CONSULTAS PRELIMINARES

3.1. Cuales son las funciones del colesterol en nuestro

organismo?

Funciones del colesterol

El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas funciones:

1. Estructural: el colesterol es un componente muy importante de las membranas

plasmticas de los animales (en general, no existe en los vegetales). Aunque el colesterol
se encuentra en pequea cantidad en las membranas celulares, en la membrana
citoplasmtica lo hallamos en una proporcin molar 1:1 con relacin a los fosfolpidos,
regulando sus propiedades fsico-qumicas, en particular la fluidez. Sin embargo, el
colesterol se encuentra en muy baja proporcin o est prcticamente ausente en las
membranas subcelulares.
2. Precursor de la vitamina D: esencial en el metabolismo del calcio.
3. Precursor de las hormonas sexuales: progesterona, estrgenos y testosterona.
4. Precursor de las hormonas corticoesteroidales: cortisol y aldosterona.
5. Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorcin de algunos nutrientes lipdicos y
va principal para la excrecin de colesterol corporal.
6. Precursor de las balsas de lpidos.

O
Colesterol proporciona estabilidad a las membranas celulares a fin de que
puedan regular selectivamente sustancias vitales para nuestra supervivencia a
entrar y salir de la celda.

Colesterol, mantiene la estructura de los buques;

Demasiado bajos niveles de colesterol se suprimir su sistema inmune, haciendo

que susceptibles a enfermedades y las enfermedades profesionales;

El colesterol es uno de los naturales del cuerpo protectores del cncer;

El colesterol produce hormonas que ayudan a su cuerpo con la curacin de las

heridas o infecciones;

Colesterol acta como aislante alrededor de los nervios y protege tu sistema

nervioso de la enfermedad;

El colesterol es un importante participante en la produccin de vitamina D. La

vitamina D es un nutriente importante para los huesos fuertes, un slido
 sistema inmunitario y nervioso, la procreacin, la produccin de insulina y la
creacin de la energa ingerida o absorbida a partir de minerales;

El colesterol es imprescindible para el cerebro para funcionar;

El colesterol es influyente en su capacidad de memoria;

El colesterol juega un papel importante en las hormonas de llegar al cerebro;

Receptores de serotonina en el cerebro necesita colesterol para funcionar

adecuadamente. La serotonina es un neurotransmisor. Los bajos niveles de
serotonina puede causar depresin, ansiedad, cambios de humor, dificultades
de la regulacin de la temperatura, la prdida de la libido y el apetito y
trastornos del sueo;

Testosterona, estrgenos y progesterona son producidas con el colesterol. Los

bajos niveles de estas hormonas puede resultar en la prdida del deseo sexual,
letargo, fatiga, sofocos, sudoracin, disfuncin erctil, la masa muscular magra
y el agotamiento de la fuerza, irregularidades menstruales, embarazo, abortos
involuntarios y la deficiencia de la densidad mineral sea;

El colesterol es importante para la produccin de hormonas esteroides. Hay

cinco clases de hormonas esteroideas: andrgenos (que afectan a la
maduracin y la funcin de los rganos sexuales secundarios de la
determinacin sexual masculina), estrgenos, progestgenos; minalocorticoids
(responsable de mantener el equilibrio de sal y agua), y glucocoticoids
(aumentan la resistencia a la tensin);

Un nivel saludable de colesterol es necesario para la digestin. Se elimina el

colesterol desde el hgado a travs de la bilis. A travs de este proceso, las
sales biliares que son fabricados de ayuda en la absorcin de los alimentos que
consumimos. La falta de bilis induce sntomas digestivos, como diarrea;

Colesterol refuerza las paredes intestinales;

La hormona insulina, que se relaciona con los niveles de azcar en la sangre, se

fabrica a partir del colesterol;

Inferior a lo normal los niveles de colesterol puede acelerar signos de

envejecimiento. Junto con este inconveniente, relacionada con la edad o
enfermedades pueden manifestarse a una edad ms temprana. El hallazgo
publicado en el American Journal of Medicinehace ms de veinte aos mostr
que los riesgos de una muerte prematura, si el aumento de los niveles de
colesterol son demasiado bajos;

Los estudios revelan que puede haber una asociacin entre la enfermedad de
Parkinson y los bajos niveles de colesterol;
 Las personas con disfuncin renal tienen un mayor riesgo de sucumbir si tienen
bajos niveles de colesterol.

