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Universidade Tecnolgica Federal do Paran

Cmpus Toledo
Bioqumica - Experimento I
Professor: Renato Eising

Experimento 02
Determinao de Acares Totais pelo Mtodo Fenol-Sulfrico (Dubois)

Introduo

O mtodo do Fenol-Sulfrico baseia-se na determinao de acares simples, polissacardeos e seus derivados,


incluindo os metil-steres com grupos redutores livres, aps a desidratao dos mesmos pelo cido sulfrico e
subsequente complexao dos produtos formados com o fenol. A mudana de cor da soluo medida na
regio do visvel e proporcional quantidade de acares presentes na amostra. A reao sensvel e de cor
estvel. Os teores devem ser determinados em espectrofotometria a um comprimento de onda de 490 nm
utilizando-se uma curva padro de glicose de 0 a 1 g/L.

Materiais

Reagentes
Soluo de fenol a 5%
cido sulfrico concentrado
Glicose
gua

Vidraria
Pipetas de vidro
10 tubos de ensaio
Pera
2 Bqueres de 50ml
1 Balo volumtrico de 50 ml
10 bales de 10 ml
Papel alumnio
Esptula
Procedimento
Prepare 50 ml de uma soluo de glicose com concentrao de 1g/l. Utilizando os bales de 10 ml
devidamente identificados, prepare diluies subsequentes (1:10, 2:10, 3:10, at 9:10) para ter as diluies de
0,1 a 0,9 g/l. Pipete 0,5ml de cada diluio e dispense nos tubos de ensaio devidamente identificados.
Adicione a cada tubo 0,5 ml de soluo de fenol a 5% e depois 2,5 ml de cido sulfrico concentrado,
mantendo o tubo na estante (o tubo ir aquecer). Agite suavemente. Aguarde o resfriamento do material e
proceda leitura em espectrofotmetro em 490 nm.
ATENO: essa prtica envolve o manuseio de cido concentrado e gerao de bastante calor. Siga
as instrues do roteiro e qualquer dvida, pergunte ao professor. Tenha extremo cuidado durante
as manipulaes.

Resultados
Anote as concentraes utilizadas e as respetivas leituras em espectrofotmetro. No esquea de zerar o
espectro. Plote os dados em uma planilha e obtenha a equao da reta para a curva analisada. Lembre-se de
identificar os reagentes (fenol e cido sulfrico) e utilizar os mesmos reagentes para anlises subsequentes.
Avalie se h uma maior linearidade em alguma regio da curva obtida e utilize essa faixa para a sua curva
padro. Lembre-se de fazer algumas diluies da sua amostra buscando estar na faixa de linearidade,
otimizando o uso de reagentes, da amostra e do seu tempo.

Concentrao (g/L) Absorbncia (490 nm)