos, producen gran cantidad de polisacridos
extracelulares mucilaginosos.
A. radiobacter (saprfito)
A. tumefaciens (tumores o agallas)
A. rhizogenes (races secundarias)
A. rubi. La literatura dice que es igual a tumefaciens. Agalla en frambuesa.
S. cratirefer S. setoii
S. intermedius S. tumuli
S. ipomoeae S. viridogenes
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Son Gram positivo o Gram variable y en los ltimos aos se ha comprobado que
hay Gram negativo; en rebanadas de papa crecen hacia arriba y las colonias son arrugadas.
Son aerobias, facultativas, pertricas, pudren tejidos, producen una endospora en la clula y
producen una gran cantidad de antibiticos. Son problema en almacn.
Devora bacterias. Son ms pequeas que las otras bacterias; se introducen entre la
pared celular y la membrana celular, donde crecen para posteriormente pasar al
protoplasma.
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La familia Acholeplasmataceae tambin tiene un solo gnero, Acholeplasma. No
requiere esterol para su crecimiento y es resistente a la digitonina.
Tienen un tamao que va de 0.2 a 0.8 a 2.0 micras, aunque algunas llegan a alcanzar
hasta 4.0 micras de longitud poco antes de dividirse. Se desarrollan mejor a 32 y 35 C.
Desde 1972 se han observado algunas plantas con ciertas anormalidades y que en su
interior se localizan organismos que se asemejan a rickettsias en la forma, tamao, posesin
de una pared generalmente ondulada, ausencia de flagelos, crecimiento intracelular y en la
incapacidad de crecer en medios nutritivos artificiales. Estos organismos tienen como
vectores a las chicharritas. Algunos se localizan en los vasos xilmicos del hospedante,
mientras que otros se limitan a los elementos cribosos del floema. Los sntomas disminuyen
cuando las plantas daadas se tratan con penicilina, clorhidrato de tetraciclina u
oxitetraciclina.
34
NDICE
UNIDAD PAG
1. INTRODUCCIN............................................................................... 1
2. IMPORTANCIA DE LOS VIRUS...................................................... 1
3. FORMA Y ESTRUCTURA QUMICA VIRAL ................................. 2
4. SNTOMAS CAUSADOS POR VIRUS FITOPATGENOS ............ 3
1. PENETRACIN ................................................................................ 14
2. INFECCIN Y SNTESIS VIRAL .................................................... 14
3. TRANSLOCACIN ........................................................................... 15
35
7. SEROLOGA ........................................................................................ 18
7.1. BASES DE LA SEROLOGA ............................................................ 19
7.2. PRODUCCIN DE ANTISUEROS ................................................... 19
7.3. REACCIONES SEROLGICAS ....................................................... 20
7.4. ELISA ................................................................................................ 20
8. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN .......................................... 22
8.1. NOMENCLATURA ........................................................................... 22
8.2. CLASIFICACIN .............................................................................. 23
5. RESISTENCIA .................................................................................. 30
.
5.1. CONCEPTOS Y PRINCIPIOS GENERALES ................................... 30
5.2. TIPOS DE RESISTENCIA................................................................. 31
5.3. FUENTES
UNIDAD 1 DE RESISTENCIA .......................................................... 31
5.4. VARIACIN PATOGNICA DE LOS VIRUS ................................. 31
36
Unidad 1.
1.- INTRODUCCIN.
La virologa es una ciencia microbiolgica que estudia a los virus. Los virus son
agentes infecciosos causantes de enfermedades de diversos organismos vivos. La palabra
virus es de origen latino y significa pus o veneno. Los virus son partculas compuestas por
cido nucleico (AN) y protena, de tamao submicroscpico, son parsitos obligados que
solo se multiplican en el interior de las clulas del hospedante. Los virus no son clulas ni
estn constituidos por ellas, pero se propagan al obligar a la clula vegetal a que los
multiplique utilizando su propia energa y maquinaria biosinttica. A consecuencia de lo
anterior el metabolismo de las clulas vegetales se altera a tal grado que las plantas se
enferman. Los virus no matan a las plantas directamente mediante toxinas ni enzimas. En
cambio desvan el metabolismo y se generan substancias extraas y se alteran diversas
funciones vitales que inducen el desarrollo de sntomas, que pueden variar desde simples
cambios de color hasta necrosis severa o muerte sbita de la planta. En otros el efecto es
casi imperceptible como en el caso de los hospedantes asintomticos.
37
en la cantidad sino en la calidad de la produccin; por ejemplo frutos deformes y
manchados pierden valor comercial.
Prcticamente cualquier planta puede ser atacada por virus y es comn encontrar a
mas de dos virus afectando al mismo tiempo a la misma planta. Algunos como el virus
Mosaico del Tabaco tiene un rango de hospedantes muy amplio; puede atacar ms de 300
especies de plantas herbceas y leosas distribuidas en 50 gneros.
A diferencia de otros patgenos de las plantas, los virus no estn constituidos por
clulas. Adems de estar entre los patgenos mas pequeos, los virus tambin se
constituyen uno de los grupos mas simples. Estn formados por partculas (solo visibles al
microscopio electrnico de transmisin) que miden menos de 2000 nanmetros (nm +);
estn formados por una cadena simple o doble de ARN o ADN, cubiertas por una cpsula
de protena. Mediante el microscopio electrnico de transmisin se ha determinando que
los virus presentan las siguientes formas:
38
La cpsula protica (cpside) esta compuesta por subunidades (CAPSMEROS). A la
partcula completa (cido mas protena se le denomina virin. El cido nucleico se ubica en
la parte central de la partcula. En el caso de virus de varilla el ARN esta organizado como
una hlice larga.
