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Establecimiento in vitro de yemas axilares de


Bambusa vulgaris var Vittata

Article January 2006

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1 author:

Yudith Garca-Ramrez
Instituto de Biotecnologa de las Plantas
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Massive propagation of forest species (Pinus caribaea var. Caribaea, Swietenia sp. And Cedrela
odorata L.) with the use of biotechnological tools. View project

Mass propagation of Bambusa vulgaris Schrader ex Wendland with the use of biotechnological tools
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Artculo Cientfico Biotecnologa Vegetal Vol. 7, No. 3: 155 - 159, julio-septiembre, 2007

Establecimiento in vitro de yemas axilares de Bambusa vulgaris var


Vittata
Yudith Garca-Ramrez1, Marisol Freire-Seijo1, Lillien Fajardo2, Marisol Tejeda1, Maritza Reyes1 *Autor para
correspondencia

1
Instituto de Biotecnologa de las Plantas. Universidad Central Marta Abreu de Las Villas. Carretera a Camajuan
km 5.5. Santa Clara, Villa Clara. Cuba. e-mail: yudith@ibp.co.cu

2
Centro de Estudios de Biotecnologa Vegetal y Medio Ambiente. Universidad de Granma. e. mail: lillien@udg.co.cu

RESUMEN
La micropropagacin constituye una alternativa viable para la propagacin del bamb, por el potencial que este
tipo de planta posee para la construccin, desarrollo de artesanas y proteccin de suelos. Esta tcnica es una
alternativa para la propagacin eficiente de plantas con alto valor gentico y calidad. La presente investigacin se
desarroll con el objetivo de lograr el establecimiento in vitro deBambusa vulgaris var. Vittata a partir de yemas
axilares. Para la desinfeccin de las yemas axilares se emplearon tres concentraciones de Hipoclorito de Sodio
(1.0, 2.0 y 3.0 %) y tres tiempos de desinfeccin (10, 15, 20 minutos). Los mayores porcentajes de yemas
establecidas se obtuvieron al emplear Hipoclorito de sodio al 2.0% durante 20 minutos para la desinfeccin de las
yemas. Entre el 86% y el 100% de las yemas brotaron y se obtuvo un 93.7 % de explantes libres de contaminantes
microbianos visibles a partir de yemas axilares introducidas en condiciones in vitro.

Palabras clave: bamb, desinfeccin, hipoclorito de sodio

ABSTRACT
Micropropagation is a viable alternative for bamboo propagation due to the potentialities this type of plant has for
building, handicrafts confection and soil protection. The technique is an efficient alternative to plants propagation
with a high genetic value and quality. The current research was developed focused on the in vitro establishing of
axillary buds of Bambusa vulgaris var. Vittata. Three concentrations of sodium hypochlorite (1.0, 2.0 and 3.0%) and
three different times (10, 15, 20 minutes) were used for disinfection of axillary buds. The highest rates of established
buds were achieved using sodium hypochlorite to 2.0% during 20 minutes for disinfection. Between 86% and 100%
buds sprouted, and a 93.7% of explants free of visible microbial contaminants were obtained from axillary buds
introduced to in vitro conditions.

