UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

Departamento de Patologa y Medicina Preventiva
Bioqumica.

Espectrofotometra y curva de calibracin de protenas.

Carla Abedrapo - Camila Barrueto Quero Martin Zamorano

Chillan Chile

2017
 I. INTRODUCCION

Objetivos

Cuantificar protenas utilizando reactivo de Biuret

Conocer el funcionamiento de un equipo de espectrofotometra
Conocer cmo se elabora una curva de calibracin de protenas

II. MATERIALES Y METODO

En el laboratorio n3 de la universidad de Concepcin, campus Chillan, se dispuso

a realizar el siguiente experimento:

Los reactivos utilizados fueron solucin estndar de seroalbumina de bovino

(4mg/mL) y reactivo de Biuret (sulfato de cobre 1% en NaOH 14%).

Luego de identificar estos reactivos, se colocaron en seis tubos de ensayo de la

siguiente manera, mediante la utilizacin de una propipeta y una pipeta:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

SAB (mL) 0,1 0,3 0,4 0,5
Muestra 0,1
problema
(mL)
Agua 0,4 0,2 0,1 0,5 0,4
destilada
(mL)
Reactivo 16 gotas 16 gotas 16 gotas 16 gotas 16 gotas 16 gotas
de Biuret
(mL)

Posterior a esto se procedi a agitar cada uno de los tubos en un agitador.

Luego se colocaron en bao de agua a 37C por 10 minutos, terminado este tiempo
se esper a que se enfriaran y se dispuso a leer en un espectrofotmetro a 540 nm
utilizando el tubo 5 como blanco.

Modo de operacin del Espectrofotmetro METERTEK

1. Se enciende el instrumento, esperando 20 minutos para que se estabilizara.

2. Llenando una cubeta con agua desionizada o destilada, solucin tampn o
solvente, se coloc en el compartimento muestra.
3. Se seleccion la longitud de onda desea.
4. Ya seleccionado la transmitancia o absorbancia, se presion el botn
TRANS/ABS.
5. Se presion el botn 100%T o A, hasta que la pantalla indic 100.0 para
TRANS y 0.000 para ABS.
6. Se sac cuidadosamente la cubeta ubicada en el compartimento muestra.
7. Enjuagando la cubeta con la solucin que se midieron y se cerr. Se anotaron
los valores de T o A, finalmente sacando la cubeta.
8. Se repiti el procedimiento con los 6 tubos de ensayo.

9. Finalmente, se apag el instrumento finalizado el trabajo

Al obtener los resultados, se calcul la cantidad de protenas presente en cada tubo

con los datos dados de la solucin de seroalbmina dispuesta en cada tubo,
mediante tcnica regla de tres.
 III. RESULTADO

En el primer experimento se observ un cambio de color en la muestra dispuesta

en cada tubo de ensayo, la cual cambio de intensidad gradualmente de manera
creciente, como se puede observar en la siguiente imagen.

figura 1. se muestra la variacin de tonalidades en cada tubo de ensayo.

Luego de medir cada tubo en el espectrofotmetro, se obtuvieron los siguientes

resultados:

Tubos Absorbancia
Tubo 1 0,044
Tubo 2 0,150
Tubo 3 0,310
Tubo 4 0,462
Tubo 5 0,001
Tubo 6 0,412
Figura 2. Tabla de datos obtenidos en el espectrofotmetro a 540nm
 Absorbancia
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
tubo 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 tubo 6

absorbancia en muestras vistas en laboratorio

Figura 3. Grfico de datos obtenidos en el espectrofotmetro a 540nm.

Posteriormente se obtuvo los siguientes resultados de cantidad de protenas:

Tubo n1:

4 1
= 0,4
0,1

Tubo n2:

4 1
= 1,2
0,3

Tubo n3:

4 1
= 1,6
0,4

Tubo n4:

4 1
= 2
0,5
Tubo n5:

Tubo n6:

0,462 2
= 1,783
0,412
 IV. DISCUSIN

En el documento de trabajo del alumno de la Universidad de Rabanales de Crdoba,

se obtuvo el siguiente resultado: En el caso del reactivo de Biuret, la tincin se basa
en la unin de un complejo coloreado entre Cu2+ y los grupos NH, siendo la
intensidad de coloracin directamente proporcional, con la cantidad de protenas.
(Fernndez et al., 2004). El color violeta resulta cuando los iones de cobre en un
medio alcalino se asocian con los electrones no saturados de los tomos de
nitrgeno y oxgeno de los enlaces de todas las protenas. (Wharton 1972).

Un espectrofotmetro est compuesto por un monocromador de prisma o red,

siendo esto que le permite la seleccin de diferentes longitudes de ondas dentro de
la capacidad del instrumento. (Paola Olivares, 2009). Con este instrumento
podemos obtener la absorbancia, siendo esta coincide con lo establecido en la Ley
de Lambert-Beer, la cual estipula que la absorbancia est directamente relacionada
con la concentracin de la sustancia a analizar. (Macarulla et al., 1994)
V. CONCLUSION

VI. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

Campbell, N; Reece, J. 2005. Biologa. Sptima Edicin. Editorial

Panamericana. Madrid, Espaa.

Emilio Fernndez R., Aurora Galvn C. 2014 Mtodos para la cuantificacin

de las protenas. Universidad de Rabanales, Crdoba, Espaa. (documento
de trabajo, emilio.fr@hotmail.com)

Macarulla, J., F. Goi. 1994. Bioqumica humana. (2.ed.). Editorial Revert.

Barcelona, Espaa

Olivares P., 2009 Fotometra, El Cid Editor | apuntes. Espaa

Walton, H. 1972, Principios y mtodos de Anlisis Qumico. Editorial Revert.

Barcelona, Espaa