El tamao de los virus isomtricos vara de 17-70 nanmetros (nm1) de dimetro; los
baciliformes alcanzan 300 nm de longitud x 95 nm de ancho; los de varilla rgida miden
114-215 nm de largos por23 nm de ancho; las dimensiones de los virus de varilla flexible
alcanzan hasta 2000 nm de longitud por 10 nm de ancho.
+ Un nanmetro (=1 milimicra) = 0.000 000 001 m; o 0.000 001 mm; o 0.001 micras
39
- La falta de sntomas no necesariamente significa que la planta no est infectada.
Puede suceder simplemente que la infeccin est latente.
En general los sntomas inducidos por virus se pueden agrupar en tres grandes
categoras: cambios de coloracin, malformaciones y sntomas diversos.
4.1.1. Hojas.
40
Necrosis de nervaduras. Necrosis por muerte del sistema vascular.
4.1.2. Flores.
4.1.3. Frutos.
Todo el fruto puede cambiar de tamao y color. Puede haber moteado, manchas
angulares.
4.1.4. Races.
4.2. Malformacin.
4.2.1. Hojas.
41
4.2.2. Flores.
4.2.3. Frutos.
4.2.4. Tallos.
Distorsin
Acortamiento de entrenudos.
4.2.5. Races.
42
Engrosamiento de yemas
Incompatibilidad en el injerto. Los injertos no prenden o no desarrollan
4.4. Factores causantes de sntomas semejantes a los inducidos por los virus
- Anormalidades genticas
- Deficiencias nutrimentales
- Dao por herbicidas
- Dao por insectos o caros
- Dao por poluantes o pesticidas
- Otros fitopatgenos
Los sntomas causados por estos ltimos agentes no son de naturaleza infecciosa; es
decir, que no se transmiten mediante injerto. Adems, al paso de los das la recuperacin
puede ser comn.
Agentes infecciosos tambin pueden causar sntomas similares a los ya descritos: por
ejemplo el tizn tardo llega a ser confundido con el virus de la marchites manchada, por
productores y tcnicos inexpertos.
El uso de los sntomas para la diagnosis de campo es una gua valiosa pero imprecisa,
sobre todo para los tcnicos no familiarizados con las enfermedades comunes en un cultivo
en una regin determinada. An el especialista debe ser humilde antes de poder afirmar que
un virus particular est involucrado en determinada enfermedad.
Lo anterior no significa que cada vez que detectemos sntomas presuntamente virales,
se tendr que acudir a un experto. Dependiendo de la experiencia del investigador y de los
antecedentes del problema, los diagnsticos de campo pueden ser relativamente precisos. El
patrn de dispersin de la enfermedad puede dar indicios del virus o grupo de virus que se
trate. Por ejemplo en el caso de geminivirus en tomate, los sntomas mas notables son de
enchinamiento y reduccin en el crecimiento; su presencia en la regin est relacionada con
43
las poblaciones de mosca blanca y generalmente al inicio de las epidemias se aprecia un
gradiente en dnde las plantas de las orillas son las primeras en ser infectadas,
especialmente si hay maleza cercana en los drenes. En base a lo anterior en sentido estricto,
solo se puede afirmar que tenemos problemas de virosis, cuyos sntomas coinciden con los
descritos para geminivirus, pero en ningn momento podemos decir con precisin de que
geminivirus se trata; tampoco podemos negar que posiblemente haya plantas infectadas por
otros virus.
El apoyo del laboratorio puede ser indispensable para determinar con certeza a los
patgenos involucrados, sobre todo cuando se presentan sntomas que antes no se haban
observado en el cultivo en la regin.
Unidad 2.
TRANSMISIN DE VIRUS
Los virus no penetran a las plantas de manera directa, ni salen de estas por sus
propios medios. La dispersin no es activa; es pasiva y se da mediante los siguientes
mecanismos:
1. Transmisin mecnica.
44
Este fenmeno sucede comnmente en el campo o en los invernaderos, mediante el
rozamiento natural entre plantas (VMT), pero principalmente a travs de las heridas
causadas por las prcticas de cultivo, tales como: podas, desbrotes, acomodo de guas,
cosecha, etc. Afortunadamente la mayora de los virus no se dispersan eficientemente de
esta manera. Sin embargo hay que valorar la enorme importancia de las prcticas causantes
de heridas en cultivos sujetos a manipuleo frecuente (hortalizas), o en aquellos casos en que
por necesidad hay que causar heridas (particin de tubrculos en papa o podas en frutales).
Por otra parte, la transmisin mecnica artificial es uno de los aspectos a estudiar para
la identificacin de virus. Este aspecto se ver en el captulo correspondiente.
3. Biotransmisores.
Se aplica este trmino a cualquier agente vivo (excluyendo semilla y polen) capaz de
portar o transmitir un virus fitopatgeno de una planta enferma a una planta sana. En
sentido estricto la palabra vector no es sinnimo de biotransmisor, aunque en el lenguaje
comn se usan de manera indistinta. Siendo ms comn el primer trmino. El ser vector
implica que el virus es ingerido y se halla en contacto ntimo con el transmisor. Un ejemplo
til de vector es el del mosco Anopheles, que transmite al protozoario causante del
paludismo; el microorganismo ingerido se multiplica y sufre transformaciones en el interior
del cuerpo del insecto, antes de poder ser transmitido. En muchos casos de biotransmisores
de virus, el patgeno si se multiplica en el insecto pero hay abundantes excepciones en las
45
que no sucede as. Entre los biotransmisores de virus fitopatgenos se hallan los insectos,
caros, nemtodos y hongos.
