CHAGAS

I. INTRODUCCIN

La tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas, es una enfermedad que

afecta tanto al hombre como a numerosos animales mamferos y es producida por
un protozoario flagelado en la sangre que es el tripanosoma cruzi.

Este parsito fue descubierto en Brasil por Carlos Chagas en 1909, durante su
trabajo, en el estado de minas de gerais, donde esa poca Chagas fue informado
de la presencia de abundantes insectos hematfagos, que habitaban dentro de las
viviendas y picaban a sus moradores en la noche. Verific que las heces de los
insectos estaban infectados por tripanosoma tdeos, que denomin Tripanosoma
cruzi, en honor a su profesor Oswaldo Cruz.

La enfermedad de Chagas registrada en Bolivia constituye un grave y alarmante

problema de salud pblica debido a la difusin y por su alto prevalencia y elevadas
tasas de morbilidad, en el cual la sociedad boliviana representa una amenaza para
la salud boliviana.

II. OBJETIVO GENERAL

Realizar un estudio para determinar el porcentaje de pacientes con anticuerpos

anti T. cruzi en suero y neonatos en cuyos sueros se observen el parasito,
diagnosticados en el Hospital Municipal de Colcapirhua en los meses Mayo y
Junio del ao 2013, de la provincia de Colcapirhua.

III. OBJETIVOS ESPECFICOS

Realizar una revisin bibliogrfica sobre el tema, para sustentar bases
teoras.
Tomar muestras sanguneas de los pacientes, segn orden mdica.
Analizar las muestras mediante las pruebas de HAI, ELISA, Micromtodo.

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IV. MARCO TERICO

1.- TRIPANOSOMIASIS

Definicin.

La enfermedad de Chagas es una infeccin generalizada de naturaleza endmica

y de evolucin generalmente crnica, causado por un protozoario; el tripanosoma
cruzi (Chagas) 1909 y transmitido al hombre y otros animales habitualmente a
travs de hemipteros de la sub-familia triatomideae.

Tripanosomiasis humanas son producidas por protozoos flagelados de la familia

Trypanosomiasis y transmitidas por artrpodos Herat**. Existen dos enfermedades
distintas con condiciones geogrficas diferentes, la americana y la africana.

2.- Tripanosomiasis americana

Llamada tambin enfermedad de Chagas, producida por Trypanosoma cruzi y

transmitida por insectos de la familia Reduviidae. Los parsitos salen en las

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deyecciones del vector y pueden introducirse al organismo a travs de la picadura,

heridas o escoriaciones o atravesando directamente la mucosa, nasal o bucal.
Existen unas formas en la sangre, conocidas como tripomastigote y otras sin
flagelos dentro de las clulas de ciertos tejidos, denominada amastigotes. La
enfermedad se caracteriza clnicamente por la existencia de tres fases: aguda,
terminada o latente y crnica; esta ltima puede producir miocarditis severa y
menos frecuentemente, agrandamiento de las vsceras huecas, tales como colon,
esfago, estmago, etc.

Esta parasitoss fue descubierta en Brasil por Carlos Chagas en 1909, durante su
trabajo en la campaa antimalrica en el estado de Minas Gerais. En esa poca
Chagas fue informado de la presencia de abundantes insectos hematfagos, que
habitaban dentro de las viviendas y picaban a sus moradores en la noche. Verific
rpidamente que las heces de los insectos se encontraban infectadas por
tripanosomatdeos, que denomin Trypanosoma cruzi, en honor a su profesor
Oswaldo Cruz. Posteriormente pudo recuperar los mismos parsitos de la sangre
de individuos que habitaban tales viviendas; de esta manera descubri la
enfermedad y encontr despus de varios estudios que en su fase crnica
ocurran lesiones en el miocardio.

3.- Distribucin geogrfica.

La enfermedad de Chagas ya se ha registrado en todos los pases del continente

americano, con excepcin de Guyana y Surinam, donde aunque no se haya
investigado, se encuentran algunas especies de Triatomas. Es en Amrica del
Sur, especialmente en la Argentina, Brasil, Chile, Uruguay y Venezuela, donde la
enfermedad de Chagas constituye un grave y alarmante problema de salud
pblica, debido a su difusin por extensas reas. En el Brasil los estados de Minas
Gerais, Gois, San Pablo, Baha, Paran y Ro Grande del Sur son los que
presentan la ms alta endemicidad. Fuera de las Amricas no se ha registrado,
hasta ahora, ningn caso de infeccin humana por el T. cruzi aunque se ha

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comprobado la infeccin natural de monos oriundos de Asia; algunos autores

creen que exista all, pero sin ser reconocida, y otros que las razas de T cruzi de
aquella regin no sean virulentas.

Un factor importante a considerar en cuanto a la distribucin geogrfica, es el

lugar donde vive el triatomideo, a lo cual contribuyen la precariedad de las
viviendas y el bajo nivel econmico social de la poblacin. Esto explica por lo
menos en parte, porque la infeccin humanas es extraordinariamente rara en el
Sur de los Estados Unidos, donde el ndice de infeccin natural del Tratoma es
alto, aproximadamente 20%, y donde varios mamferos silvestres estn infectados.

La distribucin geogrfica de la vinchuca es sumamente amplia

prcticamente abarca ahora todo el territorio del pas , las regiones ms
afectadas son los del clima clido , templado y seco ( provincias del norte y
del noroeste ) principalmente , pero a partir de esas regiones se ha
extendido cada vezms transportados por la misma gente en valijas y otros
bultos .

4.- Agente etiolgico.

El parasito (Tripanosoma cruzi)

EL Tripanosoma cruzi es un protozoo mastigoforo perteneciente a la familia

tripanosomatidas, en cuyo ciclo biolgico intervienen mamferos y un insecto
vector.

Los hospederos mamferos pueden ser el hombre y algunos animales domsticos

(el perro y el gato) o silvestres.