3.2. A que se le denomina colesterol bueno y malo?

la palabra colesterol suele tener una connotacin negativa porque

cuando se la utiliza generalmente se lo hace para referirse a las
lipoprotenas de baja densidad (LDL) . Las lipoprotenas son en realidad
las encargadas de que el colesterol llegue hasta clulas a travs del
riego sanguneo. Cuando existen un exceso de lipoprotenas de baja
densidad (LDL) el colesterol puede acumularse en las arterias
dificultando el trnsito de oxgeno a travs de la sangre, lo que s
aumenta riego de problemas cardiacos y cerebrales. De ah que las
lipoprotenas de baja densidad (LDL) sean conocidas como colesterol
malo.

Adems del LDL existen las lipoprotenas de alta densidad (HDL) que
son aquellas lipoprotenas que transportan el colesterol desde los tejidos
del cuerpo hasta el hgado.Debido a que las HDL pueden retirar el
colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hgado para su
excrecin, se les conoce como el colesterol bueno o lipoprotena buena.

3.3. Consultar las frases R y S de los reactivos a

manipular en la prctica

3.4. Consultar las fichas de seguridad de los reactivos a

manipular en la prctica

3.5. En qu consiste la reaccin de Lieberman

Burchard?
. Fundamento
Para determinar el colesterol total el mtodo utilizado comprende:
 1. tratamiento del extracto lipdico con hidrxido de potasio para
liberar el colesterol de los complejos lipoproteicos y saponificar
los steres de colesterol;
2. extraccin del colesterol en un volumen medido de ter de
petrleo despus de la dilucin de la solucin alcohlica con
agua; y
3. medida del colesterol en una alcuota de la fase etrea por medio
de la reaccin de color de Liebermann-Burchard.
La reaccin Lieberman-Burchard (L-B) se realiza en general en un medio cido fuerte
constituido por cido sulfrico, cido actico y anhdrido actico. En la reaccin, el
colesterol sufre una oxidacin gradual, formndose en cada etapa una molcula de
colestapolieno que posee un doble enlace adicional con respecto al compuesto del cual
deriva. La etapa inicial de la reaccin L-B consiste en la protonacin del grupo OH del
colesterol, con la consiguiente prdida de agua obtenindose el in carbonio 3,5-
colestadieno que constituye el primer paso de la reaccin de color. La oxidacin
secuencial de este in carbonio allico por el SO2- produce un cido colesta-hexano-
sulfnico cromforo con mximos de absorbancia a 620 nm

3.6. Qu otros mtodos se utilizan para determinar

colesterol sanguneo, explique en detalle?.
TENGO DOS RESPUESTAS NO SE CUAL TE SIRVA
1.
COLESTEROL: Se encuentra presente en todas las lipoprotenas
plasmticas. Cuando un exceso de lpidos no se elimina o utiliza, se
deposita en tejidos y paredes arteriales, obstruyendo el flujo de sangre
a rganos vitales. Se obstruye la circulacin dando lugar, por ejemplo,
al infarto de miocardio.

Intervalos de referencia: 1.20-2.20 g/L

Colesterol HDL: 0.40-1.10 g/L Hombres
0.50-1.20 g/L Mujeres

Mtodos de anlisis:
La determinacin de colesterol total incluye las formas libre y
esterificada del mismo. Los mtodos
de anlisis se dividen en:

Mtodos en 1 etapa: son ensayos directos, sin preparacin previa de la

muestra de suero.
Suelen ser medidas espectrofotomtricas o fluorimtricas. Exhiben a
menudo errores debido a interferencias y a diferencias del color
desarrollado por el colesterol libre y el esterificado.
Mtodos en 2 etapas: se introduce una etapa previa de extraccin
orgnica eliminando muchas interferencias. Sin embargo, no se elimina
el efecto de la respuesta de color diferencial entre elcolesterol libre y
esterificado. Pero se acepta para el trabajo clnico de rutina usando
factores de correccin.
Mtodos en 3 etapas: adems de la extraccin del colesterol, incluye
una etapa de saponificacin que hidroliza la porcin acido graso de los
esteres del colesterol. Se determina el colesterol libre total
La cuantificacin final del colesterol se hace por la medida del color
desarrollado y no se distingue entre colesterol libre y esterificado. El
reactivo reacciona con el colesterol que encuentran y ya sabemos que el
desarrollo del color es distinto para el colesterol libre y para el
esterificado.