3.1. Insectos
Segn Harris (1981) los insectos constituyen el grupo ms importante; de las 391
especies de animales vectores de virus en plantas, 94% son artrpodos y 6% son
nemtodos; del total de artrpodos vectores, el 99% son insectos; el 70% de los insectos
capaces de transmitir virus son hompteros.
Los principales grupos de insectos vectores de virus son: fidos, mosca blanca. trips.
chicharritas y colepteros.
3. 1. 1. Afidos.
46
virus transmitidos por fidos son de forma polidrica o de varilla flexible. Cuyo sntomas
ms notable es el de mosaico, aunque algunos tambin inducen amarillamientos. Los virus
raras veces son transmitidos transovarialmente (a travs del huevo); as, los fidos recin
eclosionados casi siempre estn libres del virus.
La transmisin por fidos pueden ser de tres tipos; No persistente (circulativa) que es
la ms comn, o persistente (circulativa). Hay una tercera categora que incluye a virus que
presentan caractersticas intermedias entre las dos anteriores (cuadro 1).
Los fidos presentan formas pteras y aladas; estas ltimas son las ms importantes
como vectores dada su alta movilidad. Son insectos partenogenticos y vivparos que pasan
47
por cinco estadios ninfales. Algunos son especficos a uno o pocos hospedantes, pero
muchas especies son polfagas, En ausencia del hospedantes cultivable los fidos
sobreviven en maleza ubicada dentro del lote (arvenses) o en los montes o drenes cercanos
(maleza ruderal)
El otro factor se refiere a que no se debe visualizar a los fidos vectores de virus bajo
la misma ptica de los insectos plaga. Tericamente basta con que una planta sea picada
con un solo fido infectivo para transmitir al virus; por lo anterior no podemos hablar de
umbrales de control para el control qumico de fidos vectores. Este tipo de transmisin no
persistente se facilita porque algunos virus se hallan muy concentrados en las clulas del
parnquima, y durante la tienta se adhieren fcilmente al estilete.
Una vez que la planta es infectada los sntomas aparecen pocos das despus, estas se
presentan inicialmente en forma aislada, pero despus se generaliza la epidemia.
48
insecticida, puede potencialmente (bajo la excitacin nerviosa derivada del txico) picar
otras plantas sanas cercanas, de tal manera que la transmisin no se evita.
El virus puede ser adquirido por las ninfas, persiste durante la "pupacin" y es
inmediatamente transmisible por el adulto recin emergido. No hay evidencia de que el
virus pase al huevo. Las moscas se alimentan del floema, prefieren tejidos jvenes o en el
envs de las hojas. Al ser arrastradas por el viento llegan a diseminar virus a grandes
distancias. Son atradas por la luz azul y colores amarillos.
La mayora de los virus transmitidos por mosca no se transmiten por frotis. Ejemplos
de virus transmitidos por MB son: Virus Mosaico Dorado del Frjol, Virus del
Enrollamiento de la Hoja de la Calabaza y el Virus del Enchinamiento del Tomate.
3. 1. 3. Chicharritas
49
1. Las especies ms comunes como vectores de virus pertenecen a gneros como:
Empoasca, Dalbulus, Circullifer, Macrosteles, Agallia y otros. Son insectos de
hbitos picador-chupador.
2. Transmisten virus asociados al floema, tejido del cual se alimentan.
3. Estos virus no se transmisten mecnicamente por frtis (excepto El Virus
Enanismo Amarillo de la Papa)
4. La transmisin es generalmente del tipo persistente (circulativa). El perodo de
adquisicin es de 30 minutos o ms. Hay un perodo de latencia en el vector. El
perodo de inoculacin es de varias horas.
5. El virus es retenido por el insecto durante toda su vida (excepto en el Virus
tungro del arroz). El virus pasa del intestino a la hemolinfa y se multiplican en el
vector (excepto el Virus curly top de la remolacha). En algunos casos hay
transmisin transovarial del virus, es decir que los huevecillos quedan infectados
y la progenie puede ser infectiva.
6. Hay una alta especificidad virus-vector y los virus tienen un limitado rango de
hospedante.
7. Los sntomas mas comunes son amarillamiento sntomas de distorsin y
proliferacin anormal de hojas y yemas ("escoba de bruja").
8. Ejemplos de virus transmitidos por chicharras son: Curly Top del Tomate,
Rayado Fino del Maz, Mosaico Estriado de la Cebada, y Estriado del Maz.
3. 1. 4. Colepteros
50
5. Ejemplos de virus transmitidos por colepteros son: Virus Mosaico de la
Calabaza, Virus Mosaico Rugoso del Frijol, Virus Mosaico de la Berenjena y el
Virus del Mosaico del Rbano.
3. 1. 5. Trips
51
6. Existen evidencias que el virus se logra multiplicar en el cuerpo del vector y que
el ciclo de vida de este se puede acortar considerablemente por el efecto del
virus.
3. 2. caros
De la clase arcnida, los erifidos son los vectores de virus ms importantes, pero
algunos tetranichidos tambin los pueden transmitir. Los caros son artrpodos de hbito
chupador. Se conocen al menos seis virus transmitidos por caros y en todos los caos la
transmisin es de tipo persistente, el virus persiste tambin durante la muda. No existe
transmisin transovrica. Algunos vectores son; Eriohystulipae, que transmite al Virus
Estriado del Trigo y E. ficus, vector del Virus del Mosaico del Higo.
3. 3. Nemtodos.