Morfologa

En sus diversos hospederos y en medios de cultivo, T. cruzi presenta tres

aspectos morfolgicos fundamentales.

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a) Tripomastigote. De aspecto fusiforme, de unos 20 um de largo, con

citoplasma granuloso y un ncleo central vesiculoso. Posee un kinetoplasto
subterminal, posterior al ncleo, del cual emerge una membrana ondulante
que recorre al parasito y cuyo borde libre lleva un flagelo que emerge por la
extremidad anterior. Se lo encuentra en la sangre de los mamferos y en el
intestino posterior de los triatomios. No se multiplica pero constituye la
forma infectante para los mamferos y los triatomas. En los mamferos, es
el diseminador de la infeccin por va sangunea.

b) Epimastigote. Corresponde a la crithidia de la antigua. Tambin es de

aspecto fusiforme, de unos 20 um de largo, con un kinetoplasto localizado
por delante del ncleo o a su nivel, y presenta en una corta membrana
ondulante y un flagelo libre. Es la forma de multiplicacin del parasito en el
intestino del triatoma y la predominante en los medios de cultivo.

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c) Amastigote. Es la forma de leishmanoide de Wenyon. Se trata de

un elemento redondeado, de unos 2 nm de dimetro, en el cual se
distingue el nucle y el kinetoplasto. Aparentemente es aflagelado al
microscopio de luz, pero en la ultraestructura se observa que posee
un corto flagelo no emergente; es la forma de multiplicacin del
parasito y lo hace en el interior de las clulas del mamfero.

5.- Ciclo evolutivo del T. cruzi

Los vectores se infectan al ingerir sangre de mamferos que contiene

tripomastigotos. En el intestino medio, los parsitos se multiplican por fisin
binaria, como epimastigotos y al cabo de quince a treinta das se desarrollan los
tripomastigotos en el intestino posterior del insecto. Cuando en insecto infectado
pica al mamfero emite deyecciones con tripomastigotes metacclicos que
atraviesan la piel por el sitio de la picadura o por las mucosas. Los tripomastigotes
penetran a las clulas y se transforman en amastigotes, los cuales se multiplican
por fisin binaria, repletan la clula hospedera que termina por romperse y salen a
la circulacin como tripomastigotes, diseminandos por todo el organismo y
repitiendo as muchas veces este ciclo. Finalmente, los tripomastigotes son
ingeridos por los triatomas hematfagos.

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6.- Transmisin

Rhodniusprolixus es el principal vector en Colombia, Venezuela, Guatemala,

Honduras y algunas zonas de Nicaragua y El Salvador.

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La transmisin natural de T. cruzi en la que interviene el vector se lleva a cabo en

tres ciclos: el domstico, en el cual el vector infecta de manera exclusiva la
vivienda humana en reas rurales y suburbanas; el peridomstico, donde se
mantienen alrededor de ncleos de poblacin humana, y el enzoontico, que se
presenta alejado de asentamientos humanos y con participacin exclusiva de
reservorios silvestres y ecotopos naturales.

Existen diversas formas de transmisin del padecimiento:

a) Transmisin vectorial o diodenar: es la principal va de transmisin, en el

80% de los casos, la enfermedad en los humanos se debe a la transmisin
vectorial, a travs de las heces del Triatoma. Esta se da cuando a travs de
las heces del insecto penetran los parsitos por la herida que causa la
picadura, por lesiones en la piel o por las mucosas de ojos, boca o nariz.
b) Transfusin sangunea: esta forma de transmisin se presenta en
aquellas zonas endmicas, en donde los donadores de sangre tienen
parasitos circulantes
c) Va trasplacentaria, la infeccin prenatal por va trasplacentaria de
Trypanosoma cruzi en la circulacin materna con infeccin aguda o crnica,
es posible, pero no obligada; en Cochabamba oscila entre 3 a un 5%
d) Por leche materna, la posibilidad de infeccin del hijo por la leche de
madre que padece enfermedad de Chagas es posible, ha sido verificada
clnicamente y cuenta con ratificacin experimental, su ocurrencia es
excepcional y muchos especialistas consideran que es un riesgo
importante. Al ser una enfermedad que se presenta predominantemente en
sectores socioeconmicamente deprimidos de la poblacin, y en aquellos
casos donde los nios sufren de malnutricin, es prudente que el hijo de
una mujer que sufre enfermedad de Chagas sea amamantado por la madre
a pesar del riesgo de infeccin; sobre todo sabiendo que el tratamiento en
nios es efectivo.
e) Por hemotransfusin, otro considerable nmero de infecciones se
produce mediante la transfusin de sangre proveniente de donadores con

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infecciones ignoradas, generando cuadros clnicos agudos en los

receptores, se han registrado casos mortales fulminantes. Por eso en todos
los bancos de sangre de zona endmica (y actualmente en pases donde
no se encuentra el vector pero cuentan con corrientes migratorias de pases
donde la enfermedad de Chagas es un problema de salud pblica) deben
realizarse los estudios especficos para descartar la contaminacin con T.
cruzi.
f) Por contaminacin accidental en laboratorio, son mltiples los casos
conocidos de esta enfermedad por infeccin accidental en laboratorios
mdicos, por manipulacin de chinches provenientes de animales
infectados, cultivos de T. cruzi o material biolgico proveniente de enfermos
grandemente infectados.
g) Por ingestin de alimentos contaminados, como la carne poco cocida de
mamferos silvestres.

7.- Patogenia

Los tripomastigotes metacclicos provocan una reaccin inflamatoria local en el

sitio de entrada, y en poco tiempo son fagocitados por los macrfagos en los
cuales empiezan a multiplicarse, ya que son capaces de escapar de la vacuola
fagoctica.