Keywords: bamboo, disinfection, sodium hypochlorite

INTRODUCCIN temporales de agua. Esta es una especie eficaz en


la proteccin de las aguas, cuando se utiliza como
El bamb es un recurso natural que ha sido faja forestal hidrorreguladora y en forma de plantones
aprovechado por el hombre durante milenios por su (Annimo, 2007).
rpido crecimiento, gran versatilidad y resistencia.
Posee un gran valor ornamental y puede ser usado La propagacin convencional de bamb se hace por
bajo diferentes aspectos como consolidacin del medio de semillas, secciones de culmos o de
suelo, reforestacin, reduccin del CO 2, en la rizomas. En general, esta forma de propagacin tiene
fabricacin de mobiliario artesanal e industrial, varias desventajas entre las cuales se pueden citar
extraccin de celulosa, presenta un valor alimenticio una floracin impredecible o muy espaciada en el
a partir del follaje y presenta propiedades medicinales tiempo, as como el alto costo (por mano de obra,
(Barbaro, 1997). espacio y transporte) y la baja eficiencia (nmero
limitado de propgulos y baja tasa de multiplicacin)
En Cuba, la distribucin del Bamb se extiende en (Gielis et al., 2001). La micropropagacin constituye
todo el territorio nacional mostrando gran una alternativa viable para la propagacin del bamb.
adaptabilidad y potencial productivo en las provincias La embriognesis somtica y la organognesis a
ms orientales. Los cultivares de bamb ms partir de yemas axilares han sido utilizados en la
adaptados son Dendrocalamus asper, Guadua multiplicacin in vitro de Bambusa vulgaris var.
angustifolia Kuth, Gigantochloa verticilata entre Vittata. Gielis et al. (1995) expresan la importancia
otras, pero Bambusa vulgaris se conoce como la del desarrollo de protocolos para la micropropagacin
ms adaptada y abundante en el territorio, de especies de bamb tales como: Dendrocalamus
especialmente en reas con fuentes permanentes o strictus, Dendrocalamus asper y Bambusa
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laucescens, con el fin de aprovechar el potencial Se emplearon yemas axilares rejuvenecidas de


que estos tipos de plantas poseen. La mayora de los plantas de Bambusa vulgaris var. Vittata. Para cortar
protocolos conocidos son en especies asiticas las yemas se emple una tijera de poda. Se cort a
(Saxena, 1990; Prutpongse y Gavinlertvana, 1992; ambos lados de la yema 1.5cm del tallo .Solamente
Chang y Hung-Lan, 1995; Saxena y Dhawan, 1999) . se tomaron aquellas yemas axilares que estaban
Son pocos los trabajos que hacen alusin a la bien diferenciadas y se colocaron en un frasco con
multiplicacin in vitro de las especies americanas agua para ser llevadas al laboratorio.
(Manzur, 1986; Ramanayake et al., 2001).
Posteriormente, las yemas fueron lavadas con
La presente investigacin se realiz con el objetivo agua corriente por tres horas, seguidamente, se
de establecer in vitro yemas axilares de Bambusa sumergieron en etanol (70.0%) durante tres
vulgaris var. Vittata como primer paso para desarrollar minutos. Luego de enjuagarlas tres veces con
un protocolo para la propagacin in vitro. agua destilada estril estas fueron colocados
en una solucin de NaClO a diferentes
MATERIALES Y MTODOS concentraciones (1.0, 2.0 y 3.0%) durante 20 min,
posteriormente se enjuagaron tres veces con agua
Fase preparativa o Fase 0 destilada estril.

Para el establecimiento del banco de plantas Al concluir la desinfeccin se eliminaron los


donantes rejuvenecidas se colect material vegetal extremos daados de cada seccin de tallo que
de plantones de Bambusa vulgaris var. Vittata, contena la yema axilar. Cada explante (yema
ubicados en la regin oriental de Cuba. axilar) se coloc individualmente en tubos de
ensayo (20 x 1.5 cm) que contenan 5ml de medio
Se estableci un banco de plantas donantes en las de cultivo compuesto por las sales y vitaminas
casas de cultivo del Instituto de Biotecnologa de las propuestas por Murashige y Skoog (1962), con 0.2
Plantas (IBP). Se realiz una fertilizacin diaria de mg.l-1 de 6-bencilaminopurina (6-BAP), 100 mg.l-1
frmula completa empleando el fertilizante comercial de mio-inositol, 30 g.l-1 de sacarosa, se emple
Bayfolan Forte (25 ml.l-1). Con un rgimen de riego como gelificante Gelrite (SIGMA), en
de 81 segundos, cada cinco minutos. concentracin de 2.5 g.l-1.