Esta cuantificacin final puede hacerse:

Reaccin con una sal de Fe3+ : se emplea cido actico + cido
sulfrico y se aade una sal de Fe3+
Como producto de reaccin se obtiene el catin tetraenlico que se mide
a = 563 nm.
Reaccin con el cido p-toluensulfnico:

Se sigue el consumo de O2 con un electrodo de oxgeno o bien se acopla el H2O2 a

una reaccin
indicadora, por ejemplo:
COLESTEROL UNIDO A LIPOPROTENAS DE ALTA DENSIDADHDL
: High Density Lipoproteins
LDL: Low Density Lipoproteins
VLDL: Very Low Density Lipoprotein.
La HDL desempean un papel importante para transportar el colesterol
lejos de los tejidos y
proporciona proteccin contra las enfermedades de la arteria coronaria.
Estn compuestas por un
50% de protenas y un 50% de lpidos. De estos ltimos, el 28% son
fosfolpidos, el 18%
colesterol (libre y esterificado, ms cantidad del segundo) y el 4%
restante son triglicridos.
Los pasos a seguir para determinar el colesterol unido a las HDL sera:
Aislar las HDL
Cuantificar el colesterol (ya visto)
Para aislar las HDL se puede seguir cualquiera de los siguientes
mtodos:
Ultracentrifugacin: el suero se ajusta a una densidad de 1.063 g/ml
por adicin de KBr
(415 mg/5 mL). Se centrfuga: la disolucin sobrenadante contiene
VLDL y LDL y la
inferior HDL
Cromatografa en columna por intercambio inico o exclusin
molecular.
Electroforesis
Precipitacin: precipitacin selectiva de lipoprotenas con diversas
soluciones
polianinicas. Las HDL quedan en el sobrenadante, no precipitan.

2.

METODO DE RUTINA
(CHOD-PAP ENZIMTICO EN UNA SOLA ETAPA)

Fundamento

El Colesterol es oxidado enzimticamente por la colesterol oxidasa (CHOD), previa hidrlisis enzimtica de los
steres mediante una lipasa de origen fungal. El Agua oxigenada (H2O2) generada en la oxidacin permite la
union oxidativa del fenol con la 4-aminoantipirina mediante una reaccin catalizada por la peroxidasa (POD).
El indicador final es la quinoneimina.

Reaccin

CE

Colesterol-esterificado Colestrol + Ac. Grasos libres

CHO

Colesterol + O2 Colesten-3-ona + H2O2

POD

H2O2 + 4-aminoamtipirina + fenol Complejo coloreado

Muestra

Suero Plasma Heparinizado o con EDTA.

Ayuno del paciente mnimo 12 horas.

Peso Corporal estable

Si la muestra es plasma , no usar fluoruro, citrato y oxalato pueden causa un pasaje considerable de agua
desde los eritrocitos la plasma, generando dilucin de sus componentes.

Linealidad.

El test es lineal hasta concentraciones de colesterol de 600 mg/dl. A concentraciones superiores, diluir la
muestra 1+1 con solucion fisiologica. Repetir el ensayo y multiplicar los resultados por 2.

Valores de referencia.

Suero/Plasma: 150-260 mg/dl

Consideraciones.

El reactivo de trabajo puede desarrollar un ligero color rosado que no afecta los resultados siempre que se
procese un blanco con cada lote nuevo.

Deshechar cuando las lecturas del blanco sean superiores a 0,160 D.O. los del estndar sean
anormalmente bajos.

El test no es influenciado por valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de Bilirrubina hasta 5 mg/dl.

Es importante controlar el Agua destilada, pues pueden tener agentes oxidantes que aumenten el color de la
reaccin.

Es necesario que se incube por 5 minutos a 37 C, debido a que el tiempo y la temperatura es vital para que
se desarrollen el total de las reacciones acopladas por las 2 enzimas (CHOD y POD).
 MTODO DE REFERENCIA

Mtodo de ABELL y col.

Este mtodo consiste en la hidrlisis de los steres de colesterilo, extraccin con etere de petroleo y
desarrollo del color con un reactivo de cido actico-anhdrico actico -cido sulfrico . Con el equipo
apropiado y buena habilidad tcnica se pueden obtener resultados exactos y precisos. La preparacin
consiste en la extraccin del colesterol con Zeolina, hidrlisis qumica de los steres (Saponificacin) y
medicin del colesterol total por la reaccin de Liebermann-Burchard , la desventaja que tiene es que es un
mtodo muy laborioso.

MTODO ALTERNATIVO.

Mtodo enzimtico de punto final.