El dao tisular durante la infeccin aguda por T. cruzi es causado por el parsito
mismo y por la respuesta aguda inmunoinflamatoria del anfitrin, que es
provocado por la presencia del parsito. Los resultados de varios estudios
realizados en modelos experimentales de infeccin por T. cruzi han sugerido que
una fuerte respuesta inmunolgica por parte de Th1 con las dos clulas CD4+ y
CD8+ y determinadas citocinas como el interfern-, factor de necrosis tumoral-
y la interleucina 12 son importantes en el control del parasitismo. En contraste,
la produccin de interleucina 10 y el factor de crecimiento transformante estn
relacionados con la replicacin del parsito mediante la inhibicin de la actividad

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tripanocida de macrfagos. La respuesta inmune Th1 tiene un papel protector

sobre todo a travs de la sntesis de xido ntrico, el cual ejerce una accin
tripanocida potente.

Durante la infeccin crnica, el equilibrio entre la contencin de parsito inmune y

la inflamacin daina de los tejidos del husped determina el curso de la
enfermedad. Si la respuesta inmunolgica es ineficiente, o, paradjicamente
conduce a daos en los tejidos, tanto la carga de parsitos como la inflamacin
aumentan. Por el contrario, una respuesta inmune bien ejecutado, en el que se
baja carga parasitaria y las consecuencias inflamatorias se mantienen al mnimo,
el dao tisular es poco.

En la enfermedad de Chagas aguda, la lesin inflamatoria causada por T. cruzi en

el sitio de entrada se denomina chagoma. Los cambios locales histolgicos
incluyen el parasitismo intracelular de los msculos y otros tejidos subcutneos,
edema intersticial, infiltracin linfocitaria e hiperplasia reactiva de los linfonodos
adyacentes. Los tripomastigotes liberados por ruptura de las clulas del hospedero
pueden ser detectados por el examen microscpico de sangre fresca. Los
msculos, incluido el miocardio, son los tejidos ms fuertemente parasitados lo
que puede causar miocarditis y necrosis. Los pseudoquistes caractersticos
observadas en los cortes de tejido infectado son agregados intracelulares de
amastigotes. Puede encontrarse una linfocitosis acompaada de elevadas
parasitemias y leve evacin de los niveles de transaminasas en la enfermedad
aguda. En algunos pacientes, los parsitos se pueden encontrar en el lquido
cefalorraqudeo.

El corazn es el rgano ms frecuentemente afectado en la enfermedad de

Chagas crnica. El examen macroscpico de los corazones de pacientes
chagsicos crnicos que murieron de insuficiencia cardaca revela una marcada
dilatacin ventricular bilateral, a menudo con el lado derecho del corazn ms
dilatado que el izquierdo.45 El adelgazamiento de las paredes ventriculares es
comn, como son los aneurismas apicales y trombos murales. Infiltracin

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linfoctica es la magnitud del presente, acompaado por una fibrosis intersticial

difusa y atrofia de las clulas del miocardio. Los parsitos se ven raramente en
secciones teidas de tejido de miocardio, pero los estudios que utilizan reaccin
en cadena de la polimerasa (PCR), han demostrado la presencia de parsitos en
las zonas de inflamacin focal.

Los rasgos ms llamativos aparentes en el examen macroscpico del esfago o el

colon de un paciente con enfermedad de Chagas crnica del tracto digestivo son
la dilatacin enorme y la hipertrofia muscular de los rganos afectados. El examen
microscpico muestra inflamacin focal y lesiones con infiltracin linfoctica. Es
tambin evidente una marcada reduccin en el nmero de neuronas en el plexo
mientrico y fibrosis peri- e intraganglionar en presencia de proliferacin de clulas
de Schwann con linfocitosis. En la mayora de los pacientes, los efectos clnicos
de esta denervacin parasimptica se limitan en el esfago o el colon, o ambos,
pero se han visto lesiones en el rbol biliar, los urteres, y otras vsceras huecas.

La patognesis de las lesiones cardiacas y digestivas de la enfermedad de

Chagas crnica se ha debatido durante muchos aos. En los ltimos aos se ha
acumulado evidencia convincente que indica que la persistencia de los parsitos
en el msculo cardaco estimula un proceso inflamatorio crnico que a menudo se
traduce en alteraciones del ritmo y miocardiopatas.

8.- Manifestaciones clnicas.

La mayora de las infecciones por T. cruzi cursan forma asintomtica. Algunas se

manifiestan mucho tiempo despus de la infeccin inicial. El modo de incubacin
vara entre 2 a 4 semanas.

a) Forma aguda. Esta fase de la enfermedad es o frecuente y se encuentra

ms en nios que adultos. La lesin primaria o chagoma de inoculacin,
que se desarrolla en la puerta de cada del parsito, se presenta como un
ndulo inflamatorio o placa de tipo erisipeloide, blando, zona central

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necrtica o hemorrgica, con edema local y acompaada de no ganglionar

de la regin. Ms tarde la se cubre con una costra dura. En muchos
pacientes se observa el complejo oftalmoganglionar, conocido como signo
de Romaa, que consiste en un edema bipalpebraluni o bilateral,
acompaado en algunos casos de edema facial, conjuntivitis, queratitis y
dacriocistius. Los ganglios ms comprometidos son los maculares,
parotidianos, externocleidomasteos y submaxilares.

Las adenopatas persisten durante largo tiempo, pero el signo de Romana

chagoma, pueden desaparecer en aproximadamente de 3 a 4 semanas.
Posteriormente, por invasin de los parsitos ros ganglios linfticos, se presenta
una lin-fenopata generalizada. Las adenopatas son de tamao variable, duro e
indoloro. Aparece la parasitemia y en proporcin a sta, se presenta fiebre, de
intensidad variable, intermitente o continua, algunas veces con escalofro.