52
a largas distancias. En base al tipo de partcula viral transmitida, los patgenos se clasifican
en:
Nepovirus. Son virus polidricos que tambin se transmiten por semilla y polen. Ejemplos
de vectores son: Xiphinema index y X. americana que transmiten al Virus de la Hoja de
Abanico de la Vid y el Virus de la Mancha Anular del Tabaco, respectivamente. ste
nemtodo es muy longevo en ausencia de hospedante y el virus dura hasta 8 meses en el
nemtodo. Longidorus sp. Transmite al Virus del Anillo Negro del Tomate.
3. 4. Hongos.
Se conocen cinco especies de hongos vectores, todos ellos son ficomycetes. Forman
zoosporas en esporangios. Las zoosporas tienen cierta autonoma de movimiento gracias a
los flagelos. El hongo adquiere al virus al atacar a una planta enferma por este ltimo. La
reproduccin del hongo da origen a esporangios y zoosporas infectadas por partculas de
virus. Las zoosporas se desplazan por el agua, al infectar races de plantas sanas tambin
inoculan al virus. Ejemplos son:
En 1982 se conocan 230 virus fitopatgenos, de los cuales al menos 62 pueden ser
transmitidos por semilla en cuando menos uno de sus hospedantes. El porcentaje de semilla
53
infectada depende del virus y de la variante del mismo, as como de la variedad del
hospedante y de la etapa de su desarrollo al momento de la infeccin viral.
En el campo es raro que ocurran incidencias del 100% de plantas infectadas y adems
no todas las semillas de una planta resultan infectadas. En consecuencia, la proporcin de
plantas con semillas infectadas generalmente es baja en la mayora de los virus; una de las
excepciones quiz sea el Virus Mosaico Comn del Frjol. Sin embargo bastan incidencias
muy bajas de semilla infectada para que se inicien epidemias severas. Por ejemplo en
California se determin que basta con que 0.1% de la semilla tenga al virus del Mosaico de
la Lechuga para que las prdidas sean cuantiosas. El papel del inculo portado en la semilla
es mayor cuando el virus no tiene muchos hospedantes alternativos. La transmisin por
semilla tiene tambin mucha importancia de la dispersin de virus de un pas o continente a
otro; en este caso puede ser el medio mediante el cual se introduce al patgeno por vez
primera a una nueva regin. Debe tambin visualizarse su papel como sitio de
supervivencia de los virus.
54
la transmisin. En algunos casos ciertos virus se transmiten por semilla solo en algunos
hospedantes; la eficiencia de transmisin (% de semilla afectada) es tambin variable segn
la especie y variedad.
Las plantas infectadas pueden tambin producir polen infectado, el cual al fertilizar
flores de plantas sanas transmite tambin el virus. Este fenmeno aumenta tambin la
proporcin de semillas infectadas. En otros casos el virus induce esterilidad en el polen.
En otros casos algunos virus se transmiten por semilla solo en algunos hospedantes.
As por ejemplo el Virus Mosaico Amarillo del Frjol se transmite por semilla en lupino,
pero no en frjol. Las diferencias en la proporcin de semilla infectadas tambin se
expresan segn el cultivar. As, al estudiar la transmisin del VMCF en 51 cultivares de
frjol, la transmisin vari desde 1-75%. Esta variacin tambin es distinta segn la planta
individual de la misma variedad; por ejemplo en lechuga de misma variedad, la transmisin
de semillas contaminadas vari de 0.2-14.2% plantas. Es obvio que la propia extirpe o
variante del virus tambin difiere en su capacidad de transmisin; tal es el caso del Virus
Mosaico Estriado de la Cebada, cuya transmisin por semilla vari del 0-53%.
Unidad 3.
55
RELACIONES VIRUS-PLANTA
Las plantas mantienen una relacin ntima con sus parsitos virales y salvo pocas
excepciones los virus generalmente estn en el interior de las clulas vivas, ya sea en etapa
de multiplicacin o en reposo. Esta relacin parastica inicia cuando el virus ingresa a tejido
sano.
1. Penetracin.
Los virus son parsitos de heridas frescas y requieren de estas para introducirse a la
planta mecnicamente ya que son capaces de introducirse en el hospedante por s solos.
Puede suceder que el virus ya est en la semilla, pero en plantas sanas las partculas
iniciales son inoculadas mecnicamente mediante prcticas de cultivo, injerto y mediante
el roce entre plantas. En el caso de la transmisin por polen, tambin ocurren heridas
mecnicas, durante la germinacin de este grano y la formacin posterior del tubo polnico.
Los vectores tambin causan heridas con su aparato bucal (artrpodos o nemtodos)
durante su alimentacin en la que se adquiere o se inocula el virus.
1. Una vez que las partculas han penetrado (inmersas en la savia infectiva) y hacen
Contacto estrecho con el citoplasma de la planta sana, la partcula viral pierde la
cpside protica. El cido nucleico (AN) libre es el responsable de la infeccin y de
los sntomas, al interferir con el metabolismo normal de la planta. Los fragmentos
56
de la cpside quedan libres en la clula y aparentemente son incorporados en las
reacciones metablicas de la clula infectada.
2. La partcula de AN viaja al ncleo y logra inducir a la clula para que sintetice
enzimas ARN-polimeras y ARN-sintetazas.
3. En presencia del ARN viral que sirve como molde, se sintetizan nuevas partculas
virales. El ARN original que sirve de molde para producir una copia que acta como
una especie de "negativo"I que sirve para que se produzcan mltiples copias
exactamente iguales al molde original.