Fundamento.-

El Fundamento es bsicamente el mismo que el mtodo descrito anteriormente en el Mtodo de Rutina, salvo
que se reemplaza la 4-aminoantipirina por 4-aminofenazona(4-AF), y el producto final de la unin oxidativa de
ste con el fenol genera 4(P-benzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O , lo que genera un complejo
coloreado medible a 500 nm.

Reaccin.-

steres de colesterol colesterol + ac. grasos

Lipasa

Colesterol + O2 colest-en-3-ona + H2O2

CHOD

H2O2 + 4-AF+fenol 4(p.benzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O

POD

HDL-COLESTEROL
La incidencia de las enfermedades cardiacas coronarias tiene una correlacin inversa con el nivel srico de
HDL(High Density Lipoproten) colesterol, osea que a mayor concentracin de HDL-Colesterol, menor es la
incidencia de la enfermedad y viceversa.

Aparentemente la relacin esta dada por el hecho que las HDL transportan el colesterol desde los tejidos
perisfericos para ser metabolizados por el higado, evitando as la proliferacin y crecimiento de lesiones
ateromatosas.

Existe HDL aumentado en mujeres , nios y negros. En la enfermedad de Tangierexiste dficit de sntesis de
HDL, acumulando colesterol en los tejidos.
El colesterol ligado a HDL es en promedio el 20 % del colesterol total en hombres y 22,5% en mujeres.

MTODO DE RUTINA

HDL-COLESTEROL

Mtodo Fosfotungstnico-Magnesio
Fundamento.

Los quilomicrones, VLDL(Very Low Density Liporpoten) y LDL(Low Density Liporpoten), son precipitados por
adicin de acido fosfotungstinico e iones magnesio. Luego de la centrifugacin , la fraccin HDL est
contenida en el sobrenadante. La cuantificacin posterior se realiza utilizando el reactivo para determinar
colesterol.

Muestra

Suero, Plasma heparinizado o EDTA.

Linealidad

El test solo debe ser realizado en pacientes con niveles de trigliceridos menores a 400 mg/dl.

Consideraciones.

Concentraciones elevadas de acido ascorbico (>2,5 mg/dl) puede arrojar valores bajos.

Valores de Hemoglobina sobre 100 mg/dl y de Bilirrubina sobre 10 mg/dl interfieren en la metodologa.

Valores de referencia

HDL colesterol
Hombre Mujer
Pronstico favorable >55 mg/dl >65 mg/dl
Niveles aceptables 35-55 mg/dl 45-65 mg/dl
Indicador de riesgo <35 mg/dl <45 mg/dl
LDL colesterol
Deseable <130 mg/dl
Riego moderado Entre 130-159 mg/dl
Riesgo elevado >160 mg/dl

METODO DE REFERENCIA

POR PRECIPITACIN
En estos mtodos, se emplean polianiones (Heparina, Dextrnsulfato), Fosfotungstato, Polietilenglicol, en
presencia de actiones bivalentes para precipitar las liporpoteinas ms grandes, menos densas; las HDL se
determinan en el sobrenadante como colesterol-HDL. Dentro de estos mtodos se encuentran la
determinacin por medio de heparina-Cloruro de manganeso que es un reactivo de uso frecuente.

3.7. Que metabolitos de colesterol podra determinar en

sangre?
Compuesto alicclico cuya estructura comprende (1) el ncleo de
ciclopentanoperhidrofenantreno con sus cuatro anillos fusionados, (2) un solo
grupo hidroxilo en la posicin C-3, (3) un centro insaturado entre los tomos de
carbono 5 y 6, (4) una cadena hidrocarbonada ramificada de ocho carbonos unida
al anillo D en la posicin 17 y (5) un grupo metilo (designado C-19) unido a la
posicin 13.

El colesterol es el esterol mayoritario en el hombre y es un componente de

virtualmente todas las superficies celulares y de las membranas intracelulares; es
particularmente abundante en las estructuras mielinizadas del cerebro y del
sistema nervioso central (es la segunda sustancia ms abundante del cerebro),
pero est presente en en pequeas cantidades en la membrana interna de la
mitocondria. A diferencia de lo que ocurre en el plasma, la mayor parte del
colesterol de las membranas celulares se encuentra de forma libre no esterificada.
Un segundo papel del colesterol es el de precursor inmediato de los cidos biliares
que se sintetizan en el hgado y que actan facilitando la absorcin de los
triacilgliceroles y vitaminas liposolubles de la dieta.