Adems, el paciente se queja de inapetencia, postracin, dolores musculares,

cefalea y algunas veces se observa un exantema morbiliforma. A partir de los
ganglios linfticos hay invasin bazo, hgado, mdula sea y corazn.
Posteriormente se encuentra hepato y esplenomegalia ms tarde anemia discreta.
En la forma generalizada grave, se presenta toxemia, meningo-falitis y miocarditis
aguda. Esta ltima puede originar insuficiencia cardiaca y llevar al paciente a la
muerte en 2 a 4 semanas. En la fase aguda rara vez hay bloqueo de rama en el
corazn, fase aguda, bien sea severa o leve, puede pasar una etapa de curacin
clnica aparente o indeterminada. Tambin puede ser seguida de una forma
subaguda en la cual predomina taquicardia, hepato y esplenomegalia y linfoadeno
generalizada.

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b) Forma indeterminada. A partir del mes, es llamada tambin fase latente.

Aunque puede haber baja parasitemia; paciente no presenta
sintomatologa. Este periodo puede durar meses o aos, antes de
manifestarse de la forma crnica. En esta etapa puede encontrarse el
parasito en la sangre entre un 20 y 60 % de los casos cuando se hace
xenodiagnostico.
c) Forma crnica. Generalmente esta fase de la enfermedad aparece
tardamente despus de los 10 o 15 aos de la picadura y las localizaciones
principales, corresponden a la miocarditis y a las visceromegalias. En esta
forma la enfermedad, puede ocurrir muerte sbita haber desarrollado
insuficiencia cardiaca congestiva y en otros casos miocarditis progresa
hasta producir insuficiencia. El compromiso cardiaco puede aparecer
muchos aos despus de haber tenido la infeccin primaria. La miocarditis
crnica es la forma ms frecuente de Chagas y puede pasar asintomtica
mucho tiempo.

Son frecuentes las palpitaciones, mareos, diarrea, dolor pectoral, sncope y

edema. Se detectan arritmias y alteraciones de la conduccin ventricular.

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Grados de infeccin.- La OMS-OPS utiliza la siguiente clasificacin para evaluar

la gravedad de la infeccin chagsica:

- Grado I: Infeccin chagsica sin compromiso clnico, radiolgico ni

electrocardiogrfico de lesin cardiaca.
- Grado II: Infeccin chagsica con sintomatologa moderada o nula,
radiolgica normal o indicativa de hipertrofia cardiaca leve o con
alteraciones electrocardiogrficas como: extrasstoles ventriculares,
bloqueo aurculo-ventricular incompleto o completo de rama del haz de His,
bloqueo incompleto o completo de la rama izquierda del haz de His,
alteraciones primarias de repolarizacin.
- Grado III:Infeccin chagsica con sintomatologa evidente, hipertofia
cardiaca moderada y alteraciones electrocardiograficas como:

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bloqueocompleto de rama derecha del haz de His con desvio del eje
elctrico medio de ORS para la izquierda
- Grado IV: Infeccin chagsica con sintomatologa muy pronunciada con
insuficiencia cardiaca. Estudio radiolgico que muestre cardiomegalia
extrema o electrocardiograma con alteraciones graves o multiples.

9) Diagnstico

El parsito Trypanosoma cruzi en un frotis delgado de sangre. (Foto de los CDC)

El diagnstico de la enfermedad de Chagas se puede hacer a travs de la

observacin del parsito en un frotis de sangre bajo el microscopio. Para la
visualizacin de los parsitos, se hace un frotis de sangre delgado y otro grueso y
se les tie. Sin embargo, el frotis de sangre funciona bien solo en la fase aguda de
la infeccin, cuando se ven los parsitos circulando en la sangre.

El diagnstico de la enfermedad de Chagas crnica se hace despus de tener en

cuenta el cuadro clnico del paciente y la probabilidad de que est infectado, por

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CHAGAS

haber vivido en un pas donde la enfermedad es endmica. El diagnstico se hace

generalmente mediante por los menos dos pruebas serolgicas diferentes.

a) Mtodos parasitolgicos directos: Estos procedimientos son de utilidad en

los perodos de parasitemia, como sucede en la fase aguda de la infeccin,
pero los resultados no la excluyen.
En la forma crnica

10.- Diagnstico de laboratorio

Las pruebas de laboratorio permiten tener la siguiente informacin:

o 1. La existencia de una infeccin actual o activa.

o 2. La existencia de una infeccin pasada o latente.
o 3. La existencia de inmunidad protectora

Para demostrar la existencia de una infeccin actual se requiere la demostracin

del agente etiolgico o los antgenos especficos del mismo, mientras que para
determinar la existencia de una infeccin latente o de respuesta protectora, es
necesario demostrar la presencia de los anticuerpos especficos. En su estadio
inicial o agudo se caracteriza por la presencia de parsitos circulantes. y de
anticuerpos de tipo IgM. Lo mismo sucede en los casos de transmisin connatal.
Por el contrario, en fase crnica con o sin sintomatologa clnica, se puede
demostrar la presencia de anticuerpos de tipo IgG, resultando dificil encontrar
parsitos en el torrente circulatorio.

Investigacin de Trypanosoma cruzi circulante: se puede efectuar mediante

dos tipos de mtodos:

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10.1.- Mtodos directos:

a) Gota gruesa: Tcnica de muy baja sensibilidad.

b) Mtodo de Strout:
Extraer 10 ml de sangre venosa, sin anticoagulante.
Dejar coagular y retraer el cogulo espontneamente.
Separar el suero.
Centrifugar este suero a 800 rpm durante 2 minutos para descartar los glbulos
rojos que pudieran quedar pues interfiere en la lectura.
Centrifugar nuevamente el sobrenadante a 2000-2500 rpm durante 10 minutos.
Separar el sobrenadante (suero) y guardarlo para estudios serolgicos.
Observar el sedimento obtenido en el punto 5 entre porta y cubreobjeto en el
microscopio con objetivos 20x o 40x de aumento. Es aconsejable observar
cuidadosamente varias preparaciones (seis a ocho), en busca de formas mviles
del parsito.