4. Tan pronto como se sintetizan las nuevas partculas virales, a partir de las propias
clulas del hospedante (bajo las ordenes del ARN viral) se sintetizan tambin cada
una de las cpsides correspondientes.
5. El proceso anterior se completa en aproximadamente 10 hrs. Al final los nuevos
virus quedan formados a imagen y semejanza de las partculas originales y se
comportaran de manera similar al padre original; a menos que ocurra alguna
alteracin (mutacin) durante la sntesis y ensamblaje de las molculas del AN o de
la cpside.
Cabe agregar que una vez formadas las nuevas partculas en algunos virus se ha
observado que forman agregados de partculas virales conocidos como inclusiones, cuya
forma y tamao es variable, as como su localizacin en el interior de la clula.
57
3. Translocacin.
Los virus tienen que desplazarse de las clulas inicialmente infectadas a las clulas sanas
vecinas o an desplazarse a distancias de varios cm o metros (rboles) para poder
generalizar la infeccin en la planta atacada. El desplazamiento entre 15 clulas vecinas se
da va de los plasmodesmos. Los plasmodesmos son proyecciones del citoplasma que
conectan una clula con otra y que permiten el transporte intercelular, lo que tambin
permite el flujo de los virus en suspensin acuosa.
Se ha estimado que este mecanismo de transporte es demasiado lento ya que los virus
se desplazan 8-10 clulas por da. El desplazamiento ms rpido y a grandes distancias
(entre rganos) a travs de los tubos cribosos del floema; se menciona que pueden
desplazarse hasta 15 cm en tan solo 6 minutos. Del floema los virus pueden invadir nuevas
clulas tambin va plasmodesmos. El transporte por el floema ocurre en sentido
descendente y por lo tanto los virus se desplazan inicialmente a la raz y posteriormente
invaden otros rganos de las plantas
Unidad 4.
IDENTIFICACION DE VIRUS
1. Aspectos generales.
58
Sin embargo, la observacin de sntomas a nivel de campo nos da una idea de la
posible causa y diseminacin de las enfermedades virales. La identificacin puede ser con
fines de diagnstico ante problemas prcticos concretos y en este caso los resultados deben
ser rpidos y oportunos. Diagnsticos errneos conducen invariablemente a la toma de
decisiones equivocadas en cuanto al manejo de la enfermedad. Por ejemplo al confundir a
una virosis con un problema nutrimental puede conducir a gastar en fertilizantes
innecesarios; la confusin con enfermedades fungosas puede inducir al productor a aplicar
infructuosamente en fungicidas. Es comn que algunos tcnicos bajo el supuesto de que
hay que prevenir contra mycoplasmas, aplican antibiticos en cultivos que solamente son
afectados por virosis.
En una investigacin formal, las fases a seguir para identificar a el o los agentes
causales de una virosis desconocida son los siguientes:
Antes que nada debe de determinarse que la enfermedad se puede transmitir de una
planta enferma a una sana, ya que solo las enfermedades de naturaleza bitica son
infecciosas. Este aspecto se prueba haciendo injertos de brotes de plantas enfermas en
59
plantas sanas cultivadas en invernadero. Es obvio que el invernadero deber estar protegido
para evitar el acceso de vectores.
Son varias las propiedades que se han utilizado y entre las ms importantes se hallan:
60
Los tubos se retiran de inmediato del agua caliente y se pasan a agua con hielo.
Enseguida se inocula savia de cada tubo por separado en plantas indicadoras, que den
origen a lesiones locales. El PIT ser aquella temperatura ms baja en la cual los sntomas
ya no se produzcan despus de inocular las plantas indicadoras.
5. Mecanismos de transmisin.
61
6. Rango de hospedantes
7. Serologa.
Todas las tcnicas anteriores forman parte del protocolo formal para identificar virus
desconocidos en una regin. Sin embargo, en los diagnsticos de rutina su uso es cada da
menor, ya que otras tcnicas mas rpidas y eficaces, como la serologa presentan amplias
ventajas (y algunas desventajas).
8. Bases de la serologa.
62
Los antgenos son molculas o partculas constituidas por polisacridos y/o protenas
de elevado peso molecular, ajenas al animal inoculado. De hecho un proceso similar ocurre
diariamente en la naturaleza cuando los animales sealados se defienden del ataque de
microorganismos potencialmente patgenos. En contraparte los anticuerpos son
macromolculas producidas por el animal inoculado natural o artificial mente. Las
reacciones antgeno anticuerpo se caracterizan por ser relativamente especficas. As un
antgeno "A" dar origen a un anticuerpo "A" y un antgeno "B" inducir la sntesis de un
anticuerpo "B"; pero ni "A" dar origen a "B" y viceversa; tampoco "A" ni "B" producirn
anticuerpos C, D...ni N.
Los anticuerpos son protenas del tipo de las gamaglobulinas especficas. Los
anticuerpos funcionan como un sistema de defensa especfica contra el antgeno que indujo
su formacin. Partculas de nucleoprotenas, tales como los virus, funcionan como
antgenos; en este caso, la cpside (cubierta de protena) determina el tipo de antgeno,
(segn el arreglo de sus aminocidos) que ser producido.
Este fenmeno que ocurre de manera natural tambin puede ser inducido inoculando
animales con virus conocidos, con el fin de aprovechar los anticuerpos producidos en
estudios de identificacin y diagnstico de virus. La produccin controlada de antisueros
(anticuerpos presentes en SL suero sanguneo) se lleva al cabo en algunos centros de
investigacin y en los ltimos aos constituye un prspero negocio de algunos laboratorios
que se encargan de producir los a nivel comercial. Ejemplos de estas compaas
internacionales son Agdia y Sanofi.