Tambin es el precursor de diversas hormonas estereoides. La progesterona es la

hormona sexual de tipo ceto-esteroide de 21 carbonos secretada por el corpus
luteum del ovario. Los corticosteroides metablicamente potentes de la corteza
adrenal derivan del colesterol; entre ellos se cuentan la desoxicorticosterona,
corticosterona, cortisol y cortisona. El mineralocorticoide aldosterona se obtiene
del colesterol en la zona glomerulosa del crtex de la glndula adrenal. El
colesterol tambin sirve de precursor de las hormonas esteroides femeninas, los
estrgenos (p.ej. estradiol) en el ovario y de los esteroides masculinos (p.ej.
testosterona) en los testculos.

REACCIONES EN LAS QUE PARTICIPA (SE INDICA LA RUTA METABLICA):

Precursor/es Enzima / Proceso Producto/s Ciclo

Ruta 17: Ciclo del colesterol y

de los esteroides
Lanosterol Colesterol

ver mapa

Ruta 17: Ciclo del colesterol y

de los esteroides
Colesterol Vitamina D

ver mapa

Ruta 17: Ciclo del colesterol y

de los esteroides
Colesterol 7 - a -
Colesterol cidos biliares
hidroxilasa

ver mapa

Ruta 17: Ciclo del colesterol y

de los esteroides
Colesterol Oxidasa Dihidroxicolesterol

ver mapa

2. La biosntesis del colesterol es un proceso metablico ampliamente

estudiado que se resume en la Figura 2. La enzima limitante de este
proceso es la HMG-CoAR. Aunque casi todas las clulas son capaces de
sintetizar colesterol( 17), el hgado contribuye aproximadamente en un
40- 50% a la sntesis en todo el organismo en el caso de especies
como la rata, el ratn y el mono. Sin embargo, su contribucin en otras
especies como el conejo, la cobaya y el hmster es inferior al 20%. La
situacin en los humanos es muy similar a la de estas ltimas
especies(18).
Como se describir ms adelante, adems del colesterol sintetizado en
el hepatocito, el hgado capta de forma eficiente el colesterol
lipoproteico de origen diettico (transportado en QM) y de origen
endgeno, proveniente de los rganos perifricos (p. ej., msculo y
tejido adiposo), transportado en LDL y HDL. El colesterol no puede ser
degradado por el organismo, por lo que los excedentes pueden ser
destinados a la sntesis de hormonas esteroideas (andrgenos,
estrgenos, progesterona, corticoides, etc.) o a la sntesis de AB para su
posterior secrecin biliar. Tambin pueden ser secretados como
colesterol libre hacia la bilis, junto a los AB y fosfolpidos. El hgado, por
tanto, es un rgano clave en la regulacin de las concentraciones de
colesterol en el plasma.
3.8. Indique las reacciones qumicas que ocurren en la
prctica.

Bibliografa

http://www.seedo.es/portals/seedo/RevistaObesidad
/2009-n6-Revision-Metabolismo-del-colesterol-bases-
actualizadas.pdf

http://www.biopsicologia.net

http://sisbib.unmsm.edu.pe
www.alimentacion-sana.com.ar
http://demedicina.com

http://www.isodisnatura.es

http://www.highcholesterolfoods.net

http://artigoo.com/nuestro-cuerpo-necesita-grasa

9.1. Elabore la grfica de la absorcin vs concentracin de los

patrones y determine la cantidad de colesterol en la muestra.
9.2. Calcules el % de colesterol sanguneo y comprelo con
los valores considerados normales.

VALORES DE COLESTEROL TOTAL Y LDL-, HDL- COLESTEROL EN PLASMA

Colesterol Total
Normal: < 200 mg/100 ml
Limite elevado: 200-240 mg/100 ml
Anormal: >240 mg/100 ml

LDL
Normal: < 130 mg/100 ml
Limite elevado: 130-159 mg/100 ml
Anormal: >160 mg/100 ml

HDL
Normal: > 35 mg/100ml
Limite elevado: 34- 25 mg/100 ml
Anormal: < 25 mg/100 ml
En esta prctica se usar el mtodo de Liebernan-Burchard segn el cual una
solucin clorofrmica de Colesterol se trata con Anhdrido Actico,
producindose un color azul verdoso cuya intensidad depende de la
concentracin de colesterol. El colesterol se extrae del suero mediante una
mezcla de Alcohol-Acetona que a su vez precipita la protena, el solvente
orgnico se remueve por evaporacin en un bao de agua hirviendo y el
residuo seco se disuelve en cloroformo.