Tcnica muy simple basada en la concentracin de los parsitos presentes en

plasma por medio de la centrifugacin y con posterior observacin microscpica
en fresco.

c) Mtodo del microtubo: Para el nuevo micromtodo, se utiliza un tubo

Eppendorf de 1,5 ml de capacidad al que se le agrega una gota de heparina ms

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0,5 ml de sangre venosa, se mezcla por inversin y se centrifuga durante dos

minutos a 3000 rpm. Se toma una gota de la interfase, rica en glbulos blancos, y
se observa entre porta y cubreobjeto al microscopio con 400 aumentos. Se deben
realizar como mnimo dos preparados que deben ser observados durante no
menos de 15 minutos cada uno antes de considerarlos negativos.

d) Micromtodo de los tubos capilares: Obtener la muestra del paciente en un

tubo de eppendorf heparinizado o colocar una gota de heparina y 0.3ml. de
sangre en un tubo sin heparina. Con esta muestra cargar 6 tubos capilares en el
laboratorio, cada uno con 50 ul de sangre. Se centrifugan en un rotor para
microhematocrito a 3000 g durante 40 segundos. Luego de la centrifugacin cada
tubo se corta a la altura de la interfase entre la capa de blancos y el aglomerado
de glbulos rojos. La interfase se coloca entre porta y cubreobjeto y se observa al
microscopio con 400 aumentos no menos de 15 minutos antes de considerar
negativa a la observacin.

e) Separacin por gradiente de densidad: tcnica que emplea la centrifugacin

a travs de un medio de siliconas, de densidad 1075, con lo que se logra una
separacin diferenciada de los parsitos y los elementos sanguneos. Resulta de

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CHAGAS

ejecucin ms rpida que el Mtodo de Strout.

f) Hemocultivo: tcnica que se realiza empleando el medio de cultivo de Warren

(infusin cerebro-corazn con 10 %de sangre de carnero).
10.2.- Mtodos indirectos:

a) Xenodiagnstico: mtodo que consiste en el empleo de los insectos vectores

(triatomas), que son alimentados sobre los pacientes. Se utilizan 40 ninfas del
3 y 4 estadio del insecto, distribuidas en 4 cajas de 10 c/u, las que se dejan
alimentar durante 30 minutos sobre un antebrazo. Luego de 30 das de la
alimentacin se examina microscpicamente el contenido intestinal del insecto
en busca de los Trypanosomas. Puede efectuarse una segunda lectura a los
60 das.
b) Inoculacin en animales: Pueden emplearse ratones o hamsters, que se
inoculan con la sangre u otro material del paciente en estudio por va
intraperitoneal, endovenosa, intracerebral o conjuntival. Se positivizan entre
los 7 y 1 0 das despus de la inoculacin.
c) Antgenos circulantes: se investigan mediante contrainmunoelectroforesis o
ELISA, empleando antisueros elaborados experimentalnente en conejos
inmunizados con antgenos solubles del T. cruzi.

11.- Diagnstico serolgico

El T. cruzi posee una estructura antignica compleja, con una diversidad de

poblaciones moleculares capaces de despertar respuesta inmune en el
hospedero. Se reconocen tres tipos de antgenos en el parsito: antgenos de
superficie celular; somtica y exoantgenos.
Los antgenos de superficie son detectados por tcnicas que operan con el
parsito ntegro. Los antgenos somticos se reconocen por tcnicas que
emplean los productos solubles del parsito obtenido por ruptura y reconocen

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anticuerpos de tipo IgG. Los exoantgenos son reconocidos por medio de

tcnicas que utilizan antisueros especficos elaborados en animales
experimentales infectados (ELISA, contrainmunoelectroforesis,
radioinmunoensayo).
El empleo de materiales antignicos con una elevada diversidad en su
composicin qumica e inmunolgica provoca a menudo dificultades en la
interpretacin de los resultados o en la comparacin de datos obtenidos de
fuentes distintas. Por ello, los tests serolgicos deben ser evaluados a la luz
de cuatro parmetros fundamentales que son: sensibilidad, especificidad,
precisin y condiciones de operabilidad (costo y simplicidad).

Reacciones serolgicas que reconocen anticuerpos contra antgenos de

superficie del T. cruzi.

a) Inmunofluorescencia indirecta Permite reconocer anticuerpos de tipo IgM,

IgG o IgA, por lo que resulta indicado para el estudio de infecciones agudas y
connatales y crnicas.

b) Aglutinacin directa Este test es adecuado para los casos de infecciones

agudas y connatales, porque en l participan de manera importante las IgM,
aunque mediante el tratamiento previo del suero a ensayar con el 2
mercaptoetanol, se pone de manifiesto la presencia de IgG.

c) Reaccin de fijacin del complemento Primera reaccin serolgica para el

diagnstico de enfermedad de Chagas. La tcnica del 50 por ciento de hemlisis,
es considerada de excelente especificidad, con ms del 90 por ciento en los
casos de infeccin crnica. En la infeccin aguda, puede presentar entre un 30 a
50 por ciento de casos con reaccin negativa.

d) Hemoaglutinacin indirecta

La hemaglutinacin indirecta (HAI), tambin llamada hemaglutinacin reversa

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pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos (que en este caso son
anti-T. cruzi) de producir aglutinacin especfica en presencia de glbulos rojos
sensibilizados con los correspondientes antgenos.
En el suero existen anticuerpos inespecficos (heterfilos) que son capaces de
aglutinar glbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga
enfrentando el suero con GR no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se
eliminan mediante tratamiento con 2-mercaptoetanol.
Esta tcnica puede aplicarse al reconocimiento de anticuerpos contra los
antgenos de superficie si se sensibilizan los hemates de carnero con las
glicoprotenas de membrana del T cruzi, mediante la accin de lecitinas. De esta
forma se reconocen anticuerpos de tipo IgM, que resultan indicados para el
estudio de la infeccin aguda. Reacciones serolgicas que reconocen anticuerpos
contra antgenos citoplasmticos del T. cruzi.