9. Produccin de antisueros.
63
precipitacin y otras substancias, auxilindose tambin con el uso de centrfugas y
ultracentrfugas hasta obtener al virus con la mayor pureza posible.
64
Existen diversidad de tcnicas disponibles, cada una con ventajas y desventajas, entre
las ms usuales: Doble Difusin en Agar, Latex, Elisa, Dot Blot, etc. La tcnica doble
difusin ya se explic con anterioridad. Aqu se explicar solamente la tcnica ELlSA, la
cual es la ms usada en la mayora de los laboratorios.
11. ELlSA.
65
3. De nuevo se agrega el antisuero usado inicialmente, pero conjugado previamente
con una enzima (por ejemplo la fosfatasa alcalina). Este conjugado se adhiere al
virus (fig. C), de tal forma que este queda atrapado entre el conjugado y el
anticuerpo agregado inicialmente (se forma un "sandwich" con el virus en medio).
4. Se agrega un substrato sobre la cual pueda actuar la enzima conjugada (Fig. D). Al
combinarse la enzima con el substrato se registra un cambio de coloracin a simple
vista, cuya intensidad ser proporcional a la concentracin.
Cabe sealar que entre cada paso el pozo se lava con una solucin especial que
contiene detergente y se desecha el lavado, de tal manera que si la muestra de savia no tena
al virus correspondiente al antisuero utilizado, en el primer lavado (despus del punto 1) los
anticuerpos no atraparn ninguna partcula viral (dada su especificidad). Si esto ocurre el
conjugado (enzima-anticuerpo) tampoco se pegar y ser eliminado por el segundo lavado.
Despus al agregar el substrato, este no ser afectado porque la enzima ya fue eliminada.
En consecuencia no habr cambio de coloracin.
Esta tcnica descrita es la que se usa con mayor frecuencia y se conoce como "ELlSA
Sandwich doble anticuerpo". Existen variantes de ELlSA, que se usan en situaciones
especiales.
Es claro que la tcnica es fcil de llevar al cabo, pero para que su utilizacin sea
confiable se requiere de experiencia, ya que pequeos detalles a veces son la diferencia
entre un diagnstico adecuado y uno errtico. La tcnica se facilita con el uso de equipo
apropiado y en algunos laboratorios bien equipados el procedimiento es semiautomtico.
Las placas con los pozos se pueden "leer" en un espectrofotmetro especial, para
cuantificar la concentracin del virus. Un aspecto muy importante es la cantidad de
antisueros que se tengan disponibles y la calidad de los mismos. Algunas compaas como
Agdia y Sanofi son proveedores de equipo, reactivos y antisueros de alta calidad.
Cabe mencionar que desde la dcada pasada inici el desarrollo de las tcnicas
moleculares, las cuales hoy en da han alcanzado un alto desarrollo y su avance es
vertiginoso. Tcnicas como la de Reaccin de la Polimerasa en Cadena (Polymerase Chain
66
Reaction = PCR), tienen una sensibilidad mucho mayor que ELlSA, de tal manera que
muestras registradas como sanas mediante EllSA (porque el virus est poco concentrado) en
realidad si estn infectadas. Estas nuevas tcnicas tienen una gran importancia en la
deteccin de virus en frutales, semillas, etc. Su utilidad prctica es grande en diversos
casos: por ejemplo en la certificacin de sanidad de semilla, material propagativo, etc.
Tcnicas moleculares.
En este caso se usan tcnicas mas sofisticadas, que requieren de equipo especial, que
por su alto costo solo se tiene en aquellos laboratorios mas avanzados en la investigacin en
virolgica. Las tcnicas moleculares incluyen diversos aspectos del anlisis bioqumico de
los virus, entre ellas el anlisis del genoma vira!. Ejemplos de estas son la Reaccin de la
Polimerasa en Cadena tambin llamada PCR, o la Hibridacin de cidos Nuclicos. Se
caracterizan porque son muy sensibles y ms precisas que otras tcnicas. Regularmente
estas pruebas se ejecutan, en casos especiales de diagnstico o con fines ms especficos.
Sin embargo, en la medida que los reactivos y el equipo utilizado sea mas barato y cuando
exista personas mas capacitado, estas tcnicas aparentemente se volvern tan rutinarias
como ELISA.
7. Nomenclatura y clasificacin
7. 1. Nomenclatura.
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En virologa es comn el uso de siglas para designar de manera abreviada a los virus,
lo cual resulta prctico. As se utiliza VMP para el Virus Mosaico del Pepino, VMT para el
Virus Mosaico del Tabaco o VMAT para el Virus Mancha Anular del Tabaco. Es necesario
aclarar que estas abreviaturas se usan de manera uniforme por la mayora de los
investigadores, con el fin de facilitar la comunicacin oral o escrita.
R/1= La R significa que el virus est compuesto por ARM; el nmero 1 indica que
la cadena del ARN es de una sola banda.
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2/5= El 2 representa el peso molecular del cido nucleico, expresado en millones. El
5 representa la proporcin (%) de ARN que posee la partcula.
E/E= Se representa aqu la forma de la partcula que recubre al ARN (envoltura /
elohagada o varilla).
S/O= Describe el tipo de hospedante (en este caso plantas de semilla o
angiosperma). El 0 (cero) indica el tipo de vector que en este caso no existe).