El plan de manejo fitosanitario consisti en la El pH del medio de cultivo fue ajustado a 5.71 con
aplicacin combinada de fungicidas sistmicos y de el uso de HCl y KOH, previo a la esterilizacin. Se
contacto distribuidos de la siguiente manera: colocaron cinco semillas por frasco de cultivo y cada
1. Silvacurt uno contena 5ml de medio de cultivo.
2. Mancosef + Cupraflow
Los frascos de cultivo fueron colocados en
La formulacin de los productos qumicos utilizados cmaras de crecimiento de luz solar donde la
se relaciona ms ampliamente en la tabla 1. densidad de flujo de fotones fotosintticos (DFFF)
oscil entre 48.0-62.5 mol. m -2 s -1 y una
La aplicacin de cada uno de las combinaciones de temperatura de 27 2 C.
fungicidas se realiz cada tres das y fue repetido
cada quince das. A los ocho das se realizaron las evaluaciones para
determinar la influencia de la concentracin del NaClO
Fase de establecimiento o fase 1 en los siguientes aspectos:

Influencia de la concentracin del Hipoclorito Nmero de yemas libres de contaminantes


de Sodio microbianos (Porcentaje de explantes sin
contaminacin fngica y bacteriana visible).
Con objetivo de establecer in vitro yemas axilares
se evalu el efecto de diferentes concentraciones de Nmero de yemas brotadas (Porcentaje de
Hipoclorito de Sodio (NaClO) en su desinfeccin. brotacin de las yemas).

Tabla 1. Productos qumicos utilizados en el plan de manejo fitosanitario de plntulas de Bambusa vulgaris var.
Vittata

Producto Concentraciones
-1
Silvacurt 2.0cc. l
-1
Mancosef 4.0g. l
-1
Cupraflow 2.0cc. l
Biotecnologa Vegetal Vol. 7, No. 3, 2007 157

Todo el proceso estadstico fue realizado a travs explantes durante la desinfeccin,ya que mayores
del paquete estadstico computacional Statgraphics concentraciones de NaClO, pudieron haber tenido
4.1. Se realizaron pruebas de anlisis de varianza un efecto txico.
de clasificacin simple, previa comprobacin de los
supuestos de homogeneidad de varianza y El hipoclorito de sodio es uno de los desinfectantes
normalidad y las tablas de contingencias (crosstab) ms comnmente utilizados en la desinfeccin
con sus respectivos parmetros para las variables superficial de los tejidos vegetales, y resulta
de niveles de medicin discretos (LSD), comparacin importante determinar la concentracin con la cual
de proporciones y prueba de hiptesis. se garantiza el control de los microorganismos
contaminantes y la supervivencia de los tejidos del
Influencia del tiempo de desinfeccin explantes (Castillo et al., 1997).

El objetivo en este experimento fue determinar la Influencia del tiempo de desinfeccin


influencia en el establecimiento del tiempo de
inmersin de los explantes en NaClO. En cuanto al tiempo de inmersin del material vegetal
en la solucin de hipoclorito de sodio se observ
La seleccin de yemas y la desinfeccin, se realiz una disminucin de la brotacin de yemas en la
tal como se describi en el experimento anterior con misma medida que se aument el tiempo de
la concentracin de mejores resultados. Se aplicaron desinfeccin. El mayor porcentaje de brotacin de
tres tiempos de inmersin (10, 15, 20 minutos), las yemas axilares se alcanz con la disminucin
posteriormente se enjuagaron tres veces las yemas del tiempo de desinfeccin a diez minutos con un
con agua destilada estril. 100% de yemas brotadas, sin diferencias
estadsticas con el resto de los tratamientos. La
Las evaluaciones y el procesamiento estadsticos brotacin de las yemas se inici entre los 10 y 20
fueron realizadas tal como se describi en el das de cultivo, en cada explante las yemas se
experimento anterior. encuentran en ptimas condiciones fisiolgicas, para
alcanzar la brotacin in vitro como se muestra en
RESULTADOS Y DISCUSIN las figuras 1 y 2.

Influencia de la concentracin del Hipoclorito El mayor porcentaje de explantes libres de