PROCEDIMIENTO
Seleccionar una policubeta con pocillos sin usar de fondo en U.
TITULACION
1- Con microgotero de 70 ul en el primer pocillo y 25 ul en el 2, 3 y 4 colocar
Diluyente de Sueros HAI en todos los pocillos a usar de lapolicubeta.
2- Poner 10 ul de suero en el primer pocillo
3- Realizar diluciones seriadas a partir del primer pocillo (dilucin 1/8), pasando
los microdilutores al pocillo siguiente (dilucin 1/16) y as sucesivamente hasta la
dilucin que se desea investigar (por ejemplo: 1/32, 1/64), rotando en cada paso
el microdilutor por lo menos 10 veces para asegurar una correcta dilucin de la
muestra. Si se emplea una micropipeta automtica de 25ul para la toma y/o
dilucin de la muestra, homogeneizar por carga y descarga. Transferir 25ul de
pocillo a pocillo hasta la dilucin que se desee investigar, descartar los ltimos
25ul.
4- Colocar en el pocillo conteniendo la dilucin 1/8, una gota (25 ul) de GR no
sensibilizados para control de heterofilia.
5- En el resto de los pocillos, agregar una gota (25 ul) de Antgeno HAI.

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6- Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta.

7- Dejar en reposo, a resguardo de vibraciones, durante 90 minutos.
8- Leer a partir de los 90 minutos.
Se puede aumentar la nitidez de la apreciacin, leyendo sobre un espejo,
iluminando la placa desde arriba e interponiendo un papel blanco y traslcido
entre la policubeta y la fuente de luz.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

No reactivo: presencia de un sedimento en forma de botn o pequeo anillo de
bordes regulares.
Reactivo: formacin de una pelcula o manto que cubre el50% o ms del fondo de
los pocillos.
Si no se usan microdilutores, la imagen del manto puede ser ms pequea.

(1) Manto.
(2) Punto final (50%)

22
CHAGAS

Limitaciones del mtodo

La serologa solo constituye un dato auxiliar para el diagnostico. La

Hemoalutinacin Indirecta, como otra cualquier tcnica serolgica no puede ser
concebida como un mtodo de diagnostico defeinitivo. En ese sentido, todo titulo
debe ser interpretado como uan probabilidad mayor o menor de acierto en
relacin al encuadramiento del caso estudiado, dentro de la poblacin normal o
parasitaria.

Independientemente de esta limitacin de la serologa, existen en la

Hemoaglutinacin Indirecta aspectos especficos de tcnica que tienen que ser
considerados por el ejecutante a fin de evitar errores.

e) Aglutinacin de partculas de ltex: Esta prueba se realiza con partculas de

poliestireno adsorbidas con extractos antignicos solubles de T. cruzi, las que asi
resultan rpidamente aglutinadas por los anticuerpos, fenmeno que es visible a
simple vista. Resulta un test til para el control de dadores en Bancos de sangre o
para " screening".

23
CHAGAS

f) Elisa

CHAGAS ELISA es un ensayo inmunoenzimtico en fase slida para la deteccin

cualitativa de anticuerpos contra el T. cruzi. Se realiza en placas cuyos pocillos
son sensibilizados con antgeno recombinantes de T. cruzi diseados y
desarrollado en nuestro laboratorio. Si las muestras analizadas contienen
anticuerpos especficos para T. cruzi, estos formarn un complejo estable con los
antgenos que recubren los pocillos. El material unido de forma no especfica ser
eliminado por medio del lavado. Durante la incubacin con el conjugado, los
anticuerpos anti-IgG marcados con peroxidasa, se unirn al complejo formado.
Finalmente en la etapa de incubacin con el sustrato cromognico, la peroxidasa
unida al complejo producir una coloracin, que permitir detectar las muestras
reactivas al T. cruzi. La reaccin enzimtica ser detenida por la adicin de cido
sulfrico, midindose posteriormente la intensidad de color con un lector
colorimtrico para placas de ELISA.

Procedimiento

24
CHAGAS

Control de Calidad
Los resultados de un ensayo son vlidos si se cumplen los siguientes criterios:
1. Promedio de los blancos debe ser menor de 0,15
2. Control negativo: absorbancia menor que 0,20 despus de restar el blanco.
3. Calibrador positivo: absorbancia igual o mayor que 1,00.
En caso de que una sola de las rplicas se encuentre dentro de los parmetros
aceptables, descartar la otra para realizar los clculos
Resultados
1. Calcular el valor umbral (Cut off) segn: (CP+CN) x 0,22 = Cut off
2. Dividir la absorbancia de la muestra por el valor umbral.

25
CHAGAS

Positivo: relacin absorbancia/valor umbral 1,1

Negativo: relacin absorbancia/valor umbral < 0,9
Dudoso: relacin absorbancia/valor umbral 0,9 < 1,1

Interpretacin de los Resultados

Una reaccin positiva debe interpretarse como la presencia de anticuerpos IgG
anti- T. cruzi.
Una reaccin negativa indica que el paciente no tiene niveles detectables de
anticuerpos anti-T. cruzi.
Esto puede deberse a la ausencia de infeccin o a una dbil respuesta inmune
del paciente.
Si el resultado de la muestra es dudoso, repetir el ensayo por duplicado. Si la
lectura persiste en esta zona considrelo como un suero positivo.