7.2. Clasificacin.
Hasta 1985 (Walkey, 1985) los virus de las plantas se hallaban clasificados en 27
grupos de los cuales se estructuraron en base a las propiedades fsicas, qumicas y
biolgicas; es decir segn la forma de la partcula, tipo de cido nucleico (ARN o ADN),
nmero de cadenas o bandas de cido (1 o 2 bandas) en las partculas de cada virus, as
como el mecanismo de transmisin conocido.
ARN 1 Cadena
1. Polidricos
Luteovirus 25 A,E - A p
Enanismo clortico 30 E - CH sp
Maz
Sobemovirus 28 E + + Co
Necrosis del Tabaco 26-28 A + Ho
Tombushvirus 30 A + -
Tymovirus 28-30 E + Co
Comovirus 24 E + Co p
Dianthovirus 31-34 + -
Nepovirus 28 A + + Ne
Mosaico Ena. 30 E + A p
Chicharo
Mosaico de la Alfalfa 18-58x28 A + + A np
Bromovirus 26 E + Co, Ne
Cucumovirus 28 A + + A np
Llarvirus 26-35 A + + T
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Moteado Velvet del 30 E + Co
Tabaco
2. Varillas 180-215 y 16- +
114x22
Tobravirus 300x18 A + + Ne, Co
Tobamovirus 100-150x13 A + + -
Potexvirus 470-580x13 E + -
Carlabirus 620-7200x13 E, A + -
Potyvirus 680-900x11 E + + A- np
Closterovirus 600-2000x10 A, E A- np
3. Envueltos A A- sp
Rhadovirus 160-380x50- A p, Ch p
95
Tospovirusa 85 A + T p
ARN 2 cadenas Ch p
Phytoreovirus 70 - Ch p
(polidricos)
Fijivirus 70 E - Ch p
(polidricos)
ADN 1 cadena
Geminivirus 18-20 A, E - - Ch p,
(polidricos) Mbp
ADN 2 cadenas
Caulimovirus 50 E A np
(polidricos)
*Cuadro elaborado en base a informacin de Wakley, 1985. Rango amplio (A) o
estrecho (E) de hospedantes. Vectores: A= afidos, Ch = Chicharras, Co = Colepteros, Ho =
hongos, Mb = Mosca Blanca, Ne = Nemtodos, T = Trips. Tipo de transmisin: p =
persistente, np = no persistente, y sp = semipersistente. *Los Rhabdovirus son de forma
baliforme y los tospovirus de forma polidrica; ambos estn recubiertos por una capa de
lpidos * Espacios en blanco significa que no se tuvo informacin disponible. *Geminivirus
estn compuestos por dos partculas unidas.
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Hoja de la Calabaza.
Unidad 5
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La mayora de los virus atacan a otros hospedantes distintos al principal, tales como
maleza o plantas silvestres que desarrollan dentro o fuera del terreno de cultivo. Estos
pueden actuar como reservreos de inculo y entre, mas cerca se hallen, la influencia puede
ser mayor del cultivo. la dispersin del virus de estas fuentes de inculo se da
principalmente mediante insectos vectores. Por lo anterior la eliminacin de maleza dentro
y por las orillas del lote, as como en drenes o canales cercanos deber hacerse varios das
antes de establecer el cultivo. Con este fin se pueden usar herbicidas o medios mecnicos y
manuales.
1.2.Saneamiento.
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especies de ciclo corto en el mismo terreno. Por ejemplo, es comn que en suelos con
acolchado se arranquen plantas viejas de calabaza (a veces con incidencias superiores a
50% de virsis) y se siembra de nuevo sin arar el terreno. Al destruir las plantas viejas, los
insectos se albergan en el suelo, en maleza o en cultivos vecinos. Una vez establecido el
nuevo cultivo, epidemia desarrolla en forma temprana a partir de abundantes fuentes de
inculo primario.
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de virus. Se recomienda la desinfeccin de manos y herramientas con agua con cloro. Una
situacin similar se da en los cultivos de tomate bajo estacado, ya que los desbrotes o las
podas, conllevan a la transmisin de virus y bacterias. Conviene valorar este factor de
riesgo antes de iniciar esta prctica y hacer lo posible por disminuir al mximo el problema
mediante la desinfeccin de herramientas (cuchillas y tijeras).
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1.8. rboles de vivero sanos.
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que agregar que muchas de las especies de fidos tambin han desarrollado resistencia a
numerosos insecticidas. En cultivos de bajo valor econmico no puede ni pensarse en este
mtodo.
3. Control Fsico.
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En Veracruz se han evaluado las barreras de plantas de jamaica para limpiar estiletes
de fidos, en un intento de controlar al Virus de la Mancha Anular de la Papaya, con xito
limitado.
Algunos materiales que reflejan la luz solar se han usado tambin para ahuyentar
insectos vectores. Por ejemplo se ha observado que los plsticos (usados en acolchado) de
color gris o plateado son repelentes de trips y de fidos. Se obtiene proteccin durante las
primeras etapas del cultivo, pero una vez que el follaje cubre la cama, la capacidad
reflejante disminuye considerablemente. Algunos productores usan tambin tiras de papel
aluminio con este propsito; en este caso las tiras se cuelgan de las estacas de las
espalderas.
3.3. Franjas amarillas.
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3.5. Aceites.
El uso de derivados del petrleo para el control de virosis transmitidas por fidos o
mosca blanca, fue comn en aos pasados. Se pretende que la fina pelcula de aceite
depositada sobre el follaje sirva como "filtro limpiador" del estilete contaminado por el
virus. En otras palabras, cuando un fido se alimenta de una planta enferma las partculas
virales son atrapadas por el aceite al extraer el estilete; o cuando un fido con el estilete
contaminado llaga a alimentarse de una planta sana tratada, el virus es desprendido por el
aceite, antes de que el estilete ingrese en el tejido sano.