de Sodio contaminantes se obtuvo con el tratamiento donde
se emplearon 20 minutos de tiempo de desinfeccin
La brotacin de las yemas axilares se inici a los (88.0%) con diferencias estadsticas con el resto de
cinco das de cultivo. Los resultados de este los tratamientos donde se emplearon 10 y 15 minutos
experimento indicaron que el mayor porcentaje de de tiempo de desinfeccin (Tabla 3).
brotacin se alcanz en el tratamiento donde se
emple NaClO al 1.0% (88.0%) con diferencias Los resultados coinciden con los descritos por Nidiye
estadsticas respecto al resto de los tratamientos. et al. (2006) quienes obtuvieron entre un 80100%
El mayor porcentaje de yemas libres de de de yemas brotadas en diferentes medios de cultivo
microorganismos contaminantes visibles (93.7%) se para Bambusa vulgaris. Marulanda et al. (2005) para
obtuvo en el tratamiento donde se emple hipoclorito la especie de Guadua angustifolia Kuth informaron
de sodio al 3.0% con diferencias significativas con resultados al emplear HgCl2 al 0.3% y obtuvieron
el resto (Tabla 2). un 74.0% de yemas brotadas para 10 minutos de
tiempo de desinfeccin y un 52.0% de yemas
Este comportamiento pudo estar dado por la brotadas para 5 minutos. Adems, al emplear NaClO
utilizacin de una menor concentracin de NaClO, a una concentracin del 2.0% alcanzaron un 12.9%
que provoc menor dao de los tejidos de los y un 11.0% de yemas brotadas.

Tabla 2. Influencia de la concentracin del hipoclorito de sodio en el establecimiento in vitro de yemas axilares de
Bambusa vulgaris var Vittata

Concen traci n de Yem as libres d e Y emas


Hipo clorit o d e So dio ( %) con tamina ntes m icrobiano s Brotad as (%)
(%)

1.0 60.0 b 88.0 a

2.0 80.0 b 80.0 a

3.0 93.7 a 46.6 b


Medias con letras diferentes dentro de una misma columna, difieren (p<0.05) segn LSD.
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Figura 1. Explantes de Bambusa vulgaris var Vittata a los 10 das de cultivo

Figura 2. Explantes de Bambusa vulgaris var Vittata a los 15 das de cultivo

Tabla 3. Efecto de diferentes tiempos de desinfeccin con hipoclorito de sodio (2.0%) en el establecimiento in vitro
de Bambusa vulgaris var Vittata

Tiempo de inmersin en Yemas libres de Yemas Brot adas


Hipoclorito de Sodio contaminantes microbianos (%)
(min) (%)
10 58.4 b 100 a

15 75.0 ab 86.6 a

20 88.0 a 80.0 a
Medias con letras diferentes dentro de una misma columna, difieren (p<0.05) segn LSD.

Resultados similares fueron obtenidos por Andrade para la desinfeccin se han obtenido los mejores
(1998), quien utiliz como desinfectante NaClO a una resultados al emplear hipoclorito de sodio 0.1%
concentracin de 1.0% durante 10 minutos para la durante 5 min, combinndose con inmersin en
desinfeccin de yemas axilares de Guadua Bicloruro de mercurio (0.1%), durante 5 min (ICFRE,
angustifolia Kunth. 2002).

En otras especies de bambes como: En diferentes especies de bamb se han informado


Dendrocalamus strictus, Bambusa arundinacea, altos porcentajes de establecimiento. Por ejemplo,
Dendrocalamus asier, Phyllostachys edulis, Ravikumar y Ananthakrishnan (1998) obtuvieron entre
Dendrocalamus giganteus y Bambusa polymorfa, un 85-90% de brotes a partir de yemas axilares de
Biotecnologa Vegetal Vol. 7, No. 3, 2007 159

plantas adultas de Dendrocalamus strictus. Por su Gielis, J, Everaert I, Goetghbeurand P, Deloose M (1995)
Bamboo and Molecular Markers. Proceedings of the 5 th
parte, Ramanayake et al. (2001) alcanzaron un
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77.5% de plantas in vitro a partir de yemas axilares Genetic Conservation. Indonesia
de Dendrocalamus giganteus.
Gielis, J, Peeters H, Gillis K, Oprins J, Debergh PC (2001)
Tissue culture strategies for genetic improvement of
Nadgaudar et al. (1997) obtuvieron un 70% de plantas
bamboo. Acta Hort. 552:195-203
a partir de yemas axilares de Bambusa arundinacea
y Das y Pal (2000) obtuvieron una rpida propagacin ICFRE (2002) Mass Propagation Protocol For Bamboos.
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Bambusa vulgaris var. Vittata con altos porcentajes
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