Limitaciones del ensayo

Todas las muestras indeterminadas o positivas deben ser repetidas en
duplicado. Las muestras
repetidamente reactivas pueden ser confirmadas por tcnicas tales como:
IFI, Western Blot,
Xenodiagnstico o PCR.
El diagnstico de la enfermedad de Chagas debe basarse en una
combinacin de resultados que incluyen la historia clnica, la deteccin del
parsito y los ensayos serolgicos posteriores.
Las muestras con contaminacin microbiana o de personas con otras
parasitosis o enfermedades autoinmunes pueden producir falsos
resultados.
Un resultado negativo no excluye la posibilidad de infeccin con T. cruzi.
Una respuesta inmune humoral no es detectada durante las primeras
semanas despus de la infeccin por ningn mtodo existente en el
mercado

26
CHAGAS

Resulta de utilidad para estudiar casos de infeccin crnica.

g) Otras pruebas de laboratorio Han sido descriptas como de utilidad en el

diagnstico serolgico de la enfermedad de Chagas, la irununoelectroforesis,
contrainmunoelectroforesis, las sondas del DNA, el empleo de anticuerpos
monoclonales o el uso de membranas poliamdicas sobre las cuales se
inmovilizan antgenos glucoproteicos del parsito (con lo que se obtienen
verdaderas "tiras reactivas"). En las reas de mayor endemia de nuestro pas, se
acepta como aglutinacin directa, hemoaglutinacin indirecta e
inmunofluorescencia indirecta, ttulos de 1:32 a 1:64, con lo cual se evita
considerar anticuerpos no correspondientes al T. cruzi, alcanzando as un 95 por
ciento de probabilidad de que el paciente cuyos ttulos sean iguales o mayores al
valor mencionado, est efectivamente infectado. Actualmente y hasta tanto se
disponga de un antgeno 100 por ciento especfico, con un alto margen de
sensibilidad, precisin y estandarizacin, est aconsejada la ejecucin de tres (3)
reacciones serolgicas simultneamente, debiendo obtenerse positivos en por lo
menos dos (2) de ellas para confirmar un diagnstico de infeccin chagsica .

27
CHAGAS

12.- Tratamiento

Se recomienda el tratamiento de la enfermedad de Chagas para todas las

personas que hayan recibido un diagnstico de infeccin aguda, infeccin
congnita y para aquellas que tengan sistemas inmunitarios deprimidos as como
para todos los nios con infeccin crnica. Los adultos con infeccin crnica
tambin se pueden beneficiar del tratamiento.

El tratamiento de los sntomas puede ser de utilidad para el control de los

problemas cardacos o gastrointestinales generados por la enfermedad de
Chagas. Los pacientes deben consultar a su proveedor de atencin mdica
primaria. Algunos pacientes pueden ser remitidos a un especialista, como a un
cardilogo, un gastroenterlogo o a un especialista en enfermedades infecciosas.

28
CHAGAS

V. ESTADISTICAS

INFORME MENSUAL DE LABORATORIO INCLUIDO S.U.M.I.

MAYO 2013

SEROLOGIA

100
90
80 Asto (4)
70
Latex R.A. (2)
60
50 P.C.R. (27)
40 R.P.R. (95)
30
Reaccin de Widal (31)
20
10
0
1

QUIMICAS SANGUNEAS

120

100 Bilirrubinas (43)

Creatinina (30)
80
Glicemia (113)
60 Transaminasas GOT (19)

40 Transaminasas GPT (19)

Urea (10)
20
Fosfatasa Alcalina (19)
0 BUN (8)
1

29
CHAGAS

HEMATOLOGIA

Grupo Sanguneo
180 (134)
160 Hematocrito (9)

140 Hemoglobina (9)

120
Hemograma (167)
100
Plaquetas (3)
80
T. coagulacin (18)
60

40 T. sangra (18)

20 Tiempo de
Protombina (TP) (18)
0
1

COPROPARASITOLOGICO

Y EXAMEN GENERAL DE ORINA

250

200

Coproparasitolgico (86)
150
Coproparasitolgico
100 Seriado (7)
Examen General de Orina
(222)
50

0
1

30
CHAGAS

INMUNOLOGIA

140 Fraccin Beta (45)

120 HAI Chagas (119)

100
Micromtodo (6)
80

60 ELISA Chagas (29)

40 Inmunocromatografa
Chagas (40)
20
VIH Prueba Rpida (140)
0
1

JUNIO 2013

SEROLOGIA

90
80
70
Asto (1)
60
50 P.C.R. (11)

40 R.P.R. (87)

30 Reaccin de Widal (13)

20
10
0
1

31
CHAGAS

QUIMICAS SANGUNEAS

120

100
Bilirruninas (11)
80 Creatinina (16)
Glicemia (111)
60
Transaminasas GOT (9)
40
Transaminasas GPT (9)
20 Urea (13)
BUN (11)
0

HEMATOLOGIA

Grupo Sanguneo
140 (110)
Hematocrito (9)
120
Hemoglobina (9)
100
Hemograma (124)

80
Plaquetas (21)

60 T. coagulacin (42)

40 T. sangra (42)

20 Tiempo de
Protombina (TP) (42)
0 VES (21)
1

32
CHAGAS

COPROPARASITOLOGICO

Y EXAMEN GENERAL DE ORINA

180

160

140

120 Coproparasitolgico (70)

100
Coproparasitolgico
80 Seriado (6)
60 Examen General de Orina
(169)
40

20

0
1

INMUNOLOGIA

180
160
140 Fraccin Beta (47)

120 HAI Chagas (102)

100 Micromtodo (3)
80 ELISA Chagas (105)
60 Gota Gruesa (9)
40 VIH Prueba Rpida (174)
20
0
1

33
CHAGAS

PROGRAMA NACIONAL CHAGAS: CHAGAS CONGENITO

INFORMACION GENERADA EN EL LABORATORIO

MAYO 2013

PRE NATAL

Resultados HAI de embarazadas (CPN)

80

60

40 NEGATIVO (78)

20 POSITIVO (13)

CONTROL MADRE AL MOMENTO DEL PARTO

Resultados HAI en SANGRE DE CORDON (o sangre de la madre en dilatantes

o puerperio)

5
4
3
NEGATIVO (5)
2
POSITIVO (0)
1
0

34
CHAGAS

CONTROL NIO AL NACIMIENTO

Resultado de MICROMETODO slo de madres reactivas

SANGRE DE CORDON Y/O SANGRE PERIERICA

Recin nacidos (0 14 das)