3.6. Termoterapia.
4. Proteccin cruzada.
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Este mtodo de control se basa en un principio anlogo al de inmunizacin de
animales de sangre caliente mediante el uso de vacunas. Las plantas de inters se inoculan
deliberadamente con cepas .dbiles o atenuadas artificialmente, antes de que estas resulten
infectadas por el patgeno en el campo. Se pretende estimular los mecanismos de defensa
de la plantas (proceso anlogo a la induccin de anticuerpos en humanos) de tal forma que
al llegar el patgeno silvestre se encuentra con los posibles sitios de infeccin ocupados.
Esta tcnica se utiliz en los aos 70, contra el VMT en tomate. Cepas silvestres del
virus se trataron con cido nitroso para obtener mutantes debilitados, que posteriormente se
inoculaban en tomate. Con esta tcnica se logr incrementar la produccin en 15% en
algunos invernaderos de Europa. Ya no se utiliz esta tcnica, una vez que se obtuvieron
variedades resistentes al VMT.
En Brasil tambin se obtuvieron buenos resultados con esta tcnica, pero contra el
Virus Tristeza de los Ctricos. En Hawaii se utiliza exitosamente la proteccin cruzada
contra el Virus de la Mancha Anular de la Papaya. Desafortunadamente, en Mxico se
evaluaron algunas de estas cepas debilitadas procedentes de EUA, pero no se obtuvo
control de la virosis del papayo. La proteccin cruzada es un mtodo riesgoso, ya que a
partir de las cepas virales alteradas se pueden originar nuevas variantes an ms agresivos
que el virus silvestre. Es una opcin conveniente en ausencia de otros mtodos de control.
5. Resistencia gentica.
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Susceptibilidad. Una planta susceptible es aquella que permite fcilmente la
infeccin y la multiplicacin del virus. Es lo opuesto a resistente. Alta susceptibilidad
y baja resistencia son sinnimos.
Inmunidad. Son plantas que no llegan a ser infectadas. Se consideran aqu a las
plantas que no son hospedantes de determinado virus. De hecho la mayora de las
plantas son inmunes a la mayora de los virus. La inmunidad es la regla, la
susceptibilidad es la excepcin.
Resistencia. Es aquella que es capaz de retardar o suprimir la multiplicacin de un
virus, o de retardar el desarrollo de los sntomas de la enfermedad. Es lo opuesto a
susceptible. Se han reconocido varios tipos de mecanismos de resistencia a virus, que
pueden agruparse en: a) resistencia a la infeccin; b) resistencia a la multiplicacin; c)
resistencia al movimiento del virus en la planta.
En el caso de la resistencia a la infeccin se ignoran muchas cosas, pero se puede
deber a diversos factores. Algunos de ellos es la presencia de cutcula gruesa y setas o
pilosidad abundante que interfiera con la alimentacin de los vectores.
Algunos materiales resistentes limitan la multiplicacin de virus a pesar de ser
infectados, tal y como ocurre en algunos cultivares de tabaco con VMT o de pepino
con VMP. Resulta obvio suponer que algunas substancias de las plantas tienen
propiedades inhibidoras de la multiplicacin. En cambio algunos materiales
resistentes al Virus Y de la Papa, el movimiento del virus se retarda
significativamente, lo cual posiblemente se deba a la accin de ciertas protenas
involucradas en la translocacin de virus.
Tolerancia. La planta es susceptible al virus, pero los sntomas desarrollan
lentamente o son moderados. La concentracin del virus y su movimiento en la planta
es similar al de las plantas susceptibles. Tolerancia no es sinnimo de resistencia.
Hipersensibilidad. Es un caso extremo de alta resistencia. Una vez que el virus se
introduce a la planta, el tejido inoculado muere y el virus generalmente no se dispersa
en la planta. El resultado puede ser una lesin local necrtica o la muerte completa
por un shock de la planta. En el primer caso se puede usar este mecanismo para
obtener variedades resistentes.
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5. 2. Tipos de resistencia.
Resistencia vertical.
Tipo de resistencia que se debe generalmente a uno o pocos pares de genes. Tiene la
desventaja de que con frecuencia la resistencia es rota por alguna nueva variante del virus.
La ventaja es que este tipo de resistencia es ms fcil de incorporar en las plantas y de
manejar durante el proceso de mejoramiento. El nivel de resistencia puede ser del 100% Y
el ambiente no determina generalmente a este tipo de resistencia. Tambin se le denomina
resistencia monognica.
Resistencia horizontal.
5. 3. Fuentes de resistencia.
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contar con genotipos resistentes con diferentes caractersticas agronmicas aceptables, que
se ajusten a las necesidades de los productores.
Una vez obtenida la variedad resistente puede suceder que presente caractersticas
agronmicas indeseables, por lo que es necesario hacer retrocruzas para incorporar los
factores deseados. Siempre es deseable incorporar resistencia a otros patgenos
importantes, ya que una variedad resistente a determinado virus puede ser de poco valor si
es susceptible a otro virus o patgeno importante.
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mtodos tradicionales se puede tardar 8 o ms aos, tiempo que se puede acortar
notablemente mediante el uso de los nuevos mtodos de mejoramiento, en los que se hace
uso de la biologa molecular y del cultivo de tejidos. El costo de las variedades resistentes
es alto durante el proceso de obtencin, pero en el caso de productos de grano bsico, es
siempre la mejor opcin, pues resulta antieconmico el uso de otros mtodos.
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