0.8

0.6
NEGATIVO (1)
0.4
POSITIVO (0)
0.2
0

CONTROL NIO DESPUES DEL NACIMIENTO

Control MICROMETODO entre 15 das 5 meses 29 das

5
4
3
NEGATIVO (5)
2
POSITIVO (0)
1
0

35
CHAGAS

Control HAI entre 6 meses 8 meses 29 das

1.5

1 NEGATIVO (2)
POSITIVO (0)
0.5

Control HAI entre 9 meses 11 meses 29 das

0.8

0.6
NEGATIVO (0)
0.4 POSITIVO (0)

0.2

36
CHAGAS

RN a < de un ao

10
8
6
TAMIZADO (10)
4
POSITIVO (0)
2
0

1 a < 5 aos

6
5
4
3 TAMIZADO (6)
2 POSITIVO (0)
1
0

5 a < 15 aos

4 TAMIZADO (8)

2 POSITIVO (1)

37
CHAGAS

< de 15 aos

45
40
35
30
25
TAMIZADOS (45)
20
POSITIVO (9)
15
10
5
0

Mujeres embarazadas parto y/o post parto

100
90
80
70
60
50 TAMIZADOS (91)
40 POSITIVO (13)
30
20
10
0

38
CHAGAS

PROGRAMA NACIONAL CHAGAS: CHAGAS CONGENITO

INFORMACION GENERADA EN EL LABORATORIO

JUNIO 2013

PRE NATAL

Resultados HAI de embarazadas (CPN)

80
60
40 NEGATIVO (71)
20 POSITIVO (11)
0

CONTROL MADRE AL MOMENTO DEL PARTO

Resultados HAI en SANGRE DE CORDON (o sangre de la madre en dilatantes

o puerperio)

1.5

1 NEGATIVO (2)
POSITIVO (1)
0.5

39
CHAGAS

CONTROL NIO AL NACIMIENTO

Resultado de MICROMETODO slo de madres reactivas

SANGRE DE CORDON Y/O SANGRE PERIERICA

Recin nacidos (0 14 das)

2.5

2
1.5 NEGATIVO (3)

1 POSITIVO (0)

0.5
0

CONTROL NIO DESPUES DEL NACIMIENTO

Control MICROMETODO entre 15 das 5 meses 29 das

0.8

0.6
NEGATIVO (0)
0.4
POSITIVO (0)
0.2

40
CHAGAS

Control HAI entre 6 meses 8 meses 29 das

1.5

1 NEGATIVO (2)
POSITIVO (0)
0.5

Control HAI entre 9 meses 11 meses 29 das

0.8

0.6
NEGATIVO (0)
0.4 POSITIVO (0)

0.2

41
CHAGAS

RN a < de un ao

5
4
3
TAMIZADOS (5)
2
POSITIVO (0)
1
0

1 a < 5 aos

1.5

1 TAMIZADOS (2)
POSITIVO (0)
0.5

5 a < 15 aos

10

6
TAMIZADOS (9)
4
POSITIVO (0)
2
0

42
CHAGAS

< de 15 aos

90
80
70
60
50
TAMIZADOS (86)
40
POSITIVO (18)
30
20
10
0

Mujeres embarazadas parto y/o post parto

90
80
70
60
50
TAMIZADOS (85)
40
POSITIVO (7)
30
20
10
0

43
CHAGAS

VI. CONCLUSION

Del estudio que se realiz se concluye que habiendo evaluado a pacientes de

todas las edades que asistieron al Hospital Municipal de Colcapirhua, mediante
anlisis de Micromtodo, HAI Chagas y ELISA, hay todava pacientes
seropositivos, constituyndose una poblacin no tan crtica, pero todava sigue
existiendo, esto nos indica que la enfermedad sigue presente en esta provincia, lo
cual nos lleva a seguir tomando medidas a favor de la lucha contra este mal.

VII. RECOMENDACIONES

Impulsar medidas a favor de la poblacin en cuanto al conocimiento de la

enfermedad, haciendo nfasis sobre todo en el vector y sus costumbres.

Implementar polticas de gobierno con el fin de reforzar el Seguro Universal

Infantil, para que exista un seguimiento sobre el paciente seropositivo con el fin de
administrar un tratamiento efectivo.

Realizar campaas diagnosticas subvencionadas por el Gobierno dirigidas a toda

la poblacin, con el fin de mejorar la calidad de vida de las personas y tambin
disminuir la tasa de mortalidad ocasionada por esta enfermedad.

44
CHAGAS

ANEXOS

45
CHAGAS

46
CHAGAS

Tripanosoma Cruzi Triatoma infestas

Tripanosoma Cruzi

47
CHAGAS

HUEVOS DE LAS VINCHUCAS

48
CHAGAS

Triatoma infestans picando.

El hematfago absorbe la sangre de su vctima.

Aumenta visiblemente el volumen de su cuerpo.

49
CHAGAS

Finaliza la ingesta, emite una gota de materia fecal lquida, rica en

trypanosomasmetacclicos.

La materia fecal lquida es depositada sobre la piel.

La oportunidad de la infeccin depende de la integridad de la capa drmica,
de su distribucin sobre el canal de puncin o en las superficies mucosas
(conjuntivas).

50
CHAGAS

Signo de Romaa

Fumigacin de vivendas

51
CHAGAS

IX. BIBLIOGRAFIA

PARASITOSIS HUMANA Davis Botero, Marcos Restrepo

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12
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52
CHAGAS

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&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ei=Da5FU7W6PKqK0AHw5IGYAg&
ved=0CF8QsAQ&biw=1024&bih=605#facrc=_&imgdii=_&imgrc=-
EL8tSzEnrS3hM%253A%3BWJZBPcErzUwUzM%3Bhttp%253A%252F%25
2F4.bp.blogspot.com%252F-Ua6jVHfu0-
Y%252FT1QcZSUd3GI%252FAAAAAAAAANQ%252F-
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1017.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fedurirom.blogspot.com%252F2012%
252F03%252Fpractica-no-3-determinacion-de.html%3B1600%3B1200

53